CN113993550A - 用于基因疗法的调理方法 - Google Patents

用于基因疗法的调理方法 Download PDF

Info

Publication number
CN113993550A
CN113993550A CN202080045488.3A CN202080045488A CN113993550A CN 113993550 A CN113993550 A CN 113993550A CN 202080045488 A CN202080045488 A CN 202080045488A CN 113993550 A CN113993550 A CN 113993550A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
amino acid
set forth
acid sequence
variable region
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202080045488.3A
Other languages
English (en)
Inventor
A.博伊塔诺
M.库克
R.帕尔乔杜里
B.R.皮尔斯
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dianthus Therapeutics Inc
Original Assignee
Magenta Therapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Magenta Therapeutics Inc filed Critical Magenta Therapeutics Inc
Publication of CN113993550A publication Critical patent/CN113993550A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A61K47/6819—Plant toxins
    • A61K47/6825—Ribosomal inhibitory proteins, i.e. RIP-I or RIP-II, e.g. Pap, gelonin or dianthin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/795—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
    • C07K14/805—Haemoglobins; Myoglobins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/289—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD45
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0012—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
    • C12N9/0036—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on NADH or NADPH (1.6)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/22—Ribonucleases RNAses, DNAses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2468—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1) acting on beta-galactose-glycoside bonds, e.g. carrageenases (3.2.1.83; 3.2.1.157); beta-agarase (3.2.1.81)
    • C12N9/2471—Beta-galactosidase (3.2.1.23), i.e. exo-(1-->4)-beta-D-galactanase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/78—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y106/00—Oxidoreductases acting on NADH or NADPH (1.6)
    • C12Y106/03—Oxidoreductases acting on NADH or NADPH (1.6) with oxygen as acceptor (1.6.3)
    • C12Y106/03001—NAD(P)H oxidase (1.6.3.1), i.e. NOX1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
    • C12Y207/11—Protein-serine/threonine kinases (2.7.11)
    • C12Y207/11001—Non-specific serine/threonine protein kinase (2.7.11.1), i.e. casein kinase or checkpoint kinase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/06—Sulfuric ester hydrolases (3.1.6)
    • C12Y301/06001—Arylsulfatase (3.1.6.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01023—Beta-galactosidase (3.2.1.23), i.e. exo-(1-->4)-beta-D-galactanase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01046—Galactosylceramidase (3.2.1.46)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01052—Beta-N-acetylhexosaminidase (3.2.1.52)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01076—L-Iduronidase (3.2.1.76)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y305/00—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5)
    • C12Y305/04—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5) in cyclic amidines (3.5.4)
    • C12Y305/04004—Adenosine deaminase (3.5.4.4)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/524—CH2 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/53—Hinge
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2740/16043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本公开内容提供可用于在用遗传修饰干细胞进行移植之前耗尽受试者的特定内源性造血干细胞和/或免疫细胞群体以改善移植的干细胞的植入并提供基因疗法的组合物和方法。本公开内容提供用于治疗各种造血疾病、代谢性病症、癌症和自身免疫性疾病等的组合物和方法。本文描述了抗体、抗原结合片段及其缀合物，其可以应用于例如通过耗尽患者(如人)的CD117+或CD45+细胞群体来实现这些病况的治疗。

