BR112021008437A2 - Métodos para transplante de células-tronco hematopoiéticas alogênicas - Google Patents

Métodos para transplante de células-tronco hematopoiéticas alogênicas Download PDF

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Jennifer Lynn Proctor
Geoffrey O. Gillard
Anthony Boitano
Sharon Hyzy
Michael Cooke
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Abstract

métodos para transplante de células-tronco hematopoiéticas alogênicas. são aqui descritos composições e métodos úteis para a depleção de células cd117+ ou cd45+ e para o tratamento de várias doenças hematopoiéticas, transtornos metabólicos, cânceres e doenças autoimunes, entre outros. as composições e métodos aqui descritos podem ser usados para tratar um transtorno, por exemplo, esgotando-se uma população de células cancerosas ou células autoimunes cd117+ ou cd45+. as composições e métodos aqui descritos também podem ser usados para preparar um paciente para a terapia de transplante de células-tronco hematopoiéticas alogênicas e para melhorar o enxerto de transplante de células-tronco hematopoiéticas alogênicas esgotando-se seletivamente as células-tronco hematopoiéticas endógenas antes do procedimento de transplante.

Description

“MÉTODOS PARA TRANSPLANTE DE CÉLULAS-TRONCO HEMATOPOIÉTICAS ALOGÊNICAS” Pedidos Relacionados
[001] Este pedido reivindica prioridade ao Pedido Provisório dos EUA No 62/752.828, depositado em 30 de outubro de 2018; Pedido Provisório dos EUA No 62/773.873, depositado em 30 de novembro de 2018; e Pedido Provisório dos EUA No 62/882.362, depositado em 2 de agosto de 2019. Todo o conteúdo de cada um dos pedidos de prioridade anteriores é aqui incorporado por referência.
Campo
[002] A presente divulgação se refere ao tratamento de pacientes sofrendo de várias patologias, tais como doenças do sangue, transtornos metabólicos, cânceres e doenças autoimunes, entre outros, pela administração de um conjugado anticorpo- fármaco capaz de se ligar a CD117 ou CD45 expressado por uma célula hematopoiética, tal como uma célula-tronco hematopoiética.
Antecedentes
[003] Terapia com célula alogênica inclui o transplante de células para um paciente, onde as células transplantadas são derivadas de um doador diferente do paciente. Tipos comuns de doadores alogênicos usados para a terapia com célula alogênica incluem irmãos compatíveis com HLA, doadores compatíveis não relacionados, doadores membros da família parcialmente compatíveis, doadores de sangue do cordão umbilical relacionados e doadores de sangue do cordão umbilical não relacionados. Um objetivo final na terapia celular é identificar terapias com células alogênicas que podem formar a base de produtos “fora de prateleira” (Brandenberger, et al. (2011). BioProcess International. 9 (suppl. I): 30-37), o que irá expandir o uso de terapia com célula alogênica.
[004] Apesar de sua promessa, o uso terapêutico de células alogênicas atualmente pode ter complicações tornando essa terapia desafiadora. Em hospedeiros imunocompetentes, as células alogênicas transplantadas são rapidamente rejeitadas, um processo denominado rejeição do hospedeiro versus enxerto (HvG). HvG pode reduzir substancialmente a eficácia das células transferidas, bem como criar eventos adversos em receptores, tornando o uso de células alogênicas limitativo. Existe atualmente uma necessidade de composições e métodos para promover o enxerto de enxertos de células-tronco hematopoiéticas alogênicas tal que a multi-potência e funcionalidade hematopoiética dessas células sejam preservadas após o transplante.
Sumário
[005] São fornecidos aqui anticorpos ou ADCs úteis em procedimentos de condicionamento, em que um paciente é preparado para receber um transplante incluindo células-tronco hematopoiéticas alogênicas. De acordo com os métodos aqui descritos, um paciente pode ser condicionado para uma terapia de transplante de células-tronco hematopoiéticas alogênicas pela administração ao paciente de um ADC, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo capaz de se ligar a um antígeno expressado por células hematopoiéticas (e.g., células-tronco hematopoiéticas), tal como CD117 (e.g., GNNK+ CD117) ou CD45 em combinação com um imunossupressor. Como descrito aqui, o anticorpo pode ser conjugado covalentemente com uma citotoxina de modo a formar um conjugado anticorpo- fármaco (ADC).
[006] Em um aspecto, é fornecido aqui um método de esgotar uma população de células CD117+ em um paciente humano em necessidade de um transplante de célula-tronco hematopoiética, o método compreendendo administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um conjugado anticorpo-fármaco anti-CD117 e um imunossupressor antes de o paciente receber um transplante compreendendo células- tronco hematopoiéticas alogênicas.
[007] Em um outro aspecto, é fornecido aqui um método compreendendo administrar a um paciente humano um conjugado anticorpo-fármaco anti-CD117 e um imunossupressor em uma quantidade suficiente para esgotar uma população de células CD117+ no paciente; e, subsequentemente, administrar ao paciente um transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas alogênicas.
[008] Em um outro aspecto, é fornecido aqui um método compreendendo administrar a um paciente humano um transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas alogênicas, em que o paciente foi previamente administrado com um anticorpo anti-CD117 e um conjugado imunossupressor-fármaco em uma quantidade suficiente para esgotar uma população de células-tronco hematopoiéticas no paciente.
[009] Em algumas modalidades, o CD117 é GNNK+ CD117.
[010] Em um outro aspecto, é aqui fornecido um método de esgotar uma população de células CD45+ em um paciente humano em necessidade de um transplante de célula-tronco hematopoiética, o método compreendendo administrar ao paciente uma quantidade eficaz do conjugado de um conjugado anticorpo-fármaco anti-CD45 e um imunossupressor antes de o paciente receber um transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas alogênicas.
[011] Em um outro aspecto, é aqui fornecido um método compreendendo administrar a um paciente humano um conjugado anticorpo-fármaco anti-CD45 e um imunossupressor em uma quantidade suficiente para esgotar uma população de células CD45+ no paciente; e, subsequentemente, administrar ao paciente um transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas alogênicas.
[012] Em um outro aspecto, é aqui fornecido um método compreendendo administrar a um paciente humano um transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas alogênicas, em que o paciente foi previamente administrado com um conjugado anticorpo-fármaco anti-CD45 e um imunossupressor em uma quantidade suficiente para esgotar uma população de células-tronco hematopoiéticas no paciente.
[013] Em um outro aspecto, é aqui fornecido um método compreendendo administrar a um paciente humano um transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas alogênicas, em que o paciente foi previamente administrado com um conjugado anticorpo-fármaco anti-CD45 em uma quantidade suficiente para esgotar uma população de células-tronco hematopoiéticas no paciente.
[014] Em algumas modalidades, o método compreende ainda administrar o imunossupressor ao paciente depois de o paciente ter recebido o transplante.
[015] Em um outro aspecto, é aqui fornecido um método de esgotar uma população de células CD117+ em um paciente humano em necessidade de um transplante de célula-tronco hematopoiética, o método compreendendo (a) administrar ao paciente humano um conjugado anticorpo-fármaco anti-CD117 em uma quantidade suficiente para esgotar uma população de células CD117+ no paciente; (b) administrar ao paciente humano um transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas alogênicas; e (c) subsequentemente administrar um imunossupressor ao paciente.
[016] Em um outro aspecto, é aqui fornecido um método de esgotar uma população de células CD45+ em um paciente humano em necessidade de um transplante de célula-tronco hematopoiética, o método compreendendo (a) administrar ao paciente humano um conjugado anticorpo-fármaco anti-CD45 em uma quantidade suficiente para esgotar uma população de células CD45+ no paciente; (b) administrar ao paciente humano um transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas alogênicas; e (c) subsequentemente administrar um imunossupressor ao paciente.
[017] Em algumas modalidades, o transplante compreende células-tronco hematopoiéticas alogênicas compatíveis com o MHC (e.g., compatíveis com HLA).
Consequentemente, em algumas modalidades, o transplante compreende células- tronco hematopoiéticas alogênicas em que todos os antígenos HLA correspondem aos antígenos HLA no paciente humano.
[018] Em certas modalidades, o transplante compreende células-tronco hematopoiéticas alogênicas que compreendem pelo menos uma incompatibilidade de
HLA em relação aos antígenos HLA no paciente humano.
Em certas modalidades, as células-tronco hematopoiéticas alogênicas compreendem pelo menos duas incompatibilidades de HLA em relação aos antígenos HLA no paciente humano.
Em certas modalidades, as células-tronco hematopoiéticas alogênicas compreendem pelo menos três incompatibilidades de HLA em relação aos antígenos HLA no paciente humano.
Em certas modalidades, as células-tronco hematopoiéticas alogênicas compreendem pelo menos quatro incompatibilidades de HLA em relação aos antígenos HLA no paciente humano.
Em certas modalidades, as células-tronco hematopoiéticas alogênicas compreendem pelo menos cinco incompatibilidades de
HLA em relação aos antígenos HLA no paciente humano.
Em certas modalidades, as células-tronco hematopoiéticas alogênicas compreendem pelo menos seis incompatibilidades de HLA em relação aos antígenos HLA no paciente humano.
Em certas modalidades, as células-tronco hematopoiéticas alogênicas compreendem pelo menos sete incompatibilidades de HLA em relação aos antígenos HLA no paciente humano.
Em certas modalidades, as células-tronco hematopoiéticas alogênicas compreendem pelo menos oito incompatibilidades de HLA em relação aos antígenos
HLA no paciente humano.
Em certas modalidades, as células-tronco hematopoiéticas alogênicas compreendem pelo menos nove incompatibilidades de HLA em relação aos antígenos HLA no paciente humano.
Em certas modalidades, as células-tronco hematopoiéticas alogênicas compreendem uma incompatibilidade total de HLA em relação aos antígenos HLA no paciente humano.
Em certas modalidades, o transplante compreende células-tronco hematopoiéticas alogênicas que compreendem entre uma e quatro incompatibilidades de HLA, entre uma e três incompatibilidades de HLA, entre uma e duas incompatibilidades de HLA, entre duas e quatro incompatibilidades de HLA, entre duas e três incompatibilidades de HLA ou entre três e quatro incompatibilidades de HLA em relação aos antígenos HLA no paciente humano.
[019] Em algumas modalidades, o transplante compreende células-tronco hematopoiéticas alogênicas que compreendem pelo menos uma incompatibilidade de antígeno de histocompatibilidade menor (miHA) em relação aos antígenos de histocompatibilidade menor no paciente humano.
[020] Em algumas modalidades, o transplante compreende células-tronco hematopoiéticas alogênicas incompatíveis com HLA.
[021] Em algumas modalidades, o método é eficaz para estabelecer pelo menos 80 % de quimerismo do doador. Em algumas modalidades, o método é eficaz para estabelecer pelo menos 85 % de quimerismo do doador. Em algumas modalidades, o método é eficaz para estabelecer pelo menos 90 % de quimerismo do doador. Em algumas modalidades, o método é eficaz para estabelecer pelo menos 95 % de quimerismo do doador. Em algumas modalidades, o quimerismo do doador é avaliado pelo menos 6 semanas, 7 semanas, 8 semanas, 9 semanas ou 10 semanas após o transplante. Em algumas modalidades, o quimerismo do doador é quimerismo mieloide periférico. Em algumas modalidades, o quimerismo do doador é quimerismo de células T.
[022] Em algumas modalidades, o imunossupressor é ciclofosfamida. Em algumas modalidades, o imunossupressor é 30F11. Em algumas modalidades, o imunossupressor é ciclofosfamida (Citoxan, e.g., Citoxan de dose baixa). Em algumas modalidades, o imunossupressor é 30F11 e ciclofosfamida. Em algumas modalidades, o imunossupressor é irradiação corporal total (TBI, e.g., TBI de dose baixa). Em algumas modalidades, o imunossupressor (e.g., Citoxan) é administrado após o transplante. Em algumas modalidades, o imunossupressor (e.g., 30F11) é administrado antes do transplante. Em algumas modalidades, o imunossupressor é administrado substancialmente ao mesmo tempo que o paciente recebe o transplante.
[023] Em algumas modalidades, o conjugado é internalizado por uma célula cancerosa, célula autoimune ou célula-tronco hematopoiética após a administração ao paciente.
[024] Em algumas modalidades, o transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas é administrado ao paciente depois que a concentração do conjugado tenha sido substancialmente eliminada do sangue do paciente.
[025] Em algumas modalidades, as células-tronco hematopoiéticas ou progênie das mesmas mantêm potencial funcional das células-tronco hematopoiéticas depois de dois ou mais dias após o transplante das células-tronco hematopoiéticas no paciente.
[026] Em algumas modalidades, as células-tronco hematopoiéticas ou progênie das mesmas são capazes de se localizar no tecido hematopoiético e/ou reestabelecer a hematopoese após o transplante das células-tronco hematopoiéticas no paciente.
[027] Em algumas modalidades, após o transplante no paciente, as células- tronco hematopoiéticas dão origem à recuperação de uma população de células selecionadas do grupo que consiste em megacariócitos, trombócitos, plaquetas, aritrócitos, mastócitos, mieloblastos, basófilos, neutrófilos, eosinófilos, microglia, granulócitos, monócitos, osteoclastos, células apresentadoras de antígeno, macrófagos, células dendríticas, células exterminadoras naturais, linfócitos T e linfócitos B.
[028] Em algumas modalidades, o paciente está sofrendo de um transtorno de células-tronco.
[029] Em algumas modalidades, o paciente está sofrendo de um transtorno de hemoglobinopatia, um transtorno autoimune, transtorno mielodisplásico, transtorno de imunodeficiência ou um transtorno metabólico.
[030] Em algumas modalidades, o paciente está sofrendo de câncer.
[031] Em algumas modalidades, o ADC compreende um anticorpo anti-CD117 compreendendo um conjunto de CDR (CDR1, CDR2 ou CDR3) de cadeia pesada/cadeia leve (HC/LC) ou um conjunto de região variável de HC/LC como descrito na Tabela 3.
[032] Em algumas modalidades, o anticorpo do conjugado tem uma taxa de dissociação (KOFF) de 1 x 10-2 a 1 x 10-3, 1 x 10-3 a 1 x 10-4, 1 x 10-5 a 1 x 10-6, 1 x 10-6 a 1 x 10-7 ou 1 x 10-7 a 1 x 10-8 conforme medido por interferometria de bio-camada (BLI).
[033] Em algumas modalidades, o anticorpo do conjugado se liga a CD117 com uma KD de cerca de 100 nM ou menos, cerca de 90nM ou menos, cerca de 80 nM ou menos, cerca de 70 nM ou menos, cerca de 60 nM ou menos, cerca de 50 nM ou menos, cerca de 40 nM ou menos, cerca de 30 nM ou menos, cerca de 20 nM ou menos, cerca de 10 nM ou menos, cerca de 8 nM ou menos, cerca de 6 nM ou menos, cerca de 4 nM ou menos, cerca de 2 nM ou menos, cerca de 1 nM ou menos conforme determinado por um ensaio de Interferometria de Bio-Camada (BLI).
[034] Em algumas modalidades, o anticorpo do conjugado é um anticorpo humano.
[035] Em algumas modalidades, o anticorpo do conjugado é um anticorpo intacto.
[036] Em algumas modalidades, o anticorpo do conjugado é um IgG. Em algumas modalidades, o IgG é um isotipo IgG1, um isotipo IgG2, um isotipo IgG3 ou um isotipo IgG4.
[037] Em algumas modalidades, o anticorpo é conjugado com uma citotoxina por meio de um conector. Em algumas modalidades, a citotoxina é um inibidor de RNA polimerase. Em algumas modalidades, o inibidor de RNA polimerase é uma amatoxina. Em algumas modalidades, o inibidor de RNA polimerase é uma amanitina.
Em algumas modalidades, a amanitina é selecionada do grupo que consiste em α-
amanitina, β-amanitina, γ-amanitina, ε-amanitina, amanina, amaninamida, amanulina, ácido amanulínico e proamanulina. Em algumas modalidades, a citotoxina selecionada do grupo que consiste em uma exotoxina de pseudomonas A, deBouganin, toxina da difteria, saporina, maitansina, um maitansinoide, uma auristatina, uma antraciclina, uma caliqueamicina, irinotecano, SN-38, uma duocarmicina, uma pirrolobenzodiazepina, um dímero de pirrolobenzodiazepina, uma indolinobenzodiazepina, um dímero de indolinobenzodiazepina e dímero de pseudo indolinobenzodiazepina. Em algumas modalidades, a auristatina é MMAE ou MMAF.
[038] Em algumas modalidades, o anticorpo é conjugado com a toxina por meio de um resíduo de cisteína no domínio Fc do anticorpo. Em algumas modalidades, o resíduo de cisteína é introduzido por meio de uma substituição de aminoácido no domínio Fc do anticorpo. Em algumas modalidades, a substituição de aminoácido é D265C.
Breve Descrição das Figuras
[039] As Figs. 1A-1J representam graficamente o projeto e resultados de um estudo in vivo de condicionamento de ADC com um ADC anti-CD45 (104-saporina; “CD45-SAP”) ou ADC anti-CD117 (2B8-saporina; “CD117-SAP”) combinado com 30F11 e Citoxan após o transplante antes de um transplante de incompatibilidade menor murino de células do doador Balb/c em receptores DBA/2. As Figs 1A e 1B representam um esquema do modelo de camundongo in vivo (Fig. 1A) e cronograma de dosagem para os vários grupos experimentais (Fig. 1B). CD45-SAP, CD117-SAP ou tratamentos de controle (e.g., 2 Gy TBI ou Nenhuma TBI) foram administrados aos receptores de transplante em combinação com um imunossupressor (30F11) antes do transplante e Citoxan após o transplante. A Fig. 1C representa graficamente o grau de depleção da medula óssea (conforme medido pelo número de HSC de longo prazo (LT-HSC) por fêmur (eixo y)) como uma função de condição do tratamento sete dias após a administração em camundongos C57BL/6. A Fig. 1D representa graficamente a porcentagem de quimerismo do doador sanguíneo geral (CD45.1+) no sangue periférico 12 semanas após o transplante. A Fig. 1E representa graficamente a porcentagem de quimerismo mieloide, quimerismo de células B e quimerismo de células T 12 semanas após o transplante.
[040] As Figs. 2A-2C representam graficamente os resultados de um estudo in vivo de condicionamento de ADC com um ADC anti-CD45 (104-saporina; “CD45- SAP”), combinado com Citoxan após o transplante, antes de um transplante de incompatibilidade menor murino de células do doador Balb/cByJ em receptores DBA/2. As Figs. 2A-2C representam graficamente a porcentagem de quimerismo total do doador (eixo y), a porcentagem de quimerismo mieloide do doador periférico (Fig.
2A) e a porcentagem de quimerismo de células T do doador (Fig. 2B) em receptores de transplante como uma função de modo de tratamento em camundongos DBA/2 transplantados com células CD45.1+ 8 semanas após o transplante. A Fig. 2D representa graficamente o número de HSC de longo prazo derivadas do doador (LT- HSC) por fêmur (eixo y) em receptores de transplante 12 semanas após o transplante.
[041] As Figs. 3A-3B representam graficamente os resultados de um ensaio de depleção in vivo mostrando que o CD45-ADC esgota eficazmente HSCs murinas e linfócitos em camundongos C57. A Fig. 3A é um esquema de um estudo in vivo para avaliar depleção de HSC murinas por um ADC anti-CD45 (CD45-saporina ou “CD45- SAP”). A Fig. 3B representa a estratégia de gating da citometria de fluxo e os resultados mostram a depleção de HSCs de longo prazo por CD45-SAP na medula óssea coletada no Dia 7. A Fig. 3C representa graficamente o nível de HSCs de longo prazo na medula óssea sete dias após a dosagem de PBS, isotipo-SAP ou CD45- SAP. A Fig. 3D representa graficamente o nível de linfócitos periféricos sete dias após a dosagem de PBS, isotipo-SAP ou CD45-SAP. O asterisco (*) indica p <0,05 quando comparado com qualquer grupo controle.
[042] As Figs. 4A-4C representam graficamente os resultados de um estudo in vivo de um modelo murino de um transplante de medula óssea de incompatibilidade total. Os camundongos C57Bl/6 (H-2b, CD45.2+) foram condicionados com um ADC anti-CD45 (anti-CD45-PDB ou “CD45-PBD”) sozinho ou com um anticorpo anti-CD4 e anti-CD8 e transplantados com medula óssea de Balb/c (H-2d, CD45.1+). A Fig. 4A representa graficamente a porcentagem de quimerismo do doador em receptores de transplante conforme detectado 3 e 8 semanas após o transplante no sangue usando o antígeno CD45.1+. A Fig. 4B representa graficamente a porcentagem de quimerismo mieloide do doador periférico, a porcentagem de quimerismo de células B e a porcentagem de quimerismo de células T como uma função de modo de tratamento em receptores de transplante 8 semanas após o transplante. As Figs. 4C e 4D representa graficamente o número total células (CD45+) no sangue periférico (Fig.
4C) e baço (Fig. 4D) dois dias após a administração do ADC.
[043] As Figs. 5A-5G representam graficamente os resultados de um estudo in vivo de um modelo murino de um transplante de medula óssea de incompatibilidade total. Os camundongos C57Bl/6 (H-2b, CD45.2+) foram condicionados com um ADC anti-CD45 (“104-PBD”) sozinho ou com TBI de baixa dose e transplantados com medula óssea de Balb/c (H-2d, CD45.1+). A Fig. 5A representa graficamente o número de HSC de longo prazo (LT-HSC) por fêmur (eixo y) como uma função de condição do tratamento em diferentes níveis de irradiação em receptores de transplante dois dias após a administração do ADC. As Figs. 5B-5E representam graficamente o grau de depleção da medula óssea (células por fêmur (eixo y)) de células CD45+ totais (Fig. 5B), mielócitos (Fig. 5C), células B (Fig. 5D) ou células T (Fig. 5E) como uma função de condição do tratamento em diferentes níveis de irradiação em receptores de transplante dois dias após a administração do ADC. A Fig. 5F representa graficamente a porcentagem de quimerismo do doador no sangue periférico de receptores de transplante quatro semanas após o transplante. A Fig. 5G representa graficamente a porcentagem de quimerismo mieloide, quimerismo de células B e quimerismo de células T em receptores de transplante quatro semanas após o transplante.
Descrição Detalhada
[044] São aqui fornecidos anticorpos ou ADCs úteis em procedimentos de condicionamento, em que um paciente é preparado para receber um transplante incluindo células-tronco hematopoiéticas alogênicas. Tais procedimentos promovem o enxerto de um transplante de células-tronco hematopoiéticas alogênicas. De acordo com os métodos aqui descritos, um paciente pode ser condicionado para uma terapia de transplante de células-tronco hematopoiéticas alogênicas pela administração ao paciente de um ADC, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo capaz de se ligar a um antígeno expressado por células hematopoiéticas (e.g., células-tronco hematopoiéticas), tal como CD117 (e.g., GNNK+ CD117) ou CD45 em combinação com um imunossupressor. Como descrito aqui, o anticorpo pode ser conjugado covalentemente com uma citotoxina de modo a formar um conjugado anticorpo- fármaco (ADC). A administração de um ADC, anticorpo, fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou conjugado fármaco-anticorpo capaz de se ligar a um ou mais dos antígenos anteriores em combinação com um imunossupressor a um paciente em necessidade de terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética pode promover o enxerto de um enxerto de célula-tronco hematopoiética alogênica, por exemplo, esgotando seletivamente as células-tronco hematopoiéticas endógenas, criando assim uma vacância preenchida por um transplante de célula-tronco hematopoiética exógena.
Definições
[045] Como aqui usado, o termo “cerca de” se refere a um valor que está dentro de 5 % acima ou abaixo do valor sendo descrito.
[046] Como aqui usado, o termo “alogênica”, quando usado no contexto de transplante, é usado para definir células (ou tecido ou um órgão) que são transplantadas de um doador geneticamente diferente para um receptor da mesma espécie.
[047] Como aqui usado, o termo “autólogo” se refere a células ou um enxerto onde o doador e receptor são o mesmo sujeito.
[048] Como aqui usado, o termo “xenogênica” se refere a células onde a espécie doadora e receptora são diferentes.
[049] Como aqui usado, o termo “célula imune” é intencionado a incluir, mas não é limitado a uma célula que é de origem hematopoiética e que desempenha um papel na resposta imune. As células imunes incluem, mas não são limitadas a células T e células exterminadoras naturais (NK). As células exterminadoras naturais são bem conhecidas na técnica. Em uma modalidade, as células exterminadoras naturais incluem linhagens de células, tais como células NK-92. Outros exemplos de linhagens de células NK incluem NKG, YT, NK-YS, HANK-1, células YTS e células NKL. Uma célula imune pode ser alogênica ou autóloga.
[050] Como aqui usado, o termo “anticorpo” se refere a uma molécula de imunoglobulina que se liga especificamente a, ou é imunologicamente reativa com, um antígeno particular. Um anticorpo inclui, mas não é limitado a anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (e.g., anticorpos biespecíficos), anticorpos geneticamente projetados e outras formas modificadas de anticorpos incluindo, mas não limitadas a anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados, anticorpos heteroconjugados (e.g., anticorpos bi- tri- e tetra- específicos, diabodies, triabodies e tetrabodies) e fragmentos de anticorpo (i.e., fragmentos de ligação ao antígeno de anticorpos), incluindo, por exemplo, fragmentos Fab’, F(ab’)2, Fab, Fv, rlgG e scFv, desde que eles exibam a atividade de ligação ao antígeno desejada.
[051] Os anticorpos da presente divulgação são geralmente isolados ou recombinantes. “Isolado”, quando aqui usado, se refere a um polipeptídeo, e.g., um anticorpo, que foi identificado e separado e/ou recuperado de uma célula ou cultura de células a partir da qual foi expressado. Comumente, um anticorpo isolado será preparado por pelo menos uma etapa de purificação. Assim, um “anticorpo isolado” se refere a um anticorpo que é substancialmente livre de outros anticorpos tendo especificidades antigênicas diferentes. Por exemplo, um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD117 é substancialmente livre de anticorpos que se ligam especificamente a antígenos diferentes de CD117. Similarmente, um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD45 é substancialmente livre de anticorpos que se ligam especificamente a antígenos diferentes de CD45.
[052] O termo “anticorpo monoclonal” como aqui usado se refere a um anticorpo que é derivado de um único clone, incluindo qualquer clone eucariótico, procariótico ou fago, por quaisquer meios disponíveis ou conhecidos na técnica, e não é limitado a anticorpos produzidos por tecnologia de hibridoma. Os anticorpos monoclonais úteis com a presente divulgação podem ser preparados usando uma ampla variedade de técnicas conhecidas na técnica incluindo o uso de tecnologias do hibridoma, recombinantes e de exibição de fagos ou uma combinação das mesmas.
A menos que de outro modo indicado, o termo “anticorpo monoclonal” (mAb) destina- se a incluir moléculas intactas bem como os fragmentos de anticorpos (incluindo, por exemplo, fragmentos Fab e F(ab’)2) que são capazes de se ligar especificamente a uma proteína alvo. Como aqui usado, os fragmentos Fab e F(ab’)2 se referem a fragmentos de anticorpo que carecem do fragmento Fc de um anticorpo intacto. Em uma modalidade, um fragmento de anticorpo compreende uma região Fc.
[053] Geralmente, os anticorpos compreendem cadeias leves e pesadas contendo regiões de ligação ao antígeno. Cada cadeia pesada é composta por uma região variável de cadeia pesada (abreviada aqui como HCVR ou VH) e uma região constante de cadeia pesada. A região constante de cadeia pesada é composta por três domínios, CH1, CH2 e CH3. Cada cadeia leve é composta por uma região variável de cadeia leve (abreviada aqui como LCVR ou VL) e uma região constante de cadeia leve. A região constante de cadeia leve é composta por um domínio, CL. As regiões de VH e VL podem ainda serem subdivididas em regiões de hipervariabilidade, denominadas regiões determinantes de complementaridade (CDR), intercaladas com regiões que são mais conservadas, denominadas regiões de estrutura (FR). Cada VH e VL é composta por três CDRs e quatro FRs, dispostas do terminal amino ao terminal carboxila na seguinte ordem: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. As regiões variáveis das cadeias leves e pesadas contêm um domínio de ligação que interage com um antígeno. As regiões constantes dos anticorpos podem mediar a ligação da imunoglobulina aos tecidos ou fatores do hospedeiro, incluindo várias células do sistema imunológico (e.g., células efetoras) e o primeiro componente (Clq) do sistema de complemento clássico.
[054] O termo “fragmento de ligação ao antígeno”, como aqui usado, se refere a uma ou mais porções de um anticorpo que mantêm a capacidade de se ligarem especificamente a um antígeno alvo. A função de ligação ao antígeno de um anticorpo pode ser realizada por fragmentos de um anticorpo de comprimento total. Os fragmentos de anticorpo podem ser, por exemplo, um Fab, F(ab’)2, scFv, diabody, um triabody, um affibody, um nanobody, um aptâmero ou um anticorpo de domínio.
Exemplos de fragmentos de ligação abrangidos pelo termo “fragmento de ligação ao antígeno” de um anticorpo incluem, mas não são limitados a: (i) um fragmento Fab, um fragmento monovalente que consiste nos domínios de VL, VH, CL e CH1; (ii) um fragmento F(ab’)2, um fragmento bivalente contendo dois fragmentos Fab ligados por uma ponte dissulfeto na região de dobradiça; (iii) um fragmento Fd que consiste nos domínios de VH e CH1; (iv) um fragmento Fv que consiste nos domínios de VL e VH de um único braço de um anticorpo, (v) um dAb incluindo domínios de VH e VL; (vi) um fragmento dAb que consiste em um domínio VH (ver, e.g., Ward et al., Nature 341:544-546, 1989); (vii) um dAb que consiste em um domínio de VH ou VL; (viii) uma região determinante de complementaridade isolada (CDR); e (ix) uma combinação de duas ou mais (e.g., duas, três, quatro, cinco ou seis) CDRs isoladas que pode, opcionalmente, serem unidas por um conector sintético. Além disso, embora os dois domínios do fragmento Fv, VL e VH, sejam codificados por genes separados, eles podem ser unidos, usando métodos recombinantes, por um conector que permite que eles sejam feitos como uma única cadeia de proteínas em que as regiões de VL e VH emparelham para formar moléculas monovalentes (conhecidas como Fv de cadeia única (scFv); ver, por exemplo, Bird et al., Science 242:423-426, 1988 e Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883, 1988). Esses fragmentos de anticorpo podem ser obtidos usando técnicas convencionais conhecidas pelos especialistas na técnica, e os fragmentos podem ser triados para utilidade da mesma maneira que os anticorpos intactos. Os fragmentos de ligação ao antígeno podem ser produzidos por técnicas de DNA recombinantes, clivagem enzimática ou química de imunoglobulinas intactas ou, em certos casos, por procedimentos químicos de síntese de peptídeos conhecidos na técnica.
[055] Como aqui usado, o termo “anticorpo anti-CD117” ou “um anticorpo que se liga a CD117” se refere a um anticorpo que é capaz de se ligar a CD117 com afinidade suficiente tal que o anticorpo seja útil como um agente de diagnóstico e/ou terapêutico no alvejamento de CD117.
[056] Como aqui usado, o termo “anticorpo anti-CD45” ou “um anticorpo que se liga a CD45” se refere a um anticorpo que é capaz de se ligar a CD45 com afinidade suficiente tal que o anticorpo seja útil como um agente de diagnóstico e/ou terapêutico no alvejamento de CD45.
[057] Como aqui usado, o termo “diabody” se refere a um anticorpo bivalente contendo duas cadeias polipeptídicas, em que cada cadeia polipeptídica inclui domínios de VH e VL unidos por um conector que é muito curto (e.g., um conector composto por cinco aminoácidos) para permitir a associação intramolecular de domínios de VH e VL na mesma cadeia peptídica. Essa configuração força cada domínio a emparelhar com um domínio complementar em outra cadeia polipeptídica de modo a formar uma estrutura homodimérica. Consequentemente, o termo “triabody” se refere aos anticorpos trivalentes contendo três cadeias peptídicas, cada uma das quais contém um domínio VH e um domínio VL unidos por um conector que é excessivamente curto (e.g., um conector composto por 1 a 2 aminoácidos) para permitir a associação intramolecular de domínios de VH e VL dentro da mesma cadeia peptídica. A fim de dobrar em suas estruturas nativas, os peptídeos configurados desta maneira tipicamente trimerizam de modo a posicionar os domínios de VH e VL de cadeias peptídicas vizinhas espacialmente proximais entre si (ver, por exemplo, Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-48, 1993).
[058] Como aqui usado, o termo “anticorpo biespecífico” se refere a, por exemplo, um anticorpo monoclonal, e.g., um humano ou humanizado, que é capaz de se ligar a pelo menos dois antígenos diferentes ou dois epítopos diferentes. Por exemplo, uma das especificidades de ligação pode ser dirigida para um epítopo em um antígeno de superfície de célula-tronco hematopoiética, tal como CD117 (e.g., GNNK+ CD117) ou CD45, e a outra pode se ligar especificamente a um epítopo em um antígeno de superfície de célula-tronco hematopoiética diferente ou outra proteína da superfície celular, tal como um receptor ou subunidade receptora envolvida em uma via de transdução de sinal que potencializa crescimento celular, entre outros. Em algumas modalidades, as especificidades de ligação podem ser dirigidas para epítopos únicos não sobrepostos no mesmo antígeno alvo (i.e., um anticorpo biparatópico). Um anticorpo “intacto” ou “comprimento total”, como aqui usado, se refere a um anticorpo tendo duas cadeias polipeptídicas pesadas (H) e duas cadeias polipeptídicas leves (L) interconectadas por ligações dissulfeto. Cada cadeia pesada é composta por uma região variável de cadeia pesada (abreviada aqui como HCVR ou VH) e uma região constante de cadeia pesada. A região constante de cadeia pesada é composta por três domínios, CH1, CH2 e CH3. Cada cadeia leve é composta por uma região variável de cadeia leve (abreviada aqui como LCVR ou VL) e uma região constante de cadeia leve. A região constante de cadeia leve é composta por um domínio, CL. As regiões de VH e VL podem ainda serem subdivididas em regiões de hipervariabilidade, denominadas regiões determinantes de complementaridade (CDR), intercaladas com regiões que são mais conservadas, denominadas regiões de estrutura (FR). Cada VH e VL é composta por três CDRs e quatro FRs, dispostas do terminal amino ao terminal carboxila na seguinte ordem: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. As regiões variáveis das cadeias leves e pesadas contêm um domínio de ligação que interage com um antígeno. As regiões constantes dos anticorpos podem mediar a ligação da imunoglobulina aos tecidos ou fatores do hospedeiro, incluindo várias células do sistema imunológico (e.g., células efetoras) e o primeiro componente (Clq) do sistema de complemento clássico.
[059] Como aqui usado, o termo “região determinante de complementaridade” (CDR) se refere a uma região hipervariável encontrada nos domínios variáveis de cadeia leve e cadeia pesada de um anticorpo. As porções mais altamente conservadas de domínios variáveis são referidas como regiões de estrutura (FRs). As posições de aminoácidos que delineiam uma região hipervariável de um anticorpo podem variar dependendo do contexto e das várias definições conhecidas na técnica.
Algumas posições dentro de um domínio variável podem ser vistas como posições hipervariáveis híbridas em que essas posições podem ser consideradas como estando dentro de uma região hipervariável sob um conjunto de critérios, embora sejam consideradas como estando fora de uma região hipervariável sob um conjunto de critérios diferente. Uma ou mais dessas posições também podem ser encontradas em regiões hipervariáveis extendidas. Os anticorpos aqui descritos podem conter modificações nessas posições hipervariáveis híbridas. Os domínios variáveis de cadeias leves e pesadas nativas contêm, cada um, quatro regiões de estrutura que adotam principalmente uma configuração em folha β, conectadas por três CDRs, que formam loops que conectam e, em alguns casos, fazem parte da estrutura em folha β. As CDRs em cada cadeia são mantidas juntas em estreita proximidade pelas regiões de estrutura na ordem FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4 e, com as CDRs das outras cadeias de anticorpos, contribuem para a formação do sítio de ligação alvo de anticorpos (ver Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institute of Health, Bethesda, MD., 1987). Em certas modalidades, a numeração de resíduos de aminoácido de imunoglobulina é realizada de acordo com o sistema de numeração de resíduo de aminoácido de imunoglobulina de Kabat et al., a menos que de outro modo indicado (embora qualquer esquema de numeração de anticorpo incluindo, mas não limitado a IMGT e Chothia, possam ser utilizados).
[060] O termo “se liga especificamente”, como aqui usado, se refere à capacidade de um anticorpo (ou ADC) reconhecer e se ligar a uma estrutura de proteína específica (epítopo) em vez de às proteínas em geral. Se um anticorpo é específico para o epítopo “A”, a presença de uma molécula contendo o epítopo A (A livre ou não marcado), em uma reação contendo “A” marcado e o anticorpo, reduzirá a quantidade de A marcado ligado ao anticorpo. A título de exemplo, um anticorpo “se liga especificamente” a um alvo se o anticorpo, quando marcado, pode ser afastado de seu alvo pelo anticorpo não marcado correspondente. Em uma modalidade, um anticorpo se liga especificamente a um alvo, e.g., um antígeno expressado por células-tronco hematopoiéticas, tal como CD117 (e.g., GNNK+ CD117) ou CD45, ou um antígeno expressado por células imunes maduras (e.g., células T), tal como CD4 ou CD8, se o anticorpo tem uma KD para o alvo de pelo menos cerca de 10-4 M, cerca de 10-5 M, cerca de 10-6 M, cerca de 10-7 M, cerca de 10-8 M, cerca de 10-9 M, cerca de 10-10 cerca de M, 10-11 cerca de M, cerca de 10-12 M ou menos (menos significa um número que seja menor que cerca de 10-12, e.g. 10-13). Em uma modalidade, o termo “se liga especificamente” se refere à capacidade de um anticorpo se ligar a um antígeno com uma KD de pelo menos cerca de 1 x 10-6 M, 1 x 10-7 M, cerca de 1 x 10- 8 M, cerca de 1 x 10-9 M, cerca de 1 x 10-10 M, cerca de 1 x 10-11 M, cerca de 1 x 10-12 M ou mais e/ou se ligar a um antígeno com uma afinidade que é pelo menos duas vezes maior que sua afinidade para um antígeno não especifico. Em uma modalidade, a KD é determinada de acordo com interferometria de bio-camada padrão (BLI). Deve ser entendido, entretanto, que o anticorpo pode ser capaz de se ligar especificamente a dois ou mais antígenos que estão relacionados em sequência. Por exemplo, em uma modalidade, um anticorpo pode se ligar especificamente a ortólogos humanos e não humanos (e.g., camundongo ou primata não humano) de um antígeno, e.g., CD117 (e.g., GNNK+ CD117) ou CD45.
[061] O termo anticorpo “quimérico”, como aqui usado, se refere a um anticorpo tendo sequências variáveis derivadas de uma imunoglobulina não humana, tal como um anticorpo de rato ou camundongo, e regiões constantes de imunoglobulina humana, tipicamente escolhidas de um modelo de imunoglobulina humano. Os métodos para produzir anticorpos quiméricos são conhecidos na técnica.
Ver, e.g., Morrison, 1985, Science 229(4719): 1202-7; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214-221; Gillies et al., 1985, J. Immunol. Methods 125:191-202; Pat. dos EUA Nos
5.807.715; 4.816.567; e 4.816.397. Os termos “Fc”, “região Fc”, “domínio Fc” e “domínio Fc de IgG”, como aqui usados, se referem à porção de uma imunoglobulina, e.g., uma molécula de IgG, que se correlaciona com um fragmento cristalizável obtido pela digestão com papaína de uma molécula de IgG. A região Fc compreende a metade C-terminal de duas cadeias pesadas de uma molécula de IgG que são ligadas por ligações dissulfeto. Não tem atividade de ligação ao antígeno, mas contém a porção de carboidrato e os sítios de ligação para o complemento e receptores Fc, incluindo o receptor FcRn (ver abaixo). Por exemplo, um domínio Fc contém o segundo domínio constante CH2 (e.g., resíduos nas posições EU 231-340 de IgG1 humano) e o terceiro domínio constante CH3 (e.g., resíduos nas posições EU 341-
447 de IgG1 humano). Como aqui usado, o domínio Fc inclui a “região de dobradiça inferior” (e.g., resíduos nas posições EU 233-239 de IgG1 humano).
[062] Fc pode se referir a essa região isoladamente ou essa região no contexto de um anticorpo, fragmento de anticorpo ou proteína de fusão Fc. Os polimorfismos foram observados em várias posições nos domínios Fc incluindo, mas não limitadas às posições EU 270, 272, 312, 315, 356 e 358 e, portanto, pequenas diferenças entre as sequências apresentadas no presente pedido e as sequências conhecidas na técnica podem existir. Assim, um “domínio Fc de IgG tipo selvagem” ou “domínio Fc de IgG WT” se refere a qualquer região Fc de IgG que ocorre naturalmente (i.e., qualquer alelo). As sequências das cadeias pesadas de IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 humanos podem ser encontradas em vários bancos de dados de sequências, por exemplo, no banco de dados Uniprot (www.uniprot.org) sob os números de acesso P01857 (IGHG1_HUMAN), P01859 (IGHG2_HUMAN), P01860 (IGHG3_HUMAN) e P01861 (IGHG1_HUMAN), respectivamente.
[063] Os termos “região Fc modificada” ou “região Fc variante”, como aqui usados, se referem a um domínio Fc de IgG compreendendo uma ou mais substituições, deleções, inserções ou modificações de aminoácidos introduzidas em qualquer posição dentro do domínio Fc. Em certos aspectos um domínio Fc de IgG variante compreende uma ou mais substituições de aminoácidos resultando em afinidade de ligação diminuída ou ablacionada para um Fc gama R e/ou C1q em comparação com a domínio Fc tipo selvagem não compreendendo a uma ou mais substituições de aminoácidos. Além disso, as interações de ligação de Fc são essenciais para uma variedade de funções efetoras e eventos de sinalização a jusante incluindo, mas não limitados a citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo (ADCC) e citotoxicidade dependente de complemento (CDC).
Consequentemente, em certos aspectos, um anticorpo compreendendo um domínio Fc variante (e.g., um anticorpo, proteína de fusão ou conjugado) pode exibir afinidade de ligação alterada para pelo menos um ou mais ligantes de Fc (e.g., Fc gama Rs) em relação a um anticorpo correspondente de outro modo tendo a mesma sequência de aminoácidos, mas não compreendendo uma ou mais substituições, deleções, inserções ou modificações de aminoácidos, tais como, por exemplo, uma região Fc não modificada contendo resíduos de aminoácido que ocorrem naturalmente na posição correspondente na região Fc.
[064] Os domínios Fc variantes aqui descritos são definidos de acordo com as modificações de aminoácidos que os compõem. Para todas as substituições de aminoácidos discutidas aqui em relação à região Fc, a numeração é sempre de acordo com o índice EU como em Kabat. Assim, por exemplo, D265C é um Fc variante com o ácido aspártico (D) na posição EU 265 substituído por cisteína (C) em relação ao domínio Fc precursor. Do mesmo modo, e.g., D265C/L234A/L235A define uma variante de Fc variante com substituições nas posições EU 265 (D para C), 234 (L para A) e 235 (L para A) em relação ao domínio Fc precursor. Uma variante também pode ser designada de acordo com sua composição de aminoácidos final nas posições EU de aminoácidos mutadas. Por exemplo, o mutante L234A/L235A pode ser referido como “LALA”. Como um outro exemplo, o mutante E233P.L234V.L235A.delG236 (deleção de 236) pode ser referido como “EPLVLAdelG”. Como ainda outro exemplo, o mutante I253A.H310A.H435A pode ser referido como “IHH”. É observado que a ordem em que substituições são fornecidas é arbitrária.
[065] Os termos “receptor Fc gama” ou “Fc gama R”, como aqui usados, se referem a qualquer membro da família de proteínas que se ligam à região Fc do anticorpo IgG e são codificados pelos genes Fc gama R. Em humanos essa família inclui, mas não é limitada a Fc gama RI (CD64), incluindo as isoformas Fc gama RIa, Fc gama RIb e Fc gama RIc; Fc gama RII (CD32), incluindo as isoformas Fc gama RIIa (incluindo os alotipos H131 e R131), Fc gama RIIb (incluindo Fc gama RIIb-1 e
Fc gama RIIb-2) e Fc gama RIIc; e Fc gama RIII (CD16), incluindo as isoformas Fc gama RIIIa (incluindo os alotipos V158 e F158) e Fc gama RIIIb (incluindo os alotipos Fc gama RIIIb-NA1 e Fc gama RIIIb-NA2), bem como quaisquer Fc gama R humanos não descobertos ou isoformas ou alotipos de Fc gama R. Um Fc gama R pode ser de qualquer organismo incluindo, mas não limitado a humanos, camundongos, ratos, coelhos e macacos. Os Fc gama R de camundongo incluem, mas não são limitados a Fc gama RI (CD64), Fc gama RII (CD32), Fc gama RIII (CD16) e Fc gama RIII-2 (CD16-2), bem como quaisquer Fc gama Rs de camundongo não descobertos ou isoformas ou alótipos de Fc gama R.
[066] O termo “função efetora”, como aqui usado, se refere a um evento bioquímico que resulta da interação de um domínio Fc com um receptor Fc. As funções efetoras incluem, mas não são limitadas a ADCC, ADCP e CDC. Por “célula efetora”, como aqui usado, entende-se uma célula do sistema imunológico que expressa ou um ou mais receptores Fc e medeia uma ou mais funções efetoras. As células efetoras incluem, mas não são limitadas a monócitos, mastócitos, neutrófilos, células dendríticas, eosinófilos, macrófagos, plaquetas, células B, linfócitos granulares grandes, células de Langerhans, células exterminadoras naturais (NK) e células T gama delta, e podem ser de qualquer organismo incluindo, mas não limitado a humanos, camundongos, ratos, coelhos e macacos.
[067] O termo “silenciar”, “silenciado” ou “silenciamento”, como aqui usado, se refere a um anticorpo tendo uma região Fc modificada aqui descrita que tem ligação diminuída para um receptor Fc gama (FcγR) em relação à ligação de um anticorpo idêntico compreendendo uma região Fc não modificada para o FcγR (e.g., uma diminuição na ligação a um FcγR em pelo menos 70 %, pelo menos 80 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 %, pelo menos 98 %, pelo menos 99 % ou 100 % em relação à ligação do anticorpo idêntico compreendendo uma região Fc não modificada para o FcγR conforme medido por, e.g., BLI). Em algumas modalidades, o anticorpo silenciado em Fc não tem ligação detectável a um FcγR. A ligação de um anticorpo tendo uma região Fc modificada para um FcγR pode ser determinada usando uma variedade de técnicas conhecidas na técnica, por exemplo, mas não limitadas a métodos de equilíbrio (e.g., ensaio imunoabsorvente ligado a enzima (ELISA); KinExA, Rathanaswami et al. Analytical Biochemistry, Vol. 373: 52-60, 2008; ou radioimunoensaio (RIA)), ou por um ensaio de ressonância plasmônica de superfície ou outro mecanismo de ensaio com base em cinética (e.g., análise BIACORE.RTM.
ou análise OctetTM (forteBIO)), e outros métodos, tais como ensaios de ligação indireta, ensaios de ligação competitiva, transferência de energia de ressonância por fluorescência (FRET), eletroforese em gel e cromatografia (e.g., filtração em gel).
Esses e outros métodos podem utilizas um marcador em um ou mais dos componentes sendo examinados e/ou utilizar uma variedade de métodos de detecção incluindo, mas não limitados a marcadores cromogênicos, fluorescentes, luminescentes ou isotópicos. Uma descrição detalhada de afinidades de ligação e cinética pode ser encontrada em Paul, W. E., ed., Fundamental Immunology, 4a Ed., Lippincott-Raven, Philadelphia (1999), que se concentra em interações anticorpo- imunógeno. Um exemplo de um ensaio de ligação competitiva é um radioimunoensaio compreendendo a incubação de antígeno marcado com o anticorpo de interesse na presença de quantidades crescentes de antígeno não marcado, e a detecção do anticorpo ligado ao antígeno marcado. A afinidade do anticorpo de interesse para um antígeno particular e as taxas de dissociação podem ser determinadas a partir de dados por análise de gráficos de scatchard. A competição com um segundo anticorpo também pode ser determinada usando radioimunoensaios. Neste caso, o antígeno é incubado com anticorpo de interesse conjugado com um composto marcado na presença de quantidades crescentes de um segundo anticorpo não marcado.
[068] Como aqui usado, o termo “anticorpo idêntico compreendendo uma região Fc não modificada” se refere a um anticorpo que carece das substituições de aminoácidos citadas (e.g., D265C, L234A, L235A e/ou H435A), mas, de outro modo, tem a mesma sequência de aminoácidos do anticorpo modificado em Fc ao qual está sendo comparado.
[069] Os termos “citotoxicidade mediada por células dependentes de anticorpo” ou “ADCC” se referem a uma forma de citotoxicidade em que um polipeptídeo compreendendo um domínio Fc, e.g., um anticorpo, ligado a receptores Fc (FcRs) presentes em certas células citotóxicas (e.g., principalmente células NK, neutrófilos e macrófagos) e permite que essas células citotóxicas efetoras se liguem especificamente a uma “célula alvo” portadora de antígeno e subsequentemente mate a célula alvo com citotoxinas. (Hogarth et al., Nature review Drug Discovery 2012, 11: 313) É considerado que, além de anticorpos e fragmentos dos mesmos, outros polipeptídeos compreendendo domínios Fc, e.g., proteínas de fusão Fc e proteínas conjugadas Fc, tendo a capacidade de se ligar especificamente a uma célula alvo portadora de antígeno serão capazes de efetuar a citotoxicidade mediada por célula.
[070] Para simplificar, a citotoxicidade mediada por célula resultante da atividade de um polipeptídeo compreendendo um domínio Fc também é referida aqui como atividade de ADCC. A capacidade de qualquer polipeptídeo particular da presente divulgação mediar a lise da célula alvo por ADCC pode ser avaliada. Para avaliar a atividade de ADCC, um polipeptídeo de interesse (e.g., um anticorpo) é adicionado em células alvo em combinação com células efetoras imunes, resultando na citólise da célula alvo. Citólise é geralmente detectada pela liberação de marcador (e.g., substratos radioativos, corantes fluorescentes ou proteínas intracelulares naturais) das células lisadas. Células efetoras úteis para esses ensaios incluem células mononucleares do sangue periférico (PBMC) e células exterminadoras naturais (NK). Exemplos específicos de ensaios de ADCC in vitro são descritos em Bruggemann et al., J. Exp. Med. 166: 1351 (1987); Wilkinson et al., J. Immunol.
Methods 258: 183 (2001); Patel et al., J. Immunol. Methods 184: 29 (1995).
Alternativamente, ou adicionalmente, a atividade de ADCC do anticorpo de interesse pode ser avaliada in vivo, e.g., em um modelo animal, tal como aqueles divulgados em Clynes et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 652 (1998).
[071] Como aqui usado, os termos “condição” e “condicionamento” se referem a processos pelo qual um paciente é preparado para receber um transplante, e.g., um transplante contendo células-tronco hematopoiéticas. Tais procedimentos promovem o enxerto de um transplante de célula-tronco hematopoiética (por exemplo, como inferido a partir de um aumento sustentado na quantidade de células-tronco hematopoiéticas viáveis dentro de uma amostra de sangue isolada de um paciente após um procedimento de condicionamento e subsequente transplante de célula- tronco hematopoiética. De acordo com os métodos aqui descritos, um paciente pode ser condicionado para terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética pela administração ao paciente de um ADC, um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo capaz de se ligar a um antígeno expressado por células-tronco hematopoiéticas, tal como CD117 (e.g., GNNK+ CD117) ou CD45. Como aqui descrito, o anticorpo pode ser conjugado covalentemente com uma citotoxina de modo a formar um ADC. A administração de um ADC, um anticorpo, ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo capaz de se ligar a um ou mais dos antígenos anteriores a um paciente em necessidade de terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética pode promover o enxerto de uma célula-tronco hematopoiética enxerto, por exemplo, esgotando seletivamente as células-tronco hematopoiéticas endógenas, criando assim uma vacância preenchida por um transplante de célula- tronco hematopoiética exógena.
[072] Como aqui usado, o termo “eficaz quantidade” ou “terapeuticamente eficaz quantidade” se refere a uma quantidade que é suficiente para obter o resultado desejado ou para ter um efeito em uma doença autoimune ou câncer.
[073] Como aqui usado, o termo “meia-vida” se refere ao tempo que leva para a concentração plasmática do fármaco de anticorpo no corpo ser reduzida pela metade ou 50 %. Essa redução de 50 % na concentração sérica reflete a quantidade de fármaco circulante.
[074] Como aqui usado, o termo “anticorpo humano” é intencionado a incluir anticorpos tendo regiões constantes e variáveis derivadas de sequências de imunoglobulina de linhagem germinativa humana. Um anticorpo humano pode incluir resíduos de aminoácido não codificados por sequências de imunoglobulina de linhagem germinativa humana (e.g., mutações introduzidas por mutagênese aleatória ou sítio-específica in vitro ou durante o reagrupamento genético ou por mutação somática in vivo). Entretanto, o termo “anticorpo humano”, como aqui usado, não é intencionado a incluir anticorpos em que as sequências de CDR derivadas da linhagem germinativa de outra espécie de mamífero, tal como um camundongo, foram enxertadas em sequências de estrutura humana. Um anticorpo humano pode ser produzido em uma célula humana (por exemplo, por expressão recombinante) ou por um animal não humano ou uma célula procariótica ou eucariótica que é capaz de expressar funcionalmente genes reorganizados de imunoglobulina humana (tal como cadeia pesada e/ou cadeia leve). Quando um anticorpo humano é um anticorpo de cadeia simples, pode incluir um peptídeo conector que não é encontrado em anticorpos humanos nativos. Por exemplo, um Fv pode conter um peptídeo conector, tal como duas a cerca de oito glicinas ou outros resíduos de aminoácido, que conecta a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve. Esses peptídeos conectores são considerados como sendo de origem humana. Anticorpos humanos podem ser feitos por uma variedade de métodos conhecidos na técnica incluindo métodos de exibição de fago usando bibliotecas de anticorpos derivadas de sequências de imunoglobulina humanas. Anticorpos humanos também podem ser produzidos usando camundongos transgênicos que são incapazes de expressar imunoglobulinas endógenas funcionais, mas que podem expressar genes de imunoglobulina humana (ver, por exemplo, Publicação PCT Nos WO 1998/24893; WO 1992/01047; WO 1996/34096; WO 1996/33735; Patentes dos EUA Nos 5.413.923;
5.625.126; 5.633.425; 5.569.825; 5.661.016; 5.545.806; 5.814.318; 5.885.793;
5.916.771; e 5.939.598).
[075] Formas “humanizadas” de anticorpos não humanos (e.g., murinos) são imunoglobulinas quiméricas que contêm sequências mínimas derivadas de imunoglobulina não humana. Em geral, um anticorpo humanizado compreenderá substancialmente todos de pelo menos um, e tipicamente dois, domínios variáveis, em que todas ou substancialmente todas as regiões CDR correspondem àquelas de uma imunoglobulina não humana e todas ou substancialmente todas das regiões FR são aquelas de uma sequência de imunoglobulina humana. O anticorpo humanizado também pode compreender pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina (Fc), tipicamente a de uma sequência consenso de imunoglobulina humana. Métodos de humanização de anticorpos são conhecidos na técnica. Ver, e.g., Riechmann et al., 1988, Nature 332: 323-7; Pat. dos EUA Nos 5.530.101;
5.585.089; 5.693.761; 5.693.762; e 6.180.370 por Queen et al.; EP239400; Publicação PCT WO 91/09967; Pat. dos EUA No 5.225.539; EP592106; EP519596; Padlan, 1991, Mol. Immunol., 28: 489-498; Studnicka et al., 1994, Prot. Eng. 7: 805-814; Roguska et al., 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. 91: 969-973; e Pat. dos EUA No 5.565.332.
[076] Como aqui usado, o termo “enxerto potencial” é usado para se referir à capacidade de células-tronco e progenitoras hematopoiéticas repovoarem um tecido, quer essas células estejam circulando naturalmente ou sejam fornecidas por transplante. O termo abrange todos os eventos que envolvem ou levam ao enxerto, tais como direcionamento de células ao tecido e colonização de células dentro do tecido de interesse. A eficiência do enxerto ou taxa de enxerto pode ser avaliada ou quantificada usando qualquer parâmetro clinicamente aceitável como conhecido por um especialista na técnica e pode incluir, por exemplo, avaliação de unidades de repovoamento competitivo (CRU); incorporação ou expressão de um marcador em tecidos nos quais as células-troncos se alojaram, colonizaram ou foram enxertadas; ou pela avaliação do progresso de um sujeito através da progressão da doença, sobrevivência das células-tronco e progenitoras hematopoiéticas ou sobrevivência de um receptor. O enxerto também pode ser determinado medindo as contagens de glóbulos brancos no sangue periférico durante um período de pós-transplante. O enxerto também pode ser avaliado medindo a recuperação de células da medula por células do doador em uma amostra aspirada da medula óssea.
[077] Como aqui usado, o termo “células-tronco hematopoiéticas” (“HSCs”) se refere às células sanguíneas imaturas tendo a capacidade de se autorrenovar e se diferenciar em células sanguíneas maduras compreendendo diversificar linhagens incluindo, mas não limitado a granulócitos (e.g., promielócitos, neutrófilos, eosinófilos, basófilos), eritrócitos (e.g., reticulócitos, eritrócitos), trombócitos (e.g., megacarioblastos, megacariócitos produtores de plaquetas, plaquetas), monócitos (e.g., monócitos, macrófagos), células dendríticas, microglia, osteoclastos e linfócitos (e.g., células NK, células B e células T). Essas células podem incluir células CD34+.
As células CD34+ são células imaturas que expressam o marcador de superfície celular CD34. Em humanos, acredita-se que as células CD34+ incluem uma subpopulação de células com as propriedades das células-tronco definidas acima, enquanto que em camundongos, as HSCs são CD34-. Além disso, as HSCs também se referem a HSCs de repovoamento de longo prazo (LT-HSC) e HSCs de repovoamento de curto prazo (ST-HSC). LT-HSCs e ST-HSCs são diferenciadas, com base no potencial funcional e na expressão celular de marcadores de superfície. Por exemplo, HSCs humanas são CD34+, CD38-, CD45RA-, CD90+, CD49F+ e lin- (negativo para marcadores de linhagem madura incluindo CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD10, CD11B, CD19, CD20, CD56, CD235A). Em camundongos, as LT-HSCs da medula óssea são CD34-, SCA-1+, C-kit+, CD135-, Slamfl/CD150+, CD48- e lin-
(negativo para marcadores de linhagem madura incluindo Ter119, CD11b, Gr1, CD3, CD4, CD8, B220, IL7ra), enquanto que as ST-HSCs são CD34+, SCA-1+, C-kit+, CD135-, Slamfl/CD150+ e lin-(negativo para marcadores de linhagem madura incluindo Ter119, CD11b, Gr1, CD3, CD4, CD8, B220, IL7ra). Além disso, as ST-HSCs são menos quiescentes e mais proliferativas que as LT-HSCs sob condições homeostáticas. Entretanto, as LT-HSC têm maior potencial de autorrenovação (i.e., elas sobrevivem ao longo da vida adulta e podem ser transplantadas em série para receptores sucessivos), enquanto que as ST-HSCs têm autorrenovação limitada (i.e., elas sobrevivem por apenas um período de tempo limitado e não possuem potencial de transplante em série). Qualquer uma dessas HSCs pode ser usada nos métodos aqui descritos. As ST-HSCs são particularmente úteis porque elas são altamente proliferativas e, assim, podem mais prontamente dar origem à progênie diferenciada.
[078] Como aqui usado, o termo “anticorpo anti-célula hematopoiética” ou “anticorpo anti-HC” se refere a um anticorpo que se liga especificamente a um antígeno expressado por células-tronco hematopoiéticas, tal como CD117 (e.g., GNNK+ CD117) ou CD45, ou um antígeno expressado por células imunes maduras (e.g., células T) tal como CD45.
[079] Como aqui usado, o termo “potencial funcional das células-tronco hematopoiéticas” se refere às propriedades funcionais de células-tronco hematopoiéticas que incluem 1) multi-potência (que se refere à capacidade de se diferenciar em múltiplas linhagens sanguíneas diferentes incluindo, mas não limitadas a granulócitos (e.g., promielócitos, neutrófilos, eosinófilos, basófilos), aritrócitos (e.g., reticulócitos, aritrócitos), trombócitos (e.g., megacarioblastos, megacariócitos produtores de plaquetas, plaquetas), monócitos (e.g., monócitos, macrófagos), células dendríticas, microglia, osteoclastos e linfócitos (e.g., células NK, células T e células B), 2) autorrenovação (que se refere à capacidade de células-tronco hematopoiéticas darem origem a células-filhas que têm potencial equivalente ao da célula-mãe e ainda que essa capacidade possa ocorrer repetidamente ao longo da vida de um indivíduo sem exaustão) e 3) a capacidade de células-tronco hematopoiéticas ou progênie das mesmas serem reintroduzidas em um receptor do transplante, após o que se alojam no nicho de célula-tronco hematopoiética e reestabelecem a hematopoese produtiva e sustentada.