Description

用于基因疗法的调理方法
相关申请
本申请要求于2019年4月24日提交的美国临时申请号62/838,278和于2019年12月6日提交的美国临时申请号62/944,925的优先权。每个优先权申请的内容都通过引用并入本文。
序列表
本申请含有序列表，该序列表已以ASCII格式以电子方式提交，并且在此通过引用以其整体并入。所述ASCII拷贝创建于2020年4月23日，被命名为M103034_2070WO_SL.txt，并且大小为341,152字节。
背景技术
造血干细胞(HSC)对于解决各种疾病具有显著的治疗潜力。最近，基于HSC的疗法包括使用强有力的基因编辑方法，该方法允许对干细胞进行遗传修饰。可以将遗传修饰HSC递送到患有特定血细胞疾病(例如，镰状细胞疾病)、代谢性病症(例如，粘多糖贮积症)、癌症和自身免疫性病况(例如，慢性肉芽肿病)等疾病的患者，以纠正缺陷型基因。对于许多患者而言，基于HSC的疗法仍然是唯一治愈性治疗。
造血干细胞移植物(HSCT)在植入前需要对受试者的组织(例如，骨髓组织)进行调理(conditioning)。目前的非靶向调理方法，包括例如照射(例如，全身照射或TBI)和DNA烷基化/修饰制剂，对多器官系统、造血和非造血细胞以及造血微环境具有非常大的毒性。这些苛刻的调理方案有效地杀死宿主受试者的免疫细胞和小生境细胞，并且对多个器官系统产生不利影响，从而经常引起危及生命的并发症。例如，虽然基因编辑方法的最新进展使得能够开发用于镰状细胞疾病的遗传修饰干细胞，但目前包括苛刻调理方案的治疗方法已证明是不成功的，患者会发生危及生命或长期的并发症，如癌症(例如，继发性恶性肿瘤)和不孕/不育症。因此，虽然HSC具有显著的治疗潜力，但此类局限性阻碍了它们在临床中的使用。
目前需要促进遗传修饰HSC移植物的植入的方法，使得在移植后HSC的多能性和造血功能性及其纠正或改变的基因保留在患者体内。
技术领域
本发明涉及遗传修饰干细胞与使用抗体-药物缀合物(ADC)的调理方法结合用于治疗患有如血液疾病、代谢性病症、癌症和自身免疫性疾病等各种病状的患者的用途，其中ADC能够结合造血干细胞和/或免疫细胞上的分子(例如，CD117或CD45)。
发明内容
本文描述一种提供干细胞基因疗法的方法，其包含与调理方法结合将遗传修饰干细胞施用到有此需要的受试者的方法，该调理方法包含使用抗体-药物缀合物(ADC)。在用遗传修饰干细胞进行移植之前，本文描述的ADC的抗体靶向并耗尽受试者的特定内源性造血干细胞和/或免疫细胞群体。
在一些方面，本公开内容提供一种将遗传修饰干细胞施用到有此需要的人受试者的方法，该方法包含：a)将与在造血干细胞(HSC)和/或免疫细胞上表达的细胞表面分子结合的抗体-药物缀合物(ADC)施用到人受试者，从而耗尽该人受试者的HSC和/或免疫细胞；以及b)将包含遗传修饰干细胞群体的移植物施用到人受试者。在一些实施方案中，ADC与在要被耗尽的HSC和/或免疫细胞上表达的细胞表面分子结合。
在一些方面，本公开内容提供一种用遗传修饰细胞治疗人受试者的方法，该方法包含将包含遗传修饰干细胞群体的移植物施用到有此需要的人受试者，其中该人受试者已接受包含与在造血干细(HSC)和/或免疫细胞上表达的细胞表面分子结合的抗体-药物缀合物(ADC)的调理治疗。
在一些实施方案中，遗传修饰干细胞是自体干细胞。在一些实施方案中，遗传修饰干细胞是同种异体干细胞。
在一些实施方案中，遗传修饰干细胞是HSC。
在一些实施方案中，遗传修饰干细胞是CD34+HSC。
在一些实施方案中，受试者患有以下中的任何一种或多种：癌症、血红蛋白病病症、骨髓增生异常病症、免疫缺陷病症或代谢性病症。
在一些实施方案中，血红蛋白病病症选自以下中的任何一种或多种：镰状细胞贫血(sickle cell anemia)、地中海贫血(thalassemia)、范科尼贫血(Fanconi anemia)、再生障碍性贫血(aplastic anemia)或威斯科特-奥尔德里奇二氏综合征(Wiskott-Aldrichsyndrome)。
在一些实施方案中，免疫缺陷病症是先天性免疫缺陷或获得性免疫缺陷。
在一些实施方案中，获得性免疫缺陷是人免疫缺陷病毒或获得性免疫缺陷综合征(AIDS)。
在一些实施方案中，代谢性病症选自以下中的任何一种或多种：糖原贮积病(glycogen storage diseases)、粘多糖贮积症(mucopolysaccharidosis)、戈谢氏病(Gaucher's Disease)、胡尔勒病(Hurlers Disease)、鞘脂沉积病(sphingolipidoses)、球样细胞脑白质营养不良(globoid cell leukodystrophy)或异染性脑白质营养不良。
在一些实施方案中，癌症选自以下中的任何一种或多种：白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤或成神经细胞瘤。
在一些实施方案中，癌症是血液学癌症，其选自例如急性髓样白血病、急性淋巴性白血病、慢性髓样白血病、慢性淋巴样白血病或多发性骨髓瘤。
在一些实施方案中，受试者患有选自以下中的任何一种或多种的病症：腺苷脱氨酶缺乏(adenosine deaminase deficiency)、重症联合免疫缺陷(severe combinedimmunodeficiency)、高免疫球蛋白M综合征(hyper immunoglobulin M syndrome)、切-希二氏病(Chediak-Higashi disease)、遗传性淋巴组织细胞增生症(hereditarylymphohistiocytosis)、骨硬化症(osteopetrosis)、成骨不全症(osteogenesisimperfecta)、贮积病(storage diseases)、重型地中海贫血(thalassemia major)、系统性硬化症(systemic sclerosis)、系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus)、多发性硬化症(multiple sclerosis)或幼年型类风湿性关节炎(juvenile rheumatoidarthritis)。
在一些实施方案中，受试者患有自身免疫性病症。在一些实施方案中，自身免疫性病症选自以下中的任何一种或多种：多发性硬化症、人系统性狼疮、类风湿性关节炎、炎性肠病、治疗型银屑病、1型糖尿病、急性播散性脑脊髓炎、艾迪生病(Addison's disease)、普秃、强直性脊柱炎、抗磷脂抗体综合征、再生障碍性贫血、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳病、自身免疫性淋巴组织增生性综合征、自身免疫性卵巢炎、巴洛病(Balo disease)、贝赫切特病(Behcet's disease)、大疱性类天疱疮、心肌病、恰加斯氏病(Chagas'disease)、慢性疲劳免疫功能障碍综合症、慢性炎性脱髓鞘性多神经病、克罗恩氏病(Crohn's disease)、瘢痕性类天疱疮、口炎性腹泻-疱疹样皮炎(coeliac sprue-dermatitis herpetiformis)、冷凝集素疾病、CREST综合征、德戈斯病(Degos disease)、盘状狼疮、自主神经机能异常(dysautonomia)、子宫内膜异位、原发性混合型冷球蛋白血症、纤维肌痛-纤维肌炎、肺出血肾炎综合征(Goodpasture's syndrome)、格雷夫斯病(Grave'sdisease)、格林-巴利综合征(Guillain-Barre syndrome)、桥本氏甲状腺炎(Hashimoto'sthyroiditis)、化脓性汗腺炎、特发性和/或急性血小板减少性紫癜、特发性肺纤维化、IgA神经病变、间质性膀胱炎、幼年型关节炎、川崎病(Kawasaki's disease)、扁平苔藓、莱姆病(Lyme disease)、梅尼埃病(Meniere disease)、混合性结缔组织病、肌腱鞘炎、肌无力症、神经性肌强直、斜视性眼阵挛肌阵挛综合征、视神经炎、奥德氏甲状腺炎(Ord'sthyroiditis)、寻常型天疱疮、恶性贫血、多软骨炎、多肌炎和皮肌炎、原发性胆汁性肝硬化、结节性多动脉炎、多腺性综合征、风湿性多肌痛、原发性无丙种球蛋白血症、雷诺现象(Raynaud phenomenon)、莱特尔综合征(Reiter's syndrome)、风湿热、结节病、硬皮病、舍格伦综合征(
Figure BDA0003423520310000041
syndrome)、僵人综合征(stiff person syndrome)、高安氏动脉炎(Takayasu's arteritis)、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、血管炎、白癜风、外阴痛、慢性肉芽肿病或韦格纳肉芽肿(Wegener's granulomatosis)。
在一些实施方案中，已对干细胞群体进行了遗传修饰以改变靶基因。在一些实施方案中，靶基因选自以下中的一种或多种：β-珠蛋白、γ-珠蛋白、腺苷脱氨酶、芳基硫酸酯酶A、WASp基因、吞噬细胞NADPH氧化酶、半乳糖基神经酰胺酶、β-半乳糖苷酶、β-氨基己糖苷酶、α-L艾杜糖醛酸酶、ATM丝氨酸/苏氨酸激酶、核糖体成熟蛋白SBDS、或CCR5。
在一些实施方案中，已使用基因编辑系统对包含遗传修饰干细胞群体的移植物进行了改变。在一些实施方案中，基因编辑系统是CRISPR/Cas系统。
在一些实施方案中，ADC包含结合一种或多种细胞表面分子的抗体或其抗原结合片段，该一种或多种细胞表面分子选自CD2、CD5、CD7、CDwl2、CD13、CD15、CD19、CD21、CD22、CD29、CD30、CD33、CD34、CD36、CD38、CD40、CD41、CD42a、CD42b、CD42c、CD42d、CD43、CD45、CD45RA、CD45RB、CD45RC、CD45RO、CD48、CD49b、CD49d、CD49e、CD49f、CD50、CD53、CD55、CD64a、CD68、CD71、CD72、CD73、CD81、CD82、CD85A、CD85K、CD90、CD99、CD104、CD105、CD109、CD110、CD111、CD112、CD114、CD115、CD117、CD123、CD124、CD126、CD127、CD130、CD131、CD133、CD135、CD137、CD138、CD151、CD157、CD162、CD164、CD168、CD172a、CD173、CD174、CD175、CD175s、CD176、CD183、CD191、CD200、CD201、CD205、CD217、CD220、CD221、CD222、CD223、CD224、CD225、CD226、CD227、CD228、CD229、CD230、CD235a、CD235b、CD236、CD236R、CD238、CD240、CD242、CD243、CD277、CD292、CDw293、CD295、CD298、CD309、CD318、CD324、CD325、CD338、CD344、CD349或CD350。
在一些实施方案中，ADC包含结合CD117的抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，ADC以足以耗尽受试者的CD117+细胞群体的量施用。
在一些实施方案中，CD117是GNNK+CD117。
在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:31中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:32中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:33中所阐述的氨基酸序列；并且该轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:34中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:35中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:36中所阐述的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:21中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:22中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:23中所阐述的氨基酸序列；并且该轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:24中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:25中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:26中所阐述的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:41中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:42中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQID NO:43中所阐述的氨基酸序列；并且该轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:44中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:45中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:46中所阐述的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:51中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:52中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:53中所阐述的氨基酸序列；并且该轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:54中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:55中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:56中所阐述的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:61中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:62中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:63中所阐述的氨基酸序列；并且该轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:64中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:65中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:66中所阐述的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:71中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:72中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:73中所阐述的氨基酸序列；并且该轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:74中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:75中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:76中所阐述的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:81中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:82中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:83中所阐述的氨基酸序列；并且该轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:84中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:85中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:86中所阐述的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:11中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:12中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:13中所阐述的氨基酸序列；并且该轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:14中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:15中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:16中所阐述的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:91中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:92中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:93中所阐述的氨基酸序列；并且该轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:94中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:95中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:96中所阐述的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:101中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:102中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:103中所阐述的氨基酸序列；并且该轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:104中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:105中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:106中所阐述的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ IDNO:245中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:246中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:247中所阐述的氨基酸序列；并且该轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:248中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:249中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:250中所阐述的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:127中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:128中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:129中所阐述的氨基酸序列；并且该轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:130中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:131中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:132中所阐述的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:133中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:134中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:135中所阐述的氨基酸序列；并且该轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:136中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:137中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:138中所阐述的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ IDNO:139中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:140中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:141中所阐述的氨基酸序列；并且该轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:142中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:143中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:144中所阐述的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:29中所阐述的氨基酸序列，并且该轻链可变区包含如SEQ ID NO:30中所阐述的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:19中所阐述的氨基酸序列，并且该轻链可变区包含如SEQ ID NO:20中所阐述的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含如SEQ IDNO:39中所阐述的氨基酸序列，并且该轻链可变区包含如SEQ ID NO:40中所阐述的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:49中所阐述的氨基酸序列，并且该轻链可变区包含如SEQID NO:50中所阐述的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:59中所阐述的氨基酸序列，并且该轻链可变区包含如SEQ IDNO:60中所阐述的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含如SEQ IDNO:69中所阐述的氨基酸序列，并且该轻链可变区包含如SEQ ID NO:70中所阐述的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:79中所阐述的氨基酸序列，并且该轻链可变区包含如SEQID NO:80中所阐述的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:9中所阐述的氨基酸序列，并且该轻链可变区包含如SEQ ID NO:10中所阐述的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含如SEQ IDNO:89中所阐述的氨基酸序列，并且该轻链可变区包含如SEQ ID NO:90中所阐述的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:99中所阐述的氨基酸序列，并且该轻链可变区包含如SEQID NO:100中所阐述的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:243中所阐述的氨基酸序列，并且该轻链可变区包含如SEQ ID NO:244中所阐述的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段的解离速率(KOFF)为1x10-2至1x10-3、1x10-3至1x10-4、1x10-5至1x10-6、1x10-6至1x10-7或1x10-7至1x10-8，如通过生物层干涉测量法(bio-layer interferometry,BLI)所测量的。
在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段以以下的KD结合CD117：约100nM或更小、约90nM或更小、约80nM或更小、约70nM或更小、约60nM或更小、约50nM或更小、约40nM或更小、约30nM或更小、约20nM或更小、约10nM或更小、约8nM或更小、约6nM或更小、约4nM或更小、约2nM或更小、约1nM或更小，如通过生物层干涉测量法(BLI)测定所确定的。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是人的。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是完整抗体。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是IgG。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是IgG1或IgG4。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区和/或轻链恒定区，该重链恒定区具有如SEQ ID NO:122所阐述的氨基酸序列，并且该轻链恒定区包含如SEQ IDNO:121中所阐述的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含Fc区，其包含至少一个选自下组的氨基酸取代，该组由以下各项组成：D265C、H435A、L234A和L235A(根据EU索引编号)。在一些实施方案中，Fc区包含氨基酸取代D265C、L234A和L235A(根据EU索引编号)。
在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，该轻链包含如SEQ ID NO:109中所阐述的氨基酸序列，并且该重链包含选自下组的氨基酸序列，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:113和SEQ IDNO:114。
在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，该轻链包含如SEQ ID NO:115中所阐述的氨基酸序列，并且该重链包含选自下组的氨基酸序列，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:117、SEQ ID NO:118、SEQ ID NO:119和SEQ IDNO:120。
在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，该轻链包含如SEQ ID NO:284中所阐述的氨基酸序列，并且该重链包含选自下组的氨基酸序列，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:276、SEQ ID NO:277和SEQ ID NO:278。
在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，该重链包含来自Ab55、Ab54、Ab56、Ab57、Ab58、Ab61、Ab66、Ab67、Ab68、Ab69、Ab85、Ab86、Ab87、Ab88、Ab89、Ab77、Ab79、Ab81、Ab85或Ab249的重链可变区的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3或可变区序列，并且该轻链包含来自Ab55、Ab54、Ab56、Ab57、Ab58、Ab61、Ab66、Ab67、Ab68、Ab69、Ab85、Ab86、Ab87、Ab88、Ab89、Ab77、Ab79、Ab81、Ab85或Ab249的轻链可变区的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3或可变区序列。在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，该重链包含来自SEQ ID NO:147、164、166、168、170、172、174、176、178、180、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、202、204、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、226、238或243的重链可变区氨基酸序列的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3或可变区，并且该轻链包含来自SEQ ID NO:148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、182、184、186、188、190、192、194、196、198、200、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、239、240、241、242或244的轻链可变区氨基酸序列的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3或可变区。
在一些实施方案中，ADC由式Ab-(Z-L-Cy)n表示，其中：Ab是抗体或其抗原结合片段；L是接头；Z是通过存在于L上的反应性取代基Z'与存在于抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基之间的偶联反应而形成的化学部分，Cy是选自下组的细胞毒素，该组由以下各项组成：鹅膏毒素、假单胞菌外毒素A、deBouganin、白喉毒素、皂草素(saporin)、美登素(maytansine)、美登木素生物碱(maytansinoid)、吡咯并苯并二氮杂卓(pyrrolobenzodiazepine)、吡咯并苯并二氮杂卓二聚体、二氢吲哚基苯并二氮杂卓(indolinobenzodiazepine)、二氢吲哚基苯并二氮杂卓二聚体、二氢吲哚基苯并二氮杂卓假二聚体、加利车霉素(calicheamicin)、澳瑞他汀(auristatin)和蒽环类药物(anthracycline)；并且n是约1至约20的整数，其表示每抗体细胞毒素的平均数目。在一些实施方案中，n是约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9、约10、约11、约12、约13、约14、约15、约16、约17、约18、约19或约20的整数。在一些实施方案中，n是2。
在一些实施方案中，细胞毒素是鹅膏毒素。
在一些实施方案中，ADC由式(I)表示：
Figure BDA0003423520310000111
其中：
Q是-S-、-S(O)-或-SO2-；
R1是H、OH、ORA或ORD；
R2是H、OH、ORB或ORD；
RA和RB，当存在时，与它们所结合的氧原子一起组合以形成任选取代的5元杂环烷基基团；
R3是H、RC或RD；
R4是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R5是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R6是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R7是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8是OH、NH2、ORC、ORD、NHRD或NRCRD；
R9是H、OH、ORC或ORD；
RC是C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基或其组合，其中所述C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基中的每一种可以任选地被1至5个取代基取代，这些取代基对于每种场合而言都独立地选自下组，该组由以下各项组成：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、烷芳基、烷基杂芳基、氨基、铵基、酰基、酰氧基、酰氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、脲基、氨基甲酸酯、芳基、杂芳基、亚磺酰基、磺酰基、羟基、烷氧基、硫烷基、卤素、羧基、三卤甲基、氰基、羟基、氢硫基和硝基；
RD是-L-Z-Ab，其中式(I)的ADC正好含有一个RD取代基；
L包含以下中的一种或多种：肼、二硫化物、硫醚、氨基酸、由至多10个氨基酸组成的肽、对氨基苄基(PAB)基团、杂环自毁基团(heterocyclic self-immolative group)、C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、-(C＝O)-基团、-C(O)NH-基团、-OC(O)NH-基团或-(CH2CH2O)p-基团，其中p是1-6的整数；
其中C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基基团各自可以任选地被1至5(例如，1、2、3、4或5)个取代基取代，这些取代基对于每种场合而言都独立地选自下组，该组由以下各项组成：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、烷芳基、烷基杂芳基、氨基、铵基、酰基、酰氧基、酰氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、脲基、氨基甲酸酯、芳基、杂芳基、亚磺酰基、磺酰基、羟基、烷氧基、硫烷基、卤素、羧基、三卤甲基、氰基、羟基、氢硫基和硝基；并且
C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基基团各自可以任选地被选自O、S和N的一个或多个杂原子中断。
在一些实施方案中，式(I)的ADC由式(Ia)表示：
Figure BDA0003423520310000131
其中Q、R1-R9、RA、RB、RC、RD、L和Z中的每一个如先前对式(I)所定义的。
在一些实施方案中，R1是ORA；R2是ORB；并且RA和RB与它们所结合的氧原子一起组合以形成：
Figure BDA0003423520310000132
其中：
Y是-(C＝O)-、-(C＝S)-、-(C＝NH)-、-(CH)2-或CRERE’，并且
RE和RE’各自独立地选自H、C1-C6亚烷基-RD、C1-C6杂亚烷基-RD、C2-C6亚烯基-RD、C2-C6杂亚烯基-RD、C2-C6亚炔基-RD、C2-C6杂亚炔基-RD、亚环烷基-RD、杂亚环烷基-RD、亚芳基-RD和杂亚芳基-RD，其中所述C1-C6亚烷基、C1-C6杂亚烷基、C2-C6亚烯基、C2-C6杂亚烯基、C2-C6亚炔基、C2-C6杂亚炔基、亚环烷基、杂亚环烷基、亚芳基或杂亚芳基中的每一种可以任选地被1至5(例如，1、2、3、4或5)个取代基取代，这些取代基对于每种场合而言都独立地选自下组，该组由以下各项组成：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、烷芳基、烷基杂芳基、氨基、铵基、酰基、酰氧基、酰氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、脲基、氨基甲酸酯、芳基、杂芳基、亚磺酰基、磺酰基、羟基、烷氧基、硫烷基、卤素、羧基、三卤甲基、氰基、羟基、氢硫基和硝基。
在一些实施方案中，Y是C＝O，其由下式表示：
Figure BDA0003423520310000141
在一些实施方案中，接头包含以下中的一种或多种：肽、寡糖、-(CH2)p-、-(CH2CH2O)p-、-(C＝O)-、-(C＝O)(CH2)p-、PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB或Ala-PAB，其中p是1-6的整数(例如1、2、3、4、5或6)。
在一些实施方案中，接头包含PAB-Ala-Val-丙酰基，其由下式表示：
Figure BDA0003423520310000142
在一些实施方案中，接头包含PAB-Cit-Val-丙酰基，其由下式表示：
Figure BDA0003423520310000143
在一些实施方案中，合在一起以L-Z-Ab表示的接头-抗体缀合物具有以下结构：
Figure BDA0003423520310000151
其中S是表示存在于抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基的硫原子。
在一些实施方案中，L-Ab具有以下结构：
Figure BDA0003423520310000152
其中S是表示存在于抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基的硫原子。
在一些实施方案中，式(I)的ADC选自下组，该组由以下各项组成：
Figure BDA0003423520310000153
附图说明
图1A和1B图解地描绘了体外细胞杀伤测定的结果，其示出了作为所指示抗CD117ADC或对照浓度的函数的Kasumi-1细胞活力，如通过Celltiter Glo在发光(RLU)中所测量的。示出了Ab54(图1A)、Ab55(图1A)、Ab56(图1A)、Ab57(图1A)、Ab58(图1A)、Ab61(图1A)、Ab66(图1B)、Ab67(图1B)、Ab68(图1B)和Ab69(图1B)的结果。
图2图解地描绘了图1A和1B中所描绘的体外细胞杀伤测定中杀伤曲线下面积的量化。
图3至6示出了CD117-ADC对原代人和非人灵长类(NHP)CD34+细胞具有强效，并且对HSC具有选择性。图3图解地描绘了使用人和非人灵长类(NHP)HSC进行的体外细胞杀伤测定的结果，其示出了与人同种型和NHP同种型对照相比，CD117ADC有效地耗尽了HSC和祖细胞。图4描述了将单剂量的CD117-ADC施用到恒河猴(Rhesus)灵长类的结果，其使用流式细胞术进行分析得出，示出了显著的HSC耗尽，同时淋巴细胞得以保持。数据表明，单剂量的CD117-ADC给药后7天导致骨髓中显著的集落形成细胞耗尽(图5)。图6图解地描绘了CD117-ADC的快速清除，这使得移植物输注能够在给药后天数内进行。
图7至11示出了CD117-ADC足以在恒河猴灵长类中实现自体遗传修饰移植物疗法。图7A描绘了在(单剂量施用)CD117ADC调理的灵长类中进行基因标记自体移植物的治疗方案。图7B描绘了白消安(busulfan)多剂量施用的治疗方案。图8图解地描绘了CD117ADC的单剂量施用对嗜中性粒细胞计数(103/μl)的结果，作为移植物后天数的函数。图9图解地描绘了CD117ADC的单剂量施用对血小板计数(105/μl)的结果，作为移植物后天数的函数。图10图解地描绘了CD117ADC的单剂量施用对淋巴细胞计数(103/μl)的结果，作为移植物后天数的函数。图11图解地描绘了示出作为移植物后天数的函数的外周粒细胞β-珠蛋白载体拷贝数(VCN)的测定结果。数据示出，外周粒细胞载体拷贝数随时间稳定并且与白消安调理的历史数据相当。阴影框表示白消安调理的VCN范围。
图12图解地描绘了示出作为移植物后天数的函数的天冬氨酸转氨酶(AST)水平(U/L)的测定结果。
具体实施方式
本文描述一种提供干细胞基因疗法的方法，其包含将包含遗传修饰干细胞(例如，造血干细胞)群体的移植物施用到有此需要的受试者的方法。将遗传修饰干细胞施用到已接受调理治疗的受试者，该方法包含施用靶向并耗尽受试者的特定内源性造血干细胞和/或免疫细胞群体的抗体-药物缀合物(ADC)(调理)。如本文所描述，遗传修饰干细胞可以用于将缺陷型基因(例如，引起遗传病症的突变体基因)的纠正递送到需要治疗的受试者。本公开内容提供将干细胞基因疗法与增强植入的调理方法进行组合的方法，并且因此允许基因纠正。
作为实例，可以对来自镰状细胞贫血患者的自体干细胞进行遗传修饰以离体纠正缺陷型基因(例如，β珠蛋白基因-HBB基因中的一个或多个突变)，并且将其施用到患者。对干细胞进行遗传修饰(即，基因编辑)的各种方法是本领域已知并可获得的，并且包括例如锌指核酸酶(例如，US 9,834,787)、转录激活子样效应子核酸酶(TALEN)、病毒介导的基因编辑、或CRISPR/Cas系统(例如，US 2019/0010495A1)。进一步地，各种遗传修饰干细胞是本领域已知的(参见例如在Yong等人“Recent challenges and advances in genetically-engineered cell therapy”J.Pharm.Investig.48(2):199-208,2018中的综述以及本文引用的参考文献，这些都通过引用以其整体并入本文)，其中任何一种都可以用于本方法。
用于本公开内容的ADC可以靶向造血干细胞和/或免疫细胞上的特定分子，其包括例如CD2、CD5、CD7、CDwl2、CD13、CD15、CD19、CD21、CD22、CD29、CD30、CD33、CD34、CD36、CD38、CD40、CD41、CD42a、CD42b、CD42c、CD42d、CD43、CD45、CD45RA、CD45RB、CD45RC、CD45RO、CD47、CD48、CD49b、CD49d、CD49e、CD49f、CD50、CD53、CD55、CD64a、CD68、CD71、CD72、CD73、CD81、CD82、CD85A、CD85K、CD90、CD99、CD104、CD105、CD109、CD110、CD111、CD112、CD114、CD115、CD117、CD123、CD124、CD126、CD127、CD130、CD131、CD133、CD134、CD135、CD137、CD138、CD151、CD157、CD162、CD164、CD168、CD172a、CD173、CD174、CD175、CD175s、CD176、CD183、CD191、CD200、CD201、CD205、CD217、CD220、CD221、CD222、CD223、CD224、CD225、CD226、CD227、CD228、CD229、CD230、CD235a、CD235b、CD236、CD236R、CD238、CD240、CD242、CD243、CD252、CD277、CD292、CDw293、CD295、CD298、CD309、CD318、CD324、CD325、CD338、CD344、CD349或CD350。例如，本文描述了包含与人CD117结合的分离的抗CD117人抗体的ADC。例如，本文还描述了包含与人CD45结合的分离的抗CD45人抗体的ADC。本文提供的抗体具有许多使其有利于疗法的特征，该疗法包括调理人患者以进行遗传修饰干细胞移植的方法。例如，本文公开的抗体与恒河猴CD117发生交叉反应并且能够内化。这两个特征也使其有利于用于将细胞毒素递送到CD117表达细胞的缀合物。
本文描述的抗体包括拮抗剂抗体和中性抗体二者。具体地，本文提供了抗CD117抗体：抗体54(Ab54)、抗体55(Ab55)、抗体56(Ab56)、抗体57(Ab57)、抗体58(Ab58)、抗体61(Ab61)、抗体66(Ab66)、抗体67(Ab67)、抗体68(Ab68)和抗体69(Ab69)，它们各自是与人CD117的胞外域特异性结合的人抗CD117抗体。Ab54、Ab55、Ab56、Ab57、Ab58、Ab61、Ab66、Ab67、Ab68和Ab69的结合区描述如下，包括在表9中。本文公开的抗CD117抗体可以包括在抗CD117抗体药物缀合物(ADC；在本文中也称为缀合物)中。
可以在治疗多种病症(如造血谱系细胞类型疾病、癌症、自身免疫性疾病、代谢性病症以及干细胞病症等)的方法中使用与包括本文描述的ADC(例如，抗CD117或抗CD45抗体药物缀合物(ADC))的调理方法组合的遗传修饰干细胞。本文描述的ADC组合物和方法耗尽内源性造血干细胞群体，以便通过提供移植细胞可以归巢的小生境来促进移植的遗传修饰造血干细胞的植入。前述活性可以通过施用能够结合由造血干细胞表达的抗原(例如，CD117或CD45)的ADC、抗体或其抗原结合片段来实现。这种施用可以导致内源性造血干细胞群体的选择性耗尽，从而在造血组织(如骨髓)中产生空缺，该空缺随后可以由移植的遗传修饰造血干细胞填充。这种选择性耗尽也被称为“调理”。本方法部分地基于以下观察结果：可以将能够结合例如CD117(如GNNK+CD117)或CD45的ADC、抗体或其抗原结合片段作为调理剂施用到患者。可以将结合例如CD117或CD45的ADC、抗体或其抗原结合片段施用到患有癌症(如白血病)或自身免疫性疾病的患者，以直接耗尽癌性细胞或自身免疫性细胞群体，并且还可以施用到需要造血干细胞基因疗法的患者，以便促进移植的遗传修饰造血干细胞的存活和植入潜力，从而确保在移植后经纠正或改变的基因保留在患者体内。
由于施用例如抗CD117或抗CD45ADC而导致的遗传修饰造血干细胞移植物的植入可以在各种经验测量中体现出来。例如，可以通过评估在施用本文描述的ADC并随后施用遗传修饰造血干细胞移植物后患者骨髓内所存在的竞争性再殖单位(CRU)的数量来评价移植的遗传修饰造血干细胞的植入。另外，可以通过以下方式来观察遗传修饰造血干细胞移植物的植入：将报告基因(如催化产生荧光、发色或发光产物的化学反应的酶)并入到载体，已用该载体对包含遗传修饰造血干细胞的移植物进行了转染，并且随后在移植的造血干细胞已归巢到的组织(如骨髓)中监测相应的信号。还可以通过评价造血干细胞和祖细胞的数量和存活(例如，如通过本领域已知的荧光激活细胞分选(FACS)分析方法所确定的)来观察造血干细胞的植入。还可以通过在移植后期期间测量外周血液中的白血细胞计数和/或通过测量骨髓抽吸样品中供体细胞对骨髓细胞的恢复来确定植入。还可以通过检测经纠正或改变的基因序列的存在来确定植入。例如，在镰状细胞疾病的治疗中，可以通过检测经纠正的HBB基因序列的存在来确定植入。
以下部分描述了可以施用到患者(如患有癌症或自身免疫性疾病的患者，或需要造血干细胞移植物疗法的患者)以便促进遗传修饰造血干细胞移植物的植入的ADC、抗体或其抗原结合片段和遗传修饰干细胞，以及将此类治疗剂施用到患者的方法(例如，调理和施用遗传修饰的HSC)。
A.定义
如本文所用，术语“约”是指在所描述的值之上或之下10％以内的值。例如，术语“约5nM”指示4.5nM至5.5nM的范围。
如本文所用，术语“抗体”是指与特定抗原特异性结合或与其发生免疫反应的免疫球蛋白分子。抗体包括但不限于单克隆抗体；多特异性抗体(例如，双特异性抗体)；基因工程抗体和其他方式修饰形式的抗体，包括但不限于嵌合抗体、人源化抗体、异源缀合物(heteroconjugate)抗体(例如双、三和四特异性抗体、双抗体、三抗体和四抗体)；以及抗体片段(即，抗体的抗原结合片段)，包括例如Fab'、F(ab')2、Fab、Fv、rIgG和scFv片段，只要它们表现出期望的抗原结合活性。
术语“单克隆抗体”(mAb)旨在包括能够与靶蛋白特异性结合的完整分子以及抗体片段(包括例如Fab和F(ab')2片段)二者。单克隆抗体是指通过本领域可获得或已知的任何方式从单个克隆衍生的抗体，并且不限于通过杂交瘤技术产生的抗体。可以使用本领域已知的极其多种技术来制备可用于本公开内容的单克隆抗体，包括使用杂交瘤、重组和噬菌体展示技术或其组合。如本文所用，Fab和F(ab')2片段是指缺少完整抗体Fc片段的抗体片段。本文描述了这些抗体片段的实例。
本公开内容的抗体通常是分离的或重组的。在本文中使用时，“分离的”通常是指已经从表达它的细胞或细胞培养物中鉴定和分离和/或回收的多肽(例如，抗体)。一般而言，分离的抗体将通过至少一个纯化步骤来制备。因此，“分离的抗体”是指基本上不含其他具有不同抗原特异性的抗体的抗体。例如，与CD117特异性结合的分离的抗体基本上不含与除CD117之外的抗原特异性结合的抗体。
如本文所用，术语“抗原结合片段”是指保留了与靶抗原特异性结合的能力的抗体的片段或部分。抗体的抗原结合功能可以由全长抗体的片段来执行。抗体片段可以是例如Fab、F(ab')2、scFv、双抗体、三抗体、亲和体(affibody)、纳米抗体、适体或域抗体。术语抗体的“抗原结合片段”中所涵盖的结合片段的实例包括但不限于：(i)Fab片段，其是由VL、VH、CL、和CH1域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，其是含有两个通过铰链区处的二硫桥连接的Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH域组成的Fv片段，(v)包括VH和VL域的dAb；(vi)由VH域组成的dAb片段(参见例如，Ward等人,Nature341:544-546,1989)；(vii)由VH或VL域组成的dAb；(viii)分离的互补决定区(CDR)；以及(ix)可以任选地通过合成接头连接的两个或更多个(例如，两个、三个、四个、五个或六个)分离的CDR的组合。此外，尽管Fv片段的两个域VL和VH由不同的基因编码，但可以使用重组方法通过接头将它们接合起来，该接头使它们能够成为单一蛋白质链，其中VL和VH区配对以形成单价分子(被称为单链Fv(scFv)；参见，例如，Bird等人,Science 242:423-426,1988和Huston等人.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883,1988)。可以使用本领域技术人员已知的常规技术来获得这些抗体片段，并且可以以与完整抗体相同的方式筛选片段的效用。抗原结合片段可以通过重组DNA技术、完整免疫球蛋白的酶促或化学切割来产生，或在某些情况下，可以通过本领域已知的化学肽合成程序来产生。
如本文所用，术语“抗CD117抗体”或“与CD117结合的抗体”是指能够以足够的亲和力结合CD117的抗体，该足够的亲和力使得该抗体可用作靶向CD117的诊断和/或治疗剂。人CD117的两种主要同种型的氨基酸序列提供在SEQ ID NO:145(同种型1)和SEQ ID NO:146(同种型2)中。
如本文所用，术语“抗CD45抗体”或“与CD45结合的抗体”是指能够以足够的亲和力结合CD45的抗体，该足够的亲和力使得该抗体可用作靶向CD45的诊断和/或治疗剂。
如本文所用，术语“抗CD2抗体”或“与CD2结合的抗体”或“抗CD2ADC”或“与CD2结合的ADC”是指与人CD2特异性结合的抗体或ADC，因为CD2存在于细胞(如T细胞)的细胞表面上。
如本文所用，术语“抗CD5抗体”或“与CD5结合的抗体”或“抗CD5ADC”或“与CD5结合的ADC”是指与人CD5特异性结合的抗体或ADC，因为CD5存在于细胞(如T细胞)的细胞表面上。
如本文所用，术语“抗CD137抗体”或“与CD137结合的抗体”是指能够以足够的亲和力结合CD137的抗体，该足够的亲和力使得该抗体可用作靶向CD137的诊断和/或治疗剂。
如本文所用，术语“双特异性抗体”是指能够结合至少两种不同抗原或两个可以位于相同或不同抗原上的不同表位的抗体，例如单克隆抗体，通常是人抗体或人源化抗体。例如，结合特异性中的一种可以针对造血干细胞表面抗原(如CD117(例如CD117，如GNNK+CD117)或如CD45)上的表位，并且其他结合特异性可以特异性结合不同造血干细胞表面抗原或另一种细胞表面蛋白上的表位，如参与加强细胞生长的信号转导通路的受体或受体亚单位，等等。在一些实施方案中，结合特异性可以针对相同靶抗原上独特的非重叠表位(即，双互补位抗体)。
如本文所用，术语“互补决定区”(CDR)是指在抗体的轻链和重链可变域中发现的高变区。可变域的更高度保守的部分被称为框架区(FR)。描述抗体高变区的氨基酸位置可以根据上下文和本领域已知的各种定义而变化。可变域内的一些位置可被视为杂合高变位置，因为这些位置在一组标准下可被视为在高变区内，而在不同组标准下被视为在高变区外。这些位置中的一个或多个也可以见于扩展的高变区。本文所述的抗体可在这些杂合高变位置中含有修饰。天然重链和轻链的可变域各自含有通过三个CDR连接的主要采用β-片层构造的四个框架区，该CDR形成连接β-片层结构的环，并且在一些情况下形成β-片层结构的一部分。每条链中的CDR通过框架区以FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4的顺序紧密靠近地保持在一起，并与来自其它抗体链的CDR一起有助于形成抗体的靶结合位点(参见Kabatet al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,NationalInstitute of Health,Bethesda,MD.,1987)。在某些实施方案中，除非另有说明，否则免疫球蛋白氨基酸残基的编号根据Kabat等人的免疫球蛋白氨基酸残基编号系统进行(尽管可以使用任何抗体编号方案，包括但不限于IMGT和Chothia)。
如本文所用，术语“调理(conditioning)”是指使患者准备好接受移植物(例如，含有遗传修饰造血干细胞(HSC)的移植物)的过程。这种规程促进造血干细胞移植物的植入(例如，从调理程序和随后的造血干细胞移植后从患者分离的血液样品中存活的造血干细胞数量的持续增加推断)。根据本文所述的方法，可以通过向患者施用能够结合由造血干细胞和/或免疫细胞表达的分子，例如抗原诸如CD117(例如，GNNK+CD117)或CD45的ADC来对患者进行调理以进行遗传修饰的HSC移植物治疗。如本文所述，抗体可与细胞毒素共价缀合以形成药物-抗体缀合物(也称为抗体药物缀合物(ADC))。向需要造血干细胞移植物(HSCT)治疗的患者施用能够结合本文公开的一种或多种HSC表达抗原的ADC、抗体或其抗原结合片段可促进HSCT移植物的植入，例如，通过选择性耗尽内源性造血干细胞，从而产生由遗传修饰HSC移植物填充的空缺。
如本文所用，术语“缀合物”、“抗体药物缀合物”或“药物抗体缀合物”或“ADC”是指与细胞毒素连接的抗体或其片段。ADC通过抗体或其抗原结合片段的反应性官能团与另一个分子(诸如本文所述的细胞毒素)的适当反应性官能团的化学键合而形成。缀合物可包括彼此结合的两个分子之间的接头，例如，抗体和细胞毒素之间的接头。可用于形成缀合物的接头的实例包括含肽的接头，诸如含有天然存在或非天然存在的氨基酸(诸如D-氨基酸)的那些。接头可使用本文所述和本领域已知的多种策略来制备。取决于其中的反应性组分，可以切割接头，例如，通过酶水解、光解、在酸性条件下水解、在碱性条件下水解、氧化、二硫化物还原、亲核裂解或有机金属裂解(参见例如Leriche等人,Bioorg.Med.Chem.,20:571-582,2012)。如上文所述，术语“缀合物”(在指化合物时)在本文中也可互换地称为“药物缀合物”、“抗体药物缀合物”、“抗体药物缀合物”或“ADC”。
如本文所用，术语“偶联反应”是指一种化学反应，其中适合于彼此反应的两个或更多个取代基反应以形成连接(例如，共价地)与每个取代基结合的分子片段的化学部分。偶联反应包括如下那些，其中与作为细胞毒素的片段(诸如本领域已知或本文描述的细胞毒素)结合的反应性取代基与同作为抗体或其抗原结合片段，诸如抗体，其抗原结合片段结合的或对本领域已知或本文描述的结合CD117(诸如GNNK+CD117)的抗CD117抗体特异性的适当反应性取代基反应。合适的反应性取代基的实例包括亲核体/亲电体对(例如，硫醇/卤代烷基对、胺/羰基对或硫醇/α,β-不饱和羰基对等)、二烯/亲二烯体对(例如，叠氮化物/炔烃对等)等。偶联反应包括不限于硫醇烷基化、羟基烷基化、胺烷基化、胺缩合、酰胺化、酯化、二硫化物形成、环加成(例如，[4+2]Diels-Alder环加成，[3+2]Huisgen环加成等)、亲核芳族取代、亲电芳族取代和本领域已知或本文所述的其它反应形式。
如本文所用，“CRU(竞争性再殖单位)”是指可在体内移植后检测的长期移植干细胞的测量单位。
如本文所用，术语“双抗体”是指含有两条多肽链的二价抗体，其中每条多肽链包括由太短而无法允许VH和VL域在同一肽链上的分子内关联的接头(例如，由五个氨基酸构成的接头)接合的VH和VL域。这种构型迫使每个域与另一多肽链上的互补域配对，从而形成同源二聚体结构。因此，术语“三抗体”是指含有三条肽链的三价抗体，其中每条肽链含有一个VH域和一个VL域，通过极短而无法允许VH和VL域在同一肽链内的分子内关联的接头(例如，由1-2个氨基酸构成的接头)连接。为了折叠成它们的天然结构，以这种方式构形的肽通常三聚化，以便将邻近肽链的VH和VL域定位成空间上彼此接近(参见，例如，Holliger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-48,1993)。
如本文所用，“药物与抗体比”或“DAR”是指与缀合物的抗体连接的药物(例如，鹅膏毒素)的数目。ADC的DAR可以在1至8的范围内，尽管更高的负载也是可能的，这取决于抗体上连接位点的数目。在某些实施方案中，缀合物具有1、2、3、4、5、6、7或8的DAR。
如本文所用，术语“内源性”描述在特定生物体(诸如人类患者)中天然存在的物质，诸如分子、细胞、组织或器官(例如，造血干细胞或造血谱系细胞，诸如巨核细胞、凝血细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、成髓细胞(myeoblast)、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、小胶质细胞、粒细胞、单核细胞、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、T淋巴细胞或B淋巴细胞)。
如本文所用，术语“移植潜力”用于指造血干细胞和祖细胞再殖组织的能力，无论此类细胞是自然循环的还是通过移植提供的。该术语涵盖围绕或导致移植的所有事件，诸如细胞的组织归巢和细胞在感兴趣组织内的定殖。植入效率或植入速率可以使用本领域技术人员已知的任何临床上可接受的参数来评估或量化，并且可以包括例如竞争性再殖单位(CRU)的评估；在已经接受干细胞归巢、定殖或植入的组织中的标志物掺入或表达；或通过疾病进展、造血干细胞和祖细胞的存活或接受体的存活来评估受试者的进展。移植也可以通过在移植物后期期间测量外周血中的白细胞计数来确定。移植还可以通过测量骨髓抽吸物样品中供体细胞对骨髓细胞的恢复来评估。
如本文所用，术语“外源性”描述在特定生物体(诸如人类患者)中天然不存在的物质，诸如分子、细胞、组织或器官(例如，遗传修饰造血干细胞或造血谱系细胞，诸如巨核细胞、凝血细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、成髓细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、小胶质细胞、粒细胞、单核细胞、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、T淋巴细胞或B淋巴细胞)。在一些实施方案中，对接受体生物(例如，接受体患者)而言是外源性的物质可以天然存在于衍生物质的供体生物(例如，供体受试者)中。例如，同种异体细胞移植物含有对于接受体外源的，但对于供体天然的细胞。在一些实施方案中，自体细胞移植物含有对于接受体外源的基因序列(例如经由纠正接受体中存在的突变)，并且因此，此类自体细胞移植物对于接受体是“外源的”。外源性物质包括从外部来源提供给生物体或从中提取的培养物质的那些。
如本文所用，术语“Fc”、“Fc区”和“Fc域”指与通过木瓜蛋白酶消化IgG分子获得的可结晶片段相关的IgG分子的部分。Fc区包含通过二硫键连接的IgG分子的两条重链的C末端半部分。它没有抗原结合活性，但含有碳水化合物部分和用于补体与Fc受体(包括FcRn受体)的结合位点(见下文)。例如，Fc区含有第二恒定域CH2(例如，IgG1的EU位置231-340处的残基)和第三恒定域CH3(例如，人IgG1的EU位置341-447处的残基)。如本文所用，Fc区或域包括“下铰链区”(例如，IgG1的EU位置233-239处的残基)。
Fc可以指分离的该区域，或在抗体、抗体片段或Fc融合蛋白的上下文中的该区域。已经在Fc域中的多个位置处观察到多态性，包括但不限于EU位置270、272、312、315、356和358，因此在本申请中呈现的序列和本领域已知的序列之间可以存在轻微差异。因此，“野生型IgG Fc域”或“WT IgG Fc域”指任何天然存在的IgG Fc区域(即任何等位基因)。人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的重链序列可以在许多序列数据库中找到，例如，在Uniprot数据库(www.uniprot.org)中，分别以登录号P01857(IGHG1_HUMAN)、P01859(IGHG2_HUMAN)、P01860(IGHG3_HUMAN)和P01861(IGHG1_HUMAN)找到。“WT”Fc区的实例在SEQ ID NO:122中提供(其提供含有Fc区的重链恒定区)。
如本文所用，术语“修饰的Fc区”或“变体Fc区”是指包含在Fc区内的任何位置引入的一个或多个氨基酸取代、缺失、插入或修饰的IgG Fc域。在某些方面，变体IgG Fc域包含一个或多个氨基酸取代，与不包含所述一个或多个氨基酸取代的野生型Fc域相比，所述取代导致对FcγR和/或C1q的结合亲和力降低或消除。此外，Fc结合相互作用对于多种效应子功能和下游信号传导事件是必需的，包括但不限于抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)。因此，在某些方面，包含变体Fc域的抗体(例如，抗体、融合蛋白或缀合物)相对于其它方面具有相同氨基酸序列但不包含一个或多个氨基酸取代、缺失、插入或修饰的相应抗体(诸如，例如，在Fc区中的相应位置处含有天然存在的氨基酸残基的未修饰的Fc区)可展现对至少一个或多个Fc配体(例如，FcγR)的改变的结合亲和力。
变体Fc域是根据组成它们的氨基酸修饰来定义的。对于本文讨论的关于Fc区的所有氨基酸取代，编号始终根据如Kabat中的EU索引。因此，例如，相对于亲本Fc域，D265C是一种EU位置265处的天冬氨酸(D)被半胱氨酸(C)取代的Fc变体。应当注意，取代的顺序是任意的。同样地，例如，相对于亲本Fc域，D265C/L234A/L235A定义一种在EU位置265(D被C)、234(L被A)和235(L被A)处具有取代的变体Fc变体。变体也可以根据其突变的EU氨基酸位置中的最终氨基酸组成来定名。例如，L234A/L235A突变体可以被称为“LALA”。作为进一步的实例，E233P.L234V.L235A.delG236(236缺失)突变体可以被称为“EPLVLAdelG”。作为又另一实例，I253A.H310A.H435A突变体可以被称为“IHH”。应当注意，取代的顺序是任意的。
如本文所用，术语“Fcγ受体”或“FcγR”是指结合IgG抗体Fc区并由FcγR基因编码的蛋白质家族的任何成员。在人类中，该家族包括但不限于FcgγRI(CD64)，包括同种型FcγRIa、FcγRIb和FcγRIc；FcγRII(CD32)，包括同种型FcγRIIa(包括同种异型H131和R131)，FcγRIIb(包括FcγRIIb-1和FcγRIIb-2)和FcγRIIc；以及FcγRIII(CD16)，包括同种型FcγRIIIa(包括同种异型V158和F158)和FcγRIIIb(包括同种异型FcγRIIIb-NA1和FcγRIIIb-NA2)，以及任何未发现的人类FcγR或FcγR同种型或同种异型。FcγR可以来自任何生物体，包括但不限于人类、小鼠、大鼠、兔和猴。小鼠FcγR包括但不限于FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)、FcγRIII(CD16)和FcγRIII-2(CD16-2)，以及任何未发现的小鼠FcγR或FcγR同种型或同种异型。
如本文所用，术语“效应子功能”是指从Fc域与Fc受体相互作用产生的生化事件。效应子功能包括但不限于ADCC、ADCP和CDC。如本文所用，“效应细胞”是指表达一种或多种Fc受体并介导一种或多种效应子功能的免疫系统细胞。效应细胞包括但不限于单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、血小板、B细胞、大颗粒淋巴细胞，朗格汉斯细胞、自然杀伤(NK)细胞和γδT细胞，并且可以来自任何生物体，包括但不限于人类、小鼠、大鼠、兔和猴。
如本文所用，术语“沉默性的(silent)”、“沉默的(silenced)”或“沉默(silencing)”是指相对于包含未修饰的Fc区的相同抗体与FcγR的结合，具有本文所述的修饰的Fc区的抗体与Fcγ受体(FcγR)的结合降低(例如，相对于包含未修饰的Fc区的相同抗体与FcγR的结合，与FcγR的结合降低至少70％，至少80％，至少90％，至少95％，至少98％，至少99％，或100％，如通过例如BLI测量的)。在一些实施方案中，Fc沉默抗体与FcγR没有可检测的结合。具有修饰的Fc区的抗体与FcγR的结合可以使用本领域已知的多种技术测定，例如但不限于平衡方法(例如，酶联免疫吸附测定(ELISA)；KinExA,Rathanaswami等人Analytical Biochemistry,Vol.373:52-60,2008；或放射免疫测定(RIA))，或通过表面等离子体共振测定或基于动力学的测定的其他机制(例如，BIACORETM分析或OctetTM分析(forteBIO))，以及其他方法，诸如间接结合测定、竞争性结合测定、荧光共振能量转移(FRET)、凝胶电泳和色谱法(例如，凝胶过滤)。这些和其它方法可以利用一种或多种检查的组分上的标记物和/或采用各种检测方法(包括但不限于生色、荧光、发光或同位素标记物)。结合亲和力和动力学的详细描述可见于Paul,W.E.编,Fundamental Immunology,第4版,Lippincott-Raven,Philadelphia(1999)，其聚焦于抗体-免疫原相互作用。竞争性结合测定的一个实例是放射免疫测定，其包括在存在增加量的未标记抗原的情况下将标记抗原与感兴趣的抗体温育，并检测与标记抗原结合的抗体。感兴趣的抗体对特定抗原的亲和力和结合解离速率可通过scatchard图分析从数据确定。与第二抗体的竞争也可以使用放射免疫测定法来测定。在这种情况下，在增加量的未标记的第二抗体存在下，将抗原同与经标记的化合物缀合的感兴趣的抗体一起温育。
如本文所用，术语“包含未修饰的Fc区的相同抗体”是指缺少叙述的氨基酸取代(例如，D265C、H435A、L234A和/或L235A)，但在其他方面具有与同其比较的经Fc修饰的抗体相同的氨基酸序列的抗体。
术语“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”是指一种细胞毒性形式，其中包含Fc域的多肽(例如，抗体)与存在于某些细胞毒性细胞(例如，主要是NK细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)上的Fc受体(FcR)结合，并使这些细胞毒性效应细胞能够特异性结合到携带抗原的“靶细胞”，并且随后用细胞毒素杀死靶细胞(Hogarth等人,Nature review DrugDiscovery 2012,11:313)。涵盖的是在抗体及其片段之外，具有与携带抗原的靶细胞特异性结合的能力的其他包含Fc域的多肽(例如，Fc融合蛋白和Fc缀合蛋白)将能够实现细胞介导的细胞毒性。
为简单起见，由包含Fc域的多肽的活性产生的细胞介导的细胞毒性在本文中也称为ADCC活性。可以测定本公开的任何特定多肽介导通过ADCC对靶细胞的裂解的能力。为了评估ADCC活性，将感兴趣的多肽(例如，抗体)与免疫效应细胞组合添加至靶细胞，导致靶细胞的细胞溶解。细胞溶解通常通过从裂解的细胞释放标记物(例如，放射性底物、荧光染料或天然细胞内蛋白质)来检测。可用于此类测定的效应细胞包括外周血单个核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。体外ADCC测定的具体实例描述于Bruggemann等人,J.Exp.Med.166:1351(1987)；Wilkinson等人,J.Immunol.Methods 258:183(2001)；Patel等人,J.Immunol.Methods 184:29(1995)。可选地或另外地，可以在体内(例如，在动物模型中，诸如Clynes等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95:652(1998)中所公开的)评估感兴趣的抗体的ADCC活性。
术语“全长抗体”和“完整抗体”在本文中可互换地用于指呈基本上完整的形式的抗体，而不是如本文所定义的抗体片段。因此，对于IgG抗体，完整抗体包含两条重链和两条轻链，其中每条重链包含可变区、恒定区和Fc区，并且每条轻链包含可变区和恒定区。更具体地，完整的IgG包含两条轻链，其中每条轻链包含轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)，并且包含两条重链，其中每条重链包含重链可变区(VH)和三个重链恒定区(CH1、CH2和CH3)。CH2和CH3表示重链的Fc区。在某些实施方案中，本文描述的方法中所使用的ADC包含与在干细胞的表面上表达的抗原(例如，人CD117(hCD117)或人CD45(hCD45))结合的完整抗体。
如本文所用，术语“框架区”或“FW区”包括与抗体或其抗原结合片段的CDR相邻的氨基酸残基。FW区残基可以存在于例如人抗体、人源化抗体、单克隆抗体、抗体片段、Fab片段、单链抗体片段、scFv片段、抗体域和双特异性抗体等中。
还提供了本文所述的SEQ ID NO中所示序列的“保守序列修饰”，即不消除由核苷酸序列编码或含有氨基酸序列的抗体与抗原结合的核苷酸和氨基酸序列修饰。这种保守序列修饰包括保守核苷酸和氨基酸取代，以及核苷酸和氨基酸添加和缺失。例如，可以通过本领域已知的标准技术(诸如定点诱变和PCR介导的诱变)将修饰引入本文所述的SEQ ID NO。保守序列修饰包括保守氨基酸取代，其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基取代。具有相似侧链的氨基酸残基家族已在本领域中定义。这些家族包括具有碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β-支链侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。因此，抗CD117抗体中预测的非必需氨基酸残基优选被来自相同侧链家族的另一氨基酸残基替代。鉴定不消除抗原结合的核苷酸和氨基酸保守取代的方法是本领域熟知的(参见例如Brummell等人,Biochem.32:1180-1187(1993)；Kobayashi等人Protein Eng.12(10):879-884(1999)；以及Burks等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94:412-417(1997))。
如本文所用，术语“半衰期”是指受试者(例如，人类受试者)体内抗体药物的血浆浓度降低一半或50％所花费的时间。血清浓度降低50％反映了药物循环量。
如本文所用，术语“干细胞”是指专能干细胞(例如，造血干细胞)。该术语还可以是指全能或多能干细胞。
如本文所用，术语“造血干细胞”(“HSC”)是指具有自我更新和分化成含有多种多样的谱系的成熟血细胞的能力的未成熟血细胞，所述谱系细胞包括但不限于粒细胞(例如，早幼粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)、红细胞(例如，网织红细胞、红细胞)、凝血细胞(例如，原巨核细胞、产生血小板的巨核细胞、血小板)、单核细胞(例如，单核细胞、巨噬细胞)、树突细胞、小胶质细胞、破骨细胞和淋巴细胞(例如，NK细胞、B细胞和T细胞)。这些细胞可包括CD34+细胞。CD34+细胞是表达CD34细胞表面标志物的未成熟细胞。在人类中，CD34+细胞被认为包括具有上文限定的干细胞特性的细胞亚群，而在小鼠中，HSC是CD34-。此外，HSC还指长期再殖HSC(long term repopulating HSC，LT-HSC)和短期再殖HSC(short term repopulating HSC，ST-HSC)。LT-HSC和ST-HSC基于功能潜力和细胞表面标志物表达来区分。例如，人类HSC是CD34+、CD38-、CD45RA-、CD90+、CD49F+和lin-(成熟谱系标志物呈阴性，包括CD2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD10、CD11B、CD19、CD20、CD56、CD235A)。在小鼠中，骨髓LT-HSC是CD34-、SCA-1+、C-kit+、CD135-、Slamfl/CD150+、CD48-和lin-(成熟谱系标志物呈阴性，包括Ter119、CD11b、Gr1、CD3、CD4、CD8、B220、IL7ra)，而ST-HSC是CD34+、SCA-1+、C-kit+、CD135-、Slamfl/CD150+和lin-(成熟谱系标志物呈阴性，包括Ter119、CD11b、Gr1、CD3、CD4、CD8、B220、IL7ra)。此外，在稳态条件下，ST-HSC比LT-HSC具有更低的静止性和更高的增殖性。然而，LT-HSC具有更大的自我更新潜力(即，它们在整个成年期存活，并且可以通过连续的接受体连续移植)，而ST-HSC具有有限的自我更新(即，它们仅存活有限的时间段，并且不具有连续移植潜力)。这些HSC中的任一种均可用于本文所述的方法中。ST-HSC是特别有用的，因为它们具有高度增殖性，因此可以更快地产生分化的后代。
如本文所用，术语“遗传修饰干细胞”或“遗传修饰HSC”是指一种或多种如下的细胞，其已经经受基因编辑以便改变细胞基因组中的靶基因，或已经被改变成使得外源性基因或外源性基因序列在细胞中表达。
如本文所用，术语“靶基因”是指干细胞基因组的基因序列或基因序列的一部分。在一些实施方案中，靶基因序列是编码序列。在一些实施方案中，靶基因序列是非编码序列(例如，调控序列)。在一些实施方案中，靶基因序列是产生病症或疾患的非野生型基因序列(例如，突变)。在一些实施方案中，改变靶基因包括，例如，1)使用基因编辑系统来纠正靶基因序列中的一个或多个突变(例如，通过密码子特异性编辑；或替换整个或部分基因)，从而恢复基因的功能(例如，产生功能性蛋白质或功能性调控序列)，2)将功能性基因序列(例如，基因的野生型或功能性变体序列)插入到干细胞基因组中，或3)插入功能性基因(例如，基因的野生型或功能变体序列)，以及中断(例如，沉默)靶基因序列。用于纠正和/或插入基因序列的各种基因编辑系统是本领域已知的。作为实例，HBB基因中引起镰状细胞疾病的一个或多个突变可以通过对突变进行位点特异性编辑或通过全部或部分地替换基因来纠正。作为实例，可以通过基因编辑方法来沉默突变的HBB基因，并且可以将功能性HBB基因插入到干细胞基因组中。在一些实施方案中，靶基因是一种野生型基因(例如，CCR5)，其可以被变体序列替换，或被编辑成编码赋予治疗益处的变体序列(例如，用于HIV疗法的CCR5(delta)32)。
如本文所用，术语“造血干细胞功能潜力”是指造血干细胞的功能特性，其包括1)多潜能性(其是指分化成多种不同血液谱系细胞的能力，该血液谱系细胞包括但不限于粒细胞(例如，早幼粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)、红细胞(例如，网织红细胞、红细胞)、凝血细胞(例如，原巨核细胞、产生血小板的巨核细胞、血小板)、单核细胞(例如，单核细胞、巨噬细胞)、树突细胞、小胶质细胞、破骨细胞和淋巴细胞(例如，NK细胞、B细胞和T细胞)，2)自我更新(其是指造血干细胞产生与母细胞具有等同潜能的子细胞的能力，并且此外这种能力可以在个体的整个寿命中反复发生而不会衰竭)，以及3)造血干细胞或其后代被重新引入到移植物接受体的能力，届时它们归巢至造血干细胞小生境，并重新建立富有成效的和持续的造血功能。
如本文所用，术语“人抗体”意图包括具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。人抗体可包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，在体外通过随机或位点特异性诱变或在基因重排期间或通过体内体细胞突变引入的突变)。然而，如本文所用，术语“人抗体”不意图包括其中源自另一哺乳动物物种(诸如小鼠)种系的CDR序列已移植到人框架序列上的抗体。人抗体可以在人细胞中产生(例如，通过重组表达)或通过非人动物或能够表达功能上重排的人免疫球蛋白(诸如重链和/或轻链)基因的原核或真核细胞产生。当人抗体为单链抗体时，其可以包括在天然人抗体中没有发现的接头肽。例如，Fv可以含有连接重链可变区和轻链可变区的接头肽，诸如2至约8个甘氨酸或其它氨基酸残基。这种接头肽认为是人源的。人抗体可以通过本领域已知的多种方法制备，包括使用源自人免疫球蛋白序列的抗体文库的噬菌体展示方法。也可以使用不能表达功能性内源性免疫球蛋白，但能表达人免疫球蛋白基因的转基因小鼠产生人抗体(参见例如PCT公开号WO1998/24893；WO 1992/01047；WO 1996/34096；WO 1996/33735；美国专利号5,413,923；5,625,126；5,633,425；5,569,825；5,661,016；5,545,806；5,814,318；5,885,793；5,916,771；以及5,939,598)。
“人源化”抗体指含有源自非人免疫球蛋白的最小序列的抗体。因此，非人(例如，鼠)抗体的“人源化”形式是含有衍生自非人抗体的最小序列的嵌合抗体。所有或基本上所有的FW区可以是人免疫球蛋白序列的那些区。一般而言，人源化抗体将包含基本上所有的至少一个并且通常是两个可变域，其中所有或基本上所有的CDR区对应于非人免疫球蛋白的那些区，并且所有或基本上所有的FR区是人免疫球蛋白序列的那些区。人源化抗体还可以包含免疫球蛋白恒定区(Fc)(通常是人免疫球蛋白共有序列的恒定区)的至少一部分。抗体人源化的方法是本领域已知的，并且已描述例如在以下文献中：Riechmann等人，Nature332:323-7,1988；授予Queen等人的美国专利号：5,530,101；5,585,089；5,693,761；5,693,762；以及6,180,370；EP239400；PCT公布WO 91/09967；美国专利号5,225,539；EP592106；EP519596；Padlan,1991,Mol.Immunol.,28:489-498；Studnicka等人，1994,Prot.Eng.7:805-814；Roguska等人，1994,Proc.Natl.Acad.Sci.91:969-973；以及美国专利号5,565,332。
如本文所用，“需要”遗传修饰造血干细胞移植的患者包括例如表现出一种或多种血细胞类型缺陷或缺乏的患者，以及患有本文描述的干细胞病症、自身免疫性疾病、癌症或其他病状的患者。在一些实施方案中，需要遗传修饰HSC移植的患者包括携带引起病症(例如，镰状细胞贫血、地中海贫血、威斯科特-奥尔德里奇二氏综合征、腺苷脱氨酶缺乏)的缺陷型基因的患者。造血干细胞通常表现出1)多潜能性，并因此可分化成多种不同血液谱系，包括但不限于粒细胞(例如，早幼粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)、红细胞(例如，网织红细胞、红细胞)、凝血细胞(例如，原巨核细胞、产生血小板的巨核细胞、血小板)、单核细胞(例如，单核细胞、巨噬细胞)、树突细胞、小胶质细胞、破骨细胞和淋巴细胞(例如，NK细胞、B细胞和T细胞)，2)自我更新，并因此可产生具有与母细胞具有同等潜能的子细胞，以及3)重新引入移植接受体的能力，由此它们归巢到造血干细胞小生境并重新建立富有成效的和持续的造血功能。因此，可以将造血干细胞施用到表现出一种或多种造血谱系细胞类型缺乏或缺陷(例如，由于突变基因)的患者，以便例如通过改变靶基因(例如，突变基因)来在体内重构缺陷型或缺乏型细胞群体。另外地或可选地，患者可以患有血红蛋白病(例如，非恶性血红蛋白病)，诸如镰状细胞性贫血、地中海贫血、范可尼贫血、再生障碍性贫血和威斯科特-奥尔德里奇二氏综合征。受试者可以是患有腺苷脱氨酶重症综合性免疫缺陷(ADA SCID)、HIV/AIDS、异染性脑白质营养不良、戴-布二氏贫血和舒-戴二氏综合征的受试者。受试者可以患有或者受累于遗传性血液病症(例如，镰状细胞性贫血)或自身免疫性病症。另外地或可选地，受试者可以患有或受累于恶性肿瘤(诸如成神经细胞瘤或血液癌症)。例如，受试者可患有白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。在一些实施方案中，受试者患有急性髓样白血病、急性淋巴样白血病、慢性髓样白血病、慢性淋巴样白血病、多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤。在一些实施方案中，受试者患有骨髓增生异常综合征。在一些实施方案中，受试者患有自身免疫性疾病，诸如硬皮病、多发性硬化、溃疡性结肠炎、克罗恩病、1型糖尿病或本文所述的另一种自身免疫病理学。在一些实施方案中，受试者需要嵌合抗原受体T细胞(CART)疗法。在一些实施方案中，受试者患有或在其它情况下受累于代谢性贮积症。受试者可以患有或在其它情况下受累于代谢病症，该代谢病症选自由以下组成的组：糖原贮积病、粘多糖症(mucopolysaccharidoses)、戈谢病(Gaucher'sDisease)、胡尔勒(Hurlers)病、鞘脂贮积病(sphingolipidoses)、异染性脑白质营养不良或可受益于本文公开的治疗和疗法的任何其它疾病或病症，并且包括但不限于重症综合性免疫缺陷、威斯科特-奥尔德里奇(Wiscott-Aldrich)综合征、高免疫球蛋白M(IgM)综合征、切东病(Chediak-Higashi disease)、遗传性淋巴组织细胞增生症、骨硬化病、成骨不全、贮积病、重型地中海贫血、镰状细胞病、系统性硬化症、系统性红斑狼疮、多发性硬化、幼年型类风湿性关节炎以及“Bone Marrow Transplantation for Non-Malignant Disease,”ASHEducation Book,1:319-338(2000)(其公开内容通过引用整体并入本文，因为其涉及可通过施用造血干细胞移植物疗法来治疗的病理学)中描述的那些疾病或病症。另外地或可选地，“需要”造血干细胞移植物的患者可以是患有或未患有前述病理学之一，但仍然表现出造血谱系内一种或多种内源性细胞类型的水平降低(例如，与其它方面健康的受试者的水平相比)的患者，所述内源性细胞类型诸如巨核细胞、凝血细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、成髓细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、小胶质细胞、粒细胞、单核细胞、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞。本领域技术人员可以容易地确定一种或多种上述细胞类型或其它血细胞类型的水平相对于其它方面健康的受试者是否降低，例如特别通过本领域已知的流式细胞术和荧光激活细胞分选(FACS)方法。
如本文所用，“中性抗体”是指不能够显著地中和、阻断、抑制、消除、减少或干扰特定或具体靶标(例如，CD117或CD45)的活性的抗体或其抗原结合片段，该活性包括受体与配体的结合或酶与底物的相互作用。在一个实施方案中，中性抗CD117抗体或其片段是基本上不抑制SCF依赖性细胞增生且不交叉阻断SCF与CD117结合的抗CD117抗体。中性抗体的实例是Ab67(或具有Ab67的结合区的抗体)。相比之下，“拮抗剂”抗CD117抗体抑制SCF依赖性增生，并且能够交叉阻断SCF与CD117结合。拮抗剂抗体的实例是Ab55(或具有Ab55的结合区的抗体)。
如本文所用，术语“接受体”是指接受移植物(诸如含有遗传修饰造血干细胞群体的移植物)的患者。对接受体施用的移植细胞可以是例如自体、同基因或同种异体细胞。
如本文所用，术语“供体”是指人或动物，从该人或动物中分离出一种或多种细胞，然后将这些细胞或其后代施用到接受体中。该一种或多种细胞可以是例如造血干细胞群体。
如本文所用，术语“自体”是指移植到受试者的细胞衍生自同一受试者。在某些情况下，在将一种或多种自体细胞移植回受试者之前，对其进行遗传修饰。
如本文所用，术语“同种异体”是指相同物种的基因上与比较细胞不同的细胞，即，来自不同的人受试者的细胞。例如，可以将来自一个人受试者的细胞移植到不同的人受试者中。同种异体旨在指细胞相对于接受体的来源，而不是细胞关于遗传修饰的状态。
如本文所用，术语“样品”是指取自受试者的样本(例如，血液、血液组分(例如，血清或血浆)、尿液、唾液、羊水、脑脊液、组织(例如，胎盘或真皮)、胰液、绒毛膜绒毛样品和细胞)。
如本文所用，术语“scFv”是指单链Fv抗体，其中来自抗体的重链和轻链的可变域已经连接形成一条链。scFv片段含有单一多肽链，其包括通过接头隔开的抗体轻链的可变区(VL)(例如，CDR-L1、CDR-L2和/或CDR-L3)和抗体重链的可变区(VH)(例如，CDR-H1、CDR-H2和/或CDR-H3)。连接scFv片段的VL和VH区的接头可以是由蛋白质源性(proteinogenic)氨基酸组成的肽接头。可使用替代接头以增加scFv片段对蛋白水解降解的抗性(例如，含有D-氨基酸的接头)，以提高scFv片段的溶解度(例如，亲水性接头，诸如含有聚乙二醇的接头或含有重复甘氨酸和丝氨酸残基的多肽)，以提高分子的生物物理稳定性(例如，含有形成分子内或分子间二硫键的半胱氨酸残基的接头)，或减弱scFv片段的免疫原性(例如，含有糖基化位点的接头)。本领域普通技术人员还将理解，本文所述的scFv分子的可变区可以经修饰，使得它们的氨基酸序列与衍生它们的抗体分子不同。例如，可以进行导致氨基酸残基上的保守取代或改变的核苷酸或氨基酸取代(例如，在CDR和/或框架残基中)，以保持或增强scFv结合由相应抗体识别的抗原的能力。
如本文所用，术语“特异性结合”或“特异性地结合”是指抗体(或ADC)通常识别并结合特定蛋白质结构(表位)而非结合蛋白质的能力。如果抗体对表位“A”具有特异性，则在含有标记的“A”和抗体的反应中，含有表位A(或游离的、未标记的A)的分子的存在将减少与抗体结合的标记的A的量。例如，如果抗体在被标记时可以由相应的未标记抗体竞争而远离其靶标，则该抗体与靶标“特异性结合”。在一个实施方案中，如果抗体对靶标的KD为至少约10-4M，10-5M，10-6M，10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，10-11M，10-12M或更小(更小意指小于10-12的数字，例如10-13)，则抗体与靶标(例如，CD117)特异性结合。本文中也包括包含前述KD数值的范围，例如10-8M-10-12M,10-9M-10-12M,或10-10M-10-12M。在一个实施方案中，如本文所用，术语“与CD117特异性结合”或“与CD117特异性地结合”是指结合CD117并具有1.0x10-7M或更小的解离常数(KD)的抗体(或ADC)，如通过表面等离振子共振测定。在一个实施方案中，KD(M)根据标准生物层干涉术(interferometery)(BLI)测定。在一个实施方案中，Koff(1/s)根据标准生物层干涉术(BLI)测定。然而，应当理解的是，抗体可能能够特异性结合两个或更多个序列相关的抗原。例如，在一个实施方案中，抗体可特异性结合例如CD117或CD45的人和非人(例如，小鼠或非人灵长类动物)直向同源物。
如本文所用，术语“受试者”和“患者”是指接受本文所述的特定疾病或病症的治疗的生物体，诸如人类。例如，患者(诸如人类患者)可以在造血干细胞移植物治疗之前接受治疗，以促进遗传修饰造血干细胞(其可以是自体的或同种异体的)的植入。
如本文所用，短语“基本上从血液中清除”是指在向患者施用治疗剂(诸如抗CD117抗体或其抗原结合片段)后的时间点，此时从患者分离的血液样品中治疗剂的浓度使得该治疗剂通过常规手段检测不到(例如，使得该治疗剂在用于检测该治疗剂的装置或测定的噪声阈值以上检测不到)。本领域已知的多种技术可用于检测抗体或抗原结合片段，诸如本领域已知的或本文所述的基于ELISA的检测测定。可用于检测抗体或抗体片段的其它测定法包括免疫沉淀技术和免疫印迹测定法，以及本领域已知的其它测定法。
如本文所用，短语“干细胞病症”泛指可通过对受试者的靶组织进行调理和/或通过消融靶组织中的内源性干细胞群体(例如，消融来自受试者骨髓组织的内源性造血干细胞或祖细胞群体)和通过在受试者的靶组织中植入或移植遗传修饰的干细胞来治疗或治愈的任何疾病、病症或病状。可使用本文所述的组合物和方法治疗的其他病症包括但不限于镰状细胞性贫血、地中海贫血、范可尼贫血、再生障碍性贫血、威斯科特-奥尔德里奇二氏综合征、ADA SCID、HIV/AIDS、异染性脑白质营养不良、戴-布二氏贫血和舒-戴二氏综合征。可使用本文所述的患者调理和遗传修饰的造血干细胞移植物方法治疗的其它疾病包括遗传性血液病症(例如，镰状细胞性贫血)和自身免疫性病症，诸如硬皮病、多发性硬化、溃疡性结肠炎和克罗恩病。可使用本文所述的调理和/或移植方法治疗的其它疾病包括恶性肿瘤，诸如成神经细胞瘤或血液癌症，诸如白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。例如，癌症可以是急性髓样白血病、急性淋巴样白血病、慢性髓样白血病、慢性淋巴样白血病、多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤。可使用本文所述的调理和/或移植方法治疗的其它疾病包括骨髓增生异常综合征。在一些实施方案中，受试者患有或在其它情况下受累于代谢性贮积症。例如，受试者可以患有或在其它情况下受累于代谢病症，该代谢病症选自由以下组成的组：糖原贮积病、粘多糖症、戈谢病、胡尔勒病、鞘脂贮积病、异染性脑白质营养不良或可受益于本文公开的治疗和疗法的任何其它疾病或病症，并且包括但不限于重症综合性免疫缺陷、威斯科特-奥尔德里奇综合征、高免疫球蛋白M(IgM)综合征，切东病、遗传性淋巴组织细胞增生症、骨硬化病、成骨不全、贮积病、重型地中海贫血、镰状细胞病、系统性硬化症、系统性红斑狼疮、多发性硬化、幼年型类风湿性关节炎以及“Bone Marrow Transplantationfor Non-Malignant Disease,”ASH Education Book,1:319-338(2000)(其公开内容通过引用整体并入本文，因为其涉及可通过施用造血干细胞移植物疗法来治疗的病理学)中描述的那些疾病或病症。
如本文所用，术语“转染”是指通常用于将外源DNA引入原核或真核宿主细胞的极其多种技术中的任一种，诸如电穿孔、脂质转染、磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖转染等。
如本文所用，术语“治疗”或“处理”是指降低疾病症状的严重性和/或频率，消除疾病症状和/或所述症状的根本原因，降低疾病症状和/或其根本原因的频率或可能性，以及改善或补救由疾病直接或间接造成的损伤，对疾病的任何后果的任何改善，诸如延长生存期、降低发病率和/或减轻作为替代治疗形式的副产物的副作用；如本领域容易理解的，完全根除疾病是优选的，但不是治疗行为的要求。有益的或期望的临床结果包括但不限于在本文所述的ADC调理治疗和随后的造血干细胞移植物治疗后，促进患者中造血细胞的植入。另外的有益结果包括调理治疗和随后对患者施用造血干细胞移植物后需要造血干细胞移植物的患者中造血干细胞的细胞计数或相对浓度的增加。本文所述治疗的有益结果还可包括调理治疗和随后的造血干细胞移植物治疗后，造血谱系的一种或多种细胞的细胞计数或相对浓度的增加，所述造血谱系的一种或多种细胞诸如巨核细胞、凝血细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、成髓细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、小胶质细胞、粒细胞、单核细胞、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、T淋巴细胞或B淋巴细胞。另外的有益结果可以包括减少致病细胞群体的数量，诸如癌细胞(例如，CD117+白血病细胞)或自身免疫细胞(例如，CD117+自身免疫淋巴细胞，例如表达与自身抗原交叉反应的T细胞受体的CD117+T细胞)的群体。另外的有益结果包括由于纠正如本文描述的致病靶基因，患者中表达的功能性蛋白的存在或检出。在本公开的方法涉及预防病症的情况下，应理解术语“预防”不要求疾病状态被完全阻遏。相反，如本文所用，术语预防是指本领域技术人员鉴定易患病症的群体的能力，使得本公开的化合物的施用可在疾病发作之前发生。该术语并不意味着完全避免疾病状态。
如本文所用，术语“变体”和“衍生物”可互换使用，并且是指本文所述的化合物、肽、蛋白质或其它物质的天然存在的、合成的和半合成的类似物。本文所述的化合物、肽、蛋白质或其它物质的变体或衍生物可保留或改善原始材料的生物活性。
如本文所用，术语“载体”包括核酸载体，诸如质粒、DNA载体、质粒、RNA载体、病毒或其它合适的复制子。本文所述的表达载体可含有多核苷酸序列以及例如用于表达蛋白质和/或将这些多核苷酸序列整合到哺乳动物细胞基因组中的其他序列元件。可用于表达本公开的抗体和抗体片段的某些载体包括含有指导基因转录的调控序列(诸如启动子和增强子区)的质粒。用于表达抗体和抗体片段的其它有用载体含有提高这些基因的翻译速率或改善由基因转录产生的mRNA的稳定性或核输出的多核苷酸序列。这些序列元件可包括例如5'和3'非翻译区和聚腺苷酸化信号位点，以指导表达载体上携带的基因的有效转录。本文所述的表达载体还可以含有编码用于选择含有这种载体的细胞的标志物的多核苷酸。合适的标志物的实例包括编码对抗生素(诸如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素和诺尔丝菌素)的抗性的基因。
如本文所用，术语“酰基”是指-C(＝O)R，其中R是氢(“醛”)、C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C3-C7碳环基、C6-C20芳基、5-10元杂芳基或5-10元杂环基，如本文所定义的。非限制性实例包括甲酰基、乙酰基、丙酰基、苯甲酰基和丙烯酰基。
如本文所用，术语“C1-C12烷基”是指具有1至12个碳原子的直链或支化饱和烃。代表性C1-C12烷基基团包括但不限于-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基和-正己基；而支化C1-C12烷基包括但不限于-异丙基、-仲丁基、-异丁基、-叔丁基、-异戊基和2-甲基丁基。C1-C12烷基基团可以是未取代或取代的。
如本文所用，术语“烯基”是指含有正碳、仲碳或叔碳原子且具有至少一个不饱和位点(即碳-碳sp2双键)的C2-C12烃。实例包括但不限于：亚乙基或乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基、-异丁烯基、-1-戊烯基、-2-戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基、-2,3-二甲基-2-丁烯基等。烯基基团可以是未取代或取代的。
如本文所用，“炔基”是指含有正碳、仲碳或叔碳原子且具有至少一个不饱和位点(即碳-碳sp三键)的C2-C12烃。实例包括但不限于炔属和炔丙基。炔基基团可以是未取代或取代的。
如本文所用，“芳基”是指C6-C20碳环芳香族基团。芳基基团的实例包括但不限于苯基、萘基和蒽基。芳基基团可以是未取代或取代的。
如本文所用，“芳基烷基”是指其中与碳原子(通常为末端或sp3碳原子)键合的氢原子中的一个被芳基自由基替换的无环烷基自由基。典型的芳基烷基基团包括但不限于苄基、2-苯基乙烷基-1-基、2-苯乙烯基-1-基、萘基甲基、2-萘基乙烷基-1-基、2-萘乙烯基-1-基、萘酚基苄基、2-萘酚基苯基乙烷基-1-基等。芳基烷基基团包含6至20个碳原子，例如，包括芳基烷基基团的烷烃基、烯基或炔基基团的烷基部分为1至6个碳原子，并且芳基部分为5至14个碳原子。烷芳基基团可以是未取代或取代的。
如本文所用，“环烷基”是指饱和碳环自由基，其可以是单环的或双环的。环烷基基团包括单环或双环，该单环具有3至7个碳原子，并且该双环具有7至12个碳原子。单环环烷基基团的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。环烷基基团可以是未取代或取代的。
如本文所用，“环烯基”是指不饱和碳环自由基，其可以是单环的或双环的。环烯基基团包括单环或双环，该单环具有3至6个碳原子，并且该双环具有7至12个碳原子。单环环烯基基团的实例包括1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基和1-环己-3-烯基。环烯基基团可以是未取代或取代的。
如本文所用，“杂芳烷基”是指其中与碳原子(通常为末端或sp3碳原子)键合的氢原子中的一个被杂芳基自由基替换的无环烷基自由基。典型的杂芳基烷基包括但不限于2-苯并咪唑基甲基、2-呋喃基乙基等。杂芳基烷基基团包含6至20个碳原子，例如，包括杂芳基烷基基团的烷烃基、烯基或炔基基团的烷基部分为1至6个碳原子，并且杂芳基部分为5至14个碳原子和1至3个选自N、O、P和S的杂原子。杂芳基烷基基团的杂芳基部分可以是具有3至7个环成员(2至6个碳原子)的单环或具有7至10个环成员(4至9个碳原子和1至3个选自N、O、P和S的杂原子)的双环，例如：双环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系统。
如本文所用，“杂芳基”和“杂环烷基”分别是指芳香性或非芳香性环系统，其中一个或多个环原子是杂原子，例如氮、氧和硫。杂芳基或杂环烷基自由基包含2至20个碳原子和1至3个选自N、O、P和S的杂原子。杂芳基或杂环烷基可以是具有3至7个环成员(2至6个碳原子和1至3个选自N、O、P和S的杂原子)的单环或具有7至10个环成员(4至9个碳原子和1至3个选自N、O、P和S的杂原子)的双环，例如：双环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系统。杂芳基和杂环烷基可以是未取代或取代的。
杂芳基和杂环烷基描述在以下文献中：Paquette,Leo A.；“Principles ofModern Heterocyclic Chemistry”(W.A.Benjamin,New York,1968)，尤其是章节1、3、4、6、7和9；“The Chemistry of Heterocyclic Compounds,A series of Monographs”(JohnWiley&Sons,New York,1950至今),尤其是章节13、14、16、19和28；以及J.Am.Chem.Soc.(1960)82:5566。
杂芳基基团的实例包括例如但不限于吡啶基、噻唑基、四氢噻吩基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、四唑基、苯并呋喃基、硫杂萘基(thianaphthalenyl)、吲哚基、吲哚烯基(indolenyl)、喹啉基、异喹啉基、异喹唑啉基、苯并咪唑基、异恶唑基、吡嗪基、哒嗪基、吲哚嗪基(indolizinyl)、异吲哚基、3H-吲哚基、1H-吲唑基、嘌呤基、4H-喹啉基、酞嗪基、萘啶基(naphthyridinyl)、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基(cinnolinyl)、蝶啶基、4aH-咔唑基、咔唑基、菲啶基、吖啶基、嘧啶基、菲咯啉基(phenanthrolinyl)、吩嗪基、吩噻嗪基、呋咕基(furazanyl)、吩恶嗪基(phenoxazinyl)、异苯并二氢吡喃基(isochromanyl)、苯并二氢吡喃基、咪唑烷基、咪唑啉基、吡唑啉基、吡唑啉基、苯并三唑基、苯并异恶唑基和靛红基(isatinoyl)。
杂环烷基的实例包括例如但不限于二氢吡啶基、四氢吡啶基(哌啶基)、四氢噻吩基、哌啶基、4-哌啶酮基(piperidonyl)、吡咯烷基、2-吡咯烷酮基(pyrrolidonyl)、四氢呋喃基、四氢吡喃基、双-四氢吡喃基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、八氢异喹啉基、哌嗪基、奎宁环基和吗啉基。
例如但不限于，碳键合的杂芳基和杂环烷基键合于吡啶的位置2、3、4、5或6，哒嗪的位置3、4、5或6，嘧啶的位置2、4、5或6，吡嗪的位置2、3、5或6，呋喃、四氢呋喃、噻吩、吡咯或四氢吡咯的位置2、3、4或5，恶唑、咪唑或噻唑的位置2、4或5，异恶唑、吡唑或异噻唑的位置3、4或5，氮丙啶的位置2或3，氮杂环丁烷的位置2、3或4，喹啉的位置2、3、4、5、6、7或8，或异喹啉的位置1、3、4、5、6、7或8。更加典型地，碳键合的杂环包括2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、5-吡啶基、6-吡啶基、3-哒嗪基、4-哒嗪基、5-哒嗪基、6-哒嗪基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、6-嘧啶基、2-吡嗪基、3-吡嗪基、5-吡嗪基、6-吡嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基或5-噻唑基。
例如但不限于，氮键合的杂芳基和杂环烷基键合于氮丙啶、氮杂环丁烷、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、二氢吲哚、1H-吲唑的位置1，异吲哚或异吲哚啉的位置2、吗啉的位置4，以及咔唑或β-咔啉的位置9。更加典型地，氮键合的杂环包括1-氮丙啶基(aziridyl)、1-氮杂环丁烷基(azetedyl)、1-吡咯基、1-咪唑基、1-吡唑基和1-哌啶基。
如本文所用以及如应用于以上烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、环烷基、杂芳基、杂环基等中的任何一种，“取代的”意味着一个或多个氢原子各自独立地被取代基替换。除非个别取代基的定义另有限制，否则前述化学部分，如“烷基”、“亚烷基”、“杂烷基”、“杂亚烷基”、“烯基”、“亚烯基”、“杂烯基”、“杂亚烯基”、“炔基”、“亚炔基”、“杂炔基”、“杂亚炔基”、“环烷基”、“亚环烷基”、“杂环烷基”、杂亚环烷基”、“芳基”、“亚芳基”、“杂芳基”和“杂亚芳基”基团，可以任选地被取代。典型的取代基包括但不限于-X、-R、-OH、-OR、-SH、-SR、NH2、-NHR、-N(R)2、-N+(R)3、-CX3、-CN、-OCN、-SCN、-NCO、-NCS、-NO、-NO2、-N3、-NC(＝O)H、-NC(＝O)R、-C(＝O)H、-C(＝O)R、-C(＝O)NH2、-C(＝O)N(R)2、-SO3-、-SO3H、-S(＝O)2R、-OS(＝O)2OR、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2N(R)2、-S(＝O)R、-OP(＝O)(OH)2、-OP(＝O)(OR)2、-P(＝O)(OR)2、-PO3、-PO3H2、-C(＝O)X、-C(＝S)R、-CO2H、-CO2R、-CO2-、-C(＝S)OR、-C(＝O)SR、-C(＝S)SR、-C(＝O)NH2、-C(＝O)N(R)2、-C(＝S)NH2、-C(＝S)N(R)2、-C(＝NH)NH2和-C(＝NR)N(R)2；其中每个X对于每种场合而言都独立地选自F、Cl、Br和I；并且每个R对于每种场合而言都独立地选自C1-C12烷基、C6-C20芳基、C3-C14杂环烷基或杂芳基、保护基团和前药部分。在基团被描述为“任选取代的”的任何情况下，该基团可以被独立地用于每种场合的上述取代基中的一个或多个取代。
应理解，取决于上下文，某些自由基命名惯例可以包括单自由基或双自由基。例如，在取代基需要有两个与分子的其余部分的连接点的情况下，应理解该取代基是双自由基。例如，鉴定为需要两个连接点的烷基的取代基包括双自由基，诸如-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-等。其他自由基命名惯例清楚地表明该自由基是双自由基，诸如“亚烷基”、“亚烯基”、“亚芳基”、“杂环亚烷基”等。
当取代基描述为双自由基(即，具有两个与分子的其余部分的连接点)时，应理解，除非另外指明，否则该取代基可以以任何定向构型连接。
“异构”是指具有相同分子式但其原子的键合顺序或其原子的空间排列不同的化合物。原子空间排列不同的异构体称为“立体异构体”。彼此不为镜像的立体异构体称为“非对映异构体”，而彼此为不可重叠镜像的立体异构体称为“对映异构体”或有时称为“光学异构体”。
与四个不同取代基键合的碳原子称为“手性中心”。“手性异构体”是指具有至少一个手性中心的化合物。具有多于一个手性中心的化合物可以作为单独的非对映异构体或非对映异构体的混合物存在，称为“非对映异构混合物”。当存在一个手性中心时，立体异构体可通过该手性中心的绝对构型(R或S)来表征。绝对构型是指与手性中心连接的取代基的空间排列。所考虑的与手性中心连接的取代基根据Cahn、Ingold和Prelog的顺序规则进行排序(Cahn等人,Angew.Chem.Inter.Edit.1966,5,385；errata 511；Cahn等人,Angew.Chem.1966,78,413；Cahn and Ingold,J.Chem.Soc.1951(London),612；Cahn等人,Experientia 1956,12,81；Cahn,J.Chem.Educ.1964,41,116)。含有等量的相反手性的个别对映体形式的混合物称为“外消旋混合物”。
本说明书和权利要求书中公开的化合物可包含一个或多个不对称中心，并且每种化合物可存在不同的非对映异构体和/或对映异构体。除非另有说明，否则本说明书和权利要求书中对任何化合物的描述旨在包括所有对映异构体、非对映异构体及其混合物。此外，除非另有说明，否则本说明书和权利要求书中对任何化合物的描述旨在包括单独的对映异构体以及对映异构体的任何混合物(外消旋的或其它)。当化合物的结构描述为特定对映异构体时，应理解本申请的公开内容不限于该特定对映异构体。因此，本文考虑了本公开的每个结构式的对映异构体、光学异构体和非对映异构体。在本说明书中，为了方便起见，在一些情况下，化合物的结构式代表某种异构体，但本公开包括所有异构体，诸如几何异构体、基于不对称碳的光学异构体、立体异构体、互变异构体等，应当理解并非所有异构体可具有相同水平的活性。化合物可以以不同的互变异构形式存在。除非另有说明，根据本公开的化合物旨在包括所有互变异构形式。当化合物的结构描述为特定互变异构体时，应理解本申请的公开内容不限于该特定互变异构体。
本文所述的任何式的化合物包括化合物本身，以及它们的盐和它们的溶剂化物(如果适用的话)。例如，可以在本公开的化合物上的阴离子和带正电荷的基团(例如，氨基)之间形成盐。合适的阴离子包括氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根、硫酸氢根、氨基磺酸根、硝酸根、磷酸根、柠檬酸根、甲磺酸根、三氟乙酸根、谷氨酸根、葡糖醛酸根、戊二酸根、苹果酸根、马来酸根、琥珀酸根、富马酸根、酒石酸根、甲苯磺酸根、水杨酸根、乳酸根、萘磺酸根和乙酸根(例如，三氟乙酸根)。术语“药学上可接受的阴离子”是指适于形成药学上可接受的盐的阴离子。同样地，还可以在阳离子和本公开的化合物上的带负电荷的基团(例如，羧酸根)之间形成盐。合适的阳离子包括钠离子、钾离子、镁离子、钙离子和铵阳离子(诸如四甲基铵离子)。一些合适的取代的铵离子的实例是衍生自以下的那些：乙胺、二乙胺、二环己胺、三乙胺、丁胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪、苄胺、苯基苄胺、胆碱、葡甲胺和氨丁三醇，以及氨基酸，诸如赖氨酸和精氨酸。本公开的化合物还包括含有季氮原子的那些盐。
合适的无机阴离子的实例包括但不限于衍生自以下无机酸的那些：盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、亚硫酸、硝酸、亚硝酸、磷酸和亚磷酸。合适的有机阴离子的实例，包括但不限于，衍生自以下有机酸的那些：2-乙酰氧基苯甲酸、乙酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯甲酸、樟脑磺酸、肉桂酸、柠檬酸、乙二胺四乙酸、乙二磺酸、乙磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、羟基马来酸、羟基萘羧酸、羟乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、马来酸、苹果酸、甲磺酸、粘酸、油酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、泛酸、苯乙酸、苯磺酸、丙酸、丙酮酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、酒石酸、甲苯磺酸和戊酸。合适的聚合有机阴离子的实例包括但不限于衍生自以下聚合酸的那些：单宁酸、羧甲基纤维素。
另外，本公开的化合物，例如化合物的盐，可以以水合或非水合(无水)形式或作为与其它溶剂分子的溶剂化物存在。水合物的非限制性实例包括一水合物、二水合物等。溶剂化物的非限制性实例包括乙醇溶剂化物、丙酮溶剂化物等。“溶剂化物”是指含有化学计量或非化学计量量的溶剂的溶剂加成形式。一些化合物倾向于在结晶固态中捕获固定摩尔比的溶剂分子，从而形成溶剂化物。如果溶剂是水，则形成的溶剂化物为水合物；而如果溶剂是醇，则形成的溶剂化物为醇化物。水合物通过一个或多个水分子与一个水分子保持其分子状态为H2O的一个物质分子的组合而形成。水合物是指例如一水合物、二水合物、三水合物等。
此外，由本文公开的式表示的化合物或其盐可存在晶体多晶型。应注意，任何晶型、晶型混合物或其酸酐或水合物都包括在本公开的范围内。
如本文所用，术语“鹅膏毒素”是指由鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)蘑菇产生的鹅膏毒素肽家族的成员，或其变体或衍生物，如能够抑制RNA聚合酶II活性的变体或衍生物。合适的鹅膏毒素及其衍生物在下文中进一步进行描述。如本文所描述，鹅膏毒素可以例如通过接头部分(L)与抗体或其抗原结合片段缀合，从而形成缀合物(即，ADC)。鹅膏毒素缀合的示例性方法以及可用于此类过程的接头在下文进行描述并且是本领域已知的。
B.干细胞基因疗法的方法
本公开内容的方法包括将遗传修饰干细胞群体施用到患有由缺陷型基因(例如，突变)引起的病况的患者。通常，本方法涉及干细胞基因疗法，其中出于治疗目的而对活细胞(例如，干细胞)的基因组进行修饰。具体地，可以通过纠正缺陷型基因来实现治疗效果，如本文所描述的。作为实例，可以从患有由缺陷型基因引起的病症的患者(例如，具有缺陷型HBB基因的镰状细胞患者)中提取造血干细胞(HSC)，并且通过针对CD34表达细胞(CD34+)的选择来将其纯化。可以使用本领域已知的方法来离体处理分离的细胞，并且可以根据需要对其基因组进行修饰(例如，编辑)以将缺陷型靶基因纠正为功能性基因。随后将此类修饰干细胞施用回该患者。移植的干细胞扎根于患者的骨髓，进行复制并产生成熟的细胞，并且产生功能正常的蛋白质，从而解决问题。
从来源分离干细胞和进一步离体处理细胞(例如，扩增和基因组修饰)的方法是本领域众所周知并可获得的。在一些实施方案中，干细胞对于接受它们施用的哺乳动物是同种异体的。在一些实施方案中，干细胞对于接受它们施用的哺乳动物是自体的。
在一些实施方案中，从骨髓中分离出干细胞。在一些实施方案中，从外周血液(例如，动员的外周血液)中分离出干细胞。在一些实施方案中，从已施用了G-CSF的受试者中分离出动员的外周血液。在一些实施方案中，从已施用了除G-CSF之外的动员剂(例如，
Figure BDA0003423520310000441
(AMD3100))的受试者中分离出动员的外周血液。在一些实施方案中，从脐带血液中分离出干细胞。
在一些实施方案中，分离的干细胞包含CD34+细胞或由其组成。在一些实施方案中，该细胞基本上不含CD34-细胞。在一些实施方案中，该细胞包含CD34+/CD90+干细胞或由其组成。在一些实施方案中，该细胞包含CD34+/CD90-细胞或由其组成。在一些实施方案中，该细胞是包含一种或多种上面描述的或本文描述的细胞类型的群体。
在一些实施方案中，任何一种或多种已知的遗传修饰干细胞可以用于本方法，包括例如StrimvelisTM(自体CD34+富集的细胞级分，其含有用编码人ADA cDNA序列的逆转录病毒载体转导的CD34+细胞)。
本文描述的遗传修饰HSC可以用于遗传修饰干细胞疗法或干细胞基因疗法，其是指对细胞进行体外基因编辑(例如，通过CRISPR/Cas系统或通过病毒转导)以形成遗传修饰细胞，然后将该遗传修饰细胞引入到患者中。因此，将本文描述的遗传修饰干细胞用于基因疗法的方法，因为它们含有经改变或纠正的基因和/或含有外源性基因。具体地，本文描述的遗传修饰干细胞可用于基因疗法的方法，因为来自修饰干细胞的所有或大部分后代将含有经改变或纠正的基因。因此，经修饰的造血细胞可以用于治疗患有包括但不限于遗传性病症、癌症和某些病毒感染的病况的哺乳动物受试者，如人受试者。
如本文所描述，将遗传修饰干细胞施用(即，移植)到已使用如本文所描述的ADC和方法进行调理以确保或改善植入的患者。
1.干细胞基因组修饰方法
用于编辑细胞(例如，干细胞)基因组的各种方法是本领域已知的，例如，如本文所描述的。要操作的干细胞包括个别分离的干细胞或来自由该分离的干细胞建立的干细胞系的干细胞，其包含一个或多个核酸突变。本领域已知的任何合适的基因操作方法以及本文描述的那些方法都可以用于编辑或改变干细胞的基因组。在特定的实施方案中，干细胞基因组的遗传修饰可以纠正干细胞中的核酸突变。在一些实施方案中，干细胞基因组的遗传修饰可以将外源性基因引入到干细胞中。在某些实施方案中，将核酸操作试剂(例如，基因编辑系统的组分)引入到干细胞中。在一些实施方案中，可以经由病毒载体(例如，逆转录病毒、腺病毒、AAV、辅助病毒依赖型腺病毒系统、杂交腺病毒系统、单纯疱疹病毒、痘病毒、慢病毒和埃巴病毒)和非病毒系统(如物理系统(裸DNA、DNA轰击、电穿孔、流体动力学、超声和磁转染)和化学系统(阳离子脂质、不同的阳离子聚合物以及脂质聚合物))来实现基因材料(例如，要被表达的外源性基因)和/或核酸操作试剂(例如，基因编辑系统的组分)的递送。在一些实施方案中，病毒载体是慢病毒。核酸操作试剂随后纠正干细胞中的核酸突变以形成被操作的干细胞。此类试剂通过对靶细胞(例如，干细胞)中的一个或多个靶多核苷酸序列(靶序列)进行有效且精确的修饰而起作用，并且通常包含定点修饰多肽，如核酸引导性核酸内切酶(例如，RNA引导性核酸内切酶(如Cas9)或DNA引导性核酸内切酶)，其识别靶细胞中的核酸序列。
用于本公开组合物和方法的定点修饰多肽是位点特异的，因为多肽本身或相关分子识别并且被靶向到特定核酸序列或一组相似序列(即，一个或多个靶序列)。在一些实施方案中，定点修饰多肽(或其相关分子)识别序列相似的序列，其包含可以在一个或多个位置处简并的保守碱基或基序。
在特定实施方案中，定点修饰多肽在其靶序列外部的一个或多个特定位置(即，一个或多个修饰位点)处修饰多核苷酸。由特定的定点修饰多肽修饰的一个或多个修饰位点通常也对特定序列或一组相似序列具有特异性。在这些实施方案的一些中，定点修饰多肽修饰序列相似的序列，其包含可以在一个或多个位置处简并的保守碱基或基序。在其他实施方案中，定点修饰多肽修饰位于相对于一个或多个靶序列的特定位置内的序列。例如，定点修饰多肽可以修饰位于靶序列上游或下游特定数目的核酸内的序列。
如本文所用，关于定点修饰多肽，术语“修饰”或“改变”意指修饰位点中至少一个核苷酸的任何插入、缺失、取代或化学修饰，或替代地，与靶位点相邻的基因的表达发生变化。修饰位点中至少一个核苷酸的取代可能是募集碱基编辑域的结果，如胞苷脱氨酶或腺嘌呤脱氨酶域(参见，例如，Eid等人，(2018)Biochem J 475(11):1955-1964，其以其整体并入本文).
与靶位点相邻的基因的表达发生变化可能起因于将转录激活域或转录阻遏域募集到基因的启动子区域，或起因于募集表观遗传修饰域，其共价修饰DNA或组蛋白，以改变组蛋白结构和/或染色体结构且不会改变DNA序列，从而导致相邻基因的基因表达发生变化。术语“修饰”或“改变”还涵盖将可检测标记物募集到靶位点，该可检测标记物可以与允许检测特定核酸序列(例如，疾病相关序列)的定点修饰多肽或相关分子(例如，gRNA)缀合。
在一些实施方案中，定点修饰多肽是核酸酶或其变体以及包含该核酸酶或其变体的制剂。如本文所用，“核酸酶”是指切割多核苷酸链骨架中的磷酸二酯键的酶。用于本公开组合物和方法的合适核酸酶可以具有核酸内切酶和/或核酸外切酶活性。核酸外切酶一次从多核苷酸链的端部切割一个核苷酸。核酸内切酶通过切割多核苷酸链内的磷酸二酯键而不是多核苷酸链两端的磷酸二酯键来切割多核苷酸链。核酸酶可以切割RNA多核苷酸链(即，核糖核酸酶)和/或DNA多核苷酸链(即，脱氧核糖核酸酶)。
核酸酶切割多核苷酸链，从而产生切割位点。如本文所用，术语“切割”是指多核苷酸链骨架内的磷酸二酯键的水解。本公开内容的核酸酶的切割可以是单链或双链的。在一些实施方案中，DNA的双链切割是经由用两种核酸酶切割来实现的，其中每种核酸酶切割DNA的单链。核酸酶的切割可以导致平末端或交错末端。
适合于本公开组合物和方法的核酸酶的非限制性实例包括大范围核酸酶(meganuclease)，如归巢核酸内切酶；限制性核酸内切酶，如IIS型核酸内切酶(例如，FokI))；锌指核酸酶；转录激活子样效应子核酸酶(TALEN)和核酸引导性核酸酶(例如，RNA引导性核酸内切酶、DNA引导性核酸内切酶或DNA/RNA引导性核酸内切酶)。
如本文所用，“大范围核酸酶”是指在长度大于12个碱基对的靶序列处结合DNA的核酸内切酶。大范围核酸酶以异二聚体的形式与双链DNA结合。用于本公开组合物和方法的合适大范围核酸酶包括归巢核酸内切酶，如LAGLIDADG(SEQ ID NO:321)家族的那些，该家族包含此种氨基酸基序或其变体。
如本文所用，“锌指核酸酶”或“ZFN”是指包含与来自核酸外切酶或核酸内切酶(如限制性核酸内切酶或大范围核酸酶)的核酸酶域融合的锌指DNA结合域的嵌合蛋白。锌指DNA结合域通过用于稳定该独特结构的锌离子结合。
如本文所用，“转录激活子样效应子核酸酶”或“TALEN”是指包含DNA结合域的嵌合蛋白，该DNA结合域包含多个与来自核酸外切酶或核酸内切酶(如限制性核酸内切酶或大范围核酸酶)的核酸酶域融合的TAL域重复序列。TAL域重复序列可以衍生自变形菌门(Proteobacteria)黄单胞菌属(Xanthomonas)的蛋白质TALE家族。TAL域重复序列是33-34个氨基酸序列，其第12和第13个氨基酸具有高变性，被称为重复可变双残基(RVD)。RVD赋予靶序列结合的特异性。可以通过合理或实验手段对TAL域重复序列进行工程化改造，以产生具有特定的靶序列特异性的变体TALEN(参见，例如，Boch等人，(2009)Science 326(5959):1509-1512以及Moscou和Bogdanove(2009)Science 326(5959):1501，它们各自通过引用以其整体并入本文)。TALEN的DNA切割需要两个侧接有非特异性间隔区的DNA靶序列，其中每个DNA靶序列都通过TALEN单体结合。在一些实施方案中，TALEN包含紧凑型TALEN，其是指包含DNA结合域的核酸内切酶，其中一个或多个TAL域重复序列以任何方位与归巢核酸内切酶的任何部分(例如，I-TevI、MmeI、EndA、End1、I-BasI、I-TevII、I-TevIII、I-TwoI、MspI、MvaI、NucA和NucM)融合。紧凑型TALEN是有利的，因为它们不需要DNA加工活动的二聚化，因此只需要单一靶位点。
如本文所用，“核酸引导性核酸酶”是指基于与核酸酶相关的引导核酸(即，引导RNA或gRNA、引导DNA或gDNA、或引导DNA/RNA杂交体)与靶序列之间的互补性(全部或部分)而定向到特定靶序列的核酸酶。引导RNA与靶序列之间的结合用于将核酸酶募集到靶序列附近。适合于本公开组合物和方法的核酸引导性核酸酶的非限制性实例包括来自原核生物体(例如，细菌、古生菌)或其变体的天然存在的成簇规律间隔短回文重复序列(RegularlyInterspaced Short Palindromic Repeats，CRISPR)相关(Cas)多肽。存在于原核生物体内的CRISPR序列是衍生自入侵病毒的多核苷酸片段的序列，并且用于在随后的感染期间识别相似病毒并经由CRISPR相关(Cas)多肽切割病毒多核苷酸，该多肽充当RNA引导性核酸酶以切割病毒多核苷酸。如本文所用，“CRISPR相关多肽”或“Cas多肽”是指天然存在的多肽，其与天然存在的CRISPR系统内的CRISPR序列接近。某些Cas多肽充当RNA引导性核酸酶。
存在至少两类天然存在的CRISPR系统，1类和2类。一般而言，考虑到2类CRISPR系统包含具有核酸引导性核酸酶活性的单一多肽，而1类CRISPR系统需要蛋白质复合物以发挥活性，因此本公开组合物和方法的核酸引导性核酸酶为2类Cas多肽或其变体。存在至少三种已知类型的2类CRISPR系统，II型、V型和VI型，其中存在多种亚型(亚型II-A、II-B、II-C、VA、VB、VC、VI-A、VI-B和VI-C，以及其他未定义或假定的亚型)。一般而言，II型和V-B型系统除需要crRNA之外还需要tracrRNA才能发挥活性。相比之下，V-A型和VI型仅需要crRNA就能发挥活性。所有已知的II型和V型RNA引导性核酸酶靶向双链DNA，而所有已知的VI型RNA引导性核酸酶靶向单链RNA。II型CRISPR系统的RNA引导性核酸酶在本文和文献中被称为Cas9。在一些实施方案中，本公开组合物和方法的核酸引导性核酸酶是II型Cas9蛋白或其变体。充当RNA引导性核酸酶的V型Cas多肽不需要tracrRNA来靶向和切割靶序列。在本文和文献中，VA型CRISPR系统的RNA引导性核酸酶被称为Cpf1；VB型CRISPR系统的RNA引导性核酸酶被称为C2C1；VC型CRISPR系统的RNA引导性核酸酶被称为Cas12C或C2C3；VIA型CRISPR系统的RNA引导性核酸酶被称为C2C2或Cas13A1；VIB型CRISPR系统的RNA引导性核酸酶被称为Cas13B；以及VIC型CRISPR系统的RNA引导性核酸酶被称为Cas13A2。在一些实施方案中，本公开组合物和方法的核酸引导性核酸酶是VA型Cpf1蛋白或其变体。充当核酸引导性核酸酶的天然存在的Cas多肽及其变体是本领域已知的，并且包括但不限于化脓链球菌(Streptococcus pyogenes)Cas9、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)Cas9、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)Cas9、新凶手弗朗西丝菌(Francisella novicida)Cpf1，或描述在以下各项中的那些：Shmakov等人，(2017)Nat Rev Microbiol 15(3):169-182；Makarova等人，(2015)Nat Rev Microbiol 13(11):722-736；以及美国专利号9790490，它们各自以其整体并入本文。2类V型CRISPR核酸酶包括Cas12和Cas12的任何亚型，如Cas12a、Cas12b、Cas12c、Cas12d、Cas12e、Cas12f、Cas12g、Cas12h和Cas12i。可以采用包括Cas13的2类VI型CRISPR核酸酶来切割RNA靶序列。
本公开组合物和方法的核酸引导性核酸酶可以是天然存在的核酸引导性核酸酶(例如，化脓链球菌Cas9)或其变体。变体核酸引导性核酸酶可以是工程化的或天然存在的变体，其含有氨基酸的取代、缺失或添加，该取代、缺失或添加例如改变一个或多个核酸酶域的活性，将核酸引导性核酸酶与赋予修饰特性的异源域(例如，转录激活域、表观遗传修饰域、可检测标记物)融合，修饰核酸酶的稳定性，或修饰核酸酶的特异性。
在一些实施方案中，核酸引导性核酸酶包括一个或多个突变，以提高对靶位点的特异性和/或细胞内微环境中的稳定性。例如，当蛋白质是Cas9(例如，SpCas9)或经修饰的Cas9时，使Rec2域的N175至R307(包括端点)中的任何或所有残基缺失可能是有益的。可以发现该核酸酶的更小或更低分子质量形式是更有效的。在一些实施方案中，相对于该核酸酶的天然存在形式，该该核酸酶包含至少一个取代。例如，当蛋白质是Cas9或经修饰的Cas9时，使C80或C574(或其同源物，在具有插入缺失的经修饰的蛋白质中)突变可能是有益的。在Cas9中，期望的取代可以包括C80A、C80L、C80I、C80V、C80K、C574E、C574D、C574N和C574Q(任和组合)中的任何一个。可以包括取代以减少核酸酶的细胞内蛋白质结合和/或增加靶位点特异性。另外或替代地，可以包括取代以减少组合物的脱靶毒性。
核酸引导性核酸酶通过其与引导核酸(例如，引导RNA(gRNA)、引导DNA(gDNA))的关联而定向到特定的靶序列。核酸引导性核酸酶经由非共价相互作用与引导核酸结合，从而形成复合物。多核苷酸靶向核酸通过包含与靶序列的序列互补的核苷酸序列为复合物提供靶特异性。复合物或者与其融合或以其他方式缀合的域或标记的核酸引导性核酸酶提供位点特异性活性。换句话说，核酸引导性核酸酶由于其与多核苷酸靶向引导核酸的蛋白质结合区段的关联而被引导到靶多核苷酸序列(例如，染色体核酸中的靶序列；染色体外核酸中的靶序列，例如，附加体核酸、微环；线粒体核酸中的靶序列；叶绿体核酸中的靶序列；质粒中的靶序列)。