[080] Como aqui usado, o termo “quimerismo do doador” se refere à porcentagem de células do doador no sistema linfo-hematopoiético de um receptor (i.e., hospedeiro) de um transplante de células-tronco hematopoiéticas alogênicas. Por exemplo, 85 % de quimerismo do doador se refere a um sistema linfo-hematopoiético compreendendo 85 % células do doador após um transplante de células-tronco hematopoiéticas alogênicas. Em algumas modalidades, os métodos aqui são eficazes para estabelecer pelo menos 80 % de quimerismo do doador, pelo menos 85 % de quimerismo do doador ou pelo menos 90 % de quimerismo in vivo. O enxerto e o grau de quimerismo (e.g., porcentagem de células-tronco do doador no hospedeiro) podem ser detectados por qualquer número de métodos padrão. A presença de marcadores do doador, tais como marcadores específicos de cromossomos sexuais, no hospedeiro podem ser determinados, por exemplo, usando análise citogenética padrão, reação em cadeia de polimerase (PCR) com iniciadores apropriados, número variável de repetições em tandem-PCR (VNTR-PCR), marcadores de microsatélites ou outras técnicas de impressão digital ou hibridização fluorescente in situ (FISH). O quimerismo hospedeiro-doador também pode ser determinado determinando a porcentagem de células do tipo doador no sangue do hospedeiro usando, por exemplo, testes de microcitotoxicidade dependente de complemento padrão.
[081] Como aqui usado, o termo “incompatibilidade” (e.g., “incompatibilidade de MHC”, “incompatibilidade de HLA” ou “incompatibilidade de miHA”), no contexto de transplante de células-tronco hematopoiéticas, se refere à presença de pelo menos um antígeno de superfície celular diferente (e.g., não idêntico) em uma célula alogênica (ou tecido ou um órgão) (e.g., uma célula do doador) em relação a uma variante do antígeno expressado pelo receptor. Um transplante alogênico pode, em algumas modalidades, conter “incompatibilidades menores” em relação ao receptor do transplante. Tais “incompatibilidades menores” incluem diferenças individuais em antígenos de superfície celular diferentes dos antígenos de MHC ou antígenos HLA.
As incompatibilidades menores incluem diferenças em antígenos de histocompatibilidade menor. Em algumas modalidades, um transplante alogênico pode conter “incompatibilidades principais” em relação ao receptor do transplante.
Tais “incompatibilidades principais” se referem às diferenças no haplótipo de MHC ou haplótipo de HLA entre o transplante e o receptor. Em uma modalidade exemplificativa, um transplante alogênico pode compartilhar o mesmo haplótipo de MHC ou HLA do receptor do transplante, mas pode conter uma ou mais incompatibilidades menores (também referido aqui como um “transplante alogênico de incompatibilidade menor”). Em uma outra modalidade exemplificativa, um transplante alogênico pode conter uma ou mais incompatibilidades principais sozinhas ou além de uma ou mais incompatibilidades menores. Um transplante alogênico de “incompatibilidade total” se refere a um transplante alogênico que contém uma ou mais incompatibilidades principais e uma ou mais incompatibilidades menores. A presença de incompatibilidades principais e/ou menores pode ser determinada por ensaios padrão usados na técnica, tais como análise sorológica, genômica ou molecular. Em algumas modalidades, pelo menos um antígeno do complexo de histocompatibilidade principal é incompatível em relação a um alelo expressado pelo receptor.
Alternativamente ou adicionalmente, pelo menos um antígeno de histocompatibilidade menor é incompatível em relação a um alelo expressado pelo receptor.
[082] Como aqui usado, os termos “sujeito” e “paciente” se referem a um organismo, tal como um humano, que recebe tratamento para uma doença ou condição particular como aqui descrito. Por exemplo, um paciente, tal como um paciente humano, pode receber tratamento antes da terapia de transplante de célula- tronco hematopoiética de modo a promover o enxerto de células-tronco hematopoiéticas exógenas.
[083] Como aqui usado, o termo “doador” se refere a um humano ou animal a partir do qual uma ou mais células são isoladas antes da administração das células, ou progênie das mesmas, a um receptor. A uma ou mais células podem ser, por exemplo, uma população de células-tronco hematopoiéticas.
[084] Como aqui usado, o termo “receptor” se refere a um paciente que recebe um transplante, tal como um transplante contendo uma população de células-tronco hematopoiéticas. As células transplantadas administradas a um receptor podem ser, e.g., células autólogas, singênicas ou alogênicas.
[085] Como aqui usado, o termo “endógeno” descreve uma substância, tal como uma molécula, célula, tecido ou órgão (e.g., uma célula-tronco hematopoiética ou uma célula de linhagem hematopoiética, tal como um megacariócito, trombócito, plaqueta, eritrócito, mastócito, mieloblasto, basófilo, neutrófilo, eosinófilo, célula microglial, granulócito, monócito, osteoclasto, célula apresentadora de antígeno, macrófago, célula dendrítica, célula matadora natural, linfócito T ou linfócito B) que é encontrada naturalmente em um organismo particular, tal como um paciente humano.
[086] Como aqui usado, o termo “amostra” se refere a um espécime (e.g., sangue, componente do sangue (e.g., soro ou plasma), urina, saliva, líquido amniótico, líquido cefalorraquidiano, tecido (e.g., placentário ou dérmico), fluido pancreático, amostra de vilosidade coriônica e células) retirado de um sujeito.
[087] Como aqui usado, o termo “scFv” se refere a um anticorpo Fv de cadeia única em que os domínios variáveis da cadeia pesada e da cadeia leve de um anticorpo foram unidos para formar uma cadeia. Os fragmentos scFv contêm uma única cadeia polipeptídica que inclui a região variável de uma cadeia leve de anticorpo (VL) (e.g., CDR-L1, CDR-L2 e/ou CDR-L3) e a região variável de uma cadeia pesada de anticorpo (VH) (e.g., CDR-H1, CDR-H2 e/ou CDR-H3) separadas por um conector.
O conector que une as regiões de VL e VH de um fragmento scFv pode ser um conector peptídico composto por aminoácidos proteinogênicos. Conectores alternativos podem ser usados de modo a aumentar a resistência do fragmento scFv à degradação proteolítica (por exemplo, conectores contendo D-aminoácidos), de modo a realçar a solubilidade do fragmento scFv (por exemplo, conectores hidrofílicos, tais como conectores contendo polietilenoglicol ou polipeptídeos contendo resíduos de repetição de glicina e serina), melhorar a estabilidade biofísica da molécula (por exemplo, um conector contendo resíduos de cisteína que formam ligações dissulfeto intramoleculares ou intermoleculares) ou atenuar a imunogenicidade do fragmento scFv (por exemplo, conectores contendo sítios de glicosilação). Também será entendido por um especialista na técnica que as regiões variáveis das moléculas de scFv aqui descritas podem ser modificadas de tal modo que elas variem em sequência de aminoácidos da molécula de anticorpo da qual foram derivadas. Por exemplo, substituições de nucleotídeos ou aminoácidos levando a substituições ou alterações conservadoras em resíduos de aminoácido podem ser feitas (e.g., em resíduos de CDR e/ou estrutura) de modo a preservar ou realçar a capacidade do scFv para se ligar ao antígeno reconhecido pelo anticorpo correspondente.
[088] Como aqui usada, a frase “substancialmente eliminado do sangue” se refere a um ponto no tempo após a administração de um agente terapêutico (tal como um anticorpo anti-CD117, um anticorpo anti-CD45 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) a um paciente quando a concentração do agente terapêutico em uma amostra de sangue isolada do paciente é tal que o agente terapêutico não seja detectável por meios convencionais (por exemplo, tal que o agente terapêutico não seja detectável acima do limite de ruído do dispositivo ou ensaio usado para detectar o agente terapêutico). Uma variedade de técnicas conhecidas na técnica pode ser usada para detectar anticorpos, fragmentos de anticorpo e ligantes de proteína, tal como ensaios de detecção com base em ELISA conhecidos na técnica ou aqui descrito. Ensaios adicionais que podem ser usados para detectar anticorpos, ou fragmentos de anticorpo, incluem técnicas de imunoprecipitação e ensaios de imunotransferência entre outros conhecidos na técnica.
[089] Como aqui usado, o termo “transfecção” se refere a qualquer uma de uma ampla variedade de técnicas comumente usadas para a introdução de DNA exógeno em uma célula hospedeira procariótica ou eucariótica, tal como eletroporação, lipofecção, precipitação de fosfato de cálcio, transfecção de DEAE- dextrano e semelhantes.
[090] Como aqui usado “tratar” ou “tratamento”, se refere a reduzir a severidade e/ou frequência de sintomas da doença, eliminar os sintomas da doença e/ou a causa subjacente dos ditos sintomas, reduzir a frequência ou probabilidade de sintomas da doença e/ou sua causa adjacente e melhorar ou remediar os danos causados, diretamente ou indiretamente, pela doença, qualquer melhoria de qualquer consequência da doença, tal como sobrevivência prolongada, menos morbidade e/ou uma diminuição dos efeitos colaterais que são os subprodutos de uma modalidade terapêutica alternativa; como é prontamente avaliado na técnica, a erradicação total da doença é preferida, mas não um requisito para uma ação de tratamento. Os resultados clínicos benéficos ou desejados incluem, mas não são limitados a promover o enxerto de células hematopoiéticas exógenas em um paciente após a terapia de condicionamento de anticorpo como aqui descrito e, subsequente, terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética. Resultados benéficos adicionais incluem um aumento na contagem de células ou concentração relativa de células- tronco hematopoiéticas em um paciente em necessidade de um transplante de célula- tronco hematopoiética após a terapia de condicionamento e subsequente administração de um enxerto de célula-tronco hematopoiética exógena ao paciente.
Os resultados benéficos da terapia aqui descrita também podem incluir um aumento na contagem de células ou concentração relativa de uma ou mais células de linhagem hematopoiética, tais como um megacariócito, trombócito, plaqueta, eritrócito, mastócito, mieloblasto, basófilo, neutrófilo, eosinófilo, célula microglial, granulócito, monócito, osteoclasto, célula apresentadora de antígeno, macrófago, célula dendrítica, célula matadora natural, linfócito T ou linfócito B, após a terapia de condicionamento e subsequente terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética. Resultados benéficos adicionais podem incluir a redução na quantidade de uma população de células que causam doença, tal como uma população de células cancerosas (e.g., células leucêmicas CD117+) ou células autoimunes (e.g., linfócitos autoimunes CD117+, tais como células T CD117+ que expressam um receptor de células T que reage de forma cruzada com um antígeno próprio). Na medida em que os métodos da presente divulgação são dirigidos à prevenção de transtornos, é entendido que o termo “prevenir” não requer que o estado da doença seja completamente frustrado. Em vez disso, como aqui usado, o termo prevenção se refere à capacidade do técnico habilitado para identificar uma população que é suscetível aos transtornos, tal que a administração dos compostos da presente divulgação possa ocorrer antes do início de uma doença. O termo não significa que o estado da doença é completamente evitado.
[091] Como aqui usado, pacientes que estão “em necessidade de” um transplante de célula-tronco hematopoiética incluem pacientes que exibem um defeito ou deficiência em um ou mais tipos de células do sangue, bem como pacientes tendo um transtorno de células-tronco, doença autoimune, câncer ou outra patologia aqui descrita. As células-tronco hematopoiéticas geralmente exibem 1) multi-potência e podem, portanto, se diferenciar em múltiplas linhagens sanguíneas diferentes incluindo, mas não limitadas a granulócitos (e.g., promielócitos, neutrófilos, eosinófilos, basófilos), aritrócitos (e.g., reticulócitos, aritrócitos), trombócitos (e.g., megacarioblastos, megacariócitos produtores de plaquetas, plaquetas), monócitos
(e.g., monócitos, macrófagos), células dendríticas, microglia, osteoclastos e linfócitos (e.g., células NK, células B e células T), 2) autorrenovação e podem, portanto, dar origem a células-filhas que têm potencial equivalente ao da célula-mãe, e 3) a capacidade de serem reintroduzidas em um receptor do transplante, após o que se alojam no nicho de célula-tronco hematopoiética e reestabelecem a hematopoese produtiva e sustentada. As células-tronco hematopoiéticas podem, portanto, serem administradas a um paciente defeituoso ou deficiente em um ou mais tipos de célula da linhagem hematopoiética de modo a reconstituir a população defeituosa ou deficiente de células in vivo. Por exemplo, o paciente pode estar sofrendo de câncer, e a deficiência pode ser causada pela administração de um agente quimioterapêutico ou outro medicamento que esgota, seletivamente ou não especificamente, a população de células cancerosas. Adicionalmente ou alternativamente, o paciente pode estar sofrendo de uma hemoglobinopatia (e.g., uma hemoglobinopatia não maligna), tal como anemia falciforme, talassemia, anemia de Fanconi, anemia aplásica e síndrome de Wiskott-Aldrich. O sujeito pode ser alguém que esteja sofrendo de imunodeficiência combinada grave de adenosina deaminase (ADA SCID), HIV/AIDS, leucodistrofia metacromática, anemia de Diamond-Blackfan e síndrome de Schwachman-Diamond. O sujeito pode ter ou ser afetado por um transtorno sanguíneo hereditário (e.g., anemia falciforme) ou um transtorno autoimune.
Adicionalmente ou alternativamente, o sujeito pode ter ou ser afetado por uma malignidade, tal como neuroblastoma ou um câncer hematológico. Por exemplo, o sujeito pode ter uma leucemia, linfoma ou mieloma. Em algumas modalidades, o sujeito tem leucemia mieloide aguda, leucemia linfoide aguda, leucemia mieloide crônica, leucemia linfoide crônica, mieloma múltiplo, linfoma difuso de grandes células B ou linfoma não-Hodgkin. Em algumas modalidades, o sujeito tem síndrome mielodisplásica. Em algumas modalidades, o sujeito tem uma doença autoimune, tal como esclerodermia, esclerose múltipla, colite ulcerativa, doença de Crohn, diabetes
Tipo 1 ou outra patologia autoimune aqui descrita. Em algumas modalidades, o sujeito necessita de terapia de células T com receptor de antígeno quimérico (CART). Em algumas modalidades, o sujeito tem ou é de outro modo afetado por um transtorno do armazenamento metabólico. O sujeito pode sofrer ou, de outro modo, ser afetado por um transtorno metabólico selecionado do grupo que consiste em doenças do armazenamento de glicogênio, mucopolissacaridose, doença de Gaucher, doença de Hurlers, esfingolipidose, leucodistrofia metacromática ou quaisquer outras doenças ou transtornos que podem se beneficiar dos tratamentos e terapias aqui divulgados incluindo, sem limitação, imunodeficiência combinada grave, síndrome de Wiscott- Aldrich, síndrome de hiperimunoglobulina M (IgM), doença de Chediak-Higashi, linfo- histiocitose hereditária, osteopetrose, osteogênese imperfeita, doenças de armazenamento, talassemia maior, doença falciforme, esclerose sistêmica, lúpus eritematoso sistêmico, esclerose múltipla, artrite reumatoide juvenil e aquelas doenças ou transtornos descritos em “Bone Marrow Transplantation for Non-Malignant Disease”, ASH Education Book, 1: 319-338 (2000), cuja divulgação é aqui incorporada por referência em sua totalidade no que se refere às patologias que podem ser tratadas pela administração de terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética.
Adicionalmente ou alternativamente, um paciente “em necessidade de” um transplante de célula-tronco hematopoiética pode ser aquele que está ou não sofrendo de uma das patologias anteriores, mas, no entanto, exibe um nível reduzido (e.g., se comparado àquele de um sujeito de outro modo saudável) de um ou mais tipos de células endógenas dentro da linhagem hematopoiética, tais como megacariócitos, trombócitos, plaquetas, aritrócitos, mastócitos, mieloblastos, basófilos, neutrófilos, eosinófilos, microglia, granulócitos, monócitos, osteoclastos, células apresentadoras de antígeno, macrófagos, células dendríticas, células exterminadoras naturais, linfócitos T e linfócitos B. Um especialista na técnica pode prontamente determinar se o nível de um ou mais dos tipos de célula anteriores, ou outro tipo de célula do sangue,
está reduzido em relação a um sujeito de outro modo saudável, por exemplo, por meio de citometria de fluxo e métodos de classificação de células ativadas por fluorescência (FACS) dentre outros procedimentos conhecidos na técnica.
[092] O termo “agente imunossupressor” ou “imunossupressor”, como aqui usado, se refere a substâncias que atuam para suprimir ou mascarar o sistema imunológico do receptor do transplante hematopoiético. Isso incluiria substâncias que suprimem a produção de citocina, regulam negativamente ou suprimem a expressão de autoantígeno ou mascaram os antígenos de MHC. Exemplos de tais agentes incluem inibidores da calcineurina/MTOR (e.g. tacrolimo, sirolimo, rapamicina, ciclosporina, everolimo), moléculas de bloqueio co-estimuladoras (e.g. CTLA4-Ig, anti- CD40L), agentes de depleção de NK, globulina anti-timócito (ATG), agentes alquilantes (e.g., mostardas de nitrogênio, e.g., ciclofosfamida; nitrosoureias (e.g., carmustina); compostos de platina), metotrexato, agentes anti-TCR (e.g., muromonabe-CD3), anticorpos anti-CD20 (e.g., rituximabe, ocrelizumabe, ofatumumabe e veltuzumabe), fludarabina, Campath (alentuzumabe), pirimidinas 2- amino-6-aril-5-substituídas (ver Pat. dos EUA No 4.665.077, supra, cuja divulgação é aqui incorporada por referência), azatioprina (ou ciclofosfamida, se existe uma reação adversa a azatioprina); bromocriptina; glutaraldeído (que mascara os antígenos de MHC, como descrito na Pat. dos EUA No 4.120.649, supra); anticorpos anti-idiotípicos para antígenos de MHC; ciclosporina A; um ou mais esteroides, e.g., corticosteroides, e.g., glucocorticosteroides tais como prednisona, metilprednisolona, hidrocortisona e dexametasona; anticorpos anti-interferon-γ; anticorpos anti-fator de necrose tumoral- α; anticorpos anti-fator de necrose tumoral-β; anticorpos anti-interleucina-2; anticorpos anti-receptor de citocina tais como anticorpos anti-receptor de IL-2; globulina anti- linfócito heteróloga; anticorpos pan-T, e.g., anticorpos monoclonais OKT-3; anticorpos para CD4; anticorpos para CD8, anticorpos para CD45 (e.g., 30-F11, YTH24.5 e/ou YTH54.12 (e.g., uma combinação de YTH24.5 e YTH54.12)); estreptoquinase;
estreptodornase; ou RNA ou DNA do hospedeiro. Imunossupressores adicionais incluem, mas não são limitados a irradiação corporal total (TBI), TBI de dose baixa e/ou Citoxan.
[093] Como aqui usado, os termos “variante” e “derivado” são usados permutavelmente e se referem a análogos que ocorrem naturalmente, sintéticos e semi-sintéticos de um composto, peptídeo, proteína ou outra substância aqui descrita.
Uma variante ou derivado de um composto, peptídeo, proteína ou outra substância aqui descrita pode manter ou melhorar a atividade biológica do material original.
[094] Como aqui usado, a frase “transtorno de células-tronco” se refere amplamente a qualquer doença, transtorno ou condição que pode ser tratado ou curado pelo condicionamento dos tecidos alvo de um sujeito e/ou pela ablação de uma população de células-tronco endógenas em um alvo tecido (e.g., ablação de uma cepa hematopoiética endógena ou população de células progenitoras do tecido da medula óssea de um sujeito) e/ou pelo enxerto ou transplante de células-tronco em tecidos alvo de um sujeito. Por exemplo, diabetes Tipo I demonstrou ser curado pelo transplante de célula-tronco hematopoiética e pode se beneficiar do condicionamento de acordo com as composições e métodos aqui descritos. Transtornos adicionais que podem ser tratados usando as composições e métodos aqui descritos incluem, sem limitação, anemia falciforme, talassemias, anemia de Fanconi, anemia aplásica, síndrome de Wiskott-Aldrich, ADA SCID, HIV/AIDS, leucodistrofia metacromática, anemia de Diamond-Blackfan e síndrome de Schwachman-Diamond. Doenças adicionais que podem ser tratadas usando os métodos de condicionamento do paciente e/ou transplante de célula-tronco hematopoiética aqui descritos incluem transtornos sanguíneos hereditários (e.g., anemia falciforme) e transtornos autoimunes, tais como esclerodermia, esclerose múltipla, colite ulcerativa e doença de Crohn. Doenças adicionais que podem ser tratadas usando os métodos de condicionamento e/ou transplante aqui descritos incluem uma malignidade, tal como um neuroblastoma ou um câncer hematológico, tal como leucemia, linfoma e mieloma.
Por exemplo, o câncer pode ser leucemia mieloide aguda, leucemia linfoide aguda, leucemia mieloide crônica, leucemia linfoide crônica, mieloma múltiplo, linfoma difuso de grandes células B ou linfoma não-Hodgkin. Doenças adicionais tratáveis usando os métodos de condicionamento e/ou transplante aqui descritos incluem síndrome mielodisplásica. Em algumas modalidades, o sujeito tem ou é de outro modo afetado por um transtorno do armazenamento metabólico. Por exemplo, o sujeito pode sofrer ou, de outro modo, ser afetado por um transtorno metabólico selecionado do grupo que consiste em doenças do armazenamento de glicogênio, mucopolissacaridose, doença de Gaucher, doença de Hurlers, esfingolipidose, leucodistrofia metacromática, ou quaisquer outras doenças ou transtornos que podem se beneficiar dos tratamentos e terapias aqui divulgados e incluindo, sem limitação, imunodeficiência combinada grave, síndrome de Wiscott-Aldrich, síndrome de hiperimunoglobulina M (IgM), doença de Chediak-Higashi, linfo-histiocitose hereditária, osteopetrose, osteogênese imperfeita, doenças de armazenamento, talassemia maior, doença falciforme, esclerose sistêmica, lúpus eritematoso sistêmico, esclerose múltipla, artrite reumatoide juvenil e aquelas doenças ou transtornos descritos em “Bone Marrow Transplantation for Non-Malignant Disease”, ASH Education Book, 1: 319-338 (2000), cuja divulgação é aqui incorporada por referência em sua totalidade no que se refere às patologias que podem ser tratadas pela administração de terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética.
[095] Como aqui usado, o termo “vetor” inclui um vetor de ácido nucleico, tal como um plasmídeo, um vetor de DNA, um plasmídeo, um vetor de RNA, vírus ou outro replicon adequado. Os vetores de expressão aqui descritos podem conter uma sequência polinucleotídica bem como, por exemplo, elementos de sequência adicionais usados para a expressão de proteínas e/ou a integração dessas sequências polinucleotídicas no genoma de uma célula de mamífero. Certos vetores que podem ser usados para a expressão de anticorpos e fragmentos de anticorpo da presente divulgação incluem plasmídeos que contêm sequências reguladoras, tais como regiões promotoras e realçadoras, que direcionam a transcrição gênica. Outros vetores úteis para a expressão de anticorpos e fragmentos de anticorpo contêm sequências polinucleotídicas que realçam a taxa de tradução desses genes ou melhoram a estabilidade ou exportação nuclear do mRNA que resulta da transcrição gênica. Esses elementos de sequência podem incluir, por exemplo, regiões não traduzidas 5’ e 3’ e um sítio de sinal de poliadenilação de modo a direcionar a transcrição eficiente do gene transportado no vetor de expressão. Os vetores de expressão aqui descritos também podem conter um polinucleotídeo que codifica um marcador para a seleção de células que contêm esse vetor. Exemplos de um marcador adequado incluem genes que codificam a resistência a antibióticos, tais como ampicilina, cloranfenicol, canamicina e nourseotricina.
[096] Como aqui usado, o termo “conjugado” ou “conjugado anticorpo- fármaco” ou “ADC” se refere a um anticorpo que é ligado a uma citotoxina. Um ADC é formado pela união química de um grupo funcional reativo de uma molécula, tal como um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, com um grupo funcional reativo apropriado de outra molécula, tal como uma citotoxina aqui descrita.
Os conjugados podem incluir um conector entre as duas moléculas ligadas uma à outra, e.g., entre um anticorpo e uma citotoxina. Exemplos de conectores que podem ser usados para a formação de um conjugado incluem conectores contendo peptídeo, tais como aqueles que contêm aminoácidos que ocorrem naturalmente ou que não ocorrem naturalmente, tais como D-aminoácidos. Os conectores podem ser preparados usando uma variedade de estratégias aqui descritas e conhecidas na técnica. Dependendo dos componentes reativos nele, um conector pode ser clivado, por exemplo, por hidrólise enzimática, fotólise, hidrólise sob condições ácidas, hidrólise sob condições básicas, oxidação, redução de dissulfeto, clivagem nucleofílica ou clivagem organometálica (ver, por exemplo, Leriche et al., Bioorg. Med.
Chem., 20: 571-582, 2012).
[097] Como aqui usado, o termo “agente de ligação a microtúbulos” se refere a um composto que atua rompendo a rede microtubular que é essencial para função mitótica e interfase celular em uma célula. Exemplos de agentes de ligação a microtúbulos incluem, mas não são limitados a maitasina, maitansinoides e derivados dos mesmos, tais como aqueles aqui descritos ou conhecidos na técnica, alcaloides da vinca, tais como vinblastina, sulfato de vinblastina, vincristina, sulfato de vincristina, vindesina e vinorelbina, taxanos, tais como docetaxel e paclitaxel, macrolídeos, tais como discodermolídeos, cochicina e epotilonas e derivados dos mesmos, tais como epotilona B ou um derivado desta.
[098] Como aqui usado, o termo “amatoxina” se refere a um membro da família amatoxina de peptídeos produzidos por cogumelos Amanita phalloides ou uma variante ou derivado da mesma, tal como uma variante ou derivado da mesma capaz de inibir atividade de RNA polimerase II. Amatoxinas úteis em conjunto com as composições e métodos aqui descritos incluem compostos tais como, mas não limitados aos compostos das Formulas (III), (IIIA), (IIIB) e (IIIC), cada um conforme aqui descrito abaixo (e.g., uma α-amanitina, β-amanitina, γ-amanitina, ε-amanitina, amanina, amaninamida, amanulina, ácido amanulínico ou proamanulina). Como aqui descrito, as amatoxinas podem ser conjugadas com um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, por exemplo, por meio de uma porção conectora (L) (formando assim um ADC). Métodos exemplificativos de conjugação de amatoxina e conectores úteis para tais processos são descritos abaixo. Amatoxinas contendo conectores exemplificativas úteis para a conjugação com um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, de acordo com as composições e métodos também são aqui descritas.
[099] O termo “acila”, como aqui usado, se refere a -C(=O)R, em que R é hidrogênio (“aldeído”), alquila, alquenila, alquinila, carbociclila, arila, heteroarila ou heterociclila, como aqui definidos. Exemplos não limitativos incluem formila, acetila, propanoila, benzoila e acriloila.
[0100] Como aqui usado, o termo “alquila” se refere a um grupo alquila de cadeia reta ou ramificada tendo, por exemplo, de 1 a 20 átomos de carbono na cadeia.
Exemplos de grupos alquila incluem metila, etila, n-propila, isopropila, butila, isobutila, sec-butila, terc-butila, pentila, isopentila, terc-pentila, hexila, iso-hexila e semelhantes.
[0101] Como aqui usado, o termo “alquileno” se refere a um grupo alquila divalente de cadeia reta ou ramificada. As posições divalentes podem estar no mesmo átomo ou em átomos diferentes dentro da cadeia alquila. Exemplos de alquileno incluem metileno, etileno, propileno, isopropileno e semelhantes.
[0102] Como aqui usado, o termo “heteroalquila” se refere a um grupo alquila de cadeia reta ou ramificada tendo, por exemplo, de 1 a 20 átomos de carbono na cadeia e contendo ainda um ou mais heteroátomos (e.g., oxigênio, nitrogênio ou enxofre, entre outros) na cadeia.
[0103] Como aqui usado, o termo “heteroalquilaeno” se refere a um grupo heteroalquila divalente de cadeia reta ou ramificada. As posições divalentes podem estar no mesmo átomo ou em átomos diferentes dentro da cadeia heteroalquila. As posições divalentes podem ter um ou mais heteroátomos.
[0104] Como aqui usado, o termo “alquenila” se refere a um grupo alquenila de cadeia reta ou ramificada tendo, por exemplo, de 2 a 20 átomos de carbono na cadeia. Exemplos de grupos alquenila incluem vinila, propenila, isopropenila, butenila, terc-butilaenila, hexenila e semelhantes.
[0105] Como aqui usado, o termo “alquenileno” se refere a um grupo alquenila divalente de cadeia reta ou ramificada. As posições divalentes podem estar no mesmo átomo ou em átomos diferentes dentro da cadeia alquenila. Exemplos de alquenileno incluem etenileno, propenileno, isopropenileno, butenileno e semelhantes.
[0106] Como aqui usado, o termo “heteroalquenila” se refere a um grupo alquenila de cadeia reta ou ramificada tendo, por exemplo, de 2 a 20 átomos de carbono na cadeia e contendo ainda um ou mais heteroátomos (e.g., oxigênio, nitrogênio ou enxofre, entre outros) na cadeia.
[0107] Como aqui usado, o termo “heteroalquenileno” se refere a um grupo heteroalquenila divalente de cadeia reta ou ramificada. As posições divalentes podem estar no mesmo átomo ou em átomos diferentes dentro da cadeia heteroalquenila. As posições divalentes podem ter um ou mais heteroátomos.
[0108] Como aqui usado, o termo “alquinila” se refere a um grupo alquinila de cadeia reta ou ramificada tendo, por exemplo, de 2 a 20 átomos de carbono na cadeia.
Exemplos de alquinila grupos incluem propargila, butinila, pentinila, hexinila e semelhantes.
[0109] Como aqui usado, o termo “alquinileno” se refere a um grupo alquinila divalente de cadeia reta ou ramificada. As posições divalentes podem estar no mesmo átomo ou em átomos diferentes dentro da cadeia alquinila.
[0110] Como aqui usado, o termo “heteroalquinila” se refere a um grupo alquinila de cadeia reta ou ramificada tendo, por exemplo, de 2 a 20 átomos de carbono na cadeia e contendo ainda um ou mais heteroátomos (e.g., oxigênio, nitrogênio ou enxofre, entre outros) na cadeia.
[0111] Como aqui usado, o termo “heteroalquinileno” se refere a um grupo heteroalquinila divalente de cadeia reta ou ramificada. As posições divalentes podem estar no mesmo átomo ou em átomos diferentes dentro da cadeia heteroalquinila. As posições divalentes podem ter um ou mais heteroátomos.
[0112] Como aqui usado, o termo “cicloalquila” se refere a uma estrutura de anel monocíclico ou fundido, ligado em ponte ou espiro policíclico que é saturado e tem, por exemplo, de 3 a 12 átomos de carbono no anel. Exemplos de grupos cicloalquila incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-heptila,
ciclo-octila, biciclo[3,1,0]hexano e semelhantes.
[0113] Como aqui usado, o termo “cicloalquileno” se refere a um grupo cicloalquila divalente. As posições divalentes podem estar no mesmo átomo ou em átomos diferentes dentro da estrutura de anel. Exemplos de cicloalquileno incluem ciclopropileno, ciclobutileno, ciclopentileno, ciclo-hexileno e semelhantes.
[0114] Como aqui usado, o termo “heterocicloalquila” se refere a uma estrutura de anel monocíclico ou fundido, ligado em ponte ou espiro policíclico que é saturado e tem, por exemplo, de 3 a 12 átomos no anel por estrutura de anel selecionados de átomos de carbono e heteroátomos selecionados de, e.g., nitrogênio, oxigênio e enxofre, entre outros. A estrutura de anel pode conter, por exemplo, um ou mais grupos oxo nos membros do anel de carbono, nitrogênio ou enxofre. Exemplos de heterocicloalquilas incluem, a título de exemplo e não limitação, di-hidropiridila, tetra-hidropiridila (piperidila), tetra-hidrotiofenila, piperidinila, 4-piperidonila, pirrolidinila, 2-pirrolidonila, tetra-hidrofuranila, tetra-hidropiranila, bis-tetra- hidropiranila, tetra-hidroquinolinila, tetra-hidroisoquinolinila, deca-hidroquinolinila, octa-hidroisoquinolinila, piperazinila, quinuclidinila e morfolinila.
[0115] Como aqui usado, o termo “heterocicloalquileno” se refere a um grupo heterocicloalquila divalente. As posições divalentes podem estar no mesmo átomo ou em átomos diferentes dentro da estrutura de anel.
[0116] Como aqui usado, o termo “arila” se refere a um sistema de anel aromático multicíclico ou monocíclico contendo, por exemplo, de 6 a 19 átomos de carbono. Os grupos arila incluem, mas não são limitados a fenila, fluorenila, naftila e semelhantes. As posições divalentes podem ter um ou mais heteroátomos.
[0117] Como aqui usado, o termo “arileno” se refere a um grupo arila divalente.
As posições divalentes podem estar no mesmo átomo ou em átomos diferentes.
[0118] “Heteroaralquila”, como aqui usado, se refere a um radical alquila acíclico em que um dos átomos de hidrogênio ligados a um átomo de carbono,
tipicamente um átomo de carbono terminal ou sp3, é substituído por um radical heteroarila. Os grupos heteroarilalquila típicos incluem, mas não são limitados a 2- benzimidazolilmetila, 2-furiletila e semelhantes. O grupo heteroarilalquila compreende 6 a 20 átomos de carbono, e.g. a porção alquila, incluindo grupos alcanila, alquenila ou alquinila do grupo heteroarilalquila, tem 1 a 6 átomos de carbono e a porção heteroarila tem 5 a 14 átomos de carbono e 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, O, P e S. A porção heteroarila do grupo heteroarilalquila pode ser um monociclo tendo 3 a 7 membros no anel (2 a 6 átomos de carbono ou um biciclo tendo 7 a 10 membros no anel (4 a 9 átomos de carbono e 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, O, P e S), por exemplo: um sistema biciclo[4,5], [5,5], [5,6] ou [6,6].
[0119] Como aqui usado, o termo “heterocicloalquila” se refere a uma estrutura de anel monocíclico ou fundido, ligado em ponte ou espiro policíclico que é saturado e tem, por exemplo, de 3 a 12 átomos no anel por estrutura de anel selecionados de átomos de carbono e heteroátomos selecionados de, e.g., nitrogênio, oxigênio e enxofre, entre outros. A estrutura de anel pode conter, por exemplo, um ou mais grupos oxo nos membros do anel de carbono, nitrogênio ou enxofre. Exemplos de heterocicloalquilas incluem, a título de exemplo e não limitação, di-hidropiridila, tetra-hidropiridila (piperidila), tetra-hidrotiofenila, piperidinila, 4-piperidonila, pirrolidinila, 2-pirrolidonila, tetra-hidrofuranila, tetra-hidropiranila, bis-tetra- hidropiranila, tetra-hidroquinolinila, tetra-hidroisoquinolinila, deca-hidroquinolinila, octa-hidroisoquinolinila, piperazinila, quinuclidinila e morfolinila.
[0120] Como aqui usado, o termo “heterocicloalquileno” se refere a um grupo heterocicloalquila divalente. As posições divalentes podem estar no mesmo átomo ou em átomos diferentes dentro da estrutura de anel.
[0121] Como aqui usado, o termo “arila” se refere a um sistema de anel aromático multicíclico ou monocíclico contendo, por exemplo, de 6 a 19 átomos de carbono. Os grupos arila incluem, mas não são limitados a fenila, fluorenila, naftila e semelhantes. As posições divalentes podem ter um ou mais heteroátomos.
[0122] Como aqui usado, o termo “arileno” se refere a um grupo arila divalente.
As posições divalentes podem estar no mesmo átomo ou em átomos diferentes.
[0123] Como aqui usado, o termo “heteroarila” se refere a um grupo heteroaromático monocíclico ou um heteroaromático de anel fundido bicíclico ou tricíclico em que um ou mais átomos no anel são um heteroátomo, e.g., nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Os grupos heteroarila incluem piridila, pirrolila, furila, tienila, imidazolila, oxazolila, isoxazolila, tiazolila, isotiazolila, pirazolila, 1,2,3-triazolila, 1,2,4- triazolila, 1,2,3-oxadiazolila, 1,2,4-oxadiazolila, 1,2,5-oxadiazolila, 1,3,4-oxadiazolila, 1,3,4-triazinila, 1,2,3-triazinila, benzofurila, [2,3-di-hidro]benzofurila, isobenzofurila, benzotienila, benzotriazolila, isobenzotienila, indolila, isoindolila, 3H-indolila, benzimidazolila, imidazo[1,2-a]piridila, benzotiazolila, benzoxazolila, quinolizinila, quinazolinila, ftalazinila, quinoxalinila, cinolinila, naftiridinila, pirido[3,4-b]piridila, pirido[3,2-b]piridila, pirido[4,3-b]piridila, quinolila, isoquinolila, tetrazolila, 5,6,7,8-tetra- hidroquinolila, 5,6,7,8-tetra-hidroisoquinolila, purinila, pteridinila, carbazolila, xantenila, benzoquinolila e semelhantes.
[0124] Como aqui usado, o termo “heteroarileno” se refere a um grupo heteroarila divalente. As posições divalentes podem estar no mesmo átomo ou em átomos diferentes. As posições divalentes podem ter um ou mais heteroátomos.
[0125] Os grupos heteroarila e heterocicloalquila são descritos em Paquette, Leo A.; “Principles of Modern Heterocyclic Chemistry” (W. A. Benjamin, Nova Iorque, 1968), particularmente nos Capítulos 1, 3, 4, 6, 7 e 9; “The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs” (John Wiley & Sons, Nova Iorque, 1950 até o presente), em particular os Volumes 13, 14, 16, 19 e 28; e J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566.
[0126] A título de exemplo e não limitação, heteroarilas e heterocicloalquilas ligadas a carbono são ligadas na posição 2, 3, 4, 5 ou 6 de uma piridina, posição 3, 4,
5 ou 6 de uma piridazina, posição 2, 4, 5 ou 6 de uma pirimidina, posição 2, 3, 5 ou 6 de uma pirazina, posição 2, 3, 4 ou 5 de um furano, tetra-hidrofurano, tiofurano, tiofeno, pirrol ou tetra-hidropirrol, posição 2, 4 ou 5 de um oxazol, imidazol ou tiazol, posição 3, 4 ou 5 de um isoxazol, pirazol ou isotiazol, posição 2 ou 3 de uma aziridina, posição 2, 3 ou 4 de uma azetidina, posição 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 de uma quinolina ou posição 1, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 de uma isoquinolina. Ainda mais tipicamente, heterociclos ligados a carbono incluem 2-piridila, 3-piridila, 4-piridila, 5-piridila, 6-piridila, 3- piridazinila, 4-piridazinila, 5-piridazinila, 6-piridazinila, 2-pirimidinila, 4-pirimidinila, 5- pirimidinila, 6-pirimidinila, 2-pirazinila, 3-pirazinila, 5-pirazinila, 6-pirazinila, 2-tiazolila, 4-tiazolila ou 5-tiazolila.
[0127] A título de exemplo e não limitação, heteroarilas e heterocicloalquilas ligadas a nitrogênio são ligadas na posição 1 de uma aziridina, azetidina, pirrol, pirrolidina, 2-pirrolina, 3-pirrolina, imidazol, imidazolidina, 2-imidazolina, 3-imidazolina, pirazol, pirazolina, 2-pirazolina, 3-pirazolina, piperidina, piperazina, indol, indolina, 1H- indazol, posição 2 de um isoindol ou isoindolina, posição 4 de uma morfolina e posição 9 de um carbazol ou beta-carbolina. Ainda mais tipicamente, heterociclos ligados a nitrogênio incluem 1-aziridila, 1-azetedila, 1-pirrolila, 1-imidazolila, 1-pirazolila e 1- piperidinila.
[0128] A menos que de outro modo restringido pela definição do substituinte individual, as porções químicas anteriores, tais como os grupos “alquila”, “alquileno”, “heteroalquila”, “heteroalquilaeno”, “alquenila”, “alquenileno”, “heteroalquenila”, “heteroalquenileno”, “alquinila”, “alquinileno”, “heteroalquinila”, “heteroalquinileno”, “cicloalquila”, “cicloalquileno”, “heterociclolalquila”, heterocicloalquileno”, “arila”, “arileno”, “heteroarila” e “heteroarileno” podem ser opcionalmente substituídos por, por exemplo, de 1 a 5 substituintes selecionados do grupo que consiste em alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, heterocicloalquila, alquil arila, alquil heteroarila, alquila cicloalquila, alquil heterocicloalquila, amino, amônio, acila, acilóxi, acilamino,
aminocarbonila, alcóxicarbonila, ureído, carbamato, arila, heteroarila, sulfinila, sulfonila, alcóxi, sulfanila, halogênio, carbóxi, tri-halometila, ciano, hidróxi, mercapto, nitro e semelhantes. Substituintes típicos incluem, mas não são limitados a -X, -R, - OH, -OU, -SH, -SR, NH2, -NHR, -N(R)2, -N+(R)3, -CX3, -CN, -OCN, -SCN, -NCO, -NCS, -NO, -NO2, -N3, -NC(=O)H, -NC(=O)R, -C(=O)H, -C(=O)R, -C(=O)NH2, -C(=O)N(R)2, - SO3-, -SO3H, -S(=O)2R, -OS(=O)2OR, -S(=O)2NH2, -S(=O)2N(R)2, -S(=O)R, - OP(=O)(OH)2, -OP(=O)(OU)2, -P(=O)(OU)2, -PO3, -PO3H2, -C(=O)X, -C(=S)R, -CO2H, -CO2R, -CO2-, -C(=S)OU, -C(=O)SR, -C(=S)SR, -C(=O)NH2, -C(=O)N(R)2, -C(=S)NH2, -C(=S)N(R)2, -C(=NH)NH2, e -C(=NR)N(R)2; em que cada X é independentemente selecionado para cada ocasião de F, Cl, Br e I; e cada R é independentemente selecionado para cada ocasião de alquila, arila, heterocicloalquila ou heteroarila, grupo de proteção e porção pró-fármaco. Onde um grupo é descrito como “opcionalmente substituído”, o grupo pode ser substituído por um ou mais dos substituintes acima, independentemente para cada ocasião. A substituição pode incluir situações em que substituintes vizinhos sofreram um fechamento de anel, tal como fechamento de anel de substituintes funcionais vicinais, para formar, por exemplo, lactamas, lactonas, anidridos cíclicos, acetais, hemiacetaiss, tioacetais, aminais e hemiaminais, formados pelo fechamento de anel, por exemplo, para fornecer um grupo de proteção.
[0129] Deve ser entendido que certas convenções de nomenclatura de radicais podem incluir um mono-radical ou um di-radical, dependendo do contexto.
Por exemplo, onde um substituinte necessita de dois pontos de fixação ao restante da molécula, é entendido que o substituinte é um di-radical. Por exemplo, um substituinte identificado como alquila que requer dois pontos de fixação inclui di-radicais, tais como -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH(CH3)CH2- e semelhantes. Outras convenções de nomenclatura de radicais claramente indicam que o radical é um di-radical, tal como “alquileno”, “alquenileno”, “arileno”, “heterocicloalquileno” e semelhantes.
[0130] Como aqui usado, o termo “reação de acoplamento” se refere a uma reação química em que dois ou mais substituintes adequados para a reação um com o outro reagem de modo a formar uma porção química que une (e.g., covalentemente) os fragmentos moleculares ligados a cada substituinte. As reações de acoplamento incluem aquelas em que um substituinte reativo ligado a um fragmento que é uma citotoxina, tal como uma citotoxina conhecida na técnica ou aqui descrita, reage com um substituinte reativo adequado ligado a um fragmento que é um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, tal como um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, específico para CD117 (tal como GNNK+ CD117) conhecido na técnica ou aqui descrito. Exemplos de substituintes reativos adequados incluem um par nucleófilo/eletrófilo (e.g., um par tiol/haloalquila, um par amina/carbonila ou um par tiol/α,β-carbonila insaturada, entre outros), um par dieno/dienófilo (e.g., um par azida/alcino, entre outros) e semelhantes. As reações de acoplamento incluem, sem limitação, alquilação de tiol, alquilação de hidroxila, alquilação de amina, condensação de amina, amidação, esterificação, formação de dissulfeto, cicloadição (e.g., [4+2] cicloadição de Diels-Alder, [3+2] cicloadição de Huisgen, entre outros), substituição aromática nucleofílica, substituição aromática eletrofílica e outras modalidades reativas conhecidas na técnica ou aqui descritas.
[0131] Como aqui usado, “CRU (unidade de repovoamento competitivo)” se refere a uma unidade de medida de enxerto células-tronco de longo prazo, que pode ser detectada depois do transplante in vivo.
[0132] Como aqui usado, “razão fármaco-anticorpo” ou “DAR” se refere ao número de citotoxinas, e.g., amatoxina, ligadas ao anticorpo de um ADC. A DAR de um ADC pode variar de 1 a 8, embora cargas mais altas também sejam possíveis dependendo do número de sítios de ligação em um anticorpo. Assim, em certas modalidades, um ADC aqui descrito tem uma DAR de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8.
[0133] Sempre que um substituinte é representado como um di-radical (i.e.,
tem dois pontos de fixação ao restante da molécula), deve ser entendido que o substituinte pode ser ligado em qualquer configuração direcional a menos que de outro modo indicado.
Método de Tratamento
[0134] São aqui divulgados métodos de esgotar uma população de células CD117+ e/ou uma população de células CD45+ em um paciente em necessidade de um transplante alogênico, e.g., um transplante de célula-tronco hematopoiética alogênica (HSC). Também são fornecidos aqui métodos de aumentar o nível de enxerto de células alogênicas em um sujeito receptor. Os métodos aqui fornecidos podem ser usados para tratar uma variedade de transtornos relacionados ao transplante alogênico, tais como doenças de um tipo de célula na linhagem hematopoiética, cânceres, doenças autoimunes, transtornos metabólicos, doença do enxerto contra hospedeiro, rejeição do hospedeiro versus enxerto e transtornos de células-tronco, entre outros. As composições e métodos aqui descritos podem (i) esgotar diretamente uma população de células que dão origem a uma patologia, tal como uma população de células cancerosas (e.g., células de leucemia) e células autoimunes (e.g., células T autorreativas) e/ou (ii) podem esgotar uma população de células-tronco hematopoiéticas endógenas de modo a promover o enxerto de células- tronco hematopoiéticas transplantadas fornecendo um nicho no qual as células transplantadas podem se alojar. A depleção de células hematopoiéticas endógenas em um sujeito em necessidade de um transplante, e.g., um transplante de HSC, pode ser obtida pela administração de um ADC, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, capaz de se ligar a um antígeno expressado por uma célula- tronco hematopoiética endógena. No caso de preparar um paciente para a terapia de transplante, essa administração pode causar a depleção seletiva de uma população de células-tronco hematopoiéticas endógenas, criando assim uma vacância no tecido hematopoiético, tal como a medula óssea, que pode subsequentemente ser preenchida por células-tronco hematopoiéticas exógenas transplantadas. Os ADCs, anticorpos ou os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos capazes de se ligar a um antígeno expressado por células-tronco hematopoiéticas (e.g., CD117+ (e.g., GNNK+ CD117) ou células CD45+) ou um antígeno expressado por células imunes (e.g., células imunes maduras), tais como células T (e.g., CD45), podem ser administrados a um paciente para efetuar a depleção celular. Assim, os ADCs, anticorpos ou os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que se ligam a um antígeno expressado por células-tronco hematopoiéticas (e.g., CD117 (e.g., GNNK+ CD117) ou CD45) ou um antígeno expressado por células imunes (e.g., células imunes maduras), tais como células T (e.g., CD45) podem ser administrados a um paciente sofrendo de um câncer ou doença autoimune para esgotar diretamente uma população de células cancerosas ou células autoimunes, e também podem ser administrados a um paciente em necessidade de terapia de transplante de célula- tronco hematopoiética de modo a promover a sobrevivência e enxerto potencial de células transplantadas, e.g., células-tronco hematopoiéticas.
[0135] Pacientes de transplante podem receber um transplante que é autólogo, em que o transplante compreende as próprias células do sujeito. Em outras modalidades, os pacientes de transplante podem receber um transplante que é alogênico, em que o transplante compreende células obtidas ou derivadas de outro indivíduo. No caso de transplante alogênico, o enxerto de células transplantadas é complicado pelo potencial para uma resposta imune contra o transplante mediada por células imunes do hospedeiro (doença do hospedeiro vs enxerto), ou pelo potencial para uma resposta imune contra células do hospedeiro mediada por células imunes presentes no transplante (doença do enxerto vs hospedeiro). A probabilidadae das complicações anteriores aumenta com o grau de dissimilaridade na composição antigênica do transplante em relação ao paciente receptor do transplante.
Consequentemente, transplantes alogênicos são tipicamente realizados entre pacientes tendo o mais alto grau de similaridade possível entre os antígenos HLA e antígenos de histocompatibilidade menor. Devido à necessidade de um grau muito alto de similaridade antigênica entre um doador e receptor de transplante autólogo, existem pacientes em necessidade de um transplante que não podem receber essa terapia porque um doador adequadamente compatível não está disponível.
[0136] Os métodos aqui fornecidos são fundamentados, pelo menos em parte, na descoberta de que o condicionamento de um paciente em necessidade de um transplante alogênico com (i) um ADC capaz de se ligar a CD117 ou CD45 e (ii) um agente imunossupressor, aumenta significativamente o enxerto de células alogênicas do doador, incluindo em situações onde as células alogênicas contêm um alto grau de incompatibilidade antigênica em relação ao receptor do transplante. Sem desejar estar limitado pela teoria, acredita-se que o agente imunossupressor inibe a atividade de células imunes residuais, e.g., células T residuais, presentes no paciente após a administração do ADC, que podem limitar o enxerto de células autólogas. Quando o ADC é administrado em conjunto com um agente imunossupressor, o enxerto de autólogas células do doador é aumentado, levando a um aumento no quimerismo do doador. Consequentemente, os métodos aqui descritos podem ser usados, em algumas modalidades, para aumentar o enxerto de células-tronco hematopoiéticas autólogas e aumentar o quimerismo do doador na medula óssea e no sangue periférico (incluindo quimerismo mieloide, quimerismo de células B e quimerismo de células T).
[0137] Como aqui descrito, a terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética pode ser administrada a um sujeito em necessidade de tratamento de modo a povoar ou repovoar um ou mais tipos de células do sangue. As células-tronco hematopoiéticas geralmente exibem multi-potência e podem, portanto, se diferenciar em múltiplas linhagens sanguíneas diferentes incluindo, mas não limitadas a granulócitos (e.g., promielócitos, neutrófilos, eosinófilos, basófilos), aritrócitos (e.g.,
reticulócitos, aritrócitos), trombócitos (e.g., megacarioblastos, megacariócitos produtores de plaquetas, plaquetas), monócitos (e.g., monócitos, macrófagos), células dendríticas, microglia, osteoclastos e linfócitos (e.g., células NK, células B e células T). As células-tronco hematopoiéticas são adicionalmente capazes de autorrenovação e podem, portanto, dar origem a células-filhas que têm potencial equivalente ao da célula-mãe, e também apresentam a capacidade de serem reintroduzidas em um receptor do transplante, após o que se alojam no nicho de célula-tronco hematopoiética e reestabelecem a hematopoese produtiva e sustentada.
[0138] As células-tronco hematopoiéticas podem, portanto, serem administradas a um paciente defeituoso ou deficiente em um ou mais tipos de célula da linhagem hematopoiética de modo a reconstituir a população defeituosa ou deficiente de células in vivo, tratando assim a patologia associada ao defeito ou depleção na população de células sanguíneas endógenas. As composições e métodos aqui descritos podem, portanto, serem usados para tratar uma hemoglobinopatia não maligna (e.g., uma hemoglobinopatia selecionada do grupo que consiste em anemia falciforme, talassemia, anemia de Fanconi, anemia aplásica e síndrome de Wiskott-Aldrich). Adicionalmente ou alternativamente, as composições e métodos aqui descritos podem ser usados para tratar uma imunodeficiência, tal como uma imunodeficiência congênita. Adicionalmente ou alternativamente, as composições e métodos aqui descritos podem ser usados para tratar uma imunodeficiência adquirida (e.g., uma imunodeficiência adquirida selecionada do grupo que consiste em HIV e AIDS). As composições e métodos aqui descritos podem ser usados para tratar um transtorno metabólico (e.g., um transtorno metabólico selecionado do grupo que consiste em doenças do armazenamento de glicogênio, mucopolissacaridose, doença de Gaucher, doença de Hurlers, esfingolipidose e leucodistrofia metacromática).
[0139] Adicionalmente ou alternativamente, as composições e métodos aqui descritos podem ser usados para tratar uma malignidade ou transtorno proliferativo, tal como um câncer hematológico, doença mieloproliferativa. No caso do tratamento de câncer, as composições e métodos aqui descritos podem ser administrados a um paciente de modo a esgotar uma população de células-tronco hematopoiéticas endógenas antes da terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética, caso este em que as células transplantadas podem se alojar em um nicho criado pela etapa de depleção de células endógenas e estabelecer a hematopoese produtiva. Isso, por sua vez, pode reconstituir uma população de células esgotadas durante a erradicação de células cancerosas, tal como durante a quimioterapia sistêmica. Cânceres hematológicos exemplificativos que podem ser tratados usando as composições e métodos aqui descritos incluem, sem limitação, leucemia mieloide aguda, leucemia linfoide aguda, leucemia mieloide crônica, leucemia linfoide crônica, mieloma múltiplo, linfoma difuso de grandes células B e linfoma não-Hodgkin, bem como outras condições cancerosas, incluindo neuroblastoma.
[0140] Doenças adicionais que podem ser tratadas com as composições e métodos aqui descritos incluem, sem limitação, deficiência e imunodeficiência combinada grave de adenosina deaminase, síndrome de hiperimunoglobulina M, doença de Chediak-Higashi, linfo-histiocitose hereditária, osteopetrose, osteogênese imperfeita, doenças de armazenamento, talassemia maior, esclerose sistêmica, lúpus eritematoso sistêmico, esclerose múltipla e artrite reumatoide juvenil.
[0141] Os anticorpos ou os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos e conjugados aqui descritos podem ser usados para induzir tolerância ao transplante de órgão sólido. Por exemplo, as composições e métodos aqui descritos podem ser usados para esgotar ou remover uma população de células de um tecido alvo (e.g., para esgotar células-tronco hematopoiéticas do nicho de células-tronco da medula óssea). Após essa depleção de células dos tecidos alvo, uma população de cepa ou células progenitoras de um órgão doador (e.g., células-tronco hematopoiéticas do órgão doador) pode ser administrada ao receptor do transplante e, após o enxerto de tal cepa ou células progenitoras, um quimerismo misto temporário ou estável pode ser obtido, permitindo assim a tolerância a longo prazo do órgão transplantado sem a necessidade de outros agentes imunossupressores. Por exemplo, as composições e métodos aqui descritos podem ser usados para induzir a tolerância do transplante em um receptor de transplante de órgão sólido (e.g., um transplante de rim, transplante de pulmão, transplante de fígado e transplante de coração, entre outros). As composições e métodos aqui descritos são bem adequados para o uso em conexão com a indução de tolerância ao transplante de órgão sólido, por exemplo, porque uma baixa porcentagem enxerto do doador temporária ou estável é suficiente para induzir a tolerância a longo prazo do órgão transplantado.
[0142] Além disso, as composições e métodos aqui descritos podem ser usados para tratar cânceres diretamente, tais como cânceres caracterizados por células que são CD117+ (e.g., GNNK+ CD117) ou CD45+. Por exemplo, as composições e métodos aqui descritos podem ser usados para tratar leucemia, tal como em pacientes que exibem células leucêmicas CD117+. Ao esgotar células cancerosas CD117+, tais como células leucêmicas, as composições e métodos aqui descritos podem ser usados para tratar vários cânceres diretamente. Cânceres exemplificativos que podem ser tratados dessa forma incluem cânceres hematológicos, tais como leucemia mieloide aguda, leucemia linfoide aguda, leucemia mieloide crônica, leucemia linfoide crônica, mieloma múltiplo, linfoma difuso de grandes células B e linfoma não-Hodgkin.
[0143] Além disso, as composições e métodos aqui descritos podem ser usados para tratar transtornos autoimunes. Por exemplo, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, pode ser administrado a um sujeito, tal como um paciente humano sofrendo de um transtorno autoimune, de modo a matar uma célula imune CD45+. Por exemplo, uma célula imune CD45+ pode ser um linfócito autorreativo, tal como uma célula T que expressa um receptor de células T que se liga especificamente e monta uma resposta imune contra um antígeno próprio. Ao esgotar células CD45+ autorreativas, as composições e métodos aqui descritos podem ser usados para tratar patologias autoimunes, tais como aquelas descritas abaixo.
Adicionalmente ou alternativamente, as composições e métodos aqui descritos podem ser usados para tratar uma doença autoimune esgotando uma população de células- tronco hematopoiéticas endógenas antes da terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética, caso este em que as células transplantadas podem se alojar em um nicho criado pela etapa de depleção de células endógenas e estabelecer a hematopoese produtiva. Isso, por sua vez, pode reconstituir uma população de células esgotadas durante erradicação de células autoimunes.
[0144] O anticorpo ou conjugado anticorpo-fármaco pode ser administrado ao paciente humano em necessidade antes do transplante de células ou de um órgão sólido ao paciente. Em uma modalidade, um ADC anti-CD45 ou ADC anti-CD117 é administrado ao paciente humano em necessidade do mesmo antes (e.g., cerca de 3 dias antes, cerca de 2 dias antes, cerca de 12 horas antes de; cerca de 12 horas a 3 dias antes, cerca de 1 a 3 dias antes, cerca de 1 a 2 dias antes ou cerca de 12 horas a 2 dias antes) do transplante de células ou de um órgão sólido. Em uma modalidade, o transplante é administrado ao paciente depois que o ADC tenha sido eliminado ou substancialmente eliminado do sangue do paciente.
[0145] Ao administrar um imunossupressor, os métodos aqui descritos também são úteis para prevenir as reações do hospedeiro versus enxerto (HvG). A falha do enxerto ou rejeição do enxerto, incluindo falha depois do transplante de células-tronco hematopoiéticas alogênicas, pode ser manifestada geralmente como falta de enxerto inicial de células do doador ou perda de células do doador depois do enxerto inicial (para revisão ver Mattsson et al. (2008) Biol Blood Marrow Transplant.
14(Suppl 1): 165-170).
[0146] Uma variedade de imunossupressores pode ser usada em combinação com um anticorpo anti-CD117, anticorpo anti-CD45 ou conjugado anticorpo-fármaco do mesmo, para prevenir reações do hospedeiro versus enxerto (HvG), prevenindo ou reduzindo assim o risco de falha do enxerto alogênico. O uso de um imunossupressor em um paciente em risco para uma reação HvG permite o enxerto de células do doador com um maior grau de incompatibilidade de MHC (e.g, incompatibilidade de HLA) ou incompatibilidade de antígeno de histocompatibilidade menor (miHA).
[0147] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD117, anticorpo anti- CD45 ou conjugado anticorpo-fármaco do mesmo, é administrado em combinação com um ou mais imunossupressores (e.g., um, dois ou três imunossupressores). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD117, anticorpo anti-CD45 ou conjugado anticorpo-fármaco do mesmo, é administrado em combinação com dois ou mais imunossupressores, tais como aqueles aqui descritos.
[0148] Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD117, anticorpo anti-CD45 ou conjugado anticorpo-fármaco do mesmo, é administrado em combinação com um agente de depleção imune que permite a depleção de células B e/ou células T.
[0149] Em algumas modalidades, o agente de depleção imune é um anticorpo anti-CD4, um anticorpo anti-CD8 ou um anticorpo anti-CD4 e um anticorpo anti-CD8.
Exemplos de anticorpos anti-CD4 são conhecidos na técnica incluindo, por exemplo, ibalizumabe (também conhecido como Trogarzo, TMB-355, TNX-355 ou Hu5A8; ver, e.g., US9790276 e US9587022B2, que são aqui incorporados por referência), zanolimumabe (também conhecido como HuMax-CD4 ou 6G5,2; ver, e.g., WO1997013852, que é aqui incorporado por referência), tregalizumabe (também conhecido como BT-061; ver, e.g., US7452981, que é aqui incorporado por referência), priliximabe (também conhecido como Centara, cM-T412, CEN 000029, MT 412,), MTRX1011A (ver, e.g., WO2008134046, que é aqui incorporado por referência), cedelizumabe (também conhecido como OKT-4A), clenoliximabe
(também conhecido como IDEC-151, BB-217969), celiximabe (também conhecido como IDEC CE9,1, SB210396), M-T413 e TRX1 (ver, e.g., WO2002102853, que é aqui incorporado por referência). Exemplos de anticorpos anti-CD8 são similarmente conhecidos na técnica incluindo, por exemplo, os anticorpos anti-CD8 descritos em WO2019033043, WO2017134306, WO2019032661, WO2019023148, WO2014025828, US10414820 e US10377826, que são aqui incorporados por referência. Em certas modalidades, o imunossupressor é um anticorpo linfodepletor.
Por exemplo, o anticorpo linfodepletor pode ser um anticorpo anti-CD45, tal como o clone 30-F11, um anticorpo nu que imita ATG por confiar na função efetora para permitir a depleção potente de células B e T periféricas.
[0150] Em outras modalidades, o anticorpo anti-CD117, anticorpo anti-CD45 ou conjugado anticorpo-fármaco do mesmo, é administrado em combinação com ciclofosfamida (Citoxan, e.g., Citoxan de dose baixa).