因此，引导核酸包含两个区段，“多核苷酸靶向区段”和“多肽结合区段”。所谓“区段”是指分子的区段/部分/区域(例如，RNA中的连续核苷酸段)。区段还可以是指复合物的区域/部分，使得区段可以包含多于一个分子的区域。例如，在一些情况下，多核苷酸靶向核酸的多肽结合区段(如下所描述)包含仅一个核酸分子，并且多肽结合区段因此包含该核酸分子的区域。在其他情况下，DNA靶向核酸的多肽结合区段(如下所描述)包含两个单独的沿着互补性区域杂交的分子。
多核苷酸靶向区段(或“多核苷酸靶向序列”或“引导序列”)包含与靶序列内的特定序列(例如，靶DNA序列的互补链)互补(完全或部分)的核苷酸序列。多肽结合区段(或“多肽结合序列”)与核酸引导性核酸酶相互作用。一般而言，核酸引导性核酸酶对靶DNA的位点特异性切割或修饰发生在由以下二者确定的位置处：(i)核酸的多核苷酸靶向序列与靶DNA之间的碱基配对互补性；以及(ii)靶DNA中的短基序(称为前间区序列邻近基序(protospacer adjacent motif,PAM))。
前间区序列邻近基序可以具有不同的长度，并且可以与靶序列相距可变距离，但PAM通常与靶序列相距约1至约10个核苷酸，包括与靶序列相距约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9或约10个核苷酸。PAM可以是靶序列的5'或3'。通常，PAM是约3-4个核苷酸的共有序列，但在特定的实施方案中，其长度可以为2、3、4、5、6、7、8、9或更多个核苷酸。用于鉴定给定RNA引导性核酸酶的优选PAM序列或共有序列的方法是本领域已知的，并且包括但不限于由Karvelis等人，(2015)Genome Biol16:253描述的PAM耗尽测定；或公开在Pattanayak等人，(2013)Nat Biotechnol 31(9):839-43中的测定，这些文献各自通过引用以其整体并入。
多核苷酸靶向序列(即，引导序列)是与感兴趣的靶序列直接杂交的核苷酸序列。引导序列工程化改造成与感兴趣的靶序列完全或部分互补。在各个实施方案中，引导序列可以包含约8个核苷酸至约30个核苷酸或更多个。例如，引导序列的长度可以为约8、约9、约10、约11、约12、约13、约14、约15、约16、约17、约18、约19、约20、约21、约22、约23、约24、约25、约26、约27、约28、约29、约30或更多个核苷酸。在一些实施方案中，引导序列的长度为约10至约26个核苷酸，或长度为约12至约30个核苷酸。在特定的实施方案中，引导序列的长度为约30个核苷酸。在一些实施方案中，当使用合适的比对算法进行最佳比对时，引导序列与其相应靶序列之间的互补性程度为约或多于约50％、约60％、约70％、约75％、约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％，约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更大。在特定的实施方案中，引导序列没有二级结构，这可以使用本领域已知的任何合适的多核苷酸折叠算法来预测，这些算法包括但不限于mFold(参见，例如，Zuker和Stiegler(1981)Nucleic AcidsRes.9:133-148)和RNAfold(参见，例如，Gruber等人，(2008)Cell106(1):23-24)。
在一些实施方案中，引导核酸包含两种不同的核酸分子(“激活子核酸”和“靶向物核酸”，参见下文)，并且在本文中被称为“双分子引导核酸”或“两分子引导核酸”。在其他实施方案中，主题引导核酸是单个核酸分子(单个多核苷酸)，并且在本文中被称为“单分子引导核酸”、“单引导核酸”或“sgNA”。术语“引导核酸”或“gNA”是包含性的，指双分子引导核酸和单分子引导核酸(即，sgNA)二者。在其中引导核酸是RNA的那些实施方案中，gRNA可以是双分子引导RNA或单引导RNA。同样地，在其中引导核酸是DNA的那些实施方案中，gRNA可以是双分子引导DNA或单引导DNA。
示例性双分子引导核酸包含crRNA样(“CRISPR RNA”或“靶向物RNA”或“crRNA”或“crRNA重复序列”)分子和相应的tracrRNA样(“反式作用CRISPR RNA”或“激活子RNA”或“tracrRNA”)分子。crRNA样分子(靶向物RNA)包含引导RNA的多核苷酸靶向区段(单链)以及核苷酸段(“双链体形成区段”)二者，该段形成引导RNA的多肽结合区段的dsRNA双链体的一半，在本文中也被称为CRISPR重复序列。
术语“激活子核酸”或“激活子NA”在本文中用于指双分子引导核酸的tracrRNA样分子。术语“靶向物核酸”或“靶向物NA”在本文中用于指双分子引导核酸的crRNA样分子。术语“双链体形成区段”在本文中用于指激活子NA或靶向物NA的核苷酸段，其通过与相应激活子NA或靶向物NA分子的核苷酸段杂交而有助于形成dsRNA双链体。换句话说，激活子NA包含与相应靶向物NA的双链体形成区段互补的双链体形成区段。因此，激活子NA包含双链体形成区段，而靶向物NA包含引导核酸的双链体形成区段和DNA靶向区段二者。因此，主题双分子引导核酸可以由任何相应的激活子NA和靶向物NA对构成。
该激活子NA包含CRISPR重复序列，其包含核苷酸序列，该核苷酸序列包含具有足够的互补性以与激活子NA杂交的区域(引导核酸的多肽结合区段的另一部分)。在各个实施方案中，CRISPR重复序列可以包含约8个核苷酸至约30个核苷酸或更多个。例如，CRISPR重复序列的长度可以为约8、约9、约10、约11、约12、约13、约14、约15、约16、约17、约18、约19、约20、约21、约22、约23、约24、约25、约26、约27、约28、约29、约30或更多个核苷酸。在一些实施方案中，当使用合适的比对算法进行最佳比对时，CRISPR重复序列与其相应tracr序列之间的互补性程度为约或多于约50％、约60％、约70％、约75％、约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％，约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更大。
相应的tracrRNA样分子(即，激活子NA)包含核苷酸段(形成双链体的区段)，其形成引导核酸的多肽结合区段的双链体的另一部分。换句话说，crRNA样分子(即，CRISPR重复序列)的核苷酸段与tracrRNA样分子(即反重复序列)的核苷酸段互补并与其杂交，以形成引导核酸的多肽结合域的双链体。crRNA样分子额外提供单链DNA靶向靶向区段。因此，crRNA样和tracrRNA样分子(以相应的对的形式)杂交以形成引导核酸。给定crRNA或tracrRNA分子的精确序列是CRISPR系统和其中存在RNA分子的物种的特征。主题双分子引导RNA可以包含任何相应的crRNA和tracrRNA对。
反式激活样CRISPR RNA或tracrRNA样分子(在本文中也被称为“激活子NA”)包含核苷酸序列，该核苷酸序列包含具有足够的互补性以与crRNA的CRISPR重复序列杂交的区域，其在本文中被称为反重复区。在一些实施方案中，tracrRNA样分子进一步包含具有二级结构(例如，茎环)的区域，或在与其相应crRNA杂交后形成二级结构。在特定的实施方案中，tracrRNA样分子的与CRISPR重复序列完全或部分互补的区域位于该分子的5'端处，并且tracrRNA样分子的3'端包含二级结构。该二级结构区域通常包含若干发夹结构，其包括与反重复序列相邻存在的连系发夹。连系发夹通常在发夹茎的基部具有保守核苷酸序列，其中UNANC基序存在于tracrRNA的许多连系发夹中。tracrRNA的3'端处通常存在末端发夹，其结构和数量可能不同，但通常包含富含GC的Rho独立转录终止子发夹，随后是3'端处的U串。参见，例如，Briner等人，(2014)Molecular Cell 56:333-339、Briner和Barrangou(2016)Cold Spring Harb Protoc；doi:10.1101/pdb.top090902、以及美国公布号2017/0275648，它们各自通过引用以其整体并入本文。
在各个实施方案中，tracrRNA样分子的与CRISPR重复序列完全或部分互补的反重复区包含约8个核苷酸至约30个核苷酸或更多个。例如，tracrRNA样反重复序列与CRISPR重复序列之间的碱基配对区域的长度可以为约8、约9、约10、约11、约12、约13、约14、约15、约16、约17、约18、约19、约20、约21、约22、约23、约24、约25、约26、约27、约28、约29、约30或更多个核苷酸。在一些实施方案中，当使用合适的比对算法进行最佳比对时，CRISPR重复序列与其相应tracrRNA样反重复序列之间的互补性程度为约或多于约50％、约60％、约70％、约75％、约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％，约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更大。
在各个实施方案中，整个tracrRNA样分子可以包含约60个核苷酸至多于约140个核苷酸。例如，tracrRNA样分子的长度可以为约60、约65、约70、约75、约80、约85、约90、约95、约100、约105、约110、约115、约120、约125、约130、约135、约140或更多个核苷酸。在特定的实施方案中，tracrRNA样分子的长度为约80至约100个核苷酸，包括长度为约80、约81、约82、约83、约84、约85、约86、约87、约88、约89、约90、约91、约92、约93、约94、约95、约96、约97、约98、约99和约100个核苷酸。
主题单分子引导核酸(即，sgNA)包含两个核苷酸段(靶向物NA和激活子NA)，该两个核苷酸段彼此互补，通过间插核苷酸(“接头”或“接头核苷酸”)共价连接，并且杂交以形成蛋白质结合区段的双链化核酸双链体，从而产生茎环结构。靶向物NA和激活子NA可以经由靶向物NA的3'端和激活子NA的5'端共价连接。替代地，靶向物NA和激活子NA可以经由靶向物NA的5'端和激活子NA的3'端共价连接。
单分子DNA靶向核酸的接头的长度可以为约3个核苷酸至约100个核苷酸。例如，接头的长度可以为约3个核苷酸(nt)至约90nt、约3nt至约80nt、约3nt至约70nt、约3nt至约60nt、约3nt至约50nt、约3nt至约40nt、约3nt至约30nt、约3nt至约20nt、或约3nt至约10nt，包括但不限于约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9、约10、约11、约12、约13、约14、约15、约16、约17、约18、约19、约20或更多个核苷酸。在一些实施方案中，单分子DNA靶向核酸的接头是4nt。
示例性单分子DNA靶向核酸包含两个互补核苷酸段，以及与特定靶序列杂交的引导序列，该两个互补核苷酸段杂交以形成双链化双链体。
crRNA(以及在一些实施方案中tracrRNA)的适当的天然存在的关联对对于大多数功能为核酸引导核酸酶的Cas蛋白是已知的，它们已经得到发现或者可以针对具有核酸引导性核酸酶活性的特定天然存在的Cas蛋白测定，通过对Cas核酸引导性核酸酶蛋白的侧翼序列进行测序和分析以鉴定tracrRNA序列以及因此通过搜索已知的反重复编码序列或其变体鉴定tracrRNA序列。tracrRNA的反重复区包含ds蛋白结合双链体的一半。包含ds蛋白结合双链体的一半的互补重复序列称为CRISPR重复序列。已知的CRISPR核酸引导性核酸酶所利用的CRISPR重复序列和反重复序列是本领域已知的，并且可以在例如万维网上的CRISPR数据库crispr.i2bc.paris-saclay.fr/crispr/中找到。
单引导核酸或双引导核酸可以化学合成或经由体外转录合成。用于确定核酸引导性核酸酶与引导核酸之间的序列特异性结合的测定是本领域已知的，并且包括但不限于表达的核酸引导性核酸酶与引导核酸之间的体外结合测定，所述引导核酸可以用可检测标记物(例如，生物素)加标签并且用于下拉检测测定，其中经由可检测标记物(例如，用链霉亲合素珠)来捕获核蛋白复合物。具有与引导核酸不相关的序列或结构的对照指导核酸可以用作核酸引导性核酸酶与核酸的非特异性结合的阴性对照。
在某些实施方案中，本公开组合物和方法的定点修饰多肽包含功能为切口酶的核酸酶变体，其中核酸酶与野生型核酸酶相比包含突变，其导致核酸酶仅能够切割双链核酸分子的单链，或一起缺少核酸酶活性(即，核酸酶死亡)。
功能为切口酶的核酸酶(如核酸引导性核酸酶)仅包含单一功能性核酸酶域。在这些实施方案的一些中，额外的核酸酶域已被突变，使得该特定域的核酸酶活性减少或消除。
在其他实施方案中，核酸酶(例如，RNA引导性核酸酶)完全缺少核酸酶活性，并且在本文中称为核酸酶死亡。在这些实施方案的一些中，核酸酶内的所有核酸酶域都已被突变，使得多肽的所有核酸酶活性都已被消除。本领域已知的任何方法可以用于将突变引入到定点核酸酶的一个或多个核酸酶域，包括以下各项中所阐述的那些：美国公布号2014/0068797和美国专利号9,790,490，它们各自通过引用以其整体并入。
核酸酶域内的减少或消除核酸酶活性的任何突变都可以用于生成具有切口酶活性的核酸引导性核酸酶或核酸酶死亡的核酸引导性核酸酶。此类突变是本领域已知的，并且包括但不限于化脓链球菌Cas9的RuvC域内的D10A突变或HNH域内的H840A突变，或当另一核酸引导性核酸酶与化脓链球菌Cas9进行比对以获得最大同源性时，该另一核酸引导性核酸酶内的一个或多个相似位置处的突变。化脓链球菌Cas9的核酸酶域内的可以突变以生成切口酶或核酸酶死亡蛋白的其他位置包括G12、G17、E762、N854、N863、H982、H983和D986。核酸引导性核酸酶的核酸酶域内的可以导致切口酶或核酸酶死亡蛋白的其他突变包括新凶手弗朗西丝菌Cpf1蛋白的D917A、E1006A、E1028A、D1227A、D1255A、N1257A、D917A、E1006A、E1028A、D1227A、D1255A和N1257A，或当另一核酸引导性核酸酶与新凶手弗朗西丝菌Cpf1蛋白进行比对以获得最大同源性时，该另一核酸引导性核酸酶内的一个或多个相似位置处的突变(美国专利号9,790,490，其通过引用以其整体并入)。
包含核酸酶死亡域的定点修饰多肽可以进一步包含能够修饰多核苷酸的域。可以与核酸酶死亡域融合的修饰域的非限制性实例包括但不限于转录激活或阻遏域、碱基编辑域和表观遗传修饰域。在其他实施方案中，包含核酸酶死亡域的定点修饰多肽进一步包含可以有助于检测靶序列的存在的可检测标记物。
可以与核酸酶死亡域融合的表观遗传修饰域用于共价修饰DNA或组蛋白，以改变组蛋白结构和/或染色体结构且不会改变DNA序列本身，从而导致基因表达发生变化(上调或下调)。可以由定点修饰多肽诱导的表观遗传修饰的非限制性实例包括组蛋白残基的以下改变及其逆反应：Sumo化(sumoylation)、精氨酸或赖氨酸残基的甲基化、赖氨酸残基的乙酰化或泛素化、丝氨酸和/或苏氨酸残基的磷酸化；以及DNA的以下改变及其逆反应：胞嘧啶残基的甲基化或羟甲基化。因此，表观遗传修饰域的非限制性实例包括组蛋白乙酰转移酶域、组蛋白脱乙酰化域、组蛋白甲基转移酶域、组蛋白脱甲基酶域、DNA甲基转移酶域和DNA脱甲基酶域。
在一些实施方案中，定点多肽包含转录激活域，其通过与转录控制元件和/或转录调控蛋白(如转录因子或RNA聚合酶)的相互作用来激活至少一个相邻基因的转录。合适的转录激活域是本领域已知的，并且包括但不限于VP16激活域。
在其他实施方案中，定点多肽包含转录阻遏物域，其也可以与转录控制元件和/或转录调控蛋白(如转录因子或RNA聚合酶)相互作用，以减少或终止至少一个相邻基因的转录。合适的转录阻遏域是本领域已知的，并且包括但不限于IκB和KRAB域。
在其它实施方案中，包含核酸酶死亡域的定点修饰多肽进一步包含可以有助于检测靶序列的存在的可检测标记物，该靶序列可能是疾病相关序列。可检测标记物是可以可视化或以其他方式观察到的分子。可检测标记物可以与核酸引导性核酸酶融合为融合蛋白(例如，荧光蛋白)，或可以是与核酸酶多肽缀合的小分子，其可以通过目视或其它手段进行检测。可以与本公开核酸引导性核酸酶融合为融合蛋白的可检测标记物包括任何可检测蛋白域，其包括但不限于可以用特异性抗体检测的荧光蛋白或蛋白域。荧光蛋白的非限制性实例包括绿色荧光蛋白(例如，GFP、EGFP、ZsGreen1)和黄色荧光蛋白(例如，YFP、EYFP、ZsYellow1)。小分子可检测标记物的非限制性实例包括放射性标记物，如3H和35S。
可以将核酸引导性核酸酶作为递送系统的一部分，以包含与其引导核酸结合的核酸引导性核酸酶的核蛋白复合物的形式递送到细胞中。或者，核酸引导性核酸酶和引导核酸分开提供。在某些实施方案中，可以将引导RNA以RNA分子的形式引入到靶细胞中。引导RNA可以在体外转录或化学合成。在其他实施方案中，将编码引导RNA的核苷酸序列引入到细胞中。在这些实施方案的一些中，编码引导RNA的核苷酸序列与启动子(例如，RNA聚合酶III启动子)可操作地连接，该启动子可以是天然启动子或是与引导RNA编码核苷酸序列异源的。
在某些实施方案中，定点多肽可以包含额外的氨基酸序列，如至少一个核定位序列(NLS)。核定位序列增强定点多肽到细胞核中的转运。被输入到细胞核中的蛋白质与核孔复合物内的一种或多种蛋白质结合，如输入蛋白/核蛋白，其通常与赖氨酸和精氨酸残基结合最好。最佳表征的核定位通路涉及与输入蛋白-α蛋白结合的短肽序列。这些核定位序列通常包含碱性氨基酸段，并且考虑到输入蛋白-α上存在两个此类结合位点，两个由至少10个氨基酸分开的基本序列可以构成二分NLS。第二最具特征的核输入通路涉及与输入蛋白-β1蛋白结合的蛋白质，如HIV-TAT和HIV-REV蛋白，它们分别使用序列RKKRRQRRR(SEQ IDNO:322)和RQARRNRRRWR(SEQ ID NO:323)与输入蛋白-β1结合。其他核定位序列是本领域已知的(参见，例如，Lange等人，J.Biol.Chem.(2007)282:5101-5105)。NLS可以是定点多肽的天然存在的NLS或异源NLS。如本文所用，关于序列的“异源”是源于外来物种的序列，或者，如果来自相同物种，则是通过刻意的人为干预从其天然形式在组成和/或基因组基因座上进行大幅度修饰的序列。可以用于增强定点多肽的核定位的NLS序列的非限制性实例包括SV40大T抗原和c-Myc的NLS。在某些实施方案中，NLS包含氨基酸序列PKKKRKV(SEQ ID NO:324)。
定点多肽可以包含多于一个NLS，如两个、三个、四个、五个、六个或更多个NLS序列。多个NLS中的每一个在序列上都可以是唯一的，或可以使用多于一个的相同NLS序列。NLS可以位于定点多肽的氨基末端(N-末端)、羧基末端(C-末端)、或多肽的N-末端和C-末端二者上。在某些实施方案中，定点多肽在其N-末端上包含四个NLS序列。在其他实施方案中，定点多肽在定点多肽的C-末端上包含两个NLS序列。在另外其它实施方案中，定点多肽在其N-末端上包含四个NLS序列，并且在其C-末端上包含两个NLS序列。
在某些实施方案中，定点多肽包含细胞穿透肽(CPP)，其诱导连接的蛋白或肽通过细胞质膜的吸收。通常，CPP诱导进入细胞，因为它们呈现出自组装成跨膜孔或具有若干带正电荷残基的一般形状和趋势，这些残基与诱导膜弯曲的带负电荷磷脂外膜相互作用，这进而激活内化。示例性可渗透肽包括但不限于转运肽(transportan)、PEP1、MPG、p-VEC、MAP、CADY、polyR、HIV-TAT、HIV-REV、穿膜肽(Penetratin)、R6W3、P22N、DPV3、DPV6、K-FGF和C105Y，并且在以下各项中进行了综述：van den Berg和Dowdy(2011)Current Opinion inBiotechnology 22:888-893以及Farkhani等人，(2014)Peptides 57:78-94,它们各自通过引用以其整体并入本文。
与NLS一起或作为其的替代物，定点多肽可以包含额外的异源氨基酸序列(如本文别处描述的可检测标记物(例如，荧光蛋白)、或纯化标签)，以形成融合蛋白。纯化标签是可以用于从混合物(例如，生物样品、培养基)中分离蛋白质或融合蛋白的任何分子。纯化标签的非限制性实例包括生物素、myc、麦芽糖结合蛋白(MBP)和谷胱甘肽-S-转移酶(GST)。
本公开组合物和方法可以用于经由以下方式来编辑基因组：引入修复的序列特异性双链断裂(经由例如易错的非同源末端接合(NHEJ)、微同源(microhomology)介导的末端接合(MMEJ)或替代性末端接合(alt-EJ)途径)，以在特定的基因组位置处引入突变。由于修复过程的易错性质，因此双链断裂的修复可以导致对靶序列的修饰。替代地，在引入的双链断裂的修复过程中，可以将供体模板多核苷酸整合到靶序列中或与其交换，从而导致外源性供体序列的引入。因此，组合物和方法可以进一步包含供体模板多核苷酸，其可以包含侧翼同源末端。在这些实施方案的一些中，供体模板多核苷酸经由如本文别处描述的接头与定点多肽连接(例如，供体模板多核苷酸经由可切割接头与定点多肽结合)。
在一些实施方案中，供体序列改变原始靶序列，使得新整合的供体序列不会被核酸引导性核酸酶识别和切割。供体序列可以包含与侧接有靶序列的序列具有基本序列同一性的侧翼序列，以经由同源性定向修复来增强供体序列的整合。在其中核酸引导性核酸酶生成双链交错断裂的特定实施方案中，供体多核苷酸可以侧接有相容的突出端，从而允许在双链断裂的修复期间经由非同源修复过程来并入供体序列。
可以使用任何合适的递送方法将本公开内容的核酸操作试剂引入到干细胞中。递送可以经由体外、离体或体内施用。用于引入核酸操作试剂的示例性方法包括但不限于转染、电穿孔和基于病毒的方法。在一些实施方案中，在引入基因编辑组分之前，从受试者中分离干细胞。可以对干细胞进行离体基因改变，并且将其返回(例如，移植)到受试者。在一个实施方案中，该受试者是从其中分离细胞的同一受试者。在另一实施方案中，该受试者与从其中分离细胞的受试者不同。在特定的实施方案中，对自体干细胞/祖细胞进行体外改变，并且将其返回到受试者。在另一实施方案中，对异源干细胞/祖细胞进行体外改变，并且将其返回到受试者中。
干细胞的遗传修饰可以包括将gRNA分子、Cas9分子和任选的供体模板核酸递送到本文描述的干细胞。在一个实施方案中，gRNA分子、Cas9分子或二者以及任选的模板核酸由病毒载体递送，例如，AAV载体或慢病毒载体，例如，整合缺乏型慢病毒(IDLV)。在另一实施方案中，gRNA分子和Cas9分子以gRNA分子/Cas9分子核糖核蛋白复合物的形式递送。在另一实施方案中，gRNA分子和Cas9分子以RNA的形式递送。模板核酸可以包括用于基因替代疗法的靶基因的至少一个外显子。在某些实施方案中，模板核酸不含有与疾病或疾病风险相关联的突变。模板核酸可以包括在靶干细胞中起作用的启动子序列。在特定的实施方案中，模板核酸包含剪接供体或受体。在另一实施方案中，模板核酸包含聚腺苷酸化信号。
在一些实施方案中，一种或多种细胞摄取试剂是转染试剂。转染试剂包括例如基于聚合物(例如，DEAE葡聚糖)的转染试剂和阳离子脂质体介导的转染试剂。电穿孔方法也可以用于促进核酸操作试剂的摄取。通过施加外场，诱导细胞的跨膜电位发生改变，并且当跨膜电位净值(施加的电位差和静息电位差的总和)大于阈值时，在膜中生成瞬变渗透结构，并且实现电穿孔。参见，例如，Gehl等人，Acta Physiol.Scand.177:437-447(2003)。
还可以通过病毒转导将核酸操作试剂递送到干细胞中。合适的病毒递送系统包括但不限于腺相关病毒(AAV)逆转录病毒和慢病毒递送系统。此类病毒递送系统在干细胞对转染具有抗性的情况下特别有用。使用病毒介导的递送系统的方法可以进一步包括制备编码核酸操作试剂的病毒载体和将该载体包装成病毒颗粒的步骤。
递送核酸试剂的其他方法包括但不限于脂质转染、核转染、显微注射、生物弹道技术、病毒体、脂质体、免疫脂质体、聚阳离子或脂质:核酸缀合物、裸DNA、人工病毒粒子、纳米粒子、以及核酸的制剂增强型摄取。另参见Neiwoehner等人，Nucleic Acids Res.42:1341-1353(2014)，其通过引用以其整体并入本文，以用于所有目的，尤其是用于与试剂递送系统有关的所有教导。在一些实施方案中，引入是通过非病毒载体递送系统来进行的，该非病毒载体递送系统包括DNA质粒、RNA(例如，本文描述的载体的转录物)、裸核酸、以及与递送载体(如脂质体)复合的核酸。
对干细胞进行遗传修饰可以改变感兴趣的基因中的靶标位置(例如，靶标突变位置)。改变靶标位置可以例如通过修复(例如，纠正或改变)基因中的一个或多个突变来实现。在具体的实施方案中，可以通过同源性定向修复来修复突变。使用同源性定向修复，一个或多个突变等位基因得到纠正并且恢复到野生型状态。在一个实施方案中，基因突变的纠正恢复了野生型基因活性。还可以通过将多核苷酸敲入到靶基因中来对干细胞进行修饰。在一个实施方案中，敲入多核苷酸恢复了野生型基因活性。
在特定的实施方案中，可以对干细胞进行修饰以敲除或敲低靶基因的活性。改变靶标位置可以通过以下各项来实现：(1)敲除基因：(a)紧接基因早期编码区或其内的一个或多个核苷酸的插入或缺失(例如，NHEJ介导的插入或缺失)，或(b)包括基因的至少一部分的基因组序列的缺失(例如，NHEJ介导的缺失)；或(2)通过靶向基因的启动子区域，敲低由酶学上无活性的Cas9(eiCas9)分子或eiCas9融合蛋白(例如，与转录阻遏物融合)介导的基因。
2.治疗的适应症
如本文所描述，可以将遗传修饰HSC移植物疗法施用到需要治疗的受试者，以便通过改变靶基因来填入一种或多种血细胞类型。造血干细胞通常表现出多潜能性，并且因此可以分化成多种不同的血液谱系，其包括但不限于粒细胞(例如，早幼粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)、红细胞(例如，网织红细胞、红细胞)、血栓细胞(例如，成巨核细胞、产生血小板的巨核细胞、血小板)、单核细胞(例如，单核细胞、巨噬细胞)、树突细胞、小胶质细胞、破骨细胞和淋巴细胞(例如NK细胞、B细胞和T细胞)。造血干细胞还能够自我更新，因此可以产生具有与母细胞等效的潜力的子细胞，并且还展现出被重新引入到移植接受体中，随之它们归巢到造血干细胞小生境，并重新建立生产性和持续性造血功能的能力。
因此，本文描述的组合物和方法可以用于非恶性血红蛋白病(例如，选自下组的血红蛋白病，该组由以下各项组成：镰状细胞贫血、地中海贫血、范科尼贫血、再生障碍性贫血和威斯科特-奥尔德里奇二氏综合征)。另外或替代地，本文描述的组合物和方法可以用于治疗免疫缺陷，如先天性免疫缺陷。另外或替代地，本文描述的组合物和方法可以用于治疗获得性免疫缺陷(例如，选自下组的获得性免疫缺陷，该组由以下各项组成：HIV和AIDS)。本文描述的组合物和方法可以用于治疗代谢性病症(例如，选自下组的代谢性病症，该组由以下各项组成：糖原贮积病、粘多糖贮积症、戈谢氏病、胡尔勒病、鞘脂沉积病和异染性脑白质营养不良)。
在一些实施方案中，本方法可以用于治疗镰状细胞疾病，即，一组影响血红蛋白的病症。患有这种病症的受试者具有非典型的血红蛋白分子(血红蛋白S)，其可能使红血细胞变形为镰刀形或新月形。这种病症的特征特性包括低数目的红血细胞(贫血)、反复感染和周期性疼痛发作。HBB基因突变导致镰状细胞疾病。HBB基因提供用于制造β-珠蛋白的指令。不同形式的β-珠蛋白由不同的HBB基因突变引起。一种特定的HBB基因突变产生一种异常形式的β-珠蛋白，其被称为血红蛋白S(HbS)。其他的HBB基因突变导致其他异常形式的β-珠蛋白，如血红蛋白C(HbC)和血红蛋白E(HbE)。HBB基因突变还可以导致异常低水平的β-珠蛋白，即，β地中海贫血。在患有镰状细胞疾病的人中，血红蛋白的β-珠蛋白亚单位中的至少一个被血红蛋白S替换。在镰状细胞贫血(镰状细胞疾病的一种常见形式)中，血红蛋白S替换血红蛋白的两个β-珠蛋白亚单位。在其他类型的镰状细胞疾病中，血红蛋白中只有一个β-珠蛋白亚单位被血红蛋白S替换。另一β-珠蛋白亚单位被不同的异常变体(如血红蛋白C)替换。例如，患有镰状血红蛋白C(HbSC)疾病的人具有其中β-珠蛋白被血红蛋白S和血红蛋白C代替的血红蛋白分子。如果产生血红蛋白S和β地中海贫血的突变一起发生，则个体患有血红蛋白S-β地中海贫血(HbSBetaThal)疾病。使用已知的基因编辑方法，可以在用于本方法的干细胞中，对导致镰状细胞疾病的突变中的任何一种或多种进行改变。另外或替代地，可以将功能性HBB基因引入到干细胞中以用于移植。
在一些实施方案中，本方法可以用于治疗β地中海贫血(也被称为βThal)，即，一种减少血红蛋白产生的血液病症。在患有β地中海贫血的受试者中，低水平的血红蛋白导致身体许多部位缺氧。受影响的个体还会出现红血细胞短缺(贫血)，这可能导致皮肤苍白、虚弱、疲劳和更严重的并发症。患有β地中海贫血的人发生异常血凝块的风险增加。取决于症状的严重程度，将β地中海贫血分类为两种类型：重型地中海贫血(也被称为Cooley贫血)和中间型地中海贫血。在该两种类型中，重型地中海贫血更为严重。HBB基因突变导致β地中海贫血。HBB基因提供用于制造β-珠蛋白的指令。一些HBB基因突变阻止任何β-珠蛋白的产生。β-珠蛋白缺乏被称为β-零(B°)地中海贫血。其他的HBB基因突变允许产生一些β-珠蛋白，但量减少，即，β-plus(B+)地中海贫血。患有两种类型的人已被诊断出患有重型地中海贫血和中间型地中海贫血。在一些实施方案中，某些罕见形式的β地中海贫血是由δ-或γ-珠蛋白(分别为HBG1和HBG2、UniProt P69891和P69892)的缺陷型产生引起的。使用已知的基因编辑方法，可以在用于本方法的干细胞中，对导致β地中海贫血的突变中的任何一种或多种进行改变。另外或替代地，可以将任何一种或多种功能性基因(例如，HBB、HBG1、HBG2)引入到干细胞中以用于移植。参见，例如，http://dx.doi.org/10.5772/61441；Pondarre和Badens,Ann.Biol.Clin(Paris)72(6):639-668,2014。
在一些实施方案中，本方法可以用于治疗腺苷脱氨酶缺乏(也被称为ADA缺乏或ADA-SCID(重症联合免疫缺陷))，即，一种由于缺少腺苷脱氨酶(ADA)酶而导致免疫缺陷的代谢性病症。实际上，患有SCID的人缺少抵抗细菌、病毒和真菌的所有免疫保护。他们易于反复和持续遭受可能非常严重或危及生命的感染。这些感染常由“机会性”生物引起，此类生物一般不会在具有正常免疫系统的人中导致疾患。大多数患有ADA缺乏的个体在生命的前6个月内被诊断出患有SCID。如果不进行治疗，这些婴儿通常活不过2岁。在约10％至15％的病例中，免疫缺陷的发作延迟到6至24个月龄之间(延迟发作)，甚至直到成年(晚期发作)。这些迟发型病例的免疫缺陷往往不太严重，主要导致复发性上呼吸道和耳部感染。随着时间的推移，受影响的个体可能发生慢性肺损伤、营养不良和其他健康问题。使用已知的基因编辑方法，可以在用于本方法的干细胞中，对引起ADA的腺苷脱氨酶基因突变中的任何一种或多种进行改变。另外或替代地，可以将功能性腺苷脱氨酶基因引入到干细胞中以用于移植。在又进一步的实施方案中，遗传修饰干细胞是StrimvelisTM(自体CD34+富集的细胞级分，其含有用编码人ADA cDNA序列的逆转录病毒载体转导的CD34+细胞)。
在一些实施方案中，本方法可以用于治疗异染性脑白质营养不良(也被称为MLD或芳基硫酸酯酶A缺乏)，即，一种由芳基硫酸酯酶A(ARSA)酶缺乏引起的溶酶体贮积病，其特征是被称为细胞硫苷脂的脂肪累积。这种累积尤其会影响神经系统中产生髓磷脂的细胞，该髓磷脂是隔离并保护神经的物质。由髓磷脂覆盖的神经细胞构成被称为白质的组织。髓磷脂产生细胞中的硫苷脂累积导致遍及神经系统的白质逐渐破坏(脑白质病变)，其包括在大脑和脊髓(中枢神经系统)以及将大脑和脊髓与肌肉和感觉细胞连接的神经(周围神经系统)中的破坏，该感觉细胞检测如触觉、疼痛、热和声音等感觉。在患有异染性脑白质营养不良的人中，白质损伤导致智力功能和运动技能(如行走能力)逐渐恶化。受影响的个体还发生四肢感觉丧失(周围神经病变)、大小便失禁、癫痫发作、麻痹、不会说话、失明和听力损失。最终，他们丧失对其周围环境的意识，并且变得反应迟钝。使用已知的基因编辑方法，可以在用于本方法的干细胞中，对导致MLD的ARSA基因突变中的任何一种或多种进行改变。另外或替代地，可以将功能性ARSA基因引入到干细胞中以用于移植。
在一些实施方案中，本方法可以用于治疗威斯科特-奥尔德里奇二氏综合征(也被称为WAS或湿疹-血小板减少症-免疫缺陷综合征)，即，一种由WASp基因突变引起的X连锁隐性疾病，其特征是免疫系统功能异常(免疫缺陷)和形成血凝块的能力降低。患有威斯科特-奥尔德里奇二氏综合征的个体患有微血小板减少症，其是指参与凝结(血小板)的血细胞片段的数目和大小减少。这种血小板异常通常从出生时就存在，可能导致容易瘀伤、血性腹泻、或轻微创伤后出血发作延长。微血小板减少症还可能导致正好在皮肤表面下的小面积出血，从而导致被称为紫癜的紫色斑点或被称为瘀斑的微小红色斑点皮疹。在一些情况下，出血发作可能危及生命。威斯科特-奥尔德里奇二氏综合征的特征还在于异常或无功能的免疫系统细胞，例如，粪便血细胞。白血细胞的变化导致患有威斯科特-奥尔德里奇二氏综合征的人发生若干免疫和炎性病症的风险增加。这些免疫问题在严重程度上有所不同，并且包括对感染和湿疹(一种炎性皮肤病症，其特征是异常的红色斑块，即敏感性皮肤)的易感性增加。患有威斯科特-奥尔德里奇二氏综合征的人发生自身免疫性病症(如类风湿性关节炎或溶血性贫血)的风险较大，当免疫系统功能失常并攻击身体自身的组织和器官时，该病症就会出现。患有威斯科特-奥尔德里奇二氏综合征的人发生某些类型的癌症(如免疫系统细胞的癌症(淋巴瘤))的几率也会增加。使用已知的基因编辑方法，可以在用于本方法的干细胞中，对导致威斯科特-奥尔德里奇二氏综合征的WASp基因突变中的任何一种或多种进行改变。另外或替代地，可以将功能性WASp基因引入到干细胞中以用于移植。
在一些实施方案中，本方法可以用于治疗慢性肉芽肿病(也被称为CGD)，其由导致吞噬细胞NADPH氧化酶缺陷的五种不同基因中的任一种的突变引起，该缺陷引起免疫缺陷。患有慢性肉芽肿病的个体可能患有复发性细菌和真菌感染。患有这种病况的人还可能在各种组织中患有炎症区域(肉芽肿)，其导致对这些组织的损伤。在这些患者中，肺部是最常见的感染区域；肺炎是这种病况的共同特征。患有慢性肉芽肿病的个体可能发生一种被称为覆盖物肺炎的真菌性肺炎，其在暴露于腐烂的有机物质(如覆盖物、干草或枯叶)后引起发烧和呼吸短促。暴露于这些有机物质和参与其分解的众多真菌会导致患有慢性肉芽肿病的人发生肺部真菌感染。患有慢性肉芽肿病的人的其他常见感染区域包括皮肤、肝脏和淋巴结。进一步地，CGD患者身体的许多不同区域都可能出现炎症。最常见地，肉芽肿出现在胃肠道和泌尿生殖道中。使用已知的基因编辑方法，可以在用于本方法的干细胞中，对导致CGD的吞噬细胞NADPH氧化酶基因突变中的任何一种或多种进行改变。另外或替代地，可以将功能性吞噬细胞NADPH氧化酶基因引入到干细胞中以用于移植。
在某些实施方案中，本方法可以用于治疗由GALC基因突变引起的球样细胞脑白质营养不良(也被称为GCL、半乳糖基神经酰胺脂沉积症或Krabbe病)。GALC基因提供用于制造半乳糖基神经酰胺酶的指令，该酶分解某些脂肪(例如，半乳糖脂)。一种被半乳糖基神经酰胺酶分解的半乳糖脂被称为半乳糖基神经酰胺，是髓磷脂的重要组分。半乳糖基神经酰胺酶的分解是发生在整个生命期间的髓磷脂正常转换的一部分。另一被称为鞘氨醇半乳糖苷的半乳糖脂是在髓磷脂的产生期间形成的，如果不被半乳糖基神经酰胺酶分解，则是有毒的。通常，GCL影响神经保护性髓鞘的生长，并且导致运动技能重度退变。GCL的特征还在于大脑中称为球形细胞的异常细胞，其是通常具有多于一个细胞核的大细胞。使用已知的基因编辑方法，可以在用于本方法的干细胞中，对导致GCL的GALC基因突变中的任何一种或多种进行改变。另外或替代地，可以将功能性GALC基因引入到干细胞中以用于移植。
在一些实施方案中，本方法可以用于治疗I型粘多糖贮积症(也被称为MPS I型)，即，MPS的一种形式(即，不能将被称为粘多糖的复杂碳水化合物代谢成更简单的分子)，其由艾杜糖醛酸酶α-L基因(IDUA基因)突变引起，该突变导致α-L-艾杜糖醛酸酶酶缺乏。IDUA酶活性的缺少导致细胞内糖胺聚糖(GAG)的累积，特别是在溶酶体内累积。患有MPS1的个体可能患有大头(巨头畸型)、脑内流体堆积(脑积水)、心脏瓣膜异常、肝和脾增大(肝脾肿大)和大舌头(巨舌症)。声带也可能增大，从而导致声音低沉、嘶哑。一些患有MPS I的人的气道可能变窄，从而导致频繁的上呼吸道感染和睡眠期间呼吸短暂停顿(睡眠呼吸暂停)。患有MPS I的人经常发生角膜混浊，其可能导致严重的视力丧失。受影响的个体还可能患有听力损失和复发性耳部感染。一些患有MPS I的人患有影响移动性的矮小症和关节畸形(挛缩)。大多数患有重型病症的人还患有多发性成骨异常，其是指多种骨骼异常。颈椎管变窄(椎管狭窄)可能压迫和损伤脊髓。使用已知的基因编辑方法，可以在用于本方法的干细胞中，对导致MPS I型的IDUA基因突变中的任何一种或多种进行改变。另外或替代地，可以将功能性IDUA基因引入到干细胞中以用于移植。
另外或替代地，本文描述的组合物和方法可以用于治疗恶性肿瘤或增生性病症，如血液学癌症、骨髓增生性疾病，特别是本文描述的缀合物。在癌症治疗的情况下，可以将本文描述的组合物和方法施用到患者，以便在造血干细胞移植物疗法之前耗尽内源性造血干细胞群体，在该情况下，移植细胞可以归巢到通过内源性细胞耗尽步骤创建的小生境，并且建立生产性造血功能。这进而可以重构癌细胞根除期间(如系统性化学疗法期间)所耗尽的细胞群体。可使用本文描述的组合物和方法治疗的示例性血液学癌症包括但不限于急性髓样白血病、急性淋巴性白血病、慢性髓样白血病、慢性淋巴样白血病、多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤和非何杰金淋巴瘤，以及其他癌症病况，包括成神经细胞瘤。
可以用本文描述的组合物和方法治疗的额外疾病包括但不限于腺苷脱氨酶缺乏和重症联合免疫缺陷、高免疫球蛋白M综合征、切-希二氏病、遗传性淋巴组织细胞增生症、骨硬化症、成骨不全症、贮积病、重型地中海贫血、系统性硬化症、系统性红斑狼疮、多发性硬化症以及幼年型类风湿性关节炎。
本文描述的组合物和方法可以用于通过在造血干细胞移植物疗法之前耗尽内源性造血干细胞群体来治疗自身免疫性疾病，在该情况下，移植细胞可以归巢到通过内源性细胞耗尽步骤创建的小生境，并且建立生产性造血功能。这进而可以重构自身免疫性细胞根除期间所耗尽的细胞群体。
可以使用本文描述的组合物和方法治疗的自身免疫性疾病包括但不限于银屑病、银屑病性关节炎、1型糖尿病(1型糖尿病)、类风湿性关节炎(RA)、人系统性狼疮(SLE)、多发性硬化症(MS)、炎性肠病(IBD)、淋巴细胞性结肠炎、急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、艾迪生病、普秃、强直性脊柱炎、抗磷脂抗体综合征(APS)、再生障碍性贫血、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳病(AIED)、自身免疫性淋巴组织增生性综合征(ALPS)、自身免疫性卵巢炎、巴洛病、贝赫切特病、大疱性类天疱疮、心肌病、恰加斯氏病、慢性疲劳免疫功能障碍综合症(CFIDS)、慢性炎性脱髓鞘性多神经病、克罗恩氏病、瘢痕性类天疱疮、口炎性腹泻-疱疹样皮炎、冷凝集素疾病、CREST综合征、德戈斯病、盘状狼疮、自主神经机能异常、子宫内膜异位、原发性混合型冷球蛋白血症、纤维肌痛-纤维肌炎、肺出血肾炎综合征、格雷夫斯病、格林-巴利综合征(GBS)、桥本氏甲状腺炎、化脓性汗腺炎、特发性和/或急性血小板减少性紫癜、特发性肺纤维化、IgA神经病变、间质性膀胱炎、幼年型关节炎、川崎病、扁平苔藓、莱姆病、梅尼埃病、混合性结缔组织病(MCTD)、肌腱鞘炎、肌无力症、神经性肌强直、斜视性眼阵挛肌阵挛综合征(OMS)、视神经炎、Ord甲状腺炎、寻常型天疱疮、恶性贫血、多软骨炎、多肌炎和皮肌炎、原发性胆汁性肝硬化、结节性多动脉炎、多腺性综合征、风湿性多肌痛、原发性无丙种球蛋白血症、雷诺现象、莱特尔综合征、风湿热、结节病、硬皮病、舍格伦综合征、僵人综合征、高安氏动脉炎、颞动脉炎(也被称为“巨细胞动脉炎”)、溃疡性结肠炎、胶原性结肠炎、葡萄膜炎、血管炎、白癜风、外阴痛(“外阴前庭炎”)和韦格纳肉芽肿。
C.抗体药物缀合物(ADC)
1.抗体
如本文所描述，本方法包括使用靶向造血干细胞和/或免疫细胞上的特定分子的ADC，该特定分子包括例如CD2、CD5、CD7、CDwl2、CD13、CD15、CD19、CD21、CD22、CD29、CD30、CD33、CD34、CD36、CD38、CD40、CD41、CD42a、CD42b、CD42c、CD42d、CD43、CD45、CD45RA、CD45RB、CD45RC、CD45RO、CD47、CD48、CD49b、CD49d、CD49e、CD49f、CD50、CD53、CD55、CD64a、CD68、CD71、CD72、CD73、CD81、CD82、CD85A、CD85K、CD90、CD99、CD104、CD105、CD109、CD110、CD111、CD112、CD114、CD115、CD117、CD123、CD124、CD126、CD127、CD130、CD131、CD133、CD134、CD135、CD137、CD138、CD151、CD157、CD162、CD164、CD168、CD172a、CD173、CD174、CD175、CD175s、CD176、CD183、CD191、CD200、CD201、CD205、CD217、CD220、CD221、CD222、CD223、CD224、CD225、CD226、CD227、CD228、CD229、CD230、CD235a、CD235b、CD236、CD236R、CD238、CD240、CD242、CD243、CD252、CD277、CD292、CDw293、CD295、CD298、CD309、CD318、CD324、CD325、CD338、CD344、CD349或CD350。在一些实施方案中，ADC包含与HSC和/或免疫细胞上的一种或多种特定分子特异性结合的抗体或其抗原结合片段。生成用于本方法的合适抗体的方法对于本领域技术人员来说是容易获得的。
a.抗CD117抗体
能够结合CD117(如GNNK+CD117)的抗体或其抗原结合片段，可以单独用作治疗剂或以缀合物(ADC)的形式使用，以例如(i)治疗由CD117+细胞表征的癌症和自身免疫性疾病，以及(ii)促进将移植的遗传修饰造血干细胞植入到需要移植物疗法的患者体内。这些治疗活性可以例如通过结合与在细胞(如癌细胞、自身免疫性细胞或造血干细胞)表面上表达的CD117(例如，GNNK+CD117)结合的分离的抗CD117抗体、其抗原结合片段并随后诱导细胞死亡来引起。内源性造血干细胞的耗尽可以提供移植的造血干细胞可以归巢并随后建立生产性造血功能的小生境。以这种方式，移植的造血干细胞可以成功地植入到患者(如患有本文描述的干细胞病症的人患者)体内。
能够结合人CD117(也被称为c-Kit，mRNA NCBI参考序列：NM_000222.2，蛋白质NCBI参考序列：NP_000213.1)的抗体和抗原结合片段，包括能够结合GNNK+CD117的那些，可以与本文描述的组合物和方法结合使用，以便调理患者以进行造血干细胞移植物疗法。在非肿瘤适应症中，以显著的群体百分比影响CD117编码区或细胞外域的多态性目前尚不为人所熟知。已鉴定出至少四种CD117同种型，可能在肿瘤细胞中表达额外的同种型。CD117同种型中的两种位于蛋白质的细胞内域上，并且两种存在于外部近膜区中。两种细胞外同种型GNNK+和GNNK-在4个氨基酸序列的存在(GNNK+)或不存在(GNNK-)方面有所不同。据报道，这些同种型对配体(SCF)具有相同的亲和力，但据报道与GNNK-同种型结合的配体增加内化和降解。GNNK+同种型可以用作免疫原以便生成能够结合CD117的抗体，因为针对这种同种型所生成的抗体将包括GNNK+和GNNK-蛋白在内。人CD117同种型1和2的氨基酸序列分别描述在SEQ ID No:145和146中。在某些实施方案中，本文公开的抗人CD117(hCD117)抗体能够与人CD117的同种型1和同种型2二者结合。
如下所描述，进行人抗体的酵母文库筛选，以鉴定具有诊断和治疗用途的新型抗CD117抗体及其片段。抗体54(Ab54)、抗体55(Ab55)、抗体56(Ab56)、抗体57(Ab57)、抗体58(Ab58)、抗体61(Ab61)、抗体66(Ab66)、抗体67(Ab67)、抗体68(Ab68)和抗体69(Ab69)是在此筛选中鉴定出的人抗体。这些抗体与人CD117和恒河猴CD117发生交叉反应。进一步地，本文公开的这些抗体能够与人CD117的两种同种型(即，同种型1(SEQ ID NO:145)和同种型2(SEQ ID NO:146))结合。
抗CD117抗体Ab54、Ab55、Ab56、Ab57、Ab58、Ab61、Ab66、Ab67、Ab68和Ab69的各种结合区的氨基酸序列描述在表9中。本公开内容包括的是包含如表9中所阐述的CDR的人抗CD117抗体、以及包含表9中所阐述的可变区的人抗CD117抗体。
在一个实施方案中，本公开内容提供一种抗CD117抗体或其抗原结合片段，其包含对应于抗体55的结合区的结合区，例如，CDR、可变区。抗体55(即，Ab55)的重链可变区(VH)氨基酸序列阐述在SEQ ID NO:19中(参见表9)。抗体55的VH CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:21(VH CDR1)；SEQ ID NO:22(VH CDR2)以及SEQ ID NO:23(VH CDR3)。抗体55的轻链可变区(VL)氨基酸序列描述在SEQ ID NO:20中(参见表9)。抗体55的VL CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:24(VL CDR1)；SEQ ID NO:25(VL CDR2)以及SEQ ID NO:26(VL CDR3)。抗体55的重链恒定区阐述在SEQ ID NO:122中。抗体55的轻链恒定区阐述在SEQ ID NO:121中。因此，在某些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID No:21、22和23中所阐述的可变重链CDR组(CDR1、CDR2和CDR3)以及如SEQ IDNo:24、25和26中所阐述的轻链可变区CDR组。在其他实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含可变轻链和如SEQ ID NO:19中所阐述的重链可变区，该可变轻链包含SEQ IDNO:20中所阐述的氨基酸残基。
在一个实施方案中，本公开内容提供一种抗CD117抗体或其抗原结合片段，其包含对应于抗体54的结合区的结合区，例如，CDR、可变区。抗体54(即，Ab54)的重链可变区(VH)氨基酸序列阐述在SEQ ID NO:29中(参见表9)。抗体54的VH CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:31(VH CDR1)；SEQ ID NO:32(VH CDR2)以及SEQ ID NO:33(VH CDR3)。抗体54的轻链可变区(VL)氨基酸序列描述在SEQ ID NO:30中(参见表9)。抗体54的VL CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:34(VL CDR1)；SEQ ID NO:35(VL CDR2)以及SEQ ID NO:36(VL CDR3)。抗体54的重链恒定区阐述在SEQ ID NO:122中。抗体54的轻链恒定区阐述在SEQ ID NO:121中。因此，在某些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID No:31、32和33中所阐述的可变重链CDR组(CDR1、CDR2和CDR3)以及如SEQ IDNo:34、35和36中所阐述的轻链可变区CDR组。在其他实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含可变轻链和如SEQ ID NO:29中所阐述的重链可变区，该可变轻链包含SEQ IDNO:30中所阐述的氨基酸残基。
在一个实施方案中，本公开内容提供一种抗CD117抗体或其抗原结合片段，其包含对应于抗体56的结合区的结合区，例如，CDR、可变区。抗体56(即，Ab56)的重链可变区(VH)氨基酸序列阐述在SEQ ID NO:39中(参见表9)。抗体56的VH CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:41(VH CDR1)；SEQ ID NO:42(VH CDR2)以及SEQ ID NO:43(VH CDR3)。抗体56的轻链可变区(VL)氨基酸序列描述在SEQ ID NO:40中(参见表9)。抗体56的VL CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:44(VL CDR1)；SEQ ID NO:45(VL CDR2)以及SEQ ID NO:46(VL CDR3)。抗体56的重链恒定区阐述在SEQ ID NO:122中。抗体56的轻链恒定区阐述在SEQ ID NO:121中。因此，在某些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID No:41、42和43中所阐述的可变重链CDR组(CDR1、CDR2和CDR3)以及如SEQ IDNo:44、45和46中所阐述的轻链可变区CDR组。在其他实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含可变轻链和如SEQ ID NO:39中所阐述的重链可变区，该可变轻链包含SEQ IDNO:40中所阐述的氨基酸残基。
在一个实施方案中，本公开内容提供一种抗CD117抗体或其抗原结合片段，其包含对应于抗体57的结合区的结合区，例如，CDR、可变区。抗体57(即，Ab57)的重链可变区(VH)氨基酸序列阐述在SEQ ID NO:49中(参见表9)。抗体57的VH CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:51(VH CDR1)；SEQ ID NO:52(VH CDR2)以及SEQ ID NO:53(VH CDR3)。抗体57的轻链可变区(VL)氨基酸序列描述在SEQ ID NO:50中(参见表9)。抗体57的VL CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:54(VL CDR1)；SEQ ID NO:55(VL CDR2)以及SEQ ID NO:56(VL CDR3)。抗体57的重链恒定区阐述在SEQ ID NO:122中。抗体57的轻链恒定区阐述在SEQID NO:121中。因此，在某些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID No:51、52和53中所阐述的可变重链CDR组(CDR1、CDR2和CDR3)以及如SEQ IDNo:54、55和56中所阐述的轻链可变区CDR组。在其他实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含可变轻链和如SEQ ID NO:49中所阐述的重链可变区，该可变轻链包含SEQ IDNO:50中所阐述的氨基酸残基。
在一个实施方案中，本公开内容提供一种抗CD117抗体或其抗原结合片段，其包含对应于抗体58的结合区的结合区，例如，CDR、可变区。抗体58(即，Ab58)的重链可变区(VH)氨基酸序列阐述在SEQ ID NO:59中(参见表9)。抗体58的VH CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:61(VH CDR1)；SEQ ID NO:62(VH CDR2)以及SEQ ID NO:63(VH CDR3)。抗体58的轻链可变区(VL)氨基酸序列描述在SEQ ID NO:60中(参见表9)。抗体58的VL CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:64(VL CDR1)；SEQ ID NO:65(VL CDR2)以及SEQ ID NO:66(VL CDR3)。抗体58的重链恒定区阐述在SEQ ID NO:122中。抗体58的轻链恒定区阐述在SEQ ID NO:121中。因此，在某些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID No:61、62和63中所阐述的可变重链CDR组(CDR1、CDR2和CDR3)以及如SEQ IDNo:64、65和66中所阐述的轻链可变区CDR组。在其他实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含可变轻链和如SEQ ID NO:59中所阐述的重链可变区，该可变轻链包含SEQ IDNO:60中所阐述的氨基酸残基。
在一个实施方案中，本公开内容提供一种抗CD117抗体或其抗原结合片段，其包含对应于抗体61的结合区的结合区，例如，CDR、可变区。抗体61(即，Ab61)的重链可变区(VH)氨基酸序列阐述在SEQ ID NO:69中(参见表9)。抗体61的VH CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:71(VH CDR1)；SEQ ID NO:72(VH CDR2)以及SEQ ID NO:73(VH CDR3)。抗体61的轻链可变区(VL)氨基酸序列描述在SEQ ID NO:70中(参见表9)。抗体61的VL CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:74(VL CDR1)；SEQ ID NO:75(VL CDR2)以及SEQ ID NO:76(VL CDR3)。抗体61的重链恒定区阐述在SEQ ID NO:122中。抗体61的轻链恒定区阐述在SEQ ID NO:121中。因此，在某些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID No:71、72和73中所阐述的可变重链CDR组(CDR1、CDR2和CDR3)以及如SEQ IDNo:74、75和76中所阐述的轻链可变区CDR组。在其他实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含可变轻链和如SEQ ID NO:69中所阐述的重链可变区，该可变轻链包含SEQ IDNO:70中所阐述的氨基酸残基。
在一个实施方案中，本公开内容提供一种抗CD117抗体或其抗原结合片段，其包含对应于抗体66的结合区的结合区，例如，CDR、可变区。抗体66(即，Ab66)的重链可变区(VH)氨基酸序列阐述在SEQ ID NO:79中(参见表9)。抗体66的VH CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:81(VH CDR1)；SEQ ID NO:82(VH CDR2)以及SEQ ID NO:83(VH CDR3)。抗体66的轻链可变区(VL)氨基酸序列描述在SEQ ID NO:80中(参见表9)。抗体66的VL CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:84(VL CDR1)；SEQ ID NO:85(VL CDR2)以及SEQ ID NO:86(VL CDR3)。抗体66的重链恒定区阐述在SEQ ID NO:122中。抗体66的轻链恒定区阐述在SEQ ID NO:121中。因此，在某些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID No:81、82和83中所阐述的可变重链CDR组(CDR1、CDR2和CDR3)以及如SEQ IDNo:84、85和86中所阐述的轻链可变区CDR组。在其他实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含可变轻链和如SEQ ID NO:79中所阐述的重链可变区，该可变轻链包含SEQ IDNO:80中所阐述的氨基酸残基。
在一个实施方案中，本公开内容提供一种抗CD117抗体或其抗原结合片段，其包含对应于抗体67的结合区的结合区，例如，CDR、可变区。抗体67的重链可变区(VH)氨基酸序列阐述在SEQ ID NO:9中(参见表9)。抗体67的VH CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQID NO 11(VH CDR1)；SEQ ID NO:12(VH CDR2)以及SEQ ID NO:13(VH CDR3)。抗体67的轻链可变区(VL)氨基酸序列描述在SEQ ID NO:10中(参见表9)。抗体67的VL CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO 14(VL CDR1)；SEQ ID NO:15(VL CDR2)以及SEQ ID NO:16(VL CDR3)。抗体67的全长重链(HC)阐述在SEQ ID NO:110中，并且抗体67的全长重链恒定阐述在SEQ ID NO:122中。抗体67的轻链(LC)阐述在SEQ ID NO:109中。抗体67的轻链恒定区阐述在SEQ ID NO:121中。因此，在某些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID No:11、12和13中所阐述的可变重链CDR组(CDR1、CDR2和CDR3)以及如SEQ ID No:14、15和16中所阐述的轻链可变区CDR组。在其他实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含可变重链和如SEQ ID NO:10中所阐述的重链可变区，该可变重链包含SEQ ID NO:9中所阐述的氨基酸残基。在进一步的实施方案中，抗CD117抗体包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:110，并且该轻链包含SEQ ID NO:109。
在一个实施方案中，本公开内容提供一种抗CD117抗体或其抗原结合片段，其包含对应于抗体68的结合区的结合区，例如，CDR、可变区。抗体68(即，Ab68)的重链可变区(VH)氨基酸序列阐述在SEQ ID NO:89中(参见表9)。抗体68的VH CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:91(VH CDR1)；SEQ ID NO:92(VH CDR2)以及SEQ ID NO:93(VH CDR3)。抗体68的轻链可变区(VL)氨基酸序列描述在SEQ ID NO:90中(参见表9)。抗体68的VL CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:94(VL CDR1)；SEQ ID NO:95(VL CDR2)以及SEQ ID NO:96(VL CDR3)。抗体68的重链恒定区阐述在SEQ ID NO:122中。抗体68的轻链恒定区阐述在SEQ ID NO:121中。因此，在某些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID No:91、92和93中所阐述的可变重链CDR组(CDR1、CDR2和CDR3)以及如SEQ IDNo:94、95和96中所阐述的轻链可变区CDR组。在其他实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含可变轻链和如SEQ ID NO:89中所阐述的重链可变区，该可变轻链包含SEQ IDNO:90中所阐述的氨基酸残基。
在一个实施方案中，本公开内容提供一种抗CD117抗体或其抗原结合片段，其包含对应于抗体69的结合区的结合区，例如，CDR、可变区。抗体69(即，Ab69)的重链可变区(VH)氨基酸序列阐述在SEQ ID NO:99中(参见表9)。抗体69的VH CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:101(VH CDR1)；SEQ ID NO:102(VH CDR2)以及SEQ ID NO:103(VHCDR3)。抗体69的轻链可变区(VL)氨基酸序列描述在SEQ ID NO:100中(参见表9)。抗体69的VL CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:104(VL CDR1)；SEQ ID NO:105(VLCDR2)以及SEQ ID NO:106(VL CDR3)。抗体69的重链恒定区阐述在SEQ ID NO:122中。抗体69的轻链恒定区阐述在SEQ ID NO:121中。因此，在某些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID No:101、102和103中所阐述的可变重链CDR组(CDR1、CDR2和CDR3)以及如SEQ ID No:104、105和106中所阐述的轻链可变区CDR组。在其他实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含可变轻链和如SEQ ID NO:99中所阐述的重链可变区，该可变轻链包含SEQ ID NO:100中所阐述的氨基酸残基。
进一步地，抗CD117抗体Ab77、Ab79、Ab81、Ab85、Ab86、Ab87、Ab88和Ab89的各种结合区的氨基酸序列描述在表9中。
在一个实施方案中，本公开内容提供一种抗CD117抗体或其抗原结合片段，其包含对应于抗体77的结合区的结合区，例如，CDR、可变区。抗体77(即，Ab77)的重链可变区(VH)氨基酸序列阐述在SEQ ID NO:147中(参见表9)。抗体77的VH CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:263(VH CDR1)；SEQ ID NO:2(VH CDR2)以及SEQ ID NO:3(VH CDR3)。抗体77的轻链可变区(VL)氨基酸序列描述在SEQ ID NO:231中(参见表9)。抗体77的VL CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:264(VL CDR1)；SEQ ID NO:265(VL CDR2)以及SEQ ID NO:266(VL CDR3)。抗体77的重链恒定区阐述在SEQ ID NO:269中。抗体77的轻链恒定区阐述在SEQ ID NO:283中。因此，在某些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID No:263、2和3中所阐述的可变重链CDR组(CDR1、CDR2和CDR3)以及如SEQ IDNo:264、265和266中所阐述的轻链可变区CDR组。在其他实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含可变轻链和如SEQ ID NO:147中所阐述的重链可变区，该可变轻链包含SEQID NO:231中所阐述的氨基酸残基。
在一个实施方案中，本公开内容提供一种抗CD117抗体或其抗原结合片段，其包含对应于抗体79的结合区的结合区，例如，CDR、可变区。抗体79(即，Ab79)的重链可变区(VH)氨基酸序列阐述在SEQ ID NO:147中(参见表9)。抗体79的VH CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:263(VH CDR1)；SEQ ID NO:2(VH CDR2)以及SEQ ID NO:3(VH CDR3)。抗体79的轻链可变区(VL)氨基酸序列描述在SEQ ID NO:233中(参见表9)。抗体79的VL CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:267(VL CDR1)；SEQ ID NO:265(VL CDR2)以及SEQ ID NO:266(VL CDR3)。抗体79的重链恒定区阐述在SEQ ID NO:269中。抗体79的轻链恒定区阐述在SEQ ID NO:283中。因此，在某些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID No:263、2和3中所阐述的可变重链CDR组(CDR1、CDR2和CDR3)以及如SEQ IDNo:267、265和266中所阐述的轻链可变区CDR组。在其他实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含可变轻链和如SEQ ID NO:147中所阐述的重链可变区，该可变轻链包含SEQID NO:233中所阐述的氨基酸残基。
在一个实施方案中，本公开内容提供一种抗CD117抗体或其抗原结合片段，其包含对应于抗体81的结合区的结合区，例如，CDR、可变区。抗体81(即，Ab81)的重链可变区(VH)氨基酸序列阐述在SEQ ID NO:147中(参见表9)。抗体81的VH CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:263(VH CDR1)；SEQ ID NO:2(VH CDR2)以及SEQ ID NO:3(VH CDR3)。抗体81的轻链可变区(VL)氨基酸序列描述在SEQ ID NO:235中(参见表9)。抗体81的VL CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:264(VL CDR1)；SEQ ID NO:268(VL CDR2)以及SEQ ID NO:266(VL CDR3)。抗体81的重链恒定区阐述在SEQ ID NO:269中。抗体81的轻链恒定区阐述在SEQ ID NO:283中。因此，在某些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID No:263、2和3中所阐述的可变重链CDR组(CDR1、CDR2和CDR3)以及如SEQ IDNo:264、268和266中所阐述的轻链可变区CDR组。在其他实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含可变轻链和如SEQ ID NO:147中所阐述的重链可变区，该可变轻链包含SEQID NO:235中所阐述的氨基酸残基。
在一个实施方案中，本公开内容提供一种抗CD117抗体或其抗原结合片段，其包含对应于抗体85的结合区的结合区，例如，CDR、可变区。抗体85(即，Ab86)的重链可变区(VH)氨基酸序列阐述在SEQ ID NO:243中(参见表9)。抗体85的VH CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:245(VH CDR1)；SEQ ID NO:246(VH CDR2)以及SEQ ID NO:247(VHCDR3)。抗体85的轻链可变区(VL)氨基酸序列描述在SEQ ID NO:242中(参见表9)。抗体85的VL CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:248(VL CDR1)；SEQ ID NO:249(VLCDR2)以及SEQ ID NO:250(VL CDR3)。抗体85的重链恒定区阐述在SEQ ID NO:269中。抗体85的轻链恒定区阐述在SEQ ID NO:283中。因此，在某些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID No:245、246和247中所阐述的可变重链CDR组(CDR1、CDR2和CDR3)以及如SEQ ID No:248、249和250中所阐述的轻链可变区CDR组。在其他实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含可变轻链和如SEQ ID NO:243中所阐述的重链可变区，该可变轻链包含SEQ ID NO:244中所阐述的氨基酸残基。
在一个实施方案中，本公开内容提供一种抗CD117抗体或其抗原结合片段，其包含对应于抗体86的结合区的结合区，例如，CDR、可变区。抗体86(即，Ab86)的重链可变区(VH)氨基酸序列阐述在SEQ ID NO:251中(参见表9)。抗体86的VH CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:245(VH CDR1)；SEQ ID NO:253(VH CDR2)以及SEQ ID NO:3(VH CDR3)。抗体86的轻链可变区(VL)氨基酸序列描述在SEQ ID NO:252中(参见表9)。抗体86的VL CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:254(VL CDR1)；SEQ ID NO:249(VL CDR2)以及SEQ ID NO:255(VL CDR3)。抗体86的重链恒定区阐述在SEQ ID NO:269中。抗体86的轻链恒定区阐述在SEQ ID NO:283中。因此，在某些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID No:245、253和3中所阐述的可变重链CDR组(CDR1、CDR2和CDR3)以及如SEQID No:254、249和255中所阐述的轻链可变区CDR组。在其他实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含可变轻链和如SEQ ID NO:251中所阐述的重链可变区，该可变轻链包含SEQ ID NO:252中所阐述的氨基酸残基。
在一个实施方案中，本公开内容提供一种抗CD117抗体或其抗原结合片段，其包含对应于抗体87的结合区的结合区，例如，CDR、可变区。抗体87(即，Ab87)的重链可变区(VH)氨基酸序列阐述在SEQ ID NO:243中(参见表9)。抗体87的VH CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:245(VH CDR1)；SEQ ID NO:246(VH CDR2)以及SEQ ID NO:247(VHCDR3)。抗体87的轻链可变区(VL)氨基酸序列描述在SEQ ID NO:256中(参见表9)。抗体87的VL CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:257(VL CDR1)；SEQ ID NO:5(VLCDR2)以及SEQ ID NO:255(VL CDR3)。抗体87的重链恒定区阐述在SEQ ID NO:269中。抗体87的轻链恒定区阐述在SEQ ID NO:283中。因此，在某些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID No:245、246和247中所阐述的可变重链CDR组(CDR1、CDR2和CDR3)以及如SEQ ID No:257、5和255中所阐述的轻链可变区CDR组。在其他实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含可变轻链和如SEQ ID NO:243中所阐述的重链可变区，该可变轻链包含SEQ ID NO:256中所阐述的氨基酸残基。
在一个实施方案中，本公开内容提供一种抗CD117抗体或其抗原结合片段，其包含对应于抗体88的结合区的结合区，例如，CDR、可变区。抗体88(即，Ab88)的重链可变区(VH)氨基酸序列阐述在SEQ ID NO:258中(参见表9)。抗体88的VH CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:245(VH CDR1)；SEQ ID NO:259(VH CDR2)以及SEQ ID NO:3(VH CDR3)。抗体88的轻链可变区(VL)氨基酸序列描述在SEQ ID NO:256中(参见表9)。抗体88的VL CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:257(VL CDR1)；SEQ ID NO:5(VL CDR2)以及SEQ ID NO:255(VL CDR3)。抗体88的重链恒定区阐述在SEQ ID NO:269中。抗体88的轻链恒定区阐述在SEQ ID NO:283中。因此，在某些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID No:245、259和3中所阐述的可变重链CDR组(CDR1、CDR2和CDR3)以及如SEQ IDNo:257、5和255中所阐述的轻链可变区CDR组。在其他实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含可变轻链和如SEQ ID NO:258中所阐述的重链可变区，该可变轻链包含SEQ IDNO:256中所阐述的氨基酸残基。
在一个实施方案中，本公开内容提供一种抗CD117抗体或其抗原结合片段，其包含对应于抗体89的结合区的结合区，例如，CDR、可变区。抗体89(即，Ab89)的重链可变区(VH)氨基酸序列阐述在SEQ ID NO:260中(参见表9)。抗体89的VH CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:245(VH CDR1)；SEQ ID NO:2(VH CDR2)以及SEQ ID NO:3(VH CDR3)。抗体89的轻链可变区(VL)氨基酸序列描述在SEQ ID NO:252中(参见表9)。抗体89的VL CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:254(VL CDR1)；SEQ ID NO:249(VL CDR2)以及SEQ ID NO:255(VL CDR3)。抗体89的重链恒定区阐述在SEQ ID NO:269中。抗体89的轻链恒定区阐述在SEQ ID NO:283中。因此，在某些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID No:245、2和3中所阐述的可变重链CDR组(CDR1、CDR2和CDR3)以及如SEQ IDNo:254、249和255中所阐述的轻链可变区CDR组。在其他实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含可变轻链和如SEQ ID NO:260中所阐述的重链可变区，该可变轻链包含SEQID NO:252中所阐述的氨基酸残基。
在一个实施方案中，本公开内容提供一种抗CD117抗体或其抗原结合片段，其包含对应于抗体249的结合区的结合区，例如，CDR、可变区。抗体249(即，Ab249)的重链可变区(VH)氨基酸序列阐述在SEQ ID NO:238中(参见表9)。抗体249的VH CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:286(VH CDR1)；SEQ ID NO:2(VH CDR2)以及SEQ ID NO:287(VHCDR3)。抗体249的轻链可变区(VL)氨基酸序列描述在SEQ ID NO:242中(参见表9)。抗体249的VL CDR域氨基酸序列阐述在以下各项中：SEQ ID NO:288(VL CDR1)；SEQ ID NO:249(VLCDR2)以及SEQ ID NO:289(VL CDR3)。抗体249的重链恒定区阐述在SEQ ID NO:269中。抗体249的轻链恒定区阐述在SEQ ID NO:283中。因此，在某些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID No:286、2和287中所阐述的可变重链CDR组(CDR1、CDR2和CDR3)以及如SEQ ID No:288、249和289中所阐述的轻链可变区CDR组。在其他实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含可变轻链和如SEQ ID NO:238中所阐述的重链可变区，该可变轻链包含SEQ ID NO:242中所阐述的氨基酸残基。
进一步地，本公开内容包括的是包含如SEQ ID No:147至168中所阐述的结合区(重链和轻链CDR或可变区)的抗CD117抗体药物缀合物。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQID NO:148的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ IDNO:149的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:150的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:151的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:152的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ IDNO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:153的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:154的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:155的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:156的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:157的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:158的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:159的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:160的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:161的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:162的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQID NO:163的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:164的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ IDNO:165的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:166的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:167的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:168的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:169的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:170的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:171的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ IDNO:172的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:173的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:174的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:175的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:176的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:177的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:178的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:179的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:180的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:181的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:172的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:182的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:183的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:184的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:185的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:186的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:187的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:188的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:189的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:190的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:191的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQID NO:192的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:193的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ IDNO:194的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:195的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:196的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:197的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:198的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:199的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:200的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ IDNO:201的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:190的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:202的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:203的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:204的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:205的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:206的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:207的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:208的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:209的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:210的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:211的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:212的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:213的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:214的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:215的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:216的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:217的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:218的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:219的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:220的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQID NO:221的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:222的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ IDNO:223的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:224的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:225的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:226的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:227的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:228的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ IDNO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:229的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:230的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:231的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:232的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:233的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:234的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:235的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:236的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。
在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:237的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:243的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:244的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:251的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:252的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:243的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:256的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:258的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:256的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:260的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:252的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:238的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:239的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQID NO:239的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:147的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ IDNO:240的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:238的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:241的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合部分包含如SEQ ID NO:238的氨基酸序列中所阐述的重链可变区、以及如SEQ ID NO:242的氨基酸序列中所阐述的轻链可变区。
本文描述的某些抗CD117抗体是中性抗体，因为这些抗体基本上不抑制CD117表达细胞上的CD117活性。中性抗体可以使用例如体外干细胞因子(SCF)依赖性细胞增生测定来鉴定(参见，例如，本文描述的实施方案11)。在SCF依赖性细胞增殖测定中，中性CD117抗体不会杀死依赖于SCF分裂的CD34+细胞，因为中性抗体不会阻断SCF与CD117结合，以至于抑制CD117活性。
鉴于中性抗体具有与人CD117特异性结合的能力，它们可以用于诊断目的，而且当与细胞毒素(如本文描述的那些)缀合时，它们也可有效地杀死CD117表达细胞。通常，用于缀合物的抗体具有抗体独有的激动或拮抗活性。然而，本文描述一种用于缀合物的独特方法，尤其是在该缀合物在干细胞移植之前被用作调理剂的背景下。尽管拮抗性抗体单独或与细胞毒素结合作为缀合物可能是有效的，但鉴于抗体单独的杀伤能力，除细胞毒素之外，使用还包含中性抗CD117抗体的缀合物进行调理呈现了一种替代策略，其中虽然抗体的活性次于细胞毒素的作用，但是抗体的内化和亲和力特征(例如，解离速率)对于细胞毒素的有效递送是重要的。
中性抗CD117抗体的实例包括Ab58、Ab61、Ab66、Ab67、Ab68和Ab69。中性抗CD117抗体CDR的CDR氨基酸序列的比较显示了所鉴定的两组中性抗体之间的共有序列。Ab58和Ab61的重链和轻链可变区的比较描述在PCT/US2018/057172中，该文献通过引用以其整体并入。Ab58和Ab61共享相同的轻链CDR和HC CDR3，但在HC CDR1和HC CDR2中略微不同。HC CDR1和CDR2的共有序列描述在SEQ ID No:133和134中。Ab66、Ab67、Ab68和Ab69也是中性抗体。这些抗体的重链和轻链可变区描述在PCT/US2018/057172中，该文献通过引用以其整体并入。虽然Ab66、Ab67、Ab68和Ab69共享相同的轻链CDR和相同的HC CDR3，但这些抗体在其HCCDR1和HC CDR2区内具有可变性。这些抗体在HC CDR1和HC CDR2区中的共有序列分别提供在SEQ ID No:139和140中。
本文还提供拮抗剂抗体，其包括Ab54、Ab55、Ab56和Ab57。这些抗体的可变重链和轻链氨基酸序列的比较提供在PCT/US2018057172中，该文献通过引用以其整体并入。虽然Ab54、Ab55、Ab56和Ab57共享相同的轻链CDR和相同的HC CDR3，但这些抗体在其HC CDR1和HC CDR2区内具有可变性。这些抗体在HC CDR1和HC CDR2区中的共有序列分别提供在SEQID No:127和128中。
本文描述的抗CD117抗体可以呈以下的形式：全长抗体、双特异性抗体、双可变域抗体、多链或单链抗体和/或特异性结合人CD117的结合片段，其包括但不限于Fab、Fab'、(Fab')2、Fv)、scFv(单链Fv)、替代抗体(包括替代轻链构建体)、单域抗体、骆驼化抗体等。它们还可以是或衍生自任何同种型，其包括例如IgA(例如，IgA1或IgA2)、IgD、IgE、IgG(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)或IgM。在一些实施方案中，抗CD117抗体是IgG(例如，IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)。
与本文描述的方法结合使用的抗体包括上述那些抗体的变体，如含有或缺少Fc域的抗体片段，以及本文描述的非人抗体的人源化变体和含有本文描述的抗体或抗体片段的一个或多个或所有CDR或其等效区域的抗体样蛋白质支架(例如，10Fn3域)。前述抗体的示例性抗原结合片段包括双可变免疫球蛋白域、单链Fv分子(scFv)、双抗体、三抗体、纳米抗体、抗体样蛋白质支架、Fv片段、Fab片段、F(ab’)2分子和串联di-scFv等。
在一个实施方案中，提供包含一种或多种放射性标记的氨基酸的抗CD117抗体。放射性标记的抗CD117抗体可以用于诊断和治疗目的二者(与放射性标记的分子缀合是另一可能的特性)。用于多肽的标记的非限制性实例包括但不限于3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc以及125I、131I和186Re。用于制备放射性标记的氨基酸和相关肽衍生物的方法是本领域已知的(参见例如Junghans等人，见于Cancer Chemotherapy and Biotherapy 655-686(第2版,Chafner和Longo编,Lippincott Raven(1996))以及美国专利号4,681,581、美国专利号4,735,210、美国专利号5,101,827、美国专利号5,102,990(U.S.RE35,500)、美国专利号5,648,471和美国专利号5,697,902。例如，放射性同位素可以通过氯胺T方法来缀合。
本文描述的抗CD117抗体或结合片段还可以包括改变抗体和/或片段的特性的修饰和/或突变，如增加半衰期、增加或降低ADCC等的那些修饰和/或突变，如本领域已知的。
在一个实施方案中，抗CD117抗体或其结合片段包含变体(或经修饰的)Fc区，其中所述变体Fc区相对于野生型Fc区包含至少一个氨基酸修饰，使得所述分子对FcγR具有改变的亲和力。通过晶体学研究已知Fc区内的某些氨基酸位置与FcγR直接接触。具体地，氨基酸234-239(铰链区)、氨基酸265-269(B/C环)、氨基酸297-299(C'/E环)和氨基酸327-332(F/G)环。(参见Sondermann等人，2000Nature,406:267-273)。在一些实施方案中，本文描述的抗CD117抗体可以包含变体Fc区，其包含基于结构和晶体学分析与FcγR直接接触的至少一个残基的修饰。在一个实施方案中，根据如Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest,5th Ed.Public Health Service,NH1,MD(1991)(该文献明确地通过引用并入本文)中的EU索引，抗CD117抗体(或其片段)的Fc区在氨基酸265处包含氨基酸取代。“如Kabat中的EU索引”是指人IgG1EU抗体的编号。EU索引或如Kabat中的EU索引或EU编号方案是指EU抗体的编号(Edelman等人，1969,Proc Natl Acad Sci USA 63:78-85，其在此通过引用完全并入)。在一个实施方案中，Fc区包含D265A突变。在一个实施方案中，Fc区包含D265C突变。在一些实施方案中，根据如Kabat中的EU索引，抗CD117抗体(或其片段)的Fc区在氨基酸234处包含氨基酸取代。在一个实施方案中，Fc区包含L234A突变。在一些实施方案中，根据如Kabat中的EU索引，抗CD117抗体(或其片段)的Fc区在氨基酸235处包含氨基酸取代。在一个实施方案中，Fc区包含L235A突变。在又另一实施方案中，Fc区包含L234A和L235A突变。在进一步的实施方案中，Fc区包含D265C、L234A和L235A突变。
在某些方面，与不包含一个或多个氨基酸取代的野生型Fc域相比，变体IgG Fc域包含一个或多个氨基酸取代，其导致对Fc.γ.R和/或C1q的结合亲和力降低或消除。Fc结合相互作用对于多种效应子功能和下游信号传导事件是至关重要的，这些事件包括但不限于抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)。因此，在某些方面，包含经修饰的Fc区(例如，包含L234A、L235A和D265C突变)的抗体的效应子功能大幅度减少或消除。
可以使用本领域已知的多种技术来确定对Fc区的亲和力，这些技术例如但不限于平衡方法(例如，酶联免疫吸附测定(ELISA)；KinExA，Rathanaswami等人，AnalyticalBiochemistry,Vol.373:52-60,2008；或放射免疫测定(RIA))、或通过表面等离子体共振测定或其他基于动力学的测定的机制(例如，BIACORETM分析或OctetTM分析(forteBIO))，以及其他方法，如间接结合测定、竞争性结合测定、荧光共振能量转移(FRET)、凝胶电泳和色谱法(例如，凝胶过滤)。这些和其他方法可以利用一种或多种被检查组分上的标记和/或采用多种检测方法，这些检测方法包括但不限于显色、荧光、发光或同位素标记法。对结合亲和力和动力学的详细描述可以见于Paul,W.E.,ed.,Fundamental Immunology,4th Ed.,Lippincott-Raven,Philadelphia(1999)，其重点关注抗体-免疫原相互作用。竞争性结合测定的一个实例是放射免疫测定，其包含在递增量的未标记抗原的存在下将标记抗原与感兴趣的抗体一起温育，并检测与标记抗原结合的抗体。感兴趣的抗体对特定抗原的亲和力以及结合解离速率可以通过scatchard作图分析从数据确定。与第二抗体的竞争也可以使用放射免疫测定来确定。在这种情况下，在递增量的未标记第二抗体的存在下，将抗原与缀合到标记化合物的感兴趣的抗体一起温育。
可以对本公开抗体进行进一步工程化改造，以通过引入额外的Fc突变来进一步调节抗体(例如，相对于具有未经修饰的Fc区的抗体)半衰期，并且包括位置250、252、253、254、256、257、307、376、380、428、434和435，该额外的Fc突变如描述例如在以下文献中的那些：(Dall'Acqua等人，(2006)J Biol Chem 281:23514-24)、(Zalevsky等人，(2010)NatBiotechnol 28:157-9)、(Hinton等人，(2004)J Biol Chem 279:6213-6)、(Hinton等人，(2006)J Immunol176:346-56)、(Shields等人，(2001)J Biol Chem 276:6591-604)、(Petkova等人，(2006)Int Immunol 18:1759-69)、(Datta-Mannan等人，(2007)Drug MetabDispos 35:86-94)、(Vaccaro等人，(2005)Nat Biotechnol 23:1283-8)、(Yeung等人，(2010)Cancer Res 70:3269-77)和(Kim等人，(1999)Eur J Immunol 29:2819-25)。可以单独或组合进行的示例性突变是T250Q、M252Y、1253A、S254T、T256E、P2571、T307A、D376V、E380A、M428L、H433K、N434S、N434A、N434H、N434F、H435A和H435R突变。
因此，在一个实施方案中，Fc区包含导致半衰期缩短的突变。在抗体预期充当短寿命治疗剂的某些情况下，例如在本文描述的先施用抗体随后施用HSC的调理步骤中，具有短半衰期的抗体可能是有利的。理想地，在递送HSC之前，抗体将基本上被清除，该HSC通常也表达CD117，但不是抗CD117抗体的靶标，这与内源性干细胞不同。在一个实施方案中，Fc区在位置435处包含突变(根据Kabat的EU索引)。在一个实施方案中，在一个实施方案中，突变是H435A突变。
在一个实施方案中，本文描述的抗CD117抗体的半衰期为等于或小于约24小时、等于或小于约22小时、等于或小于约21小时、等于或小于约20小时、等于或小于约19小时、等于或小于约18小时、等于或小于约17小时、等于或小于约16小时、等于或小于约15小时、等于或小于约14小时、等于或小于约13小时、等于或小于约12小时、等于或小于约11小时、或等于或小于约10小时。在一个实施方案中，抗体的半衰期为约11小时至约24小时；约12小时至约22小时；约10小时至约20小时；约8小时至约18小时；或约14小时至约24小时。在另一实施方案中，本文描述的抗CD117抗体的半衰期(例如，在人中)为约1-5小时、约5-10小时、约10-15小时、约15-20小时、或约20至25小时。
在一些方面，Fc区包含两个或更多个突变，这些突变赋予减少的半衰期并极大地削弱或完全消除抗体的效应子功能。在一些实施方案中，Fe区包含导致半衰期缩短的突变和可以与FcγR直接接触(例如，如基于结构和晶体学分析)的至少一个残基的突变。在一个实施方案中，Fc区包含H435A突变、L234A突变和L235A突变。在一个实施方案中，Fc区包含H435A突变和D265C突变。在一个实施方案中，Fc区包含H435A突变、L234A突变、L235A突变和D265C突变。
在一些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段通过抗体或其抗原结合片段的Fc域中的半胱氨酸残基与细胞毒素(例如，鹅膏毒素)缀合。在一些实施方案中，通过抗体或其抗原结合片段的Fc域中的突变来引入半胱氨酸残基。例如，半胱氨酸残基可以选自下组，该组由以下各项组成：Cys118、Cys239和Cys265。在一个实施方案中，根据如Kabat中的EU索引，抗CD117抗体(或其片段)的Fc区在氨基酸265处包含氨基酸取代。在一个实施方案中，Fc区包含D265C突变。在一个实施方案中，Fc区包含D265C和H435A突变。在一个实施方案中，Fc区包含D265C、L234A和L235A突变。在一个实施方案中，Fc区包含D265C、L234A、L235A和H435A突变。在一个实施方案中，根据如Kabat中的EU索引，抗CD117抗体或其抗原结合片段的Fc区在氨基酸239处包含氨基酸取代。在一个实施方案中，Fc区包含S239C突变。在一个实施方案中，Fc区包含L234A突变、L235A突变、S239C突变和D265A突变。在另一实施方案中，Fc区包含S239C和H435A突变。在另一实施方案中，Fc区包含L234A突变、L235A突变和S239C突变。在又另一实施方案中，Fc区包含H435A突变、L234A突变、L235A突变和S239C突变。在又另一实施方案中，Fc区包含H435A突变、L234A突变、L235A突变、S239C突变和D265A突变。
尤其是，除非另有指示，否则Fc氨基酸位置参考EU编号索引。
在这些方面的一些实施方案中，半胱氨酸残基天然存在于抗CD117抗体或其抗原结合片段的Fc域中。例如，Fc域可以是IgG Fc域(如人IgG1 Fc域)，并且半胱氨酸残基可以选自下组，该组由以下各项组成：Cys261、Csy321、Cys367和Cys425。
例如，在一个实施方案中，对抗体67的Fc区进行修饰以包含D265C突变(例如，SEQID NO:111)。在另一实施方案中，对抗体67的Fc区进行修饰以包含D265C、L234A和L235A突变(例如，SEQ ID NO:112)。在又另一实施方案中，对抗体67的Fc区进行修饰以包含D265C和H435A突变(例如，SEQ ID NO:113)。在进一步的实施方案中，对抗体67的Fc区进行修饰以包含D265C、L234A、L235A和H435A突变(例如，SEQ ID NO:114)。
关于抗体55，在一个实施方案中，对抗体55的Fc区进行修饰以包含D265C突变(例如，SEQ ID NO:117)。在另一实施方案中，对抗体55的Fc区进行修饰以包含D265C、L234A和L235A突变(例如，SEQ ID NO:118)。在又另一实施方案中，对抗体55的Fc区进行修饰以包含D265C和H435A突变(例如，SEQ ID NO:119)。在进一步的实施方案中，对抗体55的Fc区进行修饰以包含D265C、L234A、L235A和H435A突变(例如，SEQ ID NO:120)。
可以对抗体54、抗体55、抗体56、抗体57、抗体58、抗体61、抗体66、抗体67、抗体68或抗体69中的任何一种的Fc区进行修饰以包含D265C突变(例如，如在SEQ ID NO:123中)；D265C、L234A和L235A突变(例如，如在SEQ ID NO:124中)；D265C和H435A突变(例如，如在SEQ ID NO:125中)；或D265C、L234A、L235A和H435A突变(例如，如在SEQ ID NO:126中)。
本文描述的变体Fc域是根据组成它们的氨基酸修饰来定义的。对于本文讨论的关于Fc区的所有氨基酸取代，编号始终根据EU索引。因此，例如，相对于亲本Fc域，D265C是一种EU位置265处的天冬氨酸(D)被半胱氨酸(C)取代的Fc变体。同样地，例如，相对于亲本Fc域，D265C/L234A/L235A定义一种在EU位置265(D至C)、234(L至A)和235(L至A)处具有取代的变体Fc变体。变体也可以根据其突变的EU氨基酸位置中的最终氨基酸组成来定名。例如，L234A/L235A突变体可以被称为LALA。应当注意，取代的顺序是任意的。
在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含具有与本文公开的SEQID No至少约90％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％相同的氨基酸序列的可变区。替代地，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含CDR，该CDR包含本文公开的SEQ ID No，其具有本文描述的可变区的框架区，该可变区具有与本文公开的SEQ ID No至少约90％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％相同的氨基酸序列。
在某些实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段在用作缀合物的一部分时具有一定的解离速率，这是特别有利的。例如，在某些实施方案中，抗CD117抗体对人CD117和/或恒河猴CD117的解离速率常数(Koff)为1x10-2至1x10-3、1x10-3至1x10-4、1x10-5至1x10-6、1x10-6至1x10-7或1x10-7至1x10-8，如通过生物层干涉测量法(BLI)所测量的。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段以以下的KD结合CD117(例如，人CD117和/或恒河猴CD117)：约100nM或更小、约90nM或更小、约80nM或更小、约70nM或更小、约60nM或更小、约50nM或更小、约40nM或更小、约30nM或更小、约20nM或更小、约10nM或更小、约8nM或更小、约6nM或更小、约4nM或更小、约2nM或更小、约1nM或更小，如通过生物层干涉测量法(BLI)测定所确定的。
本文公开的抗体及其结合片段可以用于缀合物，如下文更详细描述的。
可以使用例如如美国专利号4,816,567中所描述的重组方法和组合物来产生抗体。在一个实施方案中，提供编码本文描述的抗CD117抗体的分离的核酸。此种核酸可以编码包含抗体的VL的氨基酸序列和/或包含抗体的VH的氨基酸序列(例如，抗体的轻链和/或重链)。在进一步的实施方案中，提供一种或多种包含此种核酸的载体(例如，表达载体)。在进一步的实施方案中，提供包含此种核酸的宿主细胞。在一个此种实施方案中，宿主细胞包含(例如，已用以下各项转化)：(1)载体，其包含核酸，该核酸编码包含抗体的VL的氨基酸序列和包含抗体的VH的氨基酸序列；或(2)第一载体和第二载体，该第一载体包含编码包含抗体的VL的氨基酸序列的核酸，并且该第二载体包含编码包含抗体的VH的氨基酸序列的核酸。在一个实施方案中，宿主细胞是真核细胞，例如，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴细胞(例如，Y0、NS0、Sp20细胞)。在一个实施方案中，提供一种制造抗CLL-1抗体的方法，其中该方法包括在适合于抗体表达的条件下培养包含编码抗体的核酸的宿主细胞，如上文所提供的，并且任选地从宿主细胞(或宿主细胞培养基)中回收抗体。
对于抗CD117抗体的重组产生，分离编码抗体的核酸，例如，如上文所描述的，并且将其插人到一种或多种载体中，以在宿主细胞中进行进一步克隆和/或表达。可以使用常规程序(例如，通过使用能够与编码抗体的重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)来容易地分离此种核酸并对其进行测序。
用于克隆或表达编码抗体的载体的合适宿主细胞包括本文描述的原核或真核细胞。例如，抗体可以在细菌中产生，尤其是当不需要糖基化和Fc效应子功能时。对于抗体片段和多肽在细菌中的表达，参见，例如，美国专利号5,648,237、5,789,199和5,840,523。(还参见Charlton,Methods in Molecular Biology,Vol.248(B.K.C.Lo,ed.,Humana Press,Totowa,N.J.,2003),pp.245-254，其描述抗体片段在大肠杆菌中的表达)表达后，抗体可以从细菌细胞糊中以可溶性级分分离，并且可以进一步纯化。
脊椎动物细胞也可以用作宿主。例如，适应于悬浮生长的哺乳动物细胞系可能是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其他实例是：由SV40(COS-7)转化的猴肾CV1系；人胚肾系(293或293细胞，如描述例如在Graham等人，J.Gen Virol.36:59(1977)中的)；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠支持细胞(TM4细胞，如描述例如在Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)中的)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈肿瘤细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK；水牛大鼠肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞，如描述例如在Mather等人,Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中的；MRC 5细胞；以及FS4细胞。其他有用的哺乳动物宿主细胞系包括：中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，其包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；以及骨髓瘤细胞系，如Y0,NS0和Sp2/0。对于适合于抗体产生的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见，例如，Yazaki和Wu，Methods in Molecular Biology,Vol.248(B.K.C.Lo,ed.,Humana Press,Totowa,N.J.),pp.255-268(2003)。
在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含具有与本文公开的SEQID No至少约90％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％相同的氨基酸序列的可变区。替代地，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含CDR，该CDR包含本文公开的SEQ ID No，其具有本文描述的可变区的框架区，该可变区具有与本文公开的SEQ ID No至少约90％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％相同的氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含具有本文公开的氨基酸序列的重链可变区和重链恒定区。在一个实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含具有本文公开的氨基酸序列的轻链可变区和轻链恒定区。在又另一实施方案中，抗CD117抗体或其抗原结合片段包含具有本文公开的氨基酸序列的重链可变区、轻链可变区、重链恒定区和轻链恒定区。
b.抗CD45抗体
本方法还包括使用与CD45多肽(例如，人CD45多肽)特异性结合的抗体及其抗原结合片段、以及该抗体及其抗原结合片段的用途。在示例性实施方案中，与CD45多肽特异性结合的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区。抗CD45抗体可以用于本文描述的ADC。
CD45是一种造血细胞特异性跨膜蛋白酪氨酸磷酸酶，其对于T和B细胞抗原受体介导的信号传导是至关重要的。CD45包括大的细胞外域和含有胞质域的磷酸酶。取决于刺激的性质和所涉及的细胞类型，CD45可以充当正调节物和负调节物二者。尽管CD45基因中可能存在大量排列，但传统上在人中鉴定出仅六种同种型。这些同种型是RA、RO、RB、RAB、RBC和RABC(Hermiston等人，2003“CD45:a critical regulator of signaling thresholdsin immune cells.”Annu Rev Immunol.2:107-137.)。CD45RA在初始T细胞上表达，并且CD45RO在激活和记忆T细胞、一些B细胞亚群、激活的单核细胞/巨噬细胞、以及粒细胞上表达。CD45RB在外周B细胞、初始T细胞、胸腺细胞上表达，在巨噬细胞和树突细胞上表达较弱。能够结合人CD45(mRNA NCBI参考序列：NM_080921.3，蛋白质NCBI参考序列：NP_563578.2)的抗体和抗原结合片段，包括能够结合同种型CD45RO的那些，可以与本文描述的组合物和方法结合使用，以至于促进将造血干细胞移植物植入到需要造血干细胞移植物疗法的患者体内。CD45的多种同种型由初级转录物中34个外显子的可变剪接引起。外显子4、5、6和可能7的剪接引起多种CD45变化。在下表1所描述的CD45同种型中观察到选择性外显子表达。
表1.各种CD45同种型中的外显子表达
CD45同种型 外显子表达模式
CD45RA 仅表达外显子4
CD45RB 仅表达外显子5
CD45RC 仅表达外显子6
CD45RO 不表达外显子4-6
可变剪接可以导致在CD45蛋白的各种同种型(例如，CD45RA、CD45RAB、CD45RABC)中表达的单个外显子或外显子组合。相比之下，CD45RO缺少外显子4-6的表达，并且由外显子1-3和7-34的组合生成。有证据表明，也可以将外显子7从蛋白质中排除，从而导致外显子1-3和8-34剪接在一起。这种蛋白质定名为E3-8，已在mRNA水平上检测到，但目前尚未通过流式细胞术进行鉴定。
CD45RO是目前唯一已知的在造血干细胞上表达的CD45同种型。CD45RA和CD45RABC尚未被检测到，或被排除在造血干细胞的表型之外。在小鼠中进行的研究有证据表明，CD45RB在胎儿造血干细胞上表达，但不存在于成人骨髓造血干细胞上。尤其是，CD45RC在亚洲人群内所发现的外显子6中具有较高的多态性比率(在约25％的日本人群中发现了CD45RC中外显子6处的多态性)。这种多态性导致CD45RO的高表达以及CD45RA、CD45RB和CD45RC的水平降低。另外，CD45RA变体(如CD45RAB和CD45RAC)在与自身免疫性疾病相关联的外显子4中表现出多态性。
造血干细胞上存在CD45RO，并且其在其他免疫细胞(如T和B淋巴细胞亚群以及各种髓系细胞)上的表达相对有限，使得CD45RO成为调理疗法的特别适合的靶标，该调理疗法用于需要造血干细胞移植的患者。由于CD45RO仅缺少外显子4、5和6的表达，因此将其用作免疫原使得能够筛选pan CD45Ab和CD45RO特异性抗体。
可以与本文描述的患者调理方法结合使用的抗CD45抗体包括例如可商购于
Figure BDA0003423520310000921
(San Diego,CA)的抗CD45抗体克隆HI30，以及其人源化变体。可以根据本领域已知的程序，通过用种系人抗体的框架残基和恒定区残基替代非人抗体的框架残基和恒定区残基来进行抗体的人源化。可以与本文描述的方法结合使用的额外抗CD45抗体包括可商购于
Figure BDA0003423520310000931
(Cambridge,MA)的抗CD45抗体ab10558、EP322Y、MEM-28、ab10559、0.N.125、F10-89-4、HIe-1、2B11、YTH24.5、PD7/26/16、F10-89-4、1B7、ab154885、B-A11、磷光体S1007、ab170444、EP350、Y321、GA90、D3/9、X1 6/99和LT45，以及其人源化变体。可以与本文描述的患者调理程序结合使用的其他抗CD45抗体包括可商购于SIGMA-
Figure BDA0003423520310000932
(St.Louis,MO)的抗CD45抗体HPA000440，以及其人源化变体。可以与本文描述的患者调理方法结合使用的额外抗CD45抗体包括鼠源性单克隆抗体BC8，以及其人源化变体，该鼠源性单克隆抗体描述例如在Matthews等人，Blood78:1864-1874,1991中，该文献的公开内容通过引用并入本文，因为其涉及抗CD45抗体。可以与本文描述的方法结合使用的其他抗CD45抗体包括单克隆抗体YAML568，以及其人源化变体，该单克隆抗体描述例如在Glatting等人，J.Nucl.Med.8:1335-1341,2006中，该文献的公开内容通过引用并入本文，因为其涉及抗CD45抗体。可以与本文描述的患者调理程序结合使用的额外抗CD45抗体包括单克隆抗体YTH54.12和YTH25.4，以及其人源化变体，该两种单克隆抗体描述例如在Brenner等人，Ann.N.Y.Acad.Sci.996:80-88,2003中，该文献的公开内容通过引用并入本文，因为其涉及抗CD45抗体。可以与本文描述的患者调理方法结合使用的额外抗CD45抗体包括UCHL1、2H4、SN130、MD4.3、MBI和MT2，以及其人源化变体，这些额外抗体描述例如在Brown等人，Immunology 64:331-336,1998中，该文献的公开内容通过引用并入本文，因为其涉及抗CD45抗体。可以与本文描述的方法结合使用的额外抗CD45抗体包括从美国模式培养物保藏所(American Type Culture Collection，ATCC)登录号RA3-6132、RA3-2C2和TIB122中产生和释放的那些抗体以及单克隆抗体C363.16A和13/2，以及其人源化变体，该两种单克隆抗体描述例如在Johnson等人，J.Exp.Med.169:1179-1184,1989中，该文献的公开内容通过引用并入本文，因为其涉及抗CD45抗体。可以与本文描述的患者调理方法结合使用的其他抗CD45抗体包括单克隆抗体AHN-12.1、AHN-12、AHN-12.2、AHN-12.3、AHN-12.4、HLe-1和KC56(T200)，以及其人源化变体，这些单克隆抗体描述例如在Harvath等人，J.Immunol.146:949-957,1991中，该文献的公开内容通过引用并入本文，因为其涉及抗CD45抗体。
可以与本文描述的患者调理方法结合使用的额外抗CD45抗体包括描述例如在以下文献中的那些抗体：美国专利号7,265,212(其描述例如抗CD45抗体39E11、16C9和1G10，以及其他克隆)；7,160,987(其描述例如由ATCC登录号HB-11873产生和释放的抗CD45抗体，如单克隆抗体6G3)；以及6,099,838(其描述例如抗CD45抗体MT3，以及由ATCC登录号HB220(也被定名为MB23G2)和HB223产生和释放的抗体)，以及US 2004/0096901和US 2008/0003224(其描述例如由ATCC登录号PTA-7339产生和释放的抗CD45抗体，如单克隆抗体17.1)，这些文献各自的公开内容通过引用并入本文，因为它们涉及抗CD45抗体。
可以与本文描述的患者调理方法结合使用的其他抗CD45抗体包括从ATCC登录号MB4B4、MB23G2、14.8、GAP 8.3、74-9-3、I/24.D6、9.4、4B2、M1/9.3.4.HL.2中产生和释放的抗体，以及其人源化和/或亲和力成熟的变体。可以例如使用本文描述的或本领域已知的体外展示技术(如噬菌体展示)来进行亲和力成熟。
可以与本文描述的患者调理方法结合使用的额外抗CD45抗体包括抗CD45抗体T29/33，其描述例如在Morikawa等人，Int.J.Hematol.54:495-504,1991中，该文献的公开内容通过引用并入本文，因为其涉及抗CD45抗体。
在某些实施方案中，抗CD45抗体选自艾妥单抗(apamistamab)(也就是已知的90Y-BC8、Iomab-B、BC8；如描述例如在US20170326259、WO2017155937和Orozco等人，Blood.127.3(2016):352-359.中的)或BC8-B10(如描述例如在Li等人，PloS one 13.10(2018):e0205135.中的)，这些文献各自通过引用并入。其他抗CD45抗体已经描述例如在以下文献中：WO2003048327、WO2016016442、US20170226209、US20160152733、US9701756；US20110076270或US7825222，这些文献各自通过引用并入，因为它们涉及抗CD45抗体。
在一个实施方案中，抗CD45抗体包含本文描述的抗CD45抗体的重链、以及本文描述的抗CD45抗体的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD45抗体包含重链以及轻链可变区，该重链包含本文描述的抗CD45抗体的CDR1、CDR2和CDR3，并且该轻链可变区包含本文描述的抗CD45抗体的CDR1、CDR2和CDR3。
在另一实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，该重链可变区包含与本文的抗CD45抗体具有至少约90％同一性的氨基酸序列，例如，与本文的抗CD45抗体具有至少约95％、约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗体包含经修饰的重链(HC)可变区，其包含本文的抗CD45抗体或其变体的HC可变域，该变体(i)与抗CD45抗体的不同之处在于1、2、3、4或5个氨基酸取代、添加或缺失；(ii)与抗CD45抗体的不同之处在于至多5、4、3、2或1个氨基酸取代、添加或缺失；(iii)与抗CD45抗体的不同之处在于1-5、1-3、1-2、2-5或3-5个氨基酸取代、添加或缺失和/或(iv)包含与抗CD45抗体至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％或更多相同的氨基酸序列，其中在(i)-(iv)的任何一项中，氨基酸取代可以是保守性氨基酸取代或非保守性氨基酸取代；并且其中经修饰的重链可变区相对于抗CD45抗体的重链可变区可以具有增强的生物活性，同时保留抗体的CD45结合特异性。
前述出版物中的每一个的公开内容都通过引用并入本文，因为它们涉及抗CD45抗体。可以与本文描述的组合物和方法结合使用的抗体和抗原结合片段包括上述抗体及其抗原结合片段，以及上述那些非人抗体和抗原结合片段的人源化变体和结合与上述那些表位相同的表位的抗体或抗原结合片段，如例如通过竞争性CD45结合测定所评估的。
c.抗CD2抗体
人CD2也被称为T细胞表面抗原T11/Leu-5、T11、CD2抗原(p50)和绵羊红血细胞受体(SRBC)。CD2在T细胞上表达。已经鉴定出人CD2的两种同种型。同种型1包含351个氨基酸，并且描述在Seed,B.等人，(1987)84:3365-69(还参见Sewell等人，(1986)83:8718-22)中并描述如下(NCBI参考序列：NP_001758.2)：
msfpckfvas fllifnvssk gavskeitna letwgalgqd inldipsfqm sddiddikwe
ktsdkkkiaq frkeketfke kdtyklfkng tlkikhlktd dqdiykvsiy dtkgknvlek
ifdlkiqerv skpkiswtci nttltcevmn gtdpelnlyq dgkhlklsqr vithkwttsl
sakfkctagn kvskessvep vscpekgldi yliigicggg sllmvfvall vfyitkrkkq
rsrrndeele trahrvatee rgrkphqipa stpqnpatsq hpppppghrs qapshrpppp
ghrvqhqpqk rppapsgtqv hqqkgpplpr prvqpkpphg aaenslspss n(SEQ ID NO:293)
CD2的第二同种型是377个氨基酸，并且在本文中被鉴定为NCBI参考序列：NP_001315538.1。
在一个实施方案中，可以与本文描述的组合物和方法结合使用的抗CD2抗体包括具有一个或多个或所有以下CDR的那些抗体：
CDR-H1，其具有氨基酸序列EYYMY(SEQ ID NO:294)；
CDR-H2，其具有氨基酸序列RIDPEDGSIDYVEKFKK(SEQ ID NO:295)；
CDR-H3，其具有氨基酸序列GKFNYRFAY(SEQ ID NO:296)；
CDR-L1，其具有氨基酸序列RSSQSLLHSSGNTYLN(SEQ ID NO:297)；
CDR-L2，其具有氨基酸序列LVSKLES(SEQ ID NO:298)；以及
CDR-L3，其具有氨基酸序列MQFTHYPYT(SEQ ID NO:299)。
在一个实施方案中，抗CD2抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区具有氨基酸序列QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEYYMYWVRQAPGQGLELMGRIDPEDGSIDYVEKFKKKVTLTADTSSSTAYMELSSLTSDDTAVYYCARGKFNYRFAYWGQGTLVTVSS(SEQ IDNO:300)，并且该轻链可变区具有氨基酸序列DVVMTQSPPSLLVTLGQPASISCRSSQSLLHSSGNTYLNWLLQRPGQSPQPLIYLVSKLESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISGVEAEDVGVYYCMQFTHYPYTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:301)。
在一个实施方案中，可以与本文描述的组合物和方法结合使用的抗CD2抗体包括具有一个或多个或所有以下CDR的那些抗体：
CDR-H1，其具有氨基酸序列GFTFSSY(SEQ ID NO:302)；
CDR-H2，其具有氨基酸序列SGGGF(SEQ ID NO:303)；
CDR-H3，其具有氨基酸序列SSYGEIMDY(SEQ ID NO:304)；
CDR-L1，其具有氨基酸序列RASQRIGTSIH(SEQ ID NO:305)；
CDR-L2，其具有氨基酸序列YASESIS(SEQ ID NO:306)；以及
CDR-L3，其具有氨基酸序列QQSHGWPFTF(SEQ ID NO:307)。
在一个实施方案中，抗CD2抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区具有氨基酸序列EVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYDMSWVRQTPEKRLEWVASISGGGFLYYLDSVKGRFTISRDNARNILYLHMTSLRSEDTAMYYCARSSYGEIMDYWGQGTSVTVSS(SEQ IDNO:308)，并且该轻链可变区具有氨基酸序列DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQRIGTSIHWYQQRTTGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDVADYYCQQSHGWPFTFGGGTKLEIE(SEQ IDNO:309)。
在另一实施方案中，可以与本文描述的组合物和方法结合使用的抗CD2抗体包括具有一个或多个或所有以下CDR的那些抗体：
CDR-H1，其具有氨基酸序列GFTFSSY(SEQ ID NO:302)；
CDR-H2，其具有氨基酸序列SGGGF(SEQ ID NO:303)；
CDR-H3，其具有氨基酸序列SSYGELMDY(SEQ ID NO:310)；
CDR-L1，其具有氨基酸序列RASQRIGTSIH(SEQ ID NO:305)；
CDR-L2，其具有氨基酸序列YASESIS(SEQ ID NO:306)；以及
CDR-L3，其具有氨基酸序列QQSHGWPFTF(SEQ ID NO:307)。
在一个实施方案中，抗CD2抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区具有氨基酸序列EVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYDMSWVRQTPEKRLEWVASISGGGFLYYLDSVKGRFTISRDNARNILYLHMTSLRSEDTAMYYCARSSYGELMDYWGQGTSVTVSS(SEQ IDNO:311)，并且该轻链可变区具有氨基酸序列DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQRIGTSIHWYQQRTTGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDVADYYCQQSHGWPFTFGGGTKLEIE(SEQ IDNO:309)。
含有前述CDR序列的抗体及其抗原结合片段描述例如在美国专利号6,849,258中，该文献的公开内容通过引用并入本文，因为其涉及抗CD2抗体及其抗原结合片段。
d.抗CD5抗体
人CD5也被称为淋巴细胞抗原T1、T1、Leu-1和LEU1。CD5在人T细胞上表达。已经鉴定出人CD5的两种同种型。同种型1含有495个氨基酸，并且描述在以下文献中：Gladkikh等人，(2017)Cancer Med.6(12):2984以及Jones等人，(1986)Nature323(6086):346)。CD5(同种型1)的氨基酸序列提供如下(NCBI参考序列：NP_055022.2)：
mpmgslqpla tlyllgmlva sclgrlswyd pdfqarltrs nskcqgqlev ylkdgwhmvc
sqswgrsskq wedpsqaskv cqrlncgvpl slgpflvtyt pqssiicygq lgsfsncshs
rndmchslgl tclepqkttp pttrpppttt peptapprlq lvaqsggqhc agvvefysgs
lggtisyeaq dktqdlenfl cnnlqcgsflkhlpeteagr aqdpgepreh qplpiqwkiq
nssctslehc frkikpqksg rvlallcsgf qpkvqsrlvg gssicegtve vrqgaqwaal
cdsssarssl rweevcreqq cgsvnsyrvl dagdptsrgl fcphqklsqc helwernsyc
kkvfvtcqdp npaglaagtv asiilalvll vvllvvcgpl aykklvkkfr qkkqrqwigp
tgmnqnmsfh rnhtatvrsh aenptashvd neysqpprns hlsaypaleg alhrssmqpd nssdsdydlh gaqrl(SEQ ID NO:312)
人CD5的第二同种型是438个氨基酸(参见上文下划线部分)，并且被鉴定为NCBI参考序列：NP_001333385.1。与同种型1不同，CD5同种型2是一种细胞内蛋白质。与同种型1相比，同种型2含有不同的5'UTR，并且缺少5'编码区的框内部分。与同种型1相比，所得同种型2具有较短的N-末端。与同种型1相比，CD5同种型2缺少前导肽，并且表示存在于B淋巴细胞亚群中的细胞内同种型。本文描述的ADC对表示人CD5的细胞外形式的人CD5同种型1具有特异性。
在一个实施方案中，可以用于本文描述的方法和组合物的抗CD5抗体是抗体5D7(Ab5D7)。Ab5D7的重链可变区(VH)氨基酸序列如下提供为SEQID NO:313。
QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTFSGFSLSTSGMGVGWIRQAPGKGLEWVAHIWWDDDVYYNPSLKSRLTITKDASKDQVSLKLSSVTAADTAVYYCVRRRATGTGFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:313)
Ab5D7的VH CDR氨基酸序列已在上文中加下划线，并且如下：FSLSTSGMG(VH CDR1；SEQ ID NO:315)；WWDDD(VH CDR2；SEQ ID NO:316)；以及RRATGTGFDY(VH CDR3；SEQ ID NO:317)。
Ab5D7的轻链可变区(VL)氨基酸序列如下提供为SEQ ID NO 314。
NIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDVGTAVAWYQQKPDQSPKLLIYWTSTRHTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSLQPEDIATYFCHQYNSYNTFGSGTKLEIK(SEQ ID NO:314)
Ab5D7的VL CDR氨基酸序列已在上文中加下划线，并且如下：QDVGTA(VL CDR1；SEQID NO:318)；WTSTRHT(VL CDR2；SEQ ID NO:319)；以及YNSYNT(VL CDR3；SEQ ID NO:320)。
在一个实施方案中，抗CD5ADC包含抗CD5抗体，该抗体包含重链和轻链，该重链包含：CDR1域，其包含SEQ ID NO:315中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含SEQ ID NO:316中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含SEQ ID NO:317中所阐述的氨基酸序列；并且该轻链包含：CDR1域，其包含SEQ ID NO:318中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含SEQ IDNO:319中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含SEQ ID NO:320中所阐述的氨基酸序列，其中该抗体经由接头与细胞毒素缀合。
在一个实施方案中，抗CD5ADC包含抗CD5抗体，该抗体包含重链和轻链，该重链包含可变区，其包含如SEQ ID NO:313中所阐述的氨基酸序列，并且该轻链包含可变区，其包含如SEQ ID NO:314中所阐述的氨基酸序列，其中该抗体经由接头与细胞毒素缀合。
在另一实施方案中，用于本文描述的ADC的抗CD5抗体是5D7抗体(参见，例如，US20080254027，其公开内容通过引用并入本文)。在另一实施方案中，可以用于本文描述的方法和组合物(包括ADC)的抗CD5抗体是5D7抗体的变体(参见，例如，US 20080254027，其公开内容通过引用并入本文)。
本文描述的抗CD5抗体或结合片段的额外序列是本领域已知的，包括WO 2019/108863中所阐述的序列，其内容并入本文。
可以使用本领域已知的技术(如杂交瘤产生)来鉴定可以用于本文描述的ADC的额外抗CD5抗体。可以使用鼠源性系统制备杂交瘤。免疫和随后分离用于融合的脾细胞的方案是本领域已知的。用于杂交瘤生成的融合配偶体和程序也是已知的。替代地，可以使用HuMAb-
Figure BDA0003423520310000991
或XenoMouseTM生成抗CD5抗体。在制造额外的抗CD5抗体中，分离和/或纯化CD5抗原。CD5抗原可以是来自CD5细胞外域的CD5片段。动物的免疫可以通过本领域已知的任何方法进行。参见，例如，Harlow和Lane，Antibodies:A Laboratory Manual,NewYork:Cold Spring Harbor Press,1990。用于免疫动物(如小鼠、大鼠、绵羊、山羊、猪、牛和马)的方法是本领域众所周知的。参见，例如，Harlow和Lane,见上文以及美国专利号5,994,619。CD5抗原可以与佐剂一起施用以刺激免疫应答。本领域已知的佐剂包括完全或不完全弗氏佐剂、RIBI(胞壁酰二肽)或ISCOM(免疫刺激复合物)。用CD5抗原免疫动物后，从被免疫的动物所分离出来的细胞制备产生抗体的永生化细胞系。免疫后，处死动物，并且通过本领域已知的方法(例如，致癌基因转移、致癌病毒转导、暴露于致癌性或突变化合物、与永生化细胞(例如，骨髓瘤细胞)融合、以及灭活肿瘤抑制基因)永生化淋巴结和/或脾脏B细胞。参见，例如，Harlow和Lane,见上文。可以选择、克隆并进一步筛选杂交瘤以获得期望的特征，其包括强健生长、高抗体产生和期望的抗体特征。
还可以使用抗体或抗体片段文库的针对能够结合CD5的分子的高通量筛选来鉴定用于本文描述的抗CD5ADC的抗CD5抗体。此类方法包括本领域已知的体外展示技术，如噬菌体展示、细菌展示、酵母展示、哺乳动物细胞展示、核糖体展示、mRNA展示和cDNA展示等。使用噬菌体展示来分离结合生物相关分子的抗体、抗原结合片段或配体已综述例如在以下文献中：Felici等人，Biotechnol.Annual Rev.1:149-183,1995；Katz,AnnualRev.Biophys.Biomol.Struct.26:27-45,1997；以及Hoogenboom等人，Immunotechnology4:1-20,1998,这些文献各自的公开内容通过引用并入本文，因为它们涉及体外展示技术。已构建随机化组合肽文库以选择结合如以下文献中所描述的细胞表面抗原的多肽：Kay,Perspect.Drug Discovery Des.2:251-268,1995以及Kay等人，Mol.Kay,Perspect.1:139-140,1996，这些文献各自的公开内容通过引用并入本文，因为它们涉及抗原结合分子的发现。蛋白质(如多聚体蛋白质)已成功地通过噬菌体展示技术展示为功能性分子(参见，例如，EP 0349578；EP 4527839；以及EP 0589877，以及Chiswell和McCafferty，TrendsBiotechnol.10:80-84 1992，这些文献各自的公开内容通过引用并入本文，因为它们涉及使用体外展示技术来发现抗原结合分子)。另外，功能性抗体片段(如Fab和scFv片段)已经以体外展示格式表达(参见，例如，McCafferty等人，Nature 348:552-554,1990；Barbas等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88:7978-7982,1991；以及Clackson等人，Nature 352:624-628,1991,这些文献各自的公开内容通过引用并入本文，因为它们涉及用于发现抗原结合分子的体外展示平台)。
除体外展示技术之外，还可以使用计算建模技术来经由电脑模拟设计和鉴定抗CD5抗体或抗体片段，例如，使用US 2013/0288373中所描述的程序，该文献的公开内容并入本文，因为其涉及用于鉴定抗CD5抗体的分子建模方法。例如，使用计算建模技术，本领域技术人员可以针对能够结合CD5上的特异性表位(如CD5的细胞外表位)的分子，经由电脑模拟来筛选抗体或抗体片段文库。
在一个实施方案中，用于本文描述的ADC的抗CD5抗体能够内化到细胞中。在鉴定抗CD5抗体(或其片段)中，可以使用额外的技术来鉴定结合细胞(例如，T细胞)表面上的CD5且进一步能够被细胞内化(例如，通过受体介导的内吞作用)的抗体或抗原结合片段。例如，上述体外展示技术可以适于筛选结合造血干细胞表面上的CD5且随后被内化的抗体或其抗原结合片段。噬菌体展示表示一种可以与这种筛选范例结合使用的展示技术。为了鉴定结合CD5且随后被CD5+细胞内化的抗CD5抗体或其片段，本领域技术人员可以使用Williams等人，Leukemia 19:1432-1438,2005中所描述的噬菌体展示技术，该文献的公开内容通过引用以其整体并入本文。此类技术也可以应用于靶向其他抗原的抗体。
可以例如使用本领域已知的放射性核素内化测定来评估抗CD5抗体或其片段的内化能力。例如，使用本文描述的或本领域已知的体外展示技术鉴定的抗CD5抗体或其片段可以通过并入如以下放射性同位素而功能化：18F、75Br、77Br、122I、123I、124I、125I、129I、131I、211At、67Ga、111In、99Tc、169Yb、186Re、64Cu、67Cu、177Lu、77As、72As、86Y、90Y、89Zr、212Bi、213Bi或225Ac。例如，可以使用含有亲电子卤素试剂的珠(如聚苯乙烯珠)(例如，碘化珠，ThermoFisher Scientific,Inc.,Cambridge,MA)将放射性卤素(如18F、75Br、77Br、122I、123I、124I、125I、129I、131I、211At)并入到抗体、其片段或配体中。可以将放射性标记的抗体或其片段与造血干细胞一起温育足够长的时间以允许内化。可以通过与回收的洗涤缓冲液的发射辐射(例如，γ-辐射)进行比较检测所得造血干细胞的发射辐射(例如，γ-辐射)来鉴定内化的抗体或其片段。前述内化测定还可以用于表征ADC以及靶向除CD5之外的HSC抗原的ADC。
e.鉴定和产生抗体的方法
本文提供特异性抗CD117和抗CD45抗体，这些抗体可以用于例如遗传修饰HSC移植之前的调理方法。鉴于本文的公开内容，可以鉴定其他抗CD117抗体(例如,中性抗体)或其他抗CD45抗体。
用于针对能够结合由HSC和/或免疫细胞表达的CD117(例如，GNNK+CD117)或CD45的分子而高通量筛选抗体或抗体片段文库的方法可以用于鉴定和亲和成熟抗体,该成熟抗体可用于治疗癌症、自身免疫性疾病，并且可用于调理需要如本文所描述的干细胞基因疗法的患者(例如，人患者)。此类方法可以用于鉴定本文描述的抗体的等效或甚至改进形式。此类方法包括本领域已知的体外展示技术，如噬菌体展示、细菌展示、酵母展示、哺乳动物细胞展示、核糖体展示、mRNA展示和cDNA展示等。
使用噬菌体展示来分离结合生物相关分子的配体或抗体或抗体片段(例如，scFv)已综述例如在以下文献中：Felici等人，Biotechnol.Annual Rev.1:149-183,1995；Katz,Annual Rev.Biophys.Biomol.Struct.26:27-45,1997；以及Hoogenboom等人，Immunotechnology 4:1-20,1998,这些文献各自的公开内容通过引用并入本文，因为它们涉及体外展示技术。已构建随机化组合肽文库以选择结合如以下文献中所描述的细胞表面抗原的多肽：Kay,Perspect.Drug Discovery Des.2:251-268,1995以及Kay等人，Mol.Kay,Perspect.1:139-140,1996，这些文献各自的公开内容通过引用并入本文，因为它们涉及抗原结合分子的发现。蛋白质(如多聚体蛋白质)已成功地通过噬菌体展示技术展示为功能性分子(参见，例如，EP 0349578；EP 4527839；以及EP 0589877，以及Chiswell和McCafferty，Trends Biotechnol.10:80-84 1992，这些文献各自的公开内容通过引用并入本文，因为它们涉及使用体外展示技术来发现抗原结合分子)。另外，功能性抗体片段(如Fab和scFv片段)已经以体外展示格式表达(参见，例如，McCafferty等人，Nature 348:552-554,1990；Barbas等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88:7978-7982,1991；以及Clackson等人，Nature352:624-628,1991,这些文献各自的公开内容通过引用并入本文，因为它们涉及用于发现抗原结合分子的体外展示平台)。也可以例如在HuMAb-
Figure BDA0003423520310001021
或XenoMouseTM中生成人抗体。这些技术以及其他技术可以用于鉴定和提高结合CD117(例如，GNNK+CD117)的抗体的亲和力，该抗体进而可以用于在需要造血干细胞移植物疗法的患者(例如，人患者)中耗尽内源性造血干细胞。
除体外展示技术之外，还可以使用计算建模技术来设计和鉴定能够结合抗原(如CD117(例如，GNNK+CD117)或CD45)的抗体和抗体片段。例如，使用计算建模技术，本领域技术人员可以针对能够结合特异性表位(如这种抗原的细胞外表位)的分子，经由电脑模拟来筛选抗体和抗体片段文库。通过这些计算技术鉴定的抗体及其抗原结合片段可以与本文描述的治疗方法结合使用，该治疗方法如本文描述的癌症和自身免疫性疾病治疗方法以及本文描述的患者调理程序。
可以使用额外的技术来鉴定能够结合细胞(例如，癌细胞、自身免疫性细胞或造血干细胞)表面上的例如CD117(例如，GNNK+CD117)或CD45且被细胞内化(例如，通过受体介导的内吞作用)的抗体及其抗原结合片段。例如，上述体外展示技术可以适于筛选结合CD117(例如，GNNK+CD117)或CD45且随后被内化的抗体及其抗原结合片段。噬菌体展示表示一种可以与这种筛选范例结合使用的展示技术。为了鉴定结合例如CD117(例如GNNK+CD117)或CD45且随后被造血干细胞内化的抗体及其片段，本领域技术人员可以采用描述例如在Williams等人，Leukemia 19:1432-1438,2005中的噬菌体展示技术，该文献的公开内容通过引用以其整体并入本文。例如，使用本领域已知的诱变方法，可以产生重组噬菌体文库，其编码抗体、抗体片段(如scFv片段、Fab片段)、双抗体、三抗体和10Fn3域等，或编码含有随机化氨基酸盒的配体(例如，在一个或多个或全部CDR或其等效区域或抗体或抗体片段中)。例如，由于抗体或抗体片段的框架区、铰链、Fc域和其他区域具有人种系抗体序列或相对于人种系抗体序列仅表现出微小变化的序列，因此可以被设计成使得它们在人中是非免疫原性的。
使用本文描述的或本领域已知的噬菌体展示技术，可以将含有与噬菌体颗粒共价结合的随机化抗体或抗体片段的噬菌体文库与例如CD117(例如，GNNK+CD117)或CD45抗原一起温育，例如，通过以下方式进行：首先将噬菌体文库与封端剂(如例如，乳蛋白、牛血清白蛋白和/或IgG)一起温育，以便去除编码表现出非特异性蛋白质结合的抗体或其片段的噬菌体、以及编码结合Fc域的抗体或其片段的噬菌体；然后将噬菌体文库与造血干细胞群体一起温育。可以将噬菌体文库与靶细胞(如癌细胞、自身免疫性细胞或造血干细胞)一起温育足够长的时间，以允许CD45或CD117特异性抗体或其抗原结合片段(例如，GNNK+CD117特异性抗体或其抗原结合片段；CD45特异性抗体或其抗原结合片段)结合细胞表面CD117(例如，细胞表面GNNK+CD117)或CD45抗原，并随后被造血干细胞内化(例如，4℃下30分钟至6小时，如4℃下1小时)。随后可以通过例如用pH2.8的冷(4℃)0.1M甘氨酸缓冲液洗涤细胞来去除含有对这些抗原中的一种或多种没有表现出足够亲和力以允许与癌细胞、自身免疫性细胞或造血干细胞结合并被其内化的抗体或其片段的噬菌体。可以例如通过裂解细胞和从细胞培养基中回收内化噬菌体来鉴定与已被癌细胞、自身免疫性细胞或造血干细胞内化的抗体或其片段结合的噬菌体。然后，可以例如通过使用本领域已知的方法将细菌细胞与回收的噬菌体在2xYT培养基中一起温育来在细菌细胞中扩增噬菌体。然后，可以例如通过确定插入到噬菌体基因组内的编码抗体或其片段的基因的核酸序列来表征从这种培养基中回收的噬菌体。随后，可以通过化学合成(例如，抗体片段(如scFv片段)的化学合成)或通过重组表达(例如，全长抗体的重组表达)从头制备经编码的抗体或其片段。
用于与本文描述的组合物和方法一起使用的抗CD117(例如，抗GNNK+CD117)或抗CD45抗体的体外进化的示例性方法是噬菌体展示。可以通过在抗体CDR或抗体样支架类似区域(例如，10Fn3域的BC、CD和DE环)的编码序列内进行一系列设计的突变或变化来创建噬菌体展示文库。引入有这些突变的模板抗体编码序列可以是例如幼稚人种系序列。可以使用本领域已知的标准诱变技术来进行这些突变。因此，除一个或多个氨基酸变化之外，每个突变序列编码对应于模板的抗体。可以使用本领域已知的标准载体构建技术来对逆转录病毒和噬菌体展示载体进行工程化改造。P3噬菌体展示载体以及相容的蛋白质表达载体可以用于生成用于抗体多样化的噬菌体展示载体。
突变的DNA提供序列多样性，并且每个转化子噬菌体展示一种由DNA编码的初始模板氨基酸序列的变体，从而导致噬菌体群体(文库)展示大量不同的但结构相关的氨基酸序列。由于抗体高变区具有定义明确的结构，因此噬菌体展示筛选中所引入的氨基酸变化预期会改变结合肽或域的结合特性，而不会显著改变其整体分子结构。
在典型的筛选中，可以使噬菌体文库与前述抗原中的一种或其表位接触并允许二者结合。为了促进结合剂与非结合剂的分离，方便的是将靶标固定在固体支持物上。带有CD117结合或CD45结合部分的噬菌体可以与固体支持物上的靶标形成复合物，而非结合噬菌体保留在溶液中，并且可以用过量的缓冲液洗掉。然后，可以通过将缓冲液更改为极端pH值(pH2或pH10)、更改缓冲液的离子强度、添加变性剂或其他已知的手段，将结合的噬菌体从靶标中释放出来。
然后可以通过感染细菌细胞来扩增回收的噬菌体，并且可以用新合并物(pool)重复筛选过程，现在所述新合并物在非结合抗体中得到消减并富含结合例如CD117(例如，GNNK+CD117)或CD45的抗体。甚至少许结合噬菌体的回收也足以扩增噬菌体以用于随后的筛选迭代。在几轮选择之后，通过常规方法确定编码衍生自结合库中所选噬菌体克隆的抗体或其抗原结合片段的基因序列，从而显示赋予噬菌体对靶标的结合亲和力的肽序列。在淘选过程期间，群体的序列多样性随着每轮选择而减少，直到期望的肽结合抗体保持不变。序列可能会汇聚在少量相关抗体或其抗原结合片段上。在每轮选择中回收的噬菌体的数目增加指示文库在筛选中发生了汇聚。
用于鉴定例如抗CD117或抗CD45抗体的另一方法包括例如根据以下程序使用结合CD117(例如，GNNK+CD117)或CD45的人源化非人抗体。共有人抗体重链和轻链序列是本领域已知的(参见，例如，“VBASE”人种系序列数据库；Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest,Fifth Edition,U.S.Department of Health and HumanServices,NIH Publication No.91-3242,1991；Tomlinson等人，J.Mol.Biol.227:776-798,1992；以及Cox等人，Eur.J.Immunol.24:827-836,1994，这些文献各自的公开内容通过引用并入本文，因为它们涉及共有人抗体重链和轻链序列。使用已建立的程序，本领域技术人员可以鉴定共有抗体序列的可变域框架残基和CDR(例如，通过序列比对)。共有人抗体的重链和/或轻链可变域的一个或多个CDR可以被结合如本文所描述的CD117(例如，GNNK+CD117)或CD45的非人抗体的一个或多个相应CDR取代，以便产生人源化抗体。可以使用本文描述的或本领域已知的基因编辑技术来进行这种CDR交换。
可以用于制备人源化抗体的共有人抗体的一个实例包含SEQ ID NO:7：
Figure BDA0003423520310001051
Figure BDA0003423520310001052
Figure BDA0003423520310001053
中所阐述的重链可变域以及SEQ ID NO:8：
Figure BDA0003423520310001054
Figure BDA0003423520310001055
Figure BDA0003423520310001056
中所阐述的轻链可变域，这些序列鉴定在美国专利号6,054,297(Genentech)中，该文献的公开内容通过引用并入本文，因为其涉及人抗体共有序列。上述序列中的CDR以粗体示出。
为了产生人源化抗体，可以重组表达编码上述共有序列的多核苷酸，其中一个或多个可变区CDR已被结合例如CD117(例如，GNNK+CD117)或CD45的非人抗体的一个或多个可变区CDR序列替换。由于抗体对造血干细胞抗原的亲和力主要由CDR序列确定，因此预期所得人源化抗体对造血干细胞抗原的亲和力与衍生出人源化抗体的非人抗体对造血干细胞抗原的亲和力大致相同。确定抗体对靶抗原的亲和力的方法包括例如本文描述和本领域已知的基于ELISA的技术，以及表面等离子体共振、荧光各向异性和等温滴定量热法等。
可以例如使用本领域已知的放射性核素内化测定来评估所制备的抗体或抗体片段的内化能力。例如，使用本文描述的或本领域已知的体外展示技术鉴定的抗体或其片段可以通过并入如以下放射性同位素而功能化：18F、75Br、77Br、122I、123I、124I、125I、129I、131I、211At、67Ga、111In、99Tc、169Yb、186Re、64Cu、67Cu、177Lu、77As、72As、86Y、90Y、89Zr、212Bi、213Bi或225Ac。例如，可以使用含有亲电子卤素试剂的珠(如聚苯乙烯珠)(例如，碘化珠，ThermoFisher Scientific,Inc.,Cambridge,MA)将放射性卤素(如18F、75Br、77Br、122I、123I、124I、125I、129I、131I、211At)并入到抗体或其片段中。可以将放射性标记的抗体或其片段与癌细胞、自身免疫性细胞或造血干细胞一起温育足够长的时间以允许内化(例如，4℃下30分钟至6小时，如4℃下1小时)。然后，可以洗涤细胞以去除非内化的抗体或其片段(例如，使用pH2.8的冷(4℃)0.1M甘氨酸缓冲液)。可以通过与回收的洗涤缓冲液的发射辐射(例如，γ-辐射)进行比较检测所得癌细胞、自身免疫性细胞或造血干细胞的发射辐射(例如，γ-辐射)来鉴定内化的抗体或其片段。前述内化测定也可以用于表征ADC。
可以使用例如如美国专利号4,816,567中所描述的重组方法和组合物来产生抗体。在一个实施方案中，提供编码本文描述的抗CD117或抗CD45抗体的分离的核酸。此种核酸可以编码包含抗体的VL的氨基酸序列和/或包含抗体的VH的氨基酸序列(例如，抗体的轻链和/或重链)。在进一步的实施方案中，提供一种或多种包含此种核酸的载体(例如，表达载体)。在进一步的实施方案中，提供包含此种核酸的宿主细胞。在一个此种实施方案中，宿主细胞包含(例如，已用以下各项转化)：(1)载体，其包含核酸，该核酸编码包含抗体的VL的氨基酸序列和包含抗体的VH的氨基酸序列；或(2)第一载体和第二载体，该第一载体包含编码包含抗体的VL的氨基酸序列的核酸，并且该第二载体包含编码包含抗体的VH的氨基酸序列的核酸。在一个实施方案中，宿主细胞是真核细胞，例如，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴细胞(例如，Y0、NS0、Sp20细胞)。在一个实施方案中，提供一种制造抗CLL-1抗体的方法，其中该方法包括在适合于抗体表达的条件下培养包含编码抗体的核酸的宿主细胞，如上文所提供的，并且任选地从宿主细胞(或宿主细胞培养基)中回收抗体。
对于抗CD117或抗CD45抗体的重组产生，分离编码抗体的核酸，例如，如上文所描述的，并且将其插人到一种或多种载体中，以在宿主细胞中进行进一步克隆和/或表达。可以使用常规程序(例如，通过使用能够与编码抗体的重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)来容易地分离此种核酸并对其进行测序。
用于克隆或表达编码抗体的载体的合适宿主细胞包括本文描述的原核或真核细胞。例如，抗体可以在细菌中产生，尤其是当不需要糖基化和Fc效应子功能时。对于抗体片段和多肽在细菌中的表达，参见，例如，美国专利号5,648,237、5,789,199和5,840,523。(还参见Charlton,Methods in Molecular Biology,Vol.248(B.K.C.Lo,ed.,Humana Press,Totowa,N.J.,2003),pp.245-254，其描述抗体片段在大肠杆菌中的表达)表达后，抗体可以从细菌细胞糊中以可溶性级分分离，并且可以进一步纯化。
脊椎动物细胞也可以用作宿主。例如，适应于悬浮生长的哺乳动物细胞系可能是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其他实例是：由SV40(COS-7)转化的猴肾CV1系；人胚肾系(293或293细胞，如描述例如在Graham等人，J.Gen Virol.36:59(1977)中的)；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠支持细胞(TM4细胞，如描述例如在Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)中的)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈肿瘤细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK；水牛大鼠肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞，如描述例如在Mather等人,Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中的；MRC 5细胞；以及FS4细胞。其他有用的哺乳动物宿主细胞系包括：中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，其包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；以及骨髓瘤细胞系，如Y0,NS0和Sp2/0。对于适合于抗体产生的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见，例如，Yazaki和Wu，Methods in Molecular Biology,Vol.248(B.K.C.Lo,ed.,Humana Press,Totowa,N.J.),pp.255-268(2003)。在一个实施方案中，宿主细胞是真核细胞，例如，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴细胞(例如，Y0、NS0、Sp20细胞)。
f.Fc修饰抗体
在一些实施方案中，本文公开的抗体或其抗原结合片段包括允许Fc沉默的Fc修饰。此类Fc修饰抗体能够结合由造血干细胞表达的抗原(如CD45或CD117)，可以与如本文所描述的药物缀合以促进移植的如本文所描述的遗传修饰造血干细胞的植入。这些治疗活性可以通过将抗体(例如，抗CD45抗体或其抗原结合片段或者抗CD117抗体或其抗原结合片段)与由造血细胞(例如，造血干细胞或成熟免疫细胞(例如，T细胞))(如癌细胞、自身免疫性细胞或造血干细胞)分别表达的CD45或CD117结合并随后诱导细胞死亡来引起。内源性造血干细胞的耗尽可以提供移植的遗传修饰HSC可以归巢并随后建立生产性造血功能的小生境。以这种方式，移植的遗传修饰HSC可以成功地植入到患者(如患有本文描述的干细胞病症的人患者)体内。本文中的Fc修饰抗体和ADC不仅允许内源性造血干细胞的选择性耗尽，而且具有降低的对移植的遗传修饰HSC的细胞毒性作用，从而进一步促进HSC移植物的植入。
本文描述的抗体或其抗原结合片段还可以包括改变抗体和/或片段的特性的修饰和/或突变，如增加半衰期、或者增加或降低ADCC等的那些修饰和/或突变。
在一个实施方案中，提供包含一种或多种放射性标记的氨基酸的抗体。放射性标记的抗体可以用于诊断和治疗目的二者(与放射性标记的分子缀合是另一可能的特性)。用于多肽的标记的非限制性实例包括但不限于3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc以及125I、131I和186Re。用于制备放射性标记的氨基酸和相关肽衍生物的方法是本领域已知的(参见例如Junghans等人，见于Cancer Chemotherapy and Biotherapy 655-686(2d版,Chafner和Longo编,Lippincott Raven(1996))以及美国专利号4,681,581、美国专利号4,735,210、美国专利号5,101,827、美国专利号5,102,990(U.S.RE35,500)、美国专利号5,648,471和美国专利号5,697,902。例如，放射性同位素可以通过氯胺T方法来缀合。
在一个实施方案中，抗CD45抗体或其抗原结合片段或者抗CD117抗体或其抗原结合片段包含经修饰的Fc区，其中所述经修饰的Fc区相对于野生型Fc区包含至少一个氨基酸修饰，使得所述分子对FcgammaR(FcγR)或与其结合具有改变的亲和力。通过晶体学研究已知Fc区内的某些氨基酸位置与FcγR直接接触。具体地，氨基酸234-239(铰链区)、氨基酸265-269(B/C环)、氨基酸297-299(C'/E环)和氨基酸327-332(F/G)环。(参见，例如，Sondermann等人，2000Nature,406:267-273)。在一些实施方案中，本文描述的抗体可以包含变体Fc区，其包含基于结构和晶体学分析与FcγR直接接触的至少一个残基的修饰。在一个实施方案中，根据如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,NH1,MD(1991)(该文献明确地通过引用并入本文)中的EU索引，抗CD45抗体或其抗原结合片段或者抗CD117抗体或其抗原结合片段的Fc区在氨基酸265处包含氨基酸取代。“如Kabat中的EU索引”是指人IgG1EU抗体的编号。在一个实施方案中，Fc区包含D265A突变。在一个实施方案中，Fc区包含D265C突变。在一些实施方案中，根据如Kabat中的EU索引，抗体(或其片段)的Fc区在氨基酸234处包含氨基酸取代。
在一个实施方案中，Fc区在D265、V205、H435、I253和/或H310的氨基酸位置处包含突变。例如，这些位置处的特定突变包括D265C、V205C、H435A、I253A和/或H310A。
在一个实施方案中，Fc区包含L234A突变。在一些实施方案中，根据如Kabat中的EU索引，抗CD45抗体或其抗原结合片段或者抗CD117抗体或其抗原结合片段的Fc区在氨基酸235处包含氨基酸取代。在一个实施方案中，Fc区包含L235A突变。在又另一实施方案中，Fc区包含L234A和L235A突变。在进一步的实施方案中，Fc区包含D265C、L234A和L235A突变。在又进一步的实施方案中，Fc区包含D265C、L234A、L235A和H435A突变。在进一步的实施方案中，Fc区包含D265C和H435A突变。在进一步的实施方案中，Fc区包含S239C。
在又另一实施方案中，Fc区包含L234A和L235A突变(在本文中也被称为“L234A.L235A”或称为“LALA”)。在另一实施方案中，Fc区包含L234A和L235A突变，其中Fc区不包括P329G突变。在进一步的实施方案中，Fc区包含D265C、L234A和L235A突变(在本文中也被称为“D265C.L234A.L235A”)。在另一实施方案中，Fc区包含D265C、L234A和L235A突变，其中Fc区不包括P329G突变。在又进一步的实施方案中，Fc区包含D265C、L234A、L235A和H435A突变(在本文中也被称为“D265C.L234A.L235A.H435A”)。在另一实施方案中，Fc区包含D265C、L234A、L235A和H435A突变，其中Fc区不包括P329G突变。在进一步的实施方案中，Fc区包含D265C和H435A突变(在本文中也被称为“D265C.H435A”)。在又另一实施方案中，Fc区包含D265A、S239C、L234A和L235A突变(在本文中也被称为“D265A.S239C.L234A.L235A”)。在又另一实施方案中，Fc区包含D265A、S239C、L234A和L235A突变，其中Fc区不包括P329G突变。在另一实施方案中，Fc区包含D265C、N297G和H435A突变(在本文中也被称为“D265C.N297G.H435A”)。在另一实施方案中，Fc区包含D265C、N297Q和H435A突变(在本文中也被称为“D265C.N297Q.H435A”)。在另一实施方案中，Fc区包含E233P、L234V、L235A和delG236(236缺失)突变(在本文中也被称为“E233P.L234V.L235A.delG236”或称为“EPLVLAdelG”)。在另一实施方案中，Fc区包含E233P、L234V、L235A和delG236(236缺失)突变，其中Fc区不包括P329G突变。在另一实施方案中，Fc区包含E233P、L234V、L235A、delG236(236缺失)和H435A突变(在本文中也被称为“E233P.L234V.L235A.delG236.H435A”或称为“EPLVLAdelG.H435A”)。
在另一实施方案中，Fc区包含E233P、L234V、L235A、delG236(236缺失)和H435A突变，其中Fc区不包括P329G突变。在另一实施方案中，Fc区包含L234A、L235A、S239C和D265A突变。在另一实施方案中，Fc区包含L234A、L235A、S239C和D265A突变，其中Fc区不包括P329G突变。在另一实施方案中，Fc区包含H435A、L234A、L235A和D265C突变。在另一实施方案中，Fc区包含H435A、L234A、L235A和D265C突变，其中Fc区不包括P329G突变。
在一些实施方案中，抗体具有经修饰的Fc区，使得该抗体在体外效应子功能测定中降低效应子功能，其中该抗体与Fc受体(FcR)的结合相对于包含未经修饰的Fc区的相同抗体与该FcR的结合降低。在一些实施方案中，抗体具有经修饰的Fc区，使得该抗体在体外效应子功能测定中降低效应子功能，其中该抗体与Fcγ受体(FcγR)的结合相对于包含未经修饰的Fc区的相同抗体与该FcγR的结合降低。在一些实施方案中，FcγR是FcγR1。在一些实施方案中，FcγR是FcγR2A。在一些实施方案中，FcγR是FcγR2B。在其他实施方案中，FcγR是FcγR2C。在一些实施方案中，FcγR是FcγR3A。在一些实施方案中，FcγR是FcγR3B。在其他实施方案中，抗体与FcγR的结合相对于包含未经修饰的Fc区的相同抗体与该FcγR的结合降低，结合的降低为至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％。在其他实施方案中，抗体与FcγR的结合相对于包含未经修饰的Fc区的相同抗体与该FcγR的结合降低，结合的降低为至少约70％至100％、至少约80％至100％、至少约90％至100％、至少约95％至100％或至少约98％至100％。
在一些实施方案中，抗体具有经修饰的Fc区，使得该抗体在体外细胞因子释放测定中降低细胞因子释放，其中细胞因子释放相对于包含未经修饰的Fc区的相同抗体的细胞因子释放降低至少约50％。在一些实施方案中，细胞因子释放相对于包含未经修饰的Fc区的相同抗体的细胞因子释放降低，细胞因子释放的降低为至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％。在一些实施方案中，细胞因子释放相对于包含未经修饰的Fc区的相同抗体的细胞因子释放降低，细胞因子释放的降低为至少约70％至100％、至少约80％至100％、至少约90％至100％、至少约95％至100％。在某些实施方案中，细胞因子释放由免疫细胞来进行。
在一些实施方案中，抗体具有经修饰的Fc区，使得该抗体在体外肥大细胞脱粒测定中降低肥大细胞脱粒，其中肥大细胞脱粒相对于包含未经修饰的Fc区的相同抗体的肥大细胞脱粒降低至少约50％。在一些实施方案中，肥大细胞脱粒相对于包含未经修饰的Fc区的相同抗体的肥大细胞脱粒降低，肥大细胞脱粒的降低为至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％。在一些实施方案中，肥大细胞脱粒相对于包含未经修饰的Fc区的相同抗体的肥大细胞脱粒降低，肥大细胞脱粒的降低为至少约70％至100％、至少约80％至100％、至少约90％至100％、至少约95％至100％。
在一些实施方案中，抗体具有经修饰的Fc区，使得该抗体在体外抗体依赖性细胞测定中降低或阻止抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)，其中ADCP相对于包含未经修饰的Fc区的相同抗体的ADCP降低至少约50％。在一些实施方案中，抗体依赖性细胞吞噬作用相对于包含未经修饰的Fc区的相同抗体的抗体依赖性细胞吞噬作用降低，ADCP的降低为至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％。
在一些实施方案中，本文描述的抗CD45抗体或其抗原结合片段或者抗CD117抗体或其抗原结合片段包含Fc区，其包含以下修饰或修饰组合中的一种：D265A、D265C、D265C/H435A、D265C/LALA、D265C/LALA/H435A、D265A/S239C/L234A/L235A/H435A、D265A/S239C/L234A/L235A、D265C/N297G、D265C/N297G/H435A、D265C(EPLVLAdelG)、D265C(EPLVLAdelG)/H435A、D265C/N297Q/H435A、D265C/N297Q、EPLVLAdelG/H435A、EPLVLAdelG/D265C、EPLVLAdelG/D265A、N297A、N297G或N297Q。在一些实施方案中，本文描述的抗CD45抗体或其抗原结合片段或者抗CD117抗体或其抗原结合片段包含Fc区，其包含以下修饰或修饰组合中的一种：D265A、D265C、D265C/H435A、D265C/LALA、D265C/LALA/H435A、D265C/N297G、D265C/N297G/H435A、D265C(IgG2*)、D265C(IgG2)/H435A、D265C/N297Q/H435A、D265C/N297Q、EPLVLAdelG/H435A、N297A、N297G或N297Q。
可以使用本领域已知的多种技术来确定经修饰的Fc区与Fcγ受体之间的结合或亲和力，这些技术例如但不限于平衡方法(例如，酶联免疫吸附测定(ELISA)；KinExA，Rathanaswami等人，Analytical Biochemistry,Vol.373:52-60,2008；或放射免疫测定(RIA))、或通过表面等离子体共振测定或其他基于动力学的测定的机制(例如，BIACORE.RTM.分析或OctetTM分析(forteBIO))，以及其他方法，如间接结合测定、竞争性结合测定、荧光共振能量转移(FRET)、凝胶电泳和色谱法(例如，凝胶过滤)。这些和其他方法可以利用一种或多种被检查组分上的标记和/或采用多种检测方法，这些检测方法包括但不限于显色、荧光、发光或同位素标记法。对结合亲和力和动力学的详细描述可以见于Paul,W.E.,ed.,Fundamental Immunology,4th Ed.,Lippincott-Raven,Philadelphia(1999)，其重点关注抗体-免疫原相互作用。竞争性结合测定的一个实例是放射免疫测定，其包含在递增量的未标记抗原的存在下将标记抗原与感兴趣的抗体一起温育，并检测与标记抗原结合的抗体。感兴趣的抗体对特定抗原的亲和力以及结合解离速率可以通过scatchard作图分析从数据确定。与第二抗体的竞争也可以使用放射免疫测定来确定。在这种情况下，在递增量的未标记第二抗体的存在下，将抗原与缀合到标记化合物的感兴趣的抗体一起温育。
在一个实施方案中，具有本文描述的Fc修饰(例如，D265C、L234A、L235A和/或H435A)的抗体与Fcγ受体的结合相对于包含未经修饰的Fc区的相同抗体与该Fcγ受体的结合降低至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％(例如，如通过生物层干涉测量法(BLI)所评估的)。
在不希望受到任何理论约束的情况下，据信Fc区与Fcγ受体的结合相互作用对于多种效应子功能和下游信号事件是至关重要的，这些事件包括但不限于抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)。因此，在某些方面，包含经修饰的Fc区(例如，包含L234A、L235A和/或D265C突变)的抗体的效应子功能大幅度减少或消除。可以使用本领域已知的多种方法，例如通过测量响应于感兴趣的抗体的细胞应答(例如，肥大细胞脱粒或细胞因子释放)来测定效应子功能。例如，可以使用本领域的标准方法，例如通过人外周血单个核细胞来测定Fc修饰抗体触发体外肥大细胞脱粒的能力或触发细胞因子释放的能力。
因此，在一个实施方案中，Fc区包含导致半衰期缩短的突变(例如，相对于具有未经修饰的Fc区的抗体)。在抗体预期充当短寿命治疗剂的某些情况下，例如在本文描述的先施用抗体随后施用遗传修饰HSC移植的调理步骤中，具有短半衰期的抗体可能是有利的。理想地，在递送遗传修饰HSC之前，抗体将基本上被清除，该遗传修饰HSC通常也表达靶抗原(例如，CD45或CD117)，但不是抗CD45或抗CD117抗体的靶标，这与内源性干细胞不同。在一个实施方案中，Fc区在位置435处包含突变(根据Kabat的EU索引)。在一个实施方案中，在一个实施方案中，突变是H435A突变。
在一个实施方案中，本文描述的抗CD45或抗CD117抗体的半衰期(例如，在人中)为等于或小于约24小时、等于或小于约23小时、等于或小于约22小时、等于或小于约21小时、等于或小于约20小时、等于或小于约19小时、等于或小于约18小时、等于或小于约17小时、等于或小于约16小时、等于或小于约15小时、等于或小于约14小时、等于或小于约13小时、等于或小于约12小时、或等于或小于约11小时。
在一个实施方案中，本文描述的抗CD45或抗CD117抗体的半衰期(例如，在人中)为约1-5小时、约5-10小时、约10-15小时、约15-20小时、或约20至25小时。在另一实施方案中，本文描述的抗CD45或抗CD117抗体的半衰期为约5-7小时；约5-9小时；约5-11小时；约5-13小时；约5-15小时；约5-20小时；约5-24小时；约7-24小时；约9-24小时；约11-24小时；约12-22小时；约10-20小时；约8-18小时；或约14-24小时。
在一些方面，Fc区包含两个或更多个突变，这些突变赋予减少的半衰期并减少抗体的效应子功能。在一些实施方案中，Fe区包含导致半衰期缩短的突变和可以与FcγR直接接触(例如，如基于结构和晶体学分析)的至少一个残基的突变。在一个实施方案中，Fc区包含H435A突变、L234A突变和L235A突变。在一个实施方案中，Fc区包含H435A突变和D265C突变。在一个实施方案中，Fc区包含H435A突变、L234A突变、L235A突变和D265C突变。
在一些实施方案中，如本文所描述的抗体或其抗原结合片段通过抗体或其抗原结合片段的Fc域中的半胱氨酸残基与细胞毒素(例如，鹅膏毒素)缀合。在一些实施方案中，通过抗体或其抗原结合片段的Fc域中的突变来引入半胱氨酸残基。例如，半胱氨酸残基可以选自下组，该组由以下各项组成：Cys118、Cys239和Cys265。在一个实施方案中，根据如Kabat中的EU索引，抗CD45抗体或其抗原结合片段或者抗CD117抗体或其抗原结合片段的Fc区在氨基酸265处包含氨基酸取代。在一个实施方案中，Fc区包含D265C突变。在一个实施方案中，Fc区包含D265C和H435A突变。在一个实施方案中，Fc区包含D265C、L234A和L235A突变。在一个实施方案中，Fc区包含D265C、L234A、L235A和H435A突变。在一个实施方案中，根据如Kabat中的EU索引，抗CD117抗体或其抗原结合片段或者抗CD45抗体或其抗原结合片段(或者例如，抗CD2抗体、抗CD5抗体、抗CD137抗体或抗CD252抗体)的Fc区在氨基酸239处包含氨基酸取代。在一个实施方案中，Fc区包含S239C突变。在一个实施方案中，Fc区包含L234A突变、L235A突变、S239C突变和D265A突变。在另一实施方案中，Fc区包含S239C和H435A突变。在另一实施方案中，Fc区包含L234A突变、L235A突变和S239C突变。在又另一实施方案中，Fc区包含H435A突变、L234A突变、L235A突变和S239C突变。在又另一实施方案中，Fc区包含H435A突变、L234A突变、L235A突变、S239C突变和D265A突变。
尤其是，除非另有指示，否则Fc氨基酸位置参考EU编号索引。
前述出版物中的每一个的公开内容都通过引用并入本文，因为它们涉及抗CD45抗体或抗CD117抗体。可以与本文描述的组合物和方法结合使用的抗体和抗原结合片段包括上述抗体及其抗原结合片段，以及上述那些非人抗体和抗原结合片段的人源化变体和结合与上述那些表位相同的表位的抗体或抗原结合片段，如例如通过竞争性抗原结合测定所评估的。
可以对本公开抗体进行进一步工程化改造，以通过引入额外的Fc突变来进一步调节抗体半衰期，并且包括位置250、252、253、254、256、257、307、376、380、428、434和435，该额外的Fc突变如描述例如在以下文献中的那些：(Dall'Acqua等人，(2006)J Biol Chem281:23514-24)、(Zalevsky等人，(2010)Nat Biotechnol 28:157-9)、(Hinton等人，(2004)J Biol Chem 279:6213-6)、(Hinton等人，(2006)J Immunol 176:346-56)、(Shields等人，(2001)J Biol Chem 276:6591-604)、(Petkova等人，(2006)Int Immunol 18:1759-69)、(Datta-Mannan等人，(2007)Drug Metab Dispos 35:86-94)、(Vaccaro等人，(2005)NatBiotechnol 23:1283-8)、(Yeung等人，(2010)Cancer Res 70:3269-77)和(Kim等人，(1999)Eur J Immunol 29:2819-25)。可以单独或组合进行的示例性突变是T250Q、M252Y、1253A、S254T、T256E、P2571、T307A、D376V、E380A、M428L、H433K、N434S、N434A、N434H、N434F、H435A和H435R突变。
对抗体进行工程化改造以包括本文的任何Fc修饰的方法是本领域众所周知的。这些方法包括但不限于通过定点(或寡核苷酸介导的)诱变、PCR诱变和盒诱变编码抗体或该抗体的至少恒定区的所制备DNA分子的制备。定点诱变是本领域众所周知的(参见，例如，Carter等人，Nucleic Acids Res.,13:4431-4443(1985)以及Kunkel等人，ProcNatl.Acad.Sci.USA,82:488(1987))。PCR诱变还适合于制造起始多肽的氨基酸序列变体。参见Higuchi，见于PCR Protocols,pp.177-183(Academic Press,1990)；以及Vallette等人，Nuc。Acids Res.17:723-733(1989)。另一种用于制备序列变体的方法，即盒式诱变，是基于由Wells等人，Gene,34:315-323(1985)描述的技术。
g.其他抗原结合蛋白
在某些实施方案中，在本文描述的缀合物或融合蛋白中使用抗原结合蛋白(抗原靶向部分)，如配体或其功能活性片段。例如，干细胞因子(SCF)是CD117的配体，其中SCF可以与毒素缀合或融合以实现本文公开的调节方法。
在某些实施方案中，抗体模拟物用作本文公开的组合物和方法中的抗原靶向部分。抗体模拟物的实例包括但不限于adnectins、亲和体、afflins、affimer、affilitin和alphabody和anticalin、适体、基于犰狳重复蛋白的支架、atrimer、avimer、DARpin、fynomer、knottin、Kunitz域肽、monobody和nanofitin。
2.细胞毒素
本文描述的抗体及其抗原结合片段可以经由接头与细胞毒素缀合(连接)。在一些实施方案中，细胞毒性分子与如本文所公开的细胞内化抗体或其抗原结合片段缀合，使得在抗体或其片段的细胞摄取后，细胞毒素可以进入其细胞内靶标并介导造血细胞死亡。任何数目(例如1、2、3、4、5、6、7或8)的细胞毒素都可以与抗体(例如，抗CD117或抗CD45)缀合。
在一些实施方案中，本文描述的ADC包括与细胞毒性部分(或细胞毒素)缀合(即，通过接头共价附接)的抗体(或其抗原结合片段)。在各个实施方案中，细胞毒性部分在被结合在缀合物中时表现出减少的细胞毒性或没有细胞毒性，但在从接头切割后恢复细胞毒性。在各个实施方案中，细胞毒性部分保持细胞毒性且不会从接头切割。在一些实施方案中，细胞毒性分子与如本文所公开的细胞内化抗体或其抗原结合片段缀合，使得在抗体或其片段的细胞摄取后，细胞毒素可以进入其细胞内靶标并例如介导T细胞死亡。
本文描述的抗体及其抗原结合片段(例如，识别并结合CD117或CD45的抗体及其抗原结合片段)可以与细胞毒素缀合(或连接)。
因此，本公开ADC可以具有通式Ab-(Z-L-D)n，其中抗体或其抗原结合片段(Ab)通过化学部分(Z)与接头(L)缀合(共价连接)，由此形成的缀合部分与细胞毒性部分(“药物”D)缀合。“n”表示与抗体连接的药物的数目，并且其范围通常为1至8。
因此，本文描述的抗体或其抗原结合片段可以与由整数n指示的多个药物部分缀合，该整数表示每抗体细胞毒素的平均数目，其范围可以例如为约1至约20。在一些实施方案中，n是1至4。在一些实施方案中，n是1。在一些实施方案中，n是2。在一些实施方案中，n是3。在一些实施方案中，n是4。来自缀合反应的ADC配制品中每抗体药物部分的平均数目可以通过常规手段(如质谱、ELISA测定和HPLC)表征。也可以确定ADC在n方面的定量分布。在一些情况下，可以通过如反相HPLC或电泳等手段实现对均质ADC的分离、纯化和表征，其中n是来自具有其他药物载量的ADC的特定值。
对于本文描述的一些抗CD117ADC或抗CD45ADC，每抗体细胞毒素的平均数目可能受到抗体上附接位点的数目的限制。例如，当附接是半胱氨酸硫醇时，抗体可能只有一个或若干半胱氨酸硫醇基团，或者可能只有一个或若干反应性足够的硫醇基团，通过这些硫醇基团，接头和化学部分可以被附接。通常，抗体不会含有很多可能与药物部分连接的游离和反应性半胱氨酸硫醇基团；抗体中的半胱氨酸硫醇残基主要以二硫键的形式存在。在某些实施方案中，可以在部分或全部还原条件下，用还原剂(如二硫苏糖醇(DTT)或三羰基乙基膦(TCEP))还原抗体，以生成反应性半胱氨酸硫醇基团。
在某些实施方案中，在缀合反应期间，少于理论最大值的药物部分与抗体缀合。抗体可以包含例如不与药物-接头中间体或接头试剂反应的赖氨酸残基，如下文中所讨论的。只有反应性最强的赖氨酸基团可以与胺反应性接头试剂反应。在某些实施方案中，抗体经受变性条件以显示反应性亲核基团，如赖氨酸或半胱氨酸。
ADC的载量(药物/抗体比率)可以以不同的方式进行控制，例如，通过：(i)限制药物-接头中间体或接头试剂相对于抗体的摩尔过量；(ii)限制缀合反应时间或温度；(iii)部分或限制半胱氨酸硫醇修饰的还原条件；(iv)通过重组技术对抗体的氨基酸序列进行工程化改造，使得半胱氨酸残基的数目和位置被修饰成用于控制接头-药物附接的数目和/或位置。
适用于本文描述的ADC的细胞毒素包括DNA嵌合剂(例如，蒽环类药物(anthracycline))、能够中断有丝分裂纺锤体的制剂(例如，长春花生物碱(vincaalkaloid)、美登素(maytansine)、美登木素生物碱(maytansinoid)及其衍生物)、RNA聚合酶抑制剂(例如，鹅膏毒素，如α-鹅膏蕈碱及其衍生物)和能够中断蛋白质生物合成的制剂(例如，表现出rRNA N-糖苷酶活性的试剂，如皂草素(saporin)和蓖麻毒蛋白A链)，以及本领域已知的其他物质。
适合于与本文描述的组合物和方法一起使用的细胞毒素包括但不限于5-乙炔基尿嘧啶、阿比特龙(abiraterone)、酰基富烯(acylfulvene)、腺环戊醇(adecypenol)、阿多来新(adozelesin)、阿地白介素(aldesleukin)、六甲蜜胺(altretamine)、氨莫司汀(ambamustine)、艾美多(amidox)、氨磷汀(amifostine)、氨基酮戊酸(aminolevulinicacid)、氨柔比星(amrubicin)、安吖啶(amsacrine)、阿那格雷(anagrelide)、阿那曲唑(anastrozole)、穿心莲内酯(andrographolide)、血管生成抑制剂、安雷利克斯(antarelix)、抗背侧形态发生蛋白-1(anti-dorsalizing morphogenetic protein-1)、抗雄激素(antiandrogen)、前列腺癌(prostatic carcinoma)、抗雌激素、抗瘤酮(antineoplaston)、反义寡核苷酸、阿非迪霉素甘氨酸盐(aphidicolin glycinate)、凋亡基因调节剂、凋亡调节剂、脱嘌呤核酸、奥沙那宁(asulacrine)、阿他美坦(atamestane)、阿莫司汀(atrimustine)、阿西他汀(axinastatin)1、阿西他汀2、阿西他汀3、阿扎司琼(azasetron)、阿扎毒素(azatoxin)、重氮酪氨酸(azatyrosine)、巴卡亭III衍生物(baccatin III derivatives)、班兰诺(balanol)、巴马司他(batimastat)、BCR/ABL拮抗剂、苯并二氢卟酚(benzochlorins)、苯甲酰基星形孢菌素(benzoylstaurosporine)、β-内酰胺衍生物、β-阿立辛(beta-alethine)、β-可来霉素B(betaclamycin B)、桦木酸、bFGF抑制剂、比卡鲁胺(bicalutamide)、比生群(bisantrene)、双氮丙啶基精胺(bisaziridinylspermine)、双奈法德(bisnafide)、bistratene A、比折来新(bizelesin)、比锐来特(breflate)、博来霉素A2、博来霉素B2、溴匹立明(bropirimine)、布多替坦(budotitane)、丁硫氨酸亚砜胺(buthionine sulfoximine)、卡泊三醇(calcipotriol)、钙磷酸蛋白C(calphostin C)、喜树碱衍生物(例如10-羟基-喜树碱)、卡培他滨(capecitabine)、甲酰胺-氨基三唑(carboxamide-amino-triazole)、羧酰胺基三唑(carboxyamidotriazole)、卡折来新(carzelesin)、酪蛋白激酶抑制剂、栗树精胺(castanospermine)、杀菌肽B(cecropin B)、西曲瑞克(cetrorelix)、二氢卟酚(chlorins)、氯喹喔啉磺胺(chloroquinoxaline sulfonamide)、西卡前列素(cicaprost)、顺式卟啉、克拉屈滨(cladribine)、氯米芬(clomifene)及其类似物、克霉唑(clotrimazole)、克立霉素A(collismycin A)、克立霉素B、康普瑞汀A4(combretastatinA4)、康普瑞汀类似物、康纳京尼(conagenin)、卡那贝西汀816(crambescidin 816)、克里斯奈托(crisnatol)、念珠藻环肽(cryptophycin)8、念珠藻环肽A衍生物、卡拉新A(curacinA)、环戊蒽醌(cyclopentanthraquinones)、环普兰姆(cycloplatam)、西匹霉素(cypemycin)、阿糖胞苷十八烷基磷酸钠(cytarabine ocfosfate)、溶细胞因子、磷酸己烷雌酚(cytostatin)、达昔单抗(dacliximab)、地西他滨(decitabine)、脱氢膜海鞘素B、2'脱氧柯福霉素(2'deoxycoformycin)(DCF)、地洛瑞林(deslorelin)、右异环磷酰胺(dexifosfamide)、右雷佐生(dexrazoxane)、右维拉帕米(dexverapamil)、地吖醌(diaziquone)、膜海鞘素B(didemnin B)、地多西(didox)、二乙基去甲精胺(diethylnorspermine)、二氢-5-氮杂胞苷(dihydro-5-azacytidine)、二氢紫杉醇(dihydrotaxol)、二噁霉素(dioxamycin)、二苯基螺莫司汀(diphenyl spiromustine)、圆皮海绵内酯(discodermolide)、二十二烷醇(docosanol)、多拉司琼(dolasetron)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、屈洛昔芬(droloxifene)、屈大麻酚(dronabinol)、多卡米星(duocarmycin)SA、依布硒啉(ebselen)、依考莫司汀(ecomustine)、依地福新(edelfosine)、依决洛单抗(edrecolomab)、依氟鸟氨酸(eflornithine)、榄香烯(elemene)、乙嘧替氟(emitefur)、埃博霉素(epothilones)、epithilones、爱普列特(epristeride)、雌莫司汀及其类似物、依托泊苷(etoposide)、依托泊苷4'-磷酸酯(也称为etopofos)、依西美坦(exemestane)、法倔唑(fadrozole)、法扎拉滨(fazarabine)、芬维A胺(fenretinide)、非格司亭(filgrastim)、非那雄胺(fmasteride)、夫拉平度(flavopiridol)、夫来折司汀(flezelastine)、夫斯特隆(fluasterone)、氟达拉滨、盐酸氟道诺霉素(fluorodaunorunicin hydrochloride)、福酚美克(forfenimex)、福美司坦(formestane)、福司曲星(fostriecin)、福莫司汀(fotemustine)、钆德卟啉(gadoliniumtexaphyrin)、硝酸镓、加洛他滨(galocitabine)、加尼瑞克(ganirelix)、明胶酶抑制剂、吉西他滨、谷胱甘肽抑制剂，和普苏姆(hepsulfam)、高三尖杉酯碱(homoharringtonine,HHT)、金丝桃素(hypericin)、伊班膦酸(ibandronic acid)、艾多昔芬(idoxifene)、伊决孟酮(idramantone)、伊莫福新(ilmofosine)、伊洛马司他(ilomastat)、咪唑吖啶酮(imidazoacridones)、咪喹莫特(imiquimod)、免疫刺激肽、碘苄胍(iobenguane)、碘多柔比星(iododoxorubicin)、甘薯苦醇(ipomeanol)、伊立替康(irinotecan)、伊罗普拉(iroplact)、伊索拉定(irsogladine)、异苯胍唑(isobengazole)、jasplakinolide、kahalalide F、片螺素-N三乙酸酯(lamellarin-N triacetate)、兰瑞肽(lanreotide)、leinamycin、来格司亭(lenograstim)、硫酸香菇多糖(lentinan sulfate)、雷托他汀(leptolstatin)、来曲唑、亲脂性铂类化合物、立索克林酰胺7(lissoclinamide7)、洛铂(lobaplatin)、洛美曲索(lometrexol)、氯尼达明(lonidamine)、洛索蒽醌(losoxantrone)、洛索立宾(loxoribine)、勒托替康(lurtotecan)、镥德卟啉(lutetiumtexaphyrin)、立索茶碱(lysofylline)、马索罗酚(masoprocol)、马司非(maspin)、基质金属蛋白酶抑制剂、美诺立尔(menogaril)、rnerbarone、美替瑞林(meterelin)、甲硫氨酸酶、甲氧氯普胺(metoclopramide)、MIF抑制剂、ifepristone、米替福新(miltefosine)、米立司亭(mirimostim)、光辉霉素(mithracin)、米托胍腙(mitoguazone)、二溴卫矛醇(mitolactol)、丝裂霉素及其类似物、米托萘胺(mitonafide)、米托蒽醌(mitoxantrone)、莫法罗汀(mofarotene)、莫拉司亭(molgramostim)、myloroxide B、myriaporone、N-乙酰基地那林(N-acetyldinaline)、N-取代的苯甲酰胺、那法瑞林(nafarelin)、nagrestip、napavin、naphterpin、那托司亭(nartograstim)、奈达铂(nedaplatin)、奈莫柔比星(nemorubicin)、奈立膦酸、尼鲁米特(nilutamide)、nisamycin、nitrullyn、奥曲肽(octreotide)、okicenone、奥那司酮(onapristone)、昂丹司琼(ondansetron)、oracin、奥马铂(ormaplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、oxaunomycin、紫杉醇(paclitaxel)及其类似物、帕诺明(palauamine)、十六酰基根霉素(palmitoylrhizoxin)、帕米膦酸(pamidronicacid)、人参炔三醇(panaxytriol)、帕诺米芬(panomifene)、帕拉贝新(parabactin)、帕折普汀(pazelliptine)、培门冬酶(pegaspargase)、皮地新(peldesine)、戌聚糖聚硫酸钠(pentosan polysulfate sodium)、喷司他丁(pentostatin)、pentrozole、全氟溴烷(perflubron)、培磷酰胺(perfosfamide)、苯连氮霉素(phenazinomycin)、沙培林(picibanil)、吡柔比星(pirarubicin)、吡曲克辛(piritrexim)、鬼臼毒素、泊非霉素(porfiromycin)、嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂、雷替曲塞(raltitrexed)、根霉素(rhizoxin)、罗谷亚胺(rogletimide)、罗希吐碱(rohitukine)、rubiginone B1、ruboxyl、沙芬戈(safingol)、saintopin、肌肉叶绿醇A(sarcophytol A)、沙格司亭(sargramostim)、索布佐生(sobuzoxane)、索纳明(sonermin)、斯帕磷酸(sparfosic acid)、斯卡霉素(spicamycin)D、螺莫司汀(spiromustine)、斯替皮米德(stipiamide)、sulfinosine、他莫司汀、喃氟啶、替莫唑胺、替尼泊苷、thaliblastine、噻可拉林(thiocoraline)、替拉扎明(tirapazamine)、拓扑替康(topotecan)、topsentin、曲西立滨(triciribine)、三甲曲沙(trimetrexate)、藜芦胺(veramine)、长春瑞滨、vinxaltine、伏氯唑(zeniplatin)、折尼铂(zeniplatin)和亚苄维C(zilascorb)等。
在一些实施方案中，细胞毒素是微管结合剂(例如，美登素或美登木素生物碱)、鹅膏毒素、假单胞菌外毒素A、deBouganin、白喉毒素、皂草素、澳瑞他汀、蒽环类药物、加利车霉素、伊立替康、SN-38、杜卡霉素(duocarmycin)、吡咯苯并氮卓、吡咯苯并氮卓二聚体、吡咯并苯并二氮杂卓(pyrrolobenzodiazepine)、吡咯并苯并二氮杂卓二聚体、二氢吲哚基苯并二氮杂卓(indolinobenzodiazepine)、二氢吲哚基苯并二氮杂卓二聚体、二氢吲哚基苯并二氮杂卓假二聚体或其变体，或本文描述或本领域已知的另一细胞毒性化合物。
在一些实施方案中，细胞毒素是选自下组的美登木素生物碱，该组由以下各项组成：DM1和DM4。在一些实施方案中，细胞毒素是选自下组的澳瑞他汀，该组由以下各项组成：一甲基澳瑞他汀E和一甲基澳瑞他汀F。
在一些实施方案中，细胞毒素是选自下组的蒽环类药物，该组由以下各项组成：柔红霉素、多柔比星、表柔比星和伊达比星。
在一些实施方案中，抗体-药物缀合物的细胞毒素是RNA聚合酶抑制剂。在一些实施方案中，该RNA聚合酶抑制剂是鹅膏毒素或其衍生物。鹅膏毒素是RNA聚合酶II的强效和选择性抑制剂，并且因此也抑制受影响细胞的转录和蛋白质生物合成。如本文所用，术语“鹅膏毒素”是指由鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)蘑菇产生的鹅膏毒素肽家族的成员，或其变体或衍生物，如能够抑制RNA聚合酶II活性的其变体或衍生物。鹅膏毒素是刚性双环八肽，其具有基本序列Ile-Trp-Gly-Ile-Gly-Cys-Asn(或Asp)-Pro(SEQ ID NO:325)，通过Cys硫与Trp吲哚环的位置2之间的附接，从而形成氨基羧乙基硫色氨酸而交联。
在一些实施方案中，附接到抗体、抗体片段或其他抗原结合剂(例如，配体如干细胞因子)的细胞毒素是基于蛋白质的毒素。基于蛋白质的毒素的实例是志贺毒素。因此，在一些实施方案中，附接到抗体、抗体片段或其他抗原结合剂(例如，配体如干细胞因子)的细胞毒素是志贺毒素或其突变体、片段或衍生物，例如志贺样毒素A亚单位及其突变体、片段和衍生物。在一些实施方案中，与抗体、抗体片段或其他抗原结合剂缀合的细胞毒素是志贺样毒素，如SLT I、SLT II、SLT IIV、LT毒素或C3毒素。
在某些实施方案中，细胞毒素是融合蛋白的一部分，该融合蛋白包含基于蛋白质的毒素以及抗原结合蛋白。例如，某些实施方案中的融合蛋白是工程化毒素体，其包含抗体片段(如scFv)和基于蛋白质的毒素，例如蛋白质合成抑制剂，例如核糖体失活蛋白，例如志贺毒素、志贺样毒素A亚单位、皂草素、蓖麻毒蛋白及其突变体、片段、衍生物等。
美登木素生物碱
在一些实施方案中，本文所述的抗体及其抗原结合片段可与作为微管结合剂的细胞毒素缀合。在一些实施方案中，微管结合剂为美登素、美登木素生物碱或美登木素生物碱类似物。美登木素生物碱是有丝分裂抑制剂，其结合微管并通过抑制微管蛋白聚合起作用。美登素首次从东非灌木齿叶美登木(Maytenus serrata)分离出来(美国专利号3,896,111)。随后，发现某些微生物也产生美登木素生物碱，诸如美登醇和C-3美登醇酯(美国专利号4,151,042)。合成的美登醇及其衍生物和类似物公开于，例如，美国专利号4,137,230；4,248,870；4,256,746；4,260,608；4,265,814；4,294,757；4,307,016；4,308,268；4,308,269；4,309,428；4,313,946；4,315,929；4,317,821；4,322,348；4,331,598；4,361,650；4,364,866；4,424,219；4,450,254；4,362,663和4,371,533。美登木素生物碱药物部分在抗体药物缀合物中是有吸引力的药物部分，因为它们：(i)通过发酵或化学修饰、发酵产物的衍生化可相对容易地制备，(ii)易于用适于通过非二硫化物接头与抗体缀合的官能团衍生化，(iii)在血浆中稳定，以及(iv)对多种肿瘤细胞系有效。
合适的美登木素生物碱的实例包括美登醇的酯、合成的美登醇以及美登醇类似物和衍生物。本文包括抑制微管形成并对哺乳动物细胞具有高毒性的任何细胞毒素，如美登木素生物碱、美登醇和美登醇类似物和衍生物。
合适的美登醇酯的实例包括具有修饰的芳环的那些和在其它位置具有修饰的那些。这种合适的美登木素生物碱公开于美国专利号4,137,230；4,151,042；4,248,870；4,256,746；4,260,608；4,265,814；4,294,757；4,307,016；4,308,268；4,308,269；4,309,428；4,313,946；4,315,929；4,317,821；4,322,348；4,331,598；4,361,650；4,362,663；4,364,866；4,424,219；4,450,254；4,322,348；4,362,663；4,371,533；5,208,020；5,416,064；5,475,092；5,585,499；5,846,545；6,333,410；7,276,497和7,473,796，其各自的公开内容均通过引用并入本文，因为它们涉及美登木素生物碱及其衍生物。
在一些实施方案中，本公开的抗体药物缀合物(ADC)利用含硫醇的美登木素生物碱(DM1)(其正式名称为N2′-脱乙酰基-N2′-(3-巯基-1-氧代丙基)-美登素)作为细胞毒剂。DM1由结构式(IV)表示：
Figure BDA0003423520310001231
在另一个实施方案中，本公开的缀合物利用含硫醇的美登木素生物碱N2′-脱乙酰基-N2′(4-甲基-4-巯基-1-氧代戊基)-美登素(例如，DM4)作为细胞毒剂。DM4由结构式(V)表示：
Figure BDA0003423520310001232
另一种包含含有空间位阻硫醇键的侧链的美登木素生物碱是N2′-脱乙酰基-N-2′(4-巯基-1-氧代戊基)-美登素(称为DM3)，由结构式(VI)表示：
Figure BDA0003423520310001233
美国专利号5,208,020和7,276,497中教导的每种美登木素生物碱也可用于本公开的缀合物中。在这方面，5,208,020和7,276,497的全部公开内容通过引用并入本文。
美登木素生物碱上的许多位置可用作化学连接连接部分的位置。例如，具有羟基的C-3位、经羟甲基修饰的C-14位、经羟基修饰的C-15位和具有羟基的C-20位均预期是有用的。在一些实施方案中，C-3位用作化学连接连接部分的位置，并且在一些特定实施方案中，美登醇的C-3位用作化学连接连接部分的位置。本领域已知有许多用于制备抗体-美登木素生物碱缀合物的接头团，包括，例如，美国专利号5,208,020、6,441,163、EP专利号0425235B1；Chari等人,Cancer Research 52:127-131(1992)；和U.S.2005/0169933 A1，其公开内容通过引用明确并入本文。本文描述并举例说明了另外的接头团。
本公开还包括美登木素生物碱和缀合物的各种异构体和混合物。本公开的某些化合物和缀合物可以以各种立体异构、对映异构和非对映异构形式存在。在美国专利号5,208,020、5,416,064、6,333,410、6,441,163、6,716,821和7,368,565提供了几种用于制备这种抗体-美登木素生物碱缀合物的描述，其中每一者均通过引用整体并入本文。
每个抗体分子结合的美登木素生物碱分子的治疗有效数量可以通过分光光度法测定252nm和280nm处吸光度之比来确定。在某些实施方案中，平均每个抗体分子缀合3至4个美登木素生物碱分子可增强靶细胞的细胞毒性而不会对抗体的功能或溶解度产生负面影响，尽管一分子的毒素/抗体可增强细胞毒性超过单独的抗体。美登木素生物碱分子/抗体或其抗原结合片段的平均数可以为，例如，1-10或2-5。
蒽环类药物
在其它实施方案中，本文所述的抗体及其抗原结合片段可以与细胞毒素缀合，所述细胞毒素为蒽环类药物分子。蒽环类药物是具有细胞毒活性的抗生素化合物。研究表明，蒽环类药物可以通过多种不同的机制杀死细胞，包括：1)药物分子嵌入细胞的DNA中，从而抑制DNA依赖性核酸合成；2)药物产生自由基，然后自由基与细胞大分子反应，造成细胞损伤，或3)药物分子与细胞膜的相互作用[参见例如C.Peterson等人,"Transport AndStorage Of Anthracycline In Experimental Systems And Human Leukemia"inAnthracycline Antibiotics In Cancer Therapy；N.R.Bachur,"Free Radical Damage"id.at pp.97-102]。由于其细胞毒性潜力，蒽环类药物已被用于治疗多种癌症，诸如白血病、乳腺癌、肺癌、卵巢腺癌和肉瘤[参见例如P.H-Wiernik,in Anthracycline:Current Status And New Developments p 11]。常用的蒽环类药物包括多柔比星、表柔比星、伊达比星和道诺霉素。在一些实施方案中，细胞毒素是选自由柔红霉素、多柔比星、表柔比星和伊达比星组成的组的蒽环类药物。蒽环类药物的代表性实例包括但不限于柔红霉素(Cerubidine；Bedford Laboratories)、多柔比星(Adriamycin；Bedford Laboratories；也称为盐酸多柔比星、羟基柔红霉素和Rubex)、表柔比星(Ellence；Pfizer)和伊达比星(Idamycin；Pfizer Inc.)。
认为蒽环类药物类似物多柔比星(ADRIAMYCINO)通过嵌入和抑制拓扑异构酶II的进程与DNA相互作用，所述拓扑异构酶II使DNA解旋用于转录。在拓扑异构酶II复合物破坏DNA链以进行复制后，多柔比星稳定了拓扑异构酶II复合物，阻止了DNA双螺旋被重新密封，从而停止了复制进程。多柔比星和柔红霉素(DAUNOMYCIN)是原型细胞毒性天然产物蒽环类药物化学治疗剂(Sessa等人,(2007)Cardiovasc.Toxicol.7:75-79)。
适用于本文的蒽环类药物的一个非限制性实例是PNU-159682(“PNU”)。相对于母体奈莫柔比星，PNU表现出大于3000倍的细胞毒性(Quintieri等人,Clinical CancerResearch 2005,11,1608-1617)。PNU由以下结构式表示：
Figure BDA0003423520310001251
蒽环类药物(如PNU)上的多个位置可以用作共价键合连接部分并由此键合本文描述的抗体及其抗原结合片段的位置。例如，可以通过对羟甲基酮侧链进行修饰来引入接头。
在一些实施方案中，细胞毒素是由以下结构式表示的PNU衍生物：
Figure BDA0003423520310001261
其中波浪线指示如本文所描述的ADC的接头的共价附接点。
在一些实施方案中，细胞毒素是由以下结构式表示的PNU衍生物：
Figure BDA0003423520310001262
其中波浪线指示如本文所描述的ADC的接头的共价附接点。
吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)
在其他实施方案中，本文描述的抗体及其抗原结合片段可以与细胞毒素缀合，该细胞毒素为吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)或包含PBD的细胞毒素。已知PBD是序列选择性DNA烷基化化合物。PBD细胞毒素包括但不限于氨茴霉素、二聚PBD以及公开于例如：Hartley,J.A.(2011).“The development of pyrrolobenzodiazepines as antitumour agents.”Expert Opin.Inv.Drug,20(6),733-744；以及Antonow,D.；Thurston,D.E.(2011)“Synthesis of DNA-interactive pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepines(PBDs).”Chem.Rev.111:2815-2864。
在一些实施方案中，细胞毒素可以是由下式表示的吡咯并苯并二氮杂卓二聚体：
Figure BDA0003423520310001263
其中波浪线指示接头的附接点。
在一些实施方案中，细胞毒素通过马来酰亚胺基己酰基接头与抗体或其抗原结合片段缀合。
在一些实施方案中，接头包含以下中的一种或多种：肽、寡糖、-(CH2)p-、-(CH2CH2O)q-、-(C＝O)(CH2)r-、-(C＝O)(CH2CH2O)t-、-(NHCH2CH2)u-、-PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB或Ala-PAB，其中p、q、r、t和u中的每一个都是1-12的整数，每次出现时独立选择。
在一些实施方案中，接头具有下式的结构：
Figure BDA0003423520310001271
其中R1是CH3(Ala)或(CH2)3NH(CO)NH2(Cit)。
在一些实施方案中，在与抗体缀合之前，包括反应性取代基Z'的接头(二者合在一起以L-Z'表示)具有以下结构：
Figure BDA0003423520310001272
其中波浪线指示细胞毒素(例如，PBD)的附接点。在某些实施方案中，R1是CH3。
在一些实施方案中，在与抗体缀合之前，包括反应性取代基Z'的细胞毒素-接头缀合物(二者合在一起以Cy-L-Z'表示)具有下式的结构：
Figure BDA0003423520310001273
这种特定的细胞毒素-接头缀合物被称为tesirine(SG3249)，并且已描述在例如Howard等人，ACS Med.Chem.Lett.2016,7(11),983-987中，该文献的公开内容通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，细胞毒素可以是由下式表示的吡咯并苯并二氮杂卓二聚体：
Figure BDA0003423520310001281
其中波浪线指示接头的附接点。
在一些实施方案中，在与抗体缀合之前，包括反应性取代基Z'的细胞毒素-接头缀合物(二者合在一起以Cy-L-Z'表示)具有下式的结构：
Figure BDA0003423520310001282
这种特定的细胞毒素-接头缀合物被称为talirine，并且已例如结合以下文献进行了描述：ADC Vadastuximab talirine(SGN-CD33A),Mantaj等人,Angewandte ChemieInternational Edition English 2017,56,462-488,其公开内容通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，细胞毒素可以是二氢吲哚基苯并二氮杂卓假二聚体，其具有下式的结构：
Figure BDA0003423520310001283
其中波浪线指示接头的附接点。
在一些实施方案中，在与抗体缀合之前，包括反应性取代基Z'的细胞毒素-接头缀合物(二者合在一起以Cy-L-Z'表示)具有下式的结构：
Figure BDA0003423520310001291
该结构包含ADC IMGN632，其公开在例如国际专利申请公布号WO2017004026中，该文献通过引用并入本文。
加利车霉素
在其它实施方案中，本文所述的抗体及其抗原结合片段可以与细胞毒素缀合，所述细胞毒素为烯二炔抗肿瘤抗生素(例如，加利车霉素、奥佐米星(ozogamicin))。加利车霉素抗生素家族能够以亚皮摩尔浓度产生双链DNA断裂。对于加利车霉素家族的缀合物的制备，参见美国专利号5,712,374；5,714,586；5,739,116；5,767,285；5,770,701；5,770,710；5,773,001；和5,877,296(全部归American Cyanamid Company所有)。可使用的加利车霉素的结构类似物包括但不限于例如Hinman等人,Cancer Research 53:3336-3342(1993),Lode等人,Cancer Research 58:2925-2928(1998)和属于American Cyanamid的前述美国专利中公开的那些。
示例性加利车霉素命名为γ1，其在本文中简称为γ，并具有以下结构式：
Figure BDA0003423520310001292
在一些实施方案中，加利车霉素可以是γ-加利车霉素衍生物或N-乙酰基γ-加利车霉素衍生物。可以使用的加利车霉素的结构类似物包括但不限于例如Hinman等人,Cancer Research 53:3336-3342(1993),Lode等人,Cancer Research 58:2925-2928(1998)和前述美国专利中公开的那些。加利车霉素含有甲基三硫化物部分，其可以与合适的硫醇反应以形成二硫化物，同时引入官能团，该官能团可用于经由接头将加利车霉素衍生物连接至本文所述的抗CD117抗体或其抗原结合片段。对于加利车霉素家族的缀合物的制备，参见美国专利号5,712,374；5,714,586；5,739,116；5,767,285；5,770,701；5,770,710；5,773,001；和5,877,296(全部归American Cyanamid Company所有)。可以使用的加利车霉素的结构类似物包括但不限于例如Hinman等人,Cancer Research 53:3336-3342(1993),Lode等人,Cancer Research 58:2925-2928(1998)和属于American Cyanamid的前述美国专利中公开的那些。
在一个实施方案中，本文公开的ADC的细胞毒素可以是由下式表示的加利车霉素二硫化物衍生物：
Figure BDA0003423520310001301
其中波浪线指示接头的附接点。
核糖体失活蛋白(RIP)
在一些实施方案中，与本文描述的抗体及其抗原结合片段缀合的细胞毒素是核糖体失活蛋白(RIP)。核糖体失活蛋白是作用于核糖体(通常不可逆)的蛋白合成抑制剂。RIP存在于植物以及细菌中。RIP的实例包括但不限于皂草素、蓖麻毒蛋白、相思豆毒蛋白、白树毒素、假单胞菌外毒素(或外毒素A)、天花粉蛋白、丝瓜籽蛋白(luffin)、凝集素和白喉毒素。
可用于本文公开的ADC和方法的RIP的另一个实例是志贺毒素(Stx)或志贺样毒素(SLT)。志贺毒素(Stx)是一种在痢疾志贺菌(Shigella dysenteriae)1和大肠杆菌(Escherichia coli)的一些血清组(包括血清型O157:H7和O104:H4)(称为大肠杆菌中的Stx1)中的细菌毒素。除Stx1外，一些大肠杆菌菌株产生第二种类型的Stx(Stx2)，其具有与Stx/Stx1相同的作用模式，但在抗原性上是不同的。这些毒素以Kiyoshi Shiga命名，其首次描述了由痢疾志贺菌引起的痢疾的细菌来源。SLT是由大肠杆菌产生的相似或相同毒素的历史术语。由于已经鉴定了每种毒素的亚型，因此每组的原型毒素现在被命名为Stx1a或Stx2a。Stx1a和Stx2a在对各种细胞类型的细胞毒性中表现出差异，与受体类似物或模拟物结合不同，并且诱导不同的趋化因子应答，并具有几种不同的结构特征。
志贺毒素家族的成员是指天然存在的蛋白质毒素家族的在结构上和功能上相关的任何成员，特别是从痢疾志贺菌和大肠杆菌分离的毒素(Johannes L,Romer W,Nat RevMicrobiol 8:105-16(2010))。例如，志贺毒素家族包括从痢疾志贺菌血清型1分离的真正的志贺毒素(Stx)、从肠出血性大肠杆菌的血清型中分离的志贺样毒素1变体(SLT1或Stx1或SLT-1或Slt-I)和从肠出血性大肠杆菌的血清型中分离的志贺样毒素2变体(SLT2或Stx2或SLT-2)。SLT1与Stx仅相差一个残基，并且两者均被称为Verocytotoxin或Verotoxin(VT)(O'Brien A等人,Curr Top Microbiol Immunol 180:65-94(1992))。尽管SLT1和SLT2变体在氨基酸序列水平上彼此仅约53-60％相似，但它们共享志贺毒素家族成员共有的酶活性和细胞毒性机制(Johannes,Nat Rev Microbiol 8:105-16(2010))。
志贺毒素家族的成员具有两个亚基；A亚基和B亚基。该毒素的B亚基与细胞膜的成分(称为糖脂球形三脂酰基鞘鞍醇(globotriaosylceramide，Gb3)结合。亚基B与Gb3的结合引起窄管状膜内陷的诱导，这驱动向内的膜小管的形成，用于细菌摄取到细胞中。志贺毒素(一种非孔形成毒素)通过高尔基体网络和ER转移到细胞溶质中。从高尔基体将毒素运往ER。志贺毒素通过与蓖麻毒蛋白的机制类似的机制起抑制靶细胞内蛋白质合成的作用(Sandvig and van Deurs(2000)EMBO J 19(220:5943))。在进入细胞后，毒素的A亚基从核糖体的60S亚基的28S RNA上裂解特定的腺嘌呤核碱基，从而停止蛋白质合成(Donohue-Rolfe等人(2010)Reviews of Infectious Diseases 13 Suppl.4(7):S293-297)。
如本文所用，对志贺家族毒素的提及是指在结构上和功能上相关的天然存在蛋白质毒素的志贺毒素家族的任何成员(例如，从痢疾志贺菌和大肠杆菌分离的毒素)。例如，志贺毒素家族包括从痢疾志贺菌血清型1分离的真正的志贺毒素(Stx)、从肠出血性大肠杆菌的血清型中分离的志贺样毒素1变体(SLT1或Stx1或SLT-1或Slt-I)和从肠出血性大肠杆菌的血清型中分离的志贺样毒素2变体(SLT2或Stx2或SLT-2)。如本文所用，“来自志贺家族毒素的亚基A”或“志贺家族毒素亚基A”是指来自志贺毒素家族的任何成员(包括志贺毒素或志贺样毒素)的亚基A。
在一个实施方案中，ADC包含与志贺家族毒素亚基A或具有细胞毒活性(即，核糖体抑制活性)的志贺家族毒素亚基A的一部分缀合的本文描述的任何一种抗体以及其抗原结合片段。志贺毒素亚基A细胞毒活性包括例如核糖体失活、蛋白质合成抑制、N-糖苷酶活性、多核苷酸：腺苷糖苷酶活性、RNA酶活性和DNA酶活性。志贺毒素效应物活性测定的非限制性实例测量蛋白质合成抑制活性、脱嘌呤活性、细胞生长抑制、细胞毒性、超螺旋DNA松弛活性和核酸酶活性。
在某些实施方案中，本文描述的抗体以及其抗原结合片段与志贺家族毒素A亚基或其具有核糖体抑制活性的片段缀合。志贺家族毒素亚基A的实例是志贺样毒素1亚基A(SLT-1A)，其氨基酸序列提供如下
KEFTLDFSTAKTYVDSLNVIRSAIGTPLQTISSGGTSLLMIDSGSGDNLFAVDVRGIDPEEGRFNNLRLIVERNNLYVTGFVNRTNNVFYRFADFSHVTFPGTTAVTLSGDSSYTTLQRVAGISRTGMQINRHSLTTSYLDLMSHSGTSLTQSVARAMLRFVTVTAEALRFRQIQRGFRTTLDDLSGRSYVMTAEDVDLTLNWGRLSSVLPDYHGQDSVRVGRISFGSINAILGSVALILNCHHHASRVARMASDEFPSMCPADGRVRGITHNKILWDSSTLGAILMRRTISS(SEQID NO:290)。
志贺家族毒素亚单位A的另一实例是志贺毒素亚单位A(StxA)，其氨基酸序列提供如下
KEFTLDFSTAKTYVDSLNVIRSAIGTPLQTISSGGTSLLMIDSGTGDNLFAVDVRGIDPEEGRFNNLRLIVERNNLYVTGFVNRTNNVFYRFADFSHVTFPGTTAVTLSGDSSYTTLQRVAGISRTGMQINRHSLTTSYLDLMSHSGTSLTQSVARAMLRFVTVTAEALRFRQIQRGFRTTLDDLSGRSYVMTAEDVDLTLNWGRLSSVLPDYHGQDSVRVGRISFGSINAILGSVALILNCHHHASRVARMASDEFPSMCPADGRVRGITHNKILWDSSTLGAILMRRTISS(SEQID NO:291)。
志贺家族毒素亚单位A的另一实例是志贺样毒素2亚单位A(SLT-2A)，其氨基酸序列提供如下
DEFTVDFSSQKSYVDSLNSIRSAISTPLGNISQGGVSVSVINHVLGGNYISLNVRGLDPYSERFNHLRLIMERNNLYVAGFINTETNIFYRFSDFSHISVPDVITVSMTTDSSYSSLQRIADLERTGMQIGRHSLVGSYLDLMEFRGRSMTRASSRAMLRFVTVIAEALRFRQIQRGFRPALSEASPLYTMTAQDVDLTLNWGRISNVLPEYRGEEGVRIGRISFNSLSAILGSVAVILNCHSTGSYSVRSVSQKQKTECQIVGDRAAIKVNNVLWEANTIAALLNRKPQDLTEPNQ(SEQ ID NO:292)。
在某些情况下，天然存在的志贺家族毒素亚基A可以包含前体形式，其在其氨基末端含有约22个氨基酸的信号序列，所述信号序列被去除以产生成熟的志贺家族毒素A亚基并且是技术人员可识别的。志贺家族毒素亚基A的细胞毒性片段或截短形式也可用于本文公开的ADC和方法中。
在某些实施方案中，志贺家族毒素亚基A与天然存在的志贺毒素A亚基的不同之处多达1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40或更多个氨基酸残基(但相差不超过如下情况，其保留至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或更高氨基酸序列同一性)。在一些实施方案中，志贺家族毒素亚基A与天然存在的志贺家族毒素A亚基的不同之处多达1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40或更多个氨基酸残基(但不超过如下的情况，其保留至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或更高氨基酸序列同一性)。因此，只要与天然存在的志贺家族毒素亚基A保留至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或更高氨基酸序列同一性，源自志贺毒素家族成员的A亚基的多肽区域自原始序列可包含添加、缺失、截短或其它改变。
因此，在某些实施方案中，志贺家族毒素亚基A包含与天然存在的志贺家族毒素亚基A(诸如SLT-1A(SEQ ID NO:290)、StxA(SEQ ID NO:291)和/或SLT-2A(SEQ ID NO:292))具有至少约55％，至少约60％，至少约65％，至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％，至少约99.5％，至少约99.6％，至少约99.7％，至少约99.8％，至少约99.9％，或更高总序列同一性的氨基酸序列或基本上由其组成。
适合作为细胞毒素的合适的志贺毒素和RIP公开于例如US20180057544，其通过引用整体并入本文。
澳瑞他汀
本文所述的抗体及其抗原结合片段可以与细胞毒素缀合，所述细胞毒素是澳瑞他汀(美国专利号5,635,483；5,780,588)。澳瑞他汀是抗有丝分裂剂，其可干扰微管动力学、GTP水解以及核和细胞分裂(Woyke et al(2001)Antimicrob.Agents and Chemother.45(12):3580-3584)并具有抗癌活性(美国专利号5,663,149)和抗真菌活性(Pettit et al(1998)Antimicrob.Agents Chemother.42:2961-2965)(美国专利号5,635,483；5,780,588)。澳瑞他汀药物部分可以通过肽药物部分的N-(氨基)末端或C-(羧基)末端与抗体连接(WO 02/088172)。
示例性澳瑞他汀实施方案包括N-末端连接的单甲基澳瑞他汀药物部分DE和DF，其公开于Senter et al,Proceedings of the American Association for CancerResearch,Volume 45,Abstract Number 623，于2004年3月28日发表，其公开内容通过引用明确地整体并入本文。
一个示例性澳瑞他汀实施方案是MMAE：
Figure BDA0003423520310001341
其中波浪线指示抗体-接头缀合物(-L-Z-Ab，如本文所描述)的接头的共价附接点。
另一示例性澳瑞他汀实施方案是MMAF：
Figure BDA0003423520310001342
其中波浪线指示抗体-接头缀合物(-L-Z-Ab，如本文所描述)的接头的共价附接点，如US 2005/0238649中所公开的。
澳瑞他汀可以根据以下方法进行制备：美国专利号5,635,483；美国专利号5,780,588；Pettit等人，(1989)J.Am.Chem.Soc.111:5463-5465；Pettit等人，(1998)Anti-CancerDrug Design 13:243-277；Pettit、G.R.等人，Synthesis,1996,719-725；Pettit等人，(1996)J.Chem.Soc.Perkin Trans.15:859-863；以及Doronina(2003)Nat.Biotechnol.21(7):778-784。
鹅膏毒素
在一些实施方案中，ADC的细胞毒素是鹅膏毒素或其衍生物。在一些实施方案中，细胞毒素为鹅膏毒素或其衍生物，诸如α-鹅膏蕈碱、β-鹅膏蕈碱、γ-鹅膏蕈碱、ε-鹅膏蕈碱、鹅膏素、三羟鹅膏毒肽酰胺、鹅膏无毒环肽、一羟鹅膏毒肽羧酸和前鹅膏无毒环肽。各种鹅膏毒素的结构由式(II)和所附表2表示，并公开于例如Zanotti等人,Int.J.PeptideProtein Res.30,1987,450-459，该文献通过引用以其整体并入本文。
Figure BDA0003423520310001351
表2.鹅膏毒素结构
Figure BDA0003423520310001361
可用于与本文描述的组合物和方法结合使用的鹅膏毒素及其衍生物包括但不限于α-鹅膏蕈碱、β-鹅膏蕈碱、γ-鹅膏蕈碱、ε-鹅膏蕈碱、鹅膏素、三羟鹅膏毒肽酰胺、鹅膏无毒环肽、一羟鹅膏毒肽羧酸或前鹅膏无毒环肽及其衍生物。在一个实施方案中，细胞毒素是鹅膏蕈碱或其衍生物。在一个实施方案中，细胞毒素是α-鹅膏蕈碱或其衍生物。例如，识别在人干细胞或T细胞的细胞表面上表达的抗原并与其结合的抗体或其抗原结合片段可以与鹅膏毒素缀合，如α-鹅膏蕈碱或其衍生物，如在美国专利号9233173和9399681以及美国专利申请公布号2016/0089450、2016/0002298、2015/0218220、2014/0294865中所描述的，这些文献各自的公开内容通过引用并入本文，因为其涉及鹅膏毒素(如α-鹅膏蕈碱)以及可以用于共价缀合的共价接头。本文描述了鹅膏毒素缀合的示例性方法以及可用于此类过程的接头。本文还描述了可用于与根据组合物和方法的抗体或抗原结合片段缀合的示例性含接头鹅膏毒素。
如本文所用，术语“鹅膏毒素衍生物”或“鹅膏蕈碱衍生物”是指已在相对于天然存在的鹅膏毒素的一个或多个位置处进行了化学修饰的鹅膏毒素，如α-鹅膏蕈碱、β-鹅膏蕈碱、γ-鹅膏蕈碱、ε-鹅膏蕈碱、鹅膏素、三羟鹅膏毒肽酰胺、鹅膏无毒环肽、一羟鹅膏毒肽羧酸或前鹅膏无毒环肽。在每个例子中，衍生物可以通过对天然存在的化合物进行化学修饰获得(“半合成的”)，或者可以从完全合成的来源获得。各种鹅膏毒素衍生物的合成路线公开在例如美国专利号9,676,702以及Perrin等人，J.Am.Chem.Soc.2018,140,p.6513-6517，这些文献各自通过引用以其整体并入本文，因为它们与用于制备和衍生化鹅膏毒素的合成方法有关。
在一些实施方案中，鹅膏毒素或其衍生物由式(III)表示：
Figure BDA0003423520310001371
或者是其对映异构体或非对映异构体，其中：
Q是-S-、-S(O)-或-SO2-；
R1是H、OH或ORA；
R2是H、OH或ORB；
RA和RB，当存在时，与它们所结合的氧原子一起组合以形成5元杂环烷基基团；
R3是H或RC；
R4、R5、R6和R7各自独立地是H、OH或RC；
R8是OH、NH2、ORC或NHRC；
R9是H或OH或ORC；以及
RC是C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基或其组合，其中C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基各自可以任选地被1至5个取代基取代，这些取代基对于每种场合而言都独立地选自下组，该组由以下各项组成：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、烷芳基、烷基杂芳基、氨基、铵基、酰基、酰氧基、酰氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、脲基、氨基甲酸酯、芳基、杂芳基、亚磺酰基、磺酰基、羟基、烷氧基、硫烷基、卤素、羧基、三卤甲基、氰基、羟基、氢硫基和硝基。
在一些实施方案中，RA和RB，当存在时，与它们所结合的氧原子一起组合以形成具有下式的5元杂环烷基基团：
Figure BDA0003423520310001381
其中Y是-(C＝O)-、-(C＝S)-、-(C＝NH)-或-(CH)2-。
在一些实施方案中，鹅膏毒素或其衍生物由式(IIIa)表示：
Figure BDA0003423520310001382
其中Q、R1-R9、RA、RB和RC中的每一个如先前对式(III)所定义的。
在一些实施方案中，式(III)的鹅膏毒素或其衍生物由式(IIIb)表示：
Figure BDA0003423520310001383
其中Q、R1-R9、RA、RB和RC中的每一个如先前对式(III)所定义的。
在一些实施方案中，式(III)的鹅膏毒素或其衍生物由式(IIIc)表示：
Figure BDA0003423520310001391
其中R4、R5、X和R8各自如上文所定义。
可用于与根据本文描述的组合物和方法的抗体或其抗原结合片段缀合的额外鹅膏毒素描述例如在以下文献中：WO 2016/142049；WO 2016/071856；WO 2017/149077；WO2018/115466；以及WO 2017/046658，这些文献的公开内容通过引用以其整体并入本文。
3.接头
如本文所用，术语“接头”意指包含共价键或原子链的二价化学部分，其将抗体或其片段(Ab)附接到细胞毒素(例如，鹅膏毒素)以形成抗体-药物缀合物(ADC)。
抗体和药物部分的共价附接要求接头具有两个反应性功能基团，即反应意义上的二价。可用于附接两个或更多个功能或生物活性部分(如肽、核酸、药物、毒素、抗体、半抗原和报告基团)的二价接头试剂是已知的，并且已经描述了它们产生缀合物的方法(Hermanson,G.T.(1996)Bioconjugate Techniques；Academic Press:New York,p.234-242)。
因此，本接头具有两个反应性末端，一个用于与抗体缀合，并且另一个用于与细胞毒素缀合。接头的抗体缀合反应性末端(反应性部分，在本文中被定义为Z')通常是能够通过例如抗体上的半胱氨酸硫醇或赖氨酸胺基团与抗体缀合的化学部分，因此通常是硫醇反应性基团(如Michael接受体(如在马来酰亚胺中))、离去基团(如氯代、溴代、碘代或R-硫烷基基团)或胺反应性基团(如羧基基团)。接头与抗体的缀合在下文中更充分地进行描述。
接头的细胞毒素(例如，鹅膏毒素)缀合反应性末端通常是能够通过与细胞毒素分子内的反应性取代基形成键而与细胞毒素缀合的化学部分。非限制性实例包括例如分别经由接头上的羧基或碱性胺基团与细胞毒素上的碱性胺或羧基基团形成酰胺键，或在细胞毒素上分别经由OH或NH基团烷基化形成醚、酰胺等。
当术语“接头”用于描述缀合形式的接头时，反应性末端中的一个或两个将不存在(如反应性部分Z'，其已经被转化为化学部分Z，如下文所描述的)或不完整的(如仅是羧酸的羰基)，因为在接头和/或细胞毒素之间以及在接头和/或抗体或其抗原结合片段之间形成了键。此类缀合反应在下文中进一步进行描述。
多种接头可以用于将描述的抗体、抗原结合片段和配体与细胞毒性分子缀合。通常，适合于本公开的接头在循环中可能是基本稳定的，但允许细胞毒素在靶细胞内或紧邻靶细胞的释放。在一些实施方案中，可以将适合于本公开的某些接头分类为可切割的或不可切割的。通常，可切割接头含有一个或多个响应于生理环境而被切割的功能基团。例如，可切割接头可以含有在细胞内酶(例如，组织蛋白酶B)的存在下降解的酶底物(例如，缬氨酸-丙氨酸)、在细胞区室的酸性环境下降解的酸可切割基团(例如，腙)、或在细胞内还原环境中降解的可还原基团(例如，二硫化物)。相比之下，通常，在ADC的抗体部分在靶细胞内的降解(例如，溶酶体降解)期间，从ADC释放出不可切割接头。
a.不可切割接头
适用于本文的不可切割接头可以进一步包括选自以下的一个或多个基团：键、-(C＝O)-、C1-C6亚烷基、C1-C6杂亚烷基、C2-C6亚烯基、C2-C6杂亚烯基、C2-C6亚炔基、C2-C6杂亚炔基、C3-C6亚环烷基、杂亚环烷基、亚芳基、杂亚芳基及其组合，它们各自可以是任选取代的，和/或可以包括代替一个或多个碳原子的一个或多个杂原子(例如，S、N或O)。此类基团的非限制性实例包括亚烷基(CH2)p、(C＝O)(CH2)p和聚乙二醇(PEG；(CH2CH2O)p)单元，其中p是1-6的整数，它们对于每种场合而言都被独立地选择。
在一些实施方案中，接头L包含以下中的一个或多个：键、-(C＝O)-、-C(O)NH-基团、-OC(O)NH-基团、C1-C6亚烷基、C1-C6杂亚烷基、C2-C6亚烯基、C2-C6杂亚烯基、C2-C6亚炔基、C2-C6杂亚炔基、C3-C6亚环烷基、杂亚环烷基、亚芳基、杂亚芳基、-(CH2CH2O)p-基团，其中p是1-6的整数或溶解度增强基团；
其中C1-C6亚烷基、C1-C6杂亚烷基、C2-C6亚烯基、C2-C6杂亚烯基、C2-C6亚炔基、C2-C6杂亚炔基、C3-C6亚环烷基、杂亚环烷基、亚芳基或杂亚芳基各自可以任选地被1至5个取代基取代，这些取代基对于每种场合而言都独立地选自下组，该组由以下各项组成：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、烷芳基、烷基杂芳基、氨基、铵基、酰基、酰氧基、酰氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、脲基、氨基甲酸酯、芳基、杂芳基、亚磺酰基、磺酰基、羟基、烷氧基、硫烷基、卤素、羧基、三卤甲基、氰基、羟基、氢硫基和硝基；
在一些实施方案中，C1-C6亚烷基、C1-C6杂亚烷基、C2-C6亚烯基、C2-C6杂亚烯基、C2-C6亚炔基、C2-C6杂亚炔基、C3-C6亚环烷基、杂亚环烷基、亚芳基或杂亚芳基各自可以任选地被选自O、S和N的一个或多个杂原子中断。
在一些实施方案中，C1-C6亚烷基、C1-C6杂亚烷基、C2-C6亚烯基、C2-C6杂亚烯基、C2-C6亚炔基、C2-C6杂亚炔基、C3-C6亚环烷基、杂亚环烷基、亚芳基或杂亚芳基各自可以任选地被选自O、S和N的一个或多个杂原子中断，并且可以任选地被1至5个取代基取代，这些取代基对于每种场合而言都独立地选自下组，该组由以下各项组成：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、烷芳基、烷基杂芳基、氨基、铵基、酰基、酰氧基、酰氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、脲基、氨基甲酸酯、芳基、杂芳基、亚磺酰基、磺酰基、羟基、烷氧基、硫烷基、卤素、羧基、三卤甲基、氰基、羟基、氢硫基和硝基。
在一些实施方案中，接头包含-(CH2)n-单元，其中n是2-12(例如，2-6)的整数。在一些实施方案中，接头包含-(CH2)n-，其中n是6。
在一些实施方案中，接头包含-(CH2)n-(其中n是1、2、3、4、5或6)，其由下式表示：
Figure BDA0003423520310001411
b.可切割接头
在一些实施方案中，将抗体或其抗原结合片段与细胞毒素缀合的接头在细胞内条件下是可切割的，使得接头的切割在细胞内环境中从抗体释放药物单元。可切割接头被设计成利用局部环境的差异来触发靶细胞中细胞毒素的释放，该局部环境(例如细胞外和细胞内环境)包括例如pH、还原电位或酶浓度。通常，可切割接头在循环中相对稳定，但特别易于通过一种或多种机制(例如，包括但不限于蛋白酶、肽酶和葡萄糖醛酸酶的活性)在细胞内环境中切割。本文使用的可切割接头在循环血浆中和/或在靶细胞外基本稳定，并且可以在靶细胞内或紧邻靶细胞以一些有效速率切割。
合适的可切割接头包括可以例如通过酶促水解、光解、酸性条件下水解、碱性条件下水解、氧化、二硫化物还原、亲核切割或有机金属切割来切割的那些接头(参见，例如，Leriche等人，Bioorg.Med.Chem.,20:571-582,2012，该文献的公开内容通过引用并入本文，因为其涉及适合于共价缀合的接头)。合适的可切割接头可以包括例如化学部分，如肼、二硫化物、硫醚或二肽。
在酸性条件下可水解的接头包括例如腙、缩氨基脲、缩氨基硫脲、顺乌头酰胺、原酸酯、缩醛、缩酮等。(参见，例如，美国专利号5122368；5,824,805；5,622,929；Dubowchik和Walker，1999,Pharm.Therapeutics 83:67-123；Neville等人，1989,Biol.Chem.264:14653-14661，这些文献各自的公开内容通过引用以其整体并入本文，因为其涉及适合于共价缀合的接头。此类接头在中性pH条件(如血液中的那些)下相对稳定，但在低于pH5.5或5.0(溶酶体的近似pH)时不稳定。
在还原条件下可切割的接头包括例如二硫化物。多种二硫化物接头是本领域已知的，包括例如可以使用以下各项形成的那些接头：SATA(N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰硫代乙酸酯)、SPDP(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯)、SPDB(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丁酸酯)和SMPT(N-琥珀酰亚胺基-氧羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-二硫代)甲苯)、SPDB和SMPT(参见，例如，Thorpe等人，1987,Cancer Res.47:5924-5931；Wawrzynczak等人，于Immunoconjugates:Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy ofCancer(C.W.Vogel编,Oxford U.Press,1987。还参见美国专利No.4,880,935，这些文献各自的公开内容通过引用以其整体并入本文，因为其涉及适合于共价缀合的接头。
易于酶促水解的接头可以是例如被胞内肽酶或蛋白酶(包括但不限于溶酶体或内体蛋白酶)切割的含肽接头。使用治疗剂的细胞内蛋白水解释放的一个优点在于该制剂在缀合时通常被减弱并且缀合物的血清稳定性通常较高。在一些实施方案中，肽基接头的长度为至少两个氨基酸或至少三个氨基酸。示例性氨基酸接头包括二肽、三肽、四肽或五肽。合适的肽的实例包括含有氨基酸(如缬氨酸、丙氨酸、瓜氨酸(Cit)、苯丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸和甘氨酸)的那些肽。构成氨基酸接头组分的氨基酸残基包括天然存在的氨基酸残基，以及次要氨基酸和非天然存在的氨基酸类似物，如瓜氨酸。示例性二肽包括缬氨酸-瓜氨酸(vc或val-cit)和丙氨酸-苯丙氨酸(af或ala-phe)。示例性三肽包括甘氨酸-缬氨酸-瓜氨酸(gly-val-cit)和甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(gly-gly-gly)。在一些实施方案中，接头包括二肽，如Val-Cit、Ala-Val或Phe-Lys、Val-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Phe-Arg或Trp-Cit。含有二肽(如Val-Cit或Phe-Lys)的接头公开在例如美国专利号6,214,345中，该文献的公开内容通过引用以其整体并入本文，因为其涉及适合于共价缀合的接头。在一些实施方案中，接头包含选自Val-Ala和Val-Cit的二肽。
适合于将本文描述的抗体、抗原结合片段和配体与细胞毒性分子缀合的接头包括能够通过1,6-消除过程释放细胞毒素的接头。能够进行这种消除过程的化学部分包括对氨基苄基(PAB)基团、6-马来酰亚胺基己酸、pH敏感性碳酸酯以及如Jain等人，Pharm.Res.32:3526-3540,2015中所描述的其他试剂，该文献的公开内容通过引用以其整体并入本文，因为其涉及适合于共价缀合的接头。
在一些实施方案中，接头包括“自毁”基团，如上述PAB或PABC(对氨基苄氧基羰基)，其公开在例如以下文献中：Carl等人，J.Med.Chem.(1981)24:479-480；Chakravarty等人，(1983)J.Med.Chem.26:638-644；US 6214345；US20030130189；US20030096743；US6759509；US20040052793；US6218519；US6835807；US6268488；US20040018194；W098/13059；US20040052793；US6677435；US5621002；US20040121940；W02004/032828)。能够进行这种过程的其他此类化学部分(“自毁接头”)包括氨基甲酸亚甲酯和杂芳基基团，如氨基噻唑、氨基咪唑、氨基嘧啶等。含有此类杂环自毁基团的接头公开在例如以下文献中：美国专利公布号20160303254和20150079114以及美国专利号7,754,681；Hay等人，(1999)Bioorg.Med.Chem.Lett.9:2237；US2005/0256030；de Groot等人，(2001)J.Org.Chem.66:8815-8830；以及US7223837。在一些实施方案中，二肽与自毁接头组合使用。
合适的接头可以含有具有溶解度增强特性的基团。例如，包括(CH2CH2O)p单元(聚乙二醇，PEG)的接头可以增强溶解度，用氨基、磺酸、膦酸或磷酸残基取代的烷基链也如此。包括此类部分的接头公开在例如美国专利号8,236,319和9,504,756中，这些文献各自的公开内容通过引用以其整体并入本文，因为其涉及适合于共价缀合的接头。其他溶解度增强基团包括例如酰基和氨基甲酰基磺酰胺基团，其具有以下结构：
Figure BDA0003423520310001441
其中a是0或1；并且
R10选自下组，该组由以下各项组成：氢、C1-C24烷基基团、C3-C24环烷基基团、C1-C24(杂)芳基基团、C1-C24烷基(杂)芳基基团和C1-C24(杂)芳基烷基基团、C1-C24烷基基团、C3-C24环烷基基团、C2-C24(杂)芳基基团、C3-C24烷基(杂)芳基基团和C3-C24(杂)芳基烷基基团，它们各自可以被一个或多个选自O、S和NR11R12的杂原子任选地取代和/或任选地中断，其中R11和R12独立地选自由氢和C1-C4烷基基团组成的组；或R10是细胞毒素，其中该细胞毒素任选地经由间隔物部分与N连接。含有此类基团的接头描述在例如美国专利号9,636,421和美国专利申请公布号2017/0298145中，这些文献的公开内容通过引用以其整体并入本文，因为它们涉及适合于与细胞毒素和抗体或其抗原结合片段共价缀合的接头。
在一些实施方案中，接头L包含以下中的一种或多种：肼、二硫化物、硫醚、氨基酸、由至多10个氨基酸组成的肽、对氨基苄基(PAB)基团、杂环自毁基团、C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、-(C＝O)-基团、-C(O)NH-基团、-OC(O)NH-基团或-(CH2CH2O)p-基团，其中p是1-6的整数；
其中C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基基团各自可以任选地被1至5个取代基取代，这些取代基对于每种场合而言都独立地选自下组，该组由以下各项组成：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、烷芳基、烷基杂芳基、氨基、铵基、酰基、酰氧基、酰氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、脲基、氨基甲酸酯、芳基、杂芳基、亚磺酰基、磺酰基、羟基、烷氧基、硫烷基、卤素、羧基、三卤甲基、氰基、羟基、氢硫基和硝基。
在一些实施方案中，C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基基团各自可以任选地被选自O、S和N的一个或多个杂原子中断。
在一些实施方案中，C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基基团各自可以任选地被选自O、S和N的一个或多个杂原子中断，并且可以任选地被1至5个取代基取代，这些取代基对于每种场合而言都独立地选自下组，该组由以下各项组成：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、烷芳基、烷基杂芳基、氨基、铵基、酰基、酰氧基、酰氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、脲基、氨基甲酸酯、芳基、杂芳基、亚磺酰基、磺酰基、羟基、烷氧基、硫烷基、卤素、羧基、三卤甲基、氰基、羟基、氢硫基和硝基。
本领域技术人员将认识到，所列基团中的一个或多个可以以二价(双自由基)物质(例如，C1-C6亚烷基)等的形式存在。
在一些实施方案中，接头L包含部分*-L1L2-**，其中：
L1不存在或为-(CH2)mNR13C(＝O)-、-(CH2)mNR13-、-(CH2)mX3(CH2)m-、
Figure BDA0003423520310001451
L2不存在或为-(CH2)m-、-NR13(CH2)m-、-(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-X4、-(CH2)mNR13C(＝O)X4、-(CH2)mNR13C(＝O)-、-((CH2)mO)n(CH2)m-、-((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-、-NR13((CH2)mO)nX3(CH2)m-、-NR13((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-、-X1X2C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)m(O(CH2)m)n-、-(CH2)mNR13(CH2)m-、-(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)mX3(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)-、-(CH2)mNR13(CH2)mC(＝O)X2X1C(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)X2X1C(＝O)-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mX3(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mO)n(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m(O(CH2)m)n-、-(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)-、-(CH2)mNR13(CH2)mC(＝O)-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mNR13C(＝O)-、-(CH2)m(O(CH2)m)nX3(CH2)m-、-(CH2)mX3((CH2)mO)n(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)n-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mC(＝O)-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)-、-((CH2)mO)n(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)NR13-、-(CH2)mC(＝O)NR13-、-(CH2)mX3-、-C(R13)2(CH2)m-、-(CH2)mC(R13)2NR13-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mNR13-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mNR13C(＝O)NR13-、-(CH2)mC(＝O)X2X1C(＝O)-、-C(R13)2(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mC(R13)2NR13-、-C(R13)2(CH2)mX3(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)mC(R13)2NR13-、-C(R13)2(CH2)mOC(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mNR13C(＝O)O(CH2)mC(R13)2NR13-、-(CH2)mX3(CH2)mNR13-、-(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR13-、-(CH2)mNR13-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m(O(CH2)m)nNR13-、-(CH2)m(O(CH2)m)nNR13-、-(CH2CH2O)n(CH2)m-、-(CH2)m(OCH2CH2)n；-(CH2)mO(CH2)m-、-(CH2)mS(＝O)2-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mS(＝O)2-、-(CH2)mX3(CH2)mS(＝O)2-、-(CH2)mX2X1C(＝O)-、-(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)X2X1C(＝O)-、-(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)mX2X1C(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mNR13C(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mC(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)-、-(CH2)mC(＝O)X2X1C(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mX3(O(CH2)m)nC(＝O)-、-(CH2)mNR13C(＝O)((CH2)mO)n(CH2)m-、-(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mNR13C(＝O)NR13(CH2)m-或-(CH2)mX3(CH2)mNR13C(＝O)-；