[0151] Em ainda outras modalidades, o anticorpo anti-CD117, anticorpo anti- CD45 ou conjugado anticorpo-fármaco do mesmo, é administrado em combinação com irradiação corporal total (TBI, e.g., TBI de dose baixa). Protocolos de condicionamento tradicionais podem usar altas doses de TBI antes do recebimento de um transplante alogênico. Em algumas modalidades dos métodos aqui fornecidos, quando a TBI é usada em combinação com um anticorpo anti-CD117, anticorpo anti- CD45 ou conjugado anticorpo-fármaco do mesmo, uma dose reduzida de TBI pode ser usada para condicionar eficazmente um paciente para a terapia de transplante alogênico. Consequentemente, em algumas modalidades, a invenção fornece um método de reduzir o nível de TBI usado para condicionar um paciente para a terapia de transplante alogênico, compreendendo administrar ao paciente um ADC anti- CD117 e/ou um ADC anti-CD45 como aqui descrito, em combinação com TBI de baixa dose. Em uma modalidade, o nível de TBI é 5 Gy ou menos, e.g., 4,5 Gy ou menos, 4 Gy ou menos, 3,5 Gy ou menos, 3 Gy ou menos, 2,5 Gy ou menos, 2 Gy ou menos,
1,5 Gy ou menos, 1 Gy ou menos, ou 0,5 Gy ou menos. Em algumas modalidades, o nível de TBI é de cerca de 5 Gy, cerca de 4,5 Gy, cerca de 4 Gy, cerca de 3,5 Gy, cerca de 3 Gy, cerca de 2,5 Gy, cerca de 2 Gy, cerca de 1,5 Gy, cerca de 1 Gy ou cerca de 0,5 Gy.
[0152] Em outras modalidades, o anticorpo anti-CD117, anticorpo anti-CD45 ou conjugado anticorpo-fármaco do mesmo, é administrado em combinação com um anticorpo anti-CD45 não conjugado capaz de esgotar células CD45+ por meio da função efetora (i.e., citotoxicidade dependente de complemento (CDC) ou citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC).
[0153] Em outras modalidades, um ADC anti-CD117 e/ou um ADC anti-CD45 pode ser usado de acordo com os métodos aqui fornecidos em combinação com um ou mais dos seguintes imunossupressores: inibidores da calcineurina/MTOR (e.g tacrolimo, sirolimo, rapamicina, ciclosporina, everolimo), moléculas de bloqueio co- estimuladoras (e.g. CTLA4-Ig, anti-CD40L), agentes de depleção de NK, globulina anti-timócito (ATG), agentes alquilantes (e.g., mostardas de nitrogênio, e.g., ciclofosfamida; nitrosoureias (e.g., carmustina); compostos de platina), metotrexato, agentes anti-TCR (e.g., muromonabe-CD3), anticorpos anti-CD20 (e.g., rituximabe, ocrelizumabe, ofatumumabe e veltuzumabe), fludarabina, Campath (alentuzumabe), pirimidinas 2-amino-6-arila-5-substituídas (ver Pat. dos EUA No 4.665.077, supra, cuja divulgação é aqui incorporada por referência), azatioprina (ou ciclofosfamida, se existe uma reação adversa a azatioprina); bromocriptina; glutaraldeído (que mascara os antígenos de MHC, como descrito na Pat. dos EUA No 4.120.649, supra); anticorpos anti-idiotípicos para antígenos de MHC; ciclosporina A; um ou mais esteroides, e.g., corticosteroides, e.g., glucocorticosteroides, tais como prednisona, metilprednisolona, hidrocortisona e dexametasona; anticorpos anti-interferon-γ; anticorpos anti-fator de necrose tumoral-α; anticorpos anti-fator de necrose tumoral-β; anticorpos anti- interleucina-2; anticorpos anti-receptor de citocina, tais como anticorpos anti-receptor de IL-2; globulina anti-linfócito heteróloga; anticorpos pan-T, e.g., anticorpos monoclonais OKT-3; anticorpos para CD4; anticorpos para CD8, anticorpos para CD45 (e.g., 30-F11, YTH24.5 e/ou YTH54.12 (e.g., uma combinação de YTH24.5 e YTH54.12)); estreptoquinase; estreptodornase; ou RNA ou DNA do hospedeiro.
[0154] Em uma modalidade exemplificativa, o paciente é condicionado com um ADC anti-CD117-PBD em combinação com TBI, Citoxan, um anticorpo anti-CD4, um anticorpo anti-CD8 ou uma combinação dos mesmos.
[0155] Em uma outra modalidade exemplificativa, o paciente é condicionado com um ADC anti-CD45-PBD em combinação com TBI, Citoxan, um anticorpo anti- CD4, um anticorpo anti-CD8 ou uma combinação dos mesmos.
[0156] Os imunossupressores anteriores (incluindo, mas não limitados a um anticorpo anti-CD4, um anticorpo anti-CD8, Citoxan e/ou TBI) podem ser administrados ao paciente antes do recebimento de um transplante compreendendo as células alogênicas, e.g., HSCs alogênicas. Em algumas modalidades, o imunossupressor é administrado ao sujeito após o transplante. Em algumas modalidades, o imunossupressor é administrado ao sujeito antes e depois do transplante.
[0157] Em certas modalidades, os anticorpos ou ADCs aqui descritos são usados para tratar um sujeito que recebe um transplante alogênico incompatível. Em algumas modalidades, o doador é um doador incompatível. As células, orgãos ou tecidos incompatíveis do doador compreendem pelo menos um antígeno do complexo de histocompatibilidade principal (MHC) diferente (e.g., não idêntico) (i.e., antígeno leucocitário humano (HLA) em humanos), e.g., antígeno de MHC classe I, classe II, ou classe III ou antígeno de histocompatibilidade menor (miHA), em relação a uma variante expressada pelo receptor, como tipicamente determinado por ensaios padrão usados na técnica, tais como análise sorológica, genômica ou molecular de um número definido de antígenos de MHC ou miHA. Em uma modalidade exemplificativa,
o transplante alogênico compartilha do mesmo haplótipo de MHC ou HLA que o receptor do transplante, mas pode conter uma ou mais incompatibilidades menores (e.g., um transplante alogênico de incompatibilidade menor). Em uma outra modalidade exemplificativa, o transplante alogênico contém uma ou mais incompatibilidades principais sozinhas ou além de uma ou mais incompatibilidades menores. Em uma outra modalidade exemplificativa, o transplante alogênico é um transplante alogênico de “incompatibilidade total”, que contém uma ou mais incompatibilidades principais e uma ou mais incompatibilidades menores.
[0158] As proteínas do MHC são importantes para a sinalização entre linfócitos e células apresentadoras de antígeno ou células doentes em reações imunes, onde as proteínas do MHC se ligam aos peptídeos e os apresentam para o reconhecimento por receptores de células T. As proteínas codificadas pelos genes do MHC são expressadas na superfície de células e exibem antígenos próprios (fragmentos de peptídeos da própria célula) e antígenos não próprios (e.g., fragmentos de microorganismos invasores) para uma célula T.
[0159] A região de MHC é dividida em três subgrupos, classe I, classe II e classe III. As proteínas da classe I do MHC contêm uma cadeia α e β2-microglobulina (i.e., B2M) e apresentam fragmentos de antígeno para células T citotóxicas. Na maioria das células do sistema imunológico, especificamente em células apresentadoras de antígeno, as proteínas da classe II do MHC contêm cadeias α e β e apresentam fragmentos de antígeno para células T auxiliares. A região da classe III do MHC codifica outros componentes imunes, tais como componentes de complemento e alguns que codificam citocinas. O MHC é poligênico (existem vários genes da classe I do MHC e classe II do MHC) e polimórfico (existem múltiplos alelos de cada gene).
[0160] Em humanos, o complexo de histocompatibilidade principal é alternativamente referido como o complexo do antígeno leucocitário humano (HLA).
Cada classe do MHC é representada por vários loci em humanos: e.g., HLA-A (Antígeno Leucocitário Humano A), HLA-B, HLA-C, HLA-E, HLA-F, HLA-G, HLA-H, HLA-J, HLA-K, HLA-L, HLA-P e HLA-V para a classe I e HLA-DRA, HLA-DRB1-9, HLA-, HLA-DQA1, HLA-DQB1, HLA-DPA1, HLA-DPB1, HLA-DMA, HLA-DMB, HLA- DOA e HLA-DOB para a classe II. Os MHCs exibem polimorfismo extremo: dentro da população humana existem, em cada locus genético, um grande número de haplotipos compreendendo alelos distintos. Diferentes alelos do MHC polimórfico, da classe I e classe II, têm diferentes especificidades de peptídeo: cada alelo codifica proteínas que se ligam a peptídeos exibindo padrões de sequência particulares. Os loci genômicos do HLA e métodos de testagem para alelos ou proteínas de HLA em humanos foram descritos na técnica (ver, e.g., Choo et al. (2007). Yonsei medical journal. 48,1: 11-23; Shiina et al. (2009). Journal of human genetics. 54,1: 15; Petersdorf. (2013). Blood.
122,11: 1863-1872; e Bertaina e Andreani. (2018). International journal of molecular sciences. 19,2: 621, que são aqui incorporados por referência em sua totalidade).
[0161] Em algumas modalidades, pelo menos um antígeno do complexo de histocompatibilidade principal (e.g., um antígeno HLA) é incompatível no sujeito que recebe um transplante de acordo com os métodos aqui fornecidos em relação ao doador. Em certas modalidades, o antígeno de MHC é uma molécula da classe I do MHC ou uma molécula da classe II do MHC. Em modalidades particulares, o antígeno de MHC é qualquer um de, ou qualquer combinação de, um B2M, HLA-A, HLA-B, HLA- C, HLA-DRA, HLA-DRB1, HLA-DRB3, HLA-DRB4, HLA-DRB5, HLA-DPA1, HLA- DPA2, HLA-DQA1 e/ou HLA-DQB1. Em algumas modalidades, o transplante compreende células-tronco hematopoiéticas alogênicas que compreendem pelo menos uma incompatibilidade de HLA em relação aos antígenos HLA no paciente humano. Por exemplo, em certos casos, as células-tronco hematopoiéticas alogênicas compreendem pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos seis, pelo menos sete, pelo menos oito, pelo menos nove ou mais que nove incompatibilidades de HLA em relação aos antígenos HLA no paciente humano. Em algumas modalidades, as células-tronco hematopoiéticas alogênicas compreendem uma incompatibilidade total de HLA em relação aos antígenos HLA no paciente humano.
[0162] Alternativamente ou adicionalmente, pelo menos um antígeno de histocompatibilidade menor é incompatível no sujeito que recebe um transplante de acordo com os métodos aqui fornecidos em relação ao doador. Em algumas modalidades, o transplante compreende células-tronco hematopoiéticas alogênicas que compreendem pelo menos uma incompatibilidade de miHA em relação aos antígenos miHA no paciente humano. Por exemplo, em certos casos, as células- tronco hematopoiéticas alogênicas compreendem pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos seis, pelo menos sete, pelo menos oito, pelo menos nove ou mais que nove incompatibilidades de miHAs em relação aos antígenos miHA no paciente humano. Em certas modalidades, o antígeno de histocompatibilidade menor é uma proteína HA-1, HA-2, HA-8, HA-3, HB-1, HY-Al, HY-A2, HY-B7, HY-B8, HY-B60 ou HY-DQ5. Exemplos de outros antígenos de histocompatibilidade menor são conhecidos na técnica (e.g., Perreault et al. (1990). Blood. 76,7: 1269-1280; Martin et al. (2017). Blood. 129,6: 791-798; e Patente dos EUA No US10414813B2, que são aqui incorporados por referência em sua totalidade).
[0163] Os métodos aqui descritos podem aumentar o nível de quimerismo de células alogênicas do doador no receptor do transplante em relação a um paciente que recebe um ADC anti-CD117, um ADC anti-CD45 ou um imunossupressor sozinho.
Em algumas modalidades, os métodos são eficazes para estabelecer pelo menos 80 % de quimerismo do doador no receptor do transplante (e.g., pelo menos 80 %, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou pelo menos 99 % de quimerismo do doador). O nível de quimerismo do doador após o transplante de HSC alogênicas pode ser, por exemplo, quimerismo total, quimerismo de medula óssea, quimerismo mieloide periférico, quimerismo de células B ou quimerismo de células T.
Vias de Administração e Dosagem
[0164] Os anticorpos, os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos ou ADCs aqui descritos podem ser administrados a um paciente (e.g., um paciente humano sofrendo de câncer, uma doença autoimune ou em necessidade de terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética) em uma variedade de formas de dosagem. Por exemplo, os anticorpos, os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos ou ADCs aqui descritos podem ser administrados a um paciente sofrendo de câncer, uma doença autoimune ou em necessidade de terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética na forma de uma solução aquosa, tal como uma solução aquosa contendo um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Os excipientes farmaceuticamente aceitáveis para o uso com as composições e métodos aqui descritos incluem agentes modificadores de viscosidade. A solução aquosa pode ser esterilizada usando técnicas conhecidas na técnica.
[0165] As formulações farmacêuticas compreendendo um anticorpo anti-HC (e.g., um anticorpo anti-CD117 ou um anticorpo anti-CD45) ou conjugados dos mesmos (e.g., ADCs como aqui descritos) são preparadas misturando tal anticorpo ou ADC com um ou mais portadores farmaceuticamente aceitáveis opcionais (Remington’s Pharmaceutical Sciences 16a edição, Osol, A. Ed. (1980)), na forma de formulações liofilizadas ou soluções aquosas. Os portadores farmaceuticamente aceitáveis são geralmente não tóxicos para os receptores nas dosagens e concentrações utilizadas e incluem, mas não são limitados a: tampões, tais como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes incluindo ácido ascórbico e metionina; conservantes (tais como cloreto de octadecildimetilbenzil amônio; cloreto de hexametônio; cloreto de benzalcônio; cloreto de benzetônio; álcool fenólico, butílico ou benzílico; alquil parabenos, tais como metil ou propil parabeno; catecol; resorcinol;
ciclo-hexanol; 3-pentanol; e m-cresol); polipeptídeos de baixo peso molecular (menos de cerca de 10 resíduos); proteínas, tais como albumina do soro, gelatina ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos, tais como polivinilpirrolidona; aminoácidos, tais como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos incluindo glicose, manose ou dextrinas; agentes quelantes, tais como EDTA; açúcares, tais como sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contra-íons formadores de sal, tais como sódio; complexos metálicos (e.g., complexos de proteína Zn); e/ou tensoativos não iônicos, tais como polietilenoglicol (PEG).
[0166] Os anticorpos, os fragmentos de ligação ao antígeno ou ADCs aqui descritos podem ser administrados por uma variedade de vias, tais como oral, transdérmica, subcutânea, intranasal, intravenosa, intramuscular, intraocular ou parenteral. A via mais adequada para administração em qualquer caso dependerá do anticorpo particular, ou fragmento de ligação ao antígeno, administrado, do paciente, dos métodos de formulação farmacêutica, dos métodos de administração (e.g., tempo de administração e via de administração), idade do paciente, peso corpóreo, sexo, severidade das doenças sendo tratadas, da dieta do paciente e da taxa de excreção do paciente.
[0167] A dose eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, aqui descrito pode variar, por exemplo de cerca de 0,001 a cerca de 100 mg/kg de peso corpóreo por administração única (e.g., bolus), múltiplas administrações ou administração contínua, ou para obter uma concentração sérica ótima (e.g., uma concentração sérica de 0,0001 a 5000 μg/mL) do anticorpo, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. A dose pode ser administrada uma ou mais vezes (e.g., 2 a 10 vezes) por dia, semana ou mês a um sujeito (e.g., um humano) sofrendo de câncer, uma doença autoimune ou submetido a terapia de condicionamento em preparação para receber um transplante de células-tronco hematopoiéticas.
[0168] Em uma modalidade, a dose de um ADC anti-HC (e.g, um anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45 conjugado por meio de um conector com uma citotoxina) administrada ao paciente humano é de cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 0,3 mg/kg.
[0169] Em uma modalidade, a dose de um ADC anti-HC (e.g, um anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45 conjugado por meio de um conector com uma citotoxina) administrada ao paciente humano é de cerca de 0,15 mg/kg a cerca de 0,3 mg/kg.
[0170] Em uma modalidade, a dose de um ADC anti-HC (e.g, um anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45 conjugado por meio de um conector com uma citotoxina) administrada ao paciente humano é de cerca de 0,15 mg/kg a cerca de 0,25 mg/kg.
[0171] Em uma modalidade, a dose de um ADC anti-HC (e.g, um anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45 conjugado por meio de um conector com uma citotoxina) administrada ao paciente humano é de cerca de 0,2 mg/kg a cerca de 0,3 mg/kg.
[0172] Em uma modalidade, a dose de um ADC anti-HC (e.g, um anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45 conjugado por meio de um conector com uma citotoxina) administrada ao paciente humano é de cerca de 0,25 mg/kg a cerca de 0,3 mg/kg.
[0173] Em uma modalidade, a dose de um ADC anti-HC (e.g, um anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45 conjugado por meio de um conector com uma citotoxina) administrada ao paciente humano é de cerca de 0,1 mg/kg.
[0174] Em uma modalidade, a dose de um ADC anti-HC (e.g, um anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45 conjugado por meio de um conector com uma citotoxina) administrada ao paciente humano é de cerca de 0,2 mg/kg.
[0175] Em uma modalidade, a dose de um ADC anti-HC (e.g, um anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45 conjugado por meio de um conector com uma citotoxina) administrada ao paciente humano é de cerca de 0,3 mg/kg.
[0176] Em uma modalidade, a dose de um ADC anti-HC aqui descrito administrada ao paciente humano é de cerca de 0,001 mg/kg a 10 mg/kg, cerca de 0,01 mg/kg a 9,5 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a 9 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a 8,5 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a 8 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a 7,5 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a 7 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a 6,5 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a 6 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a 5,5 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a 5 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a 4,5 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a 4 mg/kg, cerca de 0,5 mg/kg a 3,5 mg/kg, cerca de 0,5 mg/kg a 3 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a 10 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a 9 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a 8 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a 7 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a 6 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a 5 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a 4 mg/kg ou cerca de 1 mg/kg a 3 mg/kg.
[0177] Em uma modalidade, o ADC anti-HC aqui descrito que é administrado a um paciente humano para tratamento ou condicionamento tem uma meia-vida igual ou menor que 24 horas, igual ou menor que 22 horas, igual ou menor que 20 horas, igual ou menor que 18 horas, igual ou menor que 16 horas, igual ou menor que 14 horas, igual ou menor que 13 horas, igual ou menor que 12 horas, igual ou menor que 11 horas, igual ou menor que 10 horas, igual ou menor que 9 horas, igual ou menor que 8 horas, igual ou menor que 7 horas, igual ou menor que 6 horas ou igual ou menor que 5 horas. Em uma modalidade, a meia-vida do ADC anti-HC é de 5 horas a 7 horas; é de 5 horas a 9 horas; é de 15 horas a 11 horas; é de 5 horas a 13 horas; é de 5 horas a 15 horas; é de 5 horas a 20 horas; é de 5 horas a 24 horas; é de 7 horas a 24 horas; é de 9 horas a 24 horas; é de 11 horas a 24 horas; 12 horas a 22 horas; 10 horas a 20 horas; 8 horas a 18 horas; ou 14 horas a 24 horas.
[0178] Em uma modalidade, os métodos aqui divulgados minimizam a toxicidade hepática no paciente que recebe o ADC para o condicionamento. Por exemplo, em certas modalidades, os métodos aqui divulgados resultam em um nível de marcador hepático permanecendo abaixo de um nível tóxico conhecido no paciente por mais de 24 horas, 48 horas, 72 horas ou 96 horas. Em outras modalidades, os métodos aqui divulgados resultam em um nível de marcador hepático remanescente dentro de uma faixa de referência no paciente por mais de 24 horas, 48 horas, 72 horas ou 96 horas. Em certas modalidades, os métodos aqui divulgados resultam em um nível de marcador hepático aumentando não mais que 1,5 vezes acima de uma faixa de referência, não mais que 3 vezes acima de uma faixa de referência, não mais que 5 vezes acima de uma faixa de referência ou não mais que 10 vezes acima de uma faixa de referência por mais de 24 horas, 48 horas, 72 horas ou 96 horas.
Exemplos de marcadores hepáticos que podem ser usados para testar a toxicidade incluem alanina aminotransaminase (ALT), lactato desidrogenase (LDH) e aspartato aminotransaminase (AST). Em certas modalidades, a administração de um ADC como aqui descrito, i.e., onde duas doses são administradas em vez de uma dose única, resulta em um aumento transitório em um marcador hepático, e.g., AST, LDH e/ou ALT. Em alguns casos, um nível elevado de um marcador hepático indicando toxicidade pode ser alcançado, mas dentro de um certo período de tempo, e.g., cerca de 12 horas, cerca de 18 horas, cerca de 24 horas, cerca de 36 horas, cerca de 48 horas, cerca de 72 horas, acima de 3 dias, cerca de 3,5 dias, cerca de 4 dias, cerca de 4,5 dias, cerca de 5 dias, cerca de 5,5 dias, cerca de 6 dias, cerca de 6,5 dias, cerca de 7 dias, cerca de 7,5 dias ou menos de uma semana, o nível de marcador hepático retorna a um nível normal não associado à toxicidade hepática. Por exemplo, em um humano (homem adulto médio), um nível normal, não tóxico, de ALT é de 7 a 55 unidades por litro (U/L); e um nível normal, não tóxico, de AST é de 8 a 48 U/L. Em certas modalidades, pelo menos um dos níveis de AST, ALT ou LDH no sangue do paciente não atinge um nível tóxico entre a administração de uma primeira dose do ADC e 14 dias depois da administração da primeira dose ao paciente. Por exemplo, o paciente pode ser administrado com uma primeira dose e subsequentemente uma segunda dose, uma terceira dose, uma quarta dose ou mais doses dentro de, e.g., 5, 10 ou 14 dias após a administração da primeira dose, ainda pelo menos um dos níveis de AST, ALT ou LDH no sangue do paciente não atinge um nível tóxico entre a administração de uma primeira dose do ADC e 14 dias depois da administração da primeira dose ao paciente.
[0179] Em certas modalidades, pelo menos um dos níveis de AST, ALT ou LDH no sangue do paciente não sobe acima dos níveis normais, não sobe mais que 1,5 vezes acima dos níveis normais, não sobe mais que 3 vezes acima dos níveis normais, não sobe mais que 5 vezes acima dos níveis normais ou não sobe mais que 10 vezes acima dos níveis normais.
[0180] No caso de um procedimento de condicionamento antes do transplante de célula-tronco hematopoiética, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo pode ser administrado ao paciente em um momento que otimamente promova o enxerto das células-tronco hematopoiéticas exógenas, por exemplo, de cerca de 1 hora a cerca de 1 semana (e.g., cerca de 1 hora, cerca de 2 horas, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 7 horas, cerca de 8 horas, cerca de 9 horas, cerca de 10 horas, cerca de 11 horas, cerca de 12 horas, cerca de 13 horas, cerca de 14 horas, cerca de 15 horas, cerca de 16 horas, cerca de 17 horas, cerca de 18 horas, cerca de 19 horas, cerca de 20 horas, cerca de 21 horas, cerca de 22 horas, cerca de 23 horas, cerca de 24 horas, cerca de 2 dias, cerca de 3 dias, cerca de 4 dias, cerca de 5 dias, cerca de 6 dias, cerca de 7 dias) ou mais antes da administração do transplante de célula-tronco hematopoiética exógena. Faixas incluindo os números aqui citados também estão incluídas nos métodos considerados.
[0181] As faixas de dosagem descritas acima podem ser combinadas com ADCs anti-HC tendo as meias-vidas aqui citadas.
[0182] Usando os métodos aqui divulgados, um médico versado na técnica pode administrar a um paciente humano em necessidade de terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética um ADC, um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo capaz de se ligar a um antígeno expressado por células-tronco hematopoiéticas (e.g., CD117 (e.g., GNNK+ CD117) ou CD45) ou um antígeno expressado por células imunes maduras, tais como células T (e.g., CD45). Desta forma, uma população de células-tronco hematopoiéticas endógenas pode ser esgotada antes da administração de um enxerto de célula-tronco hematopoiética exógena de modo a promover o enxerto do enxerto de célula-tronco hematopoiética.
O anticorpo pode ser conjugado covalentemente com uma toxina, tal como uma molécula citotóxica aqui descrita ou conhecida na técnica. Por exemplo, um anticorpo anti-CD117 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo (tal como um anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45) ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) pode ser conjugado covalentemente com uma citotoxina, tal como exotoxina de pseudomonas A, deBouganin, toxina da difteria, uma amatoxina, tal como γ-amanitina, α-amanitina, saporina, maitansina, um maitansinoide, uma auristatina, uma antraciclina, uma caliqueamicina, irinotecano, SN-38, uma duocarmicina, uma pirrolobenzodiazepina, um dímero de pirrolobenzodiazepina, uma indolinobenzodiazepina, um dímero de indolinobenzodiazepina ou uma variante dos mesmos. Essa conjugação pode ser realizada usando as técnicas de formação de ligação covalente aqui descritas ou conhecidas na técnica. O anticorpo, fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou conjugado fármaco-anticorpo pode ser subsequentemente administrado ao paciente, por exemplo, por administração intravenosa, antes do transplante de células-tronco hematopoiéticas exógenas (tal como células-tronco hematopoiéticas autólogas, singênicas ou alogênicas) ao paciente.
[0183] O anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti- CD45) fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou conjugado fármaco-anticorpo pode ser administrado em uma quantidade suficiente para reduzir a quantidade de células-tronco hematopoiéticas endógenas, por exemplo, em cerca de 10 %, cerca de 20 %, cerca de 30 %, cerca de 40 %, cerca de 50 %, cerca de 60 %, cerca de 70 %, cerca de 80 %, cerca de 90 %, cerca de 95 % ou mais antes da terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética. A redução na contagem de células-tronco hematopoiéticas pode ser monitorada usando técnicas convencionais conhecidas na técnica, tais como por análise de FACS de células que expressam antígeno característico da superfície de células-tronco hematopoiéticas em uma amostra de sangue retirada do paciente em intervalos variáveis durante a terapia de condicionamento. Por exemplo, um médico versado na técnica pode retirar uma amostra de sangue do paciente em vários pontos no tempo durante a terapia de condicionamento e determinar a extensão da redução de células-tronco endógenas hematopoiéticas conduzindo uma análise de FACS para elucidar as concentrações relativas de células-tronco hematopoiéticas na amostra usando os anticorpos que se ligam a antígenos marcadores de células-tronco hematopoiéticas. De acordo com algumas modalidades, quando a concentração de células-tronco hematopoiéticas atingir um mínimo valor em resposta à terapia de condicionamento com um anticorpo anti-HC (e.g., um anticorpo anti-CD117, um anticorpo anti-CD45, um anticorpo anti- CD2, um anticorpo anti-CD5, um anticorpo anti-CD137 ou um anticorpo anti-CD252), um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou ADC, o médico pode concluir a terapia de condicionamento e pode começar a preparar o paciente para a terapia de transplante de células-tronco hematopoiéticas.
[0184] O anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti- CD45) fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou conjugado fármaco-anticorpo pode ser administrado ao paciente em uma solução aquosa contendo um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis, tais como um agente de modificação de viscosidade. A solução aquosa pode ser esterilizada usando técnicas aqui descritas ou conhecidas na técnica. O anticorpo, fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou conjugado fármaco-anticorpo pode ser administrado ao paciente em uma dosagem de, por exemplo, de cerca de 0,001 mg/kg a cerca de 100 mg/kg, de cerca de 0,001 mg/kg a cerca de 10 mg/kg, cerca de 0,01 mg/kg a 9,5 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a 9 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a 8,5 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a 8 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a 7,5 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a 7 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a 6,5 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a 6 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a 5,5 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a 5 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a 4,5 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a 4 mg/kg, cerca de 0,5 mg/kg a 3,5 mg/kg, cerca de 0,5 mg/kg a 3 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a 10 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a 9 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a 8 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a 7 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a 6 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a 5 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a 4 mg/kg, ou cerca de 1 mg/kg a 3 mg/kg, antes da administração de um enxerto de célula-tronco hematopoiética ao paciente. O anticorpo, fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou conjugado fármaco-anticorpo pode ser administrado ao paciente em um momento que otimamente promova o enxerto das células-tronco hematopoiéticas exógenas, por exemplo, de cerca de 1 hora a cerca de 1 semana (e.g., cerca de 1 hora, cerca de 2 horas, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 7 horas, cerca de 8 horas, cerca de 9 horas, cerca de 10 horas, cerca de 11 horas, cerca de 12 horas, cerca de 13 horas, cerca de 14 horas, cerca de 15 horas, cerca de 16 horas, cerca de 17 horas, cerca de 18 horas, cerca de 19 horas, cerca de 20 horas, cerca de 21 horas, cerca de 22 horas, cerca de 23 horas, cerca de 24 horas, cerca de 2 dias, cerca de 3 dias, cerca de 4 dias, cerca de 5 dias, cerca de 6 dias, ou cerca de 7 dias) ou mais antes da administração do transplante de célula-tronco hematopoiética exógena.
[0185] A terapia de imunossuppressão tipicamente envolve a administração de uma quantidade eficaz de um agente imunossupressor. As composições imunossupressoras serão formuladas e dosadas de uma forma compatível com as boas práticas médicas. Os fatores para consideração nesse contexto incluem a condição clínica do paciente individual, a causa do transplante, o sítio de liberação do agente, o método de administração, o cronograma de administração e outros fatores conhecidos pelos médicos. A quantidade eficaz nesse contexto, que é determinada por tais considerações, é a quantidade mínima necessária para prevenir uma resposta imune que resultaria na rejeição do enxerto pelo hospedeiro. Tal quantidade é preferivelmente abaixo da quantidade que é toxica para o hospedeiro ou torna o hospedeiro mais significativamente suscetível a infecções. A quantidade de imunossupressor necessária para a divulgação aqui pode ser menor que a normalmente necessária para enxertos transplantados que não foram pré-tratados e depende das circunstâncias individuais em torno do transplante e o tipo de imunossupressor utilizado.
[0186] Como observado acima, entretanto, essas quantidades sugeridas de imunossupressor estão sujeitas a uma grande quantidade de critérios terapêuticos. O fator chave na seleção de uma dose e cronograma apropriado é o resultado obtido, i.e., sobrevivência do enxerto. Por exemplo, doses relativamente altas podem ser necessárias inicialmente para o tratamento de rejeição hiperaguda do enxerto, que pode ser atribuída à destruição do enxerto mediada por anticorpo ou a um estágio posterior para o tratamento de rejeição aguda, que é caracterizada por um declíneo repentino na função do enxerto.
[0187] O imunossupressor é administrado por quaisquer meios adequados, incluindo parenteral e, se desejado para tratamento imunossupressor local, administração intralesional. As infusões parenterais incluem administração intramuscular, intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal ou subcutânea. Além disso, o imunossupressor é adequadamente administrado por infusão pulsada, particularmente com doses decrescentes do agente imunossupressor ou por infusão contínua.
[0188] Em algumas modalidades, o imunossupressor é administrado antes de um transplante de célula-tronco (i.e., antes do transplante). Em algumas modalidades, o imunossupressor é administrado após um transplante de célula-tronco (i.e., após o transplante). Em algumas modalidades, o imunossupressor é administrado substancialmente ao mesmo tempo que o paciente recebe o transplante.
[0189] Após a conclusão da terapia de condicionamento, o paciente pode então receber uma infusão (e.g., uma infusão intravenosa) de células-tronco hematopoiéticas exógenas, como do mesmo médico que realizou a terapia de condicionamento ou de um médico diferente. O médico pode administrar ao paciente uma infusão de células-tronco hematopoiéticas autólogas, singênicas ou alogênicas, por exemplo, em uma dosagem de 1 x 103 a 1 x 109 células-tronco hematopoiéticas/kg.
O médico pode monitorar o enxerto do transplante de células-tronco hematopoiéticas, por exemplo, retirando uma amostra de sangue do paciente e determinando o aumento na concentração de células-tronco hematopoiéticas ou células da linhagem hematopoiética (tais como megacariócitos, trombócitos, plaquetas, aritrócitos, mastócitos, mieloblastos, basófilos, neutrófilos, eosinófilos, microglia, granulócitos, monócitos, osteoclastos, células apresentadoras de antígeno, macrófagos, células dendríticas, células exterminadoras naturais, linfócitos T e linfócitos B) após a administração do transplante. Essa análise pode ser conduzida, por exemplo, de 1 hora a 6 meses ou mais, após a terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética (e.g., cerca de 1 hora, cerca de 2 horas, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 7 horas, cerca de 8 horas, cerca de 9 horas, cerca de 10 horas, cerca de 11 horas, cerca de 12 horas, cerca de 13 horas, cerca de 14 horas, cerca de 15 horas, cerca de 16 horas, cerca de 17 horas, cerca de 18 horas, cerca de 19 horas, cerca de 20 horas, cerca de 21 horas, cerca de 22 horas, cerca de 23 horas, cerca de 24 horas, cerca de 2 dias, cerca de 3 dias, cerca de 4 dias, cerca de 5 dias, cerca de 6 dias, cerca de 7 dias, cerca de 2 semanas, cerca de 3 semanas,
cerca de 4 semanas, cerca de 5 semanas, cerca de 6 semanas, cerca de 7 semanas, cerca de 8 semanas, cerca de 9 semanas, cerca de 10 semanas, cerca de 11 semanas, cerca de 12 semanas, cerca de 13 semanas, cerca de 14 semanas, cerca de 15 semanas, cerca de 16 semanas, cerca de 17 semanas, cerca de 18 semanas, cerca de 19 semanas, cerca de 20 semanas, cerca de 21 semanas, cerca de 22 semanas, cerca de 23 semanas, cerca de 24 semanas ou mais). Uma descoberta de que a concentração de células-tronco hematopoiéticas ou células da linhagem hematopoiética aumentou (e.g., em cerca de 1 %, cerca de 2 %, cerca de 3 %, cerca de 4 %, cerca de 5 %, cerca de 6 %, cerca de 7 %, cerca de 8 %, cerca de 9 %, cerca de 10 %, cerca de 20 %, cerca de 30 %, cerca de 40 %, cerca de 50 %, cerca de 60 %, cerca de 70 %, cerca de 80 %, cerca de 90 %, cerca de 100 %, cerca de 200 %, cerca de 500 % ou mais) após a terapia de transplante em relação à concentração do tipo de célula correspondente antes da terapia de transplante fornece uma indicação de que tratamento com o anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45) fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou conjugado fármaco- anticorpo promoveu com êxito o enxerto do enxerto de células-tronco hematopoiéticas transplantadas.
[0190] O enxerto de transplante de células-tronco hematopoiéticas devido à administração de um anticorpo anti-HC (e.g., um anticorpo anti-CD117 ou um anticorpo anti-CD45), os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos ou ADCs, pode se manifestar em uma variedade de medições empíricas. Por exemplo, o enxerto de células-tronco hematopoiéticas transplantadas pode ser avaliado avaliando a quantidade de unidades de repovoamento competitivo (CRU) presente dentro da medula óssea de um paciente após a administração de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo capaz de se ligar a um antígeno expressado por células-tronco hematopoiéticas (e.g., CD117 (e.g., GNNK+ CD117), ou CD45) e subsequente administração de um transplante de célula-tronco hematopoiética. Além disso, pode-se observar o enxerto de um transplante de células-tronco hematopoiéticas incorporando um gene repórter, tal como uma enzima que cataliza uma reação química produzindo um produto fluorescente, cromofórico ou luminescente, em um vetor com o qual as células-tronco hematopoiéticas do doador foram transfectadas e subsequentemente monitorar o sinal correspondente em um tecido no qual as células-tronco hematopoiéticas se alojaram, tal como a medula óssea. Também pode-se observar o enxerto de célula-tronco hematopoiética pela avaliação da quantidade e sobrevivência das células-tronco e progenitoras hematopoiéticas, por exemplo, conforme determinado por métodos de análise de classificação de células ativadas por fluorescência (FACS) conhecidos na técnica. O enxerto também pode ser determinado medindo as contagens de glóbulos brancos no sangue periférico durante um período de pós-transplante e/ou medindo a recuperação de células da medula por células do doador em uma amostra aspirada da medula óssea.
Anticorpos anti-HC
[0191] A presente divulgação tem como base em parte a descoberta de que os anticorpos ou os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos capazes de se ligar a um antígeno expressado por células hematopoiéticas, tal como CD117 (e.g., GNNK+ CD117) ou CD45 podem ser usados como agente terapêuticos sozinhos ou como conjugados anticorpo-fármaco (ADCs) para (i) tratar cânceres e doenças autoimunes caracterizados por células hematopoiéticas CD117+ (e.g., GNNK+ CD117) ou CD45+; e (ii) promover o enxerto de células-tronco hematopoiéticas transplantadas em um paciente em necessidade de terapia de transplante. Essas atividades terapêuticas podem ser causadas, por exemplo, pela ligação de um anticorpo anti-célula hematopoiética (HC) (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45) ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, que se liga a um antígeno (e.g., CD117 (e.g., GNNK+ CD117) ou CD45) expressado por uma célula hematopoiética (e.g., célula-tronco hematopoiética), leucócito ou célula imune, e.g., célula imune madura (e.g., células T)), tal como uma célula cancerosa, célula autoimune ou célula-tronco hematopoiética e, subsequentemente, induz a morte celular. A depleção de células-tronco hematopoiéticas endógenas pode fornecer um nicho no qual células-tronco hematopoiéticas transplantadas podem se alojar e, subsequentemente, estabelecer a hematopoese produtiva. Desta forma, as células- tronco hematopoiéticas transplantadas podem enxertar com êxito em um paciente, tal como paciente humano sofrendo de um transtorno de células-tronco aqui descrito.
[0192] Os anticorpos anti-HC (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-45) aqui descritos podem estar na forma de anticorpos de comprimento total, anticorpos biespecíficos, anticorpos de domínio variável duplo, anticorpos e/ou fragmentos de ligação de múltiplas cadeias ou cadeia única que se ligam especificamente a CD117 ou CD45 humano incluindo, mas não limitado a Fab, Fab’, (Fab’)2, Fv), scFv (Fv de cadeia única), surrobodies (incluindo construto de cadeia leve substituto), anticorpos de domínio único, anticorpos camelizados e semelhantes. Eles também podem ser de, ou derivados de qualquer isotipo, incluindo, por exemplo, IgA (e.g., IgA1 ou IgA2), IgD, IgE, IgG (e.g. IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4) ou IgM. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45) é um IgG (e.g.
IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4).
[0193] Anticorpos para o uso em conjunto com os métodos aqui descritos incluem variantes daqueles anticorpos descritos acima, tais como fragmentos de anticorpo que contêm ou carecem de um domínio Fc, bem como variantes humanizadas de anticorpos não humanos aqui descritos e esqueleto de proteína semelhante a anticorpo (e.g., domínios 10Fn3) contendo uma ou mais, ou todas, as CDRs ou regiões equivalentes destas de um anticorpo, ou fragmento de anticorpo, aqui descrito. Os fragmentos de ligação ao antígeno exemplificativos dos anticorpos anteriores incluem um domínio de imunoglobulina variável duplo, uma molécula Fv de cadeia única (scFv), um diabody, um triabody, um nanobody, um esqueleto de proteína semelhante a anticorpo, um fragmento Fv, um fragmento Fab, uma molécula F(ab’)2 e um di-scFv em tandem, entre outros.
[0194] Em certas modalidades, um anticorpo anti-CD117 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, tem uma certa taxa de dissociação que é particularmente vantajosa quando usado como uma parte de um conjugado. Por exemplo, um anticorpo anti-CD117 tem, em certas modalidades, uma constante de taxa de dissociação (Koff) para CD117 humano e/ou CD117 de rhesus de 1 x 10-2 a 1 x 10-3, 1 x 10-3 a 1 x 10-4, 1 x 10-5 a 1 x 10-6, 1 x 10-6 a 1 x 10-7 ou 1 x 10-7 a 1 x 10-8, conforme medido por interferometria de bio-camada (BLI). Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga a CD117 (e.g., CD117 humano e/ou CD117 de rhesus) com uma KD de cerca de 100 nM ou menos, cerca de 90nM ou menos, cerca de 80 nM ou menos, cerca de 70 nM ou menos, cerca de 60 nM ou menos, cerca de 50 nM ou menos, cerca de 40 nM ou menos, cerca de 30 nM ou menos, cerca de 20 nM ou menos, cerca de 10 nM ou menos, cerca de 8 nM ou menos, cerca de 6 nM ou menos, cerca de 4 nM ou menos, cerca de 2 nM ou menos, cerca de 1 nM ou menos conforme determinado por um ensaio de Interferometria de Bio-Camada (BLI).
[0195] Em uma modalidade, anticorpos anti-HC (e.g., anticorpos anti-CD117 ou anticorpos anti-CD45) compreendendo um ou mais aminoácidos radiomarcados são fornecidos. Um anticorpo anti-CD117 radiomarcado pode ser usado para propósitos de diagnóstico e terapêuticos (a conjugação com moléculas radiomarcadas é outra característica possível). Exemplos não limitativos de marcadores para polipeptídeos incluem, mas não são limitados a 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc e 125I, 131I e 186Re. Os métodos para preparar aminoácidos radiomarcados e derivados de peptídeos relacionados são conhecidos na técnica (ver por exemplo Junghans et al., em Cancer Chemotherapy and Biotherapy 655-686 (2a edição, Chafner e Longo, eds.,
Lippincott Raven (1996)) e Pat. dos EUA No 4.681.581, Pat. dos EUA No 4.735.210, Pat. dos EUA No 5.101.827, Pat. dos EUA No 5.102.990 (U.S. RE35.500), Pat. dos EUA No 5.648.471 e Pat. dos EUA No 5.697.902. Por exemplo, um radioisótopo pode ser conjugado por um método de cloramina T.
[0196] Os anticorpos anti-HC (e.g., anticorpos anti-CD117 ou anti-CD45), fragmentos de ligação ou conjugados dos mesmos, aqui descritos também podem incluir modificações e/ou mutações que alteram as propriedades dos anticorpos e/ou fragmentos, tais como aquelas que aumentam a meia-vida, aumentam ou diminuem ADCC, etc., como é conhecido na técnica.
[0197] Em uma modalidade, o anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45) ou fragmento de ligação do mesmo, compreende uma região Fc modificada, em que a dita região Fc modificada compreende pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a uma região Fc tipo selvagem, tal que a dita molécula tenha uma afinidade alterada para ou ligação a um FcgamaR (FcγR). Certas posições de aminoácidos dentro da região Fc são conhecidas por meio de estudos de cristalografia para fazer um contato direto com FcγR. Especificamente, os aminoácidos 234-239 (região de dobradiça), aminoácidos 265-269 (B/C loop), aminoácidos 297-299 (C’/E loop) e aminoácidos 327-332 (F/G) loop. (ver Sondermann et al., 2000 Nature, 406: 267-273). Em algumas modalidades, os anticorpos aqui descritos podem compreender regiões Fc variantes compreendendo a modificação de pelo menos um resíduo que faz um contato direto com um FcγR com base em análise estrutural e cristalográfica. Em uma modalidade, a região Fc do anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45) (ou fragmento do mesmo) compreende uma substituição de aminoácido no aminoácido 265 de acordo com o índice EU como em Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed. Public Health Service, NH1, MD (1991), expressamente incorporado aqui por referência. O “índice EU como em Kabat” se refere à numeração do anticorpo IgG1
EU humano. Em uma modalidade, a região Fc compreende uma mutação D265A. Em uma modalidade, a região Fc compreende uma mutação D265C. Em algumas modalidades, a região Fc do anticorpo (ou fragmento do mesmo) compreende uma substituição de aminoácido no aminoácido 234 de acordo com o índice EU como em Kabat. Em uma modalidade, a região Fc compreende uma mutação L234A. Em algumas modalidades, a região Fc do anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45) (ou fragmento do mesmo) compreende uma substituição de aminoácido no aminoácido 235 de acordo com o índice EU como em Kabat. Em uma modalidade, a região Fc compreende uma mutação L235A.
[0198] Ainda em uma outra modalidade, a região Fc compreende uma mutação L234A e L235A (também referida aqui como “L234A.L235A” ou como “LALA”). Em outra modalidade, a região Fc compreende uma mutação L234A e L235A, em que a região Fc não inclui uma mutação P329G. Em uma outra modalidade, a região Fc compreende uma mutação D265C, L234A e L235A (também referida aqui como “D265C.L234A.L235A”). Em outra modalidade, a região Fc compreende uma mutação D265C, L234A e L235A, em que a região Fc não inclui uma mutação P329G. Em ainda uma outra modalidade, a região Fc compreende uma mutação D265C, L234A, L235A e H435A (também referida aqui como “D265C.L234A.L235A.H435A”). Em outra modalidade, a região Fc compreende uma mutação D265C, L234A, L235A e H435A, em que a região Fc não inclui uma mutação P329G. Em uma outra modalidade, a região Fc compreende uma mutação D265C e H435A (também referida aqui como “D265C.H435A”). Ainda em uma outra modalidade, a região Fc compreende uma mutação D265A, S239C, L234A e L235A (também referida aqui como “D265A.S239C.L234A.L235A”). Ainda em uma outra modalidade, a região Fc compreende uma mutação D265A, S239C, L234A e L235A, em que a região Fc não inclui uma mutação P329G. Em outra modalidade, a região Fc compreende uma mutação D265C, N297G e H435A (também referida aqui como
“D265C.N297G.H435A”). Em outra modalidade, a região Fc compreende uma mutação D265C, N297Q e H435A (também referida aqui como “D265C.N297Q.H435A”). Em outra modalidade, a região Fc compreende uma mutação E233P, L234V, L235A e delG236 (deleção de 236) (também referida aqui como “E233P.L234V.L235A.delG236” ou como “EPLVLAdelG”). Em outra modalidade, a região Fc compreende uma mutação E233P, L234V, L235A e delG236 (deleção de 236), em que a região Fc não inclui uma mutação P329G. Em outra modalidade, a região Fc compreende uma mutação E233P, L234V, L235A, delG236 (deleção de 236) e H435A (também referida aqui como “E233P.L234V.L235A.delG236.H435A” ou como “EPLVLAdelG.H435A”). Em outra modalidade, a região Fc compreende uma mutação E233P, L234V, L235A, delG236 (deleção de 236) e H435A, em que a região Fc não inclui uma mutação P329G. Em outra modalidade, a região Fc compreende uma mutação L234A, L235A, S239C e D265A. Em outra modalidade, a região Fc compreende uma mutação L234A, L235A, S239C e D265A, em que a região Fc não inclui uma mutação P329G. Em outra modalidade, a região Fc compreende uma mutação H435A, L234A, L235A e D265C.
Em outra modalidade, a região Fc compreende uma mutação H435A, L234A, L235A e D265C, em que a região Fc não inclui uma mutação P329G.
[0199] Em algumas modalidades, o anticorpo tem uma região Fc modificada tal que, o anticorpo diminui uma função efetora em um ensaio de função efetora in vitro com uma diminuição na ligação a um receptor Fc (Fc R) em relação a ligação de um anticorpo idêntico compreendendo uma região Fc não modificada para o FcR. Em algumas modalidades, o anticorpo tem uma região Fc modificada tal que, o anticorpo diminui uma função efetora em um ensaio de função efetora in vitro com uma diminuição na ligação a um receptor Fc gama (FcγR) em relação a ligação de um anticorpo idêntico compreendendo uma região Fc não modificada para o FcγR. Em algumas modalidades, o FcγR é FcγR1. Em algumas modalidades, o FcγR é FcγR2A.
Em algumas modalidades, o FcγR é FcγR2B. Em outras modalidades, o FcγR é FcγR2C. Em algumas modalidades, o FcγR é FcγR3A. Em algumas modalidades, o FcγR é FcγR3B. Em outras modalidades, a diminuição na ligação é pelo menos uma diminuição de 70 %, pelo menos uma diminuição de 80 %, pelo menos uma diminuição de 90 %, pelo menos uma diminuição de 95 %, pelo menos uma diminuição de 98 %, pelo menos uma diminuição de 99 % ou uma diminuição de 100 % na ligação do anticorpo a um FcγR em relação à ligação do anticorpo idêntico compreendendo uma região Fc não modificada para o FcγR. Em outras modalidades, a diminuição na ligação é pelo menos uma diminuição de 70 % a 100 %, pelo menos uma diminuição de 80 % a 100 %, pelo menos uma diminuição de 90 % a 100 %, pelo menos uma diminuição de 95 % a 100 % ou pelo menos uma diminuição de 98 % a 100 % na ligação do anticorpo a um FcγR em relação à ligação do anticorpo idêntico compreendendo uma região Fc não modificada para o FcγR
[0200] Em algumas modalidades, o anticorpo tem uma região Fc modificada tal que, o anticorpo diminui a liberação de citocina em um ensaio de liberação de citocina in vitro com uma diminuição na liberação de citocina de pelo menos 50 % em relação à liberação de citocina de um anticorpo idêntico compreendendo uma região Fc não modificada. Em algumas modalidades, a diminuição na liberação de citocina é pelo menos uma diminuição de 70 %, pelo menos uma diminuição de 80 %, pelo menos uma diminuição de 90 %, pelo menos uma diminuição de 95 %, pelo menos uma diminuição de 98 %, pelo menos uma diminuição de 99 % ou uma diminuição de 100 % na liberação de citocina em relação à liberação de citocina do anticorpo idêntico compreendendo uma região Fc não modificada. Em algumas modalidades, a diminuição na liberação de citocina é pelo menos uma diminuição de 70 % a 100 %, pelo menos uma diminuição de 80 % a 100 %, pelo menos uma diminuição de 90 % a 100 %, pelo menos uma diminuição de 95 % a 100 % na liberação de citocina em relação à liberação de citocina do anticorpo idêntico compreendendo uma região Fc não modificada. Em certas modalidades, a liberação de citocina é por células imunes.
[0201] Em algumas modalidades, o anticorpo tem uma região Fc modificada tal que, o anticorpo diminui a desgranulação de mastócito em um ensaio de desgranulação de mastócito in vitro com uma diminuição na desgranulação de mastócito de pelo menos 50 % em relação à desgranulação de mastócito de um anticorpo idêntico compreendendo uma região Fc não modificada. Em algumas modalidades, a diminuição na desgranulação de mastócito é pelo menos uma diminuição de 70 %, pelo menos uma diminuição de 80 %, pelo menos uma diminuição de 90 %, pelo menos uma diminuição de 95 %, pelo menos uma diminuição de 98 %, pelo menos uma diminuição de 99 % ou uma diminuição de 100 % na desgranulação de mastócito em relação à desgranulação de mastócito do anticorpo idêntico compreendendo uma região Fc não modificada. Em algumas modalidades, a diminuição na desgranulação de mastócito é pelo menos uma diminuição de 70 % a 100 %, pelo menos uma diminuição de 80 % a 100 %, pelo menos uma diminuição de 90 % a 100 % ou pelo menos uma diminuição de 95 % a 100 % na desgranulação de mastócito em relação à desgranulação de mastócito do anticorpo idêntico compreendendo uma região Fc não modificada.
[0202] Em algumas modalidades, o anticorpo tem uma região Fc modificada tal que, o anticorpo diminui ou evita a fagocitose celular dependente de anticorpo (ADCP) em um ensaio de fagocitose celular dependente de anticorpo in vitro, com uma diminuição na ADCP de pelo menos 50 % em relação à ADCP de um anticorpo idêntico compreendendo uma região Fc não modificada. Em algumas modalidades, a diminuição na ADCP é pelo menos uma diminuição de 70 %, pelo menos uma diminuição de 80 %, pelo menos uma diminuição de 90 %, pelo menos uma diminuição de 95 %, pelo menos uma diminuição de 98 %, pelo menos uma diminuição de 99 % ou uma diminuição de 100 % na liberação de citocina em relação à liberação de citocina do anticorpo idêntico compreendendo uma região Fc não modificada.
[0203] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti- CD117 ou anticorpo anti-CD45) aqui descrito compreende uma região Fc compreendendo uma das seguintes modificações ou combinações de modificações: D265A, D265C, D265C/H435A, D265C/LALA, D265C/LALA/H435A, D265A/S239C/L234A/L235A/H435A, D265A/S239C/L234A/L235A, D265C/N297G, D265C/N297G/H435A, D265C (EPLVLAdelG*), D265C (EPLVLAdelG)/H435A, D265C/N297Q/H435A, D265C/N297Q, EPLVLAdelG/H435A, EPLVLAdelG/D265C, EPLVLAdelG/D265A, N297A, N297G ou N297Q.
[0204] A ligação ou afinidade entre uma região Fc modificada e um receptor Fc gama pode ser determinada usando uma variedade de técnicas conhecidas na técnica, por exemplo, mas não limitadas a métodos de equilíbrio (e.g., ensaio imunoabsorvente ligado a enzima (ELISA); KinExA, Rathanaswami et al. Analytical Biochemistry, Vol. 373: 52-60, 2008; ou radioimunoensaio (RIA)), ou por um ensaio de ressonância plasmônica de superfície ou outro mecanismo de ensaio com base em cinética (e.g., análise BIACORE.RTM. ou análise Octet.RTM. (forteBIO)) e outros métodos, tais como ensaios de ligação indireta, ensaios de ligação competitiva, transferência de energia de ressonância por fluorescência (FRET), eletroforese em gel e cromatografia (e.g., filtração em gel). Esses e outros métodos podem utilizar um marcador em um ou mais dos componentes sendo examinados e/ou utilizar uma variedade de métodos de detecção incluindo, mas não limitados a marcadores cromogênicos, fluorescentes, luminescentes ou isotópicos. Uma descrição detalhada de afinidades de ligação e cinética pode ser encontrada em Paul, W. E., ed., Fundamental Immunology, 4a Ed., Lippincott-Raven, Philadelphia (1999), que se concentra em interações anticorpo-imunógeno. Um exemplo de um ensaio de ligação competitiva é um radioimunoensaio compreendendo a incubação de antígeno marcado com o anticorpo de interesse na presença de quantidades crescentes de antígeno não marcado, e a detecção do anticorpo ligado ao antígeno marcado. A afinidade do anticorpo de interesse para um antígeno particular e as taxas de dissociação podem ser determinadas a partir de dados por análise de gráficos de scatchard. A competição com um segundo anticorpo também pode ser determinada usando radioimunoensaios. Neste caso, o antígeno é incubado com anticorpo de interesse conjugado com um composto marcado na presença de quantidades crescentes de um segundo anticorpo não marcado.
[0205] Em uma modalidade, um anticorpo tendo as modificações de Fc aqui descritas (e.g., D265C, L234A, L235A e/ou H435A) tem pelo menos uma diminuição de 70 %, pelo menos uma diminuição de 80 %, pelo menos uma diminuição de 90 %, pelo menos uma diminuição de 95 %, pelo menos uma diminuição de 98 %, pelo menos uma diminuição de 99 % ou uma diminuição de 100 % na ligação a um receptor Fc gama em relação à ligação do anticorpo idêntico compreendendo uma região Fc não modificada para o receptor Fc gama (e.g., conforme avaliado por interferometria de bio-camada (BLI)).
[0206] Sem desejar estar limitado por qualquer teoria, acredita-se que as interações de ligação da região Fc com um receptor Fc gama são essenciais para uma variedade de funções efetoras e eventos de sinalização a jusante incluindo, mas não limitados a citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo (ADCC) e citotoxicidade dependente de complemento (CDC). Consequentemente, em certos aspectos, um anticorpo compreendendo uma região Fc modificada (e.g., compreendendo um L234A, L235A e/ou uma mutação D265C) tem funções efetoras substancialmente reduzidas ou abolidas. As funções efetoras podem ser avaliadas usando uma variedade de métodos conhecido na técnica, e.g., medindo respostas celulares (e.g., desgranulação de mastócito ou liberação de citocina) em resposta ao anticorpo de interesse. Por exemplo, usando métodos padrão na técnica, os anticorpos modificados em Fc podem ser avaliados para sua capacidade de desencadear a desgranulação de mastócito in vitro ou para sua capacidade de desencadear a liberação de citocina, e.g. por células mononucleares do sangue periférico humano.
[0207] Os anticorpos da presente divulgação podem ser ainda projetados para modular ainda mais a meia-vida do anticorpo introduzindo mutações adicionais de Fc, tais como aquelas descritas, por exemplo, em (Dall’Acqua et al. (2006) J Biol Chem 281: 23514-24), (Zalevsky et al. (2010) Nat Biotechnol 28: 157-9), (Hinton et al. (2004) J Biol Chem 279: 6213-6), (Hinton et al. (2006) J Immunol 176: 346-56), (Shields et al.
(2001) J Biol Chem 276: 6591-604), (Petkova et al. (2006) Int Immunol 18: 1759-69), (Datta-Mannan et al. (2007) Drug Metab Dispos 35: 86-94), (Vaccaro et al. (2005) Nat Biotechnol 23: 1283-8), (Yeung et al. (2010) Cancer Res 70: 3269-77) e (Kim et al.
(1999) Eur J Immunol 29: 2819-25), e incluem as posições 250, 252, 253, 254, 256, 257, 307, 376, 380, 428, 434 e 435. Mutações exemplificativas que podem ser feitas individualmente ou em combinação são as mutações T250Q, M252Y, 1253A, S254T, T256E, P2571, T307A, D376V, E380A, M428L, H433K, N434S, N434A, N434H, N434F, H435A e H435R.
[0208] Assim, em uma modalidade, a região Fc compreende uma mutação que resulta em uma diminuição na meia-vida (e.g., em relação a um anticorpo tendo uma região Fc não modificada). Um anticorpo tendo uma meia-vida curta pode ser vantajoso em certos casos onde espera-se que o anticorpo funcione como um terapêutico de curta duração, e.g., a etapa de condicionamento aqui descrita onde o anticorpo é administrado seguido por HSCs. Idealmente, o anticorpo deve ser substancialmente eliminado antes da liberação das HSCs, que também geralmente expressam um antígeno alvo (e.g., CD117 (e.g., GNNK+ CD117) ou CD45), mas não são o alvo do anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45) ao contrário das células-tronco endógenas. Em uma modalidade, a região Fc compreende uma mutação na posição 435 (índice EU de acordo com Kabat). Em uma modalidade, a mutação é uma mutação H435A.
[0209] Em uma modalidade, o anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45) aqui descrito tem uma meia-vida (e.g., em humanos) igual ou menor que cerca de 24 horas, igual ou menor que cerca de 23 horas, igual ou menor que cerca de 22 horas, igual ou menor que cerca de 21 horas, igual ou menor que cerca de 20 horas, igual ou menor que cerca de 19 horas, igual ou menor que cerca de 18 horas, igual ou menor que cerca de 17 horas, igual ou menor que cerca de 16 horas, igual ou menor que cerca de 15 horas, igual ou menor que cerca de 14 horas, igual ou menor que cerca de 13 horas, igual ou menor que cerca de 12 horas ou igual ou menor que cerca de 11 horas.
[0210] Em uma modalidade, o anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45) aqui descrito tem uma meia-vida (e.g., em humanos) de cerca de 1 a 5 horas, cerca de 5 a 10 horas, cerca de 10 a 15 horas, cerca de 15 a 20 horas, ou cerca de 20 a 25 horas. Em uma modalidade, a meia-vida do anticorpo anti-HC é de cerca de 5 a 7 horas; cerca de 5 a 9 horas; cerca de 5 a 11 horas; cerca de 5 a 13 horas; cerca de 5 a 15 horas; cerca de 5 a 20 horas; cerca de 5 a 24 horas; cerca de 7 a 24 horas; cerca de 9 a 24 horas; cerca de 11 a 24 horas; cerca de 12 a 22 horas; cerca de 10 a 20 horas; cerca de 8 a 18 horas; ou cerca de 14 a 24 horas.
[0211] Em alguns aspectos, a região Fc compreende duas ou mais mutações que conferem meia-vida reduzida e uma função efetora reduzida do anticorpo. Em algumas modalidades, a região Fc compreende uma mutação que resulta em uma diminuição na meia-vida e uma mutação de pelo menos um resíduo que pode fazer contato direto com um FcγR (e.g., como com base em análise estrutural e cristalográfica). Em uma modalidade, a região Fc compreende uma mutação H435A, uma mutação L234A e uma mutação L235A. Em uma modalidade, a região Fc compreende uma mutação H435A e uma mutação D265C. Em uma modalidade, a região Fc compreende uma mutação H435A, uma mutação L234A, uma mutação L235A e uma mutação D265C.
[0212] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é conjugado com uma citotoxina (e.g., amatoxina) por meio de um resíduo de cisteína no domínio Fc do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
[0213] Em algumas modalidades desses aspectos, o resíduo de cisteína ocorre naturalmente no domínio Fc do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Por exemplo, o domínio Fc pode ser um domínio Fc de IgG, tal como um domínio Fc de IgG1 humano e o resíduo de cisteína pode ser selecionado do grupo que consiste em Cys261, Csy321, Cys367 e Cys425.
[0214] Em algumas modalidades, o resíduo de cisteína é introduzido por meio de uma mutação no domínio Fc do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Por exemplo, o resíduo de cisteína pode ser selecionado do grupo que consiste em Cys118, Cys239 e Cys265. Em uma modalidade, a região Fc do anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45) (ou fragmento do mesmo) compreende uma substituição de aminoácido no aminoácido 265 de acordo com o índice EU como em Kabat. Em uma modalidade, a região Fc compreende uma mutação D265C. Em uma modalidade, a região Fc compreende uma mutação D265C e H435A. Em uma modalidade, a região Fc compreende um D265C, uma mutação L234A e L235A. Em uma modalidade, a região Fc compreende um D265C, uma mutação L234A, uma L235A e uma H435A. Em uma modalidade, a região Fc do anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45) ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma substituição de aminoácido no aminoácido 239 de acordo com o índice EU como em Kabat. Em uma modalidade, a região Fc compreende uma mutação S239C. Em uma modalidade, a região Fc compreende uma mutação L234A, uma mutação L235A, uma mutação S239C e uma mutação D265A. Em outra modalidade, a região Fc compreende uma mutação S239C e H435A. Em outra modalidade, a região Fc compreende uma mutação L234A, uma mutação L235A e mutação S239C. Ainda em uma outra modalidade, a região Fc compreende uma mutação H435A, uma mutação L234A, uma mutação L235A e mutação S239C. Ainda em uma outra modalidade, a região Fc compreende uma mutação H435A, uma mutação L234A, uma mutação L235A, uma mutação S239C e mutação D265A.