其中
X1是
Figure BDA0003423520310001471
X2是
Figure BDA0003423520310001472
X3是
Figure BDA0003423520310001473
并且
X4是
Figure BDA0003423520310001474
其中
R13对于每种场合而言都独立地选自H和C1-C6烷基；
m对于每种场合而言都独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10。
m对于每种场合而言都独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13和14；并且
其中单星号(*)指示细胞毒素(例如鹅膏毒素)的附接点，并且双星号(**)指示反应性取代基Z'或化学部分Z的附接点，其前提是L1和L2并非都不存在。
在一些实施方案中，接头包括对氨基苄基基团(PAB)。在一个实施方案中，对氨基苄基基团放置在细胞毒性药物与接头中的蛋白酶切割位点之间。在一个实施方案中，对氨基苄基基团是对氨基苄氧基羰基单元的一部分。在一个实施方案中，对氨基苄基基团是对氨基苄基酰胺基单元的一部分。
在一些实施方案中，接头包含选自下组的肽，该组由以下各项组成：Phe-Lys、Val-Lys、Phe-Ala、Phe-Cit、Val-Ala、Val-Cit和Val-Arg。
在一些实施方案中，接头包含以下中的一种或多种：PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB或Ala-PAB。
在一些实施方案中，接头包含以下中的一种或多种：肽、寡糖、-(CH2)p-、-(CH2CH2O)p-、-(C＝O)(CH2)p-、PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB或Ala-PAB，其中p是1-6的整数。
在一些实施方案中，接头包含PAB-Ala-Val-丙酰基，其由下式表示：
Figure BDA0003423520310001481
在一些实施方案中，接头包含PAB-Cit-Val-丙酰基，其由下式表示：
Figure BDA0003423520310001482
此类PAB-二肽-丙酰基接头公开在例如国际专利申请公布号WO2017/149077中，该文献通过引用以其整体并入本文。
在某些实施方案中，ADC的接头是马来酰亚胺己酰基-Val-Ala-对氨基苄基(mc-Val-Ala-PAB)。
在某些实施方案中，ADC的接头是马来酰亚胺己酰基-Val-Cit-对氨基苄基(mc-vc-PAB)。
在一些实施方案中，接头包含
Figure BDA0003423520310001491
在一些实施方案中，接头包含MCC(4-[N-马来酰亚胺甲基]环己烷-1-羧酸酯)。
本领域技术人员将认识到，本文公开的化学基团、部分和特征中的任何一种或多种可以多种方式组合以形成可用于如本文所公开的抗体和细胞毒素的缀合的接头。可用于与本文描述的组合物和方法结合使用的其他接头描述例如在美国专利申请公布号2015/0218220中，该文献的公开内容通过引用以其整体并入本文。
4.接头-细胞毒素和接头-抗体缀合
在某些实施方案中，在适当的条件下，接头与细胞毒素进行反应以形成接头-细胞毒素缀合物。在某些实施方案中，在细胞毒素或接头上使用反应性基团以形成共价附接。在一些实施方案中，细胞毒素是根据式(III)、(IIIa)、(IIIb)或(IIIc)中的任何一个的鹅膏毒素或其衍生物。随后，在适当的条件下，细胞毒素-接头缀合物与抗体、衍生化抗体或其抗原结合片段进行反应以形成ADC。
替代地，接头可以首先与抗体、衍生化抗体或其抗原结合片段进行反应以形成接头-抗体缀合物，然后与细胞毒素进行反应以形成ADC。现在将更全面地描述此类缀合反应。
多种不同的反应可用于将接头或细胞毒素-接头缀合物共价附接到抗体或其抗原结合片段。抗体分子上合适的附接点包括但不限于赖氨酸的胺基团、谷氨酸和天冬氨酸的游离羧酸基团、半胱氨酸的巯氢基基团以及芳香性氨基酸的各种部分。例如，可以使用碳化二亚胺反应进行非特异性共价附接，以将接头上的羧基(或氨基)基团与抗体部分上的氨基(或羧基)基团连接。另外，双功能制剂(如二醛或亚氨酸酯)也可以用于将接头上的氨基基团与抗体部分上的氨基基团连接。希夫碱反应也可用于将细胞毒素附接到抗体部分。这种方法涉及对抗体或接头上的二醇或羟基进行高碘酸盐氧化，从而形成醛，该醛然后分别与接头或抗体进行反应。共价键形成经由在醛与氨基基团之间形成席夫碱而发生。异硫氰酸酯也可以用作偶联剂，以将细胞毒素或抗体部分共价附接到接头。其他技术对于熟练技术人员而言是已知的，并且在本公开范围内。
可用于与如本文所描述的抗体或抗原结合片段缀合的接头包括但不限于含有通过抗体与接头上的反应性化学部分(在本文中被称为反应性取代基Z')之间的偶联反应形成的化学部分Z的接头，如下表3中所描绘的。波浪线分别标示抗体或抗原结合片段和细胞毒性分子的附接点。
表3.在抗体-药物缀合物的形成中通过偶联反应形成的示例性化学部分Z
Figure BDA0003423520310001501
Figure BDA0003423520310001511
Figure BDA0003423520310001521
Figure BDA0003423520310001531
本领域技术人员将认识到，附接到接头的反应性取代基Z'和抗体或其抗原结合片段上的反应性取代基参与共价偶联反应以产生化学部分Z，并且将认识该反应性取代基Z'。因此，可以通过抗体或其抗原结合片段与如本文所描述的接头或细胞毒素-接头缀合物的反应来形成可用于与本文描述的方法结合使用的抗体-药物缀合物，该接头或细胞毒素-接头缀合物包括反应性取代基Z'，其适合于与抗体或其抗原结合片段上的反应性取代基进行反应以形成化学部分Z。
在一些实施方案中，Z’是-NR13C(＝O)CH＝CH2、-N3、-SH、-S(＝O)2(CH＝CH2)、-(CH2)2S(＝O)2(CH＝CH2)、-NR13S(＝O)2(CH＝CH2)、-NR13C(＝O)CH2R14、-NR13C(＝O)CH2Br、-NR13C(＝O)CH2I、-NHC(＝O)CH2Br、-NHC(＝O)CH2I、-ONH2、-C(O)NHNH2、-CO2H、-NH2、-NH(C＝O)、-NC(＝S)、
Figure BDA0003423520310001541
Figure BDA0003423520310001551
其中
R13对于每种场合而言都独立地选自H和C1-C6烷基；
R14是-S(CH2)nCHR15NHC(＝O)R13；
R15是R13或-C(＝O)OR13；
R16对于每种场合而言都独立地选自H、C1-C6烷基、F、Cl和-OH；
R17对于每种场合而言都独立地选自H、C1-C6烷基、F、Cl、-NH2、-OCH3、-OCH2CH3、-N(CH3)2、-CN、-NO2和-OH；并且
R18对于每种场合而言都独立地选自H、C1-C6烷基、F、被-C(＝O)OH取代的苄氧基、被-C(＝O)OH取代的苄基、被-C(＝O)OH取代的C1-C4烷氧基和被-C(＝O)OH取代的C1-C4烷基。
如表3中所描绘，接头上合适反应性取代基Z’和抗体或其抗原结合片段上的反应性取代基的实例包括亲核体/亲电体对(例如，硫醇/卤代烷基对、胺/羰基对、或硫醇/α,β-不饱和羰基对等)、二烯/亲二烯体对(例如，叠氮化物/炔烃对、或二烯/α,β-不饱和羰基对等)等。反应性取代基之间形成化学部分Z的偶联反应包括但不限于本领域已知或本文描述的硫醇烷基化、羟基烷基化、胺烷基化、胺或羟胺缩合、肼形成、酰胺化、酯化、二硫化物形成、环加成(例如，[4+2]Diels-Alder环加成、[3+2]Huisgen环加成等)、亲核芳香族取代、亲电芳香族取代和其他反应模式。在一些实施方案中，反应性取代基Z'是适合于与抗体或其抗原结合片段上的亲核功能基团进行反应的亲电功能基团。
可以存在于如本文所公开的抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基包括但不限于亲核基团，如(i)N-末端胺基团，(ii)侧链胺基团(例如，赖氨酸)，(iii)侧链硫醇基团(例如，半胱氨酸)，以及(iv)糖羟基或氨基基团，其中抗体是糖基化的。可以存在于如本文所公开的抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基包括但不限于丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基的羟基部分；赖氨酸残基的氨基部分；天冬氨酸和谷氨酸残基的羧基部分；以及半胱氨酸残基的硫醇部分，以及非天然存在的氨基酸的炔丙基、叠氮基、卤代芳基(例如，氟代芳基)、卤代杂芳基(例如，氟代杂芳基)、卤代烷基和卤代杂烷基部分。在一些实施方案中，存在于如本文所公开的抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基包括胺或硫醇部分。某些抗体具有可还原的链间二硫化物，即半胱氨酸桥。可以通过用还原剂(如DTT(二硫苏糖醇))处理使抗体与接头试剂发生缀合反应。因此，每个半胱氨酸桥理论上将形成两个反应性硫醇亲核体。可以通过赖氨酸与2-亚氨基硫烷(iminothiolane)(Traut试剂)的反应将额外的亲核基团引入到抗体中，从而将胺转化为硫醇。可以通过引入一个、两个、三个、四个或更多个半胱氨酸残基来将反应性硫醇基团引入到抗体(或其片段)中(例如，制备包含一个或多个非天然半胱氨酸氨基酸残基的突变抗体)。美国专利号7,521,541教导了通过引入反应性半胱氨酸氨基酸来对抗体进行工程化改造。
在一些实施方案中，附接到接头的反应性取代基Z'是亲核基团，其与抗体上存在的亲电基团进行反应。抗体上有用的亲电基团包括但不限于醛和酮羰基基团。亲核基团(例如)杂原子可以与抗体上的亲电基团进行反应，并且与抗体形成共价键。有用的亲核基团包括但不限于酰肼、肟、氨基、羟基、肼、缩氨基硫脲、肼肼羧酸和芳基酰肼。
在一些实施方案中，化学部分Z是存在于抗体或其抗原结合片段内的反应性亲核取代基(如胺和硫醇部分)与附接到接头的反应性亲电取代基Z'之间的反应的产物。例如，Z'可以是Michael受体(例如，马来酰亚胺)、活化酯、电子缺乏型羰基化合物或醛等。
反应性取代基和所得化学部分的若干代表性和非限制性实例提供在表4中。
表4.互补反应性取代基和化学部分
Figure BDA0003423520310001571
例如，适合于接头-抗体缀合物和ADC的合成的接头包括但不限于附接到接头的反应性取代基Z'，如马来酰亚胺或卤代烷基基团。这些可以通过例如如以下试剂附接到接头：琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺甲基)-环己烷-L-羧酸酯(SMCC)、N-琥珀酰亚胺基碘乙酸酯(SIA)、磺酸基-SMCC、间马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯(MBS)、磺酸基-MBS和琥珀酰亚胺基碘乙酸酯、以及描述在例如Liu等人，18:690-697,1979中的其他试剂，该文献的公开内容通过引用并入本文，因为其涉及用于化学缀合的接头。
在一些实施方案中，附接到接头L的反应性取代基Z'是马来酰亚胺、叠氮化物或炔烃。含有马来酰亚胺的接头的实例是不可切割的基于马来酰亚胺己酰基的接头，其特别可用于微管破坏剂(如澳瑞他汀)的缀合。此类接头由Doronina等人，Bioconjugate Chem.17:14-24,2006进行了描述，该文献的公开内容通过引用并入本文，因为其涉及用于化学缀合的接头。
在一些实施方案中，反应性取代基Z'是-(C＝O)-或-NH(C＝O)-，使得接头可以通过酰胺或脲部分与抗体或其抗原结合片段连接，该酰胺或脲部分分别是通过-(C＝O)-或-NH(C＝O)-基团与抗体或其抗原结合片段的氨基的反应而产生的。
在一些实施方案中，反应性取代基Z'是N-马来酰亚胺基基团、卤化N-烷基酰胺基基团、磺酰基氧基N-烷基酰胺基基团、碳酸酯基基团、磺酰基卤化物基团、硫醇基团或其衍生物、包含内部碳-碳三键的炔基基团、(杂)环炔基基团、双环[6.1.0]壬-4-炔-9-基基团、包含内部碳-碳双键的烯基基团、环烯基基团、四嗪基(tetrazinyl)基团、叠氮基基团、磷化氢(phosphine)基团、氧化腈基团、硝酮基团、腈亚胺基团、重氮基基团、酮基团、(O-烷基)羟氨基基团、肼基团、卤化N-马来酰亚胺基团、1,1-双(磺酰基甲基)甲基羰基基团或其消除衍生物、羰基卤化物基团或丙二烯酰胺(allenamide)基团，它们各自可以是任选取代的。在一些实施方案中，反应性取代基包含环烯基团、环炔基团或任选取代的(杂)环炔基基团。
在一些实施方案中，化学部分Z选自表3或表4。在一些实施方案中，化学部分Z是：
Figure BDA0003423520310001581
其中S是硫原子，其表示存在于与在人干细胞或T细胞上表达的抗原特异性结合的抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基(例如，来自半胱氨酸残基的-SH基团)。
在一些实施方案中，在与抗体或其抗原结合片段缀合之前，合在一起以L-Z'表示的接头-反应性取代基基团具有以下结构：
Figure BDA0003423520310001591
其中波浪线指示细胞毒素(例如，鹅膏毒素或其衍生物)的附接点。这种接头-反应性取代基基团L-Z'可以替代地被称为N-β-马来酰亚胺丙基-Val-Ala-对氨基苄基(BMP-Val-Ala-PAB)。
在一些实施方案中，接头L和化学部分Z在与抗体缀合后(三者合在一起以L-Z-Ab表示)具有以下结构：
Figure BDA0003423520310001592
其中S是硫原子，其表示存在于与在人干细胞或T细胞上表达的抗原特异性结合的抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基(例如，来自半胱氨酸残基的-SH基团)。接头末端处的波浪线指示细胞毒素(例如，鹅膏毒素或其衍生物)的附接点。
在一些实施方案中，在与抗体或其抗原结合片段缀合之前，合在一起以L-Z'表示的接头-反应性取代基基团具有以下结构：
Figure BDA0003423520310001593
其中波浪线指示细胞毒素(例如，鹅膏毒素或其衍生物)的附接点。
在一些实施方案中，接头L和化学部分Z在与抗体缀合后(三者合在一起以L-Z-Ab表示)具有以下结构：
Figure BDA0003423520310001594
其中S是硫原子，其表示存在于与在人干细胞或T细胞上表达的抗原特异性结合的抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基(例如，来自半胱氨酸残基的-SH基团)。接头末端处的波浪线指示细胞毒素(例如，鹅膏毒素或其衍生物)的附接点。
在一些实施方案中，如本文所公开的鹅膏毒素与具有下式的接头-反应性部分L-Z'缀合：
Figure BDA0003423520310001601
在一些实施方案中，如本文所公开的鹅膏毒素与具有下式的接头-反应性部分L-Z'缀合：
Figure BDA0003423520310001602
可用于与本文描述的组合物和方法结合使用的前述接头部分和鹅膏毒素-接头缀合物等描述例如在美国专利申请公布号2015/0218220和专利申请公布号WO2017/149077中，这些文献各自的公开内容通过引用以其整体并入本文。
在一个方面，如本文所公开的ADC的细胞毒素是鹅膏毒素或其衍生物。在一些实施方案中，鹅膏毒素由式(III)、(IIIa)、(IIIb)或(IIIc)中的任何一个表示。本领域技术人员将认识到，此类鹅膏毒素对于接头的附接点而言存在多种可能性(例如，在由变量R1至R9指示的任何位置处)。
例如，本文描述的抗体或抗原结合片段可以与鹅膏毒素结合以便形成由式Ab-ZL-Am表示的缀合物，其中Ab是抗体或其抗原结合片段，L是接头，Z是化学部分，并且Am是鹅膏毒素。在一些实施方案中，Ab-Z-L-Am由以下结构式(I)表示：
Figure BDA0003423520310001611
其中：
Q是-S-、-S(O)-或-SO2-；
R1是H、OH、ORA或ORD；
R2是H、OH、ORB或ORD；
RA和RB，当存在时，与它们所结合的氧原子一起组合以形成任选取代的5元杂环烷基基团；
R3是H、RC或RD；
R4是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R5是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R6是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R7是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8是OH、NH2、ORC、ORD、NHRD或NRCRD；
R9是H、OH、ORC或ORD；
RC是C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基或其组合，其中C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基各自可以任选地被1至5个取代基取代，这些取代基对于每种场合而言都独立地选自下组，该组由以下各项组成：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、烷芳基、烷基杂芳基、氨基、铵基、酰基、酰氧基、酰氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、脲基、氨基甲酸酯、芳基、杂芳基、亚磺酰基、磺酰基、羟基、烷氧基、硫烷基、卤素、羧基、三卤甲基、氰基、羟基、氢硫基和硝基；并且
RD是-L-Z-Ab，其中L、Z和Ab各自如本文所公开。
在一些实施方案中，式(I)的ADC正好含有一个RD取代基；
在一些实施方案中，式(I)的ADC由式(Ia)表示：
Figure BDA0003423520310001621
其中Q、R1-R9、RA、RB、RC和RD中的每一个如先前对式(I)所定义的。
在一些实施方案中，式(Ia)的ADC正好含有一个RD取代基；
在一些实施方案中，式(I)的ADC由式(Ib)表示：
Figure BDA0003423520310001622
其中Q、R1-R9、RA、RB、RC和RD中的每一个如先前对式(I)所定义的。
在一些实施方案中，式(Ib)的ADC正好含有一个RD取代基；
在一些实施方案中，ADC由式(I)、(Ia)或(Ib)表示，其中：
RA和RB，当存在时，与它们所结合的氧原子一起组合以形成：
Figure BDA0003423520310001631
其中：
Y是-(C＝O)-、-(C＝S)-、-(C＝NRE)-或CRERE’；并且
RE和RE'各自独立地选自H、C1-C6亚烷基-RD、C1-C6杂亚烷基-RD、C2-C6亚烯基-RD、C2-C6杂亚烯基-RD、C2-C6亚炔基-RD、C2-C6杂亚炔基-RD、亚环烷基-RD、杂环亚烷基-RD、亚芳基-RD、杂亚芳基-RD；
其中所述C1-C6亚烷基、C1-C6杂亚烷基、C2-C6亚烯基、C2-C6杂亚烯基、C2-C6亚炔基、C2-C6杂亚炔基、亚环烷基、杂环亚烷基、亚芳基或杂亚芳基中的每一种可以任选地被1至5个取代基取代，这些取代基对于每种场合而言都独立地选自下组，该组由以下各项组成：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、烷芳基、烷基杂芳基、氨基、铵基、酰基、酰氧基、酰氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、脲基、氨基甲酸酯、芳基、杂芳基、亚磺酰基、磺酰基、羟基、烷氧基、硫烷基、卤素、羧基、三卤甲基、氰基、羟基、氢硫基和硝基。
在一些实施方案中，ADC由式(I)、(Ia)或(Ib)表示，其中：
R1是H、OH、ORA或ORD；
R2是H、OH、ORB或ORD；
RA和RB，当存在时，与它们所结合的氧原子一起组合以形成：
Figure BDA0003423520310001632
R3是H、RC或RD；
R4是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R5是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R6是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R7是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8是OH、NH2、ORD或NHRD；并且
R9是H或OH。
在一些实施方案中，ADC由式(I)、(Ia)或(Ib)表示，其中：
R1是H、OH、ORA或ORD；
R2是H、OH、ORB或ORD；
RA和RB，当存在时，与它们所结合的氧原子一起组合以形成：
Figure BDA0003423520310001641
R3是H或RD；
R4和R5各自独立地是H、OH、ORC、RD或ORD；
R6和R7各自是H；
R8是OH、NH2、ORD或NHRD；并且
R9是H或OH。
在一些实施方案中，ADC由式(I)、(Ia)或(Ib)表示，其中
R1是H、OH或ORA；
R2是H、OH或ORB；
RA和RB，当存在时，与它们所结合的氧原子一起组合以形成：
Figure BDA0003423520310001642
R3、R4、R6和R7各自是H；
R5是ORD；
R8是OH或NH2；并且
R9是H或OH。
此类鹅膏毒素缀合物描述例如在美国专利申请公布号2016/0002298中，该文献的公开内容通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，ADC由式(I)、(Ia)或(Ib)表示，其中
R1和R2各自独立地是H或OH；
R3是RD；
R4、R6和R7各自是H；
R5是H、OH或OC1-6烷基；
R8是OH或NH2；并且
R9是H或OH。
此类鹅膏毒素缀合物描述例如在美国专利申请公布号2014/0294865中，该文献的公开内容通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，ADC由式(I)、(Ia)或(Ib)表示，其中
R1和R2各自独立地是H或OH；
R3、R6和R7各自是H；
R4和R5各自独立地是H、OH、ORD或RD；
R8是OH或NH2；并且
R9是H或OH。
此类鹅膏毒素缀合物描述例如在美国专利申请公布号2015/0218220中，该文献的公开内容通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，ADC由式(I)、(Ia)或(Ib)表示，其中
R1和R2各自独立地是H或OH；
R3、R6和R7各自是H；
R4和R5各自独立地是H或OH；
R8是OH、NH2、ORD或NHRD；并且
R9是H或OH。
此类鹅膏毒素缀合物描述例如在美国专利号9,233,173和9,399,681中，以及在US2016/0089450中，这些文献各自的公开内容通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，ADC由式(I)、(Ia)或(Ib)表示，其中
R1和R2各自是OH；
R3、R4、R6和R7各自是H；
R5是ORD；
R8是NH2；并且
R9是OH。
在一些实施方案中，ADC由式(I)、(Ia)或(Ib)表示，其中
R1和R2各自独立地是H或OH；
R3、R6和R7各自是H；
R4和R5各自独立地是H或OH；
R8是ORD或NHRD；并且
R9是H或OH。
在一些实施方案中，接头L包含以下中的一种或多种：肼、二硫化物、硫醚、氨基酸、由至多10个氨基酸组成的肽、对氨基苄基(PAB)基团、杂环自毁基团、C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、-(C＝O)-基团、-C(O)NH-基团、-OC(O)NH-基团、-(CH2CH2O)p-基团(其中p是1-6的整数)或溶解度增强基团；
其中C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基基团各自可以任选地被1至5个取代基取代，这些取代基对于每种场合而言都独立地选自下组，该组由以下各项组成：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、烷芳基、烷基杂芳基、氨基、铵基、酰基、酰氧基、酰氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、脲基、氨基甲酸酯、芳基、杂芳基、亚磺酰基、磺酰基、羟基、烷氧基、硫烷基、卤素、羧基、三卤甲基、氰基、羟基、氢硫基和硝基。
在一些实施方案中，C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基基团各自可以任选地被选自O、S和N的一个或多个杂原子中断。
在一些实施方案中，C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基基团各自可以任选地被选自O、S和N的一个或多个杂原子中断，并且可以任选地被1至5个取代基取代，这些取代基对于每种场合而言都独立地选自下组，该组由以下各项组成：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、烷芳基、烷基杂芳基、氨基、铵基、酰基、酰氧基、酰氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、脲基、氨基甲酸酯、芳基、杂芳基、亚磺酰基、磺酰基、羟基、烷氧基、硫烷基、卤素、羧基、三卤甲基、氰基、羟基、氢硫基和硝基。
在一些实施方案中，接头包括对氨基苄基基团(PAB)。在一个实施方案中，对氨基苄基基团放置在细胞毒性药物与接头中的蛋白酶切割位点之间。在一个实施方案中，对氨基苄基基团是对氨基苄氧基羰基单元的一部分。在一个实施方案中，对氨基苄基基团是对氨基苄基酰胺基单元的一部分。
在一些实施方案中，接头包含选自下组的肽，该组由以下各项组成：Phe-Lys、Val-Lys、Phe-Ala、Phe-Cit、Val-Ala、Val-Cit和Val-Arg。
在一些实施方案中，接头包含以下中的一种或多种：PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB或Ala-PAB。
在一些实施方案中，接头包含以下中的一种或多种：肽、寡糖、-(CH2)p-、-(CH2CH2O)p-、-(C＝O)(CH2)p-、PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB或Ala-PAB，其中p是1-6的整数。
在一些实施方案中，接头包含PAB-Ala-Val-丙酰基，其由下式表示：
Figure BDA0003423520310001671
在一些实施方案中，接头包含PAB-Cit-Val-丙酰基，其由下式表示：
Figure BDA0003423520310001672
在一些实施方案中，化学部分Z选自表3或表4。在一些实施方案中，化学部分Z是：
Figure BDA0003423520310001673
其中S是硫原子，其表示存在于与在人干细胞或T细胞上表达的抗原特异性结合的抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基(例如，来自半胱氨酸残基的-SH基团)。
在一些实施方案中，在与抗体或其抗原结合片段缀合之前，合在一起以L-Z'表示的接头-反应性取代基基团具有以下结构：
Figure BDA0003423520310001674
在一些实施方案中，接头L和化学部分Z在与抗体缀合后(三者合在一起以L-Z-Ab表示)具有以下结构：
Figure BDA0003423520310001681
其中S是硫原子，其表示存在于与在人干细胞或T细胞上表达的抗原特异性结合的抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基(例如，来自半胱氨酸残基的-SH基团)。
在一些实施方案中，接头包含-(CH2)n-单元，其中n是2-6的整数。在一些实施方案中，接头包含-(CH2)n-，其中n是6。在一些实施方案中，接头是-(CH2)n-(其中n是6)，其由下式表示：
Figure BDA0003423520310001682
在一些实施方案中，在与抗体或其抗原结合片段缀合之前，合在一起以L-Z'表示的接头-反应性取代基基团具有以下结构：
Figure BDA0003423520310001683
在一些实施方案中，接头L和化学部分Z在与抗体缀合后(三者合在一起以L-Z-Ab表示)具有以下结构：
Figure BDA0003423520310001684
其中S是硫原子，其表示存在于与在人干细胞或T细胞上表达的抗原特异性结合的抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基(例如，来自半胱氨酸残基的-SH基团)。
在特定的实施方案中，式(I)的ADC具有以下结构中的一个：
Figure BDA0003423520310001691
在特定的实施方案中，式(Ia)的ADC具有以下结构中的一个：
Figure BDA0003423520310001701
在特定的实施方案中，式(Ib)的ADC具有以下结构中的一个：
Figure BDA0003423520310001711
5.抗体-药物缀合物的制备
在如本文所公开的式Ab-(Z-L-Cy)n的ADC(如式(I)、(Ia)或(Ib)中的任何一个的ADC)中，抗体或其抗原结合片段(Ab)通过如本文所公开的接头L和化学部分Z与一个或多个细胞毒性药物部分(Cy；例如，鹅膏毒素)(例如，每抗体约1至约20个细胞毒性部分)缀合。在一些实施方案中，n是1。
可以采用本领域技术人员已知的有机化学反应、条件和试剂，通过若干途径来制备本公开ADC，该有机化学反应、条件和试剂包括：(1)抗体或其抗原结合片段的反应性取代基与二价接头试剂进行反应以形成如上文所描述的Ab-Z-L，随后与细胞毒性部分Cy进行反应；或(2)细胞毒性部分的反应性取代基与二价接头试剂进行反应以形成Cy-L-Z'，随后与如上文所描述的抗体或其抗原结合片段的反应性取代基进行反应以形成式Ab-(Z-L-Cy)n的ADC。本文描述了用于制备ADC的额外方法。
在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段可以具有一个或多个碳水化合物基团，这些碳水化合物基团可以进行化学修饰以具有一个或多个巯氢基基团。然后，如上文所描述，通过巯氢基基团的硫原子来缀合形成ADC。
在另一实施方案中，抗体可以具有一个或多个碳水化合物基团，这些碳水化合物基团可以被氧化以提供醛(-CHO)基团(参见，例如，Laguzza等人，J.Med.Chem.1989,32(3),548-55)。然后，如上文所描述，通过相应醛来缀合形成ADC。用于修饰蛋白质以附接或关联细胞毒素的其他方案描述在Coligan等人，Current Protocols in Protein Science,vol.2,John Wiley&Sons(2002)中，该文献通过引用并入本文。
用于将接头-药物部分与靶向细胞的蛋白质(如抗体、免疫球蛋白或其片段)缀合的方法见于例如美国专利号5,208,020；美国专利号6,441,163；WO2005037992；WO2005081711；以及WO2006/034488，所有这些文献在此明确地通过引用以其整体并入。
替代地，可以制造包含抗体和细胞毒性剂的融合蛋白，例如通过重组技术或肽合成来进行。DNA的长度可以包含编码缀合物的两个部分的相应区域，该两个部分彼此相邻或者被编码不破坏缀合物的期望特性的接头肽的区域隔开。
6.药物组合物
可以将本文描述的ADC以多种剂型施用到患者(例如，患有免疫性疾病或癌症的人患者)。例如，可以将本文描述的ADC以水溶液(如含有一种或多种药物上可接受的赋形剂的水溶液)的形式施用到患有免疫性疾病或癌症的患者。用于与本文描述的组合物和方法一起使用的合适的药物上可接受的赋形剂包括粘度改性剂。可以使用本领域已知的技术对水溶液进行消毒。
包含如本文所描述的ADC的药物配制剂通过将此种ADC与一种或多种任选的药物上可接受的载体进行混合来制备(Remington's Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.Ed.(1980))，并且呈冻干配制剂或水溶液的形式。药物上可接受的载体在所采用的剂量和浓度下对接受体通常是无毒性的，并且包括但不限于：缓冲液，如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，其包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六烃季铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷基酯，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；以及间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、双糖和其它碳水化合物，其包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖类，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇等；形成盐的抗衡离子，如钠；金属复合物(如锌-蛋白质复合物)；和/或非离子型表面活性剂，如聚乙二醇(PEG)。
D.施用和给药的途径
1.抗体药物缀合物(ADC)施用
可以将本文描述的抗体或其抗原结合片段以多种剂型施用到患者(例如，患有癌症、自身免疫性疾病或需要造血干细胞移植物疗法的人患者)。例如，可以将本文描述的抗体或其抗原结合片段以水溶液(如含有一种或多种药物上可接受的赋形剂的水溶液)的形式施用到患有癌症、自身免疫性疾病或需要造血干细胞移植物疗法的患者。用于与本文描述的组合物和方法一起使用的药物上可接受的赋形剂包括粘度改性剂。可以使用本领域已知的技术对水溶液进行消毒。
包含如本文所描述的抗CD117或抗CD45抗体和ADC的药物配制剂通过将此种抗体或ADC与一种或多种任选的药物上可接受的载体进行混合来制备(Remington'sPharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.Ed.(1980))，并且呈冻干配制剂或水溶液的形式。药物上可接受的载体在所采用的剂量和浓度下对接受体通常是无毒性的，并且包括但不限于：缓冲液，如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，其包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六烃季铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷基酯，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；以及间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、双糖和其它碳水化合物，其包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖类，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇等；形成盐的抗衡离子，如钠；金属复合物(如锌-蛋白质复合物)；和/或非离子型表面活性剂，如聚乙二醇(PEG)。
本文描述的抗体和抗原结合片段可以通过多种途径施用，如口服、透皮、皮下、鼻内、静脉内、肌内、眼内或胃肠外。在任何给定情况下，最合适的施用途径将取决于所施用的特定抗体或抗原结合片段、患者、药物配制方法、施用方法(例如，施用时间和施用途径)、患者的年龄、体重、性别、所治疗疾病的严重程度、患者的饮食和患者的排泄率。
本文描述的抗CD117或抗CD45缀合物、抗体或其抗原结合片段的有效剂量的范围可以为例如约0.001至约100mg/kg(按体重计，每单次(例如，大剂量)施用、多次施用或连续施用的量)，或达到抗体或其抗原结合片段的最佳血清药物浓度(例如，血清药物浓度为0.0001-5000μg/mL)。可以将该剂量每天、每周或每月一次或多次(例如，2-10次)施用到患有癌症、自身免疫性疾病或经受调理疗法以准备接受造血干细胞移植的受试者(例如，人)。在造血干细胞移植之前的调理程序的情况下，可以在最佳促进外源性(经遗传修饰的)造血干细胞的植入的时间处将抗体或其抗原结合片段施用到患者，该时间例如为施用外源性(经遗传修饰的)造血干细胞移植之前约1小时至约1周(例如，约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、约24小时、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天)或更长时间。
使用本文公开的方法，本领域技术人员可以将能够结合由造血干细胞表达的抗原的抗CD117或抗CD45ADC、抗体或其抗原结合片段(如结合例如CD117或CD45的抗体或其抗原结合片段(例如，结合GNNK+CD117的抗体或其抗原结合片段))施用到需要遗传修饰造血干细胞移植物疗法的人患者。以这种方式，可以在施用遗传修饰造血干细胞移植物之前耗尽内源性造血干细胞群体，以促进造血干细胞移植物的植入。
如上文所描述，可以将抗体与毒素(如本文描述或本领域已知的细胞毒性分子)共价缀合。例如，可以将抗CD117抗体或其抗原结合片段(如抗GNNK+CD117抗体或其抗原结合片段)或者抗CD45抗体或其抗原结合片段与细胞毒素(如假单胞菌外毒素A、deBouganin、白喉毒素、鹅膏毒素(如γ-鹅膏蕈碱、α-鹅膏蕈碱)、皂草素、美登素、美登木素生物碱、澳瑞他汀、蒽环类药物、加利车霉素、伊立替康、SN-38、杜卡霉素、吡咯并苯并二氮杂卓、吡咯并苯并二氮杂卓二聚体、二氢吲哚基苯并二氮杂卓、二氢吲哚基苯并二氮杂卓二聚体或其变体)共价缀合。可以使用本文描述或本领域已知的共价键形成技术来进行这种缀合。随后可以在将遗传修饰造血干细胞(如自体、同基因或同种异体造血干细胞)移植到患者之前，例如通过静脉内施用将抗体、其抗原结合片段或药物-抗体缀合物施用到患者。
可以在造血干细胞移体疗法之前，以足以减少内源性造血干细胞的数量的量施用抗CD117抗体(例如，抗GNNK+CD117)或抗CD45抗体、或其抗原结合片段或其抗体药物缀合物，例如，减少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％或更多。可以使用本领域已知的常规技术来监测造血干细胞计数的减少，如通过对血液样品中表达特征性造血干细胞表面抗原的细胞进行FACS分析，该血液样品是在调理疗法期间以不同的间隔从患者抽取的。例如，本领域技术人员可以在调理疗法期间的不同时间点处从患者抽取血液样品，并且通过进行FACS分析来确定内源性造血干细胞减少的程度，以使用与造血干细胞标志物抗原结合的抗体来阐明样品中造血干细胞的相对浓度。根据一些实施方案，当造血干细胞的浓度响应于使用抗CD117抗体(例如，抗GNNK+CD117)或抗CD45抗体、或其抗原结合片段或其抗体药物缀合物的调理疗法达到最小值时，技术人员可以结束调理疗法，并且可以开始为患者准备造血干细胞移植物疗法。
可以在含有一种或多种药物上可接受的赋形剂(如粘度改性剂)的水溶液中将抗CD117抗体(例如，抗GNNK+CD117)或抗CD45抗体、或其抗原结合片段或其抗体药物缀合物施用到患者。可以使用本文描述或本领域已知的技术对水溶液进行消毒。可以在将造血干细胞移植物施用到患者之前，将抗体、其抗原结合片段或其抗体药物缀合物以例如0.001mg/kg至100mg/kg的剂量施用到患者。可以在最佳促进遗传修饰造血干细胞的植入的时间处将抗体、或其抗原结合片段或药物-抗体缀合物施用到患者，该时间例如为施用遗传修饰造血干细胞移植之前约1小时至约1周(例如，约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、约24小时、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天)或更长时间。
2.遗传修饰干细胞施用
在调理疗法结束后，患者然后可以接受遗传修饰造血干细胞的输注(例如，静脉内输注)，例如由进行调理疗法的同一内科医生执行或由不同的内科医生执行。内科医生可以将自体、同基因或同种异体遗传修饰造血干细胞的输注，例如以1x103至1x109个造血干细胞/kg的剂量施用到患者。在一些实施方案中，内科医生可以将遗传修饰HSC以以下剂量施用到患者：约1x103、约2x103、约3x103、约4x103、约5x103、约6x103、约7x103、约8x103、约9x103、约1x104、约2x104、约3x104、约4x104、约5x104、约6x104、约7x104、约8x104、约9x104、约1x105、约2x105、约3x105、约4x105、约5x105、约6x105、约7x105、约8x105、约9x105、约1x106、约2x106、约3x106、约4x106、约5x106、约6x106、约7x106、约8x106、约9x106、约1x107、约2x107、约3x107、约4x107、约5x107、约6x107、约7x107、约8x107、约9x107、约1x108、约2x108、约3x108、约4x108、约5x108、约6x108、约7x108、约8x108、约9x108、约1x109、约2x109、约3x109、约4x109、约5x109、约6x109、约7x109、约8x109或约9x109个HSC/kg。在一些实施方案中，内科医生可以将遗传修饰HSC以约1x103至约1x108个HSC/kg的剂量施用到患者。在一些实施方案中，内科医生可以将遗传修饰HSC以约1x103至约1x107个HSC/kg的剂量施用到患者。在一些实施方案中，内科医生可以将遗传修饰HSC以约1x103至约1x106个HSC/kg的剂量施用到患者。在一些实施方案中，内科医生可以将遗传修饰HSC以约1x103至约1x105个HSC/kg的剂量施用到患者。在一些实施方案中，内科医生可以将遗传修饰HSC以约1x104至约1x108个HSC/kg的剂量施用到患者。在一些实施方案中，内科医生可以将遗传修饰HSC以约1x105至约1x108个HSC/kg的剂量施用到患者。在一些实施方案中，内科医生可以将遗传修饰HSC以约1x106至约1x108个HSC/kg的剂量施用到患者。
内科医生可以例如通过以下方式来监测遗传修饰造血干细胞移植物的植入：在施用移植物后，从患者抽取血液样品并确定造血干细胞或造血谱系细胞(如巨核细胞、血栓细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、成髓细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、小胶质细胞、粒细胞、单核细胞、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞)浓度的增加。例如，可以在遗传修饰造血干细胞移植物治疗后1小时至6个月或更长时间进行这种分析(例如，约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时，约23小时、约24小时、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约9周、约10周、约11周、约12周、约13周、约14周、约15周、约16周约17周、约18周、约19周、约20周、约21周、约22周、约23周、约24周或更多；约1小时至约24周、约1周至约10周、约1天至约24周、约1天至约6个月、约1天至约5个月、约1天至约4个月、约1天至约3个月、约1天至约2个月、约1天至约1个月、约)。本文还考虑了涵盖前述时间(例如，约4周)的范围。在移植物疗法后，相对于移植物疗法前相应细胞类型的浓度，造血干细胞或造血谱系细胞的浓度增加(例如，增加约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约100％、约200％、约500％或更多；约1％至约500％、约5％至约250％、约10％至约100％、约15％至约200％、约20％至约200％、约30％至约300％、约1％至约100％)，这一发现指示，使用抗CD117(例如，抗GNNK+CD117)或抗CD45抗体、其抗原结合片段或药物-抗体缀合物(ADC)进行治疗已成功地促进移植的遗传修饰造血干细胞移植物的植入。本文还考虑了涵盖前述百分比(例如，约10％)的范围。在一些实施方案中，可以通过检测改变的基因序列的存在来确定成功的植入。例如，在镰状细胞疾病的治疗中，可以通过检测经纠正的HBB基因序列的存在来确定植入。
实施例
提出以下实施例以便向本领域普通技术人员提供关于如何使用、制备和评估本文描述的组合物和方法的描述，这些实施例对本公开内容而言纯粹是示例性的，而不意图限制本发明人视为其发明的范围。
实施例1.使用体外细胞杀伤测定分析抗CD117抗体缀合物
如PCT/US2018/057172、US 2019/0144558、US 2019/0153114和PCT/US2018/057185中所描述的，已经对本文描述的各种抗体进行了进一步表征，这些文献通过引用以其整体并入。
将10个抗CD117人IgG1抗体的整个IgG与缀合到毒素(皂草素)的抗人Fab一起预温育，以测试各种抗体在体外杀死Kasumi-1细胞(ATCC No.CRL-2724)的能力。在细胞杀伤测定之后，对细胞毒性水平进行量化。
对于使用Kasumi-1细胞的体外杀伤测定，根据ATCC指南使Kasumi-1细胞生长。更具体地，在CD117-ADC或阳性对照抗体(CK6；一种拮抗剂抗体)的存在下培养Kasumi-1细胞三天。通过Celltiter Glo测量细胞活力。
图1A和1B中所描述的结果指示，各种IgG:Fab-皂草素复合物中的每一种在体外杀死CD117表达细胞(即，Kasumi-1细胞)方面都是有效的，并且指示这些复合物被内化。图2描述了Kasumi-1细胞杀伤测定的量化。下表5提供了与Kasumi-1细胞杀伤测定的这种量化有关的额外数据。在不存在SCF的情况下进行Kasumi-1细胞杀伤测定(因为Kasumi-1细胞不依赖SCF)。因此，所测试抗体的拮抗剂/中性特征不如在SCF依赖性细胞杀伤测定(其描述在PCT/US2018/057172中，该文献通过引用以其整体并入)中那样明显。尤其是，在SCF依赖性细胞杀伤测定中鉴定为拮抗剂的抗体在Kasumi-1测定中表现出更高的杀伤水平，例如，比较Ab55(拮抗剂)与Ab67(中性)的AUC值。
表5.IgG:Fab-皂草素复合物细胞杀伤的量化
Figure BDA0003423520310001781
Figure BDA0003423520310001791
实施例2：单剂量的抗CD117ADC对原代人和NHP CD34+细胞具有强效并且对HSC具有选择性
使用人和非人灵长类(NHP)HSC(即，分离的原代人和NHP CD34+所选骨髓细胞(BMC))进行体外杀伤测定。将人CD34+BMC和NHP CD34+BMC与抗CD117-ADC或对照(即，人同种型或NHP同种型)一起培养六天。通过流式细胞术评价有活力的CD34+细胞(数据未示出)。
抗CD117ADC在体外对原代人和NHP CD34+细胞二者均具有强效，EC50分别为0.2和0.1pM(图3)，这表明造血干细胞和祖细胞耗尽足以实现基因疗法，所述耗尽与通过靶向CD117在白消安(busufulan)调理(6mg/kg/天x4；数据未示出)后观察到的HSPC耗尽相当。
在恒河猴灵长类中评价抗CD117ADC的功效和可耐受性。将单剂量的CD117-ADC施用到恒河猴灵长类，使用流式细胞术分析结果(图4)。数据表明，单剂量的CD117-ADC在给药后7天导致骨髓中显著的CD34+细胞和集落形成细胞耗尽(图5)。另外，淋巴细胞区室得以保持(图4)，这表明了抗CD117ADC的特异性。
为了便于在HSCT中使用，抗CD117ADC工程化改造成具有快速清除(t1/2＝约10小时)。如图6中所描述，施用后48小时ADC水平降低至ELISA检测下限以下，模式化药物代谢动力学指示，在施用后5天之后，ADC低于细胞毒性浓度(图6)。
合在一起，这些数据指示，抗CD117ADC是完全清髓性的，并且在体内强有力地耗尽恒河猴HSC。没有观察到抗CD117ADC对淋巴细胞的实质性影响。这些数据指示，抗CD117ADC具有有利的安全性概况，不伤害免疫系统，并且可以快速清除以允许移植物输注的合适时机。
实施例3：单剂量的抗CD117ADC使得能够在非人灵长类中进行自体基因修饰造血干细胞移植物(基因疗法)
为了确定抗CD117ADC是否足以实现基于自体HSC的基因疗法(无需化学疗法或放射疗法)，在施用单剂量的抗CD117ADC后的两只恒河猴动物中评价β-珠蛋白转导的CD34+细胞的植入。用于该实施例的ADC的抗CD117抗体是Ab85LALA/S239C/H435A快速半衰期变体，其经由S239C突变与PBD缀合。
在单采血液成分术(apheresis)之前，用粒细胞集落刺激因子(G-CSF，20mcg/kg/天x5)和普乐沙福(plerixafor)(第5天1mg/kg G-CSF)动员两只恒河猴(图7)。将分离的CD34+细胞用编码β-珠蛋白基因的慢病毒载体转导并冷冻保存(图7)。在第-6天给药抗CD117ADC(0.2mg/kg IV)，并且在第0天解冻并输注(3.3x106个CD34+细胞/kg)冷冻保存的基因修饰细胞(即，单剂量的抗CD117ADC后6天，将细胞移植回到同一动物体内；参见图7A)。ADC给药后10天，抗CD117ADC调理的动物变为中性白细胞减少的(图8)。动物在第8天和第10天恢复嗜中性粒细胞(图8)，并且在第10天和第11天恢复血小板(图9)，而淋巴细胞在整个移植过程中保持不变(图10)。这些数据与白消安调理的动物相当，该动物在第8天和第10天恢复嗜中性粒细胞，并且在第10天和第15天恢复血小板。类似地，白消安是非淋巴消融的。结果还提供在下表6中。
表6
Figure BDA0003423520310001801
Figure BDA0003423520310001811
确定了用于抗CD117-ADC调理动物的转导CD34+细胞的外周粒细胞载体拷贝数(VCN)，并且发现当与用于白消安调理的动物的细胞的VCN相比时该拷贝数更低(表7)。
表7
Figure BDA0003423520310001812
然而，用于抗CD117-ADC调理动物的转导CD34+细胞的外周粒细胞VCN随着时间的推移是稳定的，并且其范围与用白消安调理的动物观察到的范围相同(参见图11的阴影区域)。这些数据指示，用CD117-ADC进行调理足以使得基因修饰的HSC能够以与完全清髓性白消安相同的水平植入。
这些研究的有利方面在于CD117-ADC耐受良好。观察到动物正常进食，未观察到胃肠(GI)副作用(表8)，这与用白消安治疗的动物形成对照，所述用白消安治疗的动物患有食欲不振(由于粘膜炎)、体重减轻和腹泻。未观察到肝脏血清化学变化(参见，例如图12；没有对天冬氨酸转氨酶(AST)丙氨酸转氨酶观察到正常范围之外的ADC相关变化)。另外，未对ALT(数据未示出)、乳酸脱氢酶(LDH；数据未示出)、白蛋白(数据未示出)、肌酐(Cr；数据未示出)、血尿素氮(BUN；数据未示出)、总胆红素(TBIL；数据未示出)、碱性磷酸酶(ALP；数据未示出)和葡萄糖(数据未示出))观察到在正常范围之外的ADC相关变化，这与任何可观察到的行为异常的缺乏一致。
表8
白消安副作用 使用CD117-ADC的结果
静脉闭塞性疾病 未观察到
消耗综合征 未观察到
腹泻 未观察到
粘膜炎 未观察到
癫痫发作(seizure) 未观察到
呕吐 未观察到
肺部纤维化 未观察到
本文示出的数据表明抗CD117 ADC对NHP CD34+细胞具有强效活性。这种抗CD117-ADC在NHP中使用单剂量即可完全清髓，具有有利的安全性概况，不伤害免疫系统，并且可以快速清除以允许移植物输注的合适时机。在自体基因修饰HSCT的恒河猴模型中，单剂量的抗CD117 ADC实现基因修饰HSC的植入。这些研究验证了抗CD117 ADC在移植前用于靶向性干细胞耗尽的用途，并且支持其作为用于自体基因修饰HSCT的新调理剂的用途。此种用于更安全调理的靶向方法可以改善经受干细胞移植物的患者的风险益处概况，并且使更多的患者能够从包括基因疗法的这些潜在治愈性疗法中受益。
表9：序列汇总
Figure BDA0003423520310001821
Figure BDA0003423520310001831
Figure BDA0003423520310001841
Figure BDA0003423520310001851
Figure BDA0003423520310001861
Figure BDA0003423520310001871
Figure BDA0003423520310001881
Figure BDA0003423520310001891
Figure BDA0003423520310001901
Figure BDA0003423520310001911
Figure BDA0003423520310001921
Figure BDA0003423520310001931
Figure BDA0003423520310001941
Figure BDA0003423520310001951
Figure BDA0003423520310001961
Figure BDA0003423520310001971
Figure BDA0003423520310001981
Figure BDA0003423520310001991
Figure BDA0003423520310002001
Figure BDA0003423520310002011
Figure BDA0003423520310002021
Figure BDA0003423520310002031
Figure BDA0003423520310002041
Figure BDA0003423520310002051
Figure BDA0003423520310002061
Figure BDA0003423520310002071
Figure BDA0003423520310002081
Figure BDA0003423520310002091
Figure BDA0003423520310002101
Figure BDA0003423520310002111
Figure BDA0003423520310002121
Figure BDA0003423520310002131
Figure BDA0003423520310002141
Figure BDA0003423520310002151
Figure BDA0003423520310002161
Figure BDA0003423520310002171
Figure BDA0003423520310002181
Figure BDA0003423520310002191
Figure BDA0003423520310002201
Figure BDA0003423520310002211
Figure BDA0003423520310002221
Figure BDA0003423520310002231
Figure BDA0003423520310002241
*Fc残基根据Kabat等人的EU索引编号。
其它实施方案
本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请通过引用并入本文中，其程度如同每个独立的出版物或专利申请被具体地和单独地指示通过引用并入。
虽然已经结合本公开的具体实施方案对本公开进行了描述，但应当理解，本公开能够进行进一步的修改，并且本申请旨在覆盖本公开的任何变化、使用或改编，这些变化、使用或改编通常遵循本公开的原则并包括偏离本公开的情况，这些偏离情况落在本公开所属领域内的已知或习惯做法的范围内，并且可以应用于上文中阐述的基本特征，并且遵循权利要求书的范围。
其他实施方案在权利要求书内。
序列表
<110> 美真达治疗公司
<120> 用于基因疗法的调理方法
<130> M103034 2070WO
<140>
<141>
<150> 62/944,925
<151> 2019-12-06
<150> 62/838,278
<151> 2019-04-24
<160> 325
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 1
Ser Tyr Trp Ile Gly
1 5
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 2
Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 3
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 3
His Gly Arg Gly Tyr Asn Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 4
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala Leu Ala
1 5 10
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 5
Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 6
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 6
Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5 10
<210> 7
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 7
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Glu Asn Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly Gly Ala Val Ser Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 8
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 8
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
100 105
<210> 9
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 9
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala
20 25 30
Asp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Thr Arg Asn Lys Ala Gly Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Lys Tyr Trp Ile Asp Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 10
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ile Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 11
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 11
Phe Thr Phe Ser Asp Ala Asp Met Asp
1 5
<210> 12
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 12
Arg Thr Arg Asn Lys Ala Gly Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 13
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 13
Ala Arg Glu Pro Lys Tyr Trp Ile Asp Phe Asp Leu
1 5 10
<210> 14
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 14
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 15
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 15
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 16
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 16
Gln Gln Ser Tyr Ile Ala Pro Tyr Thr
1 5
<210> 17
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 17
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gacgccgaca tggactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt actagaaaca aagcaggaag ttacaccaca 180
gaatacgccg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaagaactca 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgccaga 300
gagcctaaat actggatcga cttcgaccta tgggggagag gtaccttggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 18
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 18
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcagcaa agctacatcg ccccttacac ttttggcgga 300
gggaccaagg ttgagatcaa a 321
<210> 19
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 19
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Arg Ile Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Asp Phe Gly Val Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Leu Asp Thr Asp Glu Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 20
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 20
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Val Ser Asp Ile Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 21
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 21
Gly Thr Phe Arg Ile Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 22
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 22
Gly Ile Ile Pro Asp Phe Gly Val Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 23
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 23
Ala Arg Gly Gly Leu Asp Thr Asp Glu Phe Asp Leu
1 5 10
<210> 24
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 24
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 25
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 25
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 26
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 26
Gln Gln Gly Val Ser Asp Ile Thr
1 5
<210> 27
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 27
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttccga atctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatccctg acttcggtgt agcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagaggtgga 300
ttggacacag acgagttcga cctatggggg agaggtacct tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 28
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 28
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattaac agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcagcaa ggagtcagtg acatcacttt tggcggaggg 300
accaaggttg agatcaaa 318
<210> 29
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 29
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Leu Asp Thr Asp Glu Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 30
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 30
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Val Ser Asp Ile Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 31
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 31
Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 32
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 32
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 33
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 33
Ala Arg Gly Gly Leu Asp Thr Asp Glu Phe Asp Leu
1 5 10
<210> 34
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 34
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 35
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 35
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 36
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 36
Gln Gln Gly Val Ser Asp Ile Thr
1 5
<210> 37
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 37
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagaggtgga 300
ttggacacag acgagttcga cctatggggg agaggtacct tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 38
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 38
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattaac agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcagcaa ggagtcagtg acatcacttt tggcggaggg 300
accaaggttg agatcaaa 318
<210> 39
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 39
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Leu Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ala Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Leu Asp Thr Asp Glu Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 40
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 40
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Val Ser Asp Ile Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 41
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 41
Gly Thr Phe Ser Leu Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 42
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 42
Gly Ile Ile Pro Ala Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 43
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 43
Ala Arg Gly Gly Leu Asp Thr Asp Glu Phe Asp Leu
1 5 10
<210> 44
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 44
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 45
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 45
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 46
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 46
Gln Gln Gly Val Ser Asp Ile Thr
1 5
<210> 47
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 47
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc ctctatgcta tctcctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatccctg ccttcggtac cgcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagaggtgga 300
ttggacacag acgagttcga cctatggggg agaggtacct tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 48
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 48
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattaac agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcagcaa ggagtcagtg acatcacttt tggcggaggg 300
accaaggttg agatcaaa 318
<210> 49
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 49
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Leu Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro His Phe Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Leu Asp Thr Asp Glu Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 50
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 50
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Val Ser Asp Ile Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 51
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 51
Gly Thr Phe Ser Leu Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 52
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 52
Gly Ile Ile Pro His Phe Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 53
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 53
Ala Arg Gly Gly Leu Asp Thr Asp Glu Phe Asp Leu
1 5 10
<210> 54
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 54
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 55
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 55
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 56
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 56
Gln Gln Gly Val Ser Asp Ile Thr
1 5
<210> 57
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 57
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttctcc ctctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatccctc acttcggtct cgcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagaggtgga 300
ttggacacag acgagttcga cctatggggg agaggtacct tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 58
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 58
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattaac agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcagcaa ggagtcagtg acatcacttt tggcggaggg 300
accaaggttg agatcaaa 318
<210> 59
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 59
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Pro Pro Thr Tyr His Thr Asn Tyr Tyr Tyr Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 60
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 60
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn Ser Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 61
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 61
Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 62
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 62
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 63
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 63
Ala Lys Gly Pro Pro Thr Tyr His Thr Asn Tyr Tyr Tyr Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 64
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 64
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 65
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 65
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 66
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 66
Gln Gln Thr Asn Ser Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 67
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 67
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc aattatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc caagggccct 300
cctacatacc acacaaacta ctactacatg gacgtatggg gcaagggtac aactgtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 68
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 68
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcagcaa acaaatagtt tcccttacac ttttggcgga 300
gggaccaagg ttgagatcaa a 321
<210> 69
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 69
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Val Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Asp Ser Val Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Pro Pro Thr Tyr His Thr Asn Tyr Tyr Tyr Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 70
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 70
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn Ser Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 71
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 71
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Val Met Ile
1 5
<210> 72
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 72
Ser Ile Ser Gly Asp Ser Val Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 73
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 73
Ala Lys Gly Pro Pro Thr Tyr His Thr Asn Tyr Tyr Tyr Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 74
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 74
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 75
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 75
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 76
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 76
Gln Gln Thr Asn Ser Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 77
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 77
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgtca tgatctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaagc attagtggtg acagcgtaac aacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc caagggccct 300
cctacatacc acacaaacta ctactacatg gacgtatggg gcaagggtac aactgtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 78
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 78
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcagcaa acaaatagtt tcccttacac ttttggcgga 300
gggaccaagg ttgagatcaa a 321
<210> 79
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 79
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His
20 25 30
Tyr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Thr Arg Asn Lys Ala Ser Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Lys Tyr Trp Ile Asp Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 80
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 80
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ile Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 81
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 81
Phe Thr Phe Ser Asp His Tyr Met Asp
1 5
<210> 82
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 82
Arg Thr Arg Asn Lys Ala Ser Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 83
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 83
Ala Arg Glu Pro Lys Tyr Trp Ile Asp Phe Asp Leu
1 5 10
<210> 84
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 84
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 85
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 85
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 86
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 86
Gln Gln Ser Tyr Ile Ala Pro Tyr Thr
1 5
<210> 87
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 87
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gaccactaca tggactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt actagaaaca aagctagtag ttacaccaca 180
gaatacgccg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaagaactca 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgccaga 300
gagcctaaat actggatcga cttcgaccta tgggggagag gtaccttggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 88
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 88
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcagcaa agctacatcg ccccttacac ttttggcgga 300
gggaccaagg ttgagatcaa a 321
<210> 89
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 89
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His
20 25 30
Asp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Thr Arg Asn Ala Ala Gly Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Lys Tyr Trp Ile Asp Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 90
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 90
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ile Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 91
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 91
Phe Thr Phe Ser Asp His Asp Met Asn
1 5
<210> 92
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 92
Arg Thr Arg Asn Ala Ala Gly Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 93
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 93
Ala Arg Glu Pro Lys Tyr Trp Ile Asp Phe Asp Leu
1 5 10
<210> 94
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 94
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 95
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 95
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 96
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 96
Gln Gln Ser Tyr Ile Ala Pro Tyr Thr
1 5
<210> 97
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 97
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc cagggcggtc cctgagactc 60
tcctgtacag cttctggatt caccttcagt gaccacgaca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt actagaaacg ccgctggaag ttacaccaca 180
gaatacgccg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaagaactca 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgccaga 300
gagcctaaat actggatcga cttcgaccta tgggggagag gtaccttggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 98
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 98
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcagcaa agctacatcg ccccttacac ttttggcgga 300
gggaccaagg ttgagatcaa a 321
<210> 99
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 99
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Val Asp His
20 25 30
Asp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Thr Arg Asn Lys Leu Gly Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Lys Tyr Trp Ile Asp Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 100
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 100
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ile Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 101
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 101
Phe Thr Phe Val Asp His Asp Met Asp
1 5
<210> 102
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 102
Arg Thr Arg Asn Lys Leu Gly Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 103
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 103
Ala Arg Glu Pro Lys Tyr Trp Ile Asp Phe Asp Leu
1 5 10
<210> 104
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 104
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 105
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 105
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 106
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 106
Gln Gln Ser Tyr Ile Ala Pro Tyr Thr
1 5
<210> 107
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 107
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcgta gaccacgaca tggactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt actagaaaca aactaggaag ttacaccaca 180
gaatacgccg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaagaactca 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgccaga 300
gagcctaaat actggatcga cttcgaccta tgggggagag gtaccttggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 108
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 108
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcagcaa agctacatcg ccccttacac ttttggcgga 300
gggaccaagg ttgagatcaa a 321
<210> 109
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 109
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ile Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 110
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 110
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala
20 25 30
Asp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Thr Arg Asn Lys Ala Gly Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Lys Tyr Trp Ile Asp Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 111
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 111
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala
20 25 30
Asp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Thr Arg Asn Lys Ala Gly Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Lys Tyr Trp Ile Asp Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Cys Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 112
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 112
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala
20 25 30
Asp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Thr Arg Asn Lys Ala Gly Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Lys Tyr Trp Ile Asp Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Cys Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 113
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 113
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala
20 25 30
Asp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Thr Arg Asn Lys Ala Gly Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Lys Tyr Trp Ile Asp Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Cys Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 114
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 114
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala
20 25 30
Asp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Thr Arg Asn Lys Ala Gly Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Lys Tyr Trp Ile Asp Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Cys Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 115
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 115
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Val Ser Asp Ile Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 116
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 116
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Arg Ile Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Asp Phe Gly Val Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Leu Asp Thr Asp Glu Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 117
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 117
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Arg Ile Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Asp Phe Gly Val Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Leu Asp Thr Asp Glu Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 118
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 118
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Arg Ile Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Asp Phe Gly Val Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Leu Asp Thr Asp Glu Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 119
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 119
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Arg Ile Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Asp Phe Gly Val Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Leu Asp Thr Asp Glu Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 120
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 120
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Arg Ile Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Asp Phe Gly Val Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Leu Asp Thr Asp Glu Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 121
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 121
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 122
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人
<400> 122
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 123
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 123
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 124
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 124
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 125
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 126
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 126
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 127
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Ser或Arg
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Ser, Ile或Leu
<400> 127
Gly Thr Phe Xaa Xaa Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 128
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Ile, Asp, Ala或His
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Thr, Val或Leu
<400> 128
Gly Ile Ile Pro Xaa Phe Gly Xaa Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 129
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 129
Ala Arg Gly Gly Leu Asp Thr Asp Glu Phe Asp Leu
1 5 10
<210> 130
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 130
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 131
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 131
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 132
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 132
Gln Gln Gly Val Ser Asp Ile Thr
1 5
<210> 133
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Asn或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Ala或Val
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Ser或Ile
<400> 133
Phe Thr Phe Ser Xaa Tyr Xaa Met Xaa
1 5
<210> 134
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Ala或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Ser或Asp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Gly或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Gly或Val
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Ser或Thr
<400> 134
Xaa Ile Ser Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 135
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 135
Ala Lys Gly Pro Pro Thr Tyr His Thr Asn Tyr Tyr Tyr Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 136
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 136
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 137
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 137
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 138
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 138
Gln Gln Thr Asn Ser Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 139
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Ser或Val
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> His或Ala
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Tyr或Asp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Asp或Asn
<400> 139
Phe Thr Phe Xaa Asp Xaa Xaa Met Xaa
1 5
<210> 140
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Lys或Ala
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Ala或Leu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Ser或Gly
<400> 140
Arg Thr Arg Asn Xaa Xaa Xaa Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 141
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 141
Ala Arg Glu Pro Lys Tyr Trp Ile Asp Phe Asp Leu
1 5 10
<210> 142
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 142
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 143
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 143
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 144
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 144
Gln Gln Ser Tyr Ile Ala Pro Tyr Thr
1 5
<210> 145
<211> 976
<212> PRT
<213> 智人
<400> 145
Met Arg Gly Ala Arg Gly Ala Trp Asp Phe Leu Cys Val Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Arg Val Gln Thr Gly Ser Ser Gln Pro Ser Val Ser Pro Gly
20 25 30
Glu Pro Ser Pro Pro Ser Ile His Pro Gly Lys Ser Asp Leu Ile Val
35 40 45
Arg Val Gly Asp Glu Ile Arg Leu Leu Cys Thr Asp Pro Gly Phe Val
50 55 60
Lys Trp Thr Phe Glu Ile Leu Asp Glu Thr Asn Glu Asn Lys Gln Asn
65 70 75 80
Glu Trp Ile Thr Glu Lys Ala Glu Ala Thr Asn Thr Gly Lys Tyr Thr
85 90 95
Cys Thr Asn Lys His Gly Leu Ser Asn Ser Ile Tyr Val Phe Val Arg
100 105 110
Asp Pro Ala Lys Leu Phe Leu Val Asp Arg Ser Leu Tyr Gly Lys Glu
115 120 125
Asp Asn Asp Thr Leu Val Arg Cys Pro Leu Thr Asp Pro Glu Val Thr
130 135 140
Asn Tyr Ser Leu Lys Gly Cys Gln Gly Lys Pro Leu Pro Lys Asp Leu
145 150 155 160
Arg Phe Ile Pro Asp Pro Lys Ala Gly Ile Met Ile Lys Ser Val Lys
165 170 175
Arg Ala Tyr His Arg Leu Cys Leu His Cys Ser Val Asp Gln Glu Gly
180 185 190
Lys Ser Val Leu Ser Glu Lys Phe Ile Leu Lys Val Arg Pro Ala Phe
195 200 205
Lys Ala Val Pro Val Val Ser Val Ser Lys Ala Ser Tyr Leu Leu Arg
210 215 220
Glu Gly Glu Glu Phe Thr Val Thr Cys Thr Ile Lys Asp Val Ser Ser
225 230 235 240
Ser Val Tyr Ser Thr Trp Lys Arg Glu Asn Ser Gln Thr Lys Leu Gln
245 250 255
Glu Lys Tyr Asn Ser Trp His His Gly Asp Phe Asn Tyr Glu Arg Gln
260 265 270
Ala Thr Leu Thr Ile Ser Ser Ala Arg Val Asn Asp Ser Gly Val Phe
275 280 285
Met Cys Tyr Ala Asn Asn Thr Phe Gly Ser Ala Asn Val Thr Thr Thr
290 295 300
Leu Glu Val Val Asp Lys Gly Phe Ile Asn Ile Phe Pro Met Ile Asn
305 310 315 320
Thr Thr Val Phe Val Asn Asp Gly Glu Asn Val Asp Leu Ile Val Glu
325 330 335
Tyr Glu Ala Phe Pro Lys Pro Glu His Gln Gln Trp Ile Tyr Met Asn
340 345 350
Arg Thr Phe Thr Asp Lys Trp Glu Asp Tyr Pro Lys Ser Glu Asn Glu
355 360 365
Ser Asn Ile Arg Tyr Val Ser Glu Leu His Leu Thr Arg Leu Lys Gly
370 375 380
Thr Glu Gly Gly Thr Tyr Thr Phe Leu Val Ser Asn Ser Asp Val Asn
385 390 395 400
Ala Ala Ile Ala Phe Asn Val Tyr Val Asn Thr Lys Pro Glu Ile Leu
405 410 415
Thr Tyr Asp Arg Leu Val Asn Gly Met Leu Gln Cys Val Ala Ala Gly
420 425 430
Phe Pro Glu Pro Thr Ile Asp Trp Tyr Phe Cys Pro Gly Thr Glu Gln
435 440 445
Arg Cys Ser Ala Ser Val Leu Pro Val Asp Val Gln Thr Leu Asn Ser
450 455 460
Ser Gly Pro Pro Phe Gly Lys Leu Val Val Gln Ser Ser Ile Asp Ser
465 470 475 480
Ser Ala Phe Lys His Asn Gly Thr Val Glu Cys Lys Ala Tyr Asn Asp
485 490 495
Val Gly Lys Thr Ser Ala Tyr Phe Asn Phe Ala Phe Lys Gly Asn Asn
500 505 510
Lys Glu Gln Ile His Pro His Thr Leu Phe Thr Pro Leu Leu Ile Gly
515 520 525
Phe Val Ile Val Ala Gly Met Met Cys Ile Ile Val Met Ile Leu Thr
530 535 540
Tyr Lys Tyr Leu Gln Lys Pro Met Tyr Glu Val Gln Trp Lys Val Val
545 550 555 560
Glu Glu Ile Asn Gly Asn Asn Tyr Val Tyr Ile Asp Pro Thr Gln Leu
565 570 575
Pro Tyr Asp His Lys Trp Glu Phe Pro Arg Asn Arg Leu Ser Phe Gly
580 585 590
Lys Thr Leu Gly Ala Gly Ala Phe Gly Lys Val Val Glu Ala Thr Ala
595 600 605
Tyr Gly Leu Ile Lys Ser Asp Ala Ala Met Thr Val Ala Val Lys Met
610 615 620
Leu Lys Pro Ser Ala His Leu Thr Glu Arg Glu Ala Leu Met Ser Glu
625 630 635 640
Leu Lys Val Leu Ser Tyr Leu Gly Asn His Met Asn Ile Val Asn Leu
645 650 655
Leu Gly Ala Cys Thr Ile Gly Gly Pro Thr Leu Val Ile Thr Glu Tyr
660 665 670
Cys Cys Tyr Gly Asp Leu Leu Asn Phe Leu Arg Arg Lys Arg Asp Ser
675 680 685
Phe Ile Cys Ser Lys Gln Glu Asp His Ala Glu Ala Ala Leu Tyr Lys
690 695 700
Asn Leu Leu His Ser Lys Glu Ser Ser Cys Ser Asp Ser Thr Asn Glu
705 710 715 720
Tyr Met Asp Met Lys Pro Gly Val Ser Tyr Val Val Pro Thr Lys Ala
725 730 735
Asp Lys Arg Arg Ser Val Arg Ile Gly Ser Tyr Ile Glu Arg Asp Val