[0215] Notavelmente, posições de aminoácidos Fc são em referência ao índice de numeração EU a menos que de outro modo indicado.
[0216] Os domínios Fc variantes aqui descritos são definidos de acordo com as modificações de aminoácidos que os compõem. Para todas as substituições de aminoácidos discutidas aqui em relação à região Fc, a numeração é sempre de acordo com o índice EU. Assim, por exemplo, D265C é um Fc variante com o ácido aspártico (D) na posição EU 265 substituído por cisteína (C) em relação ao domínio Fc precursor. Do mesmo modo, e.g., D265C/L234A/L235A define uma variante de Fc variante com substituições nas posições EU 265 (D a C), 234 (L a A) e 235 (L a A) em relação ao domínio Fc precursor. Uma variante também pode ser designada de acordo com sua composição de aminoácidos final nas posições EU de aminoácidos mutadas.
Por exemplo, o mutante L234A/L235A pode ser referido como LALA. É observado que a ordem em que substituições são fornecidas é arbitrária. Notavelmente, as posições de aminoácidos Fc são em referência ao índice de numeração EU a menos que de outro modo indicado.
[0217] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti- CD45 aqui compreende uma região Fc compreendendo uma das seguintes modificações ou combinações de modificações: D265A, D265C, D265C/H435A, D265C/LALA, D265C/LALA/H435A, D265C/N297G, D265C/N297G/H435A, D265C (IgG2*), D265C (IgG2)/H435A, D265C/N297Q/H435A, D265C/N297Q, EPLVLAdelG/H435A, N297A, N297G ou N297Q.
[0218] Os anticorpos e fragmentos de ligação dos mesmos aqui divulgados podem ser usados em conjugados, como descrito em mais detalhes abaixo.
[0219] Os anticorpos podem ser produzidos usando métodos e composições recombinantes, e.g., como descrito na Pat. dos EUA No 4.816.567. Em uma modalidade, o ácido nucleico isolado que codifica um anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45 aqui descrito é fornecido. Tal ácido nucleico pode codificar uma sequência de aminoácidos compreendendo a VL e/ou uma sequência de aminoácidos compreendendo a VH do anticorpo (e.g., as cadeias leves e/ou pesadas do anticorpo).
Em uma outra modalidade, um ou mais vetores (e.g., os vetores de expressão) compreendendo tal ácido nucleico são fornecidos. Em uma outra modalidade, uma célula hospedeira compreendendo tal ácido nucleico é fornecida. Em uma modalidade, uma célula hospedeira compreende (e.g., foi transformada com): (1) um vetor compreendendo um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos compreendendo a VL do anticorpo e uma sequência de aminoácidos compreendendo a VH do anticorpo, ou (2) um primeiro vetor compreendendo um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos compreendendo a VL do anticorpo e um segundo vetor compreendendo um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos compreendendo a VH do anticorpo. Em uma modalidade, a célula hospedeira é eucariótica, e.g. uma célula do Ovário de Hamster Chinês (CHO) ou célula linfoide (e.g., célula Y0, NS0, Sp20). Em uma modalidade, um método de produção de um anticorpo anti-CLL-1 é fornecido, em que o método compreende cultivar uma célula hospedeira compreendendo um ácido nucleico que codifica o anticorpo, como fornecido acima, sob condições adequadas para a expressão do anticorpo e, opcionalmente, recuperar o anticorpo da célula hospedeira (ou meio de cultura da célula hospedeira).
[0220] Para a produção recombinante de um anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45, o ácido nucleico que codifica um anticorpo, e.g., como descrito acima, é isolado e inserido em um ou mais vetores para clonagem e/ou expressão adicional em uma célula hospedeira. Esse ácido nucleico pode ser facilmente isolado e sequenciado usando procedimentos convencionais (e.g., usando sondas de oligonucleotídeo que são capazes de se ligarem especificamente aos genes que codificam as cadeias leves e pesadas do anticorpo).
[0221] As células hospedeiras adequadas para clonagem ou expressão de vetores que codificam anticorpos incluem células procarióticas ou eucarióticas aqui descritas. Por exemplo, anticorpos podem ser produzidos em bactérias, em particular quando a glicosilação e função efetora de Fc não são necessárias. Para a expressão de fragmentos de anticorpo e polipeptídeos em bactérias, ver, e.g., Pat. dos EUA Nos
5.648.237, 5.789.199 e 5.840.523. (Ver também Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J., 2003), páginas 245 a 254, descrevendo a expressão de fragmentos de anticorpo em E. coli.). Depois da expressão, o anticorpo pode ser isolado da massa de célula bacteriana em uma fração solúvel e pode ser posteriormente purificado.
[0222] As células de vertebrados também podem ser usadas como hospedeiras. Por exemplo, linhagens de células de mamíferos que são adaptadas para crescerem em suspensão podem ser úteis. Outros exemplos de linhagens de células hospedeiras de mamíferos úteis são linhagem CV1 de rim de macaco transformada por SV40 (COS-7); linhagem de rim embrionário humano (células 293 ou 293 como descrito, e.g., em Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)); células de rim de hamster neonato (BHK); células de sertoli de camundongo (células TM4 como descrito, e.g., em Mather, Biol. Reprod. 23: 243-251 (1980)); células de rim de macaco (CV1); células de rim de macaco verde africano (VERO-76); células de carcinoma cervical humano (HELA); células renais caninas (MDCK; células do fígado de rato buffalo (BRL 3A); células do pulmão humano (W138); células do fígado humano (Hep G2); tumor mamário de camundongo (MMT 060562); células TRI, como descrito, e.g., em Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383: 44-68 (1982); células MRC 5; e células
FS4. Outras linhagens de células hospedeiras de mamíferos úteis incluem células do ovário de hamster chinês (CHO), incluindo células DHFR-CHO (Urlaub et al., Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216 (1980)); e linhagens de células do mieloma, tais como Y0, NS0 e Sp2/0. Para uma revisão de certas linhagens de células hospedeiras de mamífero adequadas para a produção de anticorpo, ver, e.g., Yazaki e Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B. K. C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J.), páginas 255 a 268 (2003).
[0223] Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD117 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ou anticorpo anti-CD45 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreende regiões variáveis tendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95 %, 96 %, 97 % ou 99 % idêntica às SEQ ID Nos aqui divulgadas (Tabela 3). Alternativamente, o anticorpo anti-CD117 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ou anticorpo anti-CD45 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreende CDRs compreendendo as SEQ ID Nos aqui divulgadas com regiões de estrutura das regiões variáveis aqui descritas tendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95 %, 96 %, 97 % ou 99 % idêntica às SEQ ID Nos aqui divulgadas (Tabela 3).
[0224] Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD117 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região constante de cadeia pesada tendo uma sequência de aminoácidos que é aqui divulgada. Em outra modalidade, o anticorpo anti-CD117 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia leve e uma região constante de cadeia leve tendo uma sequência de aminoácidos que é aqui divulgada.
Ainda em uma outra modalidade, o anticorpo anti-CD117 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada, uma região variável de cadeia leve, uma região constante de cadeia pesada e uma região constante de cadeia leve tendo uma sequência de aminoácidos que é aqui divulgada.
[0225] Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD45 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região constante de cadeia pesada tendo uma sequência de aminoácidos que é aqui divulgada. Em outra modalidade, o anticorpo anti-CD45 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia leve e uma região constante de cadeia leve tendo uma sequência de aminoácidos que é aqui divulgada.
Ainda em uma outra modalidade, o anticorpo anti-CD45 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada, uma região variável de cadeia leve, uma região constante de cadeia pesada e uma região constante de cadeia leve tendo uma sequência de aminoácidos que é aqui divulgada.
[0226] Exemplos de anticorpos anti-CD117 e exemplos de anticorpos anti- CD45 são descritos adicionalmente aqui.
Anticorpos anti-CD117
[0227] Os anticorpos e os fragmentos de ligação ao antígeno capazes de se ligar a CD117 humano (também referido como c-Kit, Sequência de Referência de mRNA NCBI: NM_000222.2, Sequência de Referência de Proteína NCBI: NP_000213.1), incluindo aqueles capazes de se ligar a GNNK+ CD117, podem ser usados em conjunto com as composições e métodos aqui descritos de modo a condicionar um paciente para a terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética. Os polimorfismos que afetam a região de codificação ou domínio extracelular de CD117 em uma porcentagem significativa da população não são atualmente bem conhecidos em indicações não oncológicas. Existem pelo menos quatro isoformas de CD117 que foram identificadas, com o potencial de isoformas adicionais expressadas em células tumorais. Duas das isoformas de CD117 estão localizadas no domínio intracelular da proteína, e duas estão presentes na região de justamembrana externa. As duas isoformas extracelulares, GNNK+ e GNNK-, diferem na presença (GNNK+) ou ausência (GNNK-) de uma sequência de 4 aminoácidos.
Essas isoformas são relatadas como tendo a mesma afinidade para o ligante (SCF), mas foi relatado que a ligação ao ligante para a isoforma GNNK- aumenta a internalização e degradação. A isoforma GNNK+ pode ser usada como um imunógeno de modo a gerar anticorpos capazes de se ligarem a CD117, pois os anticorpos gerados contra essa isoforma incluirão as proteínas GNNK+ e GNNK-. As sequências de aminoácidos das isoformas 1 e 2 de CD117 humano são descritas nas SEQ ID Nos: 145 e 146, respectivamente. Em certas modalidades, anticorpos anti-CD117 humano (hCD117) aqui divulgados são capazes de se ligarem à isoforma 1 e isoforma 2 de CD117 humano.
[0228] Exemplos de anticorpos anti-CD117 são descritos em US 2019/0153114 A1 e US 2019/0144558 A1, o conteúdo de ambos os pedidos é aqui expressamente incorporado por referência em sua totalidade.
[0229] Por exemplo, as sequências de aminoácidos para as várias regiões de ligação de anticorpos anti-CD117 Ab54, Ab55, Ab56, Ab57, Ab58, Ab61, Ab66, Ab67, Ab68 e Ab69 são descritas na Tabela 3. Estão incluídos na presente divulgação anticorpos anti-CD117 humanos compreendendo as CDRs conforme apresentadas na Tabela 3, bem como anticorpos anti-CD117 humanos compreendendo as regiões variáveis apresentadas na Tabela 3.
[0230] Em uma modalidade, a presente divulgação fornece um anticorpo anti- CD117 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreendendo as regiões de ligação, e.g., CDRs, regiões variáveis correspondentes àquelas do Anticorpo 55. A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada (VH) do Anticorpo 55 (i.e., Ab55) é apresentada na SEQ ID NO: 19 (ver Tabela 3). As sequências de aminoácidos do domínio da CDR de VH do Anticorpo 55 são apresentadas na SEQ ID NO: 21 (CDR1 de VH); SEQ ID NO: 22 (CDR2 de VH) e SEQ ID NO: 23 (CDR3 de VH). A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve (VL) do Anticorpo 55 é descrita na SEQ ID NO: 20 (ver Tabela 3). As sequências de aminoácidos do domínio da CDR de VL do Anticorpo 55 são apresentadas na SEQ ID NO: 24 (CDR1 de VL); SEQ ID NO: 25 (CDR2 de VL) e SEQ ID NO: 26 (CDR3 de VL). A região constante de cadeia pesada do Anticorpo 55 é apresentada na SEQ ID NO: 122. A região constante de cadeia leve do Anticorpo 55 é apresentada na SEQ ID NO: 121.
Assim, em certas modalidades, um anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende um conjunto de CDR de cadeia pesada variável (CDR1, CDR2 e CDR3) como apresentado nas SEQ ID Nos: 21, 22 e 23, e um conjunto de CDR de região variável de cadeia leve como apresentado nas SEQ ID Nos: 24, 25 e 26. Em outras modalidades, um anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma cadeia leve variável compreendendo os resíduos de aminoácido apresentados na SEQ ID NO: 20, e uma região variável de cadeia pesada como apresentada na SEQ ID NO: 19.
[0231] Em uma modalidade, a presente divulgação fornece um anticorpo anti- CD117 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreendendo as regiões de ligação, e.g., CDRs, regiões variáveis correspondentes àquelas do Anticorpo 54. A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada (VH) do Anticorpo 54 (i.e., Ab54) é apresentada na SEQ ID NO: 29 (ver Tabela 3). As sequências de aminoácidos do domínio da CDR de VH do Anticorpo 54 são apresentadas na SEQ ID NO: 31 (CDR1 de VH); SEQ ID NO: 32 (CDR2 de VH) e SEQ ID NO: 33 (CDR3 de VH). A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve (VL) do Anticorpo 54 é descrita na SEQ ID NO: 30 (ver Tabela 3). As sequências de aminoácidos do domínio da CDR de VL do Anticorpo 54 são apresentadas na SEQ ID NO: 34 (CDR1 de VL); SEQ ID NO: 35 (CDR2 de VL) e SEQ ID NO: 36 (CDR3 de VL). A região constante de cadeia pesada do Anticorpo 54 é apresentada na SEQ ID NO: 122. A região constante de cadeia leve do Anticorpo 54 é apresentada na SEQ ID NO: 121.
Assim, em certas modalidades, um anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende um conjunto de CDR de cadeia pesada variável
(CDR1, CDR2 e CDR3) como apresentado nas SEQ ID Nos: 31, 32 e 33, e um conjunto de CDR de região variável de cadeia leve como apresentado nas SEQ ID Nos: 34, 35 e 36. Em outras modalidades, um anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma cadeia leve variável compreendendo os resíduos de aminoácido apresentados na SEQ ID NO: 30, e uma região variável de cadeia pesada como apresentada na SEQ ID NO: 29.
[0232] Em uma modalidade, a presente divulgação fornece um anticorpo anti- CD117 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreendendo as regiões de ligação, e.g., CDRs, regiões variáveis correspondentes àquelas do Anticorpo 56. A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada (VH) do Anticorpo 56 (i.e., Ab56) é apresentada na SEQ ID NO: 39 (ver Tabela 3). As sequências de aminoácidos do domínio da CDR de VH do Anticorpo 56 são apresentadas na SEQ ID NO: 41 (CDR1 de VH); SEQ ID NO: 42 (CDR2 de VH) e SEQ ID NO: 43 (CDR3 de VH). A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve (VL) do Anticorpo 56 é descrita na SEQ ID NO: 40 (ver Tabela 3). As sequências de aminoácidos do domínio da CDR de VL do Anticorpo 56 são apresentadas na SEQ ID NO: 44 (CDR1 de VL); SEQ ID NO: 45 (CDR2 de VL) e SEQ ID NO: 46 (CDR3 de VL). A região constante de cadeia pesada do Anticorpo 56 é apresentada na SEQ ID NO: 122. A região constante de cadeia leve do Anticorpo 56 é apresentada na SEQ ID NO: 121.
Assim, em certas modalidades, um anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende um conjunto de CDR de cadeia pesada variável (CDR1, CDR2 e CDR3) como apresentado nas SEQ ID Nos: 41, 42 e 43, e um conjunto de CDR de região variável de cadeia leve como apresentado nas SEQ ID Nos: 44, 45 e 46. Em outras modalidades, um anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma cadeia leve variável compreendendo os resíduos de aminoácido apresentados na SEQ ID NO: 40, e uma região variável de cadeia pesada como apresentada na SEQ ID NO: 39.
[0233] Em uma modalidade, a presente divulgação fornece um anticorpo anti- CD117 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreendendo as regiões de ligação, e.g., CDRs, regiões variáveis correspondentes àquelas do Anticorpo 57. A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada (VH) do Anticorpo 57 (i.e., Ab57) é apresentada na SEQ ID NO: 49 (ver Tabela 3). As sequências de aminoácidos do domínio da CDR de VH do Anticorpo 57 são apresentadas na SEQ ID NO: 51 (CDR1 de VH); SEQ ID NO: 52 (CDR2 de VH) e SEQ ID NO: 53 (CDR3 de VH). A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve (VL) do Anticorpo 57 é descrita na SEQ ID NO: 50 (ver Tabela 3). As sequências de aminoácidos do domínio da CDR de VL do Anticorpo 57 são apresentadas na SEQ ID NO: 54 (CDR1 de VL); SEQ ID NO: 55 (CDR2 de VL) e SEQ ID NO: 56 (CDR3 de VL). A região constante de cadeia pesada do Anticorpo 57 é apresentada na SEQ ID NO: 122. A região constante de cadeia leve do Anticorpo 57 é apresentada na SEQ ID NO: 121.
Assim, em certas modalidades, um anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende um conjunto de CDR de cadeia pesada variável (CDR1, CDR2 e CDR3) como apresentado nas SEQ ID Nos: 51, 52 e 53, e um conjunto de CDR de região variável de cadeia leve como apresentado nas SEQ ID Nos: 54, 55 e 56. Em outras modalidades, um anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma cadeia leve variável compreendendo os resíduos de aminoácido apresentados na SEQ ID NO: 50, e uma região variável de cadeia pesada como apresentada na SEQ ID NO: 49.
[0234] Em uma modalidade, a presente divulgação fornece um anticorpo anti- CD117 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreendendo as regiões de ligação, e.g., CDRs, regiões variáveis correspondentes àquelas do Anticorpo 58. A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada (VH) do Anticorpo 58 (i.e., Ab58) é apresentada na SEQ ID NO: 59 (ver Tabela 3). As sequências de aminoácidos do domínio da CDR de VH do Anticorpo 58 são apresentadas na SEQ
ID NO: 61 (CDR1 de VH); SEQ ID NO: 62 (CDR2 de VH) e SEQ ID NO: 63 (CDR3 de VH). A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve (VL) do Anticorpo 58 é descrita na SEQ ID NO: 60 (ver Tabela 3). As sequências de aminoácidos do domínio da CDR de VL do Anticorpo 58 são apresentadas na SEQ ID NO: 64 (CDR1 de VL); SEQ ID NO: 65 (CDR2 de VL) e SEQ ID NO: 66 (CDR3 de VL). A região constante de cadeia pesada do Anticorpo 58 é apresentada na SEQ ID NO: 122. A região constante de cadeia leve do Anticorpo 58 é apresentada na SEQ ID NO: 121.
Assim, em certas modalidades, um anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende um conjunto de CDR de cadeia pesada variável (CDR1, CDR2 e CDR3) como apresentado nas SEQ ID Nos: 61, 62 e 63, e um conjunto de CDR de região variável de cadeia leve como apresentado nas SEQ ID Nos: 64, 65 e 66. Em outras modalidades, um anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma cadeia leve variável compreendendo os resíduos de aminoácido apresentados na SEQ ID NO: 60, e uma região variável de cadeia pesada como apresentada na SEQ ID NO: 59.
[0235] Em uma modalidade, a presente divulgação fornece um anticorpo anti- CD117 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreendendo as regiões de ligação, e.g., CDRs, regiões variáveis correspondentes àquelas do Anticorpo 61. A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada (VH) do Anticorpo 61 (i.e., Ab61) é apresentada na SEQ ID NO: 69 (ver Tabela 3). As sequências de aminoácidos do domínio da CDR de VH do Anticorpo 61 são apresentadas na SEQ ID NO: 71 (CDR1 de VH); SEQ ID NO: 72 (CDR2 de VH) e SEQ ID NO: 73 (CDR3 de VH). A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve (VL) do Anticorpo 61 é descrita na SEQ ID NO: 70 (ver Tabela 3). As sequências de aminoácidos do domínio da CDR de VL do Anticorpo 61 são apresentadas na SEQ ID NO: 74 (CDR1 de VL); SEQ ID NO: 75 (CDR2 de VL) e SEQ ID NO: 76 (CDR3 de VL). A região constante de cadeia pesada do Anticorpo 61 é apresentada na SEQ ID NO: 122. A região constante de cadeia leve do Anticorpo 61 é apresentada na SEQ ID NO: 121.
Assim, em certas modalidades, um anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende um conjunto de CDR de cadeia pesada variável (CDR1, CDR2 e CDR3) como apresentado nas SEQ ID Nos: 71, 72 e 73, e um conjunto de CDR de região variável de cadeia leve como apresentado nas SEQ ID Nos: 74, 75 e 76. Em outras modalidades, um anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma cadeia leve variável compreendendo os resíduos de aminoácido apresentados na SEQ ID NO: 70, e uma região variável de cadeia pesada como apresentada na SEQ ID NO: 69.
[0236] Em uma modalidade, a presente divulgação fornece um anticorpo anti- CD117 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreendendo as regiões de ligação, e.g., CDRs, regiões variáveis correspondentes àquelas do Anticorpo 66. A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada (VH) do Anticorpo 66 (i.e., Ab66) é apresentada na SEQ ID NO: 79 (ver Tabela 3). As sequências de aminoácidos do domínio da CDR de VH do Anticorpo 66 são apresentadas na SEQ ID NO: 81 (CDR1 de VH); SEQ ID NO: 82 (CDR2 de VH) e SEQ ID NO: 83 (CDR3 de VH). A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve (VL) do Anticorpo 66 é descrita na SEQ ID NO: 80 (ver Tabela 3). As sequências de aminoácidos do domínio da CDR de VL do Anticorpo 66 são apresentadas na SEQ ID NO: 84 (CDR1 de VL); SEQ ID NO: 85 (CDR2 de VL) e SEQ ID NO: 86 (CDR3 de VL). A região constante de cadeia pesada do Anticorpo 66 é apresentada na SEQ ID NO: 122. A região constante de cadeia leve do Anticorpo 66 é apresentada na SEQ ID NO: 121.
Assim, em certas modalidades, um anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende um conjunto de CDR de cadeia pesada variável (CDR1, CDR2 e CDR3) como apresentado nas SEQ ID Nos: 81, 82 e 83, e um conjunto de CDR de região variável de cadeia leve como apresentado nas SEQ ID Nos: 84, 85 e 86. Em outras modalidades, um anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma cadeia leve variável compreendendo os resíduos de aminoácido apresentados na SEQ ID NO: 80, e uma região variável de cadeia pesada como apresentada na SEQ ID NO: 79.
[0237] Em uma modalidade, a presente divulgação fornece um anticorpo anti- CD117 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreendendo as regiões de ligação, e.g., CDRs, regiões variáveis correspondentes àquelas do Anticorpo 67. A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada (VH) do Anticorpo 67 é apresentada na SEQ ID NO: 9 (ver Tabela 3). As sequências de aminoácidos do domínio da CDR de VH do Anticorpo 67 são apresentadas na SEQ ID NO 11 (CDR1 de VH); SEQ ID NO: 12 (CDR2 de VH) e SEQ ID NO: 13 (CDR3 de VH). A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve (VL) do Anticorpo 67 é descrita na SEQ ID NO: 10 (ver Tabela 3). As sequências de aminoácidos do domínio da CDR de VL do Anticorpo 67 são apresentadas na SEQ ID NO 14 (CDR1 de VL); SEQ ID NO: 15 (CDR2 de VL) e SEQ ID NO: 16 (CDR3 de VL). A cadeia pesada de comprimento total (HC) do Anticorpo 67 é apresentada na SEQ ID NO: 110 e a região constante de cadeia pesada de comprimento total do Anticorpo 67 é apresentada na SEQ ID NO:
122. A cadeia leve (LC) do Anticorpo 67 é apresentada na SEQ ID NO: 109. A região constante de cadeia leve do Anticorpo 67 é apresentada na SEQ ID NO: 121. Assim, em certas modalidades, um anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende um conjunto de CDR de cadeia pesada variável (CDR1, CDR2 e CDR3) como apresentado nas SEQ ID Nos: 11, 12 e 13, e um conjunto de CDR de região variável de cadeia leve como apresentado nas SEQ ID Nos: 14, 15 e
16. Em outras modalidades, um anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma cadeia pesada variável compreendendo os resíduos de aminoácido apresentados na SEQ ID NO: 9, e uma região variável de cadeia pesada como apresentada na SEQ ID NO: 10. Em outras modalidades, um anticorpo anti-CD117 compreende uma cadeia pesada compreendendo a SEQ ID NO:
110 e uma cadeia leve compreendendo a SEQ ID NO: 109.
[0238] Em uma modalidade, a presente divulgação fornece um anticorpo anti- CD117 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreendendo as regiões de ligação, e.g., CDRs, regiões variáveis correspondentes àquelas do Anticorpo 68. A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada (VH) do Anticorpo 68 (i.e., Ab68) é apresentada na SEQ ID NO: 89 (ver Tabela 3). As sequências de aminoácidos do domínio da CDR de VH do Anticorpo 68 são apresentadas na SEQ ID NO: 91 (CDR1 de VH); SEQ ID NO: 92 (CDR2 de VH) e SEQ ID NO: 93 (CDR3 de VH). A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve (VL) do Anticorpo 68 é descrita na SEQ ID NO: 90 (ver Tabela 3). As sequências de aminoácidos do domínio da CDR de VL do Anticorpo 68 são apresentadas na SEQ ID NO: 94 (CDR1 de VL); SEQ ID NO: 95 (CDR2 de VL) e SEQ ID NO: 96 (CDR3 de VL). A região constante de cadeia pesada do Anticorpo 68 é apresentada na SEQ ID NO: 122. A região constante de cadeia leve do Anticorpo 68 é apresentada na SEQ ID NO: 121.
Assim, em certas modalidades, um anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende um conjunto de CDR de cadeia pesada variável (CDR1, CDR2 e CDR3) como apresentado nas SEQ ID Nos: 91, 92 e 93, e um conjunto de CDR de região variável de cadeia leve como apresentado nas SEQ ID Nos: 94, 95 e 96. Em outras modalidades, um anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma cadeia leve variável compreendendo os resíduos de aminoácido apresentados na SEQ ID NO: 90, e uma região variável de cadeia pesada como apresentada na SEQ ID NO: 89.
[0239] Em uma modalidade, a presente divulgação fornece um anticorpo anti- CD117 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreendendo as regiões de ligação, e.g., CDRs, regiões variáveis correspondentes àquelas do Anticorpo 69. A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada (VH) do Anticorpo 69 (i.e., Ab69) é apresentada na SEQ ID NO: 99 (ver Tabela 3). As sequências de aminoácidos do domínio da CDR de VH do Anticorpo 69 são apresentadas na SEQ ID NO: 101 (CDR1 de VH); SEQ ID NO: 102 (CDR2 de VH) e SEQ ID NO: 103 (CDR3 de VH). A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve (VL) do Anticorpo 69 é descrita na SEQ ID NO: 100 (ver Tabela 3). As sequências de aminoácidos do domínio da CDR de VL do Anticorpo 69 são apresentadas na SEQ ID NO: 104 (CDR1 de VL); SEQ ID NO: 105 (CDR2 de VL) e SEQ ID NO: 106 (CDR3 de VL). A região constante de cadeia pesada do Anticorpo 69 é apresentada na SEQ ID NO: 122. A região constante de cadeia leve do Anticorpo 69 é apresentada na SEQ ID NO: 121. Assim, em certas modalidades, um anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende um conjunto de CDR de cadeia pesada variável (CDR1, CDR2 e CDR3) como apresentado nas SEQ ID Nos: 101, 102 e 103, e um conjunto de CDR de região variável de cadeia leve como apresentado nas SEQ ID Nos: 104, 105 e 106. Em outras modalidades, um anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma cadeia leve variável compreendendo os resíduos de aminoácido apresentados na SEQ ID NO: 100, e uma região variável de cadeia pesada como apresentada na SEQ ID NO: 99.
[0240] Alguns dos anticorpos anti-CD117 aqui descritos são anticorpos neutros, em que os anticorpos não inibem substancialmente a atividade de CD117 em uma célula que expressa CD117. Os anticorpos neutros podem ser identificados usando, por exemplo, um ensaio de proliferação celular dependente de fator de células-tronco (SCF) in vitro. Em um ensaio de proliferação celular dependente de SCF, um anticorpo de CD117 neutro não vai matar células CD34+ que são dependentes de SCF para dividir, pois um anticorpo neutro não vai bloquear a ligação do SCF a CD117, tal como para inibir a atividade de CD117.
[0241] Anticorpos neutros podem ser usados para propósitos de diagnóstico, dada a sua capacidade para se ligar especificamente ao CD117 humano, mas também são eficazes para matar células que expressam CD117 quando conjugados com uma citotoxina, tal como aquelas aqui descritas. Tipicamente, os anticorpos usados em conjugados têm atividade agonista ou antagonista que é única para o anticorpo. Aqui descrito, entretanto, é um método único para conjugados, especialmente no contexto em que o conjugado está sendo usado como um agente de condicionamento antes de um transplante de célula-tronco. Embora os anticorpos antagonistas, sozinhos ou em combinação com uma citotoxina como um conjugado, possam ser eficaz dada a capacidade de matar do anticorpo sozinho, além da citotoxina, o condicionamento com um conjugado compreendendo um anticorpo neutro anti-CD117 apresenta uma estratégia alternativa onde a atividade do anticorpo é secundária ao efeito da citotoxina, mas as características de internalização e afinidade, e.g., taxa de dissociação, do anticorpo são importantes para a liberação eficaz da citotoxina.
[0242] Exemplos de anticorpos neutros anti-CD117 incluem Ab58, Ab61, Ab66, Ab67, Ab68 e Ab69. Uma comparação das sequências de aminoácidos das CDRs de CDRs de anticorpos anti-CD117 neutros revela sequências consenso entre os dois grupos de anticorpos neutros identificados. Ab58 e Ab61 compartilham as mesmas CDRs de cadeia leve e CDR3 de HC, com poucas variações na CDR1 de HC e CDR2 DE HC. As sequências consenso para a CDR1 e CDR2 de HC são descritas nas SEQ ID Nos: 133 e 134. Ab66, Ab67, Ab68 e Ab69 também são anticorpos neutros. Embora Ab66, Ab67, Ab68 e Ab69 compartilhem as mesmas CDRs de cadeia leve e a mesma CDR3 de HC, esses anticorpos têm variabilidade dentro das suas regiões de CDR1 de HC e CDR2 de HC. As sequências consenso para esses anticorpos nas regiões de CDR1 de HC e CDR2 de HC são fornecidas nas SEQ ID Nos: 139 e 140, respectivamente.
[0243] Por exemplo, em uma modalidade, a região Fc do Anticorpo 67 é modificada para compreender uma mutação D265C (e.g., SEQ ID NO: 111). Em outra modalidade, a região Fc do Anticorpo 67 é modificada para compreender uma mutação D265C, L234A e L235A (e.g., SEQ ID NO: 112). Ainda em uma outra modalidade, a região Fc do Anticorpo 67 é modificada para compreender uma mutação D265C e H435A (e.g., SEQ ID NO: 113). Em uma outra modalidade, a região Fc do Anticorpo 67 é modificada para compreender uma mutação D265C, L234A, L235A e H435A (e.g., SEQ ID NO: 114).
[0244] Em relação ao Anticorpo 55, em uma modalidade, a região Fc do Anticorpo 55 é modificada para compreender uma mutação D265C (e.g., SEQ ID NO: 117). Em outra modalidade, a região Fc do Anticorpo 55 é modificada para compreender uma mutação D265C, L234A e L235A (e.g., SEQ ID NO: 118). Ainda em uma outra modalidade, a região Fc do Anticorpo 55 é modificada para compreender uma mutação D265C e H435A (e.g., SEQ ID NO: 119). Em uma outra modalidade, a região Fc do Anticorpo 55 é modificada para compreender uma mutação D265C, L234A, L235A e H435A (e.g., SEQ ID NO: 120).
[0245] As regiões Fc de qualquer um de Anticorpo 54, Anticorpo 55, Anticorpo 56, Anticorpo 57, Anticorpo 58, Anticorpo 61, Anticorpo 66, Anticorpo 67, Anticorpo 68 ou Anticorpo 69 podem ser modificadas para compreender uma mutação D265C (e.g., como em SEQ ID NO: 123); uma mutação D265C, L234A e L235A (e.g., como em SEQ ID NO: 124); uma mutação D265C e H435A (e.g., como em SEQ ID NO: 125); ou uma mutação D265C, L234A, L235A e H435A (e.g., como em SEQ ID NO: 126).
[0246] Os anticorpos antagonistas também são fornecidos aqui, incluindo Ab54, Ab55, Ab56 e Ab57. Embora Ab54, Ab55, Ab56 e Ab57 compartilhem as mesmas CDRs de cadeia leve e a mesma CDR3 de HC, esses anticorpos têm variabilidade dentro das suas regiões de CDR1 de HC e CDR2 de HC. As sequências consenso para esses anticorpos nas regiões de CDR1 de HC e CDR2 de HC são fornecidas nas SEQ ID Nos: 127 e 128, respectivamente.
[0247] Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentado na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 147, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 148.
Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 147, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 149. Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 147, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 150. Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 147, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 151. Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 147, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 152. Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 147, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 153. Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 147, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 154. Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 147, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 155. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 147, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 156. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 147, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 157. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 147, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 158. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 147, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 159. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 147, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 160. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 147, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 161. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 147, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 162. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 147, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 163. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 164, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 165. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 166, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 167. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 168, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 169. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 170, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 171. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 172, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 173. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 174, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 175. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 176, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 177. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 178, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 179. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 180, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 181. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 172, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 182. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 183, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 184. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 185, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 186. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 187, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 188. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 189, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 190. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 191, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 192. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 193, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 194. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 195, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 196. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 197, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 198. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 199, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 200. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 201, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 190. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 202, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 203. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 204, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 205. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 206, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 207. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 208, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 209. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 210, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 211. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 212, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 213. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 214, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 215. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 216, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 217. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 218, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 219. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 220, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 221. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 222, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 223. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 224, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 225. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 226, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 227. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 228. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 229. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 230. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 231. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 232. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 233. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 234. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 235. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 236. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 237. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 237. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 243, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 244. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 251, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 252. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 243, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 256. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 259, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 256. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 260, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 252. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 238, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 239. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 147, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 239. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 147, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 240. Em uma modalidade,
o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 238, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 241. Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD117, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 238, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 242.
[0248] Como descrito abaixo, uma triagem de biblioteca de exibição de fago de scFV de anticorpos humanos foi realizada para identificar anticorpos anti-CD117 inovadores, e fragmentos dos mesmos, tendo uso terapêutico. Os anticorpos 85 (Ab85), 86 (Ab86), 87 (Ab87), 88 (Ab88) e 89 (Ab89), entre outros, foram identificados nessa triagem.
[0249] A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada (VH) de Ab85 é fornecida abaixo como SEQ ID NO: 243. As sequências de aminoácidos da CDR de VH de Ab85 estão sublinhadas abaixo e são como se segue: NYWIG (CDR1 de VH; SEQ ID NO: 245); IINPRDSDTRYRPSFQG (CDR2 de VH; SEQ ID NO: 246); e HGRGYEGYEGAFDI (CDR3 de VH; SEQ ID NO: 247).
Sequência de VH de Ab85
[0250] EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTNYWIGWVRQMPGKGL
EWMAIINPRDSDTRYRPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARHGR GYEGYEGAFDIWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 243)
[0251] A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve (VL) de Ab85 é fornecida abaixo como SEQ ID NO 244. As sequências de aminoácidos da CDR de VL de Ab85 estão sublinhadas abaixo e são como se segue: RSSQGIRSDLG (CDR1 de VL; SEQ ID NO: 248); DASNLET (CDR2 de VL; SEQ ID NO: 249); e QQANGFPLT (CDR3 de VL; SEQ ID NO: 250).
Sequência de VL de Ab85
[0252] DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQGIRSDLGWYQQKPGKAPKL
LIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANGFPLTFGGGTK VEIK (SEQ ID NO: 244) Anticorpo HC-86/LC-86 (Ab86)
[0253] A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada (VH) de Ab86 é fornecida abaixo como SEQ ID NO: 251. As sequências de aminoácidos da CDR de VH Ab86 estão sublinhadas abaixo e são como se segue: NYWIG (CDR1 de VH; SEQ ID NO: 245); IIYPGDSDIRYSPSLQG (CDR2 de VH; SEQ ID NO: 253); e HGRGYNGYEGAFDI (CDR3 de VH; SEQ ID NO: 3).
Sequência de VH de Ab86
[0254] EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTNYWIGWVRQMPGKGL
EWMGIIYPGDSDIRYSPSLQGQVTISVDTSTSTAYLQWNSLKPSDTAMYYCARHGR GYNGYEGAFDIWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 251)
[0255] A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve (VL) de Ab86 é fornecida abaixo como SEQ ID NO 252. As sequências de aminoácidos da CDR de VL de Ab86 estão sublinhadas abaixo e são como se segue: RASQGIGDSLA (CDR1 de VL; SEQ ID NO: 254); DASNLET (CDR2 de VL; SEQ ID NO: 249); e QQLNGYPIT (CDR3 de VL; SEQ ID NO: 255).
Sequência de VL de Ab86
[0256] DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIGDSLAWYQQKPGKAPKL
LIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNGYPITFGQGTK VEIK (SEQ ID NO: 252) Anticorpo HC-87/LC-87 (Ab87)
[0257] A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada (VH) de Ab87 é fornecida abaixo como SEQ ID NO: 243. As sequências de aminoácidos da CDR de VH de Ab87 estão sublinhadas abaixo e são como se segue: NYWIG
(CDR1 de VH; SEQ ID NO: 245); IINPRDSDTRYRPSFQG (CDR2 de VH; SEQ ID NO: 246); e HGRGYEGYEGAFDI (CDR3 de VH; SEQ ID NO: 247).
Sequência de VH de Ab87
[0258] EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTNYWIGWVRQMPGKGL
EWMAIINPRDSDTRYRPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARHGR GYEGYEGAFDIWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 243)
[0259] A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve (VL) de Ab87 é fornecida abaixo como SEQ ID NO 256. As sequências de aminoácidos da CDR de VL de Ab87 estão sublinhadas abaixo e são como se segue: RASQGIRNDLG (CDR1 de VL; SEQ ID NO: 257); DASSLES (CDR2 de VL; SEQ ID NO: 5); e QQLNGYPIT (CDR3 de VL; SEQ ID NO: 255).
Sequência de VL de Ab87
[0260] DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKL
LIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNGYPITFGQGTK VEIK (SEQ ID NO: 256) Anticorpo HC-88/LC-88 (Ab88)
[0261] A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada (VH) de Ab88 é fornecida abaixo como SEQ ID NO: 258. As sequências de aminoácidos da CDR de VH de Ab88 estão sublinhadas abaixo e são como se segue: NYWIG (CDR1 de VH; SEQ ID NO: 245); IIYPGDSLTRYSPSFQG (CDR2 de VH; SEQ ID NO: 259); e HGRGYNGYEGAFDI (CDR3 de VH; SEQ ID NO: 3).
Sequência de VH de Ab88
[0262] EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTNYWIGWVRQMPGKGL
EWMGIIYPGDSLTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARHGR GYNGYEGAFDIWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 258)
[0263] A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve (VL) de Ab88 é fornecida abaixo como SEQ ID NO: 256. As sequências de aminoácidos da
CDR de VL de Ab88 estão sublinhadas abaixo e são como se segue: RASQGIRNDLG (CDR1 de VL; SEQ ID NO: 257); DASSLES (CDR2 de VL; SEQ ID NO: 5); e QQLNGYPIT (CDR3 de VL; SEQ ID NO: 255).
Sequência de VL de Ab88
[0264] DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKL
LIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNGYPITFGQGTK VEIK (SEQ ID NO: 256) Anticorpo HC-89/LC-89 (Ab89)
[0265] A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada (VH) de Ab89 é fornecida abaixo como SEQ ID NO: 260. As sequências de aminoácidos da CDR de VH de Ab89 estão sublinhadas abaixo e são como se segue: NYWIG (CDR1 de VH; SEQ ID NO: 245); IIYPGDSDTRYSPSFQG (CDR2 de VH; SEQ ID NO: 2); e HGRGYNGYEGAFDI (CDR3 de VH; SEQ ID NO: 3).
Sequência de VH de Ab89
[0266] EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTNYWIGWVRQMPGKGL
EWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARHGR GYNGYEGAFDIWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 260)
[0267] A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve (VL) de Ab89 é fornecida abaixo como SEQ ID NO: 252. As sequências de aminoácidos da CDR de VL de Ab89 estão sublinhadas abaixo e são como se segue: RASQGIGDSLA (CDR1 de VL; SEQ ID NO: 254); DASNLET (CDR2 de VL; SEQ ID NO: 249); e QQLNGYPIT (CDR3 de VL; SEQ ID NO: 255).
Sequência de VL de Ab89
[0268] DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIGDSLAWYQQKPGKAPKL
LIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNGYPITFGQGTK VEIK (SEQ ID NO: 252) Anticorpo HC-249/LC-249 (Ab249)
[0269] A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada (VH) de Ab249 é fornecida abaixo como SEQ ID NO: 238. As sequências de aminoácidos da CDR de VH de Ab249 estão sublinhadas abaixo e são como se segue: TSWIG (CDR1 de VH; SEQ ID NO: 286); IIYPGDSDTRYSPSFQG (CDR2 de VH; SEQ ID NO: 2); e HGLGYNGYEGAFDI (CDR3 de VH; SEQ ID NO: 287).
Sequência de VH de Ab249
[0270] EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYRFTTSWIGWVRQMPGKGL
EWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARHGL GYNGYEGAFDIWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 238)
[0271] A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve (VL) de Ab249 é fornecida abaixo como SEQ ID NO: 242. As sequências de aminoácidos da CDR de VL de Ab249 estão sublinhadas abaixo e são como se segue: RASQGIGSALA (CDR1 de VL; SEQ ID NO: 288); DASNLET (CDR2 de VL; SEQ ID NO: 249); e QQLNGYPLT (CDR3 de VL; SEQ ID NO: 289).
Sequência de VL de Ab249
[0272] DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIGSALAWYQQKPGKAPKL
LIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNGYPLTFGQGTR LEIK (SEQ ID NO: 242)
[0273] Os anticorpos humanos Ab85 e Ab249 foram derivados do anticorpo CK6, que é um anticorpo antagonista anti-CD117. Ambos os anticorpos têm propriedades melhoradas, e.g., características de ligação melhoradas, em relação ao CK6.
[0274] O CK6 inclui um sítio de desamidação potencial no domínio CDR3 da região variável de cadeia pesada. Embora seja vantajoso remover para futura produção do anticorpo, a posição da asparagina apresenta um desafio significativo. O sítio de desamidação potencial foi removido com êxito, entretanto, na CDR3 de cadeia pesada de Ab85 tal que o anticorpo (tendo CDRs de cadeia leve e pesada de Ab85)
foi capaz de manter uma especificidade de alto nível de afinidade para CD117 humano e a capacidade para internalizar. Além disso, Ab85 tem uma taxa de desativação melhorada em relação ao seu precursor.
[0275] Assim, em certas modalidades, um anticorpo anti-CD117 compreende uma cadeia pesada compreendendo um conjunto de CDR (CDR1, CDR2 e CDR3) como apresentado nas SEQ ID Nos: 245, 246 e 247, e uma cadeia leve compreendendo um conjunto de CDR como apresentado nas SEQ ID Nos: 248, 249 e 1250, internaliza em células que expressam CD117 e tem uma taxa koff de 5 x 10-4 s-1 ou menos conforme medido por BLI.
[0276] Anticorpos anti-CD117 adicionais que podem ser usados em conjunto com os métodos de condicionamento do paciente aqui descritos incluem, por exemplo, anticorpos produzidos e liberados pela ATCC No de Acesso 10716 (depositado como BA7.3C.9), tal como o anticorpo SR-1, que é descrito, por exemplo, na Patente dos EUA No 5.489.516, cuja divulgação é aqui incorporada por referência no que se refere aos anticorpos anti-CD117.
[0277] Em uma modalidade, um anticorpo anti-CD117 aqui descrito compreende uma região Fc compreendendo L235A, L235A, D265C e H435A (índice EU).
[0278] Anticorpos anti-CD117 adicionais que podem ser usados em conjunto com os métodos de condicionamento do paciente aqui descritos incluem aqueles descritos na Patente dos EUA No 7.915.391, que descreve, e.g., anticorpos SR-1 humanizados; Patente dos EUA No 5.808.002, que descreve, e.g., o anticorpo anti- CD117 A3C6E2, bem como aqueles descritos em, por exemplo, WO 2015/050959, que descreve anticorpos anti-CD117 que se ligam a epítopos contendo Pro317, Asn320, Glu329, Val331, Asp332, Lus358, Glue360, Glue376, His378 e/ou Thr380 de CD117 humano; e US 2012/0288506 (também publicado como Patente dos EUA No
8.552.157), que descreve, e.g., o anticorpo anti-CD117 CK6.
[0279] Anticorpos anti-CD117 adicionais e os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que podem ser usados em conjunto com as composições e métodos aqui descritos incluem aqueles descritos em US 2015/0320880, tais como os clones 9P3, NEG024, NEG027, NEG085, NEG086 e 20376.
Anticorpos anti-CD45
[0280] Anticorpos e os fragmentos de ligação ao antígeno capazes de se ligar a CD45 humano (Sequência de Referência de mRNA NCBI: NM_080921.3, Sequência de Referência de Proteína NCBI: NP_563578.2), incluindo aqueles capazes de se ligar à isoforma CD45RO, podem ser usados em conjunto com as composições e métodos aqui divulgados, tal como para promover enxerto de enxerto de células-tronco hematopoiéticas em um paciente em necessidade de terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética. Em uma modalidade, as composições e métodos aqui divulgados incluem um anticorpo anti-CD45 ou ADC que se liga a CD45RO humano como apresentado na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:
290. Os anticorpos que se ligam às várias isoformas de CD45 aqui divulgadas também são considerados para o uso nos métodos e composições aqui divulgados. Múltiplas isoformas de CD45 surgem a partir do splicing alternativo de 34 éxons no transcrito primário. O splicing dos éxons 4, 5, 6 e, potencialmente, 7 dá origem a múltiplas variações de CD45. A expressão seletiva de éxon é observada nas isoformas de CD45 descritas na Tabela 1, abaixo.
Tabela 1. Expressão de éxon em várias isoformas de CD45 Isoforma de CD45 Expressão Padrão de Éxon CD45RA (SEQ ID NO: 291) Expressa éxon 4 apenas CD45RB (SEQ ID NO: 292) Expressa éxon 5 apenas CD45RC (SEQ ID NO: 293) Expressa éxon 6 apenas CD45RO (SEQ ID NO: 290) Não expressa éxons 4-6
[0281] O splicing alternativo pode resultar em éxons individuais ou combinações de éxons expressados em várias isoformas da proteína CD45 (por exemplo, CD45RA, CD45RAB, CD45RABC). Ao contrário, CD45RO carece da expressão de éxons 4 a 6 e é gerado a partir de uma combinação dos éxons 1 a 3 e 7 a 34. Existe evidências de que o éxon 7 também pode ser excluído da proteína, resultando no splicing dos éxons 1 a 3 e 8 a 34. Essa proteína, designado E3-8, foi detectada ao nível do mRNA, mas não foi atualmente identificada por citometria de fluxo.
[0282] CD45RO é atualmente a única isoforma de CD45 conhecida expressada em células-tronco hematopoiéticas. CD45RA e CD45RABC não foram detectados ou estão excluídos do fenótipo de células-tronco hematopoiéticas. Existe evidências de estudos conduzidos em camundongos que a CD45RB é expressada em células-tronco hematopoiéticas fetais, mas não está presente em células-tronco hematopoiéticas da medula óssea de adultos. Notavelmente, a CD45RC tem uma alta taxa de polimorfismo no éxon 6 encontrado dentro das populações asiáticas (um polimorfismo no éxon 6 em CD45RC é encontrado em aproximadamente 25 % da população japonesa). Esse polimorfismo leva à alta expressão de CD45RO e níveis diminuídos de CD45RA, CD45RB e CD45RC. Além disso, as variantes de CD45RA (tais como CD45RAB e CD45RAC) exibem um polimorfismo no éxon 4 que foi associado com doenças autoimunes.
[0283] A presença de CD45RO em células-tronco hematopoiéticas e sua expressão comparativamente limitada em outras células imunes (tais como subconjuntos de linfócitos T e B e vários mielócitos) torna a CD45RO um alvo particularmente adequado para a terapia de condicionamento para pacientes em necessidade de um transplante de células-tronco hematopoiéticas. Como a CD45RO apenas carece da expressão dos éxons 4, 5 e 6, seu uso como um imunógeno permite a triagem de pan Abs CD45 e anticorpos específicos de CD45RO.
[0284] Anticorpos anti-CD45 que podem ser usados em conjunto com os métodos de condicionamento do paciente aqui descritos incluem anticorpos anti-
CD45, e porções de ligação ao antígeno dos mesmos. As porções de ligação ao antígeno de anticorpos são bem conhecidos na técnica, e podem ser prontamente construídas com base na região de ligação ao antígeno do anticorpo. Em modalidades exemplificativas, o anticorpo anti-CD45 usado em conjunto com os métodos de condicionamento aqui descritos pode ser um anticorpo monoclonal ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo policlonal ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo humanizado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo completamente humano ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo quimérico ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo biespecífico ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um domínio de imunoglobulina variável duplo, uma molécula Fv de cadeia única (scFv), um diabody, um triabody, um nanobody, um esqueleto de proteína semelhante a anticorpo, um fragmento Fv, um fragmento Fab, uma molécula F(ab’)2 ou um di- scFv em tandem. Anticorpos anti-CD45 exemplificativos que podem ser usados no todo ou em parte dos ADCs ou métodos aqui descritos são fornecidos abaixo.
[0285] Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD45 é ou é derivado de clone HI30, que é comercialmente disponível da BIOLEGEND® (San Diego, CA), ou uma variante humanizada do mesmo. A humanização de anticorpos pode ser realizada pela substituição de resíduos de estrutura e resíduos da região constante de um anticorpo não humano com aqueles de um anticorpo humano linhagem germinativa de acordo com os procedimentos conhecidos na técnica (como descrito, por exemplo, no exemplo 7, abaixo). Anticorpos anti-CD45 adicionais que podem ser usados em conjunto com os métodos aqui descritos incluem o anticorpos anti-CD45 ab10558, EP322Y, MEM-28, ab10559, 0.N,125, F10-89-4, HIe-1, 2B11, YTH24,5, PD7/26/16, F10-89-4, 1B7, ab154885, B-A11, S1007 fosforecente, ab170444, EP350, Y321, GA90, D3/9, X1 6/99 e LT45, que são comercialmente disponíveis na ABCAM® (Cambridge, MA), bem como variantes humanizadas dos mesmos. Outros anticorpos anti-CD45 que podem ser usados em conjunto com os procedimentos de condicionamento do paciente aqui descritos incluem anticorpo anti-CD45 HPA000440, que é comercialmente disponível da SIGMA-ALDRICH® (St. Louis, MO) e variantes humanizadas do mesmo. Anticorpos anti-CD45 adicionais que podem ser usados em conjunto com os métodos de condicionamento do paciente aqui descritos incluem anticorpo monoclonal BC8 murino, que é descrito, por exemplo, em Matthews et al., Blood 78: 1864-1874, 1991, cuja divulgação é aqui incorporada por referência no que se refere aos anticorpos anti-CD45, bem como variantes humanizadas dos mesmos.
Outros anticorpos anti-CD45 que podem ser usados em conjunto com os métodos aqui descritos incluem o anticorpo monoclonal YAML568, que é descrito, por exemplo, em Glatting et al., J. Nucl. Med. 8: 1335-1341, 2006, cuja divulgação é aqui incorporada por referência no que se refere aos anticorpos anti-CD45, bem como variantes humanizadas do mesmo. Anticorpos anti-CD45 adicionais que podem ser usados em conjunto com os procedimentos de condicionamento do paciente aqui descritos incluem anticorpos monoclonais YTH54.12 e YTH25.4, que são descritos, por exemplo, em Brenner et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 996: 80-88, 2003, cuja divulgação é aqui incorporada por referência no que se refere aos anticorpos anti-CD45, bem como variantes humanizadas dos mesmos. Anticorpos anti-CD45 adicionais para o uso com os métodos de condicionamento do paciente aqui descritos incluem UCHL1, 2H4, SN130, MD4,3, MBI e MT2, que são descritos, por exemplo, em Brown et al., Immunology 64: 331-336, 1998, cuja divulgação é aqui incorporada por referência no que se refere aos anticorpos anti-CD45, bem como variantes humanizadas dos mesmos. Anticorpos anti-CD45 adicionais que podem ser usados em conjunto com os métodos aqui descritos incluem aqueles produzidos e liberados pela American Type Culture Collection (ATCC) Nos de Acesso RA3-6132, RA3-2C2 e TIB122, bem como anticorpos monoclonais C363.16A e 13/2, que são descritos, por exemplo, em Johnson et al., J. Exp. Med. 169: 1179-1184, 1989, cuja divulgação é aqui incorporada por referência no que se refere aos anticorpos anti-CD45, bem como variantes humanizadas dos mesmos. Outros anticorpos anti-CD45 que podem ser usados em conjunto com os métodos de condicionamento do paciente aqui descritos incluem os anticorpos monoclonais AHN-12,1, AHN-12, AHN-12,2, AHN-12,3, AHN-12,4, HLe-1 e KC56(T200), que são descritos, por exemplo, em Harvath et al., J. Immunol. 146: 949-957, 1991, cuja divulgação é aqui incorporada por referência no que se refere aos anticorpos anti-CD45, bem como variantes humanizadas dos mesmos.
[0286] Anticorpos anti-CD45 adicionais que podem ser usados em conjunto com os métodos de condicionamento do paciente aqui descritos incluem aqueles descritos, por exemplo, nas Patentes dos EUA Nos 7.265.212 (que descreve, e.g., anticorpos anti-CD45 39E11, 16C9 e 1G10, dentre outros clones); 7.160.987 (que descreve, e.g., anticorpos anti-CD45 produzidos e liberados pela ATCC No de Acesso HB-11873, tal como o anticorpo monoclonal 6G3); e 6.099.838 (que descreve, e.g., anticorpo anti-CD45 MT3, bem como anticorpos produzidos e liberados pela ATCC Nos de Acesso HB220 (também designado MB23G2) e HB223), bem como US 2004/0096901 e US 2008/0003224 (que descreve, e.g., anticorpos anti-CD45 produzidos e liberados pela ATCC No de Acesso PTA-7339, tal como o anticorpo monoclonal 17.1), as divulgações de cada uma das quais são aqui incorporadas por referência, uma vez que se referem aos anticorpos anti-CD45.
[0287] Outros anticorpos anti-CD45 que podem ser usados em conjunto com os métodos de condicionamento do paciente aqui descritos incluem anticorpos produzidos e liberados pela ATCC Nos de Acesso MB4B4, MB23G2, 14.8, GAP 8.3, 74-9-3, I/24.D6, 9.4, 4B2, M1/9.3.4.HL.2, bem como variantes humanizadas e/ou maturadas por afinidade dos mesmos. A maturação por afinidade pode ser realizada, por exemplo, usando técnicas de exibição in vitro aqui descritas ou conhecidas na técnica, tais como exibição de fago.
[0288] Anticorpos anti-CD45 adicionais que podem ser usados em conjunto com os métodos de condicionamento do paciente aqui descritos incluem anticorpo anti-CD45 T29/33, que é descrito, por exemplo, em Morikawa et al., Int. J. Hematol.
54: 495-504, 1991, cuja divulgação é aqui incorporada por referência no que se refere aos anticorpos anti-CD45.
[0289] Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD45 é selecionado de apamistamabe (também conhecido 90Y-BC8, Iomab-B, BC8; como descrito em, e.g., US20170326259, WO2017155937 e Orozco et al. Blood. 127.3 (2016): 352-359.) ou BC8-B10 (como descrito, e.g., em Li et al. PloS one 13.10 (2018): e0205135.), cada um dos quais é incorporado por referência. Outros anticorpos anti-CD45 foram descritos, por exemplo, em WO2003/048327, WO2016/016442, US2017/0226209, US2016/0152733, US9.701.756; US2011/0076270 ou US7.825.222, cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade.
[0290] Por exemplo, em uma modalidade, o anticorpo anti-CD45 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreendendo as regiões de ligação, e.g., CDRs, regiões variáveis, correspondentes àquelas do apamistamabe. A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada (VH) de apamistamabe é apresentada na SEQ ID NO: 296 (ver Tabela 3). A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve (VL) de apamistamabe é descrita na SEQ ID NO: 297 (ver Tabela 3). Em outras modalidades, um anticorpo anti-CD45, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma cadeia pesada variável compreendendo os resíduos de aminoácido apresentados na SEQ ID NO: 296, e uma região variável de cadeia leve como apresentada na SEQ ID NO: 297. Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD45 compreende uma cadeia pesada compreendendo uma CDR1, CDR2 e CDR3 de apamistamabe, e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma CDR1, CDR2 e CDR3 de apamistamabe.
[0291] Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD45 compreende uma cadeia pesada de um anticorpo anti-CD45 aqui descrito, e uma região variável de cadeia leve de anticorpo anti-CD45 aqui descrito. Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD45 compreende uma cadeia pesada compreendendo uma CDR1, CDR2 e CDR3 de um anticorpo anti-CD45 aqui descrito, e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma CDR1, CDR2 e CDR3 de um anticorpo anti-CD45 aqui descrito.
[0292] Em outra modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 95 % de identidade com um anticorpo anti-CD45 aqui, e.g., pelo menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade com um anticorpo anti-CD45 aqui. Em certas modalidades, um anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada (HC) modificada compreendendo um domínio variável de HC de um anticorpo anti-CD45 aqui, ou uma variante dos mesmos, cuja variante (i) difere do anticorpo anti-CD45 em 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições, adições ou deleções de aminoácidos; (ii) difere do anticorpo anti-CD45 em no máximo 5, 4, 3, 2 ou 1 substituições, adições ou deleções de aminoácidos; (iii) difere do anticorpo anti-CD45 em 1 a 5, 1 a 3, 1 a 2, 2 a 5 ou 3 a 5 substituições, adições ou deleções de aminoácidos e/ou (iv) compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % idêntica ao anticorpo anti-CD45, em que em qualquer um de (i)-(iv), uma substituição de aminoácido pode ser uma substituição conservadora de aminoácido ou uma substituição não conservadora de aminoácido; e em que a região variável de cadeia pesada modificada pode ter uma atividade biológica intensificada em relação à região variável de cadeia pesada do anticorpo anti-CD45, enquanto mantém a especificidade de ligação a CD45 do anticorpo.
[0293] Os anticorpos e os fragmentos de ligação ao antígeno que podem ser usados em conjunto com as composições e métodos aqui descritos incluem os anticorpos acima descritos e os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos, bem como variantes humanizadas daqueles anticorpos não humanos e os fragmentos de ligação ao antígeno descritos acima e anticorpos ou os fragmentos de ligação ao antígeno que se ligam ao mesmo epítopo que aqueles descritos acima, conforme avaliado, por exemplo, por meio de um ensaio de ligação competitiva a CD45.
Métodos de Identificação de Anticorpos
[0294] Métodos para triagem de alto rendimento de anticorpo ou bibliotecas de fragmentos de anticorpos para moléculas capazes de se ligarem a um antígeno (e.g., CD117 (e.g., CD117 GNNK+) ou CD45) expressado por cepa hematopoiética a ser usada para identificar e a afinidade de anticorpos maduros úteis para tratar cânceres, doenças autoimunes e condicionamento de um paciente (e.g., um paciente humano) em necessidade de terapia de célula-tronco hematopoiética como aqui descrita. Tais métodos incluem técnicas de exibição in vitro conhecidas na técnica, tais como exibição de fago, exibição bacteriana, exibição de levedura, exibição de célula de mamífero, exibição de ribossoma, exibição de mRNA e exibição de CDNA, entre outros. O uso de exibição de fago para isolar anticorpos, ou os fragmentos de ligação ao antígeno, que se ligam a moléculas biologicamente relevantes foi revisado, por exemplo, em Felici et al., Biotechnol. Annual Rev. 1: 149-183, 1995; Katz, Annual Rev. Biophys. Biomol. Struct. 26: 27-45, 1997; e Hoogenboom et al., Immunotechnology 4: 1-20, 1998, as divulgações de cada uma das quais são aqui incorporadas por referência, uma vez que dizem respeito às técnicas de exibição in vitro. Bibliotecas de peptídeos combinatórios randomizados foram construídas para selecionar polipeptídeos que se ligam aos antígenos da superfície celular como descrito em Kay, Perspect. Drug Discovery Des. 2: 251-268, 1995 e Kay et al., Mol.
Divers. 1: 139-140, 1996, as divulgações de cada uma das quais são aqui incorporadas por referência, na medida em que se referem à descoberta de moléculas de ligação ao antígeno. Proteínas, tais como proteínas multiméricas, foram exibidas com êxito em fagos como moléculas funcionais (ver, por exemplo, EP 0349578; EP 4527839; e EP 0589877, bem como Chiswell e McCafferty, Trends Biotechnol. 10: 80-
4 1992, as divulgações de cada uma das quais são aqui incorporadas por referência, na medida em que se referem ao uso de técnicas de exibição in vitro para a descoberta de moléculas de ligação ao antígeno. Além disso, fragmentos funcionais de anticorpo, tais como fragmentos Fab e scFv, foram expressados em formatos de exibição in vitro (ver, por exemplo, McCafferty et al., Nature 348: 552-554, 1990; Barbas et al., Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 88: 7978-7982, 1991; e Clackson et al., Nature 352: 624-628, 1991, as divulgações de cada uma das quais são aqui incorporadas por referência, uma vez que se referem a plataformas de exibição in vitro para a descoberta de moléculas de ligação ao antígeno). Anticorpos humanos anti-HC (e.g., anticorpo anti- CD117 ou anticorpo anti-CD45) também podem ser gerados, por exemplo, no HuMAb- Mouse® ou XenoMouse™. Essas técnicas, entre outras, podem ser usadas para identificar e melhorar a afinidade de anticorpos, anticorpos ou fragmentos, capazes de se ligarem a um antígeno (e.g., CD117 (e.g., CD117 GNNK+) ou CD45) expressado por células-tronco hematopoiéticas que podem, por sua vez, serem usadas para esgotar células-tronco hematopoiéticas endógenas em um paciente (e.g., um paciente humano) em necessidade de terapia de transplante de células-tronco hematopoiéticas.
[0295] Além das técnicas de exibição in vitro, as técnicas de modelagem computacional podem ser usadas para projetar e identificar anticorpos capazes de se ligarem a um antígeno (e.g., CD117 (e.g., CD117 GNNK+) ou CD45) expressado por células-tronco hematopoiéticas, ou fragmentos de anticorpo in silico. Por exemplo, usando técnicas de modelagem computacional, um especialista na técnica pode rastrear bibliotecas de anticorpos, ou fragmentos de anticorpo, in silico para moléculas capazes de se ligarem a epítopos específicos em um antígeno expressado por células-tronco hematopoiéticas (e.g., CD117 (e.g., CD117 GNNK+) ou CD45), tais como epítopos extracelulares do antígeno.
[0296] Técnicas adicionais podem ser usadas para identificar anticorpos, ou fragmentos de anticorpo, capazes de se ligarem a um antígeno expressado por células-tronco hematopoiéticas (e.g., CD117 (e.g., CD117 GNNK+) ou CD45) e que são internalizados pela célula, por exemplo, por endocitose mediada por receptor. Por exemplo, as técnicas de exibição in vitro descritas acima podem ser adaptadas para rastrear anticorpos, ou fragmentos de anticorpo, que se ligam a um antígeno expressado por células-tronco hematopoiéticas (e.g., CD117 (e.g., CD117 GNNK+) ou CD45) e que são subsequentemente internalizados. A exibição de fago representa uma técnica que pode ser usada em conjunto com este paradigma de triagem. Para identificar um anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45) ou fragmento de anticorpo, e são subsequentemente internalizados por células-tronco hematopoiéticas, um especialista na técnica pode usar as técnicas de exibição de fagos descritas, por exemplo, em Williams et al., Leukemia 19: 1432-1438, 2005, cuja divulgação é aqui incorporada por referência em sua totalidade. Por exemplo, usando métodos de mutagênese conhecidos na técnica, podem ser produzidas bibliotecas de fago recombinantes que codificam anticorpos, fragmentos de anticorpo, tais como 10 fragmento scFvs, fragmentos Fab, diabodies, triabodies e domínios Fn3, entre outros, ou ligantes que contêm cassettes de aminoácidos randomizados (e.g., em uma ou mais, ou todas, as CDRs ou regiões equivalentes ou um anticorpo ou fragmento de anticorpo). As regiões de estrutura, dobradiça, domínio Fc e outras regiões dos anticorpos ou fragmentos de anticorpo podem ser projetadas de tal modo que que não sejam imunogênicas em humanos, por exemplo, em virtude de terem sequências de anticorpo de linhagem germinativa humana ou sequências que exibem apenas variações menores em relação aos anticorpos de linhagem germinativa humana.
[0297] Usando as técnicas de exibição de fagos aqui descritas ou conhecidas na técnica, a biblioteca de fagos contendo anticorpos randomizados, ou fragmentos de anticorpo, ligados covalentemente às partículas de fago pode ser incubada com um antígeno (e.g., CD117 (e.g., CD117 GNNK+) ou CD45), por exemplo, primeiro incubando a biblioteca de fagos com agentes de bloqueio (tais como, por exemplo, proteína do leite, albumina do soro bovino e/ou IgG de modo a remover o fago que codifica anticorpos, ou fragmentos de anticorpo, que exibem ligação de proteína não específica e fago que codifica anticorpos ou fragmentos dos mesmos que se ligam aos domínios Fc, e então incubar a biblioteca de fagos com uma população de células- tronco hematopoiéticas ou células imunes maduras (e.g., células T), que expressam, e.g., CD117 (e.g., CD117 GNNK+) ou CD45. A biblioteca de fagos pode ser incubada com as células-tronco hematopoiéticas por um tempo suficiente para permitir que os anticorpos anti-HC (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45) ou fragmentos de anticorpo, se liguem ao antígeno cognato da superfície celular (e.g., CD117 (e.g., CD117 GNNK+) ou CD45) e sejam subsequentemente internalizados pelas células- tronco hematopoiéticas (e.g., de 30 minutos a 6 horas a 4 °C, tal como 1 hora a 4 °C).
Fagos contendo anticorpos, ou fragmentos de anticorpo, que não exibem afinidade suficiente para o antígeno (CD117 (e.g., CD117 GNNK+) ou CD45) de modo a permitir a ligação e internalização pelas células-tronco hematopoiéticas, podem subsequentemente serem removidos pela lavagem das células, por exemplo, com 0,1 M de tampão glicina frio (4 °C) em pH 2,8. Fagos ligados a anticorpos, ou fragmentos de anticorpo, que foram internalizados pelas células-tronco hematopoiéticas, podem ser identificados, por exemplo, pela lise das células e recuperação do fago internalizado do meio de cultura de células. O fago pode então ser amplificado em células bacterianas, por exemplo, incubando-se as células bacterianas com o fago recuperado em meio 2xYT usando métodos conhecidos na técnica. O fago recuperado deste meio pode então ser caracterizado, por exemplo, determinando a sequência de ácido nucleico dos genes que codificam os anticorpos, ou fragmentos de anticorpo, inseridos dentro do genoma do fago. Os anticorpos codificados, ou fragmentos de anticorpo, podem subsequentemente serem preparados de novo por síntese química (por exemplo, de fragmentos de anticorpo, tais como fragmentos scFv) ou por expressão recombinante (por exemplo, de anticorpos de comprimento total).
[0298] A capacidade de internalização dos anticorpos preparados, ou fragmentos de anticorpo, pode ser avaliada, por exemplo, usando ensaios de internalização de radionuclídeos conhecidos na técnica. Por exemplo, anticorpos anti- HC (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45) ou fragmentos de anticorpo, identificados usando técnicas de exibição in vitro aqui descritas ou conhecidas na técnica podem ser funcionalizados pela incorporação de um isótopo radioativo, tal 18 75 como F, Br, 77Br, 122 I, 123I, 124 I, 125I, 129 I, 131 I, 211 At, 67 Ga, 111 In, 99 Tc, 169 Yb, 186 Re, 64 67 177 77 72 86 90 89 212 213 225 Cu, Cu, Lu, As, As, Y, Y, Zr, Bi, Bi ou Ac. Por exemplo, halogênios radioativos, tais como 18F, 75Br, 77Br, 122I, 123I, 124I, 125I, 129I, 131I, 211At, podem ser incorporados em anticorpos, ou fragmentos de anticorpo, usando microesferas, tais como microesferas de poliestireno, contendo reagentes eletrofílicos de halogênio (e.g., Iodination Beads, Thermo Fisher Scientific, Inc., Cambridge, MA). Anticorpos radiomarcados, fragmentos dos mesmos, ou ADCs podem ser incubados com células- tronco hematopoiéticas, por um tempo suficiente para permitir a internalização (e.g., de 30 minutos a 6 horas a 4 °C, tal como 1 hora a 4 °C). As células podem então ser lavadas para remover anticorpos não internalizados ou fragmentos dos mesmos, (e.g., usando 0,1 M de tampão glicina frio (4 °C) em pH 2,8). Os anticorpos internalizados, ou fragmentos de anticorpo, podem ser identificados detectando-se a radiação emitida (e.g., radiação γ) das células-tronco hematopoiéticas em comparação com a radiação emitida (e.g., radiação γ) do tampão de lavagem recuperado. Os ensaios de internalização anteriores também podem ser usados para caracterizar ADCs.
[0299] Os anticorpos podem ser produzidos usando métodos e composições recombinantes, e.g., como descrito na Pat. dos EUA No 4.816.567. Em uma modalidade, o ácido nucleico isolado que codifica um anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45) aqui descrito é fornecido. Esse ácido nucleico pode codificar uma sequência de aminoácidos compreendendo a VL e/ou uma sequência de aminoácidos compreendendo a VH do anticorpo (e.g., as cadeias leves e/ou pesadas do anticorpo). Em uma outra modalidade, um ou mais vetores (e.g., vetores de expressão) compreendendo tal ácido nucleico são fornecidos. Em uma outra modalidade, uma célula hospedeira compreendendo tal ácido nucleico é fornecida. Em uma modalidade, uma célula hospedeira compreende (e.g., foi transformada com): (1) um vetor compreendendo um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos compreendendo a VL do anticorpo e uma sequência de aminoácidos compreendendo a VH do anticorpo, ou (2) um primeiro vetor compreendendo um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos compreendendo a VL do anticorpo e um segundo vetor compreendendo um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos compreendendo a VH do anticorpo. Em uma modalidade, a célula hospedeira é eucariótica, e.g., uma célula do Ovário de Hamster Chinês (CHO) ou célula linfoide (e.g., célula Y0, NS0, Sp20). Em uma modalidade, um método de produção de um anticorpo anti-CLL-1 é fornecido, em que o método compreende cultivar uma célula hospedeira compreendendo um ácido nucleico que codifica o anticorpo, conforme fornecido acima, sob condições adequadas para a expressão do anticorpo e, opcionalmente, recuperar o anticorpo da célula hospedeira (ou meio de cultura da célula hospedeira).
[0300] Para a produção recombinante de um anticorpo anti-HC (e.g., um anticorpo anti-CD117 ou um anticorpo anti-CD45), um ácido nucleico que codifica um anticorpo, e.g., como descrito acima, é isolado e inserido em um ou mais vetores para clonagem e/ou expressão adicional em uma célula hospedeira. Esse ácido nucleico pode ser facilmente isolado e sequenciado usando procedimentos convencionais (e.g., usando sondas de oligonucleotídeo que são capazes de se ligarem especificamente aos genes que codificam as cadeias leves e pesadas do anticorpo).
[0301] Células hospedeiras adequadas para clonagem ou expressão de vetores que codificam anticorpos incluem células procarióticas ou eucarióticas aqui descritas. Por exemplo, anticorpos podem ser produzidos em bactérias, em particular quando a glicosilação e função efetora de Fc não são necessárias. Para a expressão de fragmentos de anticorpo e polipeptídeos em bactérias, ver, e.g., Pat. dos EUA Nos
5.648.237, 5.789.199 e 5.840.523. (Ver também Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J., 2003), páginas 245 a 254, descrevendo a expressão de fragmentos de anticorpo em E. coli.). Depois da expressão, o anticorpo pode ser isolado da massa de célula bacteriana em uma fração solúvel e pode ser posteriormente purificado.
[0302] As células de vertebrados também podem ser usadas como hospedeiras. Por exemplo, linhagens de células de mamíferos que são adaptadas para crescerem em suspensão podem ser úteis. Outros exemplos de linhagens de células hospedeiras de mamíferos úteis são linhagem CV1 de rim de macaco transformada por SV40 (COS-7); linhagem de rim embrionário humano (células 293 ou 293 como descrito, e.g., em Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)); células de rim de hamster neonato (BHK); células de sertoli de camundongo (células TM4 como descrito, e.g., em Mather, Biol. Reprod. 23: 243-251 (1980)); células de rim de macaco (CV1); células de rim de macaco verde africano (VERO-76); células de carcinoma cervical humano (HELA); células renais caninas (MDCK; células do fígado de rato buffalo (BRL 3A); células do pulmão humano (W138); células do fígado humano (Hep G2); tumor mamário de camundongo (MMT 060562); células TRI, como descrito, e.g., em Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383: 44-68 (1982); células MRC 5; e células FS4. Outras linhagens de células hospedeiras de mamíferos úteis incluem células do ovário de hamster chinês (CHO), incluindo células DHFR-CHO (Urlaub et al., Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); e linhagens de células do mieloma, tais como Y0, NS0 e Sp2/0. Para uma revisão de certas linhagens de células hospedeiras de mamífero adequadas para a produção de anticorpo, ver, e.g., Yazaki e Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B. K. C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J.), páginas
255 a 268 (2003). Em uma modalidade, a célula hospedeira é eucariótica, e.g., uma célula do Ovário de Hamster Chinês (CHO) ou célula linfoide (e.g., célula Y0, NS0, Sp20).
Conjugados Anticorpo-Fármaco
[0303] Anticorpos e os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui descritos podem ser conjugados (ligados) com uma citotoxina por meio de um conector. Em algumas modalidades, a molécula citotóxica é conjugada com um anticorpo de internalização celular, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo como aqui divulgado, tal que após a captura celular do anticorpo ou fragmento do mesmo, a citotoxina pode acessar seu alvo intracelular e mediar a morte celular hematopoiética. Qualquer número de citotoxinas pode ser conjugado com o anticorpo anti-HC, e.g., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8.
[0304] Citotoxinas adequadas para o uso com as composições e métodos aqui descritos incluem agentes intercalantes de DNA, (e.g., antraciclinas), agentes capazes de interromperem o aparelho do fuso mitótico (e.g., alcaloides da vinca, maitansina, maitansinoides e derivados dos mesmos), inibidores de RNA polimerase (e.g., uma amatoxina, tal como α-amanitina e derivados da mesma), e agentes capazes de interromperem a biossíntese de proteína (e.g., agentes que exibem atividade N-glicosidase de rRNA, tais como saporina e cadeia A de ricina), entre outros conhecidos na técnica.
Citotoxinas
[0305] Várias citotoxinas podem ser conjugadas a um anticorpo anti-HC (e.g., um anticorpo anti-CD117 ou um anticorpo anti-CD45) por meio de um conector para o uso nas terapias aqui descritas. Em particular, os ADCs anti-HC (e.g., ADC anti- CD117 ou ADC anti-CD45) incluem um anticorpo (ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) conjugado (i.e., covalentemente ligado por um conector) com uma porção citotóxica (ou citotoxina). Em várias modalidades, a porção citotóxica exibe citotoxicidade reduzida ou nenhuma citotoxicidade quando ligada em um conjugado, mas recupera a citotoxicidade depois da clivagem do conector. Em várias modalidades, a porção citotóxica mantém a citotoxicidade sem a clivagem do conector. Em algumas modalidades, a molécula citotóxica é conjugada com um anticorpo de internalização celular, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo como aqui divulgado, tal que após a captura celular do anticorpo ou fragmento do mesmo, a citotoxina pode acessar seu alvo intracelular e, e.g., mediar a morte de células T.
[0306] Os ADCs da presente divulgação podem, portanto, serem da fórmula geral Ab-(Z-L-D)n, em que um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo (Ab) é conjugado (covalentemente ligado) ao conector (L), por meio de uma porção química (Z), a uma porção citotóxica (“fármaco”, D), cada qual como aqui divulgado.
[0307] Consequentemente, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo pode ser conjugado com várias porções de fármaco como indicado pelo número inteiro n, que representa o número médio de citotoxinas por anticorpo, que pode variar, e.g., de cerca de 1 a cerca de 20. Em algumas modalidades, n é de 1 a
4. Em algumas modalidades, n é 1. O número médio de porções de fármaco por anticorpo em preparações de ADC a partir das reações de conjugação pode ser caracterizado por meios convencionais, tais como espectroscopia de massa, ensaio ELISA e HPLC. A distribuição quantitativa de ADC em termos de n também pode ser determinada. Em alguns casos, a separação, purificação e caracterização de ADC homogêneo onde n é um certo valor de ADC com outras cargas de fármaco, podem ser obtidas por meios, tais como HPLC de fase reversa ou eletroforese.
[0308] Alguns ADCs anti-HC (e.g., ADC anti-CD117 ou ADC anti-CD45) podem ser limitados pelo número de sítios de fixação no anticorpo. Por exemplo, onde a fixação é um tiol de cisteína, um anticorpo pode ter apenas um ou vários grupos tiol de cisteína, ou pode ter apenas um ou vários grupos tiol suficientemente reativos através dos quais um conector pode ser ligado. Geralmente, os anticorpos não contêm muitos grupos tiol de cisteína livres e reativos que podem ser ligados a uma porção de fármaco; principalmente, os resíduos tiol de cisteína em anticorpos existem como pontes dissulfeto. Em certas modalidades, um anticorpo pode ser reduzido com um agente redutor, tal como ditiotreitol (DTT) ou tricarboniletilfosfina (TCEP), sob condições de redução parcial ou total, para gerar grupos tiol de cisteína reativos. Em certas modalidades, maior carga de fármaco, e.g., n>5, pode causar agregação, insolubilidade, toxicidade ou perda de permeabilidade celular de certos conjugados anticorpo-fármaco.
[0309] Em certas modalidades, menos que o máximo teórico de porções de fármaco são conjugados a um anticorpo durante uma reação de conjugação. Um anticorpo pode conter, por exemplo, resíduos de lisina que não reagem com o intermediário conector de fármaco ou reagente conector, como discutido abaixo.
Apenas os grupos de lisina mais reativos podem reagir com um reagente conector reativo a amina. Em certas modalidades, um anticorpo é submetido a condições desnaturantes para revelar grupos nucleofílicos reativos, tais como lisina ou cisteína.
[0310] A carga (razão fármaco/anticorpo) de um ADC pode ser controlada de diferentes maneiras, e.g.: (i) limitar o excesso molar do intermediário conector de fármaco ou reagente conector em relação ao anticorpo, (ii) limitar o tempo ou temperatura da reação de conjugação, (iii) condições redutoras parciais ou limitantes para modificação de tiol de cisteína, (iv) manipular por técnicas recombinantes da sequência de aminoácidos do anticorpo tal que o número e posição dos resíduos de cisteína sejam modificados para o controle do número e/ou posição das fixações de fármaco do conector.
[0311] As citotoxinas adequadas para o uso com as composições e métodos aqui descritos incluem agentes intercalantes de DNA, (e.g., antraciclinas), agentes capazes de interromperem o aparelho do fuso mitótico (e.g., alcaloides da vinca, maitansina, maitansinoides e derivados dos mesmos), inibidores de RNA polimerase (e.g., uma amatoxina, tal como α-amanitina e derivados da mesma), e agentes capazes de interromperem a biossíntese de proteína (e.g., agentes que exibem atividade N-glicosidase de rRNA, tal como saporina e cadeia A de ricina), entre outros conhecidos na técnica.
[0312] Em algumas modalidades, a citotoxina é um agente de ligação a microtúbulos (por exemplo, maitansina ou um maitansinoide), uma amatoxina, pseudomonas exotoxina A, deBouganin, toxina da difteria, saporina, uma auristatina, uma antraciclina, uma caliqueamicina, irinotecano, SN-38, uma duocarmicina, uma pirrolobenzodiazepina, um dímero de pirrolobenzodiazepina, uma indolinobenzodiazepina, um dímero de indolinobenzodiazepina, um pseudodímero de indolinobenzodiazepina ou uma variante do mesmo, ou outro composto citotóxico aqui descrito ou conhecido na técnica.
[0313] Em algumas modalidades, a citotoxina do conjugado anticorpo- fármaco é um inibidor de RNA polimerase. Em algumas modalidades, o inibidor de RNA polimerase é uma amatoxina ou derivado da mesma. Em algumas modalidades, a citotoxina do conjugado anticorpo-fármaco como aqui divulgado é uma amatoxina ou derivado da mesma, tal como uma α-amanitina, β-amanitina, γ-amanitina, ε- amanitina, amanina, amaninamida, amanulina, ácido amanulinaico, pró-amanulina ou um derivado da mesma.
[0314] Detalhes adicionais a respeito das citotoxinas que podem ser usadas nos ADCs anti-HC (e.g., ADC anti-CD117 ou ADC anti-CD45) úteis nos métodos da presente invenção são descritos abaixo.
Amatoxinas
[0315] Os métodos e composições aqui divulgados incluem ADCs compreendendo um inibidor de RNA polimerase, e.g., uma amatoxina, como a citotoxina conjugada com um anticorpo anti-HC (e.g., um anticorpo anti-CD117). Em algumas modalidades, a citotoxina do conjugado anticorpo-fármaco é um inibidor de RNA polimerase. Em algumas modalidades, o inibidor de RNA polimerase é uma amatoxina ou derivado da mesma. Em algumas modalidades, a citotoxina do conjugado anticorpo-fármaco como aqui divulgado é uma amatoxina ou derivado da mesma, tal como um α-amanitina, β-amanitina, γ-amanitina, ε-amanitina, amanina, amaninamida, amanulina, ácido amanulinaico, pró-amanulina ou um derivado da mesma. Amatoxinas adequadas são divulgadas em, e.g., Zanotti et al., Int. J. Peptide Protein Res. 30, 1987, 450-459.
[0316] Amatoxinas útéis em conjunto com as composições e métodos aqui descritos incluem compostos de acordo com, mas não são limitados à fórmula (III), incluindo α-amanitina, β-amanitina, γ-amanitina, ε-amanitina, amanina, amaninamida, amanulina, ácido amanulinaico ou pró-amanulina. A Fórmula (III) é como se segue: (III) em que R1 é H, OH ou ORA; R2 é H, OH ou ORB; RA e RB, quando presentes, juntos com os átomos de oxigênio aos quais estão ligados, combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído; R3 é H ou RD;
R4 é H, OH, ORD ou RD; R5 é H, OH, ORD ou RD; R6 é H, OH, ORD ou RD; R7 é H, OH, ORD ou RD; R8 é OH, NH2 ou ORD; R9 é H, OH ou ORD; X é -S-, -S(O)- ou -SO2-; e RD é alquila opcionalmente substituída (e.g., alquila C1-C6), heteroalquila opcionalmente substituída (e.g., heteroalquila C1-C6), alquenila opcionalmente substituída (e.g., alquenila C2-C6), heteroalquenila opcionalmente substituída (e.g., heteroalquenila C2-C6), alquinila opcionalmente substituída (e.g., alquinila C2-C6), heteroalquinila opcionalmente substituída (e.g., heteroalquinila C2-C6), cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída.
[0317] Por exemplo, em uma modalidade, as amatoxinas úteis em conjunto com as composições e métodos aqui descritos incluem os compostos de acordo com fórmula (IIIA) (IIIA), em que R4, R5, X e R8 são, cada um, como definidos acima.
[0318] Por exemplo, em uma modalidade, as amatoxinas úteis em conjunto com as composições e métodos aqui descritos incluem os compostos de acordo com fórmula (IIIB), abaixo:
(IIIB)
em que R1 é H, OH ou ORA;
R2 é H, OH ou ORB;
RA e RB, quando presentes, juntos com os átomos de oxigênio aos quais estão ligados, combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído;
R3 é H ou RD;
R4 é H, OH, ORD ou RD;
R5 é H, OH, ORD ou RD;
R6 é H, OH, ORD ou RD;
R7 é H, OH, ORD ou RD; R8 é OH, NH2 ou ORD;
R9 é H, OH ou ORD;
X é -S-, -S(O)- ou -SO2-; e
RD é alquila opcionalmente substituída (e.g., alquila C1-C6), heteroalquila opcionalmente substituída (e.g., heteroalquila C1-C6), alquenila opcionalmente substituída (e.g., alquenila C2-C6), heteroalquenila opcionalmente substituída (e.g.,
heteroalquenila C2-C6), alquinila opcionalmente substituída (e.g., alquinila C2-C6),
heteroalquinila opcionalmente substituída (e.g., heteroalquinila C2-C6), cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída.
[0319] Em uma modalidade, as amatoxinas úteis em conjunto com as composições e métodos aqui descritos também incluem os compostos de acordo com fórmula (IIIC), abaixo: R2 R1
H
N R6 R7 NH O R5 O
O
HN R4 HN O R3N
X O N H O
N NH R9 O N
O H
O R8 (IIIC) em que R1 é H, OH ou ORA; R2 é H, OH ou ORB; RA e RB, quando presentes, juntos com os átomos de oxigênio aos quais estão ligados, combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído; R3 é H ou RD; R4 é H, OH, ORD ou RD; R5 é H, OH, ORD ou RD; R6 é H, OH, ORD ou RD; R7 é H, OH, ORD ou RD; R8 é OH, NH2 ou ORD; R9 é H, OH ou ORD; X é -S-, -S(O)- ou -SO2-; e
RD é alquila opcionalmente substituída (e.g., alquila C1-C6), heteroalquila opcionalmente substituída (e.g., heteroalquila C1-C6), alquenila opcionalmente substituída (e.g., alquenila C2-C6), heteroalquenila opcionalmente substituída (e.g., heteroalquenila C2-C6), alquinila opcionalmente substituída (e.g., alquinila C2-C6), heteroalquinila opcionalmente substituída (e.g., heteroalquinila C2-C6), cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída.
[0320] Em uma modalidade, a citotoxina é uma amanitina.
[0321] Por exemplo, os anticorpos, e os fragmentos de ligação ao antígeno, aqui descritos podem estar ligados a uma amatoxina (e.g., da Fórmula III, IIIA, IIIB ou IIIC) de modo a formar um conjugado representado pela fórmula Ab-Z-L-Am, em que Ab é o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, L é um conector, Z é uma porção química e Am é uma amatoxina. Muitas posições em amatoxinas ou derivados das mesmas podem servir como a posição para ligar covalentemente a porção de ligação L e, consequentemente, os anticorpos ou os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos. Métodos exemplificativos de conjugação de amatoxina e conectores úteis para tais processos são descritos abaixo. Amatoxinas exemplificativas contendo conectores Am-L-Z úteis para a conjugação com um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, de acordo com as composições e métodos aqui descritos são mostradas nas fórmulas estruturais (I), (IA), (IB), (II), (IIA) e (IIB), aqui citadas.
[0322] Em algumas modalidades, o conjugado amatoxina-conector Am-L-Z é representado pela fórmula (I)
em que R1 é H, OH, ORA ou ORC;
R2 é H, OH, ORB ou ORC;
RA e RB, quando presentes, juntos com os átomos de oxigênio aos quais estão ligados, combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído;
R3 é H, RC ou RD;
R4 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD;
R5 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD;
R6 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD;
R7 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD;
R8 é OH, NH2, ORC, ORD, NHRC ou NRCRD;
R9 é H, OH, ORC ou ORD;
X é -S-, -S(O)- ou -SO2-; RC é -L-Z;
RD é alquila opcionalmente substituída (e.g., alquila C1-C6), heteroalquila opcionalmente substituída (e.g., heteroalquila C1-C6), alquenila opcionalmente substituída (e.g., alquenila C2-C6), heteroalquenila opcionalmente substituída (e.g.,
heteroalquenila C2-C6), alquinila opcionalmente substituída (e.g., alquinila C2-C6),
heteroalquinila opcionalmente substituída (e.g., heteroalquinila C2-C6), cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída; L é um conector, tal como alquileno opcionalmente substituído (e.g., alquileno C1-C6), heteroalquileno opcionalmente substituído (heteroalquileno C1-C6), alquenileno opcionalmente substituído (e.g., alquenileno C2-C6), heteroalquenileno opcionalmente substituído (e.g., heteroalquenileno C2-C6), alquinileno opcionalmente substituído (e.g., alquinileno C2-C6), heteroalquinileno opcionalmente substituído (e.g., heteroalquinileno C2-C6), cicloalquileno opcionalmente substituído, heterocicloalquileno opcionalmente substituído, arileno opcionalmente substituído, heteroarileno opcionalmente substituído, um peptídeo, um dipeptídeo, -(C=O)-, um dissulfeto, uma hidrazona ou uma combinação dos mesmos; e Z é uma porção química formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente em L e um substituinte reativo presente dentro de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, que se liga a um antígeno alvo (e.g., CD117).
[0323] Em algumas modalidades, Am contém exatamente um substituinte RC.
[0324] Em algumas modalidades, L-Z é
O O O H O N N
S N N N ou or H H
O O O
S onde S é um átomo de enxofre que representa o substituinte reativo presente dentro de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, que se liga a um antígeno alvo (e.g., do grupo -SH de um resíduo de cisteína).
[0325] Em algumas modalidades, L-Z é
[0326] Em algumas modalidades, o conjugado Am-L-Z-Ab é representado por uma das Fórmulas IV, IVA ou IVB: (IV) (IVA) (IVB) onde X é S, SO ou SO2 e Ab é mostrado para indicar o ponto de fixação de Ab.
[0327] Em algumas modalidades, Am-L-Z-Ab é onde Ab é mostrado para indicar o ponto de fixação de Ab.
[0328] Em algumas modalidades, Am-L-Z-Ab é
HO HO H N NH O O N O H HN O N S O H O H NH N N N O H HO O O NH O H O N N H O
N O H N Ab
S
O onde Ab é mostrado para indicar o ponto de fixação de Ab.
[0329] Em algumas modalidades, o precursor de Am-L-Z-Ab é onde Ab é mostrado para indicar o ponto de fixação de Ab.
[0330] Em algumas modalidades, o precursor de Am-L-Z-Ab, Am-L-Z’, é
HO HO H N NH O O O HN HN N S O O H O H NH N N N O H HO O O NH O H N N O H N O O H N
O em que a maleimida reage com um grupo tiol encontrado em uma cisteína no anticorpo.
[0331] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representada pela fórmula (IA) em que R1 é H, OH, ORA ou ORC; R2 é H, OH, ORB ou ORC; RA e RB, quando presentes, juntos com os átomos de oxigênio aos quais estão ligados, combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído; R3 é H, RC ou RD; R4 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD;
R5 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD;
R6 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD;
R7 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD;
R8 é OH, NH2, ORC, ORD, NHRC ou NRCRD;
R9 é H, OH, ORC ou ORD;
X é -S-, -S(O)- ou -SO2-; RC é -L-Z;
RD é alquila opcionalmente substituída (e.g., alquila C1-C6), heteroalquila opcionalmente substituída (e.g., heteroalquila C1-C6), alquenila opcionalmente substituída (e.g., alquenila C2-C6), heteroalquenila opcionalmente substituída (e.g.,
heteroalquenila C2-C6), alquinila opcionalmente substituída (e.g., alquinila C2-C6),
heteroalquinila opcionalmente substituída (e.g., heteroalquinila C2-C6), cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída;
L é um conector, tal como alquileno opcionalmente substituído (e.g., alquileno
C1-C6), heteroalquileno opcionalmente substituído (heteroalquileno C1-C6),
alquenileno opcionalmente substituído (e.g., alquenileno C2-C6), heteroalquenileno opcionalmente substituído (e.g., heteroalquenileno C2-C6), alquinileno opcionalmente substituído (e.g., alquinileno C2-C6), heteroalquinileno opcionalmente substituído (e.g.,
heteroalquinileno C2-C6), cicloalquileno opcionalmente substituído,
heterocicloalquileno opcionalmente substituído, arileno opcionalmente substituído,
heteroarileno opcionalmente substituído, um peptídeo, um dipeptídeo, -(C=O)-, um dissulfeto, uma hidrazona ou uma combinação dos mesmos;
Z é uma porção química formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente em L e um substituinte reativo presente dentro de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, que se liga a um antígeno
HC (i.e., um anticorpo anti-HC, e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45); e em que Am contém exatamente um substituinte RC.
[0332] Em algumas modalidades, L-Z é
O O O H O N N
S N N N ou or H H
O O O S
[0333] Em algumas modalidades, L-Z é
[0334] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representada pela fórmula (IB) em que R1 é H, OH, ORA ou ORC; R2 é H, OH, ORB ou ORC; RA e RB, quando presentes, juntos com os átomos de oxigênio aos quais estão ligados, combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído; R3 é H, RC ou RD; R4 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R5 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R6 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R7 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD;
R8 é OH, NH2, ORC, ORD, NHRC ou NRCRD; R9 é H, OH, ORC ou ORD; X é -S-, -S(O)- ou -SO2-; RC é -L-Z; RD é alquila opcionalmente substituída (e.g., alquila C1-C6), heteroalquila opcionalmente substituída (e.g., heteroalquila C1-C6), alquenila opcionalmente substituída (e.g., alquenila C2-C6), heteroalquenila opcionalmente substituída (e.g., heteroalquenila C2-C6), alquinila opcionalmente substituída (e.g., alquinila C2-C6), heteroalquinila opcionalmente substituída (e.g., heteroalquinila C2-C6), cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída; L é um conector, tal como alquileno opcionalmente substituído (e.g., alquileno C1-C6), heteroalquileno opcionalmente substituído (heteroalquileno C1-C6), alquenileno opcionalmente substituído (e.g., alquenileno C2-C6), heteroalquenileno opcionalmente substituído (e.g., heteroalquenileno C2-C6), alquinileno opcionalmente substituído (e.g., alquinileno C2-C6), heteroalquinileno opcionalmente substituído (e.g., heteroalquinileno C2-C6), cicloalquileno opcionalmente substituído, heterocicloalquileno opcionalmente substituído, arileno opcionalmente substituído, heteroarileno opcionalmente substituído, um peptídeo, um dipeptídeo, -(C=O)-, um dissulfeto, uma hidrazona ou uma combinação dos mesmos; Z é uma porção química formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente em L e um substituinte reativo presente dentro de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, que se liga a um antígeno HC (i.e., um anticorpo anti-HC, e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45); e em que Am contém exatamente um substituinte RC.
[0335] Em algumas modalidades, L-Z é
O O O H O N N
S N N N ou or H H
O O O S
[0336] Em algumas modalidades, L-Z é
[0337] Em algumas modalidades, RA e RB, quando presentes, juntos com os átomos de oxigênio aos quais estão ligados, combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros da fórmula: em que Y é -(C=O)-, -(C=S)-, -(C=NRE)- ou -(CRERE’)-; e RE e RE’ são, cada um, independentemente alquileno C1-C6-RC opcionalmente substituído, heteroalquileno C1-C6-RC opcionalmente substituído, alquenileno C2-C6- RC opcionalmente substituído, heteroalquenileno C2-C6-RC opcionalmente substituído, alquinileno C2-C6-RC opcionalmente substituído, heteroalquinileno C2-C6-RC opcionalmente substituído, cicloalquileno-RC opcionalmente substituído, heterocicloalquileno-RC opcionalmente substituído, arileno-RC opcionalmente substituído ou heteroarileno-RC opcionalmente substituído.
[0338] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representada pela fórmula (IA) ou fórmula (IB), em que R1 é H, OH, ORA ou ORC; R2 é H, OH, ORB ou ORC; RA e RB, quando presentes, juntos com os átomos de oxigênio aos quais estão ligados, combinam para formar:
R3 é H ou RC; R4 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R5 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R6 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R7 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R8 é OH, NH2, ORC ou NHRC; R9 é H ou OH; X é -S-, -S(O)- ou -SO2-; e em que RC e RD são, cada um, como definidos acima.
[0339] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representada pela fórmula (IA) ou fórmula (IB), em que R1 é H, OH, ORA ou ORC; R2 é H, OH, ORB ou ORC; RA e RB, quando presentes, juntos com os átomos de oxigênio aos quais estão ligados, combinam para formar: R3 é H ou RC; R4 e R5 são, cada um, independentemente H, OH, ORC, RC ou ORD; R6 e R7 são, cada um, H; R8 é OH, NH2, ORC ou NHRC; R9 é H ou OH; X é -S-, -S(O)- ou -SO2-; e em que RC é como definido acima.
[0340] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representada pela fórmula (IA) ou fórmula (IB), em que R1 é H, OH ou ORA; R2 é H, OH ou ORB; RA e RB, quando presentes, juntos com os átomos de oxigênio aos quais estão ligados, combinam para formar: R3, R4, R6 e R7 são, cada um, H; R5 é ORC; R8 é OH ou NH2; R9 é H ou OH; X é -S-, -S(O)- ou -SO2-; e em que RC é como definido acima. Tais conjugados amatoxina são descritos, por exemplo, na Publicação do Pedido de Patente dos EUA No 2016/0002298, cuja divulgação é aqui incorporada por referência em sua totalidade.
[0341] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representada pela fórmula (IA) ou fórmula (IB), em que R1 e R2 são, cada um, independentemente H ou OH; R3 é RC; R4, R6 e R7 são, cada um, H; R5 é H, OH, ou alquila OC1-C6; R8 é OH ou NH2; R9 é H ou OH; X é -S-, -S(O)- ou -SO2-; e em que RC é como definido acima. Tais conjugados amatoxina são descritos, por exemplo, na Publicação do Pedido de Patente dos EUA No 2014/0294865, cuja divulgação é aqui incorporada por referência em sua totalidade.
[0342] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representada pela fórmula (IA) ou fórmula (IB), em que R1 e R2 são, cada um, independentemente H ou OH; R3, R6 e R7 são, cada um, H; R4 e R5 são, cada um, independentemente H, OH, ORC ou RC; R8 é OH ou NH2; R9 é H ou OH; X é -S-, -S(O)- ou -SO2-; e em que RC é como definido acima. Tais conjugados amatoxina são descritos, por exemplo, na Publicação do Pedido de Patente dos EUA No 2015/0218220, cuja divulgação é aqui incorporada por referência em sua totalidade.
[0343] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representada pela fórmula (IA) ou fórmula (IB), em que R1 e R2 são, cada um, independentemente H ou OH; R3, R6 e R7 são, cada um, H; R4 e R5 são, cada um, independentemente H ou OH; R8 é OH, NH2, ORC ou NHRC; R9 é H ou OH; X é -S-, -S(O)- ou -SO2-; e em que RC é como definido acima. Tais conjugados amatoxina são descritos, por exemplo, nas Patentes dos EUA Nos 9.233.173 e 9.399.681, bem como em US 2016/0089450, as divulgações de cada uma das quais são aqui incorporadas por referência em sua totalidade.
[0344] Em algumas modalidades, Am-L-Z’ é
.
[0345] Amatoxinas adicionais que podem ser usadas para a conjugação com um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, de acordo com as composições e métodos aqui descritos são descritos, por exemplo, em WO 2016/142049; WO 2016/071856; WO 2017/149077; WO 2018/115466; e WO 2017/046658, as divulgações de cada uma das quais são aqui incorporadas por referência em sua totalidade.
[0346] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representada pela fórmula (II), fórmula (IIA) ou fórmula (IIB)
em que X é S, SO, ou SO2; R1 é H ou um conector ligado covalentemente ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo por meio de uma porção química Z formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo Z’ presente no conector e um substituinte reativo presente dentro de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; e R2 é H ou um conector ligado covalentemente ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo por meio de uma porção química Z formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo Z’ presente no conector e um substituinte reativo presente dentro de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; em que quando R1 é H, R2 é o conector, e quando R2 é H, R1 é o conector.
Em algumas modalidades, R1 é o conector e R2 é H, e o conector e a porção química, juntos como
L-Z, são ou .
[0347] Em algumas modalidades, L-Z é .
[0348] Em uma modalidade, Am-L-Z-Ab é:
OH HO H N O NH O S O O
N O Ab O N
O H 5 HN
N O HO N S O H O O H NH N N H O
O NH2
[0349] Em uma modalidade, Am-L-Z-Ab é:
[0350] Em algumas modalidades, o precursor de Am-L-Z-Ab (i.e., Am-L-Z’) é um de:
; em que a maleimida reage com um grupo tiol encontrado em uma cisteína no anticorpo.
[0351] Em algumas modalidades, a citotoxina é uma α-amanitina. Em algumas modalidades, a α-amanitina está ligada a um anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti- CD117 ou anticorpo anti-CD45) por meio de um conector L. Em algumas modalidades, a α-amanitina é um composto da fórmula III. O conector L pode estar ligado à α- amanitina da fórmula III em qualquer uma das várias posições possíveis (e.g., qualquer uma de R1-R9) para fornecer um conjugado α-amanitina-conector da fórmula I, IA, IB, II, IIA ou IIB. Em algumas modalidades, o conector inclui uma hidrazina, um dissulfeto, um tioéter ou um dipeptídeo. Em algumas modalidades, o conector inclui um dipeptídeo selecionado de Val-Ala e Val-Cit. Em algumas modalidades, o conector inclui um grupo para-aminobenzila (PAB). Em algumas modalidades, o conector inclui a porção PAB-Cit-Val. Em algumas modalidades, o conector inclui a porção PAB-Ala- Val. Em algumas modalidades, o conector inclui uma unidade -((C=O)(CH2)n-, em que n é um número inteiro de 1 a 6.
[0352] Em algumas modalidades, o conector inclui uma unidade -(CH2)n -, onde n é um número inteiro de 2 a 6. Em algumas modalidades, o conector é -PAB- Cit-Val-((C=O)(CH2)n -. Em algumas modalidades, o conector é -PAB-Ala-Val- ((C=O)(CH2)n -. Em algumas modalidades, o conector L e a porção química Z, tomados juntos como L-Z, são ou .
[0353] Em algumas modalidades, a citotoxina é uma β-amanitina. Em algumas modalidades, a β-amanitina está ligada a um anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti- CD117 ou anticorpo anti-CD45) por meio de um conector L. Em algumas modalidades, a β-amanitina é um composto da fórmula III. O conector L pode estar ligado à β- amanitina da fórmula III em qualquer uma das várias posições possíveis (e.g., qualquer uma de R1-R9) para fornecer um conjugado β-amanitina-conector da fórmula I, IA, IB, II, IIA ou IIB. Em algumas modalidades, o conector inclui uma hidrazina, um dissulfeto, um tioéter ou um dipeptídeo. Em algumas modalidades, o conector inclui um dipeptídeo selecionado de Val-Ala e Val-Cit. Em algumas modalidades, o conector inclui um grupo para-aminobenzila (PAB). Em algumas modalidades, o conector inclui a porção PAB-Cit-Val. Em algumas modalidades, o conector inclui a porção PAB-Ala- Val. Em algumas modalidades, o conector inclui uma unidade -((C=O)(CH2)n-, em que n é um número inteiro de 1 a 6.
[0354] Em algumas modalidades, o conector inclui uma unidade -(CH2)n -, onde n é um número inteiro de 2 a 6. Em algumas modalidades, o conector é -PAB- Cit-Val-((C=O)(CH2)n -. Em algumas modalidades, o conector é -PAB-Ala-Val- ((C=O)(CH2)n -. Em algumas modalidades, o conector L e a porção química Z, tomados juntos como L-Z, são ou .
[0355] Em algumas modalidades, a citotoxina é uma γ-amanitina. Em algumas modalidades, a γ-amanitina está ligada a um anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti-
CD117 ou anticorpo anti-CD45) por meio de um conector L. Em algumas modalidades, a γ-amanitina é um composto da fórmula III. O conector L pode estar ligado à γ- amanitina da fórmula III em qualquer uma das várias posições possíveis (e.g., qualquer uma de R1-R9) para fornecer um conjugado γ-amanitina-conector da fórmula I, IA, IB, II, IIA ou IIB. Em algumas modalidades, o conector inclui uma hidrazina, um dissulfeto, um tioéter ou um dipeptídeo. Em algumas modalidades, o conector inclui um dipeptídeo selecionado de Val-Ala e Val-Cit. Em algumas modalidades, o conector inclui um grupo para-aminobenzila (PAB). Em algumas modalidades, o conector inclui a porção PAB-Cit-Val. Em algumas modalidades, o conector inclui a porção PAB-Ala- Val. Em algumas modalidades, o conector inclui uma unidade -((C=O)(CH2)n-, em que n é um número inteiro de 1 a 6.
[0356] Em algumas modalidades, o conector inclui uma unidade -(CH2)n -, onde n é um número inteiro de 2 a 6. Em algumas modalidades, o conector é -PAB- Cit-Val-((C=O)(CH2)n -. Em algumas modalidades, o conector é -PAB-Ala-Val- ((C=O)(CH2)n -. Em algumas modalidades, o conector L e a porção química Z, tomados juntos como L-Z, são ou .
[0357] Em algumas modalidades, a citotoxina é uma ε-amanitina. Em algumas modalidades, a ε-amanitina está ligada a um anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti- CD117 ou anticorpo anti-CD45) por meio de um conector L. Em algumas modalidades, a ε-amanitina é um composto da fórmula III. O conector L pode estar ligado à ε- amanitina da fórmula III em qualquer uma das várias posições possíveis (e.g., qualquer uma de R1-R9) para fornecer um conjugado ε-amanitina-conector da fórmula I, IA, IB, II, IIA ou IIB. Em algumas modalidades, o conector inclui uma hidrazina, um dissulfeto, um tioéter ou um dipeptídeo. Em algumas modalidades, o conector inclui um dipeptídeo selecionado de Val-Ala e Val-Cit. Em algumas modalidades, o conector inclui um grupo para-aminobenzila (PAB). Em algumas modalidades, o conector inclui a porção PAB-Cit-Val. Em algumas modalidades, o conector inclui a porção PAB-Ala- Val. Em algumas modalidades, o conector inclui uma unidade -((C=O)(CH2)n-, em que n é um número inteiro de 1 a 6.
[0358] Em algumas modalidades, o conector inclui uma unidade -(CH2)n -, onde n é um número inteiro de 2 a 6. Em algumas modalidades, o conector é -PAB- Cit-Val-((C=O)(CH2)n -. Em algumas modalidades, o conector é -PAB-Ala-Val- ((C=O)(CH2)n -. Em algumas modalidades, o conector L e a porção química Z, tomados juntos como L-Z, são ou .
[0359] Em algumas modalidades, a citotoxina é um amanina. Em algumas modalidades, a amanina está ligada a um anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti- CD117 ou anticorpo anti-CD45) por meio de um conector L. Em algumas modalidades, a amanina é um composto da fórmula III. O conector L pode estar ligado à amanina da fórmula III em qualquer uma das várias posições possíveis (e.g., qualquer uma de R1-R9) para fornecer um conjugado amanina-conector da fórmula I, IA, IB, II, IIA ou IIB. Em algumas modalidades, o conector inclui uma hidrazina, um dissulfeto, um tioéter ou um dipeptídeo. Em algumas modalidades, o conector inclui um dipeptídeo selecionado de Val-Ala e Val-Cit. Em algumas modalidades, o conector inclui um grupo para-aminobenzila (PAB). Em algumas modalidades, o conector inclui a porção PAB-Cit-Val. Em algumas modalidades, o conector inclui a porção PAB-Ala-Val. Em algumas modalidades, o conector inclui uma unidade -((C=O)(CH2)n-, em que n é um número inteiro de 1 a 6.
[0360] Em algumas modalidades, o conector inclui uma unidade -(CH2)n -,
onde n é um número inteiro de 2 a 6. Em algumas modalidades, o conector é -PAB- Cit-Val-((C=O)(CH2)n -. Em algumas modalidades, o conector é -PAB-Ala-Val- ((C=O)(CH2)n -. Em algumas modalidades, o conector L e a porção química Z, tomados juntos como L-Z, são ou .
[0361] Em algumas modalidades, a citotoxina é um amaninamida. Em algumas modalidades, a amaninamida está ligada a um anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45) por meio de um conector L. Em algumas modalidades, a amaninamida é um composto da fórmula III. O conector L pode estar ligado à amaninamida da fórmula III em qualquer uma das várias posições possíveis (e.g., qualquer uma de R1-R9) para fornecer um conjugado amaninamida- conector da fórmula I, IA, IB, II, IIA ou IIB. Em algumas modalidades, o conector inclui uma hidrazina, um dissulfeto, um tioéter ou um dipeptídeo. Em algumas modalidades, o conector inclui um dipeptídeo selecionado de Val-Ala e Val-Cit. Em algumas modalidades, o conector inclui um grupo para-aminobenzila (PAB). Em algumas modalidades, o conector inclui a porção PAB-Cit-Val. Em algumas modalidades, o conector inclui a porção PAB-Ala-Val. Em algumas modalidades, o conector inclui uma unidade -((C=O)(CH2)n-, em que n é um número inteiro de 1 a 6.
[0362] Em algumas modalidades, o conector inclui uma unidade -(CH2)n -, onde n é um número inteiro de 2 a 6. Em algumas modalidades, o conector é -PAB- Cit-Val-((C=O)(CH2)n -. Em algumas modalidades, o conector é -PAB-Ala-Val- ((C=O)(CH2)n -. Em algumas modalidades, o conector L e a porção química Z, tomados juntos como L-Z, são ou .
[0363] Em algumas modalidades, a citotoxina é uma amanulina. Em algumas modalidades, a amanulina está ligada a um anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti- CD117 ou anticorpo anti-CD45) por meio de um conector L. Em algumas modalidades, a amanulina é um composto da fórmula III. O conector L pode estar ligado à amanulina da fórmula III em qualquer uma das várias posições possíveis (e.g., qualquer uma de R1-R9) para fornecer um conjugado amanulina-conector da fórmula I, IA, IB, II, IIA ou IIB. Em algumas modalidades, o conector inclui uma hidrazina, um dissulfeto, um tioéter ou um dipeptídeo. Em algumas modalidades, o conector inclui um dipeptídeo selecionado de Val-Ala e Val-Cit. Em algumas modalidades, o conector inclui um grupo para-aminobenzila (PAB). Em algumas modalidades, o conector inclui a porção PAB-Cit-Val. Em algumas modalidades, o conector inclui a porção PAB-Ala-Val. Em algumas modalidades, o conector inclui uma unidade -((C=O)(CH2)n-, em que n é um número inteiro de 1 a 6.
[0364] Em algumas modalidades, o conector inclui uma unidade -(CH2)n-, onde n é um número inteiro de 2 a 6. Em algumas modalidades, o conector é -PAB- Cit-Val-((C=O)(CH2)n -. Em algumas modalidades, o conector é -PAB-Ala-Val- ((C=O)(CH2)n -. Em algumas modalidades, o conector L e a porção química Z, tomados juntos como L-Z, são ou .
[0365] Em algumas modalidades, a citotoxina é um ácido amanulinaico. Em algumas modalidades, o ácido amanulinaico está ligado a um anticorpo anti-HC (e.g.,
anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45) por meio de um conector L. Em algumas modalidades, o ácido amanulinaico é um composto da fórmula III. O conector L pode estar ligado ao ácido amanulinaico da fórmula III em qualquer uma das várias posições possíveis (e.g., qualquer uma de R1-R9) para fornecer um conjugado ácido amanulinaico-conector da fórmula I, IA, IB, II, IIA ou IIB. Em algumas modalidades, o conector inclui uma hidrazina, um dissulfeto, um tioéter ou um dipeptídeo. Em algumas modalidades, o conector inclui um dipeptídeo selecionado de Val-Ala e Val-Cit. Em algumas modalidades, o conector inclui um grupo para-aminobenzila (PAB). Em algumas modalidades, o conector inclui a porção PAB-Cit-Val. Em algumas modalidades, o conector inclui a porção PAB-Ala-Val. Em algumas modalidades, o conector inclui uma unidade -((C=O)(CH2)n-, em que n é um número inteiro de 1 a 6.
[0366] Em algumas modalidades, o conector inclui uma unidade -(CH2)n-, onde n é um número inteiro de 2 a 6. Em algumas modalidades, o conector é -PAB- Cit-Val-((C=O)(CH2)n -. Em algumas modalidades, o conector é -PAB-Ala-Val- ((C=O)(CH2)n -. Em algumas modalidades, o conector L e a porção química Z, tomados juntos como L-Z, são ou .
[0367] Em algumas modalidades, a citotoxina é uma pró-amanulina. Em algumas modalidades, a pró-amanulina está ligada a um anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45) por meio de um conector L. Em algumas modalidades, a pró-amanulina é um composto da fórmula III. O conector L pode estar ligado à pró-amanulina da fórmula III em qualquer uma das várias posições possíveis (e.g., qualquer uma de R1-R9) para fornecer um conjugado pró-amanulina- conector da fórmula I, IA, IB, II, IIA ou IIB. Em algumas modalidades, o conector inclui uma hidrazina, um dissulfeto, um tioéter ou um dipeptídeo. Em algumas modalidades,
o conector inclui um dipeptídeo selecionado de Val-Ala e Val-Cit. Em algumas modalidades, o conector inclui um grupo para-aminobenzila (PAB). Em algumas modalidades, o conector inclui a porção PAB-Cit-Val. Em algumas modalidades, o conector inclui a porção PAB-Ala-Val. Em algumas modalidades, o conector inclui uma unidade -((C=O)(CH2)n-, em que n é um número inteiro de 1 a 6.
[0368] Em algumas modalidades, o conector inclui uma unidade -(CH2)n-, onde n é um número inteiro de 2 a 6. Em algumas modalidades, o conector é -PAB- Cit-Val-((C=O)(CH2)n -. Em algumas modalidades, o conector é -PAB-Ala-Val- ((C=O)(CH2)n -. Em algumas modalidades, o conector L e a porção química Z, tomados juntos como L-Z, são ou .
[0369] Métodos sintéticos de fabricar amatoxina são descritos na Patente dos EUA No 9.676.702, que é incorporada aqui por referência.
[0370] Os anticorpos, ou os fragmentos de ligação ao antígeno, para o uso com as composições e métodos aqui descritos podem ser conjugados com uma amatoxina, tal como α-amanitina ou uma variante da mesma, usando técnicas de conjugação conhecidas na técnica ou aqui descritas. Por exemplo, os anticorpos, ou os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos, que reconhecem e se ligam a um antígeno alvo (um anticorpo anti-HC, e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti- CD45) podem ser conjugados com uma amatoxina, tal como α-amanitina ou uma variante da mesma, como descrito em US 2015/0218220, cuja divulgação é aqui incorporada por referência no que se refere, por exemplo, às amatoxinas, tais como α-amanitina e variantes da mesma, bem como conectores covalentes que podem ser usados para conjugação covalente.
Auristatinas
[0371] Os anticorpos anti-HC (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti- CD45) e os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui descritos podem ser conjugados com uma citotoxina que é uma auristatina (Pat. dos EUA Nos 5.635.483;
5.780.588). Auristatinas são agentes anti-mitóticos que interferem na dinâmica de microtúbulos, hidrólise de GTP e divisão nuclear e celular (Woyke et al. (2001) Antimicrob. Agents and Chemother. 45(12): 3580-3584) e têm atividade anticâncer (Pat. dos EUA No 5.663.149) e antifúngica (Pettit et al. (1998) Antimicrob. Agents Chemother. 42: 2961-2965). (Pat. dos EUA Nos 5.635.483; 5.780.588). A porção de fármaco de auristatina pode estar ligada ao anticorpo por meio do terminal N (amino) ou o terminal C (carboxila) da porção peptídica de fármaco (WO 02/088172).
[0372] Modalidades de auristatina exemplificativas incluem as porções de fármaco de monometilauristatina ligadas ao terminal N DE e DF, divulgadas em Senter et al, Proceedings of the American Association for Cancer Research, Volume 45, Resumo Número 623, apresentado em 28 de março de 2004, cuja divulgação é expressamente incorporada por referência em sua totalidade.
[0373] Uma modalidade de auristatina exemplificativa é MMAE, em que a linha ondulada indica o ponto de fixação covalente ao conector de um conjugado anticorpo-conector (-L-Z-Ab ou -L-Z′, como aqui descrito).
[0374] Outra modalidade de auristatina exemplificativa é MMAF, em que a linha ondulada indica o ponto de fixação covalente ao conector de um conjugado anticorpo-conector (-L-Z-Ab ou -L-Z′, como aqui descrito), como divulgado em US 2005/0238649:
[0375] As auristatinas podem ser preparadas de acordo com os métodos de: Pat. dos EUA No 5.635.483; Pat. dos EUA No 5.780.588; Pettit et al. (1989) J. Am.
Chem. Soc. 111: 5463-5465; Pettit et al. (1998) Anti-Cancer Drug Desing 13: 243-277; Pettit, G. R., et al. Synthesis, 1996, 719-725; Pettit et al. (1996) J. Chem. Soc. Perkin Trans. 15: 859-863; e Doronina (2003) Nat. Biotechnol. 21(7): 778-784.
Maitansinoides
[0376] Os anticorpos e os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui descritos podem ser conjugados com uma citotoxina que é um agente de ligação de microtúbulos. Em algumas modalidades, o agente de ligação de microtúbulos é uma maitansina, um maitansinoide ou um análogo de maitansinoide. Os maitansinoides são inibidores mitotóticos que se ligam a microtúbulos e agem inibindo a polimerização de tubulina. A maitansina foi isolada pela primeira vez de arbusto do leste africano Maytenus serrata (Pat. dos EUA No 3.896.111). Subsequentemente, foi descoberto que certos micróbios também produzem maitansinoides, tais como maitansinol e ésteres de maitansinol C-3 (Pat. dos EUA No 4.151.042). Maitansinol sintético e derivados e análogos dos mesmos são divulgados, por exemplo, nas Pat.
dos EUA Nos 4.137.230; 4.248.870; 4.256.746; 4.260.608; 4.265.814; 4.294.757;
4.307.016; 4.308.268; 4.308.269; 4.309.428; 4.313.946; 4.315.929; 4.317.821;
4.322.348; 4.331.598; 4.361.650; 4.364.866; 4.424.219; 4.450.254; 4.362.663; e
4.371.533. Porções de fármaco maitansinoide são porções atrativas de fármaco em conjugados anticorpo-fármaco porque elas são: (i) relativamente acessíveis para preparar, por fermentação ou modificação química, derivatização de produtos de fermentação, (ii) passíveis de derivatização com grupos funcionais adequados para conjugação por meio de conectores não dissulfeto para anticorpos, (iii) estáveis no plasma e (iv) eficazes contra uma variedade de linhagens de células tumorais.
[0377] Exemplos de maitansinoides adequados incluem ésteres de maitansinol, maitansinol sintético e análogos e derivados de maitansinol. Estão incluídos aqui quaisquer citotoxinas que inibem a formação de microtúbulos e que são altamente tóxicas para as células de mamíferos, como são os maitansinoides, maitansinol e análogos e derivados de maitansinol.
[0378] Exemplos de ésteres de maitansinol adequados incluem aqueles tendo um anel aromático modificado e aqueles tendo modificações em outras posições. Tais maitansinoides adequados são divulgados na Pat. dos EUA Nos 4.137.230; 4.151.042;
4.248.870; 4.256.746; 4.260.608; 4.265.814; 4.294.757; 4.307.016; 4.308.268;
4.308.269; 4.309.428; 4.313.946; 4.315.929; 4.317.821; 4.322.348; 4.331.598;
4.361.650; 4.362.663; 4.364.866; 4.424.219; 4.450.254; 4.322.348; 4.362.663;
4.371.533; 5.208.020; 5.416.064; 5.475.092; 5.585.499; 5.846.545; 6.333.410;
7.276.497; e 7.473.796, as divulgações de cada uma das quais são aqui incorporadas por referência, uma vez que se referem a maitansinoides e derivados dos mesmos.
[0379] Em algumas modalidades, os conjugados anticorpo-fármaco (ADCs) da presente divulgação utilizam o maitansinoide contendo tiol (DM1), formalmente denominado N2′-deacetil-N2′-(3-mercapto-1-oxopropil)-maitansina, como o agente citotóxico. O DM1 é representado pela seguinte fórmula estrutural V: (V)
[0380] Em uma outra modalidade, os conjugados da presente divulgação utilizam o maitansinoide contendo tiol N2′-deacetil-N2′(4-metil-4-mercapto-1- oxopentil)-maitansina (e.g., DM4) como o agente citotóxico. O DM4 é representado pela seguinte fórmula estrutural VI: (VI)
[0381] Outro maitansinoide compreendendo uma cadeia lateral que contém uma ligação tiol estericamente impedida é N2′-deacetil-N-2′(4-mercapto-1-oxopentil)- maitansina (denominado DM3), representado pela seguinte fórmula estrutural VII: (VII)
[0382] Cada um dos maitansinoides ensinados nas Pat. dos EUA Nos
5.208.020 e 7.276.497 também podem ser usados nos conjugados da presente divulgação. A este respeito, toda a divulgação de 5.208.020 e 7.276.697 é aqui incorporada por referência.
[0383] Muitas posições em maitansinoides podem servir como a posição para ligar covalentemente a porção de ligação e, consequentemente os anticorpos ou os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos (-L-Z-Ab ou -L-Z′, como aqui descrito).
Por exemplo, espera-se que a posição C-3 tendo um grupo hidroxila, a posição C-14 modificada com hidroximetila, a posição C-15 modificada com hidróxi e a posição C-
20 tendo um grupo hidróxi sejam úteis. Em algumas modalidades, a posição C-3 serve como a posição para ligar covalentemente a porção conectora e, em algumas modalidades particulares, a posição C-3 de maitansinol serve como a posição para ligar covalentemente a porção de ligação. Existem muitos grupos de ligação conhecidos na técnica para fabricar conjugados anticorpo-maitansinoide, incluindo, por exemplo, aqueles divulgados nas Pat. dos EUA Nos 5.208.020, 6.441.163 e Patente EP No 0425235 B1; Chari et al., Cancer Research 52: 127-131 (1992); e U.S.
2005/0169933 A1, as divulgações dos quais são aqui expressamente incorporadas por referência. Grupos de ligação adicionais são descritos e exemplificados aqui.
[0384] A presente divulgação também inclui vários isômeros e misturas de maitansinoides e conjugados. Certos compostos e conjugados da presente divulgação podem existir em várias formas estereoisoméricas, enantioméricas e diastereoméricas. Várias descrições para produzir tais conjugados anticorpo- maitansinoide são fornecidas nas Pat. dos EUA Nos 5.208.020; 5.416.064; 6.333.410;
6.441.163; 6.716.821; e 7.368.565, cada uma das quais é aqui incorporada em sua totalidade. Antraciclinas
[0385] Em outras modalidades, os anticorpos e os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui descritos podem ser conjugados com uma citotoxina que é uma molécula de antraciclina. Antraciclinas são compostos antibióticos que exibem atividade citotóxica. Estudos têm indicado que as antraciclinas podem operar para matar células por vários mecanismos diferentes incluindo: 1) intercalação das moléculas de fármaco no DNA da célula inibindo assim a síntese de ácido nucleico dependente de DNA; 2) produção pelo fármaco de radicais livres que então reagem com as macromoléculas celulares para causar danos às células ou 3) interações das moléculas de fármaco com a membrana da célula [ver, e.g., C. Peterson et al.”, Transport And Storage Of Anthracycline In Experimental Systems And Human
Leukemia” em Anthracycline Antibiotics In Cancer Therapy; N.R. Bachur, “Free Radical Damage” id. nas páginas 97 a 102]. Por causa do seu potencial citotóxico, as antraciclinas foram usadas no tratamento de numerosos cânceres, tais como leucemia, carcinoma de mama, carcinoma de pulmão, adenocarcinoma de ovário e sarcomas [ver e.g., P.H- Wiernik, em Anthracycline: Current Status And New Developments p 11]. As antraciclinas comumente usadas incluem doxorrubicina, epirrubicina, idarrubicina e daunomicina.