740 745 750
Thr Pro Ala Ile Met Glu Asp Asp Glu Leu Ala Leu Asp Leu Glu Asp
755 760 765
Leu Leu Ser Phe Ser Tyr Gln Val Ala Lys Gly Met Ala Phe Leu Ala
770 775 780
Ser Lys Asn Cys Ile His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile Leu Leu
785 790 795 800
Thr His Gly Arg Ile Thr Lys Ile Cys Asp Phe Gly Leu Ala Arg Asp
805 810 815
Ile Lys Asn Asp Ser Asn Tyr Val Val Lys Gly Asn Ala Arg Leu Pro
820 825 830
Val Lys Trp Met Ala Pro Glu Ser Ile Phe Asn Cys Val Tyr Thr Phe
835 840 845
Glu Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Ile Phe Leu Trp Glu Leu Phe Ser
850 855 860
Leu Gly Ser Ser Pro Tyr Pro Gly Met Pro Val Asp Ser Lys Phe Tyr
865 870 875 880
Lys Met Ile Lys Glu Gly Phe Arg Met Leu Ser Pro Glu His Ala Pro
885 890 895
Ala Glu Met Tyr Asp Ile Met Lys Thr Cys Trp Asp Ala Asp Pro Leu
900 905 910
Lys Arg Pro Thr Phe Lys Gln Ile Val Gln Leu Ile Glu Lys Gln Ile
915 920 925
Ser Glu Ser Thr Asn His Ile Tyr Ser Asn Leu Ala Asn Cys Ser Pro
930 935 940
Asn Arg Gln Lys Pro Val Val Asp His Ser Val Arg Ile Asn Ser Val
945 950 955 960
Gly Ser Thr Ala Ser Ser Ser Gln Pro Leu Leu Val His Asp Asp Val
965 970 975
<210> 146
<211> 972
<212> PRT
<213> 智人
<400> 146
Met Arg Gly Ala Arg Gly Ala Trp Asp Phe Leu Cys Val Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Arg Val Gln Thr Gly Ser Ser Gln Pro Ser Val Ser Pro Gly
20 25 30
Glu Pro Ser Pro Pro Ser Ile His Pro Gly Lys Ser Asp Leu Ile Val
35 40 45
Arg Val Gly Asp Glu Ile Arg Leu Leu Cys Thr Asp Pro Gly Phe Val
50 55 60
Lys Trp Thr Phe Glu Ile Leu Asp Glu Thr Asn Glu Asn Lys Gln Asn
65 70 75 80
Glu Trp Ile Thr Glu Lys Ala Glu Ala Thr Asn Thr Gly Lys Tyr Thr
85 90 95
Cys Thr Asn Lys His Gly Leu Ser Asn Ser Ile Tyr Val Phe Val Arg
100 105 110
Asp Pro Ala Lys Leu Phe Leu Val Asp Arg Ser Leu Tyr Gly Lys Glu
115 120 125
Asp Asn Asp Thr Leu Val Arg Cys Pro Leu Thr Asp Pro Glu Val Thr
130 135 140
Asn Tyr Ser Leu Lys Gly Cys Gln Gly Lys Pro Leu Pro Lys Asp Leu
145 150 155 160
Arg Phe Ile Pro Asp Pro Lys Ala Gly Ile Met Ile Lys Ser Val Lys
165 170 175
Arg Ala Tyr His Arg Leu Cys Leu His Cys Ser Val Asp Gln Glu Gly
180 185 190
Lys Ser Val Leu Ser Glu Lys Phe Ile Leu Lys Val Arg Pro Ala Phe
195 200 205
Lys Ala Val Pro Val Val Ser Val Ser Lys Ala Ser Tyr Leu Leu Arg
210 215 220
Glu Gly Glu Glu Phe Thr Val Thr Cys Thr Ile Lys Asp Val Ser Ser
225 230 235 240
Ser Val Tyr Ser Thr Trp Lys Arg Glu Asn Ser Gln Thr Lys Leu Gln
245 250 255
Glu Lys Tyr Asn Ser Trp His His Gly Asp Phe Asn Tyr Glu Arg Gln
260 265 270
Ala Thr Leu Thr Ile Ser Ser Ala Arg Val Asn Asp Ser Gly Val Phe
275 280 285
Met Cys Tyr Ala Asn Asn Thr Phe Gly Ser Ala Asn Val Thr Thr Thr
290 295 300
Leu Glu Val Val Asp Lys Gly Phe Ile Asn Ile Phe Pro Met Ile Asn
305 310 315 320
Thr Thr Val Phe Val Asn Asp Gly Glu Asn Val Asp Leu Ile Val Glu
325 330 335
Tyr Glu Ala Phe Pro Lys Pro Glu His Gln Gln Trp Ile Tyr Met Asn
340 345 350
Arg Thr Phe Thr Asp Lys Trp Glu Asp Tyr Pro Lys Ser Glu Asn Glu
355 360 365
Ser Asn Ile Arg Tyr Val Ser Glu Leu His Leu Thr Arg Leu Lys Gly
370 375 380
Thr Glu Gly Gly Thr Tyr Thr Phe Leu Val Ser Asn Ser Asp Val Asn
385 390 395 400
Ala Ala Ile Ala Phe Asn Val Tyr Val Asn Thr Lys Pro Glu Ile Leu
405 410 415
Thr Tyr Asp Arg Leu Val Asn Gly Met Leu Gln Cys Val Ala Ala Gly
420 425 430
Phe Pro Glu Pro Thr Ile Asp Trp Tyr Phe Cys Pro Gly Thr Glu Gln
435 440 445
Arg Cys Ser Ala Ser Val Leu Pro Val Asp Val Gln Thr Leu Asn Ser
450 455 460
Ser Gly Pro Pro Phe Gly Lys Leu Val Val Gln Ser Ser Ile Asp Ser
465 470 475 480
Ser Ala Phe Lys His Asn Gly Thr Val Glu Cys Lys Ala Tyr Asn Asp
485 490 495
Val Gly Lys Thr Ser Ala Tyr Phe Asn Phe Ala Phe Lys Glu Gln Ile
500 505 510
His Pro His Thr Leu Phe Thr Pro Leu Leu Ile Gly Phe Val Ile Val
515 520 525
Ala Gly Met Met Cys Ile Ile Val Met Ile Leu Thr Tyr Lys Tyr Leu
530 535 540
Gln Lys Pro Met Tyr Glu Val Gln Trp Lys Val Val Glu Glu Ile Asn
545 550 555 560
Gly Asn Asn Tyr Val Tyr Ile Asp Pro Thr Gln Leu Pro Tyr Asp His
565 570 575
Lys Trp Glu Phe Pro Arg Asn Arg Leu Ser Phe Gly Lys Thr Leu Gly
580 585 590
Ala Gly Ala Phe Gly Lys Val Val Glu Ala Thr Ala Tyr Gly Leu Ile
595 600 605
Lys Ser Asp Ala Ala Met Thr Val Ala Val Lys Met Leu Lys Pro Ser
610 615 620
Ala His Leu Thr Glu Arg Glu Ala Leu Met Ser Glu Leu Lys Val Leu
625 630 635 640
Ser Tyr Leu Gly Asn His Met Asn Ile Val Asn Leu Leu Gly Ala Cys
645 650 655
Thr Ile Gly Gly Pro Thr Leu Val Ile Thr Glu Tyr Cys Cys Tyr Gly
660 665 670
Asp Leu Leu Asn Phe Leu Arg Arg Lys Arg Asp Ser Phe Ile Cys Ser
675 680 685
Lys Gln Glu Asp His Ala Glu Ala Ala Leu Tyr Lys Asn Leu Leu His
690 695 700
Ser Lys Glu Ser Ser Cys Ser Asp Ser Thr Asn Glu Tyr Met Asp Met
705 710 715 720
Lys Pro Gly Val Ser Tyr Val Val Pro Thr Lys Ala Asp Lys Arg Arg
725 730 735
Ser Val Arg Ile Gly Ser Tyr Ile Glu Arg Asp Val Thr Pro Ala Ile
740 745 750
Met Glu Asp Asp Glu Leu Ala Leu Asp Leu Glu Asp Leu Leu Ser Phe
755 760 765
Ser Tyr Gln Val Ala Lys Gly Met Ala Phe Leu Ala Ser Lys Asn Cys
770 775 780
Ile His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile Leu Leu Thr His Gly Arg
785 790 795 800
Ile Thr Lys Ile Cys Asp Phe Gly Leu Ala Arg Asp Ile Lys Asn Asp
805 810 815
Ser Asn Tyr Val Val Lys Gly Asn Ala Arg Leu Pro Val Lys Trp Met
820 825 830
Ala Pro Glu Ser Ile Phe Asn Cys Val Tyr Thr Phe Glu Ser Asp Val
835 840 845
Trp Ser Tyr Gly Ile Phe Leu Trp Glu Leu Phe Ser Leu Gly Ser Ser
850 855 860
Pro Tyr Pro Gly Met Pro Val Asp Ser Lys Phe Tyr Lys Met Ile Lys
865 870 875 880
Glu Gly Phe Arg Met Leu Ser Pro Glu His Ala Pro Ala Glu Met Tyr
885 890 895
Asp Ile Met Lys Thr Cys Trp Asp Ala Asp Pro Leu Lys Arg Pro Thr
900 905 910
Phe Lys Gln Ile Val Gln Leu Ile Glu Lys Gln Ile Ser Glu Ser Thr
915 920 925
Asn His Ile Tyr Ser Asn Leu Ala Asn Cys Ser Pro Asn Arg Gln Lys
930 935 940
Pro Val Val Asp His Ser Val Arg Ile Asn Ser Val Gly Ser Thr Ala
945 950 955 960
Ser Ser Ser Gln Pro Leu Leu Val His Asp Asp Val
965 970
<210> 147
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 147
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Ala Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Gly Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Asn Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 148
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 148
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 149
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 149
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Thr Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 150
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 150
Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Thr Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 151
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 151
Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 152
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 152
Asn Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ala Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 153
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 153
Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ile Ile Ala Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Gly Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Lys Val Leu Val
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 154
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 154
Asp Ile Ala Met Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ser Ala Phe Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ile Ser Ser
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 155
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 155
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile
35 40 45
Ser Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Gly Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 156
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 156
Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 157
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 157
Asn Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Thr Ser
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Leu Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Tyr Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 158
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 158
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Asp Tyr
20 25 30
Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Val Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 159
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 159
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Arg Ser Thr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ile Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Gly Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 160
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 160
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 161
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 161
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Phe
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Gly Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 162
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 162
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ile Gly Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Gly Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 163
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 163
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Thr Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 164
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 164
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Arg Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Tyr Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Lys Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Glu Ala Ser Ala Asn Thr Ala Asn
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Arg Gly Leu Val Asp Asp Tyr Val Met Asp Ala Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 165
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 165
Ser Tyr Glu Leu Ile Gln Pro Pro Ser Ala Ser Val Thr Leu Gly Asn
1 5 10 15
Thr Val Ser Leu Thr Cys Val Gly Asp Glu Leu Ser Lys Arg Tyr Ala
20 25 30
Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Ile Val Ser Val Ile Tyr
35 40 45
Lys Asp Ser Glu Arg Pro Ser Gly Ile Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Thr Thr Ala Thr Leu Thr Ile His Gly Thr Leu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ser Thr Tyr Ser Asp Asp Asn Leu
85 90 95
Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 166
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 166
Glu Val Gln Leu Gln Gln Tyr Gly Ala Glu Leu Gly Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Arg Leu Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Asn Ile Arg Asn Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Thr Asn Gly Asn Thr Ile Ser Ala Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser His Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Phe Ser Gln Leu Lys Ser Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Leu Asn Tyr Glu Gly Tyr Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met
100 105 110
Val Thr Gly Ser Ser
115
<210> 167
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 167
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Val Gly Glu Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Phe Lys Thr Asn Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Thr
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Phe Gln Tyr Asn Ile Gly Tyr Thr
85 90 95
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys
100 105
<210> 168
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 168
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Arg Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Val Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Asn Ser Ala Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Ile Ser Met Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Gln Val Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Leu Arg Gly Tyr Ile Thr Asp Tyr Ser Gly Phe Phe Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 169
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 169
Asp Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Asn Ile Glu Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Phe Ser Asp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Ala Asn Ser Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Arg Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Lys Asn Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 170
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 170
Glu Val Gln Leu Gln Gln Tyr Gly Ala Glu Leu Gly Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Arg Leu Ser Cys Lys Leu Ser Gly Tyr Lys Ile Arg Asn Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Ala Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Gln Leu Lys Ser Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Met Asn Tyr Glu Gly Tyr Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 171
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 171
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Ser Val Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Glu Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
His Lys Thr Asp Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Phe Gln Tyr Lys Ser Gly Phe Met
85 90 95
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 172
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 172
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ala Val Tyr Trp Val Ile Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Lys Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Asn
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Gly Met Thr Lys Asp Tyr Val Met Asp Ala Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Val Leu Val Thr Val Ser
115 120
<210> 173
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 173
Ser Tyr Glu Leu Ile Gln Pro Pro Ser Ala Ser Val Thr Leu Gly Asn
1 5 10 15
Thr Val Ser Leu Thr Cys Val Gly Asp Glu Leu Ser Lys Arg Tyr Ala
20 25 30
Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Ile Val Ser Val Ile Tyr
35 40 45
Lys Asp Ser Glu Arg Pro Ser Asp Ile Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Thr Thr Ala Thr Leu Thr Ile His Gly Thr Leu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ser Thr Tyr Ser Asp Asp Asn Leu
85 90 95
Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 174
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 174
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Leu Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Thr Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Leu Met Trp Asn Asp Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met His Ser Leu Gln Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Glu Ser Asn Leu Gly Phe Thr Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 175
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 175
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Glu
1 5 10 15
Glu Ile Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Gly Ile Asp Asp Asp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Val Thr Arg Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Ser Arg Pro Gln Val
65 70 75 80
Ala Asp Ser Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 176
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 176
Glu Val Gln Leu Gln Gln Tyr Gly Ala Glu Leu Gly Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Arg Leu Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Asn Ile Arg Asn Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val His Gln Arg Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Thr Asn Gly Asn Thr Ile Ser Ala Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Phe Ser Gln Leu Lys Ser Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Met Asn Tyr Glu Gly Tyr Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 177
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 177
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Leu Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Glu Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Phe Lys Thr Asn Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Phe Gln Tyr Asn Ile Gly Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 178
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 178
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ser Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Asn Tyr Asp Gly Ser Thr Thr Tyr His Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Asp Tyr Gly Tyr His Tyr Gly Ala Tyr Tyr Phe Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 179
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 179
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln
1 5 10 15
Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Ser Leu Ser Gly
20 25 30
Tyr Asn Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Gly Gln Gln Pro Lys
35 40 45
Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Ala Pro Gly Ile Pro Ala Arg
50 55 60
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Pro
65 70 75 80
Val Gln Ser Asp Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg Glu
85 90 95
Ser Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Asn Leu Glu Met Lys
100 105
<210> 180
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 180
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ala Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Arg Trp Met
35 40 45
Ala Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Lys Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Glu Ala Ser Ala Ser Thr Ala His
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Phe Phe Cys
85 90 95
Ala Gly Gly Ser His Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 181
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 181
Ser Tyr Glu Leu Ile Gln Pro Pro Ser Ala Ser Val Thr Leu Glu Asn
1 5 10 15
Thr Val Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Glu Leu Ser Asn Lys Tyr Ala
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Ile Leu Glu Val Ile Tyr
35 40 45
Asn Asp Ser Glu Arg Pro Ser Gly Ile Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Thr Thr Ala Ile Leu Thr Ile Arg Asp Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ser Thr Phe Ser Asp Asp Asp Leu
85 90 95
Pro Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 182
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 182
Ser Tyr Glu Leu Ile Gln Pro Pro Ser Thr Ser Val Thr Leu Gly Asn
1 5 10 15
Thr Val Ser Leu Thr Cys Val Gly Asn Glu Leu Pro Lys Arg Tyr Ala
20 25 30
Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Ile Val Arg Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Asp Asp Arg Arg Pro Ser Gly Ile Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Thr Thr Ala Thr Leu Thr Ile Arg Asp Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Tyr Tyr Tyr Cys His Ser Thr Tyr Thr Asp Asp Lys Val
85 90 95
Pro Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 183
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 183
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Asp Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Arg Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Tyr Asp Gly Ile Thr Ala Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Val Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Glu Gly Gly Tyr Val Tyr Ser Gly Pro His Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 184
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 184
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Phe
20 25 30
Val Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Arg Ser Pro Arg Arg Met Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Asp Tyr His Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 185
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 185
Glu Val Gln Leu Gln Gln Tyr Gly Ala Glu Leu Gly Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Arg Leu Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Lys Ile Arg Asn Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Ala Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Gln Leu Lys Ser Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Met Asn Tyr Glu Gly Tyr Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 186
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 186
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Ser Val Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Glu Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
His Lys Thr Asn Ser Leu Gln Pro Gly Phe Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Ala Tyr Phe Cys Phe Gln Tyr Asn Ser Gly Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 187
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 187
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asn Pro His Ser Gly Asp Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Asn Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
<210> 188
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 188
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Asn Glu
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 189
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 189
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Gln Asn Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Asn Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
<210> 190
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 190
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Gly Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 191
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 191
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Glu Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
<210> 192
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 192
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Glu Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Gly Tyr Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 193
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 193
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Leu Asn Pro Ser Gly Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Asp Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
<210> 194
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 194
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Gly Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 195
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 195
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Lys Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Glu Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
<210> 196
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 196
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asp Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Gly Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 197
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 197
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Asn Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Asn Ala Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
<210> 198
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 198
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Asn Gly Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 199
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 199
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Asn Pro Thr Val Gly Gly Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Asn Glu Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
<210> 200
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 200
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 201
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 201
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Asn Pro Asn Gly Ala Gly Thr Asn Phe Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Glu Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
<210> 202
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 202
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Thr Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Asn Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Glu Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
<210> 203
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 203
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Ser Gly Tyr Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 204
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 204
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Met Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Asn Asp Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
<210> 205
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 205
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ala Ser Asn Leu Glu Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 206
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 206
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ser Ala Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Arg Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Gly Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Asp Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
<210> 207
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 207
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Asp Tyr
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Gly Tyr Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 208
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 208
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Asp Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Asn Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Asn Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
<210> 209
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 209
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Tyr Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ala Ser Phe Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 210
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 210
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Ser Ser Phe Pro Asn Ser
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Glu Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Asn Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
<210> 211
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 211
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 212
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 212
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Asp Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Met Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Asn Ala Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
<210> 213
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 213
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asn Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Phe Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 214
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 214
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Trp
20 25 30
Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly
35 40 45
Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Glu Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
50 55 60
Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg His Gly Arg Gly Tyr Tyr Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120
<210> 215
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 215
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Asn
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ile Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 216
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 216
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Asn Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Tyr Pro Asp Asp Ser Glu Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Asn Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
<210> 217
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 217
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Arg Asp Ile Arg Asp Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 218
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 218
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly
35 40 45
Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Gly Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
50 55 60
Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ala Ile Ser Thr Ala Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg His Ser Arg Gly Tyr Asn Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120
<210> 219
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 219
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Val
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 220
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 220
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Asn Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile His Pro Ala Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Asn Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
<210> 221
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 221
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Val Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 222
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 222
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Arg Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Asp Asn Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Asp Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
<210> 223
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 223
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Ser Asp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 224
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 224
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Arg Phe Ala Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Thr Tyr Pro Gly Asp Ser Glu Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Gln
50 55 60
Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg His Gly Arg Gly Tyr Gly Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120
<210> 225
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 225
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 226
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 226
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Asn Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
<210> 227
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 227
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 228
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 228
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ile Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 229
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 229
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 230
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 230
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Gly Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 231
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 231
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ile Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ile Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 232
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 232
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ile Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 233
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 233
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Gly Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ile Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 234
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 234
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ile Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 235
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 235
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ile Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 236
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 236
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 237
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 237
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Gly Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 238
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 238
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Thr Ser
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Leu Gly Tyr Asn Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 239
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 239
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Gly Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 240
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 240
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Arg Gly Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 241
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 241
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Gly Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 242
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 242
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Gly Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 243
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 243
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Ala Ile Ile Asn Pro Arg Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Arg Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Glu Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 244
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 244
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Gly Ile Arg Ser Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Gly Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 245
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 245
Asn Tyr Trp Ile Gly
1 5
<210> 246
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 246
Ile Ile Asn Pro Arg Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Arg Pro Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 247
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 247
His Gly Arg Gly Tyr Glu Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 248
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 248
Arg Ser Ser Gln Gly Ile Arg Ser Asp Leu Gly
1 5 10
<210> 249
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 249
Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr
1 5
<210> 250
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 250
Gln Gln Ala Asn Gly Phe Pro Leu Thr
1 5
<210> 251
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 251
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Ile Arg Tyr Ser Pro Ser Leu
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Asn Ser Leu Lys Pro Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Asn Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 252
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 252
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Asp Ser
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Gly Tyr Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 253
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 253
Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Ile Arg Tyr Ser Pro Ser Leu Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 254
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 254
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Asp Ser Leu Ala
1 5 10
<210> 255
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 255
Gln Gln Leu Asn Gly Tyr Pro Ile Thr
1 5
<210> 256
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 256
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Gly Tyr Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 257
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 257
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly
1 5 10
<210> 258
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 258
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Leu Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Asn Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 259
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 259
Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Leu Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 260
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 260
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Asn Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 261
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 261
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Ala Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Gly Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Asn Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 262
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 262
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 263
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 263
Thr Tyr Trp Ile Gly
1 5
<210> 264
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 264
Arg Ala Ser Gln Gly Val Ile Ser Ala Leu Ala
1 5 10
<210> 265
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 265
Asp Ala Ser Ile Leu Glu Ser
1 5
<210> 266
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 266
Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 267
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 267
Arg Ala Ser Gln Gly Val Gly Ser Ala Leu Ala
1 5 10
<210> 268
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 268
Asp Ala Ser Thr Leu Glu Ser
1 5
<210> 269
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人
<400> 269
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 270
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 270
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 271
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 271
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 272
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 272
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 273
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 273
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 274
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 274
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 275
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 275
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Ala Ile Ile Asn Pro Arg Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Arg Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Glu Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 276
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 276
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Ala Ile Ile Asn Pro Arg Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Arg Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Glu Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala
225 230 235 240
Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 277
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 277
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Ala Ile Ile Asn Pro Arg Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Arg Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Glu Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala
225 230 235 240
Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Cys Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 278
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 278
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Ala Ile Ile Asn Pro Arg Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Arg Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Arg Gly Tyr Glu Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala
225 230 235 240
Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Cys Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 279
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 279
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Thr Ser
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Leu Gly Tyr Asn Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 280
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 280
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Thr Ser
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Leu Gly Tyr Asn Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala
225 230 235 240
Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 281
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 281
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Thr Ser
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Leu Gly Tyr Asn Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala
225 230 235 240
Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Cys Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 282
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 282
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Thr Ser
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Leu Gly Tyr Asn Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala
225 230 235 240
Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Cys Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 283
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 283
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 284
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 284
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Gly Ile Arg Ser Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Gly Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 285
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 285
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Gly Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 286
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 286
Thr Ser Trp Ile Gly
1 5
<210> 287
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 287
His Gly Leu Gly Tyr Asn Gly Tyr Glu Gly Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 288
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 288
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Ser Ala Leu Ala
1 5 10
<210> 289
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 289
Cys Gln Gln Leu Asn Gly Tyr Pro Leu Thr
1 5 10
<210> 290
<211> 293
<212> PRT
<213> 大肠杆菌
<400> 290
Lys Glu Phe Thr Leu Asp Phe Ser Thr Ala Lys Thr Tyr Val Asp Ser
1 5 10 15
Leu Asn Val Ile Arg Ser Ala Ile Gly Thr Pro Leu Gln Thr Ile Ser
20 25 30
Ser Gly Gly Thr Ser Leu Leu Met Ile Asp Ser Gly Ser Gly Asp Asn
35 40 45
Leu Phe Ala Val Asp Val Arg Gly Ile Asp Pro Glu Glu Gly Arg Phe
50 55 60
Asn Asn Leu Arg Leu Ile Val Glu Arg Asn Asn Leu Tyr Val Thr Gly
65 70 75 80
Phe Val Asn Arg Thr Asn Asn Val Phe Tyr Arg Phe Ala Asp Phe Ser
85 90 95
His Val Thr Phe Pro Gly Thr Thr Ala Val Thr Leu Ser Gly Asp Ser
100 105 110
Ser Tyr Thr Thr Leu Gln Arg Val Ala Gly Ile Ser Arg Thr Gly Met
115 120 125
Gln Ile Asn Arg His Ser Leu Thr Thr Ser Tyr Leu Asp Leu Met Ser
130 135 140
His Ser Gly Thr Ser Leu Thr Gln Ser Val Ala Arg Ala Met Leu Arg
145 150 155 160
Phe Val Thr Val Thr Ala Glu Ala Leu Arg Phe Arg Gln Ile Gln Arg
165 170 175
Gly Phe Arg Thr Thr Leu Asp Asp Leu Ser Gly Arg Ser Tyr Val Met
180 185 190
Thr Ala Glu Asp Val Asp Leu Thr Leu Asn Trp Gly Arg Leu Ser Ser
195 200 205
Val Leu Pro Asp Tyr His Gly Gln Asp Ser Val Arg Val Gly Arg Ile
210 215 220
Ser Phe Gly Ser Ile Asn Ala Ile Leu Gly Ser Val Ala Leu Ile Leu
225 230 235 240
Asn Cys His His His Ala Ser Arg Val Ala Arg Met Ala Ser Asp Glu
245 250 255
Phe Pro Ser Met Cys Pro Ala Asp Gly Arg Val Arg Gly Ile Thr His
260 265 270
Asn Lys Ile Leu Trp Asp Ser Ser Thr Leu Gly Ala Ile Leu Met Arg
275 280 285
Arg Thr Ile Ser Ser
290
<210> 291
<211> 293
<212> PRT
<213> 痢疾志贺氏菌
<400> 291
Lys Glu Phe Thr Leu Asp Phe Ser Thr Ala Lys Thr Tyr Val Asp Ser
1 5 10 15
Leu Asn Val Ile Arg Ser Ala Ile Gly Thr Pro Leu Gln Thr Ile Ser
20 25 30
Ser Gly Gly Thr Ser Leu Leu Met Ile Asp Ser Gly Thr Gly Asp Asn
35 40 45
Leu Phe Ala Val Asp Val Arg Gly Ile Asp Pro Glu Glu Gly Arg Phe
50 55 60
Asn Asn Leu Arg Leu Ile Val Glu Arg Asn Asn Leu Tyr Val Thr Gly
65 70 75 80
Phe Val Asn Arg Thr Asn Asn Val Phe Tyr Arg Phe Ala Asp Phe Ser
85 90 95
His Val Thr Phe Pro Gly Thr Thr Ala Val Thr Leu Ser Gly Asp Ser
100 105 110
Ser Tyr Thr Thr Leu Gln Arg Val Ala Gly Ile Ser Arg Thr Gly Met
115 120 125
Gln Ile Asn Arg His Ser Leu Thr Thr Ser Tyr Leu Asp Leu Met Ser
130 135 140
His Ser Gly Thr Ser Leu Thr Gln Ser Val Ala Arg Ala Met Leu Arg
145 150 155 160
Phe Val Thr Val Thr Ala Glu Ala Leu Arg Phe Arg Gln Ile Gln Arg
165 170 175
Gly Phe Arg Thr Thr Leu Asp Asp Leu Ser Gly Arg Ser Tyr Val Met
180 185 190
Thr Ala Glu Asp Val Asp Leu Thr Leu Asn Trp Gly Arg Leu Ser Ser
195 200 205
Val Leu Pro Asp Tyr His Gly Gln Asp Ser Val Arg Val Gly Arg Ile
210 215 220
Ser Phe Gly Ser Ile Asn Ala Ile Leu Gly Ser Val Ala Leu Ile Leu
225 230 235 240
Asn Cys His His His Ala Ser Arg Val Ala Arg Met Ala Ser Asp Glu
245 250 255
Phe Pro Ser Met Cys Pro Ala Asp Gly Arg Val Arg Gly Ile Thr His
260 265 270
Asn Lys Ile Leu Trp Asp Ser Ser Thr Leu Gly Ala Ile Leu Met Arg
275 280 285
Arg Thr Ile Ser Ser
290
<210> 292
<211> 297
<212> PRT
<213> 大肠杆菌
<400> 292
Asp Glu Phe Thr Val Asp Phe Ser Ser Gln Lys Ser Tyr Val Asp Ser
1 5 10 15
Leu Asn Ser Ile Arg Ser Ala Ile Ser Thr Pro Leu Gly Asn Ile Ser
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Val Ser Val Ile Asn His Val Leu Gly Gly Asn
35 40 45
Tyr Ile Ser Leu Asn Val Arg Gly Leu Asp Pro Tyr Ser Glu Arg Phe
50 55 60
Asn His Leu Arg Leu Ile Met Glu Arg Asn Asn Leu Tyr Val Ala Gly
65 70 75 80
Phe Ile Asn Thr Glu Thr Asn Ile Phe Tyr Arg Phe Ser Asp Phe Ser
85 90 95
His Ile Ser Val Pro Asp Val Ile Thr Val Ser Met Thr Thr Asp Ser
100 105 110
Ser Tyr Ser Ser Leu Gln Arg Ile Ala Asp Leu Glu Arg Thr Gly Met
115 120 125
Gln Ile Gly Arg His Ser Leu Val Gly Ser Tyr Leu Asp Leu Met Glu
130 135 140
Phe Arg Gly Arg Ser Met Thr Arg Ala Ser Ser Arg Ala Met Leu Arg
145 150 155 160
Phe Val Thr Val Ile Ala Glu Ala Leu Arg Phe Arg Gln Ile Gln Arg
165 170 175
Gly Phe Arg Pro Ala Leu Ser Glu Ala Ser Pro Leu Tyr Thr Met Thr
180 185 190
Ala Gln Asp Val Asp Leu Thr Leu Asn Trp Gly Arg Ile Ser Asn Val
195 200 205
Leu Pro Glu Tyr Arg Gly Glu Glu Gly Val Arg Ile Gly Arg Ile Ser
210 215 220
Phe Asn Ser Leu Ser Ala Ile Leu Gly Ser Val Ala Val Ile Leu Asn
225 230 235 240
Cys His Ser Thr Gly Ser Tyr Ser Val Arg Ser Val Ser Gln Lys Gln
245 250 255
Lys Thr Glu Cys Gln Ile Val Gly Asp Arg Ala Ala Ile Lys Val Asn
260 265 270
Asn Val Leu Trp Glu Ala Asn Thr Ile Ala Ala Leu Leu Asn Arg Lys
275 280 285
Pro Gln Asp Leu Thr Glu Pro Asn Gln
290 295
<210> 293
<211> 351
<212> PRT
<213> 智人
<400> 293
Met Ser Phe Pro Cys Lys Phe Val Ala Ser Phe Leu Leu Ile Phe Asn
1 5 10 15
Val Ser Ser Lys Gly Ala Val Ser Lys Glu Ile Thr Asn Ala Leu Glu
20 25 30
Thr Trp Gly Ala Leu Gly Gln Asp Ile Asn Leu Asp Ile Pro Ser Phe
35 40 45
Gln Met Ser Asp Asp Ile Asp Asp Ile Lys Trp Glu Lys Thr Ser Asp
50 55 60
Lys Lys Lys Ile Ala Gln Phe Arg Lys Glu Lys Glu Thr Phe Lys Glu
65 70 75 80
Lys Asp Thr Tyr Lys Leu Phe Lys Asn Gly Thr Leu Lys Ile Lys His
85 90 95
Leu Lys Thr Asp Asp Gln Asp Ile Tyr Lys Val Ser Ile Tyr Asp Thr
100 105 110
Lys Gly Lys Asn Val Leu Glu Lys Ile Phe Asp Leu Lys Ile Gln Glu
115 120 125
Arg Val Ser Lys Pro Lys Ile Ser Trp Thr Cys Ile Asn Thr Thr Leu
130 135 140
Thr Cys Glu Val Met Asn Gly Thr Asp Pro Glu Leu Asn Leu Tyr Gln
145 150 155 160
Asp Gly Lys His Leu Lys Leu Ser Gln Arg Val Ile Thr His Lys Trp
165 170 175
Thr Thr Ser Leu Ser Ala Lys Phe Lys Cys Thr Ala Gly Asn Lys Val
180 185 190
Ser Lys Glu Ser Ser Val Glu Pro Val Ser Cys Pro Glu Lys Gly Leu
195 200 205
Asp Ile Tyr Leu Ile Ile Gly Ile Cys Gly Gly Gly Ser Leu Leu Met
210 215 220
Val Phe Val Ala Leu Leu Val Phe Tyr Ile Thr Lys Arg Lys Lys Gln
225 230 235 240
Arg Ser Arg Arg Asn Asp Glu Glu Leu Glu Thr Arg Ala His Arg Val
245 250 255
Ala Thr Glu Glu Arg Gly Arg Lys Pro His Gln Ile Pro Ala Ser Thr
260 265 270
Pro Gln Asn Pro Ala Thr Ser Gln His Pro Pro Pro Pro Pro Gly His
275 280 285
Arg Ser Gln Ala Pro Ser His Arg Pro Pro Pro Pro Gly His Arg Val
290 295 300
Gln His Gln Pro Gln Lys Arg Pro Pro Ala Pro Ser Gly Thr Gln Val
305 310 315 320
His Gln Gln Lys Gly Pro Pro Leu Pro Arg Pro Arg Val Gln Pro Lys
325 330 335
Pro Pro His Gly Ala Ala Glu Asn Ser Leu Ser Pro Ser Ser Asn
340 345 350
<210> 294
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 294
Glu Tyr Tyr Met Tyr
1 5
<210> 295
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 295
Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Ser Ile Asp Tyr Val Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Lys
<210> 296
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 296
Gly Lys Phe Asn Tyr Arg Phe Ala Tyr
1 5
<210> 297
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 297
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15
<210> 298
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 298
Leu Val Ser Lys Leu Glu Ser
1 5
<210> 299
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 299
Met Gln Phe Thr His Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 300
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 300
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Leu Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Ser Ile Asp Tyr Val Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Lys Lys Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Lys Phe Asn Tyr Arg Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 301
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 301
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Leu Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Pro Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Glu Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Gly Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Phe
85 90 95
Thr His Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 302
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 302
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
1 5
<210> 303
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 303
Ser Gly Gly Gly Phe
1 5
<210> 304
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 304
Ser Ser Tyr Gly Glu Ile Met Asp Tyr
1 5
<210> 305
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 305
Arg Ala Ser Gln Arg Ile Gly Thr Ser Ile His
1 5 10
<210> 306
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 306
Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser
1 5
<210> 307
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 307
Gln Gln Ser His Gly Trp Pro Phe Thr Phe
1 5 10
<210> 308
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 308
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Gly Gly Gly Phe Leu Tyr Tyr Leu Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu
65 70 75 80
His Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ser Ser Tyr Gly Glu Ile Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 309
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 309
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Ile Gly Thr Ser
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Thr Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser His Gly Trp Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Glu
100 105
<210> 310
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 310
Ser Ser Tyr Gly Glu Leu Met Asp Tyr
1 5
<210> 311
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 311
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Gly Gly Gly Phe Leu Tyr Tyr Leu Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu
65 70 75 80
His Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ser Ser Tyr Gly Glu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 312
<211> 495
<212> PRT
<213> 智人
<400> 312
Met Pro Met Gly Ser Leu Gln Pro Leu Ala Thr Leu Tyr Leu Leu Gly
1 5 10 15
Met Leu Val Ala Ser Cys Leu Gly Arg Leu Ser Trp Tyr Asp Pro Asp
20 25 30
Phe Gln Ala Arg Leu Thr Arg Ser Asn Ser Lys Cys Gln Gly Gln Leu
35 40 45
Glu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Trp His Met Val Cys Ser Gln Ser Trp
50 55 60
Gly Arg Ser Ser Lys Gln Trp Glu Asp Pro Ser Gln Ala Ser Lys Val
65 70 75 80
Cys Gln Arg Leu Asn Cys Gly Val Pro Leu Ser Leu Gly Pro Phe Leu
85 90 95
Val Thr Tyr Thr Pro Gln Ser Ser Ile Ile Cys Tyr Gly Gln Leu Gly
100 105 110
Ser Phe Ser Asn Cys Ser His Ser Arg Asn Asp Met Cys His Ser Leu
115 120 125
Gly Leu Thr Cys Leu Glu Pro Gln Lys Thr Thr Pro Pro Thr Thr Arg
130 135 140
Pro Pro Pro Thr Thr Thr Pro Glu Pro Thr Ala Pro Pro Arg Leu Gln
145 150 155 160
Leu Val Ala Gln Ser Gly Gly Gln His Cys Ala Gly Val Val Glu Phe
165 170 175
Tyr Ser Gly Ser Leu Gly Gly Thr Ile Ser Tyr Glu Ala Gln Asp Lys
180 185 190
Thr Gln Asp Leu Glu Asn Phe Leu Cys Asn Asn Leu Gln Cys Gly Ser
195 200 205
Phe Leu Lys His Leu Pro Glu Thr Glu Ala Gly Arg Ala Gln Asp Pro
210 215 220
Gly Glu Pro Arg Glu His Gln Pro Leu Pro Ile Gln Trp Lys Ile Gln
225 230 235 240
Asn Ser Ser Cys Thr Ser Leu Glu His Cys Phe Arg Lys Ile Lys Pro
245 250 255
Gln Lys Ser Gly Arg Val Leu Ala Leu Leu Cys Ser Gly Phe Gln Pro
260 265 270
Lys Val Gln Ser Arg Leu Val Gly Gly Ser Ser Ile Cys Glu Gly Thr
275 280 285
Val Glu Val Arg Gln Gly Ala Gln Trp Ala Ala Leu Cys Asp Ser Ser
290 295 300
Ser Ala Arg Ser Ser Leu Arg Trp Glu Glu Val Cys Arg Glu Gln Gln
305 310 315 320
Cys Gly Ser Val Asn Ser Tyr Arg Val Leu Asp Ala Gly Asp Pro Thr
325 330 335
Ser Arg Gly Leu Phe Cys Pro His Gln Lys Leu Ser Gln Cys His Glu
340 345 350
Leu Trp Glu Arg Asn Ser Tyr Cys Lys Lys Val Phe Val Thr Cys Gln
355 360 365
Asp Pro Asn Pro Ala Gly Leu Ala Ala Gly Thr Val Ala Ser Ile Ile
370 375 380
Leu Ala Leu Val Leu Leu Val Val Leu Leu Val Val Cys Gly Pro Leu
385 390 395 400
Ala Tyr Lys Lys Leu Val Lys Lys Phe Arg Gln Lys Lys Gln Arg Gln
405 410 415
Trp Ile Gly Pro Thr Gly Met Asn Gln Asn Met Ser Phe His Arg Asn
420 425 430
His Thr Ala Thr Val Arg Ser His Ala Glu Asn Pro Thr Ala Ser His
435 440 445
Val Asp Asn Glu Tyr Ser Gln Pro Pro Arg Asn Ser His Leu Ser Ala
450 455 460
Tyr Pro Ala Leu Glu Gly Ala Leu His Arg Ser Ser Met Gln Pro Asp
465 470 475 480
Asn Ser Ser Asp Ser Asp Tyr Asp Leu His Gly Ala Gln Arg Leu
485 490 495
<210> 313
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 313
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Val Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Val Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Ala Ser Lys Asp Gln Val
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Val Arg Arg Arg Ala Thr Gly Thr Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 314
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 314
Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys His Gln Tyr Asn Ser Tyr Asn Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 315
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 315
Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly
1 5
<210> 316
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 316
Trp Trp Asp Asp Asp
1 5
<210> 317
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 317
Arg Arg Ala Thr Gly Thr Gly Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 318
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 318
Gln Asp Val Gly Thr Ala
1 5
<210> 319
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 319
Trp Thr Ser Thr Arg His Thr
1 5
<210> 320
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 320
Tyr Asn Ser Tyr Asn Thr
1 5
<210> 321
<211> 9
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述：
"LAGLIDADG"家族基序肽
<400> 321
Leu Ala Gly Leu Ile Asp Ala Asp Gly
1 5
<210> 322
<211> 9
<212> PRT
<213> 人免疫缺陷病毒1
<400> 322
Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg
1 5
<210> 323
<211> 12
<212> PRT
<213> 人免疫缺陷病毒1
<400> 323
Arg Gln Ala Arg Arg Asn Arg Arg Arg Arg Trp Arg
1 5 10
<210> 324
<211> 7
<212> PRT
<213> 猿病毒40
<400> 324
Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val
1 5
<210> 325
<211> 8
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述：
鹅膏毒素序列
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Asn或Asp
<400> 325
Ile Trp Gly Ile Gly Cys Xaa Pro
1 5

Claims (43)

1.将遗传修饰干细胞施用到有此需要的人受试者的方法，所述方法包括：
a)将与在造血干细胞(HSC)和/或免疫细胞上表达的细胞表面分子结合的抗体-药物缀合物(ADC)施用到所述人受试者，从而耗尽来自所述人受试者的HSC和/或免疫细胞；以及
b)将包含遗传修饰干细胞群体的移植物施用到所述人受试者。
2.用遗传修饰细胞治疗人受试者的方法，所述方法包括将包含遗传修饰干细胞群体的移植物施用到有此需要的所述人受试者，其中所述人受试者已接受包含与在造血干细胞(HSC)和/或免疫细胞上表达的细胞表面分子结合的抗体-药物缀合物(ADC)的调理治疗。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述遗传修饰干细胞是自体干细胞。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述遗传修饰干细胞是同种异体干细胞。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述遗传修饰干细胞是HSC。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述受试者患有癌症、血红蛋白病病症、骨髓增生异常病症、免疫缺陷病症或代谢性病症。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述血红蛋白病病症选自以下中的任何一种或多种：镰状细胞贫血、地中海贫血、范科尼贫血、再生障碍性贫血或威斯科特-奥尔德里奇二氏综合征。
8.根据权利要求6所述的方法，其中所述免疫缺陷病症是先天性免疫缺陷或获得性免疫缺陷。
9.根据权利要求6所述的方法，其中所述获得性免疫缺陷是人免疫缺陷病毒或获得性免疫缺陷综合征(AIDS)。
10.根据权利要求6所述的方法，其中所述代谢性病症选自以下中的任何一种或多种：糖原贮积病、粘多糖贮积症、戈谢氏病、胡尔勒病、鞘脂沉积病、球样细胞脑白质营养不良或异染性脑白质营养不良。
11.根据权利要求6所述的方法，其中所述癌症选自以下中的任何一种或多种：白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤或成神经细胞瘤。
12.根据权利要求6所述的方法，其中所述癌症是血液学癌症。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述血液学癌症是急性髓样白血病、急性淋巴样白血病、慢性髓样白血病、慢性淋巴样白血病或多发性骨髓瘤。
14.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述受试者患有选自以下中的任何一种或多种的病症：腺苷脱氨酶缺乏、重症联合免疫缺陷、高免疫球蛋白M综合征、切-希二氏病、遗传性淋巴组织细胞增生症、骨硬化症、成骨不全症、贮积病、重型地中海贫血、系统性硬化症、系统性红斑狼疮、多发性硬化症或幼年型类风湿性关节炎。
15.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述受试者患有自身免疫性病症。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述自身免疫性病症选自以下中的任何一种或多种：多发性硬化症、人系统性狼疮、类风湿性关节炎、炎性肠病、治疗型银屑病、1型糖尿病、急性播散性脑脊髓炎、艾迪生病、普秃、强直性脊柱炎、抗磷脂抗体综合征、再生障碍性贫血、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳病、自身免疫性淋巴组织增生性综合征、自身免疫性卵巢炎、巴洛病、贝赫切特病、大疱性类天疱疮、心肌病、恰加斯氏病、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎性脱髓鞘性多神经病、克罗恩氏病、瘢痕性类天疱疮、口炎性腹泻-疱疹样皮炎、冷凝集素疾病、CREST综合征、德戈斯病、盘状狼疮、自主神经机能异常、子宫内膜异位、原发性混合型冷球蛋白血症、纤维肌痛-纤维肌炎、肺出血肾炎综合征、格雷夫斯病、格林-巴利综合征、桥本氏甲状腺炎、化脓性汗腺炎、特发性和/或急性血小板减少性紫癜、特发性肺纤维化、IgA神经病变、间质性膀胱炎、幼年型关节炎、川崎病、扁平苔藓、莱姆病、梅尼埃病、混合性结缔组织病、重症肌无力、神经性肌强直、视性眼阵挛肌阵挛综合征、视神经炎、奥德氏甲状腺炎、寻常型天疱疮、恶性贫血、多软骨炎、多肌炎和皮肌炎、原发性胆汁性肝硬化、结节性多动脉炎、多腺性综合征、风湿性多肌痛、原发性丙种球蛋白缺乏血症、雷诺现象、莱特尔综合征、风湿热、结节病、硬皮病、舍格伦综合征、僵人综合征、高安氏动脉炎、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、血管炎、白癜风、外阴痛、慢性肉芽肿病或韦格纳肉芽肿。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述干细胞群体已经进行了遗传修饰以改变靶基因。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述靶基因选自以下中的一种或多种：β-珠蛋白、γ-珠蛋白、腺苷脱氨酶、芳基硫酸酯酶A、WASp基因、吞噬细胞NADPH氧化酶、半乳糖基神经酰胺酶、β-半乳糖苷酶、β-氨基己糖苷酶、α-L艾杜糖醛酸酶、ATM丝氨酸/苏氨酸激酶、核糖体成熟蛋白SBDS、或CCR5。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述包含遗传修饰干细胞群体的移植物已使用基因编辑系统进行了修饰。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述基因编辑系统是CRISPR/Cas系统。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述ADC包含结合一种或多种细胞表面分子的抗体或其抗原结合片段，所述一种或多种细胞表面分子选自CD2、CD5、CD7、CDwl2、CD13、CD15、CD19、CD21、CD22、CD29、CD30、CD33、CD34、CD36、CD38、CD40、CD41、CD42a、CD42b、CD42c、CD42d、CD43、CD45、CD45RA、CD45RB、CD45RC、CD45RO、CD48、CD49b、CD49d、CD49e、CD49f、CD50、CD53、CD55、CD64a、CD68、CD71、CD72、CD73、CD81、CD82、CD85A、CD85K、CD90、CD99、CD104、CD105、CD109、CD110、CD111、CD112、CD114、CD115、CD117、CD123、CD124、CD126、CD127、CD130、CD131、CD133、CD135、CD137、CD138、CD151、CD157、CD162、CD164、CD168、CD172a、CD173、CD174、CD175、CD175s、CD176、CD183、CD191、CD200、CD201、CD205、CD217、CD220、CD221、CD222、CD223、CD224、CD225、CD226、CD227、CD228、CD229、CD230、CD235a、CD235b、CD236、CD236R、CD238、CD240、CD242、CD243、CD277、CD292、CDw293、CD295、CD298、CD309、CD318、CD324、CD325、CD338、CD344、CD349或CD350。
22.根据权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述ADC包含结合CD117的抗体或其抗原结合片段。
23.根据权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述ADC以足以耗尽所述受试者中的CD117+细胞群体的量施用。
24.根据权利要求22所述的方法，其中所述CD117是GNNK+CD117。
25.根据权利要求22所述的方法，其中所述抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：
(a)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:31中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:32中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:33中所阐述的氨基酸序列；并且所述轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:34中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:35中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:36中所阐述的氨基酸序列；
(b)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:21中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:22中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:23中所阐述的氨基酸序列；并且所述轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:24中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:25中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:26中所阐述的氨基酸序列；
(c)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:41中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:42中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:43中所阐述的氨基酸序列；并且所述轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:44中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:45中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:46中所阐述的氨基酸序列；
(d)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:51中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:52中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:53中所阐述的氨基酸序列；并且所述轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:54中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:55中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:56中所阐述的氨基酸序列；
(e)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:61中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:62中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:63中所阐述的氨基酸序列；并且所述轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:64中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:65中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:66中所阐述的氨基酸序列；
(f)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:71中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:72中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:73中所阐述的氨基酸序列；并且所述轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:74中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:75中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:76中所阐述的氨基酸序列；
(g)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:81中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:82中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:83中所阐述的氨基酸序列；并且所述轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:84中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:85中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:86中所阐述的氨基酸序列；
(h)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:11中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:12中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:13中所阐述的氨基酸序列；并且所述轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:14中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:15中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:16中所阐述的氨基酸序列；
(i)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:91中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:92中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:93中所阐述的氨基酸序列；并且所述轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:94中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:95中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:96中所阐述的氨基酸序列；
(j)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:101中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:102中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:103中所阐述的氨基酸序列；并且所述轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:104中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:105中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:106中所阐述的氨基酸序列；或者
(k)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:245中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:246中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:247中所阐述的氨基酸序列；并且所述轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:248中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:249中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:250中所阐述的氨基酸序列。
26.根据权利要求22所述的方法，其中所述抗CD117抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:127中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:128中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:129中所阐述的氨基酸序列；并且所述轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQID NO:130中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:131中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:132中所阐述的氨基酸序列。
27.根据权利要求22所述的方法，其中所述抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：
(a)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:133中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:134中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:135中所阐述的氨基酸序列；并且所述轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:136中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:137中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:138中所阐述的氨基酸序列；或者
b)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:139中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:140中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:141中所阐述的氨基酸序列；并且所述轻链可变区包含：CDR1域，其包含如SEQ ID NO:142中所阐述的氨基酸序列，CDR2域，其包含如SEQ ID NO:143中所阐述的氨基酸序列，以及CDR3域，其包含如SEQ ID NO:144中所阐述的氨基酸序列。
28.根据权利要求22所述的方法，其中所述抗CD117抗体或其抗原结合片段包含：
(a)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:29中所阐述的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:30中所阐述的氨基酸序列；
(b)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:19中所阐述的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:20中所阐述的氨基酸序列；
(c)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:39中所阐述的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:40中所阐述的氨基酸序列；
(d)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:49中所阐述的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:50中所阐述的氨基酸序列；
(e)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:59中所阐述的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:60中所阐述的氨基酸序列；
(f)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:69中所阐述的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:70中所阐述的氨基酸序列；
(g)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:79中所阐述的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:80中所阐述的氨基酸序列；
(h)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:9中所阐述的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:10中所阐述的氨基酸序列；
(i)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:89中所阐述的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:90中所阐述的氨基酸序列；
(j)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:99中所阐述的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:100中所阐述的氨基酸序列；或者
(k)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:243中所阐述的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:244中所阐述的氨基酸序列。
29.根据权利要求22至28中任一项所述的方法，其中所述抗CD117抗体或其抗原结合片段的解离速率(KOFF)为1x10-2至1x10-3、1x10-3至1x10-4、1x10-5至1x10-6、1x10-6至1x10-7或1x10-7至1x10-8，如通过生物层干涉测量法(BLI)所测量的。
30.根据权利要求22至28中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段以以下的KD结合CD117：约100nM或更小、约90nM或更小、约80nM或更小、约70nM或更小、约60nM或更小、约50nM或更小、约40nM或更小、约30nM或更小、约20nM或更小、约10nM或更小、约8nM或更小、约6nM或更小、约4nM或更小、约2nM或更小、约1nM或更小，如通过生物层干涉测量法(BLI)测定所确定的。
31.根据权利要求21至28中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段是人的。
32.根据权利要求21至28中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段是完整抗体。
33.根据权利要求21至28中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段是IgG。
34.根据权利要求21至28中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段是IgG1或IgG4。
35.根据权利要求21至28中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体。
36.根据权利要求21至28中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区和/或轻链恒定区，所述重链恒定区具有如SEQ ID NO:122中所阐述的氨基酸序列，并且所述轻链恒定区包含如SEQ ID NO:121中所阐述的氨基酸序列。
37.根据权利要求21至28中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段包含Fc区，所述Fc区包含至少一个选自下组的氨基酸取代，所述组由以下各项组成：D265C、H435A、L234A和L235A(根据EU索引编号)。
38.根据权利要求37所述的方法，其中所述Fc区包含氨基酸取代D265C、L234A和L235A(根据EU索引编号)。
39.根据权利要求22所述的方法，其中所述抗CD117抗体或其抗原结合片段包含轻链和重链，所述轻链包含如SEQ ID NO:109中所阐述的氨基酸序列，并且所述重链包含选自下组的氨基酸序列，所述组由以下各项组成：SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:114。
40.根据权利要求22所述的方法，其中所述抗CD117抗体或其抗原结合片段包含轻链和重链，所述轻链包含如SEQ ID NO:115中所阐述的氨基酸序列，并且所述重链包含选自下组的氨基酸序列，所述组由以下各项组成：SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:117、SEQ ID NO:118、SEQ ID NO:119和SEQ ID NO:120。
41.根据权利要求22所述的方法，其中所述抗CD117抗体或其抗原结合片段包含轻链和重链，所述轻链包含如SEQ ID NO:284中所阐述的氨基酸序列，并且所述重链包含选自下组的氨基酸序列，所述组由以下各项组成：SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:276、SEQ ID NO:277和SEQ ID NO:278。
42.根据权利要求22所述的方法，其中所述抗CD117抗体或其抗原结合片段包含
重链和轻链，所述重链包含来自Ab55、Ab54、Ab56、Ab57、Ab58、Ab61、Ab66、Ab67、Ab68、Ab69、Ab85、Ab86、Ab87、Ab88、Ab89、Ab77、Ab79、Ab81、Ab85或Ab249的重链可变区的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3或可变区序列，并且所述轻链包含来自Ab55、Ab54、Ab56、Ab57、Ab58、Ab61、Ab66、Ab67、Ab68、Ab69、Ab85、Ab86、Ab87、Ab88、Ab89、Ab77、Ab79、Ab81、Ab85或Ab249的轻链可变区的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3或可变区序列，或者
重链和轻链，所述重链包含来自SEQ ID NO:147、164、166、168、170、172、174、176、178、180、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、202、204、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、226、238或243的重链可变区氨基酸序列的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3或可变区，并且所述轻链包含来自SEQ ID NO:148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、182、184、186、188、190、192、194、196、198、200、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、239、240、241、242或244的轻链可变区氨基酸序列的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3或可变区。
43.根据权利要求1至42中任一项所述的方法，其中所述ADC由式Ab-(Z-L-Cy)n表示，其中：
Ab是所述抗体或其抗原结合片段；
L是接头；
Z是通过存在于L上的反应性取代基与存在于所述抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基之间的偶联反应形成的化学部分，
Cy是选自下组的细胞毒素，所述组由以下各项组成：鹅膏毒素、假单胞菌外毒素A、deBouganin、白喉毒素、皂草素、美登素、美登木素生物碱、吡咯并苯并二氮杂卓、吡咯并苯并二氮杂卓二聚体、二氢吲哚基苯并二氮杂卓、二氢吲哚基苯并二氮杂卓二聚体、加利车霉素、澳瑞他汀和蒽环类药物；并且
n是约1至约20的整数，其表示每个抗体的细胞毒素的平均数目。
CN202080045488.3A 2019-04-24 2020-04-24 用于基因疗法的调理方法 Pending CN113993550A (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962838278P 2019-04-24 2019-04-24
US62/838,278 2019-04-24
US201962944925P 2019-12-06 2019-12-06
US62/944,925 2019-12-06
PCT/US2020/029934 WO2020219964A1 (en) 2019-04-24 2020-04-24 Conditioning methods for gene therapy