[0386] Acredita-se que o análogo de antraciclina, doxorrubicina (ADRIAMICINO) interage com o DNA pela intercalação e inibição da progressão da enzima topoisomerase II, que desenrola o DNA para transcrição. A doxorrubicina estabiliza o complexo topoisomerase II depois de quebrar a cadeia de DNA para replicação, evitando que a dupla hélice de DNA seja selada novamente e, desse modo, parando o processo de replicação. A doxorrubicina e daunorrubicina (DAUNOMICINA) são protótipos do produto natural citotóxico de antraciclinas quimioterapêuticas (Sessa et al., (2007) Cardiovasc. Toxicol. 7: 75-79).
[0387] Antraciclinas comumente usadas incluem doxorrubicina, epirrubicina, idarrubicina e daunomicina. Em algumas modalidades, a citotoxina é uma antraciclina selecionada do grupo que consiste em daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina e idarrubicina.
[0388] Exemplos representativos de antraciclinas incluem, mas não são limitados a daunorrubicina (Cerubidina; Bedford Laboratories), doxorrubicina (Adriamicina; Bedford Laboratories; também referida como cloridreto de doxorrubicina, hidróxi-daunorrubicina e Rubex), epirrubicina (Ellence; Pfizer) e idarrubicina (Idamicina; Pfizer Inc.). Acredita-se que o análogo de antraciclina, doxorrubicina (ADRIAMICINO) interage com o DNA pela intercalação e inibição da progressão da enzima topoisomerase II, que desenrola o DNA para transcrição. A doxorrubicina estabiliza o complexo topoisomerase II depois de quebrar a cadeia de
DNA para replicação, evitando que a dupla hélice de DNA seja selada novamente e, desse modo, parando o processo de replicação. A doxorrubicina e a daunorrubicina (DAUNOMICINA) são protótipos do produto natural citotóxico de antraciclinas quimioterapêuticas (Sessa et al., (2007) Cardiovasc. Toxicol. 7: 75-79).
[0389] Um exemplo não limitativo de uma antraciclina adequada para o uso aqui é PNU-159682 (“PNU”). PNU exibe citotoxicidade superior a 3000 vezes em relação à nemorrubicina precursora (Quintieri et al., Clinical Cancer Research 2005, 11, 1608-1617). PNU é representada pela fórmula estrutural: .
[0390] Múltiplas posições em antraciclinas, tais como PNU, podem servir como a posição para ligar covalentemente a porção de ligação e, consequentemente os anticorpos anti-CD117 ou os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos como aqui descrito. Por exemplo, conectores podem ser introduzidos através de modificações na cadeia lateral de hidroximetil cetona.
[0391] Em algumas modalidades, a citotoxina é um derivado de PNU representado pela fórmula estrutural: , em que a linha ondulada indica o ponto de fixação covalente ao conector do ADC como aqui descrito.
[0392] Em algumas modalidades, a citotoxina é um derivado de PNU representado pela fórmula estrutural: , em que a linha ondulada indica o ponto de fixação covalente ao conector do ADC como aqui descrito.
Pirrolobenzodiazepinas (PBDs)
[0393] Em outras modalidades, os anticorpos anti-HC (e.g., anticorpo anti- CD117 ou anticorpo anti-CD45) ou os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui descritos podem ser conjugados com uma citotoxina que é uma pirrolobenzodiazepina (PBD) ou uma citotoxina que compreende uma PBD. As PBDs são produtos naturais produzidos por certos actinomicetos e foram mostrados como sendo compostos alquilantes seletivos de sequências de DNA. As citotoxinas PBD incluem, mas não são limitadas a antramicina, PBDs diméricas e aquelas divulgadas em, por exemplo, Hartley, JA (2011) The development of pyrrolobenzodiazepines as antitumour agents. Expert Opin Inv Drug, 20(6), 733-744 e Antonow D, Thurston DE (2011) Synthesis of DNA-interactive pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepines (PBDs). Chem Rev 111: 2815-2864.
[0394] Em algumas modalidades, a citotoxina é um dímero de pirrolobenzodiazepina representado pela fórmula estrutural: , em que a linha ondulada indica o ponto de fixação do conector.
[0395] Em algumas modalidades, a citotoxina é conjugada com o anticorpo, ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, por meio de um conector maleimidocaproil.
[0396] Em algumas modalidades, o conector compreende um ou mais de um peptídeo, oligossacarídeo, -(CH2)p-, -(CH2CH2O)q-, -(C=O)(CH2)r-, -(C=O)(CH2CH2O)t- , -(NHCH2CH2)u-, -PAB, Val-Cit-PAB, Val-Ala-PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe-Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn-PAB ou Ala-PAB, em que cada um de p, q, r, t e u são inteiros de 1 a 12, selecionados independentemente para cada ocorrência.
[0397] Em algumas modalidades, o conector tem a estrutura da fórmula: , em que R1 é CH3 (Ala) ou (CH2)3NH(CO)NH2 (Cit).
[0398] Em algumas modalidades, o conector, antes da conjugação com o anticorpo e incluindo o substituinte reativo Z’, tomados juntos como L-Z’, tem a estrutura: , em que a linha ondulada indica o ponto de fixação da citotoxina (e.g., uma PBD). Em certas modalidades, R1 é CH3.
[0399] Em algumas modalidades, o conjugado citotoxina-conector, antes da conjugação com o anticorpo e incluindo o substituinte reativo Z’, tomados juntos como Cy-L-Z’, tem a fórmula estrutural:
.
[0400] Esse conjugado citotoxina-conector particular é conhecido como tesirina (SG3249), e foi descrito em, por exemplo, Howard et al., ACS Med. Chem.
Lett. 2016, 7(11), 983-987, cuja divulgação é aqui incorporada por referência em sua totalidade.
[0401] Em algumas modalidades, a citotoxina é um dímero de pirrolobenzodiazepina representado pela fórmula estrutural: , em que a linha ondulada indica o ponto de fixação do conector.
[0402] Em algumas modalidades, o conjugado citotoxina-conector, antes da conjugação com o anticorpo e incluindo o substituinte reativo Z’, tomados juntos como Cy-L-Z’, tem a fórmula estrutural: .
[0403] Esse conjugado citotoxina-conector particular é conhecido como talirina, e foi descrito, por exemplo, em relação à talirina do ADC Vadastuximabe
(SGN-CD33A), Mantaj et al., Angewandte Chemie International Edition English 2017,56, 462-488, cuja divulgação é aqui incorporada por referência em sua totalidade.
[0404] Em algumas modalidades, a citotoxina é um pseudodímero de indolinobenzodiazepina tendo a fórmula estrutural: , em que a linha ondulada indica o ponto de fixação do conector.
[0405] Em algumas modalidades, o conjugado citotoxina-conector, antes da conjugação com o anticorpo e incluindo o substituinte reativo Z’, tomados juntos como Cy-L-Z’, tem a fórmula estrutural: , que compreende o ADC IMGN632, divulgado em, por exemplo, Publicação de Pedido de Patente Internacional No WO2017004026, que é aqui incorporado por referência.
Caliqueamicina
[0406] Em outras modalidades, os anticorpos e os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui descritos podem ser conjugados com uma citotoxina que é um antibiótico antitumor de enedina (e.g., caliqueamicinas, ozogamicina). A família caliqueamicina de antibióticos é capaz de produzir quebras de DNA de filamento duplo em concentrações sub-picomolares. Para a preparação de conjugados da família caliqueamicina, ver Pat. dos EUA Nos 5.712.374; 5.714.586; 5.739.116; 5.767.285;
5.770.701; 5.770.710; 5.773.001; e 5.877.296 (todos da American Cyanamid Company). Análogos estruturais de caliqueamicina que podem ser usados incluem, mas não são limitados àqueles divulgados em, por exemplo, Hinman et al., Cancer Research 53: 3336-3342 (1993), Lode et al., Cancer Research 58: 2925-2928 (1998), e as patentes do EUA anteriormente mencionadas da American Cyanamid.
[0407] Uma caliqueamicina exemplificativa é designada γ1, que é aqui referenciada simplesmente como gama, e tem a fórmula estrutural: .
[0408] Em algumas modalidades, a caliqueamicina é um derivado de caliqueamicina gama ou um derivado de N-acetil caliqueamicina gama. Análogos estruturais de caliqueamicina que podem ser usados incluem, mas não são limitados àqueles divulgados em, por exemplo, Hinman et al., Cancer Research 53: 3336-3342 (1993), Lode et al., Cancer Research 58: 2925-2928 (1998), e as patentes dos EUA anteriormente mencionadas. As caliqueamicinas contêm uma porção de metiltrissulfeto que pode ser reagida com tióis apropriados para formar dissulfetos, ao mesmo tempo introduzir um grupo funcional que é útil na fixação de um derivado de caliqueamicina a um anticorpo anti-CD117 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo como aqui descrito, por meio de um conector. Para a preparação de conjugados da família caliqueamicina, ver Pat. dos EUA Nos 5.712.374; 5.714.586;
5.739.116; 5.767.285; 5.770.701; 5.770.710; 5.773.001; e 5.877.296 (todos da
American Cyanamid Company). Análogos estruturais de caliqueamicina que podem ser usados incluem, mas não são limitados àqueles divulgados em, por exemplo, Hinman et al., Cancer Research 53: 3336-3342 (1993), Lode et al., Cancer Research 58: 2925-2928 (1998), e as patentes dos EUA anteriormente mencionadas da American Cyanamid.
[0409] Em uma modalidade, a citotoxina do ADC, como aqui divulgado, é um derivado de dissulfeto de caliqueamicina representado pela fórmula estrutural: , em que a linha ondulada indica o ponto de fixação do conector.
Citotoxinas Adicionais
[0410] Em outras modalidades, os anticorpos e os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui descritos podem ser conjugados com uma citotoxina diferente ou além daquelas citotoxinas aqui divulgadas acima. Citotoxinas adicionais adequadas para o uso com as composições e métodos aqui descritos incluem, sem limitação, 5-etiniluracila, abiraterona, acilfulveno, adecipenol, adozelesina, aldesleucina, altretamina, ambamustina, amidox, amifostina, ácido aminolevulínico, anrubicina, ansacrina, anagrelida, anastrozol, andrografólido, inibidores da angiogênese, antarelix, proteína-1 morfogenética anti-dorsalizante, antiandrogênio, carcinoma prostático, antiestrogênio, antineoplaston, oligonucleotídeos antisenso, glicinato de afidicolina, genes modulatores da apoptose, reguladores da apoptose, ácido apurínico, asulacrina, atamestano, atrimustina, axinastatina 1, axinastatina 2, axinastatina 3, azasetrona, azatoxina, azatirosina, derivados de bacatina III, balanol,
batimastato, antagonistas BCR/ABL, benzoclorinas, benzoilestaurosporina, derivados de beta lactama, beta-aletina, betaclamicina B, ácido betulínico, inibidores bFGF,
bicalutamida, bisantreno, bisaziridinilespermina, bisnafida, bistrateno A, bizelesina,
breflato, bleomicina A2, bleomicina B2, bropirimina, budotitano, butionina sulfoximina,
calcipotriol, calfostina C, derivados de camptotecina (e.g., 10-hidróxi-camptotecina),
capecitabina, carboxamida-amino-triazol, carboxiamidotriazol, carzelesina, inibidores de caseína cinase, castanospermina, cecropina B, cetrorrelix, clorinas, sulfonamida de cloroquinoxalina, cicaprosta, cis-porfirina, cladribina, clomifeno e análogos do mesmo, clotrimazol, colismicina A, colismicina B, combretastatina A4, análogos de combretastatina, conagenina, crambescidina 816, crisnatol, criptoficina 8, derivados de criptoficina A, curacina A, ciclopentantraquinonas, cicloplatam, cipemicina,
ocfosfato de citarabina, fator citolítico, citostatina, dacliximabe, decitabina,
desidrodidemnina B, 2’desoxicoformicina (DCF), deslorelina, dexifosfamida,
dexrazoxano, dexverapamil, diaziquona, didemnina B, didox, dietilnorspermina, di-
hidro-5-azacitidina, di-hidrotaxol, dioxamicina, difenil espiromustina, discodermolida,
docosanol, dolasetron, doxifluridina, droloxifeno, dronabinol, duocarmicina SA,
ebseleno, ecomustina, edelfosina, edrecolomabe, eflornitina, elemeno, emitefur,
epotilonas, epitilones, epristerida, estramustina e análogos do mesma, etoposídeo, 4’-
fosfato de etoposídeo (também referido como etopofos), exemestano, fadrozol,
fazarabina, fenretinida, filgrastim, finasteride, flavopiridol, flezelastina, fluasterona,
fludarabina, cloridreto de fluorodaunorunicina, forfenimex, formestano, fostriecina,
fotemustina, gadolínio texafirina, nitrato de gálio, galocitabina, ganirelix, inibidores da gelatinase, gemcitabina, inibidores de glutationa, hepsulfam, homoharringtonina
(HHT), hipericina, ácido ibandrônico, idoxifeno, idramantona, ilmofosina, ilomastat,
imidazoacridonas, imiquimod, peptídeos imunoestimulantes, iobenguane,
iododoxorrubicina, ipomeanol, irinotecano, iroplact, irsogladina, isobengazol,
jasplaquinolídeo, kahalalida F, triacetato de lamelarina-N, lanreotida, leinamicina,
lenograstima, sulfato de lentinana, leptolstatina, letrozol, compostos de platina lipofílica, lissoclinamida 7, lobaplatina, lometrexol, lonidamina, losoxantrona, loxoribina, lurtotecano, lutécio texafirina, lisofilina, masoprocol, maspina, inibidores da metaloproteinase da matriz, menogarila, merbarone, meterelina, metioninase, metoclopramida, inibidor da MIF, ifepristona, miltefosina, mirimostim, mitracin, mitoguazona, mitolactol, mitomicina e análogos da mesma, mitonafida, mitoxantrona, mofaroteno, molgramostim, micaperóxido B, miriaporona, N-acetildinalina, N- benzamidas substituídas, nafarelina, nagrestip, napavina, nafterpina, nartograstim, nedaplatina, nemorrubicina, ácido neridrônico, nilutamida, nisamicina, nitrolin, octreotide, okicenone, onapristona, ondansetrona, oracina, ormaplatina, oxaliplatina, oxaunomicina, paclitaxel e análogos do mesmo, palauamina, palmitoilrizoxina, ácido pamidrônico, panaxitriol, panomifeno, parabactina, pazeliptina, pegaspargase, peldesina, pentosan polissulfato sódico, pentostatina, pentrozol, perflubron, perfosfamida, fenazinomicina, picibanila, pirarrubicina, piritrexim, podofilotoxina, porfiromicina, inibidores da fosforilase de nucleosídeos de purina, raltitrexede, rizoxina, rogletimida, roituquina, rubiginona B1, ruboxil, safingol, saintopina, sarcofitol A, sargramostima, sobuzoxane, sonermina, ácido esparfósico, espiramicina D, espiromustina, estipiamida, sulfinosina, talimustina, tegafur, temozolomida, teniposídeo, taliblastina, tiocoralina, tirapazamina, topotecano, topsentina, triciribina, trimetrexato, veramina, vinorelbina, vinxaltine, vorozol, zeniplatina e zilascorbe, entre outros.
Conectores
[0411] Uma variedade de conectores pode ser usada para conjugar os anticorpos, ou fragmentos de anticorpo, aqui descritos (e.g., um anticorpo anti-CD117 ou um anticorpo anti-CD45) com uma molécula citotóxica.
[0412] O termo “conector”, como aqui usado, significa uma porção química divalente compreendendo uma ligação covalente ou uma cadeia de átomos que fixa covalentemente um anticorpo anti-HC (e.g., um anticorpo anti-CD117 ou um anticorpo anti-CD45) dos conjugados fármacos (ADC) da presente divulgação (ADCs; Ab-Z-L- D, onde D é uma citotoxina). Os conectores adequados têm dois terminais reativos, um para a conjugação com um anticorpo e o outro para a conjugação com uma citotoxina. O reativo terminal para conjugação com anticorpo do conector (porção reativa, Z′) é tipicamente um sítio que é capaz de conjugar com o anticorpo por meio de um grupo tiol de cisteína ou lisina amina no anticorpo e, portanto, é tipicamente um grupo reativo com tiol, tal como uma ligação dupla (como em maleimida) ou um grupo de partida, tal como um cloro, bromo, iodo ou um grupo R-sulfanila, ou um grupo reativo com amina, tal como um grupo carboxila; enquanto o terminal reativo para conjugação com anticorpo do conector é tipicamente um sítio que é capaz de conjugar com a citotoxina através da formação de uma ligação amida com uma amina básica ou grupo carboxila na citotoxina e, portanto, é tipicamente um grupo carboxila ou amina básica. Quando o termo “conector” é usado para descrever o conector na forma conjugada, um ou ambos os terminais reativos serão ausentes (tal como porção reativa Z′, tendo sido convertida em porção química Z) ou incompletos (tal como sendo apenas a carbonila do ácido carboxílico) por causa da formação das ligações entre o conector e/ou a citotoxina, e entre o conector e/ou o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Tais reações de conjugação são descritas mais adiante neste documento.
[0413] Em algumas modalidades, o conector é clivável sob condições intracelulares, de tal modo que a clivagem do conector libere a unidade de fármaco do anticorpo no ambiente intracelular. Em ainda outras modalidades, a unidade de conexão não é clivável e o fármaco é liberado, por exemplo, por degradação do anticorpo. Os conectores úteis para os presentes ADCs são preferivelmente estáveis extracelularmente, evitam a agregação de moléculas do ADC e mantêm o ADC livremente solúvel em meios aquosos e em um estado monomérico. Antes do transporte ou liberação em uma célula, o ADC é preferivelmente estável e permanece intacto, i.e. o anticorpo permanece ligado à porção de fármaco. Os conectores são estáveis fora da célula alvo e podem ser clivados em alguma taxa eficaz dentro da célula. Um conector eficaz irá: (i) manter as propriedades de ligação específicas do anticorpo; (ii) permitir a liberação intracelular do conjugado ou porção de fármaco; (iii) permanecer estável e intacto, i.e. não clivado até que o conjugado tenha sido liberado ou transportado para seu sítio alvo; e (iv) manter um efeito citotóxico de morte celular ou um efeito citostático da porção citotóxica. A estabilidade do ADC pode ser medida por técnicas analíticas padrão, tais como espectroscopia de massa, HPLC e a técnica de separação/análise LC/MS. A fixação covalente do anticorpo e a porção de fármaco exige que o conector tenha dois grupos funcionais reativos, i.e. bivalência em um sentido reativo. Os conectores reagentes bivalentes que são úteis para fixar duas ou mais porções funcional ou biologicamente ativas, tais como peptídeos, ácidos nucleicos, fármacos, toxinas, anticorpos, haptenos e grupos repórter são conhecidos, e métodos foram descritos para seus conjugados resultantes (Hermanson, G. T.
(1996) Bioconjugate Technics; Academic Press: New York, p. 234-242).
[0414] Os conectores incluem aqueles que podem ser clivados, por exemplo, por hidrólise enzimática, fotólise, hidrólise sob condições ácidas, hidrólise sob condições básicas, oxidação, redução de dissulfeto, clivagem nucleofílica ou clivagem organometálica (ver, por exemplo, Leriche et al., Bioorg. Med. Chem., 20: 571-582, 2012, cuja divulgação é aqui incorporada por referência no que se refere aos conectores adequados para conjugação covalente). Os conectores cliváveis adequados podem incluir, por exemplo, porções químicas, tais como uma hidrazina, um dissulfeto, um tioéter ou um dipeptídeo.
[0415] Conectores hidrolisáveis sob condições ácidas incluem, por exemplo, hidrazonas, semicarbazonas, tiosemicarbazonas, amidas cis-aconíticas, ortoésteres, acetais, cetais ou semelhantes. (Ver, e.g., Pat. dos EUA Nos 5.122.368; 5.824.805;
5.622.929; Dubowchik e Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83: 67-123; Neville et al., 1989, Biol. Chem. 264: 14653-14661, a divulgação de cada uma das quais é aqui incorporada por referência em sua totalidade no que se refere aos conectores adequados para conjugação covalente. Tais conectores são relativamente estáveis sob condições de pH neutro, tais como aquelas no sangue, mas são instáveis abaixo do pH 5,5 ou 5,0, o pH aproximado do lisossoma.
[0416] Conectores cliváveis sob condições de redução incluem, por exemplo, um dissulfeto. Uma variedade de conectores de dissulfeto são conhecidos na técnica, incluindo, por exemplo, aqueles que podem ser formados usando SATA (N- succinimidil-S-acetiltioacetato), SPDP (N-succinimidil-3-(2-piridilditio)propionato), SPDB (N-succinimidil-3-(2-piridilditio)butirato) e SMPT (N-succinimidil-oxicarbonil- alfa-metil-alfa-(2-piridil-ditio)tolueno), SPDB e SMPT (Ver, e.g., Thorpe et al., 1987, Cancer Res. 47: 5924-5931; Wawrzynczak et al., In Immunoconjugates: Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer (C. W. Vogel ed., Oxford U. Press,
1987. Ver também Pat. dos EUA No 4.880.935, a divulgação de cada uma das quais é aqui incorporada por referência em sua totalidade no que se refere aos conectores adequados para conjugação covalente.
[0417] Conectores suscetíveis a hidrólise enzimática podem ser, e.g., um conector contendo peptídeo que é clivado por uma peptidase intracelular ou enzima protease, incluindo, mas não limitada a uma protease lisossomal ou endossomal. Uma vantagem de usar liberação proteolítica intracelular do agente terapêutico é que o agente é tipicamente atenuado quando conjugado e as estabilidades séricas dos conjugados são tipicamente altas. Em algumas modalidades, a conector peptidil tem pelo menos dois aminoácidos de comprimento ou pelo menos três aminoácidos de comprimento. Os conectores de aminoácidos exemplificativos incluem um dipeptídeo, um tripeptídeo, um tetrapeptídeo ou um pentapeptídeo. Exemplos de peptídeos adequados incluem aqueles contendo aminoácidos, tais como Valina, Alanina,
Citrulina (Cit), Fenilalanina, Lisina, Leucina e Glicina. Os resíduos de aminoácido que compreendem um componente conector de aminoácido incluem aqueles que ocorrem naturalmente, bem como aminoácidos menores e análogos de aminoácidos que não ocorrem naturalmente, tais como citrulina. Dipeptídeos exemplificativos incluem valina-citrulina (vc ou val-cit) e alanina-fenilalanina (af ou ala-fe). Tripeptídeos exemplificativos incluem glicina-valina-citrulina (gli-val-cit) e glicina-glicina-glicina (gli- gli-gli). Em algumas modalidades, o conector inclui um dipeptídeo, tal como Val-Cit, Ala-Val, ou Phe-Lys, Val-Lys, Ala-Lys, Phe-Cit, Leu-Cit, Ile-Cit, Phe-Arg ou Trp-Cit. Os conectores contendo dipeptídeos, tais como Val-Cit ou Phe-Lys são divulgados em, por exemplo, Pat. dos EUA No 6.214.345, cuja divulgação é aqui incorporada por referência em sua totalidade no que se refere aos conectores adequados para conjugação covalente. Em algumas modalidades, o conector inclui um dipeptídeo selecionado de Val-Ala e Val-Cit.
[0418] Os conectores adequados para conjugar os anticorpos, ou fragmentos de anticorpo, aqui descritos com uma molécula citotóxica incluem aqueles capazes de liberar uma citotoxina por um processo de eliminação 1,6 (um grupo “autoimolativo”). Porções químicas capazes deste processo de eliminação incluem o grupo p- aminobenzila (PAB), ácido 6-maleimido-hexanoico, carbonatos sensíveis ao pH e outros reagentes como descrito em Jain et al., Pharm. Res. 32: 3526-3540, 2015, cuja divulgação é aqui incorporada por referência em sua totalidade no que se refere aos conectores adequados para conjugação covalente.
[0419] Em algumas modalidades, o conector inclui um grupo “autoimolativo”, tal como o PAB ou PABC (para-aminobenziloxicarbonila) anteriormente mencionado, que são divulgados em, por exemplo, Carl et al., J. Med. Chem. (1981) 24: 479-480; Chakravarty et al. (1983) J. Med. Chem. 26: 638-644; US 6214345; US20030130189; US20030096743; US6759509; US20040052793; US6218519; US6835807; US6268488; US20040018194; W098/13059; US20040052793; US6677435;
US5621002; US20040121940; W02004/032828). Outras dessas porções químicas capazes deste processo (“conectores autoimolativos”) incluem carbamatos de metileno e grupos heteroarila, tais como aminotiazóis, aminoimidazóis, aminopirimidinas e semelhantes. Os conectores contendo tais grupos autoimolativos heterocíclicos são divulgados em, por exemplo, Publicação de Patente dos EUA Nos 20160303254 e 20150079114 e Patente dos EUA No 7.754.681; Hay et al. (1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9: 2237; US 2005/0256030; de Groot et al. (2001) J. Org.
Chem. 66: 8815-8830; e US 7223837. Em algumas modalidades, um dipeptídeo é usado em combinação com um conector autoimolativo.
[0420] Conectores adequados para o uso aqui podem incluir ainda um ou mais grupos selecionados de alquileno C1-C6, heteroalquileno C1-C6, alquenileno C2-C6, heteroalquenileno C2-C6, alquinileno C2-C6, heteroalquinileno C2-C6, cicloalquileno C3- C6, heterocicloalquileno, arileno, heteroarileno e combinações dos mesmos, cada um dos quais pode ser opcionalmente substituído. Exemplos não limitativos de tais grupos incluem as unidades (CH2)p, (CH2CH2O)p e -(C=O)(CH2)p -, em que p é um número inteiro de 1 a 6, independentemente selecionado para cada ocasião.
[0421] Os conectores adequados podem conter grupos tendo propriedades de intensificamento de solubilidade. Os conectores incluindo a unidade (CH2CH2O)p (polietilenoglicol, PEG), por exemplo, podem intensificar a solubilidade, assim como as cadeias alquila substituídas por resíduos de amino, ácido sulfônico, ácido fosfônico ou ácido fosfórico. Os conectores incluindo tais porções são divulgados em, por exemplo, Patentes dos EUA Nos 8.236.319 e 9.504.756, a divulgação de cada uma das quais é aqui incorporada por referência em sua totalidade no que se refere aos conectores adequados para conjugação covalente. Outros grupos de intensificamento de solubilidade incluem, por exemplo, os grupos acil e carbamoil sulfamida, tendo a estrutura:
em que a é 0 ou 1; e R10 é selecionado do grupo consiste em hidrogênio, grupos alquila C1-C24, grupos cicloalquila C3-C24, grupos (hetero)arila C1-C24, grupos alquil(hetero)arila C1- C24 e grupos (hetero)arilalquila C1-C24, os grupos alquila C1-C24, grupos cicloalquila C3-C24, grupos (hetero)arila C2-C24, grupos alquil(hetero)arila C3-C24 e grupos (hetero)arilalquila C3-C24, cada um dos quais pode ser opcionalmente substituído e/ou opcionalmente interrompido por um ou mais heteroátomos selecionados de O, S e NR11R12, em que R11 e R12 são independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio e grupos alquila C1-C4; ou R10 é uma citotoxina, em que a citotoxina está opcionalmente conectada a N por meio de uma porção espaçadora.
Os conectores contendo tais grupos são descritos, por exemplo, na Patente dos EUA No 9.636.421 e Publicação de Pedido de Patente dos EUA No 2017/0298145, as divulgações dos quais são aqui incorporadas por referência em sua totalidade no que se refere aos conectores adequados para conjugação covalente com citotoxinas e anticorpos ou os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos.
[0422] Em algumas modalidades, o conector pode incluir um ou mais de uma hidrazina, um dissulfeto, um tioéter, um dipeptídeo, um grupo p-aminobenzila (PAB), um grupo autoimolativo heterocíclico, uma alquila C1-C6 opcionalmente substituída, uma heteroalquila C1-C6 opcionalmente substituída, uma alquenila C2-C6 opcionalmente substituída, uma heteroalquenila C2-C6 opcionalmente substituída, uma alquinila C2-C6 opcionalmente substituída, uma heteroalquinila C2-C6 opcionalmente substituída, uma cicloalquila C3-C6 opcionalmente substituída, uma heterocicloalquila opcionalmente substituída, uma arila opcionalmente substituída, uma heteroarila opcionalmente substituída, um grupo de intensificamento de solubilidade, acila, grupo -(C=O)- ou -(CH2CH2O)p-, em que p é um número inteiro de
1 a 6. Um especialista na técnica reconhecerá que um ou mais dos grupos listados podem estar presentes na forma de uma espécie bivalente (diradical), e.g., alquileno C1-C6 e semelhantes.
[0423] Em algumas modalidades, o conector L compreende a porção *-L1L2- **, em que: L1 está ausente ou é -(CH2)mNR13C(=O)-, -(CH2)mNR13-, -(CH2)mX3(CH2)m-, ou ; L2 está ausente ou é -(CH2)m-, -NR13(CH2)m-, -(CH2)mNR13C(=O)(CH2)m-, -X4, -(CH2)mNR13C(=O)X4, -(CH2)mNR13C(=O)-, -((CH2)mO)n(CH2)m-, - ((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, - NR13((CH2)mO)nX3(CH2)m-, - NR13((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)n-, - (CH2)mNR13(CH2)m-, -(CH2)mNR13C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, - (CH2)mC(=O)NR13(CH2)mNR13C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)-, - (CH2)mNR13(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, - (CH2)mC(=O)NR13(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR13(CH2)mX3(CH2)m-, - (CH2)mX3(CH2)mNR13C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR13(CH2)m-, - (CH2)mO)n(CH2)mNR13C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR13(CH2)m(O(CH2)m)n-, - (CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -(CH2)mNR13(CH2)mC(=O)-, - (CH2)mC(=O)NR13(CH2)mNR13C(=O)-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX3(CH2)m-, - (CH2)mX3((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)-, - (CH2)mC(=O)NR13(CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, - (CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR13C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, - (CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)n-, -(CH2)mC(=O)NR13(CH2)mC(=O)-, - (CH2)mC(=O)NR13(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -((CH2)mO)n(CH2)mNR13C(=O)(CH2)m-, -
(CH2)mC(=O)NR13(CH2)mC(=O)NR13(CH2)m-, -
(CH2)mNR13C(=O)(CH2)mNR13C(=O)(CH2)-(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR13-, -
(CH2)mC(=O)NR13-, -(CH2)mX3-, -C(R13)2(CH2)m-, -(CH2)mC(R13)2NR13-, -
(CH2)mC(=O)NR13(CH2)mNR13-, -(CH2)mC(=O)NR13(CH2)mNR13C(=O)NR13-, -
(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, - C(R13)2(CH2)mNR13C(=O)(CH2)m-, -
(CH2)mC(=O)NR13(CH2)mC(R13)2NR13-, - C(R13)2(CH2)mX3(CH2)m-, -
(CH2)mX3(CH2)mC(R13)2NR13-, -C(R13)2(CH2)mOC(=O)NR13(CH2)m-, -
(CH2)mNR13C(=O)O(CH2)mC(R13)2NR13-, -(CH2)mX3(CH2)mNR13-, -
(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR13-, -(CH2)mNR13-, -
(CH2)mC(=O)NR13(CH2)m(O(CH2)m)nNR13 -, -(CH2)m(O(CH2)m)nNR13-, -
(CH2CH2O)n(CH2)m-, -(CH2)m(OCH2CH2)n; -(CH2)mO(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2-, -
(CH2)mC(=O)NR13(CH2)mS(=O)2-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2-, -(CH2)mX2X1C(=O)-, -
(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -
(CH2)mX3(CH2)mX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1 C(=O)-, -
(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR13(CH2)mNR13C(=O)-, -
(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR13(CH2)mC(=O)-, -
(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR13(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -
(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NR13(CH2)m-, -(CH2)mX3(O(CH2)m)nC(=O)-, -
(CH2)mNR13C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)NR13(CH2)m-, -
(CH2)mNR13C(=O)NR13(CH2)m- ou -(CH2)mX3(CH2)mNR13C(=O)-;
em que
X1 é ou
X2 é ou
X3 é ou ;e
X4 é
;
em que
R13 é independentemente selecionado para cada ocasião de H e alquila C1- C6;
m é independentemente selecionado para cada ocasião de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,
8, 9 e 10; n é independentemente selecionado para cada ocasião de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 e 14; e em que o único asterisco (*) indica o ponto de fixação à citotoxina (e.g., uma amatoxina), e o asterisco duplo (**) indica o ponto de fixação ao substituinte reativo Z’ ou porção química Z, com a condição de que L1 e L2 não estejam ausentes.
[0424] Em algumas modalidades, o conector inclui um grupo p-aminobenzila (PAB). Em uma modalidade, o grupo p-aminobenzila está disposto entre o fármaco citotóxico e um sítio de clivagem de protease no conector. Em uma modalidade, o grupo p-aminobenzila é parte de uma unidade p-aminobenziloxicarbonila. Em uma modalidade, o grupo p-aminobenzila é parte de uma unidade p-aminobenzilamido.
[0425] Em algumas modalidades, o conector compreende PAB, Val-Cit-PAB, Val-Ala- PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe-Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu-Lys, Gly- Gly-Arg, Ala-Ala-Asn-PAB ou Ala-PAB.
[0426] Em algumas modalidades, o conector compreende uma combinação de um ou mais de um peptídeo, oligossacarídeo, -(CH2)p-, -(CH2CH2O)p-, PAB, Val- Cit-PAB, Val-Ala-PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe-Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu- Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn-PAB ou Ala-PAB.
[0427] Em algumas modalidades, o conector compreende uma unidade - (C=O)(CH2)p-, em que p é um número inteiro de 1 a 6.
[0428] Em algumas modalidades, o conector compreende uma unidade - (CH2)n-, em que n é um número inteiro de 2 a 6.
[0429] Em certas modalidades, o conector do ADC é maleimidocaproil-Val- Ala-para-aminobenzila (mc-Val-Ala-PAB).
[0430] Em certas modalidades, o conector do ADC é maleimidocaproil-Val- Cit-para-aminobenzila (mc-vc-PAB).
[0431] Em algumas modalidades, o conector compreende
.
[0432] Em algumas modalidades, o conector compreende MCC (4-[N- maleimidometil]ciclo-hexano-1-carboxilato).
[0433] Em uma modalidade específica, o conector compreende a estrutura em que as linhas onduladas indicam os pontos de fixação da citotoxina e da porção reativa Z′. Em outra modalidade específica, o conector compreende a estrutura
O O H N N N H H O
HN H2N O em que as linhas onduladas indicam os pontos de fixação da citotoxina e da porção reativa Z′. Tais conectores PAB-dipeptídeo-propionil são divulgados em, e.g., Publicação de Pedido de Patente No WO2017/149077, que é aqui incorporada por referência em sua totalidade. Além disso, as citotoxinas divulgadas em WO2017/149077 são incorporadas aqui por referência.
[0434] Os conectores que podem ser usados para conjugar um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, com um agente citotóxico incluem aqueles que são ligados covalentemente ao agente citotóxico em uma extremidade do conector e, na outra extremidade do conector, contêm uma porção química formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente no conector e um substituinte reativo presente dentro do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, que se liga a CD117. Substituintes reativos que podem estar presentes dentro de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, que se liga a CD117 incluem, sem limitação, porções hidroxila de resíduos de serina, treonina e tirosina; porções amino de resíduos de lisina; porções carboxila de resíduos de ácido aspártico e ácido glutâmico; e porções tiol de resíduos de cisteína, bem como porções de propargil, azido, haloarila (e.g., fluoroarila), halo- heteroarila (e.g., fluoro-heteroarila), haloalquila e halo-heteroalquila de aminoácidos que não ocorrem naturalmente.
[0435] Exemplos de conectores úteis para a síntese de conjugados fármaco- anticorpo incluem aqueles que contêm eletrófilos, tais como aceptores de Michael (e.g., maleimidas), ésteres ativados, compostos carbonila deficientes em elétrons e aldeídos, entre outros, adequados para a reação com os substituintes nucleofílicos presentes dentro de anticorpos ou dos fragmentos de ligação ao antígeno, tais como porções amina e tiol. Por exemplo, os conectores adequados para a síntese de conjugados fármaco-anticorpo incluem, sem limitação, succinimidil 4-(N- maleimidometil)-ciclo-hexano-L-carboxilato (SMCC), N-succinimidil iodoacetato (SIA), sulfo-SMCC, éster de m-maleimidobenzoil-N-hidroxisuccinimidil (MBS), sulfo-MBS e succinimidil iodoacetato, entre outros descrito, por exemplo, Liu et al., 18: 690-697, 1979, cuja divulgação é aqui incorporada por referência no que se refere aos conectores para conjugação química. Conectores adicionais incluem os conectores maleimidocaproil não cliváveis, que são particularmente úteis para a conjugação de agentes de rompimento de microtúbulos, tais como auristatinas, são descritos por Doronina et al., Bioconjugate Chem. 17: 14-24, 2006, cuja divulgação é aqui incorporada por referência no que se refere aos conectores para conjugação química.
[0436] Será reconhecido por um especialista na técnica que qualquer um ou mais dos grupos químicos, porções e características aqui divulgados podem ser combinados de múltiplas maneiras para formar conectores úteis para a conjugação dos anticorpos e citotoxinas como aqui divulgado. Outros conectores úteis em conjunto com as composições e métodos aqui descritos, são descritos, por exemplo, na Publicação de Pedido de Patente dos EUA No 2015/0218220, cuja divulgação é aqui incorporada por referência em sua totalidade.
[0437] Em certas modalidades, um intermediário, que é o precursor do conector, é reagido com a porção de fármaco sob condições apropriadas. Em certas modalidades, os grupos reativos são usados no fármaco e/ou no intermediário ou conector. O produto da reação entre o fármaco e o intermediário, ou o fármaco derivatizado, é subsequentemente reagido com o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno sob condições apropriadas. Alternativamente, o conector ou intermediário pode primeiro ser reagido com o anticorpo ou um anticorpo derivatizado e depois reagido com o fármaco ou fármaco derivatizado. Tais reações de conjugação serão agora descritas de forma mais completa.
[0438] Várias reações diferentes estão disponíveis para a fixação covalente de conectores ou conjugados fármaco-conector com o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Os pontos de fixação adequados na molécula de anticorpo incluem os grupos amina de lisina, os grupos de ácido carboxílico livres de ácido glutâmico e ácido aspártico, os grupos sulfidrila de cisteína e as várias porções dos aminoácidos aromáticos. Por exemplo, a fixação covalente não específica pode ser realizada usando uma reação de carbodi-imida para ligar um grupo carbóxi (ou amino) em um composto a um grupo amino (ou carbóxi) em uma porção de anticorpo.
Além disso, agentes bifuncionais, tais como dialdeídos ou imidoésteres também podem ser usados para ligar o grupo amino em um composto a um grupo amino em uma porção de anticorpo. Também disponível para a fixação de fármacos a agentes de ligação é a reação de base de Schiff. Este método envolve a oxidação de periodato de um fármaco que contém grupos glicol ou hidróxi, formando assim um aldeído que é então reagido com o agente de ligação. A fixação ocorre por meio da formação de uma base de Schiff com grupos amino do agente de ligação. Os isotiocianatos também podem ser usados como agentes de acoplamento para fixar covalentemente fármacos aos agentes de ligação. Outras técnicas são conhecidas pelo especialista e dentro do escopo da presente divulgação.
[0439] Conectores úteis para conjugação com os anticorpos ou os fragmentos de ligação ao antígeno como aqui descritos incluem, sem limitação, conectores contendo porções químicas Z formadas por reações de acoplamento como representado na Tabela 2, abaixo. As linhas curvadas designam os pontos de fixação do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, e da molécula citotóxica, respectivamente.
Tabela 2. Porções químicas Z exemplificativas formadas por reações de acoplamento na formação de conjugados anticorpo-fármaco Reações de Porção química Z Formada por Reações de Acoplamento acoplamento Exemplificativas [3+2] Cicloadição [3+2] Cicloadição [3+2] Cicloadição, Esterificação [3+2] Cicloadição,
Esterificação
[3+2] Cicloadição, Esterificação
[3+2] Cicloadição, Esterificação
[3+2] Cicloadição, Esterificação
[3+2] Cicloadição, Esterificação
[3+2] Cicloadição, Esterificação
[3+2] Cicloadição, Esterificação
[3+2] Cicloadição, Esterificação
[3+2] Cicloadição, Esterificação
[3+2]
Cicloadição, Esterificação
[3+2] Cicloadição, Etherification
[3+2] Cicloadição
Adição de Michael
Adição de Michael
Condensação de imina, Amidação
Condensação de imina Formação de dissulfeto Alquilação de tiol Condensação, Adição de Michael
[0440] Um especialista na técnica reconhecerá que um substituinte reativo Z′ ligado ao conector e um substituinte reativo no anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, estão envolvidos na reação de acoplamento covalente para produzir a porção química Z, e reconhecerão a porção reativa Z′. Portanto, os conjugados anticorpo-fármaco úteis em conjunto com os métodos aqui descritos podem ser formados pela reação de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, com um conector ou conjugado citotoxina-conector, como aqui descrito, o conector ou conjugado citotoxina-conector incluindo um substituinte reativo Z′, adequado para reação com um substituinte reativo no anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, para formar a porção química Z.
[0441] Como representado na Tabela 2, exemplos de substituintes adequadamente reativos no conector e anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo incluem um nucleófilo/eletrófilo par (e.g., um par tiol/haloalquila, um par amina/carbonila ou um par tiol/α,β-carbonila insaturada, e semelhantes), um par dieno/dienófilo (e.g., um par azida/alcino ou um par dieno/α,β-carbonila insaturada, entre outros), e semelhantes. As reações de acoplamento entre os substituintes reativos para formar a porção química Z incluem, sem limitação, alquilação de tiol, alquilação de hidroxila, alquilação de amina, condensação de amina ou hidroxilamina, formação de hidrazina, amidação, esterificação, formação de dissulfeto, cicloadição (e.g., [4+2] cicloadição de Diels-Alder, cicloadição de Huisgen [3+2], entre outros), substituição nucleofílica aromática, substituição eletrofílica aromática e outras modalidades reativas conhecidas na técnica ou aqui descritas. Preferivelmente, o conector contém um grupo funcional eletrofílico para reação com um grupo funcional nucleofílico no anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
[0442] Em algumas modalidades, Z’ é -NR13C(=O)CH=CH2, -N3, -SH, - S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NR13S(=O)2(CH=CH2), - NR13C(=O)CH2R14, -NR13C(=O)CH2Br, -NR13C(=O)CH2I, -NHC(=O)CH2Br, - NHC(=O)CH2I, -ONH2, -C(O)NHNH2, -CO2H, -NH2, -NH(C=O), -NC(=S),
OH O O H N P P O O O O N OH OH N
N O O O NH2
HO OH N P N , HO O OH O O H H N N P P O O O O N OH OH N
O O O NH2
HO OH N P N HO O , OH O O H N P P O O O O N OH OH N
O O NH2
HO OH N P N , HO O OH O O H H N N P P O O O O N OH OH N
O O O NH2
HO OH N P N HO O ,
F F F F O O O F H2N H2N
O O F F O O , O F F , , H ,
O H2N
O O O O O N N O N O
H O , O ou , or ; em que R13 é independentemente selecionado para cada ocasião de H e alquila C1- C6; R14 é -S(CH2)nCHR15NHC(=O)R13; R15 é R13 ou -C(=O)OR13; R16 é independentemente selecionado para cada ocasião de H, alquila C1-C6, F, Cl, e -OH; R17 é independentemente selecionado para cada ocasião de H, alquila C1-C6, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2 e-OH; e R18 é independentemente selecionado para cada ocasião de H, alquila C1-C6, F, benzilóxi substituído por -C(=O)OH, benzila substituída por -C(=O)OH, alcóxi C1-C4 substituído por -C(=O)OH e alquila C1-C4 substituído por -C(=O)OH.
[0443] Substituintes reativos que podem estar presentes dentro de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, como aqui divulgado incluem, sem limitação, grupos nucleofílicos tais como (i) grupos amina N-terminais, (ii) grupos amina de cadeia lateral, e.g., lisina, (iii) grupos tiol de cadeia lateral, e.g., cisteína e (iv) grupos hidroxila ou amino de açúcar onde o anticorpo é glicosilado.
Substituintes reativos que podem estar presentes dentro de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, como aqui divulgado incluem, sem limitação, porções hidroxila de resíduos de serina, treonina e tirosina; porções amino de resíduos de lisina; porções carboxila de resíduos de ácido aspártico e ácido glutâmico; e porções tiol de resíduos de cisteína, bem como porções de propargil, azido, haloarila (e.g., fluoroarila), halo-heteroarila (e.g., fluoro-heteroarila), haloalquila e halo-heteroalquila de aminoácidos que não ocorrem naturalmente. Em algumas modalidades, os substituintes reativos presentes dentro de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo como aqui divulgado incluem, porções de amina ou tiol. Certos anticorpos têm dissulfetos intercadeia reduzíveis, i.e. pontes de cisteína.
Os anticorpos podem ser tornados reativos para conjugação com reagentes conectores pelo tratamento com um agente redutor, tal como DTT (ditiotreitol). Cada ponte de cisteína, portanto, formará, teoricamente, dois nucleófilos de tiol reativos.
Grupos nucleofílicos adicionais podem ser introduzidos em anticorpos por meio da reação de lisinas com 2-iminotiolano (reagente de Traut) que resulta na conversão de uma amina em um tiol. Grupos tiol reativos podem ser introduzidos no anticorpo (ou fragmento do mesmo) introduzindo um, dois, três, quatro ou mais resíduos de cisteína (e.g., preparar anticorpos mutantes compreendendo um ou mais resíduos de aminoácido de cisteína não nativos). A Pat. dos EUA No 7.521.541 ensina a engenharia de anticorpos pela introdução de aminoácidos de cisteína reativos.
[0444] Em algumas modalidades, a porção reativa Z′ ligada ao conector é um grupo nucleofílico que é reativo com um grupo eletrofílico presente em um anticorpo.
Grupos eletrofílicos úteis em um anticorpo incluem, mas não são limitados aos grupos aldeído e carbonil cetona. O heteroátomo de um grupo nucleofílico pode reagir com um grupo eletrofílico em um anticorpo e formar uma ligação covalente com o anticorpo.
Grupos nucleofílicos úteis incluem, mas não são limitados a hidrazida, oxima, amino, hidroxila, hidrazina, tiosemicarbazona, carboxilato de hidrazina e ari-lhidrazida.
[0445] Em algumas modalidades, Z é o produto de uma reação entre substituintes nucleofílicos reativos presentes dentro dos anticorpos, ou os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos, tais como porções amina e tiol e um substituinte eletrofílico reativo Z′. Por exemplo, Z′ pode ser um aceptor de Michael (e.g.,
maleimida), éster ativado, composto carbonila deficiente em elétrons e aldeído, entre outros.
[0446] Por exemplo, conectores adequados para a síntese de ADCs incluem, sem limitação, substituintes reativos Z′ tais como grupos maleimida ou haloalquila.
Esses podem estar ligados ao conector por reagentes, tais como succinimidil 4-(N- maleimidometil)-ciclo-hexano-L-carboxilato (SMCC), N-succinimidil iodoacetato (SIA), sulfo-SMCC, éster de m-maleimidobenzoil-N-hidroxisuccinimidil (MBS), sulfo-MBS e succinimidil iodoacetato, entre outros descritos, em por exemplo, Liu et al., 18: 690- 697, 1979, cuja divulgação é aqui incorporada por referência no que se refere aos conectores para conjugação química.
[0447] Em algumas modalidades, o substituinte reativo Z′ ligado ao conector L é um maleimida, azida ou alcino. Um exemplo de um conector contendo maleimida é o conector à base de maleimidocaproil não clivável, que é particularmente útil para a conjugação de agentes de rompimento de microtúbulos, tais como auristatinas.
Esses conectores são descritos por Doronina et al., Bioconjugate Chem. 17: 14-24, 2006, cuja divulgação é aqui incorporada por referência no que se refere aos conectores para conjugação química.
[0448] Em algumas modalidades, o substituinte reativo Z′ é -(C=O)- ou - NH(C=O)-, tal que o conector pode ser unido ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, por uma porção amida ou ureia, respectivamente, resultante da reação do grupo -(C=O)- ou -NH(C=O)- com um grupo amino do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
[0449] Em algumas modalidades, o substituinte reativo é um grupo N- maleimidil, grupo N-alquilamido halogenado, grupo sulfoniloxi N-alquilamido, grupo carbonato, grupo haleto de sulfonila, grupo tiol ou derivado do mesmo, grupo alquinila compreendendo uma ligação tripla carbono-carbono interna, grupo (hetero)cicloalquinila, grupo biciclo[6,1,0]non-4-in-9-ila, grupo alquenila compreendendo uma ligação dupla carbono-carbono interna, grupo cicloalquenila, grupo tetrazinila, grupo azido, grupo fosfina, grupo óxido de nitrila, grupo nitrona, grupo nitrila imina, grupo diazo, grupo cetona, grupo (O-alquila)hidroxilamino, grupo hidrazina, grupo N-maleimidil halogenado, grupo 1,1-bis (sulfonilmetil)metilcarbonila ou derivados de eliminação dos mesmos, grupo haleto de carbonila ou um grupo alenamida, cada um dos quais pode ser opcionalmente substituído. Em algumas modalidades, o substituinte reativo compreende um grupo cicloalqueno, um grupo cicloalquino ou um grupo (hetero)cicloalquinila opcionalmente substituído.
[0450] Exemplos não limitativos de conjugados amatoxina-conector contendo um substituinte reativo Z′ adequado para reação com um resíduo reativo no anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo incluem, sem limitação, 7’C-(4-(6- (maleimido)hexanoil)piperazin-1-il)-amatoxina; 7’C-(4-(6- (maleimido)hexanamido)piperidin-1-il)-amatoxina; 7’C-(4-(6-(6- (maleimido)hexanamido)hexanoil)piperazin-1-il)-amatoxina; 7’C-(4-(4- ((maleimido)metil)ciclo-hexanocarbonil)piperazin-1-il)-amatoxina; 7’C-(4-(6-(4- ((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)hexanoil)piperazin-1-il)-amatoxina; 7’C- (4-(2-(6-(maleimido)hexanamido)etil)piperidin-1-il)-amatoxina; 7’C-(4-(2-(6-(6- (maleimido)hexanamido)hexanamido)etil)piperidin-1-il)-amatoxina; 7’C-(4-(2-(4- ((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)etil)piperidin-1-il)-amatoxina; 7’C-(4-(2- (6-(4-((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)hexanamido)etil)piperidin-1-il)- amatoxina; 7’C-(4-(2-(3-carboxipropanamido)etil)piperidin-1-il)-amatoxina; 7’C-(4-(2- (2-bromoacetamido)etil)piperidin-1-il)-amatoxina; 7’C-(4-(2-(3-(piridin-2- ildissulfanil)propanamido)etil)piperidin-1-il)-amatoxina; 7’C-(4-(2-(4- (maleimido)butanamido)etil)piperidin-1-il)-amatoxina; 7’C-(4-(2- (maleimido)acetil)piperazin-1-il)-amatoxina; 7’C-(4-(3-(maleimido)propanoil)piperazin- 1-il)-amatoxina; 7’C-(4-(4-(maleimido)butanoil)piperazin-1-il)-amatoxina; 7’C-(4-(2-(6- (4-((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)hexanamido)etil)piperidin-1-il)-
amatoxina; 7’C-(3-((6-(maleimido)hexanamido)metil)pirrolidin-1-il)-amatoxina; 7’C-(3-
((6-(6-(maleimido)hexanamido)hexanamido)metil)pirrolidin-1-il)-amatoxina; 7’C-(3-
((4-((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)metil)pirrolidin-1-il)-amatoxina; 7’C-
(3-((6-((4-(maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)hexanamido)metil)pirrolidin-1-
il)-amatoxina; 7’C-(4-(2-(6-(2-(amino-óxi)acetamido)hexanamido)etil)piperidin-1-il)-
amatoxina; 7’C-(4-(2-(4-(2-(amino-óxi)acetamido)butanamido)etil)piperidin-1-il)-
amatoxina; 7’C-(4-(4-(2-(amino-óxi)acetamido)butanoil)piperazin-1-il)-amatoxina; 7’C-
(4-(6-(2-(amino-óxi)acetamido)hexanoil)piperazin-1-il)-amatoxina; 7’C-((4-(6-
(maleimido)hexanamido)piperidin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(2-(6-
(maleimido)hexanamido)etil)piperidin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(6-
(maleimido)hexanoil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; (R)-7’C-((3-((6-
(maleimido)hexanamido)metil)pirrolidin-1-il)metil)-amatoxina; (S)-7’C-((3-((6-
(maleimido)hexanamido)metil)pirrolidin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(2-(6-(6-
(maleimido)hexanamido)hexanamido)etil)piperidin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(2-
(4-((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)etil)piperidin-1-il)metil)-amatoxina;
7’C-((4-(2-(6-(4-((maleimido)metil)ciclo-
hexanocarboxamido)hexanamido)etil)piperidin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(2-(6-
(maleimido)hexanamido)etil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(2-(6-(6-
(maleimido)hexanamido)hexanamido)etil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(2-
(4-((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)etil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina;
7’C-((4-(2-(6-(4-((maleimido)metil)ciclo-
hexanocarboxamido)hexanamido)etil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((3-((6-(6-
(maleimido)hexanamido)hexanamido)-S-metil)pirrolidin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((3-
((6-(6-(maleimido)hexanamido)hexanamido)-R-metil)pirrolidin-1-il)metil)-amatoxina;
7’C-((3-((4-((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)-S-metil)pirrolidin-1-il)metil)-
amatoxina; 7’C-((3-((4-((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)-R-metil)pirrolidin-
1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((3-((6-(4-((maleimido)metil)ciclo-
hexanocarboxamido)hexanamido)metil)pirrolidin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(2-(3-
carboxipropanamido)etil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(6-(6-
(maleimido)hexanamido)hexanoil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(6-(4-
((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)hexanoil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina;
7’C-((4-(2-(maleimido)acetil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(3-
(maleimido)propanoil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(4-
(maleimido)butanoil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(2-(2-
(maleimido)acetamido)etil)piperidin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(2-(4-
(maleimido)butanamido)etil)piperidin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(2-(6-(4-
((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)hexanamido)etil)piperidin-1-il)metil)-
amatoxina; 7’C-((3-((6-(maleimido)hexanamido)metil)azetidin-1-il)metil)-amatoxina;
7’C-((3-(2-(6-(maleimido)hexanamido)etil)azetidin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((3-((4-
((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)metil)azetidin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-
((3-(2-(4-((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)etil)azetidin-1il)metil)-
amatoxina; 7’C-((3-(2-(6-(4-((maleimido)metil)ciclo-
hexanocarboxamido)hexanamido)etil)azetidin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-(((2-(6-
(maleimido)-N-metil-hexanamido)etil)(metil)amino)metil)-amatoxina; 7’C-(((4-(6-
(maleimido)-N-metil-hexanamido)butil(metil)amino)metil)-amatoxina; 7’C-((2-(2-(6-
(maleimido)hexanamido)etil)aziridin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((2-(2-(6-(4-
((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)hexanamido)etil)aziridin-1-il)metil)-
amatoxina; 7’C-((4-(6-(6-(2-(amino-óxi)acetamido)hexanamido)hexanoil)piperazin-1-
il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(1-(amino-óxi)-2-oxo-6,9,12,15-tetraoxa-3-aza-
heptadecan-17-oil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(2-(2-(amino-
óxi)acetamido)acetil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(3-(2-(amino-
óxi)acetamido)propanoil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(4-(2-(amino-
óxi)acetamido)butanoil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(2-(6-(2-(amino-
óxi)acetamido)hexanamido)etil)piperidin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(2-(2-(2-
(amino-óxi)acetamido)acetamido)etil)piperidin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(2-(4-(2- (amino-óxi)acetamido)butanamido)etil)piperidin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(20- (amino-óxi)-4,19-dioxo-6,9,12,15-tetraoxa-3,18-diazaicosil)piperidin-1-il)metil)- amatoxina; 7’C-(((2-(6-(2-(amino-óxi)acetamido)-N-metil- hexanamido)etil)(metil)amino)metil)-amatoxina; 7’C-(((4-(6-(2-(amino-óxi)acetamido)- N-metil-hexanamido)butil)(metil)amino)metil)-amatoxina; 7’C-((3-((6-(4- ((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)hexanamido)metil)pirrolidin-1-il)-S-metil)- amatoxina; 7’C-((3-((6-(4-((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)hexanamido)- R-metil)pirrolidin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(2-(2-bromoacetamido)etil)piperazin-1- il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(2-(2-bromoacetamido)etil)piperidin-1-il)metil)-amatoxina; 7’C-((4-(2-(3-(piridina-2-ildissulfanil)propanamido)etil)piperidin-1-il)metil)-amatoxina; 6’O-(6-(6-(maleimido)hexanamido)hexil)-amatoxina; 6’O-(5-(4- ((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)pentil)-amatoxina; 6’O-(2-((6- (maleimido)hexil)óxi)-2-oxoetil)-amatoxina; 6’O-((6-(maleimido)hexil)carbamoil)- amatoxina; 6’O-((6-(4-((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)hexil)carbamoil)- amatoxina; 6’O-(6-(2-bromoacetamido)hexil)-amatoxina; 7’C-(4-(6- (azido)hexanamido)piperidin-1-il)-amatoxina; 7’C-(4-(hex-5-inoilamino)piperidin-1-il)- amatoxina; 7’C-(4-(2-(6-(maleimido)hexanamido)etil)piperazin-1-il)-amatoxina; 7’C-(4- (2-(6-(6-(maleimido)hexanamido)hexanamido)etil)piperazin-1-il)-amatoxina; 6’O-(6- (6-(11,12-dide-hidro-5,6-di-hidro-dibenz[b,f]azocin-5-il)-6-oxo-hexanamido)hexil)- amatoxina; 6’O-(6-(hex-5-inoilamino)hexil)-amatoxina; 6’O-(6-(2-(amino- óxi)acetilamido)hexil)-amatoxina; 6’O-((6-amino-óxi)hexil)-amatoxina; e 6’O-(6-(2- iodoacetamido)hexil)-amatoxina.
[0451] Um especialista na técnica reconhecerá que a estrutura do grupo substituinte reativo ao conector, antes da conjugação com o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, inclui uma maleimida como o grupo Z’. As porções conectoras e conjugados amatoxina-conector anteriores, entre outros úteis em conjunto com as composições e métodos aqui descritos, são descritos, por exemplo, na Publicação de Pedido de Patente dos EUA No 2015/0218220 e Publicação de Pedido de Patente No WO2017/149077, a divulgação de cada uma das quais é aqui incorporada por referência em sua totalidade.
[0452] Em algumas modalidades, a estrutura do grupo substituinte reativo ao conector L-Z’, antes da conjugação com o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, é: ou .
[0453] Em algumas modalidades, uma amatoxina como aqui divulgada é conjugada a uma porção reativa ao conector -L-Z′ tendo a seguinte fórmula: .
[0454] Em algumas modalidades, uma amatoxina como aqui divulgada é conjugada a uma porção reativa ao conector -L-Z′ tendo a seguinte fórmula: .
[0455] Em algumas modalidades, o ADC compreende um anticorpo anti- CD117 conjugado com uma amatoxina incluindo, mas não limitado a uma amatoxina de qualquer uma das fórmulas I, IA, IB, II, IIA ou IIB como aqui divulgado, por meio de um conector e uma porção química Z. Em algumas modalidades, o conector inclui uma hidrazina, um dissulfeto, um tioéter ou um dipeptídeo. Em algumas modalidades, o conector inclui um dipeptídeo selecionado de Val-Ala e Val-Cit. Em algumas modalidades, o conector inclui um grupo para-aminobenzila (PAB). Em algumas modalidades, o conector inclui a porção PAB-Cit-Val. Em algumas modalidades, o conector inclui a porção PAB-Ala-Val. Em algumas modalidades, o conector inclui uma unidade -((C=O)(CH2)n-, em que n é um número inteiro de 1 a 6. Em algumas modalidades, o conector é -PAB-Cit-Val-((C=O)(CH2)n -.
[0456] Em algumas modalidades, o conector inclui uma unidade -(CH2)n -, onde n é um número inteiro de 2 a 6. Em algumas modalidades, o conector é -PAB- Cit-Val-((C=O)(CH2)n -. Em algumas modalidades, o conector é -PAB-Ala-Val- ((C=O)(CH2)n -. Em algumas modalidades, o conector é -(CH2)n -. Em algumas modalidades, o conector é -((CH2)n-, em que n é 6.
[0457] Em algumas modalidades, a porção química Z é selecionada da Tabela
4. Em algumas modalidades, a porção química Z é , onde S é um átomo de enxofre que representa o substituinte reativo presente dentro de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, que se liga a CD117 (e.g., do grupo -SH de um resíduo de cisteína).
[0458] Em algumas modalidades, o conector L e a porção química Z, tomados juntos como L-Z, são ou Preparação de Conjugados Anticorpo-Fármaco
[0459] Nos ADCs da fórmula I, como aqui divulgado, um anticorpo anti-HC (e.g., um anticorpo anti-CD117 ou um anticorpo anti-CD45) ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, é conjugado a uma ou mais porções citotóxicas de fármaco (D), e.g., cerca de 1 a cerca de 20 porções de fármaco por anticorpo, por meio de um conector L e uma porção química Z como aqui divulgado. Os ADCs da presente divulgação podem ser preparados por várias vias, utilizando reações de química orgânica, condições e reagentes conhecidos pelos especialistas na técnica, incluindo: (1) reação de um substituinte reativo de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo com um reagente conector bivalente para formar Ab- Z-L como aqui descrito acima, seguida por reação com uma porção de fármaco D; ou (2) reação de um substituinte reativo de uma porção de fármaco com um reagente conector bivalente para formar D-L-Z′, seguida por reação com um substituinte reativo de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo como aqui descrito acima para formar um ADC da fórmula D-L-Z-Ab, tal como Am-Z-L-Ab. Métodos adicionais para preparar ADC são aqui descritos.
[0460] Em um outro aspecto, o anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45) ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, tem um ou mais resíduos de lisina que podem ser quimicamente modificados para introduzir um ou mais grupos sulfidrila. O ADC é então formado pela conjugação por meio de átomos de enxofre do grupo sulfidrila como aqui descrito acima. Os reagentes que podem ser usados para modificar lisina incluem, mas não são limitados a N- succinimidil S-acetiltioacetato (SATA) e cloridreto de 2-Iminotiolano (Reagente de Traut).
[0461] Em um outro aspecto, o anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti-CD117 ou anticorpo anti-CD45) ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, pode ter um ou mais grupos de carboidratos que podem ser quimicamente modificados para terem um ou mais grupos sulfidrila. O ADC é então formado pela conjugação por meio de átomos de enxofre do grupo sulfidrila como aqui descrito acima.
[0462] Ainda em um outro aspecto, o anticorpo anti-HC (e.g., anticorpo anti- CD117 ou anticorpo anti-CD45) ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, pode ter um ou mais grupos de carboidratos que podem ser oxidados para fornecer um grupo aldeído (-CHO) (ver, for e.g., Laguzza, et al., J. Med. Chem. 1989, 32(3),
548-55). O ADC é então formado pela conjugação por meio do aldeído correspondente como aqui descrito acima. Outros protocolos para a modificação de proteínas para a fixação ou associação de citotoxinas são descritos em Coligan et al., Current Protocols in Protein Science, vol. 2, John Wiley & Sons (2002), incorporado aqui por referência.
[0463] Métodos para a conjugação de porções de conector-fármaco com proteínas de alvejamento de células, tais como anticorpos, imunoglobulinas ou fragmentos dos mesmos são encontrados, por exemplo, na Pat. dos EUA No
5.208.020; Pat. dos EUA No 6.441.163; WO2005037992; WO2005081711; e WO2006/034488, todas as quais são aqui expressamente incorporadas por referência em sua totalidade.
[0464] Alternativamente, uma proteína de fusão compreendendo o anticorpo e agente citotóxico pode ser feita, e.g., por técnicas recombinantes ou síntese peptídica. O comprimento do DNA pode compreender regiões respectivas que codificam as duas porções do conjugado adjacentes uma à outra ou separadas por uma região que codifica um peptídeo conector que não destrói as propriedades desejadas do conjugado.
[0465] Os ADCs aqui descritos podem ser administrados a um paciente (e.g., um paciente humano sofrendo de uma doença imune ou câncer) em uma variedade de formas de dosagem. Por exemplo, os ADCs aqui descritos podem ser administrados a um paciente sofrendo de uma doença imune ou câncer na forma de uma solução aquosa, tal como uma solução aquosa contendo um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Os excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados para o uso com as composições e métodos aqui descritos incluem agentes de modificação de viscosidade. A solução aquosa pode ser esterilizada usando técnicas conhecidas na técnica.
[0466] As formulações farmacêuticas compreendendo ADCs anti-HC (e.g.,
ADC anti-CD117 ou ADC anti-CD45) como são aqui descritos preparados pela mistura de tais ADC com um ou mais portadores farmaceuticamente aceitáveis opcionais (Remington’s Pharmaceutical Sciences 16a edição, Osol, A. Ed. (1980)), na forma de formulações ou soluções aquosas liofilizadas. Os portadores farmaceuticamente aceitáveis são geralmente não tóxicos para receptores nas dosagens e concentrações utilizadas, e incluem, mas não são limitados a: tampões, tais como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes incluindo ácido ascórbico e metionina; conservantes (tais como cloreto de octadecildimetilbenzil amônio; cloreto de hexametônio; cloreto de benzalcônio; cloreto de benzetônio; álcool fenólico, butílico ou benzílico; alquil parabenos, tais como metil ou propil parabeno; catecol; resorcinol; ciclo-hexanol; 3-pentanol; e m-cresol); polipeptídeos de baixo peso molecular (menos de cerca de 10 resíduos); proteínas, tais como albumina do soro, gelatina ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos, tais como polivinilpirrolidona; aminoácidos, tais como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos incluindo glicose, manose ou dextrinas; agentes quelantes, tais como EDTA; açúcares, tais como sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contra-íons formadores de sal, tais como sódio; complexos metálicos (e.g., complexos de proteína Zn); e/ou tensoativos não iônicos, tais como polietilenoglicol (PEG).
Exemplos
[0467] Os exemplos a seguir são apresentados de modo a fornecer aos versados na técnica uma descrição de como as composições e métodos descritos neste documento podem ser usados, feitos e avaliados e se destinam a ser puramente exemplificativos da invenção e não se destinam a limitar o escopo do que os inventores consideram sua invenção.
Exemplo 1. Conjugados anticorpo-fármaco anti-CD45 e anti-CD117 permitem o transplante de células-tronco hematopoiéticas alogênicas
[0468] Conjugados anticorpo-fármaco (ADCs) direcionados a CD45 de camundongo ou CD117 de camundongo foram recentemente mostrados condicionar efetivamente camundongos imunocompetentes para transplantes de medula óssea inteira (Palchaudhuri et al. Nature Biotech 2016 34: 738-745; e Czechowicz et al. Blood 2016 128: 493). Esta abordagem inovadora direcionada ao condicionamento usando ADCs tem o potencial de ser um avanço terapêutico se puder ser traduzida com sucesso para os humanos. Os anticorpos anti-CD45 ou anti-CD117 usados anteriormente foram acoplados à saporina (SAP), uma proteína inibidora de ribossomo, que uma vez internalizada induz citotoxicidade de uma maneira independente do ciclo celular. Foi demonstrado que os ADCs anti-CD45-saporina (CD45-SAP) e anti-CD117-saporina (CD117-SAP) esgotam efetivamente as células- tronco hematopoiéticas da medula óssea (HSCs) como agentes de entidade única, criando espaços vazios que permitem o enxerto autólogo de HSC eficiente (>95 % de quimerismo de doador de longo prazo).
[0469] O anticorpo anti-CD117 usado no ADC no exemplo a seguir é 2B8, e o anticorpo anti-CD45 usado no ADC é 104. Para investigar e expandir a utilidade desses ADCs em modelos de transplante murino, CD45-SAP (1,9 mg/kg, iv) e CD117- SAP (1 mg/kg, iv) foram testados em um modelo de transplante de incompatibilidade menor alogênico (doador Balb/c em receptores DBA/2). Camundongos DBA/2 CD45.2 foram transplantados com 2 x 107 células de medula óssea inteiras colhidas de dadores congênicos Balb/c CD45.1 reunidos. Conforme mostrado no esquema do projeto do estudo nas Figs. 1A e 1B, camundongos DBA/2 receberam condicionamento pré-transplante antes do transplante com células doadoras de medula óssea total Balb/c CD45.1. Tratamentos de condicionamento, incluindo CD45- SAP (1,9 mg/kg, iv) ou CD117-SAP (1 mg/kg, iv) foram avaliados em conjunto com agentes moduladores imunológicos adicionais: clone 30F11 (25 mg/kg, IP), um anticorpo anti-CD45 nu que imita ATG, contando com a função efetora para permitir a depleção potente das células B e T periféricas; pré-transplante Citoxan (PreT-Cy, 200 mg/kg, IP); Irradiação corporal total de 2 Gy (TBI); ou Citoxan pós-transplante (PTCy, 200 mg/kg, IP) para prevenir a doença do enxerto contra o hospedeiro, bem como bloquear a rejeição do hospedeiro contra o enxerto. 9 Gy TBI foi usado como o controle positivo do condicionamento convencional. Camundongos condicionados foram transplantados com 2 x 107 células de medula óssea inteiras, e o nível de depleção de HSC e quimerismo de células do doador foram avaliados ao longo de 12 semanas.
[0470] Os resultados do ensaio de enxerto são mostrados nas Figs. 1C-1E, que mostra a contagem de células-tronco hematopoéticas de longo prazo (LT- HSC)/fêmur (Fig. 1C), a porcentagem de quimerismo de doador (Fig. 1D) e a porcentagem de quimerismo mieloide, porcentagem de quimerismo de células B e porcentagem quimerismo de células T (Fig. 1E) após o condicionamento com o ADC indicado e imunossupressor.
[0471] CD45-SAP ou CD117-SAP em combinação com imunossupressores (30F11 e Citoxan pós-transplante) permitiu a depleção da medula óssea em camundongos C57Bl/6 (Fig. 1C; 7 dias pós-administração) e permitiu quimerismo de doador completo (>85 % de quimerismo de doador (CD45.1+)) no sangue periférico 12 semanas após o transplante (Fig. 1D). A reconstituição de multilinhagem foi observada nos compartimentos de células T, B e mieloides com >80 %, >90 % e >90 % de quimerismo de doador, respectivamente, em ambos os grupos CD45-SAP e CD117-SAP (Fig. 1E). Em contraste, 2 Gy TBI em combinação com imunossupressores (30F11 e Citoxan pós-transplante) resultou em apenas 5 % de enxerto de doador. A multi-dosagem com 30F11 (QDx3) mais 2 Gy TBI e Citoxan pós- transplante aumentou o quimerismo de doador periférico para 40 %. Citoxan pré- transplante mais 30F11 (QDx3) e Citoxan pós-transplante renderam 20 % de quimerismo de doador. Para todos os grupos, o quimerismo das células-tronco na medula óssea correspondeu ao quimerismo periférico.
[0472] Estes resultados indicam que os ADCs anti-CD45 e anti-CD117 podem ser usados em combinação com imunossupressão para permitir transplantes alogênicos altamente eficientes em um modelo de incompatibilidade menor (quimerismo de doador de 85 %). CD45-SAP e CD117-SAP em combinação com 30F11 e Citoxan pós-transplante foram mais eficazes no condicionamento em comparação com 2 Gy TBI ou Citoxan pré-transplante.
Exemplo 2. Conjugado anticorpo-fármaco direcionado a CD45 e Citoxan pós- transplante é suficiente para permitir o transplante de medula óssea alogênico em um modelo de camundongo com incompatibilidade menor
[0473] O transplante de medula óssea (BMT) é um tratamento potencialmente curativo para doenças malignas e não malignas do sangue. Os regimes atuais de preparação ou condicionamento do paciente antes do BMT limitam o uso desse procedimento curativo devido à mortalidade e morbidades relacionadas ao regime, incluindo riscos de toxicidade de órgão, infertilidade e malignidades secundárias. A preparação direcionada usando conjugados anticorpo-fármaco (ADCs) para CD45 de camundongo já demonstrou ser suficiente para permitir o transplante de medula óssea (BMT) em camundongos imunocompetentes singênicos (Palchaudhuri et al. Nature Biotech 2016 34: 738-745), e esta abordagem para preparação tem o potencial de expandir a utilidade do BMT se puder ser traduzido com sucesso para os pacientes.
Para investigar ainda mais a utilidade de um ADC anti-CD45 (anticorpo anti-CD45, 104, conjugado a saporina) em modelos de transplante murino, exploramos o anti- CD45-saporina (CD45-SAP) em um modelo de transplante de incompatibilidade menor alogênico (doador Balb/c em receptores DBA/2). O objetivo do trabalho era identificar o nível de supressão imunológica, se houver, que precisa ser usado em combinação com o CD45-SAP para permitir um alto quimerismo de doador no ambiente alogênico. (CD45-SAP é alternativamente referido como CD45-SAB-SAP,
indicando que a saporina é conjugada ao anticorpo monoclonal 104 usando acoplamento estreptavidina/biotina (SAB)).
[0474] CD45-SAP (1,9 mg/kg, iv) foi avaliado sozinho ou em combinação com agentes moduladores imunológicos adicionais: clone 30F11 (25 mg/kg, IP), um anticorpo anti-CD45 nu que imita ATG por confiar na função efetora para permitir o esgotamento potente das células B e T periféricas; Citoxan pré-transplante (PreTCy, 200 mg/kg, IP), irradiação corporal total de 2 Gy (TBI) e Citoxan pós-transplante (PTCy, 200 mg/kg, IP) para prevenir a doença do enxerto contra o hospedeiro, bem como bloquear o hospedeiro versus rejeição de enxerto. 9 Gy TBI foi usado como o controle positivo do condicionamento convencional. Os camundongos condicionados foram transplantados com 2 x 107 células da medula óssea inteira e o quimerismo foi avaliado ao longo de 12 semanas.
[0475] CD45-SAP em combinação com PTCy alcançou quimerismo de doador significativo 8 semanas após o transplante (Fig. 2A), incluindo um nível de quimerismo mieloide periférico, uma leitura de enxerto de células-tronco, comparável ao alcançado com 9 Gy TBI (>90 %) (Fig. 2B-2C). A adição de 30F11 ao protocolo CD45-SAP/PTCy não teve efeito sobre o quimerismo de doador periférico (59 % vs 61 %), sugerindo que a linfodepleção adicional não é necessária. Em contraste, os agentes únicos isoladamente, 2 Gy TBI em combinação com 30F11 e PTCy resultaram em <5 % de enxerto de doador. Outras condições testadas que alcançaram o quimerismo mieloide do doador de baixo nível foram a multi-dosagem de 30F11 (QDx3) mais 2 Gy TBI com PTCy (40 % de quimerismo de doador) e PreTCy mais 30F11 (QDx3) com PTCy (20 % de quimerismo de doador). Para todos os grupos, o quimerismo das células-tronco na medula óssea correspondeu ao quimerismo periférico.
[0476] HSCs de longo prazo derivadas de doador estavam presentes na medula óssea de camundongos receptores 12 semanas após o transplante, em animais condicionados com CD45-SAP e Citoxan (Fig. 2D). Os resultados na Fig. 2D são apresentados de animais que receberam anticorpo de controle de isotipo acoplado a saporina (Isotipo-SAB-SAP), sozinho (à esquerda) ou em combinação com Citoxan (à direita); animais que receberam mAb 104 CD45 acoplado a saporina (104- SAB-SAP), sozinho (esquerda) ou em combinação com Citoxan (direita); e 9 Gy TBI (IRR), sem Citoxan.
[0477] Estes resultados indicam CD45-SAP em combinação com PTCy é suficiente para permitir que níveis elevados de quimerismo de doador na menor configuração incompatível sem a necessidade para a supressão imune adicional. O CD45-SAP foi mais eficaz no condicionamento do que 2 Gy TBI ou PreTCy.
Exemplo 3. Conjugados anticorpo-fármaco anti-CD45 e anti-CD117 permitem o transplante de células-tronco hematopoiéticas alogênicas em modelos animais
[0478] O transplante de medula óssea (BMT) é um tratamento potencialmente curativo para doenças malignas e não malignas do sangue e tem demonstrado resultados impressionantes em doenças autoimunes. Antes do BMT, os pacientes são preparados com quimioterapia de alta dose isolada ou com irradiação corporal total, e ambos estão associados a morbidades precoces e tardias, toxicidades orgânicas, infertilidade, neoplasias secundárias e risco substancial de mortalidade. Isso limita muito o uso de BMT em condições malignas e não malignas. Para resolver essas questões, estamos desenvolvendo conjugados anticorpo-fármaco (ADCs) visando células-tronco hematopoiéticas (HSCs) e células imunes para condicionar pacientes com segurança para BMT alogênico (35 % de todos os transplantes, CIBMTR) e BMT autólogo (para doenças autoimunes).
[0479] ADCs direcionados para CD45 de camundongo ou CD117 de camundongo mostraram-se condicionar eficazmente os camundongos imunocompetentes para BMT (Palchaudhuri et al. Nature Biotech 2016 34: 738-745; e Czechowicz. et al., Blood 2016 128: 493). Esses ADCs foram criados usando saporina (SAP), uma proteína inibidora do ribossomo, que uma vez internalizada induz citotoxicidade de uma maneira independente do ciclo celular. Tanto o anti-CD45- saporina (CD45-SAP) quanto o anti-CD117-saporina (CD117-SAP) efetivamente esgotaram os HSCs da medula óssea como agentes de dosagem única e permitiram o enxerto autólogo de HSC eficiente (>95 % de quimerismo doador de longo prazo).
Esses ADCs também permitiram o BMT em modelos murinos de Anemia de Fanconi.
[0480] Para investigar mais a utilidade desses ADCs murinos, exploramos CD45-SAP e CD117-SAP no contexto de transplante de incompatibilidade secundária alogênico. Usando o doador Balb/c no modelo de transplante DBA/2, procuramos determinar se CD45-SAP ou CD117-SAP poderia permitir o transplante alogênico como agentes de entidade única ou precisava ser combinado com agentes imunossupressores adicionais (por exemplo, Citoxan, ATG-mímico).
Métodos Imunotoxinas à Base de Saporina (SAP)
[0481] O mAb anti-CD45.2 biotinilado comercialmente disponível (clone 104) foi combinado com estreptavidina-saporina (ATS Bio, Catálogo IT-27) em uma razão molar de 1:1 imediatamente antes da injeção. Da mesma forma, para criar CD117- SAP, mAb anti-CD117 biotinilado (clone 2B8) foi combinado com estreptavidina saporina). A dosagem foi calculada com base na quantidade de anticorpo usado para criar a imunotoxina. O isotipo-SAP foi criado usando um isotipo mIgG2a mAb biotinilado.
Imunossupressores
[0482] Para imitar ATG, foi utilizado um mAb anti-CD45 nu (clone 30F11, 25 mg/kg IP) que se baseia na função efetora para esgotar potentemente linfócitos periféricos sem afetar HSCs da medula óssea. Citoxan foi administrado a 200 mg/kg IP 3 dias após o transplante para prevenir GvHD das células T do doador, conforme mostrado nos esquemas. A irradiação corporal total (2 Gy ou 9Gy) foi realizada usando um irradiador de raios-X.
Estudos Animais
[0483] C57BL6, DBA/2 e CD45.1 camundongos Balb/c foram adquiridos a partir de Jackson Laboratories. Camundongos DBA/2 foram transplantados com 2 x107 células de medula óssea inteiras colhidas de dadores congênicos Balb/c CD45.1 reunidos. Todas as pesquisas in vivo foram conduzidas de acordo com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório publicado pelo Conselho Nacional de Pesquisa das Academias Nacionais e sob a aprovação do Comitê Institucional de Uso e Cuidado de Animais.
Depleção de HSC Murino por CD45-SAP
[0484] Conforme descrito no esquema do projeto do estudo na Fig. 3A, uma única dose de CD45-SAP ou controles (por exemplo, PBS ou IgG1 isotipo-SAP) foi administrada a camundongos C57 no dia 0. Sangue periférico e medula óssea foram coletados no dia 7 e examinados por hemograma completo (CBC) e citometria de fluxo. A estratégia de bloqueio de citometria de fluxo da medula óssea e depleção de LT-HSC por CD45-SAP são mostradas na Fig. 3B. A quantificação do nível de LT- HSCs na medula óssea de camundongos condicionados sete dias após a dosagem de PBS, isotipo-SAP ou CD45-SAP é mostrada na Fig. 3C. Estes resultados indicam que a administração de CD45-SAP resultou na depleção de HSCs de longo prazo (LT- HSCs) na medula óssea (Figs. 3B e 3C). Como mostrado na Fig. 3D, os linfócitos periféricos sete dias após a dosagem também mostraram depleção eficaz por CD45- SAP. Assim, o CD45-SAP ADC esgota efetivamente HSCs e linfócitos murinos.
Exemplo 4. O condicionamento com conjugado anticorpo-fármaco direcionado a CD45 permite o transplante alogênico de células-tronco hematopoiéticas em camundongos
[0485] O seguinte estudo foi conduzido para examinar se um ADC CD45 anti- camundongo (anticorpo anti-CD45, 104, conjugado com PBD (“CD45-PBD”)) poderia ser usado para permitir o BMT alogênico totalmente incompatível em camundongos.
Métodos
[0486] Um anticorpo anti-camundongo CD45 ADC contendo mAb 104 acoplado a PBD (CD45-PDB) foi manipulado para ter uma rápida eliminação (meia- vida de 2 horas) para permitir a transplantação de medula óssea. A dose ideal de CD45-PBD foi identificada em um modelo de transplante de camundongo autólogo congênico. Para determinar se o ADC poderia condicionar com sucesso os destinatários para um alogênico-BMT completo, o CD45-PBD foi avaliado sozinho ou em combinação com anticorpos de depleção de células T (anti-CD4 e anti-CD8, 0,25 mg/kg IP) em um modelo BMT alogênico totalmente incompatível (doador Balb/c (H- 2d, CD45.1+) em receptores C57Bl/6 (H-2b, CD45.2+). 9 Gy TBI foi usado como o controle positivo de condicionamento convencional. Camundongos condicionados foram transplantados com 2 x 107 células de medula óssea total e quimerismo de sangue periférico foram avaliados ao longo de 16 semanas. Em 16 semanas, o quimerismo de células-tronco da medula óssea foi determinado.
Resultados
[0487] Em um modelo de camundongo autólogo congênico, uma dose única de CD45-PBD a 3 mg/kg foi totalmente mieloablativa, resultando em insuficiência de medula óssea em 11 dias. O transplante de medula óssea congênica em camundongos condicionados com CD45-PBD leva ao quimerismo de doador total em um nível que foi comparável aos animais que foram condicionados com uma dose mieloablativa de irradiação (9 Gy TBI). CD45-PBD foi em seguida avaliado no Balb/c totalmente incompatível  modelo BMT alogênico C57Bl/6, no qual os camundongos dadores e receptores têm diferentes antígenos do MHC. Uma dose única do CD45- ADC a 3 mg/kg como um agente único permitiu o quimerismo mielóide misto transitório até 3 semanas (Fig. 4A). A suplementação de CD45-PBD com depleção de células T (usando anticorpos anti-CD4 e anti-CD8) permite quimerismo de doador completo e durável (>90 % de quimerismo de doador periférico) na semana 3 e semana 8 pós-
transplante (Fig. 4A), que foi mantida até a semana 16. A reconstituição de multilinhagem foi observada nos compartimentos de células T, B e mielóides com >90 % de quimerismo de doador em 8 semanas após o transplante visto em cada compartimento, indicativo de enxerto de células-tronco hematopoiéticas (Fig. 4B) Estes resultados foram comparáveis ao quimerismo observado no controle positivo 9 Gy TBI para condicionamento mieloablativo (Figs. 4A e 4B). O tratamento com um ADC compatível com isotipo não direcionado (Iso-PBD) não foi eficaz. Para todos os grupos, o quimerismo das células-tronco na medula óssea correspondeu ao quimerismo periférico. CD45-PBD em combinação com a depleção de células T (usando anticorpos anti-CD4 e anti-CD8) permitiu a depleção de células CD45+ do sangue periférico e baço dois dias após a administração, como mostrado nas Figs. 4C e 4D.
[0488] Estes resultados demonstram que uma dose única de CD45-PBD é totalmente mieloablativa e permite quimerismo de doador durável e completa em um modelo BMT alogênico totalmente incompatível com depleção de células T suplementar. Esta abordagem direcionada e prontamente traduzível para um condicionamento mais seguro pode melhorar o perfil de risco-benefício para o BMT alogênico e haploidêntico e pode estender o potencial curativo desta modalidade terapêutica para mais pacientes que sofrem de câncer no sangue e outras doenças que podem se beneficiar do BMT.
Exemplo 5. Depleção da medula óssea e quimerismo alogênico do doador após condicionamento com ADC anti-CD45 e dose baixa de TBI
[0489] Um CD45-ADC contendo mAb 104 anti-CD45 e PBD (CD45-PBD, também referido como 104-PBD) foi avaliado sozinho ou em combinação com irradiação corporal total (TBI) de baixa dose (0,5-2 Gy) em um modelo de transplante de HSC alogênico totalmente incompatível (doadores Balb/c (H-2d, CD45.1+) em receptores C57Bl/6 (H-2b, CD45.2+)). Doses de TBI abaixo de 9 Gy TBI (5 Gy, 4 Gy,
3Gy, 2 Gy, 1 Gy, 0,5 Gy e 0 Gy) foram avaliadas em combinação com CD45-PBD. 9 Gy TBI serviu como o controle positivo do condicionamento convencional. Os camundongos receptores C57Bl/6 condicionados foram transplantados com 2 x 107 células de medula óssea totais derivadas de doadores Balb/c, e o quimerismo de sangue periférico foi avaliado ao longo de 16 semanas.
[0490] Em combinação com baixa dose de TBI, CD45-PBD permitiu a depleção de células LT-HSC (Fig. 5A) e depleção de células CD45+ (Fig. 5B), células mieloides (Fig. 5C), células B (Fig. 5D) e células T (Fig. 5E) na medula óssea dois dias após a administração de ADC. O CD45-PBD em combinação com TBI de baixa dose permitiu o quimerismo alogênico total do doador (>90 % de quimerismo de doador no sangue periférico) na semana 4 pós-transplante (Fig. 5F). A reconstituição de multilinhagem dos compartimentos de células B e mieloides foi observada (>90 % de quimerismo de doador; Fig. 5G) após o condicionamento com o CD45-PBD em combinação com TBI de baixa dose (0,5 Gy) e foi comparável ao quimerismo observado em 9 Gy TBI controle positivo (Figs. 5F e 5G). O tratamento com um ADC de isotipo não direcionado não foi eficaz (Figura 5F, 5G).
Tabela 3: SUMÁRIO DE SEQUÊNCIA Identificador de Sequência Descrição Sequência SEQ ID NO: 1 CDR-H1 de CK6 SYWIG SEQ ID NO: 2 CDR-H2 de CK6 IIYPGDSDTRYSPSFQG SEQ ID NO: 3 CDR-H3 de CK6 HGRGYNGYEGAFDI SEQ ID NO: 4 CDR-L1 de CK6 RASQGISSALA SEQ ID NO: 5 CDR-L2 de CK6 DASSLES SEQ ID NO: 6 CDR-L3 de CK6 CQQFNSYPLT
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTF
SDYAMSWVRQAPGKGLEWVAVISENGSDT Ab humano consenso SEQ ID NO: 7 YYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRA Domínio variável de cadeia pesada
EDTAVYYCARDRGGAVSYFDVWGQGTLVT VSS
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVS Ab humano consenso SYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLESGVPS SEQ ID NO: 8 Domínio variável de cadeia leve RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ
YNSLPYTFGQGTKVEIKRT Região variável de cadeia pesada de Ab67 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTF SEQ ID NO: 9 (e.g., como encontrado em HC-67) SDADMDWVRQAPGKGLEWVGRTRNKAGS
Cadeia principal de hIgG1 YTTEYAASVKGRFTISRDDSKNSLYLQMNS (CDRs em negrito) LKTEDTAVYYCAREPKYWIDFDLWGRGTLV
TVSS Região variável de cadeia leve de Ab67 (e.g., DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISS como encontrado em LC-67) YLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPS SEQ ID NO: 10 Cadeia principal de hKappa RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ (CDRs em negrito) SYIAPYTFGGGTKVEIK SEQ ID NO: 11 CDR-H1 de Ab67 FTFSDADMD SEQ ID NO: 12 CDR-H2 de Ab67 RTRNKAGSYTTEYAASVKG SEQ ID NO: 13 CDR-H3 de Ab67 AREPKYWIDFDL SEQ ID NO: 14 CDR-L1 de Ab67 RASQSISSYLN SEQ ID NO: 15 CDR-L2 de Ab67 AASSLQS SEQ ID NO: 16 CDR-L3 de Ab67 QQSYIAPYT
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAG GCTTGGTCCAGCCTGGAGGGTCCCTGAG ACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCT TCAGTGACGCCGACATGGACTGGGTCCG CCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTG
GGTTGGCCGTACTAGAAACAAAGCAGGA Região variável de cadeia pesada de Ab67 SEQ ID NO: 17 AGTTACACCACAGAATACGCCGCGTCTGT (nucl)
GAAAGGCAGATTCACCATCTCAAGAGATG ATTCAAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGA ACAGCCTGAAAACCGAGGACACGGCGGT GTACTACTGCGCCAGAGAGCCTAAATACT GGATCGACTTCGACCTATGGGGGAGAGG TACCTTGGTCACCGTCTCCTCA GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTC CCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATT AGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAA
ACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCT Região variável de cadeia leve de Ab67 ATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTC SEQ ID NO: 18 (nucl) CCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGT CTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTA CTGTCAGCAAAGCTACATCGCCCCTTACA CTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGAT CAAA
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTF Região variável de cadeia pesada de Ab55
RIYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPDFGVAN (e.g., como encontrado em HC-55) SEQ ID NO: 19 YAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSE Cadeia principal de hIgG1
DTAVYYCARGGLDTDEFDLWGRGTLVTVS (CDRs em negrito)
S Região variável de cadeia leve de Ab55 (e.g., DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSINS como encontrado em LC-55) YLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPS SEQ ID NO: 20 Cadeia principal de hKappa RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ (CDRs em negrito) GVSDITFGGGTKVEIK SEQ ID NO: 21 CDR-H1 de Ab55 GTFRIYAIS
SEQ ID NO: 22 CDR-H2 de Ab55 GIIPDFGVANYAQKFQG SEQ ID NO: 23 CDR-H3 de Ab55 ARGGLDTDEFDL SEQ ID NO: 24 CDR-L1 de Ab55 RASQSINSYLN SEQ ID NO: 25 CDR-L2 de Ab55 AASSLQS SEQ ID NO: 26 CDR-L3 de Ab55 QQGVSDIT
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTG AGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAA GGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACC TTCCGAATCTATGCTATCAGCTGGGTGCG ACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGG
ATGGGAGGGATCATCCCTGACTTCGGTGT Região variável de cadeia pesada de Ab55 SEQ ID NO: 27 AGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGC (nucl)
AGAGTCACGATTACCGCGGACGAATCCA CGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAG CCTGAGATCTGAGGACACGGCGGTGTAC TACTGCGCCAGAGGTGGATTGGACACAG ACGAGTTCGACCTATGGGGGAGAGGTAC CTTGGTCACCGTCTCCTCA GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTC CCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATT AACAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAA
CCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTA Região variável de cadeia leve de Ab55 SEQ ID NO: 28 TGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCC (nucl)
CATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGG GACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTC TGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACT GTCAGCAAGGAGTCAGTGACATCACTTTT GGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTF Região variável de cadeia pesada de Ab54
SSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTAN (e.g., como encontrado em HC-54) SEQ ID NO: 29 YAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSE Cadeia principal de hIgG1
DTAVYYCARGGLDTDEFDLWGRGTLVTVS (CDRs em negrito)
S Região variável de cadeia leve de Ab54 (e.g., DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSINS como encontrado em LC-54) YLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPS SEQ ID NO: 30 Cadeia principal de hKappa RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ (CDRs em negrito) GVSDITFGGGTKVEIK SEQ ID NO: 31 CDR-H1 de Ab54 GTFSSYAIS SEQ ID NO: 32 CDR-H2 de Ab54 GIIPIFGTANYAQKFQG SEQ ID NO: 33 CDR-H3 de Ab54 ARGGLDTDEFDL SEQ ID NO: 34 CDR-L1 de Ab54 RASQSINSYLN SEQ ID NO: 35 CDR-L2 de Ab54 AASSLQS SEQ ID NO: 36 CDR-L3 de Ab54 QQGVSDIT
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTG Região variável de cadeia pesada de Ab54 AGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAA SEQ ID NO: 37 (nucl) GGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACC
TTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCG ACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGG ATGGGAGGGATCATCCCTATCTTTGGTAC AGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGC AGAGTCACGATTACCGCGGACGAATCCA CGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAG CCTGAGATCTGAGGACACGGCGGTGTAC TACTGCGCCAGAGGTGGATTGGACACAG ACGAGTTCGACCTATGGGGGAGAGGTAC CTTGGTCACCGTCTCCTCA GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTC CCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATT AACAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAA
CCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTA Região variável de cadeia leve de Ab54 SEQ ID NO: 38 TGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCC (nucl)
CATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGG GACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTC TGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACT GTCAGCAAGGAGTCAGTGACATCACTTTT GGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTF Região variável de cadeia pesada de Ab56
SLYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPAFGTAN (e.g., como encontrado em HC-56) SEQ ID NO: 39 YAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSE Cadeia principal de hIgG1
DTAVYYCARGGLDTDEFDLWGRGTLVTVS (CDRs em negrito)
S Região variável de cadeia leve de Ab56 (e.g., DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSINS como encontrado em LC-56) YLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPS SEQ ID NO: 40 Cadeia principal de hKappa RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ (CDRs em negrito) GVSDITFGGGTKVEIK SEQ ID NO: 41 CDR-H1 de Ab56 GTFSLYAIS SEQ ID NO: 42 CDR-H2 de Ab56 GIIPAFGTANYAQKFQG SEQ ID NO: 43 CDR-H3 de Ab56 ARGGLDTDEFDL SEQ ID NO: 44 CDR-L1 de Ab56 RASQSINSYLN SEQ ID NO: 45 CDR-L2 de Ab56 AASSLQS SEQ ID NO: 46 CDR-L3 de Ab56 QQGVSDIT
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTG AGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAA GGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACC TTCAGCCTCTATGCTATCTCCTGGGTGCG ACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGG
ATGGGAGGGATCATCCCTGCCTTCGGTA Região variável de cadeia pesada de Ab56 SEQ ID NO: 47 CCGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGG (nucl)
CAGAGTCACGATTACCGCGGACGAATCC ACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCA GCCTGAGATCTGAGGACACGGCGGTGTA CTACTGCGCCAGAGGTGGATTGGACACA GACGAGTTCGACCTATGGGGGAGAGGTA CCTTGGTCACCGTCTCCTCA GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTC CCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATT AACAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAA
CCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTA Região variável de cadeia leve de Ab56 SEQ ID NO: 48 TGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCC (nucl)
CATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGG GACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTC TGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACT GTCAGCAAGGAGTCAGTGACATCACTTTT GGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTF Região variável de cadeia pesada de Ab57
SLYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPHFGLAN (e.g., como encontrado em HC-57) SEQ ID NO: 49 YAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSE Cadeia principal de hIgG1
DTAVYYCARGGLDTDEFDLWGRGTLVTVS (CDRs em negrito)
S Região variável de cadeia leve de Ab57 (e.g., DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSINS como encontrado em LC-57) YLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPS SEQ ID NO: 50 Cadeia principal de hKappa RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ (CDRs em negrito) GVSDITFGGGTKVEIK SEQ ID NO: 51 CDR-H1 de Ab57 GTFSLYAIS SEQ ID NO: 52 CDR-H2 de Ab57 GIIPHFGLANYAQKFQG SEQ ID NO: 53 CDR-H3 de Ab57 ARGGLDTDEFDL SEQ ID NO: 54 CDR-L1 de Ab57 RASQSINSYLN SEQ ID NO: 55 CDR-L2 de Ab57 AASSLQS SEQ ID NO: 56 CDR-L3 de Ab57 QQGVSDIT
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTG AGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAA GGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACC TTCTCCCTCTATGCTATCAGCTGGGTGCG ACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGG
ATGGGAGGGATCATCCCTCACTTCGGTCT Região variável de cadeia pesada de Ab57 SEQ ID NO: 57 CGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGC (nucl)
AGAGTCACGATTACCGCGGACGAATCCA CGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAG CCTGAGATCTGAGGACACGGCGGTGTAC TACTGCGCCAGAGGTGGATTGGACACAG ACGAGTTCGACCTATGGGGGAGAGGTAC CTTGGTCACCGTCTCCTCA GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTC CCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATT
AACAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAA Região variável de cadeia leve de Ab57 SEQ ID NO: 58 CCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTA (nucl)
TGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCC CATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGG GACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTC TGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACT GTCAGCAAGGAGTCAGTGACATCACTTTT GGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS Região variável de cadeia pesada de Ab58
NYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGST (e.g., como encontrado em HC-58) SEQ ID NO: 59 YYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRA Cadeia principal de hIgG1
EDTAVYYCAKGPPTYHTNYYYMDVWGKGT (CDRs em negrito)
TVTVSS Região variável de cadeia leve de Ab58 (e.g., DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIS como encontrado em LC-58) SWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVP SEQ ID NO: 60 Cadeia principal de hKappa SRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQ (CDRs em negrito) QTNSFPYTFGGGTKVEIK SEQ ID NO: 61 CDR-H1 de Ab58 FTFSNYAMS SEQ ID NO: 62 CDR-H2 de Ab58 AISGSGGSTYYADSVKG SEQ ID NO: 63 CDR-H3 de Ab58 AKGPPTYHTNYYYMDV SEQ ID NO: 64 CDR-L1 de Ab58 RASQGISSWLA SEQ ID NO: 65 CDR-L2 de Ab58 AASSLQS SEQ ID NO: 66 CDR-L3 de Ab58 QQTNSFPYT
GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAG GCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAG ACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCT TTAGCAATTATGCCATGAGCTGGGTCCGC CAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGG
GTCTCAGCTATTAGTGGTAGTGGTGGTAG Região variável de cadeia pesada de Ab58 SEQ ID NO: 67 CACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGC (nucl)
CGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAA GAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCC TGAGAGCCGAGGACACGGCGGTGTACTA CTGCGCCAAGGGCCCTCCTACATACCAC ACAAACTACTACTACATGGACGTATGGGG CAAGGGTACAACTGTCACCGTCTCCTCA GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCTTC CGTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCACTTGTCGGGCGAGTCAGGGTATT AGCAGCTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAA
ACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCT Região variável de cadeia leve de Ab58 ATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTC SEQ ID NO: 68 (nucl) CCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGC CTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTA CTGTCAGCAAACAAATAGTTTCCCTTACA CTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGAT CAAA
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS Região variável de cadeia pesada de Ab61
SYVMIWVRQAPGKGLEWVSSISGDSVTTYY (e.g., como encontrado em HC-61) SEQ ID NO: 69 ADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAED Cadeia principal de hIgG1
TAVYYCAKGPPTYHTNYYYMDVWGKGTTV (CDRs em negrito)
TVSS SEQ ID NO: 70 Região variável de cadeia leve de Ab61 (e.g., DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIS como encontrado em LC-61) SWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVP Cadeia principal de hKappa SRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQ (CDRs em negrito) QTNSFPYTFGGGTKVEIK SEQ ID NO: 71 CDR-H1 de Ab61 FTFSSYVMI SEQ ID NO: 72 CDR-H2 de Ab61 SISGDSVTTYYADSVKG SEQ ID NO: 73 CDR-H3 de Ab61 AKGPPTYHTNYYYMDV SEQ ID NO: 74 CDR-L1 de Ab61 RASQGISSWLA SEQ ID NO: 75 CDR-L2 de Ab61 AASSLQS SEQ ID NO: 76 CDR-L3 de Ab61 QQTNSFPYT
GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAG GCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAG ACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCT TTAGCAGCTATGTCATGATCTGGGTCCGC CAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGG
GTCTCAAGCATTAGTGGTGACAGCGTAAC Região variável de cadeia pesada de Ab61 SEQ ID NO: 77 AACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGC (nucl)
CGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAA GAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCC TGAGAGCCGAGGACACGGCGGTGTACTA CTGCGCCAAGGGCCCTCCTACATACCAC ACAAACTACTACTACATGGACGTATGGGG CAAGGGTACAACTGTCACCGTCTCCTCA GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCTTC CGTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCACTTGTCGGGCGAGTCAGGGTATT AGCAGCTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAA
ACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCT Região variável de cadeia leve de Ab61 ATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTC SEQ ID NO: 78 (nucl) CCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGC CTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTA CTGTCAGCAAACAAATAGTTTCCCTTACA CTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGAT CAAA
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTF Região variável de cadeia pesada de Ab66
SDHYMDWVRQAPGKGLEWVGRTRNKASS (e.g., como encontrado em HC-66) SEQ ID NO: 79 YTTEYAASVKGRFTISRDDSKNSLYLQMNS Cadeia principal de hIgG1
LKTEDTAVYYCAREPKYWIDFDLWGRGTLV (CDRs em negrito)
TVSS Região variável de cadeia leve de Ab66 (e.g., DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISS como encontrado em LC-66) YLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPS SEQ ID NO: 80 Cadeia principal de hKappa RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ (CDRs em negrito) SYIAPYTFGGGTKVEIK SEQ ID NO: 81 CDR-H1 de Ab66 FTFSDHYMD SEQ ID NO: 82 CDR-H2 de Ab66 RTRNKASSYTTEYAASVKG SEQ ID NO: 83 CDR-H3 de Ab66 AREPKYWIDFDL SEQ ID NO: 84 CDR-L1 de Ab66 RASQSISSYLN SEQ ID NO: 85 CDR-L2 de Ab66 AASSLQS
SEQ ID NO: 86 CDR-L3 de Ab66 QQSYIAPYT
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAG GCTTGGTCCAGCCTGGAGGGTCCCTGAG ACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCT TCAGTGACCACTACATGGACTGGGTCCG CCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTG
GGTTGGCCGTACTAGAAACAAAGCTAGTA Região variável de cadeia pesada de Ab66 SEQ ID NO: 87 GTTACACCACAGAATACGCCGCGTCTGTG (nucl)
AAAGGCAGATTCACCATCTCAAGAGATGA TTCAAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAA CAGCCTGAAAACCGAGGACACGGCGGTG TACTACTGCGCCAGAGAGCCTAAATACTG GATCGACTTCGACCTATGGGGGAGAGGT ACCTTGGTCACCGTCTCCTCA GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTC CCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATT AGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAA
ACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCT Região variável de cadeia leve de Ab66 ATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTC SEQ ID NO: 88 (nucl) CCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGT CTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTA CTGTCAGCAAAGCTACATCGCCCCTTACA CTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGAT CAAA
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFS Região variável de cadeia pesada de Ab68
DHDMNWVRQAPGKGLEWVGRTRNAAGSY (e.g., como encontrado em HC-68) SEQ ID NO: 89 TTEYAASVKGRFTISRDDSKNSLYLQMNSL Cadeia principal de hIgG1
KTEDTAVYYCAREPKYWIDFDLWGRGTLV (CDRs em negrito)
TVSS Região variável de cadeia leve de Ab68 (e.g., DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISS como encontrado em LC-68) YLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPS SEQ ID NO: 90 Cadeia principal de hKappa RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ (CDRs em negrito) SYIAPYTFGGGTKVEIK SEQ ID NO: 91 CDR-H1 de Ab68 FTFSDHDMN SEQ ID NO: 92 CDR-H2 de Ab68 RTRNAAGSYTTEYAASVKG SEQ ID NO: 93 CDR-H3 de Ab68 AREPKYWIDFDL SEQ ID NO: 94 CDR-L1 de Ab68 RASQSISSYLN SEQ ID NO: 95 CDR-L2 de Ab68 AASSLQS SEQ ID NO: 96 CDR-L3 de Ab68 QQSYIAPYT
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAG GCTTGGTACAGCCAGGGCGGTCCCTGAG
ACTCTCCTGTACAGCTTCTGGATTCACCT Região variável de cadeia pesada de Ab68 SEQ ID NO: 97 TCAGTGACCACGACATGAACTGGGTCCG (nucl)
CCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTG GGTTGGCCGTACTAGAAACGCCGCTGGA AGTTACACCACAGAATACGCCGCGTCTGT GAAAGGCAGATTCACCATCTCAAGAGATG ATTCAAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGA ACAGCCTGAAAACCGAGGACACGGCGGT GTACTACTGCGCCAGAGAGCCTAAATACT GGATCGACTTCGACCTATGGGGGAGAGG TACCTTGGTCACCGTCTCCTCA GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTC CCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATT AGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAA
ACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCT Região variável de cadeia leve de Ab68 ATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTC SEQ ID NO: 98 (nucl) CCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGT CTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTA CTGTCAGCAAAGCTACATCGCCCCTTACA CTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGAT CAAA
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTF Região variável de cadeia pesada de Ab69
VDHDMDWVRQAPGKGLEWVGRTRNKLGS (e.g., como encontrado em HC-69) SEQ ID NO: 99 YTTEYAASVKGRFTISRDDSKNSLYLQMNS Cadeia principal de hIgG1
LKTEDTAVYYCAREPKYWIDFDLWGRGTLV (CDRs em negrito)
TVSS Região variável de cadeia leve de Ab69 (e.g., DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISS como encontrado em LC-69) YLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPS SEQ ID NO: 100 Cadeia principal de hKappa RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ (CDRs em negrito) SYIAPYTFGGGTKVEIK SEQ ID NO: 101 CDR-H1 de Ab69 FTFVDHDMD SEQ ID NO: 102 CDR-H2 de Ab69 RTRNKLGSYTTEYAASVKG SEQ ID NO: 103 CDR-H3 de Ab69 AREPKYWIDFDL SEQ ID NO: 104 CDR-L1 de Ab69 RASQSISSYLN SEQ ID NO: 105 CDR-L2 de Ab69 AASSLQS SEQ ID NO: 106 CDR-L3 de Ab69 QQSYIAPYT
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAG GCTTGGTCCAGCCTGGAGGGTCCCTGAG ACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCT TCGTAGACCACGACATGGACTGGGTCCG CCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTG
GGTTGGCCGTACTAGAAACAAACTAGGAA Região variável de cadeia pesada de Ab69 SEQ ID NO: 107 GTTACACCACAGAATACGCCGCGTCTGTG (nucl)
AAAGGCAGATTCACCATCTCAAGAGATGA TTCAAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAA CAGCCTGAAAACCGAGGACACGGCGGTG TACTACTGCGCCAGAGAGCCTAAATACTG GATCGACTTCGACCTATGGGGGAGAGGT ACCTTGGTCACCGTCTCCTCA GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTC CCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATT AGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAA
ACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCT Região variável de cadeia leve de Ab69 ATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTC SEQ ID NO: 108 (nucl) CCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGT CTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTA CTGTCAGCAAAGCTACATCGCCCCTTACA CTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGAT CAAA DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISS YLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSR FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQS
YIAPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE Cadeia leve de Ab67 SEQ ID NO: 109 QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDN Região constante de LC sublinhada
ALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLS KADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTF SDADMDWVRQAPGKGLEWVGRTRNKAGS YTTEYAASVKGRFTISRDDSKNSLYLQMNS LKTEDTAVYYCAREPKYWIDFDLWGRGTLV TVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV LQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN
HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE Cadeia pesada de Ab67 SEQ ID NO: 110 LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV Região constante de HC sublinhada
DVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWES NGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLS LSPGK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTF SDADMDWVRQAPGKGLEWVGRTRNKAGS YTTEYAASVKGRFTISRDDSKNSLYLQMNS
LKTEDTAVYYCAREPKYWIDFDLWGRGTLV Cadeia pesada de Ab67 (D265C)* TVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG SEQ ID NO: 111 Região constante de HC sublinhada CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV
LQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV CVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWES NGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLS LSPGK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTF SDADMDWVRQAPGKGLEWVGRTRNKAGS YTTEYAASVKGRFTISRDDSKNSLYLQMNS LKTEDTAVYYCAREPKYWIDFDLWGRGTLV TVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV
LQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN Cadeia pesada de Ab67 (L234A / L235A / HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE SEQ ID NO: 112 D265C)* AAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV Região constante de HC sublinhada VCVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR
EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC KVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWE SNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL SLSPGK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTF SDADMDWVRQAPGKGLEWVGRTRNKAGS YTTEYAASVKGRFTISRDDSKNSLYLQMNS LKTEDTAVYYCAREPKYWIDFDLWGRGTLV TVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV
LQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN Cadeia pesada de Ab67 (D265C / H435A)* HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE SEQ ID NO: 113 Região constante de HC sublinhada LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV
CVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWES NGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNAYTQKSLS LSPGK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTF SDADMDWVRQAPGKGLEWVGRTRNKAGS
YTTEYAASVKGRFTISRDDSKNSLYLQMNS Cadeia pesada de Ab67 (L234A / L235A /
LKTEDTAVYYCAREPKYWIDFDLWGRGTLV SEQ ID NO: 114 D265C / H435A)*
TVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG Região constante de HC sublinhada
CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV LQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV VCVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC KVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWE SNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNAYTQKSL SLSPGK DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSINS YLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSR
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQG Cadeia leve de Ab55 VSDITFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE SEQ ID NO: 115 Região constante de LC sublinhada QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDN
ALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLS KADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTF RIYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPDFGVAN YAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSE DTAVYYCARGGLDTDEFDLWGRGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKP
SNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLG Cadeia pesada de Ab55 SEQ ID NO: 116 GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS Região constante de HC sublinhada
HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRD ELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP GK QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTF RIYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPDFGVAN YAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSE DTAVYYCARGGLDTDEFDLWGRGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS
SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKP Cadeia pesada de Ab55 (D265C)* SEQ ID NO: 117 SNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLG Região constante de HC sublinhada
GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVCVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRD ELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP GK QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTF RIYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPDFGVAN YAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSE DTAVYYCARGGLDTDEFDLWGRGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS
SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKP Cadeia pesada de Ab55 (L234A / L235A / SNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAA SEQ ID NO: 118 D265C)* GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVC Região constante de HC sublinhada VSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE
QYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPS RDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN GQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSL SPGK QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTF RIYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPDFGVAN YAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSE DTAVYYCARGGLDTDEFDLWGRGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS
SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKP Cadeia pesada de Ab55 (D265C / H435A)* SNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLG SEQ ID NO: 119 Região constante de HC sublinhada GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVCVS
HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRD ELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALHNAYTQKSLSLSP GK QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTF RIYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPDFGVAN YAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSE
DTAVYYCARGGLDTDEFDLWGRGTLVTVS Cadeia pesada de Ab55 (L234A / L235A / SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV SEQ ID NO: 120 D265C / H435A)* KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS Região constante de HC sublinhada SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKP
SNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVC VSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPS RDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN GQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK SRWQQGNVFSCSVMHEALHNAYTQKSLSL SPGK
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN Região constante de cadeia leve de LC-54,
FYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQD SEQ ID NO: 121 LC-55, LC-56, LC-57, LC-58, LC-61, LC-66,
SKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVT LC-67, LC-68, LC-69
HQGLSSPVTKSFNRGEC ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH
EDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN SEQ ID NO: 122 Região constante de cadeia pesada de WT
STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDE LTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP ENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG K ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVCVSH
EDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN Região constante de cadeia pesada SEQ ID NO: 123 STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK (D265C)*
ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDE LTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP ENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG K ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAG
GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVCVS Região constante de cadeia pesada (L234A / HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY SEQ ID NO: 124 L235A / D265C)* NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN
KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRD ELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP GK ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG
PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVCVSH Região constante de cadeia pesada (H435A / EDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN SEQ ID NO: 125 D265C)* STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK
ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDE LTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP ENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNAYTQKSLSLSPG K ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAG
GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVCVS Região constante de cadeia pesada (L234A / HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY SEQ ID NO: 126 L235A / H435A / D265C)* NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN
KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRD ELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALHNAYTQKSLSLSP
GK Sequência consenso de CDR1 de cadeia SEQ ID NO: 127 GTF(S/R)(S/I/L)YAIS pesada variável (Abs 54-57) Sequência consenso de CDR2 de cadeia SEQ ID NO: 128 GIIP(I/D/A/H)FG(T/V/L)ANYAQKFQG pesada variável (Abs 54-57) SEQ ID NO: 129 CDR3 de cadeia pesada variável (Abs 54-57) ARGGLDTDEFDL SEQ ID NO: 130 CDR1 de cadeia leve variável (Abs 54-57) RASQSINSYLN SEQ ID NO: 131 CDR2 de cadeia leve variável (Abs 54-57) AASSLQS SEQ ID NO: 132 CDR3 de cadeia leve variável (Abs 54-57) QQGVSDIT Sequência consenso de CDR1 de cadeia SEQ ID NO: 133 FTFS(N/S)Y(A/V)M(S/I) pesada variável (Abs 58, 61) Sequência consenso de CDR2 de cadeia SEQ ID NO: 134 (A/S)ISG(S/D)(G/S)(G/V)(S/T)TYYADSVKG pesada variável (Abs 58, 61) CDR3 de cadeia pesada variável (Abs 58, SEQ ID NO: 135 AKGPPTYHTNYYYMDV 61) SEQ ID NO: 136 CDR1 de cadeia leve variável (Abs 58, 61) RASQGISSWLA SEQ ID NO: 137 CDR2 de cadeia leve variável (Abs 58, 61) AASSLQS SEQ ID NO: 138 CDR3 de cadeia leve variável (Abs 58, 61) QQTNSFPYT Sequência consenso de CDR1 de cadeia SEQ ID NO: 139 FTF(S/V)D(H/A)(Y/D)M(D/N) pesada variável (Abs 66-69) Sequência consenso de CDR2 de cadeia SEQ ID NO: 140 RTRN(K/A)(A/L)(S/G)SYTTEYAASVKG pesada variável (Abs 66-69) SEQ ID NO: 141 CDR3 de cadeia pesada variável (Abs 66-69) AREPKYWIDFDL SEQ ID NO: 142 CDR1 de cadeia leve variável (Abs 66-69) RASQSISSYLN
SEQ ID NO: 143 CDR2 de cadeia leve variável (Abs 66-69) AASSLQS SEQ ID NO: 144 CDR3 de cadeia leve variável (Abs 66-69) QQSYIAPYT
MRGARGAWDFLCVLLLLLRVQTGSSQPSV SPGEPSPPSIHPGKSDLIVRVGDEIRLLCTD PGFVKWTFEILDETNENKQNEWITEKAEAT NTGKYTCTNKHGLSNSIYVFVRDPAKLFLVD RSLYGKEDNDTLVRCPLTDPEVTNYSLKGC QGKPLPKDLRFIPDPKAGIMIKSVKRAYHRL CLHCSVDQEGKSVLSEKFILKVRPAFKAVP VVSVSKASYLLREGEEFTVTCTIKDVSSSVY STWKRENSQTKLQEKYNSWHHGDFNYER QATLTISSARVNDSGVFMCYANNTFGSANV TTTLEVVDKGFINIFPMINTTVFVNDGENVDL IVEYEAFPKPEHQQWIYMNRTFTDKWEDYP KSENESNIRYVSELHLTRLKGTEGGTYTFLV
SNSDVNAAIAFNVYVNTKPEILTYDRLVNGM CD117 humana (Kit do receptor do fator de LQCVAAGFPEPTIDWYFCPGTEQRCSASVL crescimento de mastócitos/células tronco PVDVQTLNSSGPPFGKLVVQSSIDSSAFKH SEQ ID NO: 145 precursor da isoforma 1) NGTVECKAYNDVGKTSAYFNFAFKGNNKE Sequência de Referência de NCBI de QIHPHTLFTPLLIGFVIVAGMMCIIVMILTYKY Proteína: NP_000213.1 LQKPMYEVQWKVVEEINGNNYVYIDPTQLP
YDHKWEFPRNRLSFGKTLGAGAFGKVVEA TAYGLIKSDAAMTVAVKMLKPSAHLTEREAL MSELKVLSYLGNHMNIVNLLGACTIGGPTLV ITEYCCYGDLLNFLRRKRDSFICSKQEDHAE AALYKNLLHSKESSCSDSTNEYMDMKPGV SYVVPTKADKRRSVRIGSYIERDVTPAIMED DELALDLEDLLSFSYQVAKGMAFLASKNCIH RDLAARNILLTHGRITKICDFGLARDIKNDSN YVVKGNARLPVKWMAPESIFNCVYTFESDV WSYGIFLWELFSLGSSPYPGMPVDSKFYK MIKEGFRMLSPEHAPAEMYDIMKTCWDAD PLKRPTFKQIVQLIEKQISESTNHIYSNLANC SPNRQKPVVDHSVRINSVGSTASSSQPLLV HDDV MRGARGAWDFLCVLLLLLRVQTGSSQPSV SPGEPSPPSIHPGKSDLIVRVGDEIRLLCTD PGFVKWTFEILDETNENKQNEWITEKAEAT
NTGKYTCTNKHGLSNSIYVFVRDPAKLFLVD CD117 humana (Kit do receptor do fator de RSLYGKEDNDTLVRCPLTDPEVTNYSLKGC crescimento de mastócitos/células tronco QGKPLPKDLRFIPDPKAGIMIKSVKRAYHRL SEQ ID NO: 146 precursor da isoforma 2) CLHCSVDQEGKSVLSEKFILKVRPAFKAVP Sequência de Referência de NCBI de VVSVSKASYLLREGEEFTVTCTIKDVSSSVY Proteína: NP_001087241.1 STWKRENSQTKLQEKYNSWHHGDFNYER
QATLTISSARVNDSGVFMCYANNTFGSANV TTTLEVVDKGFINIFPMINTTVFVNDGENVDL IVEYEAFPKPEHQQWIYMNRTFTDKWEDYP KSENESNIRYVSELHLTRLKGTEGGTYTFLV SNSDVNAAIAFNVYVNTKPEILTYDRLVNGM LQCVAAGFPEPTIDWYFCPGTEQRCSASVL PVDVQTLNSSGPPFGKLVVQSSIDSSAFKH NGTVECKAYNDVGKTSAYFNFAFKEQIHPH TLFTPLLIGFVIVAGMMCIIVMILTYKYLQKPM YEVQWKVVEEINGNNYVYIDPTQLPYDHKW EFPRNRLSFGKTLGAGAFGKVVEATAYGLI KSDAAMTVAVKMLKPSAHLTEREALMSELK VLSYLGNHMNIVNLLGACTIGGPTLVITEYC CYGDLLNFLRRKRDSFICSKQEDHAEAALY KNLLHSKESSCSDSTNEYMDMKPGVSYVV PTKADKRRSVRIGSYIERDVTPAIMEDDELA LDLEDLLSFSYQVAKGMAFLASKNCIHRDLA ARNILLTHGRITKICDFGLARDIKNDSNYVVK GNARLPVKWMAPESIFNCVYTFESDVWSY GIFLWELFSLGSSPYPGMPVDSKFYKMIKE GFRMLSPEHAPAEMYDIMKTCWDADPLKR PTFKQIVQLIEKQISESTNHIYSNLANCSPNR QKPVVDHSVRINSVGSTASSSQPLLVHDDV QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-1 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGVSS
ALAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSR SEQ ID NO: 148 Região variável de cadeia leve de LC-1
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQF NSYPLTFGGGTKVEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-2 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRT
DLGWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSR SEQ ID NO: 149 Região variável de cadeia leve de LC-2
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQF NSYPLTFGGGTKVEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-3 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS AIRMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRN
DLAWYQQKPGKTPKLLIYDASSLESGVPSR SEQ ID NO: 150 Região variável de cadeia leve de LC-3
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQF NSYPLTFGGGTKVEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-4 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRN
DLGWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSR SEQ ID NO: 151 Região variável de cadeia leve de LC-4
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQF NSYPLTFGGGTKVDIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-5 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS NIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQAISD
YLAWFQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSR SEQ ID NO: 152 Região variável de cadeia leve de LC-5
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQL NSYPLTFGGGTKVEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-6 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS AIRMTQSPSSLSASVGDRVIIACRASQGIGG
ALAWYQQKPGNAPKVLVYDASTLESGVPS SEQ ID NO: 153 Região variável de cadeia leve de LC-6
RFSGGGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ FNSYPLTFGGGTKLEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-7 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS DIAMTQSPPSLSAFVGDRVTITCRASQGIISS
LAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRF SEQ ID NO: 154 Região variável de cadeia leve de LC-7
SGSGSGTDFTLTIRSLQPEDFATYYCQQFN SYPLTFGGGTKLEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-8 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISS
ALAWYQQKAGKAPKVLISDASSLESGVPSR SEQ ID NO: 155 Região variável de cadeia leve de LC-8
FSGSGSGTDFTLSISSLQPEDFATYYCQQF NGYPLTFGGGTKVDIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR Região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 147 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS sequência de aminoácidos HC-9
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS AIRMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQGIRN
DLGWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSR SEQ ID NO: 156 Região variável de cadeia leve de LC-9
FSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQFN SYPLTFGGGTKLEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-10 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS NIQMTQSPSSLSTSVGDRVTITCRASQGIGT
SLAWYQQKPGKPPKLLIYDASSLESGVPSR SEQ ID NO: 157 Região variável de cadeia leve de LC-10
LSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQS NSYPITFGQGTRLEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-11 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIGD
YLTWYQQKPGKAPKVLIYGASSLQSGVPPR SEQ ID NO: 158 Região variável de cadeia leve de LC-11
FSGSGSGTDFTLTVSSLQPEDFATYYCQQL NSYPLTFGGGTKLEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-12 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGVR
STLAWYQQKPGKAPKLLIYDASILESGVPSR SEQ ID NO: 159 Região variável de cadeia leve de LC-12
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQF NGYPLTFGQGTRLEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-13 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRN
DLGWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSR SEQ ID NO: 160 Região variável de cadeia leve de LC-13
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQF NSYPLTFGGGTKLEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-14 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISS
FLAWYQQKPGKAPKLLIYDASTLQSGVPSR SEQ ID NO: 161 Região variável de cadeia leve de LC-14
FSGSASGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQLN GYPLTFGGGTKVEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-15 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIGS
ALAWYQQKPGIGPKLLIYDASTLESGVPARF SEQ ID NO: 162 Região variável de cadeia leve de LC-15
SGSGSRTDFTLTITSLQPEDFATYYCQQFN GYPLTFGGGTKLEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-16 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGITS
ALAWYQEKPGKAPNLLIYDASSLESGVPSR SEQ ID NO: 163 Região variável de cadeia leve de LC-16
FSGSGYGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQL NSYPLTFGGGTKVDIK QIQLVQSGPELRKPGESVKISCKASGYTFT
DYAMYWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGKP SEQ ID NO: 164 Região variável de cadeia pesada de HC-17 TYADDFKGRFVFSLEASANTANLQISNLKNE
DTATYFCARARGLVDDYVMDAWGQGTSVT VSS SYELIQPPSASVTLGNTVSLTCVGDELSKRY
AQWYQQKPDKTIVSVIYKDSERPSGISDRF SEQ ID NO: 165 Região variável de cadeia leve de LC-17
SGSSSGTTATLTIHGTLAEDEADYYCLSTYS DDNLPVFGGGTKLTVL EVQLQQYGAELGKPGTSVRLSCKVSGYNIR
NTYIHWVNQRPGEGLEWIGRIDPTNGNTIS SEQ ID NO: 166 Região variável de cadeia pesada de HC-18
AEKFKTKATLTADTSSHTAYLQFSQLKSDDT AIYFCALNYEGYADYWGQGVMVTGSS DIQMTQSPSFLSASVGDRVTINCKASQNINK
YLNWYQQKVGEAPKRLIFKTNSLQTGIPSR SEQ ID NO: 167 Região variável de cadeia leve de LC-18
FSGSGSGTDYTLTISSLQTEDVATYFCFQY NIGYTFGAGTKVELK EVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCSVTGYSIS
SNYRWNWIRKFPGNKVEWMGYINSAGSTN SEQ ID NO: 168 Região variável de cadeia pesada de HC-19 YNPSLKSRISMTRDTSKNQFFLQVNSVTTE
DTATYYCARSLRGYITDYSGFFDYWGQGV MVTVSS DIRMTQSPASLSASLGETVNIECLASEDIFS
DLAWYQQKPGKSPQLLIYNANSLQNGVPS SEQ ID NO: 169 Região variável de cadeia leve de LC-19
RFSGSGSGTRYSLKINSLQSEDVATYFCQQ YKNYPLTFGSGTKLEIK EVQLQQYGAELGKPGTSVRLSCKLSGYKIR
NTYIHWVNQRPGKGLEWIGRIDPANGNTIY SEQ ID NO: 170 Região variável de cadeia pesada de HC-20
AEKFKSKVTLTADTSSNTAYMQLSQLKSDD TALYFCAMNYEGYEDYWGQGVMVTVSS DIQMTQSPSFLSASVGDSVTINCKASQNINK
YLNWYQQKLGEAPKRLIHKTDSLQTGIPSR SEQ ID NO: 171 Região variável de cadeia leve de LC-20
FSGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYFCFQY KSGFMFGAGTKLELK QIQLVQSGPELKKPGESVKISCKASGYTFTD
YAVYWVIQAPGKGLKWMGWINTYTGKPTY SEQ ID NO: 172 Região variável de cadeia pesada de HC-21
ADDFKGRFVFSLETSASTANLQISNLKNEDT ATYFCARGAGMTKDYVMDAWGRGVLVTVS SYELIQPPSASVTLGNTVSLTCVGDELSKRY
AQWYQQKPDKTIVSVIYKDSERPSDISDRFS SEQ ID NO: 173 Região variável de cadeia leve de LC-21
GSSSGTTATLTIHGTLAEDEADYYCLSTYSD DNLPVFGGGTKLTVL QVQLKESGPGLVQPSQTLSLTCTVSGFSLT
SYLVHWVRQPPGKTLEWVGLMWNDGDTS SEQ ID NO: 174 Região variável de cadeia pesada de HC-22
YNSALKSRLSISRDTSKSQVFLKMHSLQAE DTATYYCARESNLGFTYWGHGTLVTVSS DIQMTQSPASLSASLEEIVTITCKASQGIDDD
LSWYQQKPGKSPQLLIYDVTRLADGVPSRF SEQ ID NO: 175 Região variável de cadeia leve de LC-22
SGSRSGTQYSLKISRPQVADSGIYYCLQSY STPYTFGAGTKLELK EVQLQQYGAELGKPGTSVRLSCKVSGYNIR
NTYIHWVHQRPGEGLEWIGRIDPTNGNTIS SEQ ID NO: 176 Região variável de cadeia pesada de HC-23
AEKFKSKATLTADTSSNTAYMQFSQLKSDD TAIYFCAMNYEGYADYWGQGVMVTVSS DIQMTQSPSFLSASVGDRLTINCKASQNINK
YLNWYQQKLGEAPKRLIFKTNSLQTGIPSRF SEQ ID NO: 177 Região variável de cadeia leve de LC-23
SGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYFCFQYNI GFTFGAGTKLELK EVQLVESGGGLVQSGRSLKLSCAASGFTV
SDYYMAWVRQAPTKGLEWVATINYDGSTT SEQ ID NO: 178 Região variável de cadeia pesada de HC-24 YHRDSVKGRFTISRDNAKSTLYLQMDSLRS
EDTATYYCARHGDYGYHYGAYYFDYWGQ GVMVTVSS DIVLTQSPALAVSLGQRATISCRASQTVSLS
GYNLIHWYQQRTGQQPKLLIYRASNLAPGI SEQ ID NO: 179 Região variável de cadeia leve de LC-24
PARFSGSGSGTDFTLTISPVQSDDIATYYCQ QSRESWTFGGGTNLEMK QIQLVQSGPELKKPGESVKISCKASGYTFTD
YAIHWVKQAPGQGLRWMAWINTETGKPTY SEQ ID NO: 180 Região variável de cadeia pesada de HC-25
ADDFKGRFVFSLEASASTAHLQISNLKNEDT ATFFCAGGSHWFAYWGQGTLVTVSS SYELIQPPSASVTLENTVSITCSGDELSNKY
AHWYQQKPDKTILEVIYNDSERPSGISDRFS SEQ ID NO: 181 Região variável de cadeia leve de LC-25
GSSSGTTAILTIRDAQAEDEADYYCLSTFSD DDLPIFGGGTKLTVL QIQLVQSGPELKKPGESVKISCKASGYTFTD
YAVYWVIQAPGKGLKWMGWINTYTGKPTY SEQ ID NO: 172 Região variável de cadeia pesada de HC-26
ADDFKGRFVFSLETSASTANLQISNLKNEDT ATYFCARGAGMTKDYVMDAWGRGVLVTVS SYELIQPPSTSVTLGNTVSLTCVGNELPKRY
AYWFQQKPDQSIVRLIYDDDRRPSGISDRF SEQ ID NO: 182 Região variável de cadeia leve de LC-26
SGSSSGTTATLTIRDAQAEDEAYYYCHSTY TDDKVPIFGGGTKLTVL EVQLVESGGGLVQPGRSMKLSCKASGFTF
SNYDMAWVRQAPTRGLEWVASISYDGITAY SEQ ID NO: 183 Região variável de cadeia pesada de HC-27 YRDSVKGRFTISRENAKSTLYLQLVSLRSED
TATYYCTTEGGYVYSGPHYFDYWGQGVMV TVSS DIQMTQSPSSMSVSLGDTVTITCRASQDVGI
FVNWFQQKPGRSPRRMIYRATNLADGVPS SEQ ID NO: 184 Região variável de cadeia leve de LC-27
RFSGSRSGSDYSLTISSLESEDVADYHCLQ YDEFPRTFGGGTKLELK EVQLQQYGAELGKPGTSVRLSCKVSGYKIR
NTYIHWVNQRPGKGLEWIGRIDPANGNTIY SEQ ID NO: 185 Região variável de cadeia pesada de HC-28
AEKFKSKVTLTADTSSNTAYMQLSQLKSDD TALYFCAMNYEGYEDYWGQGVMVTVSS DIQMTQSPSFLSASVGDSVTINCKASQNINK
YLNWYQQKLGEAPKRLIHKTNSLQPGFPSR SEQ ID NO: 186 Região variável de cadeia leve de LC-28
FSGSGSGTDYTLTISSLQPEDVAAYFCFQY NSGFTFGAGTKLELK QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTF
TDYYIHWVRQAPGQGLEWMGWMNPHSGD SEQ ID NO: 187 Região variável de cadeia pesada de HC-29 TGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSL
RSEDTAVYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQ GTLVTVSSAS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIG
NELGWYQQKPGKAPKLLIYAASNLQSGVPS SEQ ID NO: 188 Região variável de cadeia leve de LC-29
RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ YDNLPLTFGQGTKVEIK QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTF
TGYYLHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGD SEQ ID NO: 189 Região variável de cadeia pesada de HC-30 TNYAQNFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSL
RSEDTAVYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQ GTLVTVSSAS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRN
DLGWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSR SEQ ID NO: 190 Região variável de cadeia leve de LC-30
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQL NGYPLTFGGGTKVEIK QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTF
TGYYLHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGG SEQ ID NO: 191 Região variável de cadeia pesada de HC-31 TNYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLR
SEDTAVYYCARHGRGYEGYEGAFDIWGQG TLVTVSSAS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRN
DLGWYQQKPGKAPKLLIYDASELETGVPSR SEQ ID NO: 192 Região variável de cadeia leve de LC-31
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQL NGYPITFGQGTKVEIK QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTF
TSYYIHWVRQAPGQGLEWMGWLNPSGGG SEQ ID NO: 193 Região variável de cadeia pesada de HC-32 TSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLR
SEDTAVYYCARHGRGYDGYEGAFDIWGQG TLVTVSSAS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRN
DLGWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSR SEQ ID NO: 194 Região variável de cadeia leve de LC-32
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQL NGYPLTFGGGTKVEIK QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTF
STYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGST SEQ ID NO: 195 Região variável de cadeia pesada de HC-33 SYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMKLSSLRS
EDTAVYYCARHGRGYEGYEGAFDIWGQGT LVTVSSAS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRD
DLGWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSR SEQ ID NO: 196 Região variável de cadeia leve de LC-33
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQA NGFPLTFGGGTKVEIK QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTF
TGYYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGNT SEQ ID NO: 197 Região variável de cadeia pesada de HC-34 NYAQNFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLR
SEDTAVYYCARHGRGYNAYEGAFDIWGQG TLVTVSSAS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRN
DLGWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSR SEQ ID NO: 198 Região variável de cadeia leve de LC-34
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQV NGYPLTFGGGTKVEIK QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGGTF
SSYAISWVRQAPGQGLEWMGVINPTVGGA SEQ ID NO: 199 Região variável de cadeia pesada de HC-35 NYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLR
SEDTAVYYCARHGRGYNEYEGAFDIWGQG TLVTVSSAS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISD
YLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSR SEQ ID NO: 200 Região variável de cadeia leve de LC-35
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQG NSFPLTFGGGTKLEIK QVQLVQSGAEVKKLGASVKVSCKASGYTF
SSYYMHWVRQAPGQGLEWMGVINPNGAG SEQ ID NO: 201 Região variável de cadeia pesada de HC-36 TNFAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLR
SEDTAVYYCARHGRGYEGYEGAFDIWGQG TLVTVSSAS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRN
DLGWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSR SEQ ID NO: 190 Região variável de cadeia leve de LC-36
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQL NGYPLTFGGGTKVEIK QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTF
TTYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPTGGG SEQ ID NO: 202 Região variável de cadeia pesada de HC-37 TNYAQNFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSL
RSEDTAVYYCARHGRGYEGYEGAFDIWGQ GTLVTVSSAS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRN
DVSWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSR SEQ ID NO: 203 Região variável de cadeia leve de LC-37
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQL SGYPITFGQGTKLEIK QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTF
TSYYIHWVRQAPGQGLEWMGMINPSGGST SEQ ID NO: 204 Região variável de cadeia pesada de HC-38 NYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLR
SEDTAVYYCARHGRGYNDYEGAFDIWGQG TLVTVSSAS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISD
WLAWYQQKPGKAPKLLIYEASNLEGGVPS SEQ ID NO: 205 Região variável de cadeia leve de LC-38
RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ ANSFPYTFGQGTKVEIK QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFS
AYYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTR SEQ ID NO: 206 Região variável de cadeia pesada de HC-39 YAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSE
DTAVYYCARHGRGYGGYEGAFDIWDQGTL VTVSSAS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIG
DYVAWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPS SEQ ID NO: 207 Região variável de cadeia leve de LC-39
RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ LNGYPITFGQGTRLEIK EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYRFT
SYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPDDSDTR SEQ ID NO: 208 Região variável de cadeia pesada de HC-40 YSPSFQGQVTISVDKSNSTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGTL VTVSSAS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISS
YLAWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSR SEQ ID NO: 209 Região variável de cadeia leve de LC-40
FSGSGSGTYFTLTISSLQPEDFATYYCQQG ASFPITFGQGTKVEIK EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGSSFP
NSWIAWVRQMPGKGLEWMGIIYPSDSDTR SEQ ID NO: 210 Região variável de cadeia pesada de HC-41 YSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLEAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGTL VTVSSAS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRN
YLAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLQSGVPSR SEQ ID NO: 211 Região variável de cadeia leve de LC-41
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQL NSYPLTFGGGTKVEIK EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFD
SYWIGWVRQMPGKGLEWMGIMYPGDSDT SEQ ID NO: 212 Região variável de cadeia pesada de HC-42 RYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKA
SDTAMYYCARHGRGYNAYEGAFDIWGQGT LVTVSSAS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSINN
WLAWYQQKPGKAPKLLIYDAFILQSGVPSR SEQ ID NO: 213 Região variável de cadeia leve de LC-42
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQLN SYPLTFGPGTKVDIK EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFT
NWIAWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSETRY SEQ ID NO: 214 Região variável de cadeia pesada de HC-43 SPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDT
AMYYCARHGRGYYGYEGAFDIWGQGTLVT VSSAS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISD
NLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSR SEQ ID NO: 215 Região variável de cadeia leve de LC-43
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAI SFPLTFGQGTKVEIK EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYNFT
SYWIGWVRQMPGKGLEWMGVIYPDDSETR SEQ ID NO: 216 Região variável de cadeia pesada de HC-44 YSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGTL VTVSSAS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRDIRD
DLGWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSR SEQ ID NO: 217 Região variável de cadeia leve de LC-44
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQA NSFPLTFGGGTKVEIK EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYTFN
TYIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSGTRY SEQ ID NO: 218 Região variável de cadeia pesada de HC-45 SPSFQGQVTISADKAISTAYLQWSSLKASDT
AMYYCARHSRGYNGYEGAFDIWGQGTLVT VSSAS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISN
YLAWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSR SEQ ID NO: 219 Região variável de cadeia leve de LC-45
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQA NSFPVTFGQGTKVEIK EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYNFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIHPADSDTR SEQ ID NO: 220 Região variável de cadeia pesada de HC-46 YNPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGTL VTVSSAS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSQGISS
YLAWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSR SEQ ID NO: 221 Região variável de cadeia leve de LC-46
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQA NSFPLTFGGGTKVEIK EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYRFS
NYWIAWVRQMPGKGLEWMGIIYPDNSDTR SEQ ID NO: 222 Região variável de cadeia pesada de HC-47 YSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYDGYEGAFDIWGQGTL VTVSSAS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRS
DLAWYQQKPGKAPKLLIYGASSLQSGVPSR SEQ ID NO: 223 Região variável de cadeia leve de LC-47
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQA NSFPLSFGQGTKVEIK EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYRFA
SYWIGWVRQMPGKGLEWMGITYPGDSETR SEQ ID NO: 224 Região variável de cadeia pesada de HC-48 YNPSQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASD
TAMYYCARHGRGYGGYEGAFDIWGQGTLV TVSSAS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRN
DLGWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSR SEQ ID NO: 225 Região variável de cadeia leve de LC-48
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQA NSFPLTFGGGTKVEIK EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFT
SYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 226 Região variável de cadeia pesada de HC-49 YSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGTL VTVSSAS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISN
WLAWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSR SEQ ID NO: 227 Região variável de cadeia leve de LC-49
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQT NSFPLTFGQGTRLEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-74 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGVIS
ALAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSR SEQ ID NO: 228 Região variável de cadeia leve de LC-74
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQF NSYPLTFGGGTKVEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-75 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRS
ALAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSR SEQ ID NO: 229 Região variável de cadeia leve de LC-75
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQF NSYPLTFGGGTKVEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-76 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGVG
SALAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPS SEQ ID NO: 230 Região variável de cadeia leve de LC-76
RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ FNSYPLTFGGGTKVEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-77 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGVIS
ALAWYQQKPGKAPKLLIYDASILESGVPSRF SEQ ID NO: 231 Região variável de cadeia leve de LC-77
SGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFN SYPLTFGGGTKVEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-78 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRS
ALAWYQQKPGKAPKLLIYDASILESGVPSRF SEQ ID NO: 232 Região variável de cadeia leve de LC-78
SGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFN SYPLTFGGGTKVEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-79 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGVG
SALAWYQQKPGKAPKLLIYDASILESGVPSR SEQ ID NO: 233 Região variável de cadeia leve de LC-79
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQF NSYPLTFGGGTKVEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-80 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISS
ALAWYQQKPGKAPKLLIYDASILESGVPSRF SEQ ID NO: 234 Região variável de cadeia leve de LC-80
SGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFN SYPLTFGGGTKVEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-81 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGVIS
ALAWYQQKPGKAPKLLIYDASTLESGVPSR SEQ ID NO: 235 Região variável de cadeia leve de LC-81
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQF NSYPLTFGGGTKVEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-82 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRS
ALAWYQQKPGKAPKLLIYDASTLESGVPSR SEQ ID NO: 236 Região variável de cadeia leve de LC-82
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQF NSYPLTFGGGTKVEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-83 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGVG
SALAWYQQKPGKAPKLLIYDASTLESGVPS SEQ ID NO: 237 Região variável de cadeia leve de LC-83
RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ FNSYPLTFGGGTKVEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-84 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGVG
SALAWYQQKPGKAPKLLIYDASTLESGVPS SEQ ID NO: 237 Região variável de cadeia leve de LC-84
RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ FNSYPLTFGGGTKVEIK EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TSWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 238 Região variável de cadeia pesada de HC-245 YSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGLGYNGYEGAFDIWGQGTL VTVSS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIGS
ALAWYQQKPGKAPKLLIYDASTLESGVPSR SEQ ID NO: 239 Região variável de cadeia leve de LC-245
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQF NGYPLTFGQGTRLEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-246 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIGS
ALAWYQQKPGKAPKLLIYDASTLESGVPSR SEQ ID NO: 239 Região variável de cadeia leve de LC-246
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQF NGYPLTFGQGTRLEIK QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 147 Região variável de cadeia pesada de HC-247 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRGISD
YLAWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSR SEQ ID NO: 240 Região variável de cadeia leve de LC-247
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQA NSFPITFGQGTRLEIK EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TSWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 238 Região variável de cadeia pesada de HC-248 YSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGLGYNGYEGAFDIWGQGTL VTVSS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIGS
ALAWYQQKPGKAPKLLIYDASTLESGVPSR SEQ ID NO: 241 Região variável de cadeia leve de LC-248
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQL NGYPLTFGQGTRLEIK EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYRFT
TSWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 238 Região variável de cadeia pesada de HC-249 YSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGLGYNGYEGAFDIWGQGTL VTVSS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIGS
ALAWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSR SEQ ID NO: 242 Região variável de cadeia leve de LC-249
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQL NGYPLTFGQGTRLEIK EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFT
NYWIGWVRQMPGKGLEWMAIINPRDSDTR SEQ ID NO: 243 Região variável de cadeia pesada de Ab85 YRPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYEGYEGAFDIWGQGTL VTVSS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQGIRS
DLGWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSR SEQ ID NO: 244 Região variável de cadeia leve de Ab85
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQA
NGFPLTFGGGTKVEIK SEQ ID NO: 245 CDR-H1 de Ab85 NYWIG SEQ ID NO: 246 CDR-H2 de Ab85 IINPRDSDTRYRPSFQG SEQ ID NO: 247 CDR-H3 de Ab85 HGRGYEGYEGAFDI SEQ ID NO: 248 CDR-L1 de Ab85 RSSQGIRSDLG CDR-L2 de Ab85 SEQ ID NO: 249 DASNLET CDR-L2 de Ab249 SEQ ID NO: 250 CDR-L3 de Ab85 QQANGFPLT
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFT
NYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDIR SEQ ID NO: 251 Região variável de cadeia pesada de Ab 86 YSPSLQGQVTISVDTSTSTAYLQWNSLKPS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGTL VTVSS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIG
DSLAWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPS SEQ ID NO: 252 Região variável de cadeia leve de Ab 86
RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ
LNGYPITFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 245 CDR-H1 de Ab86 NYWIG SEQ ID NO: 253 CDR-H2 de Ab86 IIYPGDSDIRYSPSLQG SEQ ID NO: 3 CDR-H3 de Ab86 HGRGYNGYEGAFDI SEQ ID NO: 254 CDR-L1 de Ab86 RASQGIGDSLA SEQ ID NO: 249 CDR-L2 de Ab86 DASNLET SEQ ID NO: 255 CDR-L3 de Ab86 QQLNGYPIT
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFT
NYWIGWVRQMPGKGLEWMAIINPRDSDTR SEQ ID NO: 243 Região variável de cadeia pesada de Ab87 YRPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYEGYEGAFDIWGQGTL VTVSS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRN
DLGWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSR SEQ ID NO: 256 Região variável de cadeia leve de Ab87
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQL
NGYPITFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 245 CDR-H1 de Ab87 NYWIG SEQ ID NO: 246 CDR-H2 de Ab87 IINPRDSDTRYRPSFQG
SEQ ID NO: 247 CDR-H3 de Ab87 HGRGYEGYEGAFDI SEQ ID NO: 257 CDR-L1 de Ab87 RASQGIRNDLG SEQ ID NO: 5 CDR-L2 de Ab87 DASSLES SEQ ID NO: 255 CDR-L3 de Ab87 QQLNGYPIT
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFT
NYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSLTR SEQ ID NO: 258 Região variável de cadeia pesada de Ab88 YSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGTL VTVSS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRN
DLGWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSR SEQ ID NO: 256 Região variável de cadeia leve de Ab88
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQL
NGYPITFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 245 CDR-H1 de Ab88 NYWIG SEQ ID NO: 259 CDR-H2 de Ab88 IIYPGDSLTRYSPSFQG SEQ ID NO: 3 CDR-H3 de Ab88 HGRGYNGYEGAFDI SEQ ID NO: 257 CDR-L1 de Ab88 RASQGIRNDLG SEQ ID NO: 5 CDR-L2 de Ab88 DASSLES
SEQ ID NO: 255 CDR-L3 de Ab88 QQLNGYPIT
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFT
NYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR SEQ ID NO: 260 Região variável de cadeia pesada de Ab89 YSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGTL VTVSS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIG
DSLAWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPS SEQ ID NO: 252 Região variável de cadeia leve de Ab89
RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ
LNGYPITFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 245 CDR-H1 de Ab89 NYWIG SEQ ID NO: 2 CDR-H2 de Ab89 IIYPGDSDTRYSPSFQG SEQ ID NO: 3 CDR-H3 de Ab89 HGRGYNGYEGAFDI SEQ ID NO: 254 CDR-L1 de Ab89 RASQGIGDSLA SEQ ID NO: 249 CDR-L2 de Ab89 DASNLET SEQ ID NO: 255 CDR-L3 de Ab89 QQLNGYPIT
QVQLVQSGAAVKKPGESLKISCKGSGYRFT
SYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR Sequência de aminoácidos de região variável SEQ ID NO: 261 YSPSFQGQVTISAGKSISTAYLQWSSLKAS de cadeia pesada de CK6
DTAMYYCARHGRGYNGYEGAFDIWGQGT MVTVSS
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISS Sequência de aminoácidos de região variável ALAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSR SEQ ID NO: 262 de cadeia leve de CK6 FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQF
NSYPLTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO: 263 CDR-H1 de Ab77 TYWIG
SEQ ID NO: 2 CDR-H2 de Ab77 IIYPGDSDTRYSPSFQG
SEQ ID NO: 3 CDR-H3 de Ab77 HGRGYNGYEGAFDI
SEQ ID NO: 264 CDR-L1 de Ab77 RASQGVISALA
SEQ ID NO: 265 CDR-L2 de Ab77 DASILES
SEQ ID NO: 266 CDR-L3 de Ab77 QQFNSYPLT
SEQ ID NO: 263 CDR-H1 de Ab79 TYWIG
SEQ ID NO: 2 CDR-H2 de Ab79 IIYPGDSDTRYSPSFQG
SEQ ID NO: 3 CDR-H3 de Ab79 HGRGYNGYEGAFDI
SEQ ID NO: 267 CDR-L1 de Ab79 RASQGVGSALA
SEQ ID NO: 265 CDR-L2 de Ab79 DASILES
SEQ ID NO: 266 CDR-L3 de Ab79 QQFNSYPLT SEQ ID NO: 263 CDR-H1 de Ab81 TYWIG SEQ ID NO: 2 CDR-H2 de Ab81 IIYPGDSDTRYSPSFQG SEQ ID NO: 3 CDR-H3 de Ab81 HGRGYNGYEGAFDI SEQ ID NO: 264 CDR-L1 de Ab81 RASQGVISALA SEQ ID NO: 268 CDR-L2 de Ab81 DASTLES SEQ ID NO: 266 CDR-L3 de Ab81 QQFNSYPLT
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG
PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH Região constante de cadeia pesada (Tipo EDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN SEQ ID NO: 269 selvagem (WT)) STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK
ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDE LTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP ENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG K ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS
GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS Região constante de cadeia pesada com
NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAG SEQ ID NO: 270 mutações L234A, L235A (LALA) (mutações
GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS em negrito)*
HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRD ELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP GK ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG
PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVCVSH Região constante de cadeia pesada com
EDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN SEQ ID NO: 271 mutação D265C
STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK (mutação em negrito)*
ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDE LTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP ENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG K ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG
PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH Região constante de cadeia pesada com
EDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN SEQ ID NO: 272 mutação H435A
STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK (mutação em negrito)*
ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDE LTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP ENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNAYTQKSLSLSPG K ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAG
GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVCVS Região constante de cadeia pesada: região
HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY SEQ ID NO: 273 Fc modificada com mutações L234A, L235A,
NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN D265C (mutações em negrito)*
KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRD ELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP GK ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS
GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS Região constante de cadeia pesada: região
NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAG SEQ ID NO: 274 Fc modificada com mutações L234A, L235A,
GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVCVS D265C, H435A (mutações em negrito)*
HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRD ELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALHNAYTQKSLSLSP GK EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFT NYWIGWVRQMPGKGLEWMAIINPRDSDTR YRPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKAS DTAMYYCARHGRGYEGYEGAFDIWGQGTL VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAAL GCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA
VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN Sequência de cadeia pesada de
HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE SEQ ID NO: 275 comprimento total de Ab85; região constante
LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV sublinhada
DVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWES NGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLS LSPGK EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFT NYWIGWVRQMPGKGLEWMAIINPRDSDTR YRPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKAS DTAMYYCARHGRGYEGYEGAFDIWGQGTL VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAAL
GCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA Sequência de cadeia pesada de
VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN comprimento total de Ab85; região constante
HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE SEQ ID NO: 276 sublinhada; região Fc modificada com
AAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV mutações L234A, L235A (mutações em
VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR negrito)*
EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC KVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWE SNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL SLSPGK EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFT NYWIGWVRQMPGKGLEWMAIINPRDSDTR YRPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKAS
DTAMYYCARHGRGYEGYEGAFDIWGQGTL Sequência de cadeia pesada de
VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAAL comprimento total de Ab85: região constante
GCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA SEQ ID NO: 277 sublinhada; região Fc modificada com
VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN mutações L234A, L235A, D265C (mutações
HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE em negrito)*
AAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV VCVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC KVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWE SNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL SLSPGK EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFT NYWIGWVRQMPGKGLEWMAIINPRDSDTR YRPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKAS DTAMYYCARHGRGYEGYEGAFDIWGQGTL VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAAL
GCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA Sequência de cadeia pesada de VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN comprimento total de Ab85 (mutante LALA - HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE SEQ ID NO: 278 D265C - H435A); região constante AAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV sublinhada VCVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR
EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC KVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWE SNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNAYTQKSL SLSPGK EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYRFT TSWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR YSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKAS DTAMYYCARHGLGYNGYEGAFDIWGQGTL VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAAL GCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA
VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN Sequência de cadeia pesada de
HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE SEQ ID NO: 279 comprimento total de Ab249; região
LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV constante sublinhada
DVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWES NGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLS LSPGK EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYRFT TSWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR YSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKAS DTAMYYCARHGLGYNGYEGAFDIWGQGTL
VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAAL Sequência de cadeia pesada de
GCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA SEQ ID NO: 280 comprimento total de Ab249; região
VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN constante sublinhada (mutações LALA)*
HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC KVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWE SNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL SLSPGK EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYRFT TSWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR YSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKAS DTAMYYCARHGLGYNGYEGAFDIWGQGTL VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAAL
GCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA Sequência de cadeia pesada de VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN comprimento total de Ab249; região HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE SEQ ID NO: 281 constante sublinhada (mutações LALA - AAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV D265C)* VCVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR
EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC KVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWE SNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL SLSPGK EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYRFT TSWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR YSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKAS DTAMYYCARHGLGYNGYEGAFDIWGQGTL VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAAL
GCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA Sequência de cadeia pesada de VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN comprimento total de Ab249; região HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE SEQ ID NO: 282 constante sublinhada; (mutações LALA - AAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV D265C - H435A)* VCVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR
EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC KVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWE SNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNAYTQKSL SLSPGK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN
FYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQD SEQ ID NO: 283 Região constante de cadeia leve
SKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVT HQGLSSPVTKSFNRGEC DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQGIRS DLGWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSR
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQA Cadeia leve de comprimento total de Ab85; NGFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSD SEQ ID NO: 284 região constante sublinhada EQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVD
NALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTL SKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIGS ALAWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSR
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQL Cadeia leve de Ab249; região constante NGYPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSD SEQ ID NO: 285 sublinhada EQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVD
NALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTL SKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR
GEC SEQ ID NO: 286 HC-CDR1 de Ab249 TSWIG SEQ ID NO: 287 HC-CDR3 de Ab249 HGLGYNGYEGAFDI SEQ ID NO: 288 LC-CDR1 de Ab249 RASQGIGSALA SEQ ID NO: 289 LC-CDR3 de Ab249 QQLNGYPLT
MTMYLWLKLLAFGFAFLDTEVFVTGQSPTP SPTDAYLNASETTTLSPSGSAVISTTTIATTP SKPTCDEKYANITVDYLYNKETKLFTAKLNV NENVECGNNTCTNNEVHNLTECKNASVSIS HNSCTAPDKTLILDVPPGVEKFQLHDCTQV EKADTTICLKWKNIETFTCDTQNITYRFQCG NMIFDNKEIKLENLEPEHEYKCDSEILYNNH KFTNASKIIKTDFGSPGEPQIIFCRSEAAHQG VITWNPPQRSFHNFTLCYIKETEKDCLNLDK NLIKYDLQNLKPYTKYVLSLHAYIIAKVQRNG SAAMCHFTTKSAPPSQVWNMTVSMTSDNS
MHVKCRPPRDRNGPHERYHLEVEAGNTLV SEQ ID NO: 290 CD45RO (Isoforma de CD45 humana)
RNESHKNCDFRVKDLQYSTDYTFKAYFHN GDYPGEPFILHHSTSYNSKALIAFLAFLIIVTS IALLVVLYKIYDLHKKRSCNLDEQQELVERD DEKQLMNVEPIHADILLETYKRKIADEGRLFL AEFQSIPRVFSKFPIKEARKPFNQNKNRYVD ILPYDYNRVELSEINGDAGSNYINASYIDGFK EPRKYIAAQGPRDETVDDFWRMIWEQKAT VIVMVTRCEEGNRNKCAEYWPSMEEGTRA FGDVVVKINQHKRCPDYIIQKLNIVNKKEKA TGREVTHIQFTSWPDHGVPEDPHLLLKLRR RVNAFSNFFSGPIVVHCSAGVGRTGTYIGID AMLEGLEAENKVDVYGYVVKLRRQRCLMV QVEAQYILIHQALVEYNQFGETEVNLSELHP YLHNMKKRDPPSEPSPLEAEFQRLPSYRS WRTQHIGNQEENKSKNRNSNVIPYDYNRV PLKHELEMSKESEHDSDESSDDDSDSEEP SKYINASFIMSYWKPEVMIAAQGPLKETIGD FWQMIFQRKVKVIVMLTELKHGDQEICAQY WGEGKQTYGDIEVDLKDTDKSSTYTLRVFE LRHSKRKDSRTVYQYQYTNWSVEQLPAEP KELISMIQVVKQKLPQKNSSEGNKHHKSTP LLIHCRDGSQQTGIFCALLNLLESAETEEVV DIFQVVKALRKARPGMVSTFEQYQFLYDVIA STYPAQNGQVKKNNHQEDKIEFDNEVDKV KQDANCVNPLGAPEKLPEAKEQAEGSEPT SGTEGPEHSVNGPASPALNQGS MTMYLWLKLLAFGFAFLDTEVFVTGQSPTP SPTGLTTAKMPSVPLSSDPLPTHTTAFSPA STFERENDFSETTTSLSPDNTSTQVSPDSL DNASAFNTTDAYLNASETTTLSPSGSAVIST TTIATTPSKPTCDEKYANITVDYLYNKETKLF TAKLNVNENVECGNNTCTNNEVHNLTECK NASVSISHNSCTAPDKTLILDVPPGVEKFQL HDCTQVEKADTTICLKWKNIETFTCDTQNIT YRFQCGNMIFDNKEIKLENLEPEHEYKCDS EILYNNHKFTNASKIIKTDFGSPGEPQIIFCR SEAAHQGVITWNPPQRSFHNFTLCYIKETE KDCLNLDKNLIKYDLQNLKPYTKYVLSLHAYI IAKVQRNGSAAMCHFTTKSAPPSQVWNMT VSMTSDNSMHVKCRPPRDRNGPHERYHLE VEAGNTLVRNESHKNCDFRVKDLQYSTDYT FKAYFHNGDYPGEPFILHHSTSYNSKALIAF
LAFLIIVTSIALLVVLYKIYDLHKKRSCNLDEQ SEQ ID NO: 291 CD45RA (Isoforma de CD45 humana)
QELVERDDEKQLMNVEPIHADILLETYKRKI ADEGRLFLAEFQSIPRVFSKFPIKEARKPFN QNKNRYVDILPYDYNRVELSEINGDAGSNYI NASYIDGFKEPRKYIAAQGPRDETVDDFWR MIWEQKATVIVMVTRCEEGNRNKCAEYWP SMEEGTRAFGDVVVKINQHKRCPDYIIQKLN IVNKKEKATGREVTHIQFTSWPDHGVPEDP HLLLKLRRRVNAFSNFFSGPIVVHCSAGVG RTGTYIGIDAMLEGLEAENKVDVYGYVVKL RRQRCLMVQVEAQYILIHQALVEYNQFGET EVNLSELHPYLHNMKKRDPPSEPSPLEAEF QRLPSYRSWRTQHIGNQEENKSKNRNSNVI PYDYNRVPLKHELEMSKESEHDSDESSDD DSDSEEPSKYINASFIMSYWKPEVMIAAQG PLKETIGDFWQMIFQRKVKVIVMLTELKHGD QEICAQYWGEGKQTYGDIEVDLKDTDKSST YTLRVFELRHSKRKDSRTVYQYQYTNWSV EQLPAEPKELISMIQVVKQKLPQKNSSEGN KHHKSTPLLIHCRDGSQQTGIFCALLNLLES AETEEVVDIFQVVKALRKARPGMVSTFEQY QFLYDVIASTYPAQNGQVKKNNHQEDKIEF DNEVDKVKQDANCVNPLGAPEKLPEAKEQ AEGSEPTSGTEGPEHSVNGPASPALNQGS MTMYLWLKLLAFGFAFLDTEVFVTGQSPTP SPTGVSSVQTPHLPTHADSQTPSAGTDTQT FSGSAANAKLNPTPGSNAISDAYLNASETTT LSPSGSAVISTTTIATTPSKPTCDEKYANITV DYLYNKETKLFTAKLNVNENVECGNNTCTN NEVHNLTECKNASVSISHNSCTAPDKTLILD VPPGVEKFQLHDCTQVEKADTTICLKWKNI ETFTCDTQNITYRFQCGNMIFDNKEIKLENL EPEHEYKCDSEILYNNHKFTNASKIIKTDFG SPGEPQIIFCRSEAAHQGVITWNPPQRSFH NFTLCYIKETEKDCLNLDKNLIKYDLQNLKP YTKYVLSLHAYIIAKVQRNGSAAMCHFTTKS APPSQVWNMTVSMTSDNSMHVKCRPPRD RNGPHERYHLEVEAGNTLVRNESHKNCDF RVKDLQYSTDYTFKAYFHNGDYPGEPFILH HSTSYNSKALIAFLAFLIIVTSIALLVVLYKIYD LHKKRSCNLDEQQELVERDDEKQLMNVEPI HADILLETYKRKIADEGRLFLAEFQSIPRVFS KFPIKEARKPFNQNKNRYVDILPYDYNRVEL
SEINGDAGSNYINASYIDGFKEPRKYIAAQG SEQ ID NO: 292 CD45RB (Isoforma de CD45 humana)
PRDETVDDFWRMIWEQKATVIVMVTRCEE GNRNKCAEYWPSMEEGTRAFGDVVVKINQ HKRCPDYIIQKLNIVNKKEKATGREVTHIQFT SWPDHGVPEDPHLLLKLRRRVNAFSNFFS GPIVVHCSAGVGRTGTYIGIDAMLEGLEAEN KVDVYGYVVKLRRQRCLMVQVEAQYILIHQ ALVEYNQFGETEVNLSELHPYLHNMKKRDP PSEPSPLEAEFQRLPSYRSWRTQHIGNQEE NKSKNRNSNVIPYDYNRVPLKHELEMSKES EHDSDESSDDDSDSEEPSKYINASFIMSYW KPEVMIAAQGPLKETIGDFWQMIFQRKVKVI VMLTELKHGDQEICAQYWGEGKQTYGDIEV DLKDTDKSSTYTLRVFELRHSKRKDSRTVY QYQYTNWSVEQLPAEPKELISMIQVVKQKL PQKNSSEGNKHHKSTPLLIHCRDGSQQTGI FCALLNLLESAETEEVVDIFQVVKALRKARP GMVSTFEQYQFLYDVIASTYPAQNGQVKKN NHQEDKIEFDNEVDKVKQDANCVNPLGAP EKLPEAKEQAEGSEPTSGTEGPEHSVNGP ASPALNQGS MTMYLWLKLLAFGFAFLDTEVFVTGQSPTP SPTDVPGERSTASTFPTDPVSPLTTTLSLAH HSSAALPARTSNTTITANTSDAYLNASETTT LSPSGSAVISTTTIATTPSKPTCDEKYANITV DYLYNKETKLFTAKLNVNENVECGNNTCTN NEVHNLTECKNASVSISHNSCTAPDKTLILD VPPGVEKFQLHDCTQVEKADTTICLKWKNI ETFTCDTQNITYRFQCGNMIFDNKEIKLENL EPEHEYKCDSEILYNNHKFTNASKIIKTDFG SPGEPQIIFCRSEAAHQGVITWNPPQRSFH NFTLCYIKETEKDCLNLDKNLIKYDLQNLKP YTKYVLSLHAYIIAKVQRNGSAAMCHFTTKS APPSQVWNMTVSMTSDNSMHVKCRPPRD RNGPHERYHLEVEAGNTLVRNESHKNCDF RVKDLQYSTDYTFKAYFHNGDYPGEPFILH HSTSYNSKALIAFLAFLIIVTSIALLVVLYKIYD LHKKRSCNLDEQQELVERDDEKQLMNVEPI HADILLETYKRKIADEGRLFLAEFQSIPRVFS KFPIKEARKPFNQNKNRYVDILPYDYNRVEL
SEINGDAGSNYINASYIDGFKEPRKYIAAQG SEQ ID NO: 293 CD45RC (Isoforma de CD45 humana)
PRDETVDDFWRMIWEQKATVIVMVTRCEE GNRNKCAEYWPSMEEGTRAFGDVVVKINQ HKRCPDYIIQKLNIVNKKEKATGREVTHIQFT SWPDHGVPEDPHLLLKLRRRVNAFSNFFS GPIVVHCSAGVGRTGTYIGIDAMLEGLEAEN KVDVYGYVVKLRRQRCLMVQVEAQYILIHQ ALVEYNQFGETEVNLSELHPYLHNMKKRDP PSEPSPLEAEFQRLPSYRSWRTQHIGNQEE NKSKNRNSNVIPYDYNRVPLKHELEMSKES EHDSDESSDDDSDSEEPSKYINASFIMSYW KPEVMIAAQGPLKETIGDFWQMIFQRKVKVI VMLTELKHGDQEICAQYWGEGKQTYGDIEV DLKDTDKSSTYTLRVFELRHSKRKDSRTVY QYQYTNWSVEQLPAEPKELISMIQVVKQKL PQKNSSEGNKHHKSTPLLIHCRDGSQQTGI FCALLNLLESAETEEVVDIFQVVKALRKARP GMVSTFEQYQFLYDVIASTYPAQNGQVKKN NHQEDKIEFDNEVDKVKQDANCVNPLGAP EKLPEAKEQAEGSEPTSGTEGPEHSVNGP
ASPALNQGS evkllesggglvqpggslklscaasgfdfsrywmswvrqap gkglewigeinptsstinftpslkdkvfisrdnakntlylqmskv rsedtalyycargnyyrygdamdywgqgtsvtvssakttpp svyplapgsaaqtnsmvtlgclvkgyfpepvtvtwnsgslss SEQ ID NO: 294 Cadeia pesada de apamistamaba gvhtfpavlqsdlytlsssvtvpsstwpsetvtcnvahpasst kvdkkivprdcgckpcictvpevssvfifppkpkdvltitltpkvt cvvvdiskddpevqfswfvddvevhtaqtqpreeqfnster svselpimhqdwlngkefkcrvnsaafpapiektisktkgrp kapqvytipppkeqmakdkvsltcmitdffpeditvewqwn gqpaenykntqpimdtdgsyfvysklnvqksnweagntftc svlheglhnhhtekslshspgk dialtqspaslavslgqratiscrasksvstsgysylhwyqqk pgqppklliylasnlesgvparfsgsgsgtdftlnihpveeeda atyycqhsrelpftfgsgtkleikradaaptvsifppsseqltsg SEQ ID NO: 295 Cadeia leve de Apamistamabe gasvvcflnneypkdinvkwkidgserqngvlnswtdqdsk dstysmsstltltkdeyerhnsytceathktstspivksfnrne c evkllesggglvqpggslklscaasgfdfsrywmswvrqap Região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 296 gkglewigeinptsstinftpslkdkvfisrdnakntlylqmskv Apamistamabe rsedtalyycargnyyrygdamdywgqgtsvtvssa dialtqspaslavslgqratiscrasksvstsgysylhwyqqk Região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 297 pgqppklliylasnlesgvparfsgsgsgtdftlnihpveeeda Apamistamaba atyycqhsrelpftfgsgtkleikr
EVQLVESGGDLVQPGGSLKLSCTASGFTFS NYGMSWIRQTPDKRLEWVATIVGNDYTYFP DSMKGRFTVSRDNAKSILYLQMNSLASADT AMYYCTRHDWVFDYWGQGTPLTVSSAKTT APSVYPLAPVCGGTTGSSVTLGCLVKGYFP EPVTLTWNSGSLSSGVHTFPALLQSGLYTL
SSSVTVTSNTWPSQTITCNVAHPASSTKVD Região variável de cadeia pesada de mAb SEQ ID NO: 298 KKIEPRVPITQNPCPPLKECPPCAAPDLLGG 104
PSVFIFPPKIKDVLMISLSPMVTCVVVDVSE DDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYN STLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNR ALPSPIEKTISKPRGPVRAPQVYVLPPPAEE MTKKEFSLTCMITGFLPAEIAVDWTSNGRTE QNYKNTATVLDSDGSYFMYSKLRVQKSTW ERGSLFACSVVHEGLHNHLTTKTISRSLGK DIVLTQSPASLAVSLGQRAILSCKASQSVSF AGSSLMHWYQQKPGQQPKLLIYRASDLET GIPTRFSGGGSGTDFTLNIHPVEEDDAATYY
CQQSREYPYTFGGGTRLEIKRADAAPTVSIF SEQ ID NO: 299 Região variável de cadeia leve de mAb 104
PPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPRDINVKW KIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSS TLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKS FNRNEC EVKLVESGGGLLKPGGSLKLSCAASGFTFS KYWMHWVRQAPGKGLEWIGEIEYDGTETN
YAPSMKDRFTISRDNAKNTLYLQMSSVRSE Região variável de cadeia pesada de mAb SEQ ID NO: 300 DTATYFCTTLQIYNNYLFDYWGQGVMVTVS 2B8
SAQTTAPSVYPLAPGCGDTTSSTVTLGCLV KGYFPEPVTVTWNSGALSSDVHTFPAVLQS GLYTLTSSVTSSTWPSQTVTCNVAHPASST KVDKKVERRNGGIGHKCPTCPTCHKCPVP ELLGGPSVFIFPPKPKDILLISQNAKVTCVVV DVSEEEPDVQFSWFVNNVEVHTAQTQPRE EQYNSTFRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCK VNNKALPSPIEKTISKPKGLVRKPQVYVMGP PTEQLTEQTVSLTCLTSGFLPNDIGVEWTS NGHIEKNYKNTEPVMDSDGSFFMYSKLNVE RSRWDSRAPFVCSVVHEGLHNHHVEKSIS RPPGK DIQMTQSPSFLSASVGDRVTINCKPSQNINK YLNWYQQKLGEAPKRLIYNTNSLQTGIPSR FSGSGSGTDYTLTITSLQPEDVATYFCLQH
NRGVTFGSGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSME SEQ ID NO: 301 Região variável de cadeia leve de mAb 2B8
QLTSGGATVVCFVNNFYPRDISVKWKIDGS EQRDGVLDSVTDQDSKDSTYSMSSTLSLTK VEYERHNLYTCEVVHKTSSSPVVKSFNRNE
C Outras Modalidades
[0491] Todas as publicações, patentes e pedidos de patente mencionados neste relatório descritivo estão aqui incorporados por referência na mesma medida como se cada publicação independente ou pedido de patente foi especificamente e individualmente indicado para ser incorporado por referência.
[0492] Embora a invenção tenha sido descrita em relação às modalidades específicas da mesma, será entendido que ela é capaz de modificações adicionais e este pedido se destina a cobrir quaisquer variações, usos ou adaptações da invenção seguindo, em geral, os princípios da invenção e incluindo tais desvios da invenção que caem dentro da prática conhecida ou habitual dentro da técnica à qual a invenção pertence e podem ser aplicados às características essenciais aqui expostas, e seguem no escopo das reivindicações.
[0493] Outras modalidades estão dentro das reivindicações.

Claims (55)

REIVINDICAÇÕES
1. Método de esgotar uma população de células CD117+ em um paciente humano em necessidade de um transplante de célula-tronco hematopoiética, o método CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um conjugado anticorpo-fármaco anti-CD117 e um imunossupressor antes do paciente receber um transplante compreendendo células- tronco hematopoiéticas alogênicas.
2. Método, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: a. administrar a um paciente humano um conjugado anticorpo-fármaco anti- CD117 e um imunossupressor em uma quantidade suficiente para esgotar uma população de células CD117+ no paciente; e b. administrar subsequentemente ao paciente um transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas alogênicas.
3. Método, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar a um paciente humano um transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas alogênicas, em que o paciente foi previamente administrado com um conjugado anticorpo-fármaco anti-CD117 e um imunossupressor em uma quantidade suficiente para esgotar uma população de células-tronco hematopoiéticas no paciente.
4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, CARACTERIZADO pelo fato de que a CD117 é CD117 GNNK+.
5. Método de esgotar uma população de células CD45+ em um paciente humano em necessidade de um transplante de célula-tronco hematopoiética, o método CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao paciente uma quantidade eficaz do conjugado de um conjugado anticorpo-fármaco anti-CD45 e um imunossupressor antes do paciente receber um transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas alogênicas.
6. Método, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende:
a. administrar a um paciente humano um conjugado anticorpo-fármaco anti- CD45 e um imunossupressor em uma quantidade suficiente para esgotar uma população de células CD45+ no paciente; e b. administrar subsequentemente ao paciente um transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas alogênicas.
7. Método, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar a um paciente humano um transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas alogênicas, em que o paciente foi previamente administrado com um conjugado anticorpo-fármaco anti-CD45 e um imunossupressor em uma quantidade suficiente para esgotar uma população de células-tronco hematopoiéticas no paciente.
8. Método, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar a um paciente humano um transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas alogênicas, em que o paciente foi previamente administrado com um conjugado anticorpo-fármaco anti-CD45 em uma quantidade suficiente para esgotar uma população de células-tronco hematopoiéticas no paciente.
9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende ainda administrar o imunossupressor ao paciente depois do paciente ter recebido o transplante.
10. Método de esgotar uma população de células CD117+ em um paciente humano em necessidade de um transplante de célula-tronco hematopoiética, o método CARACTERIZADO pelo fato de que compreende a. administrar ao paciente humano um conjugado anticorpo-fármaco anti- CD117 em uma quantidade suficiente para esgotar uma população de células CD117+ no paciente; b. administrar ao paciente humano um transplante compreendendo células- tronco hematopoiéticas alogênicas; e c. administrar subsequentemente um imunossupressor ao paciente.
11. Método de esgotar uma população de células CD45+ em um paciente humano em necessidade de um transplante de célula-tronco hematopoiética, o método CARACTERIZADO pelo fato de que compreende a. administrar ao paciente humano um conjugado anticorpo-fármaco anti- CD45 em uma quantidade suficiente para esgotar uma população de células CD45+ no paciente; b. administrar ao paciente humano um transplante compreendendo células- tronco hematopoiéticas alogênicas; e c. administrar subsequentemente um imunossupressor ao paciente.
12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, CARACTERIZADO pelo fato de que o transplante compreende células-tronco hematopoiéticas alogênicas em que todos os antígenos HLA correspondem aos antígenos HLA no paciente humano.
13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, CARACTERIZADO pelo fato de que o transplante compreende células-tronco hematopoiéticas alogênicas que compreendem pelo menos uma incompatibilidade de HLA em relação aos antígenos HLA no paciente.
14. Método, de acordo com a reivindicação 13, CARACTERIZADO pelo fato de que as células-tronco hematopoiéticas alogênicas compreendem pelo menos duas incompatibilidades de HLA em relação aos antígenos HLA no paciente.
15. Método, de acordo com a reivindicação 14, CARACTERIZADO pelo fato de que as células-tronco hematopoiéticas alogênicas compreendem pelo menos cinco incompatibilidades de HLA em relação aos antígenos HLA no paciente.
16. Método, de acordo com a reivindicação 15, CARACTERIZADO pelo fato de que as células-tronco hematopoiéticas alogênicas compreendem uma incompatibilidade total de HLA em relação aos antígenos HLA no paciente.
17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16,
CARACTERIZADO pelo fato de que o transplante compreende células-tronco hematopoiéticas alogênicas que compreendem pelo menos uma incompatibilidade de antígeno de histocompatibilidade menor (miHA) em relação aos antígenos de histocompatibilidade menor no paciente.
18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, CARACTERIZADO pelo fato de que o método é eficaz para estabelecer pelo menos 80 % de quimerismo de doador.
19. Método, de acordo com a reivindicação 18, CARACTERIZADO pelo fato de que o método é eficaz para estabelecer pelo menos 85 % de quimerismo de doador.
20. Método, de acordo com a reivindicação 19, CARACTERIZADO pelo fato de que o método é eficaz para estabelecer pelo menos 90 % de quimerismo de doador.
21. Método, de acordo com a reivindicação 20, CARACTERIZADO pelo fato de que o método é eficaz para estabelecer pelo menos 95 % de quimerismo de doador.
22. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 18 a 21, CARACTERIZADO pelo fato de que o quimerismo de doador é avaliado pelo menos 6 semanas, 7 semanas, 8 semanas, 9 semanas ou 10 semanas após o transplante.
23. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 18 a 22, CARACTERIZADO pelo fato de que o quimerismo de doador é quimerismo mieloide periférico.
24. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 18 a 22, CARACTERIZADO pelo fato de que o quimerismo de doador é quimerismo de células T.
25. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, CARACTERIZADO pelo fato de que o imunossupressor é ciclofosfamida.
26. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, CARACTERIZADO pelo fato de que o imunossupressor é irradiação corporal total (TBI).
27. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, CARACTERIZADO pelo fato de que o imunossupressor é TBI de dose baixa.
28. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, CARACTERIZADO pelo fato de que o imunossupressor é um anticorpo anti-CD8, um anticorpo anti-CD4, ou tanto um anticorpo anti-CD8 quanto um anticorpo anti-CD4.
29. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 28, CARACTERIZADO pelo fato de que o imunossupressor é administrado após o transplante.
30. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 28, CARACTERIZADO pelo fato de que o imunossupressor é administrado antes do transplante.
31. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 30, CARACTERIZADO pelo fato de que o conjugado é internalizado por uma célula cancerosa, célula autoimune ou célula-tronco hematopoiética após a administração ao paciente.
32. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 31, CARACTERIZADO pelo fato de que o transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas é administrado ao paciente depois que a concentração do conjugado tenha sido substancialmente eliminada do sangue do paciente.
33. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 32, CARACTERIZADO pelo fato de que as células-tronco hematopoiéticas ou progênie das mesmas mantêm potencial funcional das células-tronco hematopoiéticas depois de dois ou mais dias após o transplante das células-tronco hematopoiéticas no paciente.
34. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 33, CARACTERIZADO pelo fato de que as células-tronco hematopoiéticas ou progênie das mesmas são capazes de se localizar no tecido hematopoiético e/ou reestabelecer a hematopoese após o transplante das células-tronco hematopoiéticas no paciente.
35. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 34, CARACTERIZADO pelo fato de que após o transplante no paciente, as células-tronco hematopoiéticas dão origem à recuperação de uma população de células selecionadas do grupo que consiste em megacariócitos, trombócitos, plaquetas, aritrócitos, mastócitos, mieloblastos, basófilos, neutrófilos, eosinófilos, microglia, granulócitos, monócitos, osteoclastos, células apresentadoras de antígeno, macrófagos, células dendríticas, células exterminadoras naturais, linfócitos T e linfócitos B.
36. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 35, CARACTERIZADO pelo fato de que o paciente está sofrendo de um transtorno de células-tronco.
37. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 35, CARACTERIZADO pelo fato de que o paciente está sofrendo de um transtorno de hemoglobinopatia, um transtorno autoimune, transtorno mielodisplásico, transtorno de imunodeficiência, ou um transtorno metabólico.
38. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 36, CARACTERIZADO pelo fato de que o paciente está sofrendo de câncer.
39. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4 e 14 a 38, CARACTERIZADO pelo fato de que ADC compreende um anticorpo anti-CD117 compreendendo um conjunto de CDR (CDR1, CDR2 ou CDR3) de cadeia pesada/cadeia leve (HC/LC) ou um conjunto de região variável de HC/LC como descrito na Tabela 3.
40. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 39,
CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo do conjugado tem uma taxa de dissociação (KOFF) de 1 x 10-2 a 1 x 10-3, 1 x 10-3 a 1 x 10-4, 1 x 10-5 a 1 x 10-6, 1 x 10- 6 a 1 x 10-7 ou 1 x 10-7 a 1 x 10-8 medida por interferometria de bio-camada (BLI).
41. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 40, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo do conjugado se liga a CD117 com uma KD de cerca de 100 nM ou menos, cerca de 90 nM ou menos, cerca de 80 nM ou menos, cerca de 70 nM ou menos, cerca de 60 nM ou menos, cerca de 50 nM ou menos, cerca de 40 nM ou menos, cerca de 30 nM ou menos, cerca de 20 nM ou menos, cerca de 10 nM ou menos, cerca de 8 nM ou menos, cerca de 6 nM ou menos, cerca de 4 nM ou menos, cerca de 2 nM ou menos, cerca de 1 nM ou menos conforme determinado por um ensaio de Interferometria de Bio-Camada (BLI).
42. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 40, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo do conjugado é um anticorpo humano.
43. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 40, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo do conjugado é um anticorpo intacto.
44. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 43, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo do conjugado é uma IgG.
45. Método, de acordo com a reivindicação 44, CARACTERIZADO pelo fato de que a IgG é um isotipo IgG1, um isotipo IgG2, um isotipo IgG3 ou um isotipo IgG4.
46. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 45, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo é conjugado com uma citotoxina por meio de um conector.
47. Método, de acordo com a reivindicação 46, CARACTERIZADO pelo fato de que a citotoxina é um inibidor de RNA polimerase.
48. Método, de acordo com a reivindicação 47, CARACTERIZADO pelo fato de que o inibidor de RNA polimerase é uma amatoxina.
49. Método, de acordo com a reivindicação 47, CARACTERIZADO pelo fato de que o inibidor de RNA polimerase é uma amanitina.
50. Método, de acordo com a reivindicação 49, CARACTERIZADO pelo fato de que a amanitina é selecionada do grupo que consiste em α-amanitina, β-amanitina, γ-amanitina, ε-amanitina, amanina, amaninamida, amanulina, ácido amanulínico e proamanulina.
51. Método, de acordo com a reivindicação 46, CARACTERIZADO pelo fato de que a citotoxina selecionada do grupo que consiste em uma exotoxina de pseudomonas A, deBouganin, toxina da difteria, saporina, maitansina, um maitansinoide, uma auristatina, uma antraciclina, uma caliqueamicina, irinotecano, SN-38, uma duocarmicina, uma pirrolobenzodiazepina, um dímero de pirrolobenzodiazepina, uma indolinobenzodiazepina, um dímero de indolinobenzodiazepina e uma pseudodímero de indolinobenzodiazepina.
52. Método, de acordo com a reivindicação 51, CARACTERIZADO pelo fato de que a auristatina é MMAE ou MMAF.
53. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 46 a 52, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo é conjugado com a toxina por meio de um resíduo de cisteína no domínio Fc do anticorpo.
54. Método, de acordo com a reivindicação 53, CARACTERIZADO pelo fato de que o resíduo de cisteína é introduzido por meio de uma substituição de aminoácido no domínio Fc do anticorpo.
55. Método, de acordo com a reivindicação 54, CARACTERIZADO pelo fato de que a substituição de aminoácido é D265C.
Petição 870210039504, de 30/04/2021, pág. 291/323 Condição dos Transplante de camundongos células do doador DBA/2 Balb/c WBM CD45.1
Grupo 1/29
Transplante (2x107 células WBM) Citoxano (200 mg/kg, IP)
Nenhuma
LT-HSC / Fêmur
Nenhuma
Quimerismo Mieloide
Nenhuma
% de Doador
Quimerismo de Células B
Nenhuma
% de Doador
Quimerismo de Células T
Nenhuma
% de Doador
Quimerismo de doador total
% de Doador
Quimerismo mieloide
% de Doador
Quimerismo de Células T
% de Doador
Isotipo-SAB-SAP
LT-HSCs / Fêmur
Petição 870210039504, de 30/04/2021, pág. 301/323 Camundongos C57 Dia 0 Dia 7
Avaliação da depleção (dose única, no sangue periférico e 11/29
1,9 mg/kg i.v.) medula óssea
LINHAGEM
LINHAGEM
Isotipo-SAR
LT-HSC / Fêmur
Isotipo-SAR
Linfócitos (103 células/µL)
Semana 3 Semana 8
% DE QUIMERISMO DE DOADOR (CD45,1)
Quimerismo Mieloide
% de Doador
Quimerismo de Células B
% de Doador
Quimerismo de Células T
% de Doador
Sangue Periférico
Número total de células (CD45+)
Baço
Número total de células (CD45+)
Nenhum ADC Células LT-HSC
Células/Fêmur
Nenhum ADC Células CD45+
Células/Fêmur
Nenhum ADC Células mieloides
Células/Fêmur
Nenhum ADC Células B
Células/Fêmur
Nenhum ADC Células T
Células/Fêmur
% de Doador
Quimerismo Mieloide
% de Doador
Quimerismo de Células B
% de Doador
Quimerismo de Célula T
% de Doador
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Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10882915B2 (en) 2017-10-24 2021-01-05 Magenta Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the depletion of CD117+ cells
WO2020219775A1 (en) * 2019-04-24 2020-10-29 Magenta Therapeutics, Inc. Anti-cd117 antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2020219778A2 (en) * 2019-04-24 2020-10-29 Magenta Therapeutics, Inc. Anti-cd117 antibody-drug conjugates and uses thereof
EP3959242A4 (en) * 2019-04-24 2023-09-13 Magenta Therapeutics, Inc. ANTRACYCLINE ANTIBODY-DRUG CONJUGATES AND THEIR USES
WO2023122138A1 (en) * 2021-12-22 2023-06-29 The Jackson Laboratory Humanized mouse models
WO2023118608A1 (en) * 2021-12-23 2023-06-29 Universität Basel Discernible cell surface protein variants of cd45 for use in cell therapy
WO2023164744A1 (en) * 2022-03-01 2023-09-07 CSL Innovation Pty Ltd Methods of bone marrow conditioning

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX368272B (es) * 2010-08-18 2019-09-26 Deisher Theresa Composiciones y métodos para inhibir la unión de células madre y células progenitoras a tejido linfoide y para regenerar centros germinales en tejidos linfáticos.
CA2982115A1 (en) * 2015-04-06 2016-10-13 President And Fellows Of Harvard College Compositions and methods for non-myeloablative conditioning
KR20230066647A (ko) * 2016-06-17 2023-05-16 마젠타 테라퓨틱스 인코포레이티드 Cd117+ 세포의 고갈을 위한 조성물 및 방법
EP3471772A4 (en) * 2016-06-17 2020-03-18 Magenta Therapeutics, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR DEPLOYING CELLS

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