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113993550A true CN113993550A (zh) 2022-01-28

Family

ID=72940803

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202080045488.3A Pending CN113993550A (zh) 2019-04-24 2020-04-24 用于基因疗法的调理方法

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20220175946A1 (zh)
EP (1) EP3958878A4 (zh)
JP (1) JP2022531141A (zh)
CN (1) CN113993550A (zh)
AU (1) AU2020261079A1 (zh)
CA (1) CA3134689A1 (zh)
WO (1) WO2020219964A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2018354189A1 (en) 2017-10-24 2020-04-23 Crispr Therapeutics Ag Compositions and methods for the depletion of CD117+ cells
WO2024073751A1 (en) * 2022-09-29 2024-04-04 Vor Biopharma Inc. Methods and compositions for gene modification and enrichment

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018183613A1 (en) * 2017-03-31 2018-10-04 The Children's Medical Center Corporation Antibody-mediated conditioning with immunosuppression to enable allogeneic transplantation
WO2019018383A1 (en) * 2017-07-18 2019-01-24 Calimmune, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING BETA-HEMOGLOBINOPATHIES
CN109641051A (zh) * 2016-06-17 2019-04-16 美真达治疗公司 用于耗尽细胞的组合物和方法
CN109661400A (zh) * 2016-06-17 2019-04-19 美真达治疗公司 用于耗尽cd117+细胞的组合物和方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7280254B2 (ja) * 2017-10-24 2023-05-23 マジェンタ セラピューティクス インコーポレイテッド Ｃｄ１１７＋細胞を減少させるための組成物及び方法
CN113330026A (zh) * 2018-10-23 2021-08-31 美真达治疗公司 Fc沉默的抗体药物缀合物(ADC)及其用途

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109641051A (zh) * 2016-06-17 2019-04-16 美真达治疗公司 用于耗尽细胞的组合物和方法
CN109661400A (zh) * 2016-06-17 2019-04-19 美真达治疗公司 用于耗尽cd117+细胞的组合物和方法
WO2018183613A1 (en) * 2017-03-31 2018-10-04 The Children's Medical Center Corporation Antibody-mediated conditioning with immunosuppression to enable allogeneic transplantation
WO2019018383A1 (en) * 2017-07-18 2019-01-24 Calimmune, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING BETA-HEMOGLOBINOPATHIES

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AGNIESZKA CZECHOWICZ等: "Selective hematopoietic stem cell ablation using CD117-antibody-drug-conjugates enables safe and effective transplantation with immunity preservation", NATURE COMMUNICATIONS, vol. 10, no. 617, 6 February 2019 (2019-02-06), pages 1 - 12, XP055617538, DOI: 10.1038/s41467-018-08201-x *

Also Published As

Publication number Publication date
JP2022531141A (ja) 2022-07-06
EP3958878A1 (en) 2022-03-02
CA3134689A1 (en) 2020-10-29
WO2020219964A1 (en) 2020-10-29
EP3958878A4 (en) 2022-12-28
US20220175946A1 (en) 2022-06-09
AU2020261079A1 (en) 2021-12-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220175951A1 (en) Anti-CD45 Antibody Drug Conjugates and Uses Thereof
CN111601616A (zh) 用于耗尽cd117+细胞的组合物和方法
KR20200069364A (ko) Cd117+ 세포의 고갈을 위한 조성물 및 방법
US20200255523A1 (en) Fc silenced antibody drug conjugates (adcs) and uses thereof
US20210371524A1 (en) Anti-cd45 antibodies and conjugates thereof
CN114174317A (zh) 鹅膏毒素抗体-药物缀合物及其用途
KR20210086683A (ko) 동종이형 조혈 줄기 세포 이식 방법
US20240075157A1 (en) Fc silenced antibody drug conjugates (adcs) and uses thereof
JP2022530438A (ja) 抗ｃｄ１１７抗体薬物複合体およびその使用
US20220175946A1 (en) Conditioning methods for gene therapy
JP2022518150A (ja) 細胞療法での抗ｃｄ４５抗体－薬物結合体（ａｄｃ）の使用経験
US20220267441A1 (en) Anti-cd45 antibodies and conjugates thereof
JP2022529727A (ja) Ａｎｔｉ－ｃｄ１１７ とその使用
JP2022530443A (ja) 抗ｃｄ１１７抗体薬物複合体およびその使用
JP2022529726A (ja) Ａｎｔｉ－ｃｄ１１７とその使用
WO2020219774A1 (en) Anthracycline antibody-drug conjugates and uses thereof
US20220273811A1 (en) Methods and compositions for treating autoimmune diseases
CN111372608B (zh) 用于耗尽cd117+细胞的组合物和方法
KR20220154676A (ko) 동종 이식을 위한 조성물 및 방법
JPWO2020219778A5 (zh)
JPWO2020219774A5 (zh)

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination