MX2012011900A - Conjugados de pirrolobenzodiazepina diana. - Google Patents

Conjugados de pirrolobenzodiazepina diana.

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MX2012011900A
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MX
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carbon atoms
unit
mmol
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MX2012011900A
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Philip Wilson Howard
Scott Jeffrey
Patrick Burke
Peter Senter
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Seattle Genetics Inc
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Abstract

Se proporcionan Conjugados que comprenden conjugados de PBD a un agente diana y procedimientos de uso de dichos PBD.

Description

CONJUGADOS DE PIRROLOBENZODIAZEPINA DIANA Campo de la invención La presente invención se relaciona con conjugados de pirrolobenzodiazepinas (PBD) diana, en particular dímeros de pirrolobenzodiazepina, que están conjugados a un agente de dirección mediante la posición C2 de uno de los monómeros .
Antecedentes de la invención Algunas pirrolobenzodiazepinas (PBD) tiene la capacidad de reconocer y unirse a secuencias específicas de ADN; la secuencia preferida es PuGPu. El primer antibiótico antitumoral PBD, antramicina, fue descubierto en 1965 (Leimgruber, y col., J. Am. Chem. Soc, 87, 5793-5795 (1965); Leimgruber, y col., J. Am. Chem. Soc, 87, 5791-5793 (19965) ) . Desde entonces, se han reportado muchos PBD que se encuentran de manera natural y se han desarrollado más de 10 rutas de síntesis para una diversidad de análogos (Thurston, y col., Chem. Rev. 1994, 433-465 (1994)). Los miembros de la familia incluyen abbeimicina (Hochlowski, y col., J. Antibiotics, 40, 145-148 (1987)), chicamicina (Konishi, y col., J. Antibiotics, 37, 200-206 (1984)), DC-81 (patente Japonesa 58-180 487; Thurston, y col., Chem. Brit., 26, 767-772 (1990); Bose, y col., Tetrahedron, 48, 751-758 (1992)), mazetramicina (Kuminoto, y col., J. Antibiotics, 33, 665-667 (1980)), neotramicinas A y B (Takeuchi, y col., J. Antibiotics, 29, 93-96 (1976)), porotramicina (Tsunakawa, y col., J. Antibiotics, 41, 1366-1373 (1988)), protracarcina (Shimizu, y col., J. Antibiotics, 29, 2492-2503 (1982); Langley and Thurston, J. Org. Chem., 52, 91-97 (1987)), sibanomicina (DC-102) (Hara, y col., J. Antibiotics, 41, 702-704 (1988); Itoh, y col., J. Antibiotics, 41, 1281-1284 (1988)), sibiromicina (Leber, y col., J. Am. Chem. Soc, 110, 2992-2993 (1988)) y tomamicina (Arima, y col., J. Antibiotics, 25, 437-444 (1972)). Las PBD son de la estructura general: Difieren en el número, tipo y posición de los sustituyentes, tanto en sus anillos A aromáticos como los anillos C pirrólo y en el grado de saturación del anillo C. En el anillo B existen ya sea una imina (N = C) , una carbinolamina (NH-CH(OH)) o carbinolamina metiléter (NH-CH(OMe)) en la posición N10-C11, el cual es el centro electrófilo responsable para alquilar ADN. La totalidad de los productos naturales conocidos tienen una configuración (S) en la posición Clla quiral la cual les proporciona un giro dextrógiro (mano derecha) cuando se observan desde el anillo C hacia el anillo A. Esto les proporciona una forma tridimensional apropiada para isohelicidad con el surco menor de la forma B de ADN, lo que genera un ajuste estrecho en el sitio de unión (Kohn, In Antibiotics III. Springer-Verlag, New York, pp. 3-11 (1975); Hurley and Needham-VanDevanter, Acc. Chem. Res., 19, 230-237 (1986)). La capacidad de las PBD para formar un aducto en el surco menor, les permite interferir con el procesamiento de ADN y por lo tanto su uso como agentes antitumorales .
La actividad biológica de estas moléculas se puede potenciar al unir dos unidades PBD juntas a través de sus funcionalidades C8/C -hidroxilo vía un engarce alquileno flexible (Bose, D. S., y col., J. Am. Chem. Soc, 114, 4939-4941 (1992); Thurston, D. E . , y col., J. Org. Chem., 61, 8141-8147 (1996)).. Se considera que los dimeros de PBD forman lesiones de ADN selectivas de secuencia tales como el reticulado intercatenario 5' -Pu-GATC-Py-3' palindrómico (Smellie, M . , y col., Biochemistry, 42, 8232-8239 (2003); Martin, C, y col., Biochemistry, 44, 4135-4147), el cual se considera que es el responsable principal de su actividad biológica. Un ejemplo de un dimero PBD es SG2000 (SJG-136) : (Gregson, S., y col., J. Med. Chem., 44, 737-748 (2001); Alley, M. C, y col., Cáncer Research, 64, 6700-6706 (2004); Hartley, J. A., y col., Cáncer Research, 64, 6693-6699 (2004) ) .
Debido a la manera en la cual estos compuestos altamente potentes actúan en reticular ADN, los dímeros de PBD se han elaborado simétricamente, es decir ambos monómeros del dimero son iguales. Esta ruta sintética proporciona una síntesis directa, ya sea al construir el resto dimérico de PBD simultáneamente que tienen forma da antemano el enlace dimérico o al reaccionar porciones monoméricas de PBD construidas de antemano con el grupo de engarce dimérico. Estos enfoques sintéticos han limitado las opciones para la preparación de conjugados diana que contengan PBD. Debido a la potencia observada de los dímeros de PBD, sin embargo, existe una necesidad de dímeros de PBD que puedan conjugarse con los agentes de dirección para su uso en terapia dirigida.
Sumario de la invención La presente invención se refiere a Conjugados que comprenden dímeros de PBD enlazados a un agente de dirección, en los que un monómero de PBD tiene un sustituyente en la posición C2 que proporciona un anclaje para enlazar el compuesto con el agente de dirección. La presente invención también se refiere a Conjugados que comprenden dimeros de PBD conjugados con un agente de dirección, en el que los monómeros de PBD del dimero son diferentes. Uno de los monómeros de PBD tiene un sustituyente en la posición C2 que proporciona un anclaje para enlazar el compuesto con el agente de dirección. Los Conjugados descritos en el presente documento tienen actividad citotóxica y/o citostática potente frente a células que expresan una molécula diana, tal como células cancerosas o leucocitos. Estos conjugados muestran buena potencia con toxicidad reducida, en comparación con los medicamentos sin dimero de PBD correspondientes.
En algunas realizaciones, los Conjugados tienen la siguiente fórmula I: L - (LU-D)p (I) en la que L es una unidad de Ligando (es decir, un agente de dirección) , LU es una unidad de Engarce y D es unidad de Fármaco que comprende un dimero de PBD. El subíndice p es un número entero de 1 a 20. Por consiguiente, los Conjugados comprende una unidad de Ligando enlazada covalentemente a al menos unidad de Fármaco mediante una unidad de Engarce. La unidad de Ligando, descrita más en profundidad más adelante, es un agente de dirección que une a una resto diana. La unidad de Ligando puede, por ejemplo, unir específicamente a un componente celular (un Agente de Unión a Célula) o a otras moléculas diana de interés. Por consiguiente, la presente invención también proporciona procedimientos para el tratamiento de, por ejemplo, diversos cánceres y enfermedades autoinmunes. Estos procedimientos abarcan el uso de los Conjugados, en los que la unidad de Ligando es un agente de dirección que une específicamente a una molécula diana. La unidad de Ligando puede ser, por ejemplo, una proteína, polipéptido o péptido, tal como un anticuerpo, un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo u otro agente de unión, tal como una proteína de fusión Fe.
En un primer aspecto, los Conjugados comprenden un Cojugado de fórmula I (anterior) , en los que la unidad de Fármaco comprende un dímero de PBD de la siguiente fórmula en la que R2 es de la fórmula III: Q Q ni en la que A es un grupo arilo C5-7, X es un grupo que puede activarse para la conjugación a la unidad de Engarce, en la que X se selecciona entre el grupo que comprende: -0-, -S-, -C(0)0-, -C(0)-, -NHC(O)- y -N(RN)-, en el que RN se selecciona entre el grupo que comprende H, alquilo C1-4 y (C2H40) raCH3, en el que m es de 1 a 3, y: (i) Q1 es un enlace sencillo y Q2 se selecciona de un enlace sencillo y -Z-(CH2)n-í en donde Z se selecciona de un enlace sencillo, 0, S y NH y es de 1 a 3; o (ii) Q1 es -CH=CH-, y Q2 es un enlace sencillo; R12 es un grupo arilo de 5 a 10 átomos de carbono, opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes que se seleccionan del grupo que comprende: halo, nitro, ciano, éter, alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, heterociclilo de 3 a 1 átomos de carbono y bis-oxi-quileno de 1 a 3 átomos de carbono; R6 y R9 se seleccionan independientemente de H, R, OH, 0R, SH, SR, NH2, NHR, NRR' , nitro, Me3Sn y halo; en donde R y R' se seleccionan independientemente de alquilo de 1 a 12 átomos de carbono opcionalmente sustituido, heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono opcionalmente sustituido y grupos arilo de 5 a 20 átomos de carbono opcionalmente sustituidos; R7 se selecciona de H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NHRR' , nitro e3Sn y halo; ya sea: (a) R10 es H, y R11 es OH o 0RA, en donde RA es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; (b) R10 y R11 forman un enlace doble nitrógeno-carbono entre los átomos de nitrógeno y carbono a los cuales están unidos; o (c) R10 es H y R11 es SOzM, en donde z es 2 ó 3 y M es un catión monovalente farmacéuticamente aceptable; R" es un grupo alquileno de 3 a 12 átomos de carbono, cadena la cual puede estar interrumpida por uno o más heteroátomos , por ejemplo O, S, NRN2 (en donde RN2 es H o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono) y/o anillos aromáticos, por ejemplo benceno o piridina; Y e Y' se seleccionan de 0, S, o NH; R6' , R7' , R9' se seleccionan de los mismos grupos que R6, R7 y R9, respectivamente, y R10' y R11' son iguales que R10 y R11, en donde, si R11 y R11' son S0ZM, M puede representar un catión divalente farmacéuticamente aceptable .
En un segundo aspecto, el uso del conjugado de fórmula i se proporciona para la fabricación de un medicamento para tratar una enfermedad proliferativa . en un tercer aspecto relacionado, el uso del conjugado de fórmula i se proporciona para el tratamiento de una enfermedad proliferativa o una enfermedad autoinmune.
Breve descripción de las Figuras Las Figuras 1 a 6 muestran el efecto de conjugados de la presente invención en tumores.
La figura 1, se refiere a una gráfica que muestra los resultados de un estudio de pérdida de peso, usando CaclO val-alaSG3132 (2) .
La figura 2, se refiere a una gráfica que muestra los resultados de un estudio de pérdida de peso usando hlF6 val-alaSG3132 (2) .
La figura 3, se refiere a una gráfica que muestra los resultados de un estudio de tratamiento usando un conjugado hlF6-val-ala-SG3131.
La figura 4, se refiere a una gráfica que muestra los resultados de un estudio de tratamiento usando un conjugado hlF6-val-ala-SG3132 (2) .
La figura 5, se refiere a una gráfica que muestra los resultados de un estudio de tratamiento usando un anticuerpo de dos cargas hlF6d unido al compuesto 38 (hlF6d-38) . Actividad de hlF6d-38 ADC en ratones atimicos portadores de tumores Cakil subcutáneos.
La figura 6, se refiere a una gráfica que muestra los resultados de un estudio de tratamiento usando un anticuerpo hlF6d de dos cargas unido al compuesto 38 (hlF6d-38) . Actividad de hlF6d-38 ADC en ratones atimicos portadores de tumores 786-0 subcutáneos.
Descripción detallada de la invención Una persona con habilidad habitual en el ámbito será capaz fácilmente de determinar si un conjugado de candidato trata o no una afección proliferativa para algún tipo de célula particular. Por ejemplo, los análisis los cuales se pueden utilizar convenientemente para determinar la actividad proporcionada por un compuesto particular se describen en los ejemplos siguientes.
El término "enfermedad proliferativa" se relaciona con una proliferación celular no deseada o no controlada de células excesivas o anormales en lo cual no es deseado, tal como crecimiento neoplásico o hiperplásico in vitro o in vivo .
Los ejemplos de afecciones proliferativas incluyen, pero no se limitan a proliferación celular benigna, premaligna y maligna que incluyen pero que no se limitan a neoplasmas y tumores (por ejemplo histocitoma, glioma, astrocioma, osteoma), canceres (por ejemplo cáncer de pulmón, cáncer de pulmón microcitico, cáncer gastrointestinal, cáncer de vejiga, cáncer de colon, carcinoma de mama, carcinoma ovárico, cáncer de próstata, cáncer testicular, cáncer de hígado, cáncer de riñon, cáncer de vejiga, cáncer de páncreas, cáncer cerebral, sarcoma, osteosarcoma, sarcoma de Kaposi, melanoma) , leucemias, psoriasis, enfermedades óseas, trastornos fibroproliferativos (por ejemplo de tejidos conectivos) y ateroesclerosis . Otros cánceres de interés incluyen, pero no se limitan a, hematológico y subtipos, tales como DLBCL, zona marginal, zona del manto y folicular, linfoma de Hodgkin, LMA y otros cánceres de origen de células B o T.
Ejemplos de enfermedades autoinmunitarias incluyen los siguientes: Artritis reumatoide, enfermedades autoinmunitarias desmielinizantes (por ejemplo, esclerosis múltiple, encefalomielitis alérgica) , artritis psoriásica, oftalmopatía endocrina, uveoretinitis, lupus eritematoso sistémico, miastenia gravis, enfermedad de Graves, glomerulonefritis , trastorno autoinmunitario hepatológico, enfermedad inflamatoria intestinal (por ejemplo, enfermedad de Crohn) , anafilaxia, reacción alérgica, síndrome de Sjógren, diabetes mellitus de tipo I, cirrosis biliar primaria, granulomatosis de Wegener, fibromialgia, polimiositis , dermatomiositis, insuficiencia endocrina múltiple, síndrome de Schmidt, uveítis autoinmunitaria, enfermedad de Addison, adrenalitis, tiroiditis, tiroiditis de Hashimoto, enfermedad tiroidea autoinmunitaria, anemia perniciosa, atrofia gástrica, hepatitis crónica, hepatitis lúpica, aterosclerosis, lupus eritematoso cutáneo subagudo, hipoparatiroidismo, síndrome de Dressler, trombocitopenia autoinmunitaria, púrpura trombocitopénica idiopática, anemia hemolítica, pénfigo vulgar, pénfigo, dermatitis herpetiforme, alopecia areata, penfigoide, esclerodermia, esclerosis sistémica progresiva, síndrome de CREST (calcinosis, fenómeno de Raynaud, dismotilidad esofágica, esclerodactilia y telangiectasia) , infertilidad autoinmunitaria de sexo masculino y femenino, espondilitis anquilosante, colitis ulcerosa, enfermedad mixta del tejido conectivo, poliarteritis nodosa, vasculitis necrotizante sistémica, dermatitis atópica, rinitis atópica, síndrome de Goodpasture, enfermedad de Chagas, sarcoidosis, fiebre reumática, asma, aborto recurrente, síndrome antifosfolípidos, pulmón del granjero, eritema multiforme, síndrome poscardiotomía, síndrome de Cushing, hepatitis activa crónica autoinmunitaria, pulmón del cuidador de aves, necrólisis epidérmica tóxica, síndrome de Alport alveolitis, alveolitis alérgica, alveolitis fibrosante, enfermedad pulmonar intersticial, eritema nodoso, pioderma gangrenoso, reacción a la transfusión, arteritis de Takayasu, polimialgia reumática, arteritis temporal, esquistosomiasis, arteritis de células gigantes, ascariasis, aspergilosis, síndrome de Sampter, eccema, granulomatosis linfomatoide, enfermedad de Behcet, síndrome de Caplan, enfermedad de Kawasaki, dengue, encefalomielitis, endocarditis, fibrosis endomiocárdica, endoftalmitis, eritema elevado y persistente, psoriasis, eritroblastosis fetal, fascitis eosinófila, síndrome de Shulman, síndrome de Felty, filariasis, ciclitis, ciclitis crónica, ciclitis heterocrónica, ciclitis de Fuchs, nefropatía de IgA, púrpura de Henoch-Schonlein, enfermedad del injerto contra el huésped, rechazo de transplante, miocardiopatía, síndrome de Eaton-Lambert, policondritis recidivante, crioglobulinemia, macroglobulemia de Waldenstrom, síndrome de Evan e insuficiencia gonadal autoinmunitaria .
En algunas realizaciones, la enfermedad autoinmunitaria es un trastorno de los linfocitos B (p. ej . , lupus eritematoso sistémico, síndrome de Goodpasture, artritis reumatoide y diabetes de tipo 1), linfocitos Thl (por ejemplo, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, psoriasis, síndrome de Sjogren, tiroiditis de Hashimoto, enfermedad de Graves, cirrosis biliar primaria, granulomatosis de Wegener, tuberculosis, o enfermedad del injerto contra el huésped, o de linfocitos Th2 (por ejemplo, dermatitis atópica, lupus eritematoso sistémico, asma atópica, rinoconjuntivitis, rinitis alérgica, síndrome de Omenn, esclerosis múltiple o enfermedad del injerto contra el huésped crónica) . En general, los trastornos que implican células dendriticas incluyen trastornos de linfocitos Thl o de linfocitos Th2. En algunas realizaciones, el trastorno inmunitario es un trastorno inmunitario mediado por los linfocitos T.
Un cuarto aspecto de la presente invención comprende un procedimiento de fabricación de Conjugados de fórmula I.
Los compuestos de PBD diméricos para su uso en la presente invención se fabrican por estrategias diferentes a las que se han empleado anteriormente en la fabricación de compuestos de PBD diméricos simétricos. En particular, los inventores de la presente invención han desarrollado un procedimiento que implica añadir cada sustituyente arilo en C2 a un núcleo dimérico de PBD simétrico en etapas de procedimiento separadas. Por consiguiente, un sexto aspecto de la presente invención proporciona un procedimiento de fabricación de un Conjugado de fórmula I, que comprende al menos una de las etapas de procedimiento descritas en el presente documento.
Definiciones Cuando se usa un nombre comercial en el presente documento, la referencia al nombre comercial también se refiere a la formulación del producto, al fármaco genérico y al principio o principios farmacéuticamente activos del producto del nombre comercial, a menos que se indique otra cosa por contexto.
Agente de Unión y Agente de Dirección Las expresiones "agente de unión" y "agente de dirección", como se usan en el presente documento para referirse a una molécula, por ejemplo, proteína, polipéptido o péptido, que unen a una molécula diana. Los ejemplos pueden incluir un anticuerpo de longitud complete, un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo de longitud completa, otro agente (proteína, polipéptido o péptido) que incluye un región de anticuerpo variable de cadena pesada y/o ligera que une específicamente a la molécula diana o una proteína de fusión Fe que comprende un dominio extracelular de una proteína, péptido polipéptido que une que une a la molécula diana y que está unido a una región de Fe, dominio o porción de la misma, de un anticuerpo.
Uniones específicas Las expresiones "que se une específicamente" y "unión específica" se refieren a la unión de un anticuerpo u otra proteína, polipéptido o péptido a una molécula predeterminada (por ejemplo, un antígeno) . Típicamente, el anticuerpo u otra molécula une con una afinidad de al menos aproximadamente 1 x 107 M"1, y une a la molécula predeterminada con una afinidad que es al menos dos veces superior que su afinidad para la unión a una molécula no especifica (por ejemplo, BSA, caseína) en vez de la molécula predeterminada o una molécula estrechamente relacionada .
Cationes farmacéuticamente aceptables Los ejemplos de cationes monovalentes y divalentes farmacéuticamente aceptables se describen en Berge y col., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977), la cual se incorpora en la presente como referencia.
El catión farmacéuticamente aceptable puede ser inorgánico u orgánico.
Los ejemplos de cationes inorgánicos monovalentes farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a iones de metal alcalino tales como Na+ y K+. Los ejemplos de cationes inorgánicos divalentes farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a cationes alcalinotérreos tales como Ca2+ y Mg2+. Los ejemplos de cationes orgánicos farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a ión amonio (es decir, NH4+) e iones amonio sustituidos (por ejemplo NH3R+, NH2R2+, HR3+, NR4+) . Los ejemplos de algunos iones amonio sustituidos adecuados son aquellos derivados de: etilamina, dietilamina, diciclohexilamina, trietilamina, butilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina, bencilamina, fenilbencilamina, colina, meglumina, y trometamina, así como aminoácidos tales como lisina y arginina. Un ejemplo de un ión amonio cuaternario común es (CH3)4+.
Sustituyentes La frase "opcionalmente sustituido", como se utiliza en la presente, se relaciona con un grupo original el cual puede estar no sustituido o el cual puede estar sustituido.
A menos que se especifique en otro sentido, el término "sustituido", como se utiliza en la presente, se relaciona con un grupo original el cual presenta uno o más sustituyentes. El término "sustituyente" se utiliza en la presente en el sentido convencional y se refiere a una porción química la cual está unida covalentemente, o, si es apropiado, está fusionada a un grupo original. Son bien conocidos una amplia variedad de sustituyentes y también son bien conocidos los procedimientos para su formación e introducción en una diversidad de grupos originales.
Los ejemplos de sustituyentes se describen con mayor detalle en lo siguiente.
Alquilo de 1 a 12 átomos de carbono: el término "alquilo de 1 a 12 átomos de carbono" como se utiliza en la presente, se relaciona con una porción monovalente que se obtiene al separar un átomo de hidrógeno de un átomo de carbono de un compuesto hidrocarburo que tiene de 1 a 12 átomos de carbono, el cual puede ser alifático o alicíclico y el cual puede estar saturado o insaturado (por ejemplo parcialmente insaturado, completamente insaturado) . De esta manera, el término "alquilo" incluye las subclases alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, etc., descritas más adelante.
Los ejemplos de grupos alquilo saturados incluyen, pero no se limitan a metilo (Ci) , etilo (C2) , propilo (C3) , butilo (C4) , pentilo (C5) , hexilo (Ce) y heptilo (C7) .
Los ejemplos de grupos alquilo lineales saturados incluyen, pero no se limitan a metilo (Cj.) , etilo (C2) , n-propilo (C3) , n-butilo (C4) , n-pentilo (C5) , n-hexilo (Ce) y n-heptilo (C7) .
Los ejemplos de grupos alquilo ramificados saturados incluyen isopropilo (C3) , isobutilo (C4) , sec-butilo (C4), terbutilo (C4) , isopentilo (C¾) y neopentilo (C5) .
Alquenilo de 2 a 12 átomos de carbono: el término "alquenilo de 2 a 12 átomos de carbono", como se utiliza en la presente, se relaciona con un grupo alquilo que tiene uno o más enlace dobles carbono-carbono.
Los ejemplos de grupos alquenilo insaturados incluyen, pero no se limitan a etenilo (vinilo, -CH=CH2) , 1-propenilo (-CH=CH-CH3) , 2-propenilo (alilo, -CH-CH=CH2) , isopropenilo ( 1-metilvinilo, -C (CH3) =CH2) , butenilo (C4) , pentenilo (C5) y hexenilo (C5) .
Alquinilo de 2 a 12 átomos de carbono: El término "alquinilo de 2 a 12 átomos de carbono", como se utiliza en la presente, se relaciona con un grupo alquilo que tiene uno o más enlaces triples carbono-carbono.
Los ejemplos de grupos alquinilo insaturados incluyen, pero no se limitan a etinilo (-C=CH) y 2-propinilo (propargilo, -CH2C=CH) .
Cicloalquilo de 3 a 12 átomos de carbono: El término "cicloalquilo de 3 a 12 átomos de carbono", como se utiliza en la presente, se relaciona con un grupo alquilo el cual también es un grupo ciclilo; es decir, una porción monovalente obtenida al separar un átomo de hidrógeno de un átomo de anillo aliciclico de un compuesto hidrocarburo cíclico (carbocíclico) , porción la cual tiene de 3 a 7 átomos de carbono, que incluye 3 a 7 átomos en el anillo.
Los ejemplos de grupos cicloalquilo incluyen, pero no se limitan a aquellos derivados de: compuestos de hidrocarburo monociclico saturado: ciclopropano (C3) , ciclobutano (C4), ciclopentano (C5) , ciclohexano (Ce) , cicloheptano (C7) , metilciclopropano (C4) , dimetilciclopropano (C5) , metilciclobutano (C5) , dimetilciclobutano (C4) , metilciclopentano (Cs) , dimetilciclopentano (C7) y metilciclohexano (C/) ; compuestos de hidrocarburo monociclico insaturado: ciclopropeno (C3) , ciclobuteno (Cj) , ciclopenteno (C5) , ciclohexeno (C6) , metilciclopropeno (C4) , dimetilciclopropeno (C5) , metilciclobuteno (C5) , dimetilciclobuteno {C$) , metilciclopenteno (C6> , dimetilciclopenteno (C7) y metilciclohexeno (C7) ; y compuestos de hidrocarburo policiclico saturado: norcarano (C7) , norpinano (C7) nornornano (C7) .
Heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono: El término "heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono" como se utiliza en la presente, se relaciona con una porción monovalente que se obtiene al separar un átomo de hidrógeno de un átomo de anillo de un compuesto heterocíclico, porción la cual tiene de 3 a 20 átomos en el anillo, de la cual 1 a 10 son heteroátomos del anillo. Preferentemente, cada anillo tiene de 3 a 7 átomos en el anillo, de los cuales 1 a 4 son heteroátomos del anillo.
En este contexto, los prefijos en inglés (por ejemplo C3-20 (de 3 a 20 átomos de carbono) , C3-7 (de 3 a 7 átomos de carbono), C 5-6 (de 5 a 6 átomos de carbono), etc.) indican el número de átomos en el anillo o el intervalo de números de átomos en el anillo, ya sea átomos de carbono o heteroátomos. Por ejemplo, el término "heterociclilo de 5 a 6 átomos de carbono", como se utiliza en la presente, se relaciona con un grupo heterociclilo que tiene 5 ó 6 átomos en el anillo.
Los ejemplos de grupos heterociclilo monociclicos incluyen, pero no se limitan a aquellos derivados de: i: aziridina (C3) , azetidina (C4) , pirrolidina (tetrahidropirrol) (C5) , pirrolina (por ejemplo 3-pirrolina, 2, 5-dihidropirrol) (C5) , 2H-pirrol ó 3H-pirrol (isopirrol, isoazol) (C5) , piperidina (Ce) , dihidropridina (Ce) , tetrahidropiridina (C^) , azepina (C7) ; Oí; oxirano (C3) , ozetano (C4) , oxolano (tetrahidrofurano) (C5) , oxol (dihidrofurano) (C5) , oxano (tetrahidropirano) (Ce) , dihidropirano (C6) , pirano (C6) , oxepin (C7) , Si: tiirano (C3) , tietano (C4) , tiolano (tetrahidrotiofeno) (C5) , tiano (tetrahidrotiopirano) (C6) , tiepano (C7) 02 : dioxolano ( C5 ) , dioxano (C6> y dioxepano (C7) ; O3: trioxano (C6) ; N2: imidazolidina (C5) , pirazolidina (diazolidina) (C5) , imidazolina (C5) , pirazolina (dihidropirazol ) (C5) , piperazina Ce) ; 1O1: tetrahidrooxazol (C5) , dihidrooxazol (C5) , tetrahidroisoxazol (C5), dihidroisoxazol (C5) , morfolina (C6) , tetrahidrooxazina (C6) , dihidrooxazina (C ) , oxazina (C6) ; N1S1: tiazolina (C5) , tiazolidina (C5) , tiomorfolina (C6) ; 2Oi : oxadiazina (Ce) ; O1S1: oxatiol (C5) y oxatiano (tioxano) (C6) ; y iOiSi: oxatiazina (?T) .
Los ejemplos de grupos heterociclilo monocíclicos sustituidos incluyen aquellos derivados de sacáridos, en forma cíclica, por ejemplo furanosas (C5) tales como arabinofuranosa, lixofuranosa, ribofuranosa y silofuranosa, y piranosas {Ce) tales como alopiranosa, altropiranosa, glucopiranosa, manopiranosa, gulopiranosa, idopiranosa, galactopiranosa y talopiranosa .
Arilo de 5 a 20 átomos de carbono: El término "arilo de 5 a 20 átomos de carbono", como se utiliza en la presente, pertenece a una porción monovalente que se obtiene al separar un átomo de hidrógeno de un átomo de anillo aromático de un compuesto aromático, porción la cual tiene de 3 a 20 átomos en el anillo. Preferentemente, cada anillo tiene de 5 a 7 átomos en el anillo.
En este contexto, los prefijos (por ejemplo C3-20 (de 3 a 20 átomos de carbono) , C5-7 (de 5 a 7 átomos de carbono) , C5-6 (de 5 a 6 átomos de carbono), etc.), indican el número de átomos del anillo o el intervalo de número de átomos en el anillo, ya sea átomos de carbono o heteroátomos . Por ejemplo, el término "arilo de 5 a 6 átomos de carbono", como se utiliza en la presente, se relaciona con un grupo arilo que tiene 5 ó 6 átomos en el anillo.
Los átomos en el anillo pueden ser todos átomos de carbono, tal como en "grupos carboarilo" .
Los ejemplos de grupos carboarilo incluyen, pero no se limitan a aquellos derivados de benceno (es decir, fenilo) (C ) , naftaleno (Cío) > azuleno (C10) , antraceno (Ci4) , fenantreno (C14), naftaceno (Cíe) y pireno (C ) .
Los ejemplos de grupos arilo los cuales comprenden anillos fusionados, por lo menos uno de los cuales es un anillo aromático incluyen, pero no se limitan a grupos derivados de indano (por ejemplo 2 , 3-dihidro-lH-indeno) (Cg) , indeno (Cg) , isoindeno (Cg) , tetralina (1,2,3,4-tetrahidronaftaleno (Cío) acenafteno (C12) , fluoreno (Ci3) , fenaleno (C13) , acefenantreno (C15) y aceantreno (Ci6) · De manera alternativa, los átomos en el anillo pueden incluir uno o más heteroátomos , como en los "grupos heteroarilo" . Los ejemplos de grupos heteroarilo monociclicos incluyen, pero no se limitan a aquellos derivados de: Ni: pirrol (azol) (C5), piridina (azina) (Ce) ; Oí: furano (oxol) (C5) ; Si: tiofeno (tiol) (C5) ; N1O1: oxazol (C5) , isoxazol (C5) , isoxazina (Cg) ; N2Oi . oxadiazol (furazan) (C5) ; 3O1: oxatriazol (C5) ; N1S1: tiazol (C5) , isotiazol (C5) ; N2: imidazol (1,3-diazol) (C5) , pirazol (1,2-diazol) (C5) , piridazina (1, 2-diazina) (C6) , pirimidina (1,3-diazina) (Ce) , (por ejemplo citosina, timina, uracilo) , pirazina (1, 4-diazina) (Ce); N3: tiazol (C5) , triazina (C6) ; y N4: tetrazol (C5) .
Los ejemplos de heteroarilo los cuales comprenden anillos fusionados incluyen, pero no se limitan a: 9 átomos de carbono (Cg) (con 2 anillos fusionados) derivados de benzofurano (Oí) , isobenzofurano (Oí) , indol (Ni) , isoindol (Ni) , indolizina (Ni) , indolina (Ni) , isoindolina (Ni) , purina (N4) (por ejemplo adenina, guanina) , bencimidazol (N2) / indazol (N2) , benzoxazol (N1O1) , benzisoxazol (N1O1) , benzodioxol (02) , benzofurazano (N2Oi) , benzotriazol (N3) , benzotiofurano (Si) , benzotiazol ( 1S1) , benzotiadiazol (N2S) ; 10 átomos de carbono (Cío) (con 2 anillos fusionados) derivados de cromeno (Oí) , isocromeno (Oí) , cromano (??) , isocromano (Oí) , benzodioxano (02) , quinolina (Ni) , isoquinolina (Ni), quinolizina (Ni), benzoxazina (NJ I) , benzodiazina (N2) , piridopiridina (N2) , quinoxalina (N2) , quinazolina (N2) ; cinolina (N2) , ftalazina (N2) , naftiridina (N2) , pteridina (N4) ; 11 átomos de carbono (Cu) (con 2 anillos fusionados) derivados de benzodiazepina (N2) ; 13 átomos de carbono (C13) (con 3 anillos fusionados) derivados de carbazol (Ni) , dibenzofurano (Oí) , dibenzotiofeno (Si) , carbolina ( 2) , perimidina (N2) , piridoindol (N2) ; y 14 átomos de carbono (C14) (con 3 anillos fusionados) derivados de acridina (??) , xanteno (Oí) , tioxanteno (Si) , oxantreno (02) , fenoxatiina (O1S1) , fenazina (N2) , fenoxazina (????) , fenotiazina ( 1S1) , tiantreno (S2) , fenantridina (Ni) , fenantrolina (N2) , fenazina (N2) .
Los grupos anteriores, ya sea solos o parte de otro sustituyente por si mismos opcionalmente pueden estar sustituidos con uno o más grupos que se seleccionan de si mismos y los sustituyentes adicionales que se incluyen en lo siguiente.
Halo: -F, -Cl, -Br y -I.
Hidroxi: -OH. Éter: -0R, en donde R es un sustituyente éter, por ejemplo un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono (también denominado como grupo alcoxi de 1 a 7 átomos de carbono, descrito más adelante) , un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono (también denominado como un grupo heterocicliloxi de 3 a 20 átomos de carbono) o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono (también denominado como un grupo ariloxi de 5 a 20 átomos de carbono) , preferentemente un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono .
Alcoxi: -OR, en donde R es un grupo alquilo, por ejemplo un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos alcoxi de 1 a 7 átomos de carbono incluyen, pero no se limitan a -OMe (metoxi) , -OEt (etoxi) , -O(nPr) (n-propoxi) , -O(iPr) (isopropoxi) , -O(nBu) (n-butoxi) , -O(sBu) (sec-butoxi) , -O(iBu) (isobutoxi) y -O(tBu) (tercbutoxi) .
Acetal: -CHÍOR1) (OR2) en donde R1 y R2 son independientemente sustituyentes acetal, por ejemplo un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono o, en el caso de un grupo acetal "cíclico", R1 y R2, tomados junto con dos átomos de oxígeno a los cuales están unidos y los átomos de carbono a los cuales están unidos, forman un anillo heterocíclico que tiene de 4 a 8 átomos en el anillo. Los ejemplos de grupos acetal incluyen, pero no se limitan a -CH(OMe)2, -CH(OEt)2 y -CH (OMe) (OEt) .
Hemiacetal: -CH (OH) (OR1) , en donde R1 es un sustituyente hemiacetal, por ejemplo un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos hemiacetal incluyen, pero no se limitan a -CH(OH(OMe) y -CH(OH) (OEt).
Cetal: -CRfOR1) (OR2) , en donde R1 y R2 son como se definen para los acétales y R es un sustituyente cetal diferente de hidrógeno, por ejemplo un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos cetal incluyen, pero no se limitan a -C (Me) (OMe) 2, -C (Me) (OEt) 2, -C (Me) (OMe) (OEt) , -C(Et) (OMe) i, -C(Et) (OEt)2 y -C(Et) (OMe) (OEt) .
Hemicetal: -CRfOHJOR1), en donde R1 es como se define para hemiacetales y R es un sustituyente hemicetal diferente de hidrógeno, por ejemplo un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos hemiacetal incluyen, pero no se limitan a -C (Me) (OH) (OMe) 2, -C (Et) (OH) (OMe) , -C(Me) (OH) (OEt) y -C(Et) (OH) (OEt) .
Oxo (ceto, -ona) : =0.
Tiona (tiocetona) : =S .
Imino (imina) : = NR, en donde R es un sustituyente imino, por ejemplo hidrógeno, un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente hidrógeno o un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos éster incluyen, pero no se limitan a =NH, =NMe, =NEt y =NPh.
Formilo (carbaldehído, carboxaldehido) : -C(=0)H.
Acilo (ceto) : -C(=0)R, en donde R es un sustituyente acilo, por ejemplo un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono (también denominado como alquiladlo de 1 a 7 átomos de carbono o alcanoilo de 1 a 7 átomos de carbono) , un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono (también denominado como heterociclilacilo de 3 a 20 átomos de carbono) o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono (también denominado como arilacilo de 5 a 20 átomos de carbono) , preferentemente un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos acilo incluyen, pero no se limitan a -C(=0)CH3 (acetilo) , -C(=0)CH2CH3 (propionilo) , -C (=o) C (CH3) 3 (t-butirilo) y -C(=0)Ph (benzoilo, fenona) .
Carboxi (ácido carboxilico) : -C(=0)OH.
Tiocarboxi (ácido tiocarboxilico) : -C(=S)SH.
Tiolocarboxi (ácido tiolocarboxilico) : -C(=0)SH.
Tionocarboxi (ácido tionocarboxilico) : -C(=S)OH. Ácido Imidico: -C(=NH)OH. Ácido Hidroxámico: -C(=NOH)OH. Éster (carboxilato, éster de ácido carboxilico, oxicarbonilo) : -C(=0)0R, en donde R es un sustituyente éster, por ejemplo un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos éster incluyen, pero no se limitan a -C(=0)OCH3, -C (=0) OCH2CH3, -C (=0) OC (CH3) 3 y -C(=0)OPh.
Aciloxi (éster inverso): -0C(=0)R, en donde R es un sustituyente aciloxi, por ejemplo un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos aciloxi incluyen, pero no se limitan a -0C(=0)CH3 (acetoxi) , -OC (=0) CH2CH3, -OC(=0)C(CH3)3, -0C(=0)Ph y -OC (=0)CH2Ph.
Oxicarboiloxi : -0C(=0)0R, en donde R es un sustituyente éster, por ejemplo un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono o un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono, o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos éster incluyen, pero no se limitan a -OC(=0)OCH3, -OC (=0) 0CH2CH3, -OC (=0) OC (CH3) 3 y -OC(=0)OPh.
Amino: -NR1R2, en donde R1 y R2 son independientemente sustituyentes amino, por ejemplo hidrógeno, un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono (también denominado como alquilamino de 1 a 7 átomos de carbono o dialquilamino de 1 a 7 átomos de carbono) , un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente H o un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, o, en el caso de un grupo amino "cíclico", R1 y R2, tomados junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, forman un anillo heterocíclico que tiene 4 a 8 átomos en el anillo. Los grupos amino pueden ser primarios (-NH2) , secundarios (-NHR1) o terciarios (-NHR1R2) y en forma catiónica pueden ser cuaternarios (-+NR1R2R3) . Los ejemplos de grupos amino incluyen, pero no se limitan a -NH2, -NHCH3, -NHC(CH3)2, -N(CH3>2, -N(CH2CH3)2 y -NHPh. Los ejemplos de grupos amino cíclicos incluyen, pero no se limitan a aziridino, azetidino, pirrolidino, piperidino, piperazino, morfolino y tiomorfolino .
Amido (carbamoílo, carbamilo, aminocarbonilo, carboxamida) : -C(=0)NR1R2, en donde R1 y R2 son independientemente sustituyentes amino, como se define para grupos amino. Los ejemplos de grupos amino incluyen, pero no se limitan a -C(=0)NH2, -C(=0)NHCH3, -C (=0) N (CH3) 2, -C(=0)NHCH2CH3, y -C (=0) N (CH2CH3) 2, así como grupos amido en los cuales R1 y R2 junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos forman una estructura heterocíclica como en, por ejemplo, piperidinocarbonilo, morfolinocarbonilo, tiomorfolinocarbonilo y piperazinocarbonilo.
Tioamido (tiocarbamilo) : -C(=S)NR1R2, en donde R1 y R2 son independientemente sustituyentes amino, como se define para grupos amino. Los ejemplos de grupos amido incluyen, pero no se limitan a -C(=S)NH2, -C(=S)NHCH3, -C (=S ) N (CH3) 2 y -C(=S)NHCH2CH3.
Acilamido (acilamino) : -NR1C(=0)R2, en donde R1 es un sustituyente amida, por ejemplo hidrógeno, un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente hidrógeno o un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono y R2 es un sustituyente acilo, por ejemplo, un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente hidrógeno o un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos acilamida incluyen, pero no se limitan a -NHC(=0)CH3, -NHC (=0) CH2CH3 y -NHC(=0)Ph. R1 y R2 juntos pueden formar una estructura cíclica como en, por ejemplo, succinimidilo, maleimidilo y ftalimidilo: succinimidilo maleimidilo ftalimidilo Aminocarboniloxi : -OC (=0) NR1R2, en donde independientemente sustituyentes amino, como se define para grupos amino. Los ejemplos de grupos aminocarboniloxi incluyen, pero no se limitan a: -0C (=0) H2, -OC (=0) NHMe, -0C(=0)NMe2 y -0C(=0)NEt2.
Ureido: -N (R1) CONR2R3 en donde R2 y R3 son independientemente sustituyentes amino, como se define para grupos amino, y R1 es un sustituyente ureido, por ejemplo hidrógeno, un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente hidrógeno o un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos ureido incluyen, pero no se limitan a -NHCONH2, -NHCONHMe, -NHCONHEt, -NHC0NMe2, -NHCONEt2, -NMeCONH2, -N eCONHMe , -N eCONHEt, -NMeC0NMe2 y -NMeC0NEt2.
Guanidino: -NH-C (=NH) NH2.
Tetrazolilo: un anillo aromático de cinco miembros que tiene cuatro átomos de nitrógeno y un átomo de carbono, Imino: =NR, en donde R es un sustituyente imino, por ejemplo, por ejemplo, hidrógeno, un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente H o un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos imino incluyen, pero no se limitan a =NH, =NMe y =NEt.
Amidina (amidino) : -C(=NR)NR2, en donde cada R es un sustituyente amidina, por ejemplo hidrógeno, un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente H o un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos amidina incluyen, pero no se limitan a -C(=NH)NH2, -C(=NH)NMe2 y -C(=NMe)NMe2- Nitro: -N02.
Nitroso: -NO.
Azido: -N3.
Ciano (nitrilo, carbonitrilo) : -CN.
Isociano: -NC .
Cianato: -OCN.
Isocianato: -NCO.
Tiociano (tiocianato) : -SCN.
Isotiociano (isotiocianato) : -NCS .
Sulfhidrilo (tiol, mercapto) : -SH.
Tioéter (sulfuro) : -SR, en donde R es un sustituyente tioéter, por ejemplo un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono (también denominado como un grupo alquiltio de 1 a 7 átomos de carbono) , un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos alquiltio de 1 a 7 átomos de carbono incluyen, pero no se limitan a -SCH3 y -SCH2CH3.
Disulfuro: -SS-R, en donde R es un sustituyente disulfuro, por un ejemplo un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono (también denominado en la presente como disulfuro de alquilo de 1 a 7 átomos de carbono) . Los ejemplos de grupos disulfuro de alquilo de 1 a 7 átomos de carbono incluyen pero no se limitan a -SSCH3 y -SSCH2CH3.
Sulfina (sulfinilo, sulfóxido) : -S( 0)R, en donde R es un sustituyente sulfina, por ejemplo un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos sulfina incluyen, pero no se limitan a S( =0)CH3 y -S ( =0) CH2CH3.
Sulfona (sulfonilo) : -S( =0)2R, en donde R es un sustituyente sulfona, por ejemplo un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono que incluye, por ejemplo, un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono fluorado o perfluorado. Los ejemplos de grupos sulfona incluyen, pero no se limitan a -S(=0)2CH3 (metansulfinilo, mesilo) , -S(=0)2CF3 (trifilo), -S (=0) 2CH2CH3 (esilo) , -S(=0)2C4F9 (nonaflilo) , -S (=0) 2CH2CF3 (tresilo) , -S (=0)2CH2CH2NH2 (taurilo) , -S(=0)2Ph (fenilsulfonilo, besilo) , 4-metilfenilsulfonilo (tosilo) , 4-clorofenilsulfonilo (closilo) , 4-bromofenilsulfonilo (brosilo) , 4-nitrofenilo (nosilo) , 2-naftalensulfonato (napsilo) y 5-dimetilamino-naftalen-l-sulfonato (dansilo) . Ácido sulfinico (sulfino) : -S(=0)0H, -S02H. Ácido sulfónico (sulfo) : -S(0)20H, -S03H.
Sulfinato (éster de ácido sulfinico) : -S(=0)0R; en donde R es un sustituyente sulfinato, por ejemplo un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos sulfinato incluyen, pero no se limitan a S(=0)OCH3 (metoxisulfinilo; sulfinato de metilo) y -S (=0) OCH2CH3 (etoxisulfinilo; sulfinato de etilo) .
Sulfonato (éster de ácido sulfónico): -S(=0)20R, en donde R es un sustituyente sulfonato por ejemplo un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos sulfonato incluyen, pero no se limitan a -S(=0)20CH3 (metoxisulfonilo; sulfonato de metilo) y -S (=0) 2OCH2CH3 (etoxisulfonilo; sulfonato de etilo) .
Sulfiniloxi: -OS(=0)R, en donde R es un sustituyente sulfiniloxi, por ejemplo un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos sulfiniloxi incluyen, pero no se limitan a 0S(=0)CH3 y -OS (=0) CH2CH3 - Sulfoniloxi: -0S(=0)2 , en donde R es un sustituyente sulfoniloxi, por ejemplo un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos sulfoniloxi incluyen, pero no se limitan a -OS(=0)2CH3 (mesilato) y -OS (=0) 2CH2CH3 (esilato) .
Sulfato: -0S(=0)20R: en donde R es un sustituyente sulfato, por ejemplo un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos sulfato incluyen, pero no se limitan a -OS(=0)2OCH3 y -SO (=0) 2OCH2CH3.
Sulfamilo (sulfamoilo; amida de ácido sulfinico; sulfinamida) : -S (=0) NR^-R2, en donde R1 y R2 son independientemente sustituyentes amino, como se define para grupos amino. Los ejemplos de grupos sulfamilo incluyen, pero no se limitan a -S(=0)NH2, -S (=0) H (CH3) , -S(=0)N(CH3)2, -S (=0)NH(CH2CH3) , -S (=0) N (CH2CH3) 2 y -S (=0)NHPh.
Sulfonamido (sulfinamoilo; amida de ácido sulfónico; sulfonamida) : -S (=0) 2NR1R2, en donde R1 y R2 son independientemente sustituyentes amino, como se define para grupos amino. Los ejemplos de grupos sulfonamido incluyen, pero no se limitan a -S(=0)2NH2, -S (=0) 2NH (CH3) , -S(=0)2N(CH3)2, -S (=0)2NH(CH2CH3) , -S (=0) 2N (CH2CH3) 2 y -S (=0) 2NHPh.
Sulfamino: -NR1S (=0) 20H, en donde R1 es un sustituyente amino, como se define para grupos amino. Los ejemplos de grupos sulfamino incluyen, pero no se limitan a -NHS(=0)20H y -N (CH3) S (=0) 20H.
Sulfonamino: -NR1S(=0)2R, en donde R1 es un sustituyente amino, como se define para grupos amino y R es un sustituyente sulfonamino, por ejemplo un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos sulfonamino incluyen, pero no se limitan a -NHS(=0)2CH3 y -N (CH3) S (=0) 2C6H5.
Sulfinamino: -NR1S(=0)R, en donde R1 es un sustituyente amino, como se define para grupos amino y R es un sustituyente sulfinamino, por ejemplo un qrupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos sulfinamino incluyen, pero no se limitan a -NHS(=0)CH3 y -N (CH3) S (=0) C6H5.
Fosfino (fosfina) : -PR2, en donde R1 es un sustituyente fosfino, por ejemplo -H, un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente -H, un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos fosfino incluyen, pero no se limitan a -PH2, -P(CH3)2, -P(CH2CH3)2, -P(t-Bu)2 y -P(Ph)2.
Fosfo: -P(=0)2.
Fosfinilo (óxido de fosfina): -P(=0)R2, R es un sustituyente fosfinilo, por ejemplo un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos fosfinilo incluyen, pero no se limitan a -P (=0) (CH3) 2, -P (=0) (CH2CH3) 2, -P (=0) (t-Bu) 2 y -P(=0) (Ph)2. Ácido fosfónico (fosfono) : -P(=0) (0H)2.
Fosfonato ( fosfonoéster) : -P(=0) (0R)2, en donde R es un sustituyente fosfonato, por ejemplo -H, un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente -H, un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos fosfonato incluyen, pero no se limitan a -P (=0) (0CH3) 2 -P (=0) (OCH2CH3) 2, -P (=0) 0-t-Bu) 2 y -P(=0) (0Ph)2. Ácido fosfórico (fosfonooxi) : -0P (=0) (OH) 2.
Fosfato ( fosfonooxiéster) : -OP (=0) (OR) 2, en donde R es un sustituyente fosfato, por ejemplo -H, un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente -H, un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos fosfato incluyen, pero no se limitan a -OP (=0) (OCH3) 2, -OP (=0) (OCH2CH3) 2, -OP(=0)0-t-Bu)2 y -OP(=0) (OPh)2. Ácido fosforoso: -OP(OH)2.
Fosfito: -OP(OR)2, en donde R es un sustituyente fosfito, por ejemplo -H, un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente -H, un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos fosfito incluyen, pero no se limitan a -OP(OCH3)2, -OP (OCH2CH3) 2, -OP(0-t-Bu)2 y -OP(OPh)2.
Fosforoamidita : -OP (OR1) -NR22, en donde R1 y R2 son sustituyentes fosforoamidita, por ejemplo -H, un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono (opcionalmente sustituido) , un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente -H, un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos fosforoamidita incluyen, pero no se limitan a -OP (OCH2CH3) -N (CH3) 2, -OP (OCH2CH3) -N (i-Pr) 2 y -OP (OCH2CH2CN) -N (i-Pr) 2.
Fosforoamidato: -OP (=0) (OR1) -NR22, en donde R1 y R2 son sustituyentes fosforoamidato, por ejemplo -H, un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono (opcionalmente sustituido) , un grupo heterociclilo de 3 a 20 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono, preferentemente -H, un grupo alquilo de 1 a 7 átomos de carbono o un grupo arilo de 5 a 20 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos fosforoamidato incluyen, pero no se limitan a -OP (=0) (OCH2CH3) -N (CH3) 2, -0P (=0) (OCH2CH3) -N ( i-Pr) 2 y -0P(=0) (OCH2CH2CN) -N (i-Pr)2.
Alquileno Alquileno de 3 a 12 átomos de carbono: El término "alquileno de 3 a 12 átomos de carbono", como se utiliza en la presente, se relaciona con una porción bidentada que se obtiene al separar dos átomos de hidrógeno, ya sea ambos del mismo átomos de carbono o uno de cada uno de dos átomos de carbono diferentes, de un compuesto hidrocarburo que tiene de 3 a 12 átomos de carbono (a menos que se especifique en otro sentido) , el cual puede ser alifático o aliciclico y el cual puede estar saturado, parcialmente insaturado o completamente insaturado. De esta manera, el término "alquileno" incluye las subclases alquenileno, alquinileno, cicloalquileno, etc., descritas más adelante.
Los ejemplos de grupos alquileno de 3 a 12 átomos de carbono saturados lineales incluyen, pero no se limitan a -(CH2)r._ en donde n es un número entero de 3 a 12, por ejemplo, -CH2CH2CH2-propilen (propileno) , -CH2CH2CH2CH2-butilen (butileno) , -CH2CH2CH2CH2CH2-pentilen (pentileno) y -CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-heptilen (heptileno) .
Los ejemplos de grupos alquileno de 3 a 12 átomos de carbono saturados ramificados incluyen, pero no se limitan a -CH(CH3)CH2, -CH (CH3) CH2CH2-, -CH (CH3) CH2CH2CH2- , -CH2CH (CH3)CH2-, -CH2CH(CH3)CH2CH2-/ -CH (CH2CH3) - , -CH2(CH2CH3)CH2- y -CH2CH(CH2CH3) CH2-, Los ejemplos de grupos alquileno de 3 a 12 átomos de carbono insaturados parcialmente lineales (grupos alquenileno de 3 a 12 átomos de carbono y alquinileno) incluyen, pero no se limitan a -CH=CH-CH2-, -CH2-CH=CH2-, -CH=CH-CH2-CH2-, -CH=CH-CH2-CH2-CH2-, -CH=CH-CH=CH-, -CH=CH-CH=CH-CH2-, -CH=CH-CH=CH-CH2-CH2-, -CH=CH-CH2-CH=CH-, -CH=CH-CH2-CH2-CH=CH- y -CH2-C =C-CH2- .
Los ejemplos de grupos alquileno de 3 a 12 átomos de carbono insaturados parcialmente ramificados (grupos alquenileno de 3 a 12 átomos de carbono y alquinileno) incluyen, pero no se limitan a -C(CH3)=CH-, -C (CH3) =CH-CH2-, -CH=CH-CH(CH3) - y -C=C-CH (CH3) - .
Los ejemplos de grupos alquileno de 3 a 12 átomos de carbono saturados aliciclicos (cicloalquilenos de 3 a 12 átomos de carbono) incluyen, pero no se limitan a ciclopentileno (por ejemplo ciclopent-1, 3-ileno) y ciclohexileno (por ejemplo ciclohex-1, 4-ileno) .
Los ejemplos de grupos alquileno de 3 a 12 átomos de carbono parcialmente insaturados aliciclicos (cicloalquilenos de 3 a 12 átomos de carbono) incluyen, pero no se limitan a ciclopentileno (por ejemplo 4-ciclopent-1 , 3-ileno) , ciclohexenileno (por ejemplo 2-ciclohexen-1, -ileno; 3-ciclohexen-l , 2-ileno; 2,5-ciclohexadien-1, 4-ileno) .
Grupo protector de oxígeno: el término "grupo protector de oxígeno" se refiere a una porción a la cual oculta un grupo hidroxi y estos son bien conocidos en el ámbito. Una gran cantidad de grupos adecuados se describen en las páginas 23 a 200 de Greene, T.W. y Wuts, G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, tercera edición, John Wiley & Sons, Inc., 1999, la cual se incorpora en la presente como referencia. Las clases de interés particular incluyen éteres de sililo (por ejemplo TMS, TBDMS) , éteres de metilo sustituidos (por ejemplo THP) y ésteres (por ejemplo acetato.
Grupo protector de nitrógeno carbamato: el término "grupo protector de nitrógeno carbamato" se relaciona con una porción la cual oculta al nitrógeno en el enlace imina y estos son bien conocidos en el ámbito. Estos grupos tienen la siguiente estructura: en donde R' es R como se define en lo anterior. Se describen una gran cantidad de grupos adecuados en las páginas 503 a 549 de Greene, T.W. y Wuts, G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, tercera edición, John Wiley & Sons, Inc., 1999, la cual se incorpora en la presente como referencia .
Grupo protector de nitrógeno hemi-aminal : el término "grupo protector de nitrógeno hemi-aminal" pertenece a un grupo que tiene la siguiente estructura: en donde R' es R como se define en lo anterior. Se describen una gran cantidad de grupos adecuados en las páginas 633 a 647 de grupos protectores de amida de Greene, T.W. y Wuts, G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, tercera edición, John Wiley & Sons, Inc., 1999, la cual se incorpora en la presente como referencia.
Descripción detallada de la invención La presente invención proporciona Conjugados que comprenden un dimero de PBD conectado a una unidad de Ligando mediante une unidad de Engarce . En una realización, la unidad de Engarce incluye una unidad de Extensión (A) , una unidad de Especificidad (L1) y una unidad de Espaciado (L2) . La unidad de Engarce está conectada a un extremo de la unidad de Ligando y en el otro extremo, al compuesto dimérico de PBD.
En un aspecto, dicho Conjugado se muestra a continuación en la fórmula la: L- (A L^-L DIJ (la) en la que: L es la unidad de Ligando ; y L2y- es una unidad de Engarce (LU) , en la que una unidad de Extensión, a es 1 ó 2, una unidad de Especificidad, s es un número entero que varia de 1 a 12, una unidad de Espaciado, y es 0, 1 ó 2; -D es un dimero de PBD; y p es de 1 a 20.
La carga de fármaco está representada por p, el número de moléculas de fármaco por unidad de Ligando (por ejemplo, un anticuerpo) . La carga de fármaco puede variar de 1 a 20 unidades de Fármaco (D) por unidad de Ligando (por ejemplo, Ab o mAb) . Para composiciones, p representa la carga de fármaco media de los Conjugados en la composición y p varia de 1 a 20.
En algunas realizaciones, p es de aproximadamente 1 a aproximadamente 8 unidades de Fármaco por unidad de Ligando. En algunas realizaciones, p es 1. En algunas realizaciones, p es 2. En algunas realizaciones, p es de aproximadamente 2 a aproximadamente 8 unidades de Fármaco por unidad de Ligando. En algunas realizaciones, p es de aproximadamente 2 a aproximadamente 6, de 2 a aproximadamente 5, o de 2 a aproximadamente 4 unidades de Fármaco por unidad de Ligando. En algunas realizaciones, p es aproximadamente 2, aproximadamente 4, aproximadamente 6 o aproximadamente 8 unidades de Fármaco por unidad de Ligando.
El número medio de unidades de Fármaco por unidad de Ligando en una preparación a partir de una reacción de conjugación puede caracterizarse por medios convencionales, tales como espectroscopia de masas, ensayo ELISA, y HPLC. La distribución cuantitativa de Conjugados en términos de p también puede determinarse. En algunos casos, puede conseguirse la separación, purificación y caracterización de Conjugados homogéneos, en los que p es un valor determinado, a partir de Conjugados con otras cargas de fármacos mediante medios, tales como HPLC de fase inversa o electroforesis .
En otro aspecto, dicho Conjugado se muestra a continuación en la fórmula Ib: L1.
I L - (A1.- L2y -D)p (Ib) También se ilustra como: L - (A1.- L2y (- h ) -D)p (Ib) en la que: L es la unidad de Ligando ; y -A1a-L1s (L2y) - es una unidad de Engarce (LU) , en la que : -A1- es una unidad de Extensión enlazada a una unidad de Extensión (L2) , a es 1 ó 2, L1 - es una unidad de Especificidad enlazada a una unidad de Extensión (L2) , s es un número entero que varia de 0 a 12, -L2- es una unidad de Espaciado, y es 0, 1 ó 2; -D es un dimero de PBD; y p es de 1 a 20.
Preferencias Pueden aplicarse las siguientes preferencias a todos los aspectos de la invención como se ha descrito anteriormente, o pueden referirse a un sólo aspecto. Las preferencias pueden combinarse entre si en cualquier combinación .
En una realización, el Conjugado tiene la fórmula: L- (A L L D)? en la que L, A1, a, L1, s, L2, D y p son como se han descrito anteriormente.
En una realización, la unidad de Ligando (L) es un Agente de Unión a Célula (CBA) que se une específicamente a la molécula diana en la superficie de la célula diana. Una fórmula ejemplar se ilustra a continuación: en la que el asterisco indica el punto de unión a la unidad de Fármaco (D) , CBA es el Agente de Unión a Célula, L1 es una unidad de Especificidad, A1 es una unidad de Extensión que conecta L1 al Agente de Unión a Célula, L2 es una unidad de Espaciado, que es un enlace covalente, un grupo autoescindible o junto con -0C(=0)- forma un grupo autoescindible y L2 opcional.
En otra realización, la unidad de Ligando (L) es un Agente de Unión a Célula (CBA) que une específicamente una molécula diana sobre la superficie de la célula diana. Una fórmula ejemplar se ilustra a continuación: CBA - Axa - ? - L2y - * en la que el asterisco indica el punto de unión a la unidad de Fármaco (D) , CBA es el Agente de Unión a Célula, L1 es una unidad de Especificidad, A1 es una unidad de Extensión que conecta L1 al Agente de Unión a Célula, L2 es una unidad de Espaciado que es un enlace covalente o un grupo autoescindible y a as 1 ó 2, s es 0, 1 ó 2, e y es 0 ó 1 ó 2.
En las realizaciones ilustradas anteriormente, L1 puede ser una unidad de Especificidad escindible, y puede denominarse "desencadenante" que cuando se escinde activa un grupo autoescindible (o grupos autoescindibles ) L2, cuando uno o más grupo autoescindibles están presentes. Cuando la unidad de Especificidad L1 se escinde, o el enlace (es decir, el enlace covalente) entre L1 y L2 se escinde, el grupo autoescindible libera la unidad de Fármaco (D) .
En otra realización, la unidad de Ligando (L) es un Agente de Unión a Célula (CBA) que une específicamente a una molécula diana sobre la superficie de la célula diana. Una fórmula ejemplar se ilustra a continuación: L1.
I CBA - Axa - L2y - * en la que el asterisco indica el punto de unión al Fármaco (D) , CBA es el Agente de Unión a Célula, L1 es una unidad de Especificidad conectada a L2, A1 es una unidad de Extensión que conecta L2 al Agente de Unión a Célula, L2 es un grupo autoescindible y a es 1 ó 2, s es 1 ó 2, e y es 1 ó 2.
En las diversas realizaciones que se exponen en el presente documento, la naturaleza de L1 y L2 puede variar ampliamente. Estos grupos se seleccionan en base a sus características, que pueden estar dictadas en parte, por las condiciones en el sitio en el que se libera el conjugado. Cuando la unidad de Especificidad L1 es escindible, la estructura y/o secuencia de L se selecciona de manera que se escinda por la acción de enzimas presentes en el sitio diana (por ejemplo, la célula diana) . También pueden usarse unidades L1 que son escindible por cambios en el pH (por ejemplo, lábil a ácido o base) , temperatura o después de irradiación (por ejemplo, fotolábil) . Las unidades L1 que son escindibles en condiciones de reducción u oxidación también pueden ser útiles en los Conjugados.
En algunas realizaciones, L1 puede comprender un aminoácido o secuencia contigua de aminoácidos. La secuencia de aminoácidos puede ser el sustrato diana para una enzima.
En una realización, L1 es escindible mediante la acción de una enzima. En una realización, la enzima es una esterasa o una peptidasa. Por ejemplo, L1 puede escindirse mediante una proteasa lisosomal, tal como una catepsina.
En una realización, L2 está presente, y junto con -C(=0)0-, forma un grupo autoescindible o grupos autoescindibles . En algunas realizaciones, -C(=0)0- también es un grupo autoescindible.
En una realización, en la que L1 es escindible mediante la acción de una enzima y L2 está presente, la enzima escinde el enlace entre L1 y L2, por lo que el grupo o grupos autoescindibles liberan la unidad de Fármaco.
L1 y L2, cuando están presentes, pueden conectarse mediante un enlace seleccionado entre: -C (=0) H- , -C(=0)0-, -NHC (=0) -, -0C(=0)-, -0C(=0)0-, -NHC (=0) 0-, -0C (=0)NH-, -NHC(=0)NH, y -0- (p un enlace glucosidico) .
Un grupo amino de L1 que conecta a L2 puede estar en el término N de un aminoácido o puede obtenerse a partir de un grupo amino de una cadena lateral de aminoácido, por ejemplo una cadena lateral de aminoácido de lisina.
Un grupo carboxilo L1 que conecta a L2 puede estar en el término C de un aminoácido o puede obtenerse a partir de un grupo carboxilo de una cadena lateral de aminoácido,, por ejemplo una cadena lateral de aminoácido de ácido glutámico .
Un grupo hidroxi de L1 que conecta a L2 puede obtenerse a partir de un grupo hidroxi de una cadena lateral de aminoácido, por ejemplo una cadena lateral de aminoácido de serina .
En una realización, -C(=0)0- y L2 forman juntos el grupo : en el que el asterisco indica el punto de unión a la unidad de Fármaco, la linea ondulada indica el punto de unión al L1, Y es - (H) -, -0-, -C(=0)N(H)- o -C(=0)0- y n es de 0 a 3. El anillo fenileno está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes como se describe en el presente documento.
En una realización, Y es NH.
En una realización, n es 0 ó 1. Preferentemente, n es 0.
Cuando Y es NH y n es 0, el grupo autoescindible puede denominarse un engarce p-aminobencilcarbonilo (PABC) .
El grupo autoescindible permitirá la entrega de la unidad de Fármaco (es decir, el PBD asimétrico) cuando un sitio distante en el engarce se activa, procediendo de la manera que se indica a continuación (para n = 0) : en la que el asterisco indica la unión al Fármaco, L* es la forma activada de la porción restante del engarce y la unidad de Fármaco liberada no se muestra. Estos grupos tienen la ventaja de separar el sitio de activación, del Fármaco .
En otra realización, -C(=0)0- y L2 forman juntos un grupo seleccionado entre: en los que el asterisco, la linea ondulada, Y y n son como se han definido anteriormente. Cada anillo fenileno está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes como se describe en el presente documento. En una realización, el anillo fenileno que tiene el sustituyente Y está opcionalmente sustituido y el anillo fenileno que no tiene el sustituyente Y está sin sustituir.
En otra realización, -C(=0)0- y L2 forman juntos un grupo seleccionado entre: en el que el asterisco, la linea ondulada, Y y n son como se han definido anteriormente, E es 0, S o NR, D es N, CH, o CR, y F es N, CH o CR.
En una realización, D es N.
En una realización, D es CH.
En una realización, E es 0 o S.
En una realización, F es CH.
En una realización preferida, el enlace covalente entre L1 y L2 es un enlace lábil a catepsina (por ejemplo, escindible) .
En una realización, L1 comprende un dipéptido. Los aminoácidos en el dipéptido pueden ser cualquier combinación de aminoácidos naturales y aminoácidos no naturales. En algunas realizaciones, el dipéptido comprende aminoácidos naturales. Cuando el engarce es un engarce lábil a captepsina, el dipéptido está en el sitio de acción para escisión mediada por catepsina. Después, el dipéptido está en un sitio de reconocimiento para catepsina.
En una realización, el grupo -Xi-X2- en el dipéptido, -NH-X1-X2-CO-, se selecciona entre: -Phe-Lys-, -Val-Ala-, -Val-Lys-, -Ala-Lys-, -Val-Cit-, -Phe-Cit-, -Leu-Cit-, -Ile-Cit-, -Phe-Arg- y -Trp-Cit-; cuando Cit es citrulina. En dicho dipéptido, -NH- es el grupo amino de Xi y CO es el grupo carbonilo de X2.
Preferentemente, el grupo -X1-X2- en el dipéptido, -NH-X!-X2-CO- , se selecciona entre: -Phe-Lys-, -Val-Ala-, -Val-Lys-, -Ala-Lys-, y -Val-Cit- .
Más preferentemente, el grupo -Xi~X2- en el dipéptido, -NH-X1-X2-CO-, es -Phe-Lys-, Val-Cit o -Val-Ala-.
Otras combinaciones de dipéptido de interés incluyen: -Gly-Gly-, -Pro-Pro-, y -Val-Glu-.
Pueden usarse otras combinaciones de dipéptido, incluyendo las que se describen por Dubowchik y col., que se incorpora en el presente documento como referencia.
En una realización, la cadena lateral de los aminoácidos se protege químicamente, cuando es adecuado. El grupo protector de la cadena lateral puede ser un grupo como ser un grupo se expone más adelante. Las secuencias de aminoácidos protegidas se pueden escindir mediante enzimas. Por ejemplo, una secuencia dipeptidica que comprende un resto de Lys con la cadena lateral protegida con Boc se puede escindir por catepsina.
Los grupos protectores para las cadenas laterales de aminoácidos se conocen bien en la técnica y se describen en el Novabiochem Catalog. En Protective Groups in Organic Synthesis, Greene and Wuts, se exponen estrategias de grupos protectores adicionales.
A continuación, se muestran posibles grupos protectores de cadena lateral para aquellos aminoácidos que tienen una funcionalidad de cadena lateral reactiva: Arg: Z, Mtr, Tos; Asn : Trt, Xan; Asp: Bzl, t-Bu; Cys : Acm, Bzl, Bzl-OMe, Bzl-Me, Trt; Glu: Bzl, t-Bu; Gln: Trt, Xan; His: Boc, Dnp, Tos, Trt; Lys : Boc, Z-Cl, Fmoc, Z; Ser: Bzl, TBDMS, TBDPS; Thr : Bz; Trp: Boc; Tyr: Bzl, Z, Z-Br.
En una realización, -X2- está conectado directamente a la unidad de Fármaco. En dicha realización, la unidad de Espaciado L2 está presente.
En una realización, el dipéptido se usa junto con un grupo o grupos autoescindibles (la unidad de Espaciado) . El grupo o grupos autoescindibles pueden estar conectados a -X2-.
Cuando un grupo autoescindible está presente, -X2- se conecta directamente al grupo autoescindible. En una realización, -X2- se conecta al grupo Y del grupo autoescindible. Preferentemente, el grupo -X2-CO- se conecta a Y, en el que Y es NH.
-Xi- se conecta directamente a A1. En una realización, -Xi- se conecta directamente a A1. Preferentemente, el grupo NH-Xi- (el término amino de Xi) se conecta a A1. A1 puede comprender la funcionalidad -CO- para formar así un enlace de amida con -Xi~.
En una realización, L1 y L2, junto con -OC(=0)-, comprenden el grupo -Xi-X2-PABC- . El grupo PABC se conecta directamente a la unidad de Fármaco. En un ejemplo, el grupo autoescindible y el dipéptido forman juntos el grupo -Phe-Lys-PABC- , que se ilustra a continuación: en el que el asterisco indica el punto de unión a la unidad de Fármaco y la linea ondulada indica el punto de unión a la porción restante de L1 o el punto de unión a A1' Preferentemente, la linea ondulada indica el punto de unión a A1.
Como alternativa, el grupo autoescindible y el dipéptido forman juntos el grupo -Val-Ala-PABC-, que se ilustra a continuación: en el que el asterisco y la linea ondulada son como se han definido anteriormente.
En otra realización, L1 y L2 junto con -OC(=0)-representan : en las que el asterisco indica el punto de unión a la unidad de Fármaco, la linea ondulada indica el punto de unión a A1, Y es un enlace covalente o un grupo funcional, y E es un grupo que es susceptible de escindirse para activar, por tanto, un grupo autoescindible .
E se selecciona de manera que el grupo sea sensible a escisión, por ejemplo, mediante luz o por la acción de una enzima. E puede ser -N02 o ácido glucuronico (por ejemplo, ácido ß-glucurónico) . El primero puede ser sensible a la acción de una nitrorreductasa, el último a la acción de una ß-glucuronidasa .
El grupo Y puede ser un enlace covalente.
El grupo Y puede ser un grupo funcional seleccionado entre : -C(=0)- -NH- -0- -C (=0)NH-, -C(=0)0-, -NHC (=0) -, -0C(=0) -, -0C(=0)0-, -NHC (=0)0-, -0C(=0)NH-, -NHC (=0) H-, -NHC (=0)NH, -C(=0)NHC(=0)-, so2 y -S-.
El grupo Y es preferentemente -NH-, -CH2-, -O- y -S- .
En algunas realizaciones, L1 y L2 junto con -OC(=0)-representan : en la que el asterisco indica el punto de unión a la unidad de Fármaco, la linea ondulada indica el punto de unión a A, Y es un enlace covalente o un grupo funcional y E es ácido glucurónico (por ejemplo, ácido ß-glucurónico) . Y es preferentemente un grupo funcional seleccionado entre -NH- .
En algunas realizaciones, L1 y L2 representan juntos: en las que el asterisco indica el punto de unión al resto de L2 o la unidad de Fármaco, la linea ondulada indica el punto de unión a A , Y es un enlace covalente o un grupo funcional y E es ácido glucuronico (por ejemplo, ácido ß-glucurónico) . Y es preferentemente un grupo funcional seleccionado entre -NH-, -CH2-, -0- y -S-.
En algunas realizaciones adicionales, Y es un grupo funcional como se ha establecido anteriormente, el grupo funcional está enlazado a un aminoácido y el aminoácido está enlazado a la unidad de Extensión A1. En algunas realizaciones, el aminoácido es ß-alanina. En dicha realización, el aminoácido es una parte considerada de un modo equivalente de la unidad de Extensión.
La unidad de Especificidad L1 y la unidad de Ligando ese conectan indirectamente mediante la unidad de Extensión .
L1 y A1 pueden estar conectados por un enlace seleccionado entre: -C (=0) NH-, -C(=0)0-, -NHC (=0) -, -0C(=0)-, -0C(=0)0-, -NHC (=0) 0-, -0C(=0)NH- y -NHC (=0)NH- .
En una realización, el grupo A1 es: en la que el asterisco indica el punto de unión a la línea ondulada indica el punto de unión a la unidad Ligando y n es de 0 a 6. En una realización, n es 5.
En una realización, el grupo A1 es : en la que el asterisco indica el punto de unión a la línea ondulada indica el punto de unión a la unidad Ligando y n es de 0 a 6. En una realización, n es 5.
En una realización, el grupo A1 es : en la que el asterisco indica el punto de unión a L1, la línea ondulada indica el punto de unión a la unidad de Ligando, n es 0 ó 1 y m es de 0 a 30. En una realización preferida, n es 1 y m es de 0 a 10, de 1 a 8, preferentemente de 4 a 8, lo más preferido 4 u 8.
En una realización, el grupo A1 es: en la que el asterisco indica el punto de unión a L1, la línea ondulada indica el punto de unión a la unidad de Ligando, n es 0 ó 1 y m es de 0 a 30. En una realización preferida, n es 1 y m es de 0 a 10, de 1 a 8, preferentemente de 4 a 8, lo más preferido 4 u 8.
En una realización, el grupo A1 es: en la que el asterisco indica el punto de unión a L , la línea ondulada indica el punto de unión a la unidad de Ligando y n es de 0 a 6. En una realización, n es 5.
En una realización, el grupo A es: en la que el asterisco indica el punto de unión a L1, la línea ondulada indica el punto de unión a la unidad de Ligando y n es de 0 a 6. En una realización, n es 5.
En una realización, el grupo A1 es: en la que el asterisco indica el punto de unión a L , la línea ondulada indica el punto de unión a la unidad de Ligando, n es 0 ó 1 y m es de 0 a 30. En una realización preferida, n es 1 y m es de 0 a 10, de 1 a 8, preferentemente 4 a 8, lo más preferido 4 u 8.
En una realización, el grupo A1 es: en la que el asterisco indica el punto de unión a L , la linea ondulada indica el punto de unión a la unidad de Ligando, n es 0 ó 1 y m es de 0 a 30. En una realización preferida, n es 1 y m es de 0 a 10, de 1 a 8, preferentemente de 4 a 8, lo más preferido 4 u 8.
En una realización, la conexión entre la unidad de Ligando y A1 es a través de un resto tiol de la unidad de Ligando un grupo maleimida de A1.
En una realización, la conexión entre la unidad de Ligando y A1 es: en la que el asterisco indica el punto de unión a la porción restante de A1, L1, L2 o D, y la linea ondulada indica el punto de unión a la porción restante de la unidad de Ligando. En esta realización, el átomo de S se obtiene típicamente de la unidad de Ligando.
En cada una de las realizaciones anteriores, puede usarse una funcionalidad alternativa en lugar del grupo derivado de maleimida que se muestra a continuación: en el que la línea ondulada indica el punto de unión a la unidad de Ligando como antes, y el asterisco indica el enlace a la porción restante del grupo A1, o a L1, L2 o D.
En una realización, el grupo derivado de maleimida está reemplazado por el en el que la línea ondulada indica el punto de unión a la unidad de Ligando y el asterisco indica el enlace a la porción restante del grupo A1, o a L1, L2 o D.
En una realización, el grupo derivado de maleimida está reemplazado por un grupo, que opcionalmente junto con una unidad de Ligando (por ejemplo, un Agente de Unión a Célula), se selecciona entre: -C (=0)NH-, -C(=0)0-, -NHC (=0) -, -0C(=0)-, -0C(=0)0-, -NHC (=0)0-, -0C (=0)NH-, -NHC (=0)NH-, -NHC (=0)NH, -C (=0)NHC(=0) -, -s-, -s-s-, -CH2C (=0) - -C(=0)CH2-, =N-NH- y -NH-N=.
En una realización, el grupo derivado de maleimida está reemplazado por un grupo, que opcionalmente junto con la unidad de Ligando, se selecciona entre: en las que la linea ondulada indica el punto de unión a la unidad de Ligando o en enlace a la porción restantes del grupo A1, y el asterisco indica el otro de el punto de unión a la unidad de Ligando o el enlace a la porción restante del grupo A .
Otros grupos adecuados para conectar L1 al Agente de Unión a Célula se describen en el documento WO2005/082023.
En una realización, la unidad de Extensión A1 está presente, la unidad de Especificidad L1 está presente y la unidad de Espaciado L2 está ausente. Por lo tanto, L1 y la unidad de Fármaco están conectados mediante un enlace. De forma equivalente, en esta realización, L2 es un enlace.
L1 y D pueden estar conectados por un enlace seleccionado entre: -C (=0)NH-, -C(=0)0-, -NHC (=0) -, -OC(=0)-, -0C(=0)0-, -NHC (=0) 0-, -0C(=0)NH- y -NHC (=0) H- .
En una realización, L1 y D están conectados preferentemente por un enlace seleccionado entre: -C(=0)NH- y -NHC (=0) -.
En una realización, L1 comprende un dipéptido y un extremo del dipéptido está enlazado a D. Como se ha descrito anteriormente, los aminoácidos en el dipéptido pueden ser cualquier combinación de aminoácidos naturales y aminoácidos non-naturales. En algunas realizaciones, el dipéptido comprende aminoácidos naturales. Cuando el engarce es un engarce lábil a catepsina, el dipéptido está en el sitio de acción para la escisión mediada por catepsina. Después, el dipéptido es un sitio de reconocimiento para catepsina.
En una realización, el grupo -??-?2- en el dipéptido, -NH-Xi-X2-CO- , se selecciona entre: -Phe-Lys-, -Val-Ala-, -Val-Lys- , -Ala-Lys- , -Val-Cit-, -Phe-Cit-, -Leu-Cit-, -Ile-Cit-, -Phe-Arg- y -Trp-Cit-; en los que Cit es citrulina. En dicho dipéptido, -NH-es el grupo amino de Xi y CO es el grupo carbonilo de X2.
Preferentemente, el grupo -X1X2- en el dipéptido, -NH-X1-X2-CO- , se selecciona entre: -Phe-Lys-, -Val-Ala-, -Val-Lys-, -Ala-Lys- y -Val-Cit-.
Más preferentemente, el grupo -X1-X2- en el dipéptido, -NH-X1-X2-CO-, es -Phe-Lys- o -Val-Ala-.
Otras combinaciones dipeptidicas de interés incluyen: -Gly-Gly-, -Pro-Pro- y -Val-Glu- .
Pueden usarse otras combinaciones dipeptidicas, incluyendo las que se han descrito anteriormente.
En una realización, L1-D es: -NH-X1-X2-CO-NH- * en el que -NH-Xi-X2-CO es el dipéptido, -NH- es parte de la unidad de Fármaco, el asterisco indica el punto de unión al resto de la unidad de Fármaco y la linea ondulada indica el punto de unión a la porción restante de L1 o el punto de unión a A1. Preferentemente, la linea ondulada indica el punto de unión a A1.
En una realización, el dipéptido es valina-alanina y en la que el asterisco, -NH- y la linea ondulada son como se han definido anteriormente.
En una realización, el dipéptido es fenilalanina-lisina y L1-D es: en la que el asterisco, -NH- y la linea ondulada son como se han definido anteriormente.
En una realización, el dipéptido es valina-citrulina.
En una realización, los grupos A1-L1 son: en la que el asterisco indica el punto de unión a L2 o D, la linea ondulada indica el punto de unión a la unidad de Ligando y n es de 0 a 6. En una realización, n es 5.
En una realización, los grupos A1-!1 son: en la que el asterisco indica el punto de unión a D, la linea ondulada indica el punto de unión a la unidad de Ligando y n es de 0 a 6. En una realización, n es 5 En una realización, los grupos A -L son: en la que el asterisco indica el punto de unión a D, la línea ondulada indica el punto de unión a la unidad de Ligando, n es 0 ó 1 y m es de 0 a 30. En una realización preferida, n es 1 y m es de 0 a 10, de 1 a 8, preferentemente de 4 a 8, lo más preferido 4 u 8.
En una realización, los grupos A^L1 son: en la que el asterisco indica el punto de unión a D, la línea ondulada indica el punto de unión a la unidad de Ligando, n es 0 ó 1 y m es de 0 a 30. En una realización preferida, n es 1 y m es de 0 a 10, de 1 a 7, preferentemente de 3 a 7, lo más preferido 3 ó 7.
En una realización, los grupos A1-L1 son: en la que el asterisco indica el punto de unión a L2 o D, la línea ondulada indica el punto de unión a la unidad de Ligando y n es de 0 a 6. En una realización, n es 5.
En una realización, los grupos A1-!1 son: en la que el asterisco indica el punto de unión a L2 o D, la linea ondulada indica el punto de unión a la unidad de Ligando y n es de 0 a 6. En una realización, n es 5.
En una realización, los grupos A1-!.1 son: en la que el asterisco indica el punto de unión a L o D, la linea ondulada indica el punto de unión a la unidad de Ligando, n es 0 ó 1 y m es de 0 a 30. En una realización preferida, n es 1 y m es de 0 a 10, de 1 a 8, preferentemente de 4 a 8, lo más preferido 4 u 8.
En una realización, los grupos A1-L1 son: en la que el asterisco indica el punto de unión a L2 o D, la linea ondulada indica el punto de unión a la unidad de Ligando, n es 0 ó 1 y m es de 0 a 30. En una realización preferida, n es 1 y m es de O a 10, de 1 a 8, preferentemente de 4 a 8, lo más preferido 4 u 8.
En una realización, los grupos L- A1-!1: en la que el asterisco indica el punto de unión a D, S es un grupo azufre de la unidad de Ligando, la linea ondulada indica el punto de unión al resto de la unidad de Ligando y n es de 0 a 6. En una realización, n es 5.
En una realización, el grupo L-A1-L1 es: en el que el asterisco indica el punto de unión a D, S es un grupo azufre de la unidad de Ligando, la linea ondulada indica el punto de unión al resto de la unidad de Ligando y n es de 0 a 6. En una realización, n es 5.
En una realización, el grupo L-A1-L1 es: en el que el asterisco indica el punto de unión a D, S es un grupo azufre de la unidad de Ligando, la linea ondulada indica el punto de unión al resto de la unidad de Ligando, n es 0 ó 1 y m es de 0 a 30. En una realización preferida, n es 1 y m es de 0 a 10, de 1 a 8, preferentemente de 4 a 8, lo más preferido 4 u 8.
En una realización, los grupos L-A1-L1 son: en los que el asterisco indica el punto de unión a D, la linea ondulada indica el punto de unión a la unidad de Ligando, n es 0 ó 1 y m es de 0 a 30. En una realización preferida, n es 1 y m es de 0 a 10, de 1 a 7, preferentemente de 4 a 8, lo más preferido 4 u 8.
En una realización, los grupos L-A1-L1 son: en el que el asterisco indica el punto de unión a L2 o D, la linea ondulada indica el punto de unión al resto de la unidad de Ligando y n es d eO a 6. En una realización, n es 5.
En una realización, los grupos L-A1-!1 son: O en la que el asterisco indica el punto de unión a L2 o D, la linea ondulada indica el punto de unión al resto de la unidad de Ligando y n es de 0 a 6. En una realización, n es 5.
En una realización, los grupos L-A1-L1 son: en el que el asterisco indica el punto de unión a L o D, la línea ondulada indica el punto de unión al resto de la unidad de Ligando, n es 0 ó 1 y m es de 0 a 30. En una realización preferida, n es 1 y m es de 0 a 10, de 1 a 8, preferentemente de 4 a 8, lo más preferido 4 u 8.
En una realización, los grupos L-A1-L1 son: en la que el asterisco indica el punto de unión a L2 o D, la linea ondulada indica el punto de unión al resto de la unidad de Ligando, n es 0 ó 1 y m es de 0 a 30. En una realización preferida, n es 1 y m es de 0 a 10, de 1 a 8, preferentemente de 4 a 8, lo más preferido 4 u 8.
En una realización, la unidad de Extensión es una unidad de acetamida, que tiene la fórmula: / -CH2-CO-N-* en la que el asterisco indica el punto de unión al resto de la unidad de Extensión, L1 o D, y la linea ondulada indica el punto de unión a la unidad de Ligando.
En otras realizaciones, se proporcionan compuestos de Engarce-Fármaco para conjugación a una unidad de Ligando. En una realización, los compuestos de Engarce-Fármaco se diseñan para su conexión a un Agente de Unión a Célula.
En una realización, el compuesto Engarce de Fármaco tiene la fórmula: en la que el asterisco indica el punto de unión a la unidad de Fármaco, G1 es un grupo de Estiramiento (A1) para formar una conexión a una unidad de Ligando, L1 es una unidad de Especificidad, L2 (una unidad de Espaciado) es un enlace covalente o junto con -0C(=0)- forma un grupo o grupos autoescindibles .
En otra realización, el compuesto Engarce de Fármaco tiene la fórmula: G^-L2- * en la que el asterisco indica el punto de unión a la unidad de Fármaco, G1 es una unidad de Extensión (A1) para formar una conexión a una unidad de Ligando, L1 es una unidad de Especificidad, L2 (una unidad de Espaciado) es un enlace covalente o un grupo o grupos autoescindibles .
L1 y L2 son como se han definido anteriormente. En el presente documento, las referencias a la conexión a A1 pueden interpretarse como referencias a la conexión a G1.
En una realización, cuando L1 comprende un aminoácido, la cadena lateral de dicho aminoácido puede estar protegida. Puede usarse cualquier grupo protector adecuado. En una realización, los grupos protectores de cadena lateral pueden retirarse con otros grupos protectores en el compuesto, cuando esté presente. En otras realizaciones, los grupos protectores pueden ser ortogonales a otros grupos protectores en la molécula, cuando estén presentes.
Los grupos protectores adecuados para cadenas lateralea de aminoácidos incluyen los grupos que se describen el Novabiochem Catalog 2006/2007. En Dubowchik y col, también se describen grupos protectores para su uso en engarces lábiles a catepsina.
En ciertas realizaciones de la invención, el grupo L1 incluye un resto aminoacidico Lys . La cadena lateral de este aminoácido puede protegerse con un grupo protector Boc o Alloc. Se prefiere más un grupo protector Boc.
El grupo funcional G1 forma un grupo de conexión después de reacción con una unidad de Ligando (por ejemplo, un agente de unión a célula) .
En una realización, el grupo funcional G1 es o comprende un grupo amino, ácido carboxilico, hidroxi, tiol o maleimida para reacción con un grupo adecuado en la unidad de Ligando . En una realización preferida, G1 comprende un grupo maleimida.
En una realización, el grupo G1 es un grupo alquilo maleimida. Este grupo es adecuado para reacción con grupos tiol, particularmente grupos tiol cisteina, presentes en el agente de unión a célula, por ejemplo, presentes en un anticuerpo .
En una realización, el grupo G1 es: en la que el asterisco indica el punto de unión a L , L2 o D, y n es de 0 a 6. En una realización, n es 5.
En una realización, el grupo G1 es: en la que el asterisco indica el punto de unión a L1, L2 o D y n es de 0 a 6. En una realización, n es 5.
En una realización, el grupo G1 es: en la que el asterisco indica el punto de unión a L , es 0 ó 1 y m es de 0 a 30. En una realización preferida, es 1 y m es de 0 a 10, de 1 a 2, preferentemente de 4 a 8 lo más preferido de 4 u 8.
En una realización, el grupo G1 es: en la que el asterisco indica el punto de unión a L , n es 0 ó 1 y m es de 0 a 30. En una realización preferida, n es 1 y m es de 0 a 10, de 1 a 8, preferentemente de 4 a 8, y lo más preferido 4 u 8.
En una realización, el grupo G es en la que el asterisco indica el punto de unión a L , L2 o D, y n es de 0 a 6. En una realización, n es 5.
En una realización, el grupo G1 es: O en la que el asterisco indica el punto de unión a L , L2 o D y n es de 0 a 6. En una realización, n es 5.
En una realización, el grupo G1 es: en la que el asterisco indica el punto de unión a L1, es 0 ó 1 y m es de 0 a 30. En una realización preferida, es 1 y m es de 0 a 10, de 1 a 2, preferentemente de 4 a 8 lo más preferido 4 u 8.
En una realización, el grupo G1 es: en la que el asterisco indica el punto de unión a L , n es 0 ó 1 y m es de 0 a 30. En una realización preferida, n es 1 y m es de 0 a 10, de 1 a 8, preferentemente de 4 a 8 y lo más preferido 4 u 8.
En cada una de las realizaciones anteriores, puede usarse una funcionalidad alternativa en lugar del grupo naaleimida que se muestra a continuación: en el que el asterisco indica el enlace a la porción restante del grupo G.
En una realización, el grupo obtenido de maleimida se reemplaza por el grupo: en el que el asterisco indica el enlace a la porción restante del grupo G.
En una realización, el grupo maleimida está reemplazado por un grupo seleccionado entre: -C (=0) OH, -OH, -NH2 -SH, -C(=0)CH2X, en el que X es Cl, Br o I, -CHO, -NHNH2 -C=CH y -N3 (azida) .
En una realización, L1 está presente y G1 es -NH2, NHMe, -C00H, -OH o -SH .
En una realización, cuando L está presente, G es -NH2 o -NHMe. Ambos grupos pueden estar en el N-terminal de una secuencia de aminoácidos de L1.
En una realización, L1 está presente y G1 es -N¾, y L1 es una secuencia de aminoácidos -X1-X2-, como se ha definido anteriormente.
En una realización, L1 está presente y G1 es COOH. Este grupo puede estar en el C-terminal de una secuencia de aminoácidos de L1.
En una realización, L1 está presente y G1 es OH.
En una realización, L1 está presente y G1 es SH.
El grupo G1 puede transformarse de un grupo funcional en otro. En una realización, L1 está presente y G1 es -NH2. Este grupo puede transformarse en otro grupo G1 que comprenda un grupo maleimida. Por ejemplo, el grupo -NH2 puede hacerse reaccionar con unos ácidos o ácidos activados (por ejemplo, formas de N-succinimida) de aquellos grupos G1 que comprendan la maleimida que se ha mostrado anteriormente .
Por lo tanto, el grupo G1 puede convertirse en un grupo funcional que sea más adecuado para la reacción con una unidad e Ligando.
Como se ha indicado anteriormente, en una realización, L1 está presente y G1 es -NH2, -NHMe , -COOH, -OH o -SH. En una realización más, estos grupos se proporcionan en una forma protegida químicamente. Por lo tanto, la forma protegida químicamente es un precursor para el engarce que se proporciona con un grupo funcional.
En una realización, G1 es -NH2 en una forma protegida químicamente. El grupo puede desprotegerse con un grupo protector de carbamato. El grupo protector de carbamato puede seleccionarse entre el grupo que consiste en: Alloc, Fmoc, Boc, Troc, Teoc, Cbz y PNZ.
Preferentemente, cuando G1 es -NH2, está protegido con un grupo Alloc o Fmoc.
En una realización, cuando G1 es -NH2, se protege con un grupo Fmoc.
En una realización, el grupo protector es el mismo que el grupo protector de carbamato del grupo de finalización.
En una realización, el grupo protector no es el mismo que el grupo protector de carbamato del grupo de finalización. En esta realización, se prefiere que el grupo protector pueda retirarse en condiciones que no retiren el grupo protector de carbamato del grupo de finalización.
El grupo protector químico puede retirarse para proporcionar un grupo funcional para formar una conexión a una unidad de Ligando. Opcionalmente, después, este grupo funcional puede convertirse en otro grupo funcional como se ha descrito anteriormente.
En una realización, el grupo activo es una amina. Preferentemente, esta amina es la amina N-terminal de un péptido y puede estar en la amina N-terminal de los dipéptidos preferidos de la invención.
El grupo protector puede hacerse reaccionar para producir el grupo funcional que se pretende que forma una conexión a una unidad de Ligando.
En otras realizaciones, la unidad de Engarce es un precursor para la unidad de Engarce que tiene un grupo activo. En esta realización, la unidad de Engarce comprende el grupo activo, que está protegido por medio de un grupo protector. El grupo protector puede retirarse para proporcionar la unidad de enlace que tenga un grupo protector activo.
Cuando el grupo activo es una amina, el grupo protector puede ser un grupo protector de amina, tal como los que se describen por Green y Wuts.
El grupo protector es preferentemente ortogonal a otros grupos protectores, cuando están presentes, en la unidad de Engarce .
En una realización, el grupo protector es ortogonal al grupo de finalización. Por lo tanto, el grupo protector de grupo activo pude retirarse mientras que se mantiene el grupo de finalización. En otras realizaciones, el grupo protector y el grupo de finalización pueden retirarse en s mismas condiciones que las usadas para retirar el grupo finalización.
En una realización, la unidad de Engarce es: en la que el asterisco indica el punto de unión a la unidad de Fármaco y la linea ondulada indica el punto de unión a la porción restante de la unidad de Engarce, según convenga, o el punto de unión a G1. Preferentemente, la linea ondulada indica el punto de unión a G1.
En una realización, la unidad de Engarce es: en el que el asterisco y la linea ondulada son como se han definido anteriormente.
Otros grupos funcionales adecuados para su uso en la formación de una conexión entre L1 y el Agente de Unión a Célula se describen en el documento WO 2005/082023.
Unidad de Ligando La unidad de Ligando puede ser de cualquier clase e incluye una proteína, polipéptido, péptido y un agente no peptídico que se una específicamente a una molécula diana. En algunas realizaciones, la unidad de Ligando puede ser una proteína, polipéptido o péptido. En algunas realizaciones, la unidad de Ligando puede ser un polipéptido cíclico. Estas unidades de Ligando pude incluir anticuerpos o un fragmento de un anticuerpo que contenga al menos un sitio de unión a molécula diana, linfocinas, hormonas, factores de crecimiento o cualquier otra molécula de unión a célula o sustrato que pueda unirse específicamente a una diana.
Los ejemplos de unidades de Ligando incluyen los agentes que se describen para su aplicación en el documento WO2007/085930, que se incorpora en el presente documento.
En algunas realizaciones, la unidad de Ligando es un Agente de Unión a Célula que se une a una diana extracelular sobre una célula. Dicho Agente de Unión a Célula puede ser una proteína, polipéptido, péptido o un agente no peptídico. En algunas realizaciones, el Agente de Unión a Célula puede ser una proteína, polipéptido o péptido. En algunas realizaciones, el Agente de Unión a Célula puede ser un polipéptido cíclico. El Agente de Unión a Célula también puede ser un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo. Por lo tanto, en una realización, la presente invención proporciona un conjugado fármaco-anticuerpo (ADC) .
En una realización el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal; anticuerpo quimérico; anticuerpo humanizado; anticuerpo totalmente humano; o un anticuerpo de una sola cadena. En una realización, el anticuerpo es un fragmento de uno de estos anticuerpos que tienen actividad biológica. Los ejemplos de dichos fragmentos incluyen fragmentos de Fab, Fab' , F(ab' )2 y Fv.
El anticuerpo puede ser un diacuerpo, un anticuerpo de dominio (DAB) o un anticuerpo de una sola cadena.
En una realización, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal .
Los anticuerpos para su uso en la presente invención incluyen los anticuerpos descritos en el documento WO2005/082023 que se incorpora en el presente documento por referencia. Se prefieren particularmente los anticuerpos para antigenos asociados a tumor. Los ejemplos de aquellos antigenos conocidos en la técnica incluyen, pero sin limitación, los antigenos asociados a tumor expuestos en el documento WO2005/082023. Véase, por ejemplo, páginas 41-55.
En algunas realizaciones, los conjugados se diseñan para que se dirijan a células tumorales mediante sus antigenos de superficie celular. Los antigenos pueden ser antigenos de superficie celular que sobreexpresados o expresados o expresados en momentos anormales o tipos de células. Preferentemente, el antigeno diana se expresa únicamente en células proliferativas (preferentemente células tumorales) ; sin embargo, esto raramente se observa en la práctica. Como resultado, los antigenos diana se seleccionan normalmente en base a la expresión diferencial entre tejido proliferativo y sano.
Se han creado anticuerpos para que se dirijan a antigenos relacionados con tumores específicos, incluyendo: Cripto, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, Glucoproteina NMB, CanAg, Her2 (ErbB2/Neu) , CD56 (NCAM) , CD70, CD79, CD138, PSCA, PSMA (antígeno de membrana específico de la próstata), BCMA, E-selectina, EphB2 , Melanotransferina, Mucl6 y TMEFF2.
La unidad de Ligando está conectada a la unidad de Engarce . En una realización, la unidad de Ligando está conectada a A, cuando están presentes, de la unidad de Engarce .
En una realización, la conexión entre la unidad de Ligando y la unidad de Engarce es a través de un enlace tioéter .
En una realización, la conexión entre la unidad de Ligando y la unidad de Engarce es a través de un enlace disulfuro .
En una realización, la conexión entre la unidad de Ligando y la unidad de Engarce es a través de una enlace amida .
En una realización, la conexión entre la unidad de Ligando y la unidad de Engarce es a través de un enlace de éster .
En una realización, la conexión entre la unidad de Ligando y él se forma entre un grupo tiol de un resto de cisteina de la unidad de Ligando y un grupo maleimida de la unidad de Engarce .
Los restos de cisteina de la unidad de Ligando pueden estar disponibles para reacción con el grupo funcional de la unidad de Engarce para formar una conexión. En otras realizaciones, por ejemplo, en las que la unidad de Ligando es un anticuerpo, los grupos tiol del anticuerpo pueden participar en enlaces disulfuro intercatenarios . Estos enlaces intercatenarios pueden convertirse en grupos tiol libres mediante, por ejemplo, tratamiento del anticuerpo con DTT antes de reacción con el grupo funcional de la unidad de Engarce .
En algunas realizaciones, el resto de cisteina es uno introducido en la cadena pesada o ligera de un anticuerpo. Las posiciones para la inserción de cisteina por sustitución en cadenas de anticuerpo pesadas o ligeras incluyen las que se describen en la Solicitud de Estados Unidos Publicada N° 2007-0092940 y la Publicación de Patente Internacional WO2008070593, que se incorporan en el presente documento.
Procedimientos de tratamiento Los conjugados de la presente invención se pueden utilizar en un procedimiento de tratamiento. También se proporciona un procedimiento de tratamiento que comprende administrar un sujeto en necesidad de tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de un conjugado de fórmula I. El término "cantidad terapéuticamente eficaz" es una cantidad suficiente para mostrar beneficio en un paciente. El beneficio puede ser por lo menos una disminución de por lo menos un síntoma. La cantidad real administrada de un conjugado así como la tasa o velocidad y el curso de tiempo de administración dependerán de la naturaleza y gravedad de lo que se va a tratar. La prescripción o tratamiento, por ejemplo, las decisiones respecto a la dosificación se encuentran bajo la responsabilidad de los profesionales de medicina generales y otros doctores en medicina.
En algunas realizaciones, la cantidad del Conjugado administrada varía de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 10 mg/kg por dosis. En algunas realizaciones, la cantidad del Conjugado administrada varía de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 5 mg/kg por dosis. En algunas realizaciones, la cantidad del Conjugado administrada varía de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 5 mg/kg por dosis. En algunas realizaciones, la cantidad del Conjugado administrada varia de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 5 mg/kg por dosis. En algunas realizaciones, la cantidad del Conjugado administrada varia de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 4 mg/kg por dosis. En algunas realizaciones, la cantidad del Conjugado administrada varia de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 3 mg/kg por dosis. En algunas realizaciones, la cantidad del Conjugado administrada varia de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 3 mg/kg por dosis. En algunas realizaciones, la cantidad del Conjugado administrada varia de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 2 mg/kg por dosis. En ^ algunas realizaciones, la cantidad del Conjugado administrada varia de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 1 mg/kg por dosis.
Un compuesto se puede administrar solo o en combinación con otros tratamientos, ya sea de manera simultánea o secuencial, dependiendo de la afección que va a ser tratada. Los ejemplos de tratamientos y terapias incluyen, pero no se limitan a quimioterapia (la administración de los agentes activos, que incluye, por ejemplo medicamentos; cirugía y radioterapia.
Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la presente invención y para uso de acuerdo con la presente invención pueden comprender, además del ingrediente activo, es decir, un Conjugado de fórmula I, un excipiente, portador, amortiguador, estabilizante u otros materiales bien conocidos los expertos en el ámbito, farmacéuticamente aceptables. Los materiales deben ser no tóxicos y no deben interferir con la eficacia del ingrediente activo. La naturaleza precisa del portador u otro material dependerá de la ruta de administración la cual puede ser oral o por inyección, por ejemplo por via cutánea, subcutánea o intravenos .
Las composiciones farmacéuticas para administración oral pueden ser en comprimido, cápsula, polvo o forma liquida. Un comprimido puede comprender un portador sólido o un adyuvante. Las composiciones farmacéuticas liquidas generalmente comprenden un portador liquido tal como agua, petróleo, aceites animales o vegetales, aceite mineral o aceite sintético. Se pueden incluir solución salina fisiológica, dextrosa u otras soluciones de sacáridos o glicoles tales como etilenglicol, propilenglicol o polietilenglicol . Una cápsula puede comprender un portador sólido tal como una gelatina.
Para inyección intravenosa, cutánea o subcutánea, o para inyección en el sitio de enfermedad, el ingrediente activo puede estar en forma de una solución acuosa parenteralmente aceptable la cual esté libre de pirógeno y presente un pH, isotonicidad y estabilidad adecuados. Los expertos en el ámbito relevante serán capaces de preparar soluciones adecuadas utilizando, por ejemplo, vehículos isotónicos tales como material para inyección con cloruro de sodio, inyección Ringer, inyección Ringer con lactato. Se pueden incluir, según se requiera, conservadores, estabilizantes, amortiguadores, antioxidantes y/u otros aditivos .
Inclusión de otras formas A menos que se especifique en otro sentido, se incluye en lo anterior las formas bien conocidas iónicas, sales, solvatos y formas protegidos de estos sustituyentes . Por ejemplo, una referencia a ácido carboxílico (-COOH) también incluye la forma aniónica ( carboxilato) (-C00"), una sal o solvato de la misma, así como formas protegidas convencionales. De manera similar, una referencia a un grupo amino incluye la forma protonada (-N+HR1R2) , una sal o solvato del grupo amino, por ejemplo una sal clorhidrato así como formas protegidas convencionales de un grupo amino. Similarmente, una referencia a un grupo hidroxilo también incluye la forma aniónica (-0") o una sal o solvato de la misma así como formas protegidas convencionales.
Sales Puede ser conveniente o deseable preparar, purificar y/o manejar una sal correspondiente del compuesto activo (o Conjugado) , por ejemplo, una sal farmacéuticamente aceptable . Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables se describen en Berge y col., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977) .
Por ejemplo, si el compuesto es aniónico o tiene un grupo funcional el cual puede ser aniónico (por ejemplo -COOH puede ser -C00") , entonces se puede formar una sal con un catión adecuado. Los ejemplos de cationes inorgánicos adecuados incluyen, pero no se limitan a iones de metal alcalino tal como Na+ y K+, cationes alcalinotérreos tales como Ca2+ y Mg2+, y otros cationes tales como Al+3. Los ejemplos de cationes orgánicos adecuados incluyen, pero no se limitan a ión amonio (es decir, NH4+) e iones amonio sustituidos (por ejemplo NH3R+, NH2R2+, NHR3+, NR4+) . Los ejemplos de algunos iones amonio sustituidos adecuados son aquellos derivados de: etilamina, dietilamina, diciclohexilamina, trietilamina, butilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina, bencilamina, fenilbencilamina, colina, meglumina y trometamina asi como aminoácidos tales como lisina y arginina. Un ejemplo de un ión amonio cuaternario común es N(CH3)4+.
Si el conjugado es catiónico o tiene un grupo funcional el cual puede ser catiónico (por ejemplo, -NH2 puede ser -NH3+) , entonces se puede formar una sal con un anión adecuado. Los ejemplos de aniones inorgánicos adecuados incluyen, pero no se limitan a aquellos derivados de los siguientes ácidos inorgánicos: clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, sulfúrico, sulfuroso, nítrico, nitroso, fosfórico y fosforoso.
Los ejemplos de aniones orgánicos adecuados incluyen, pero no se limitan a aquellos derivados de los siguientes ácidos orgánicos: 2-acetoxibenzoico, acético, ascórbico, aspártico, benzoico, canforsulfónico, cinámico, cítrico, edético, etanodisulfónico, etanosulfónico, fumárico, gluceptónico, glucónico, glutámico, glicólico, hidroximaleico, hidroxinaftalencarboxílico, isetiónico, láctico, lactobiónico, láurico, maleico, málico, metanosulfónico, mucico, oleico, oxálico, palmítico, pamoico, pantoténico, fenilacético, fenilsulfónico, propiónico, pirúvico, salicíclico, esteárico, succínico, sulfanílico, tartárico, toluenosulfónico y valérico. Los ejemplos de aniones orgánicos poliméricos adecuados incluyen, pero no se limitan a aquellos de los siguientes ácidos poliméricos: ácido tánico y carboximetilcelulosa. Solvatos Puede ser conveniente o deseable preparar, purificar y/o manejar un solvato correspondiente del conjugado o conjugados activos. El término "solvato" se utiliza en la presente en el sentido convencional para referirse a un complejo de soluto (por ejemplo conjugado activo, sal del Conjugado activo) y solvente. Si el solvente es agua, el solvato se puede denominar convenientemente como hidrato, por ejemplo, un monohidrato, un dihidrato, un trihidrato, etc .
Carbinolaminas La invención incluye conjugados en donde un solvente agrega a través de un enlace imina de la porción PBD, lo cual se ilustra en lo siguiente para un monómero de PBD en donde el solvente es agua o un alcohol (RAOH, en donde RA es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono) : Estas formas se pueden denominar las formas carbinolamina y carbinolamina éter de PBD. El balance de este equilibrio depende de las condiciones en las cuales se encuentren los compuestos asi como la naturaleza de la porción misma.
Estos compuestos particulares se pueden aislar en forma sólida, por ejemplo, por liofilización .
Isómeros Pueden existir ciertos compuestos en una o más formas geométricas particulares, ópticas, enantioméricas , diastereoméricas, epiméricas, atrópicas, estereoisoméricas, tautoméricos , conformacionales o anoméricas que incluyen pero que no se limitan a las formas cis y trans; las formas E y Z; las formas c, t y r, las formas endo y exo; las formas R, S y meso; las formas D y L; las formas d y 1; las formas (+ ) y (-) ; las formas ceto, enol y enolato; las formas sin y anti; las formas clínica y anticlínica; las formas y ß y; las formas axial y ecuatorial; las formas de bote, silla, torcida, sobre y semisilla o silla alabiada; y combinaciones de las mismas; a continuación denominadas colectivamente como "isómeros" (o "formas isoméricas" ) .
Nótese que, excepto como se describe en lo siguiente para las formas tautoméricas, se excluyen específicamente del término "isómeros" como se utilizan en la presente, están los isómeros estructurales (o constitutivos) (es decir, isómeros los cuales difieren en las conexiones entre los átomos en vez de simplemente por la posición de los átomos en el espacio) . Por ejemplo, una referencia a un grupo metoxi, -OCH3, no debe considerarse como una referencia a su isómero estructural, un grupo hidroximetilo, -CH2OH. Similarmente, una referencia a orto-clorofenilo no debe considerarse como una referencia a su isómero estructural, metaclorofenilo . No obstante, una referencia a una clase de estructuras bien puede incluir formas estructuralmente isoméricas que se encuentren dentro de esa clase (por ejemplo, alquilo de 1 a 7 átomos de carbono incluye n-propilo e isopropilo; butilo incluye n-, iso-, sec- y tere-butilo; metoxifenilo incluye orto-, meta-y para-metoxifenilo) .
La exclusión anterior no pertenece a las formas tautoméricas , por ejemplo, las formas ceto, enol y enolato como en, por ejemplo, los siguientes pares tautoméricos : ceto/enol (ilustrado más adelante) , imina/enamina, amida/iminoalcohol, amidina/amidina, nitroso/oxima, tiocetona/enetiol, N-nitroso/hiroxiazo y nitro/acinitro . ceto enol enolato Nótese que se incluyen específicamente en el término "isómero" los compuestos con una o más sustituciones isotópicas. Por ejemplo, H puede estar en cualquier forma isotópica que incluye 2H (D) y 3H, (T) ; C puede estar en cualquier forma isotópica que incluye 12C, 13C y 1C; O puede estar en cualquier forma isotópica que incluye 160 y 180; y similares .
A menos que se especifique en otro sentido, una referencia a un compuesto o Conjugado particular incluye la totalidad de las formas isoméricas que incluye mezclas racémicas (completas o parciales) y otras mezclas de los mismos. Los procedimientos para la preparación (por ejemplo síntesis asimétrica) y separación (por ejemplo cristalización fraccionada y medios cromatográficos ) de las formas isoméricas se conocen en el ámbito o se obtienen fácilmente al adaptar los procedimientos descritos en la presente, o procedimientos conocidos, de una manera conocida .
Rutas sintéticas generales La síntesis de compuestos diméricos de PBD se describe extensamente en las siguientes referencias, cuya descripción se mejora en la presente como referencia: a) WO 00/12508 (páginas 14 a 30); b) WO 2005/023814 (páginas 3 a 10); c) WO 2004/043963 (páginas 28 a 29); y d) WO 2005/085251 (páginas 30 a 39).
RUTA DE SINTESIS Los conjugados de la presente invención en donde R10 y R11 forman un enlace doble nitrógeno-carbono entre los átomos de nitrógeno y carbono a los cuales están unidos, se pueden sintetizar a partir de un compuesto de fórmula 2: Fórmula 2 en donde R2, R6, R7, R9, R6', R7', R9' , R12, X, X' y R" son como se definen para compuestos de fórmula I, ProtN es un grupo protector de nitrógeno para síntesis y Prot0 es un grupo de oxígeno protegido para síntesis o un grupo oxo, al desproteger el enlace imina por procedimientos estándar o convencionales .
El compuesto producido puede estar en su forma carbinolamina o carbinolaminaéter, dependiendo de los solventes usados. Por ejemplo, si ProtN es Alloc y Prot0 es un grupo protector de oxígeno para síntesis, entonces la desprotección se lleva a cabo utilizando paladio para eliminar el grupo protector N10, seguido por eliminación del grupo protector de oxígeno para la síntesis. Si ProtN es Troc y Prot0 es un grupo protector de oxígeno para síntesis, entonces la desprotección se lleva a cabo utilizando un par Cd/Pb para proporcionar el compuesto de fórmula (I) . Si ProtN es SEM o un grupo análogo y Prot0 es un grupo oxo, entonces el grupo oxo se puede separar por reducción lo que genera un intermediario carbinolamina protegido el cual después se puede tratar para separar el grupo protector SEM, seguido por la eliminación de agua. La reducción del compuesto de fórmula 2 se puede llevar a cabo, por ejemplo, por tetraborohidruro de litio mientras un medio adecuado para separar el grupo protector SEM es tratamiento con gel de sílice.
Los compuestos de fórmula 2 se pueden sintetizar a partir de un compuesto de fórmula 3a: en donde R2, R6, R7, R9, R6', R7' , R9', X, X' y R" son como se definen para los compuestos de fórmula 2, por acoplamiento de un derivado organometálico que comprende R12, tal como un derivado de organoboro. El derivado de organoboro puede ser un boronato o ácido borónico.
Los compuestos de fórmula 2 se pueden sintetizar a partir de un compuesto de fórmula 3b: en donde R12, R6, R7, R9, R6', R7', R9', X, X' y R" son como se definen para los compuestos de fórmula 2, por acoplamiento de un derivado organometálico que comprende R2, tal como un derivado de organoboro. El derivado de organoboro puede ser un boronato o ácido borónico.
Los compuestos de fórmulas 3a y 3b se pueden sintetizar a partir de un compuesto de fórmula 4: Fórmula 4 en donde R2, R6, R7, R9, R6', R7', R9' , X, X' y R" son como se definen para los compuestos de fórmula 2, por acoplamiento alrededor de un equivalente único (por ejemplo 0,9 ó 1 a 1,1 ó 1,2) de un derivado organometálico tal como un derivado de organoboro, que comprende R2 o R12.
Los acoplamientos descritos en lo anterior habitualmente se llevan a cabo en presencia de un catalizador de paladio, por ejemplo Pd(PPh3)4, Pd(OCOCH3)2, PdCl2, Pd2(dba)3. El acoplamiento se puede llevar a cabo bajo condiciones estándar o también se puede llevar a cabo bajo condiciones de microondas .
Las dos etapas de acoplamiento habitualmente se llevan a cabo secuencialmente . Se pueden llevar a cabo con o sin purificación entre las dos etapas. Si no se lleva a cabo purificación, entonces se pueden llevar a cabo dos etapas en el mismo recipiente de reacción. La purificación habitualmente se requiere después de la segunda etapa de acoplamiento. La purificación del compuesto a partir de productos secundarios no deseados se puede llevar a cabo por cromatografía en columna o separación por intercambio iónico .
La síntesis de compuestos de fórmula 4 en donde Prot es un grupo oxo y ProN es SEM se describen con detalle en WO 00/12508, la cual se incorpora en la presente como referencia. En particular, se hace referencia al esquema 7 en la página 24, en donde el compuesto anterior se denomina como el intermediario P. Este procedimiento de síntesis también se describe en WO 2004/043963.
La síntesis de compuestos de fórmula 4 en donde Prot0 es un grupo de oxígeno protegido para síntesis se describen en WO 2005/085251, síntesis la cual se incorpora en la presente como referencia.
Los compuestos de fórmula I en donde R10 y R10' son H y R11 y R11' son S0ZM, se pueden sintetizar a partir de compuestos de fórmula I en donde R10 y R11 forman un enlace doble nitrógeno-carbono entre los átomos de nitrógeno y de carbono a los cuales están unidos, por la adición de la sal bisulfita apropiada o sal sulfinato, seguido por una etapa de purificación apropiada. Se describen procedimientos adicionales en GB 2 053 894, la cual se incorpora en la presente como referencia.
Grupos protectores de nitrógeno para síntesis Los grupos protectores de nitrógeno para síntesis son bien conocidos en el ámbito. En la presente invención, los grupos protectores de interés particular son grupos protectores de nitrógeno carbamato y grupos protectores de nitrógeno hemi-aminal .
Los grupos protectores de nitrógeno carbamato tienen la siguiente estructura: en donde R'10 es R como se define en lo anterior. Una gran cantidad de grupos adecuados se describen en las páginas 503 a 549 de Greene, T.W. y uts, G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3a Edición, John iley & Sons, Inc., 1999, la cual se incorpora en la presente como referencia .
Los grupos protectores preferidos particularmente incluyen Troc, Teoc, Fmoc, BOC, Doc, Hoc, TcBOC, 1-Adoc y 2-Adoc.
Otros grupos posibles son nitrobenciloxicarbonilo (por ejemplo 4-nitrobenciloxilocarbonilo) y 2- ( fenilsulfonil ) etoxicarbonilo .
Los grupos protectores los cuales se pueden separar con catalizadores de paladio no se prefieren, por ejemplo Alloc.
Los grupos protectores de nitrógeno hemi-aminal tienen la siguiente estructura: en donde R'10 es R como se define en lo anterior. Se describen una gran cantidad de grupos adecuados en las páginas 633 a 647 como grupos protectores de amida de Greene, T.W. y Wuts, G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3a Edición, John Wiley & Sons, Inc., 1999, la cual se incorpora en la presente como referencia.
Los grupos que se describen en la presente se pueden aplicar a compuestos de la presente invención. Estos compuestos incluyen pero no se limitan a SEM, MO , MTM, MEM, BOM sustituido con nitro o metoxi, BOM, CI3CCH2OCH2- .
Grupos de oxigeno protegido para síntesis Los grupos de oxígeno protegidos para síntesis son bien conocidos en el ámbito. Una gran cantidad de grupos protectores de oxígeno adecuados se describen en las páginas 23 a 2000 de Greene, T.W. y Wuts, G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3a Edición, John Wiley & Sons, Inc., 1999, la cual se incorpora en la presente como referencia .
Las clases de interés particular incluyen sililéteres, metiléteres, alquiléteres, benciléteres, ésteres, acetatos, benzoatos, carbonatos y sulfonatos.
Los grupos protectores de oxígeno preferidos incluyen acetatos, TBS y THP.
Preferencias adicionales Las siguientes preferencias pueden aplicarse a todos los aspectos de la invención como se describe en lo anterior o se pueden relacionar con un aspecto único. Las preferencias se pueden combinar juntas en cualquier combinación .
En algunas modalidades, R6' , R7', R9', R11' e Y ' son preferentemente iguales que R6, R7, R9, R10, R11 e Y, respectivamente .
Enlazante dimerico Y e Y' preferentemente son O.
R" preferentemente es un grupo alquileno de 3 a 7 átomos de carbono sin sustituyentes . De manera más preferente, R" es alquileno de 3, 5 ó 7 átomos de carbono. R6 a R9 R9 preferentemente es H.
R6 preferentemente se selecciona de H, OH, OR, SH, NH2, nitro y halo y de manera más preferente es H o halo y de manera mucho más preferente es H.
R7 preferentemente se selecciona de H, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR' y halo, y de manera más preferente se selecciona independientemente de H, OH y OR, en donde R preferentemente se selecciona de grupos alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, heterociclilo de 3 a 10 átomos de carbono y arilo de 5 a 10 átomos de carbono, opcionalmente sustituidos. R de manera más preferente puede ser un grupo alquilo de 1 a 4 átomos de carbono el cual puede o no estar sustituido. Un sustituyente de interés es un grupo arilo de 5 a 6 átomos de carbono (por ejemplo fenilo) . Los sustituyentes particularmente preferidos en las posiciones 7 son OMe y 0CH2Ph.
Estas preferencias se aplican a R9', R6' y R7', respectivamente.
R2 A en R2 puede ser un grupo fenilo o un grupo heteroarilo de 5 a 7 átomos de carbono por ejemplo furanilo, tiofenilo y piridilo. En algunas modalidades, A preferentemente es fenilo. En otras modalidades, A preferentemente es tiofenilo, por ejemplo, tiofen-2-ilo y tiofen-3-ilo .
X es un grupo que se selecciona de la lista que comprende: -O-, -S-, -C(0)0-, -C(0)-, -NH(C=0)- y _N (RN) - , en el que RN se selecciona entre el grupo que comprende H y alquilo C1- . X puede ser preferentemente: -0-, -S- o -NH-, y lo más preferido es que sea -NH- .
Q2-X puede estar en cualquiera de los átomos de anillo disponibles del grupo arilo de 5 a 7 átomos de carbono pero preferentemente está en el átomo del anillo que no está adyacente al enlace al resto del compuesto, es decir, preferentemente ß o ? respecto al enlace del resto del compuesto. Por lo tanto, cuando el grupo arilo de 5 a 7 átomos de carbono (A) es fenilo, el sustituyente (Q2-X) preferentemente está en las posiciones meta o para, y de manera más preferente está en la posición para punto 1.
En algunas modalidades, Q1 es un enlace sencillo. En esas modalidades, Q2 se selecciona de un enlace sencillo y -Z-(CH2)n-í en donde Z se selecciona de un enlace sencillo, O, S y NH, y es de 1 a 3. En algunas de estas modalidades, Q2 es un enlace sencillo. En otras modalidades, Q2 es -Z- ((¾)?-· En estas modalidades, Z puede ser O o S y n puede ser I o n puede ser 2. En otras de estas modalidades, Z puede ser un enlace sencillo y n puede ser 1.
En otras modalidades, Q1 es -CH=CH.
En algunas modalidades, R2 puede ser -A-CH2-X y -A-X. En estas modalidades, X puede ser -O-, -S-, -C(0)0-, -C(O)-y -NH-. En modalidades particularmente preferidas, X puede ser -NH-.
R12 R12 puede ser un grupo arilo de 5 a 7 átomos de carbono. Un grupo arilo de 5 a 7 átomos de carbono puede ser un grupo fenilo o un grupo heteroarilo de 5 a 7 átomos de carbono, por ejemplo furanilo, tiofenilo y piridilo. En algunas modalidades R12 es preferentemente fenilo. En otras modalidades, R12 es preferentemente tiofenilo, por ejemplo tiofen-2-ilo y tiofen-3-ilo .
R12 puede ser un arilo de 8 a 10 átomos de carbono, por ejemplo un grupo quinolinilo o isoquinolinilo . El grupo quinolinilo o isoquinolinilo puede estar unido al núcleo PBD a través de cualquier posición de anillo disponible. Por ejemplo, el quinolinilo puede ser quinolin-2-ilo, quinolin-3-ilo, quinolin-4-ilo, quinolin-5-ilo, quinolin-6-ilo, quinolin-7-ilo y quinolin-8-ilo . De estos se pueden preferir quinolin-3-ilo y quinolin-6-ilo . El isoquinolinilo puede ser isoquinolin-l-ilo, isoquinolin-3-ilo, isoquinolin-4-ilo, isoquinolin-5-ilo, isoquinolin-6-ilo, isoquinolin-7-ilo e isoquinolin-8-ilo . De estos se pueden preferir isoquinolin-3-ilo e isoquinolin-6-ilo .
R12 puede presentar cualquier número de grupos sustituyentes. Preferentemente presenta de 1 a 3 grupos sustituyentes, en donde 1 y 2 son los más preferidos, y los grupos con un solo sustituyente son los más preferidos. Los sustituyentes pueden estar en cualquier posición.
Cuando R12 es un grupo arilo de 5 a 7 átomos de carbono, un sustituyente único preferentemente está en un átomo del anillo que no está adyacente al enlace con el resto del compuesto, es decir, preferentemente está ß o ? respecto al enlace del resto del compuesto. Por lo tanto, cuando el grupo arilo de 5 a 7 átomos de carbono es fenilo, el sustituyente preferentemente está en las posiciones meta o para, y de manera más preferente está en la posición para .
Cuando R12 es un grupo arilo de 8 a 10 átomos de carbono, por ejemplo quinolinilo o isoquinolinilo, puede presentar cualquier número de sustituyente en cualquier posición de los anillos quinolina o isoquinolina . En algunas modalidades, presenta uno, dos o tres sustituyentes y estos pueden estar en ya sea los anillos proximal y distal o en ambos (si es más de un sustituyente) .
Sustituyentes en R12 Si un sustituyente en R12 es halo, preferentemente es F o Cl, de manera más preferente Cl .
Si un sustituyente en R12 es éter, en algunas modalidades puede ser un grupo alcoxi, por ejemplo un grupo alcoxi de 1 a 7 átomos de carbono (por ejemplo metoxi, etoxi) o en algunas modalidades puede ser un grupo ariloxi de 5 a 7 átomos de carbono (por ejemplo fenoxi, piridiloxi, furaniloxi) . El grupo alcoxi en si mismo puede estar sustituido, por ejemplo, por un grupo amino (por ejemplo dimetilamino) .
Si un sustituyente en R12 es alquilo de 1 a 7 átomos de carbono, preferentemente puede ser un grupo alquilo de 1 a 4 átomos de carbono (por ejemplo metilo, etilo, propilo, butilo) .
Si un sustituyente en R12 es heterociclilo de 3 a 7 átomos de carbono, en algunas modalidades puede ser un grupo heterociclilo que contenga nitrógeno Cs, por ejemplo morfolino, tiomorfolino, piperidinilo, piperazinilo . Estos grupos pueden estar unidos al resto de la porción PBD vía el átomo de nitrógeno. Estos grupos pueden estar sustituidos adicionalmente, por ejemplo, por grupos alquilo de 1 a 4 átomos de carbono. Si el grupo heterociclilo que contiene nitrógeno Ce es piperazinilo, el sustituyente adicional puede estar en el segundo átomo de nitrógeno del anillo .
Si un sustituyente en R12 es bis-oxi-alquileno de 1 a 3 átomos de carbono, este es preferentemente bis-oxi-metileno o bis-oxi-etileno .
Los sustituyentes particularmente preferidos para R12 incluyen metoxi, etoxi, flúor, cloro, ciano, bis-oxi-metileno, metil-piperazinilo, morfolino y metil-tiofenilo. Otro sustituyente particularmente preferido para R12 es dimetilaminopropiloxi .
Grupos en R12 Los grupos en R12 sustituidos particularmente preferidos incluyen, pero no se limitan a 4-metoxifenilo, 3-metoxifenilo, 4-etoxifenilo, 3-etoxifenilo, 4-fluorofenilo, 4-clorofenilo, 3, 4-bisoximetilenfenilo, 4-metiltiofenilo, 4-cianofenilo, 4-fenoxifenilo, quinolin-3-ilo y quinolin-6-ilo, isoquinolin-3-ilo e isoquinolin-6-ilo, 2-tienilo, 2-furanilo, metoxinaftilo y naftilo. Otro posible sustituyente del grupo R12 es 4-nitrofenilo .
M y z Se prefiere que y M' sean cationes monovalentes farmacéuticamente aceptables, y de manera más preferente Na+.
Preferentemente, el radical z es 3 .
Ejemplos Procedimientos Experimentales Generales Las rotaciones ópticas se miden en un polarimetro ADP 220 (Bellingham Stanley Ltd.) y las concentraciones (c) se proporcionan en g/ 100 mi. Los puntos de fusión se miden utilizando un aparato de determinación de punto de fusión digital (Electrothermal) . Los espectros IR se registran en un espectrómetro Perkin-Elmer Spectrum 1000 FT IR. Los espectro de XH y 13C por RMN se adquieren a 300 K utilizando un espectrómetro Bruker Avance RMN a 400 y 100 MHz, respectivamente. Los desplazamientos químicos se reportan en relación a TMS (d = 0 , 0 ppm) y las señales se designan como s (singlete) , d (doblete) , t (triplete) , dt (doble triplete) , dd (doble de dobletes), ddd (doble doblete de dobletes) o m (multiplete) , con constantes de acoplamiento proporcionadas en hertzios (Hz) . Los datos de espectroscopia de masas (EM) se recolectan utilizando un instrumento Waters Micromass ZQ acoplado a un equipo Waters 2695 HPLC con Waters 2996 PDA. Los parámetros Waters Micromass ZQ utilizados son: capilaridad (kV) , 3 , 38 ; cono (V), 35 ; extractor (V) , 3 , 0 ; temperatura fuente (°C), 100 ; temperatura de desolvatación (°C), 200; caudal de cono (1/h), 50; caudal de desolvatación (1/h), 250. Los datos de espectroscopia de masas de alta resolución (EMAR) se registran en Waters Micromass QTOF Global en el modo W positivo utilizando puntas de vidrio de borosilicato recubiertas con metal para introducir las muestras en el instrumento. La cromatografía en capa delgada (CCD) se realiza en placas de aluminio de gel de sílice (Merck 60, F254) y cromatografía instantánea utilizando gel de sílice (Merck 60, malla 230-400 ASTM) . Excepto para los reactivos HOBt (NovaBiochem) y de soporte sólido (Argonaut) , todas las sustancias químicas y solventes se adquieren de Sigma-Aldrich y se utilizan como se suministran, sin purificación adicional. Se preparan solventes anhidros por destilación bajo una atmósfera de nitrógeno seco en presencia de un agente de secado apropiado y se almacenan sobre tamices moleculares de 4Á o alambre de sodio. El éter de petróleo se refiere a una fracción que hierve a 40-60 °C.
El compuesto Ib se sintetiza como se describe en el documento WO 00/012508 (compuesto 210) , el cual se incorpora en la presente como referencia.
Condiciones Generales de CL/EM: La CLAP (Waters Alliance 2695) se corre utilizando una fase móvil de agua (A) (ácido fórmico 0,1%) y acetonitrilo (B) (ácido fórmico 0,1%). Gradiente: composición inicial B 5% durante 1,0 min, después de B 5% hasta B 95% en los siguientes 3 min. La composición se mantiene durante 0,5 min en B 95% y después se regresa a B 5% en 0,3 minutos. El tiempo de corrimiento de gradiente total es igual a 5 min. El caudal es de 3,0 ml/min, 400 µ? se dividen vía un volumen muerto cero de una pieza en t, la cual pasa al interior del espectrómetro de masas. Intervalos de detección de longitud de onda: 220 a 400 nm. Tipo de función: arreglo de diodo (535 exploraciones) . Columna: Phenonmenex® Onyx Monolithic C18 50 x , 60 mm.
Las condiciones de CL/EM especificas para compuestos protegidos por un grupo Troc y un TBDM: separación cromatográfica de compuestos protegidos con Troc y TBDMS se realiza en un sistema Waters Alliance 2695 HPLC utilizando columna en fase inversa Onyx Monolitic (partículas de 3 µp?, 50 x 4,6 mm) de Phenomenex Corp. La fase A móvil consiste de 5% de acetonitrilo - 95% de agua que contiene ácido fórmico 0,1% y la fase móvil B consiste de 95% de acetonitrilo - 5% de agua que contiene ácido fórmico 0,1%. Después de 1 min a B 5%, la proporción de B se incrementa a B 95% durante los siguientes 2,5 min y se mantiene a B 95% durante 1 min adicional, antes de regresar a A 95% en 10 s y reequilibrio durante 50 s adicionales, lo que proporciona un tiempo de corrida total de 5,0 min. El caudal se mantiene a 3,0 ml/min.
Condiciones de CL/EM específicas para el compuesto 33: se lleva a cabo Cl en un equipo Waters 2767 con sample Manager acoplado con un detector de arreglo de fotodiodo Waters 2996 y un espectrómetro de masa cuádruple única Waters ZQ. La columna utilizada es Luna Phenyl-Hexyl 150 x 4,60 mm, 5 um, parte no. 00F-4257-E0 (Phenomenex) . Las fases móviles utilizadas son: fase móvil A: 100% de agua grado CLAP (trietilamina 0, 05%) , pH = 7 fase móvil B: 20% de agua grado CLAP y 80% de acetonitrilo grado CLAP (trietilamina 0,05%), pH = 7 Los gradientes utilizados fueron: Tiempo (min) Caudal (ml/min) % de A % de B inicial 1,50 90 10 1,0 1,50 90 10 16,0 1,50 64 36 30,0 1,50 5 95 31,0 1,50 90 10 32,0 1,50 90 10 La espectrometría de masas se llevó a cabo en modo de ión positivo y SIR (monitoreo de ión selectivo) y el ión monitoreado fue m/z = 727,2.
Síntesis de intermediarios clave (a) 1, 1' - [ [ (propano-1, 3-diil) dioxi] bis [ (5-metoxi-2-nitro-1, -fenilen) carbonil] ] bis [4-hidroxipirrolidino-2carboxilato de (2S, R) -metilo] (2a) Procedimiento A: Se agrega una cantidad catalítica de D F (2 gotas) a una solución agitada del nitroácido la (1,0 g, 2,15 mmol) y cloruro de oxalilo (0,95 mi, 1,36 g, 10,7 mmol) en 20 mi de THF seco. Se permite que la mezcla de reacción se agite durante 16 horas a temperatura ambiente y el solvente se separa por evaporación al vacío.
El residuo resultante se vuelve a disolver en 20 mi de THF seco y la solución de cloruro de ácido se agrega a gotas a una mezcla agitada de clorhidrato de 4-hidroxipirrolidino-2-carboxilato de (2S, 4R) -metilo (859 mg, 4,73 mmol) y TEA (6,6 mi, 4,79 g, 47,3 mmol) en 10 de THF a -30 °C (el hielo seco/etilenglicol) bajo una atmósfera de nitrógeno. Se permite que la mezcla de reacción se caliente hasta la temperatura ambiente y se agite durante 3 horas adicionales después de lo cual la CCD (95:5 v/v CHCl3/MeOH) y CL/EM (2,45 min (EN+) m/z (intensidad relativa) 721 ( [M + H]+, 20)) muestra la formación del producto. Se elimina por evaporación giratoria el exceso de THF y el residuo resultante se disuelve en 50 mi de DCM. La fase orgánica se lava con 15 mi de HC1 1N, 2 veces, 15 mi de NaHC03 saturado, 2 veces, 20 mi de H20, 30 mi de salmuera y se seca con MgS04. La filtración y evaporación del solvente proporciona el producto crudo como un aceite de color oscuro. La purificación por cromatografía instantánea (gradiente de elusión: CHC13 100% a 96:4 v/v de CHCl3/MeOH) aisla la amida pura 2a como un vidrio de color naranja (840 mg, 54%) .
Procedimiento B: Se agrega cloruro de oxalilo (9,75 mi, 14,2 g, 111 mmol) a una suspensión agitada del nitroácido la (17,3 g, 37,1 mmol) y 2 mi de DMF en 200 mi de DCM anhidra. Después de efervescencia inicial la suspensión de reacción se vuelve una solución y la mezcla se permite que se agite a temperatura ambiente durante 16 horas. Se confirma la conversión al cloruro de ácido por tratamiento de una muestra de la mezcla de reacción con MeOH y el bis-metiléster resultante se observa por CL/EM. La mayor parte del solvente se separa por evaporación al vacío, la solución concentrada resultante se vuelve a disolver en una cantidad mínima de DCM seco y se tritura con dietiléter. El precipitado amarillo resultante se recolecta por filtración, se lava con dietiléter frío y se seca durante 1 hora en un horno al vacío, a 40 °C. Se agrega en porciones cloruro de ácido sólido durante un período de 25 minutos a una suspensión agitada de clorhidrato de 4-hidroxipirrolidina-2-carboxilato de (2S, 4R) -metilo (15,2 g, 84,0 mmol) y TEA (25,7 mi, 18,7 g, 185 mmol) en 150 mi de D C a -40 °C (hielo seco/CH3CN) . Inmediatamente, la reacción se completa a considerar por CL/EM (2,47 min (EN+) m/z (intensidad relativa) 721 ( [M + H]+, 100)) . La mezcla se diluye en 150 mi de DCM y se lava con 300 mi de HC1 1N, 300 mi de NaHC03 saturado, 300 mi de salmuera, se filtra (a través de un separador de fase) y el solvente se evapora al vacío para proporcionar el producto crudo 2a como un sólido naranja (21,8 g, 82%).
Datos Analíticos: [a]22D = -46,1° (c = 0,47, CHC13) ; RMN XH (400 MHz, CDC13) (rotámeros) d 7,63 (s, 2H) , 6,82 (s, 2H), 4, 79-4, 72 (m, 2H) , 4, 49-4,28 (m, 6H) , 3,96 (s, 6H) , 3,79 (s, 6H) , 3,46-3,38 (m, 2H) , 3,02 (d, 2H, J = 11,1 Hz), 2, 48-2, 30 (m, 4H) , 2,29-2, 04 (m, 4H) ; RMN 13C (100 MHz, CDC13) (rotámeros) d 172,4, 166,7, 154,6, 148,4, 137,2, 127,0, 109,7, 108,2, 69,7, 65,1, 57,4, 57,0, 56,7, 52, 4, 37, 8, 29,0; IR (ATR, CHC13) 3410 (a), 3010, 2953, 1741, 1622, 1577, 1519, 1455, 1429, 1334, 1274, 1211, 1177, 1072, 1050, 1008, 871 cirf1; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 721 ( [M + H)]+, 47), 388 (80); HRMS [ + H] + teórico C3iH36N4016 m/z 721,2199, encontrado (EN+) m/z 721, 2227. (a) 1,1'- [ [ (pentan-1, 5-diil) dioxijbis [ (5-metoxi-2-nitro-1 , 4-fenilen) carbonil ] ]bis [4-hidroxipirrolidin-2-carboxilato] de (2S, R) -metilo] (2b) La preparación a partir de Ib, de acuerdo con el Procedimiento B proporciona el producto puro como una espuma naranja (75,5 g, 82%) .
Datos Analíticos: (EN+) m/z (intensidad relativa) 749 ( [M + H]+, 100) . (b) 1,1 '-[ [ (propan-l,3-diil)dioxi]bis(llaS,2R) -2- (hidroxi) -7-metoxi-l ,2, 3,10, 11 , lla-hexahidro-5H-pirrolo [2 , 1 -c] [1,4] -benzodiazepin-5 , 11-diona ] (3a) Procedimiento A: Una suspensión de 10% de Pd/C (7,5 g, 10% p/p) en 40 mi de D F se agrega a una solución del nitroéster 2a (75 g, 104 mmol) en 360 mi de DMF. La suspensión se hidrogena en un aparato de hidrogenación Parr durante 8 horas. El avance de la reacción se monitorea por CL/EM (2,12 min (EN+) m/z (intensidad relativa) 597 ( [M + H]\ 100), (EN-) m/z (intensidad relativa) 595 ( [M + H] + 100) después de que se ha detenido la captación de hidrógeno. Se separa el Pd/C sólido por filtración y el filtrado se concentra por evaporación giratoria bajo vacio (inferior a 10 mbar) a 40 °C para proporcionar un aceite oscuro que contiene trazas de DMF y carbón vegetal residual. El residuo se digiere en 500 mi de EtOH a 40 °C en un baño de agua (baño de evaporador giratorio) y la suspensión resultante se filtra a través de Celite y se lava con 500 mi de etanol para proporcionar un filtrado claro. Se agregan a la solución hidrato de hidrazina (10 mi, 321 mmol) y la mezcla de reacción se calienta a reflujo. Después de 20 minutos se observa la formación de un precipitado blanco y se permite que el reflujo continué durante 30 minutos adicionales. Se permite que la mezcla se enfrie hasta la temperatura ambiente y el precipitado se recupera por filtración, se lava con dietiléter (2*1 volumen de precipitado) y se seca en un desecador al vacio para proporcionar 3a (50 g, 81%) .
Procedimiento B: Una solución del nitroéster 2a (6,80 g, 9,44 mmol) en 300 mi de MeOH se agrega níquel Raney® (4 extremos de espátula grande de una suspensión ~50% en H2O) y gránulos para evitar burbujeo en un matraz de fondo redondo de 3 cuellos. La mezcla se calienta a reflujo y después se trata a gotas con una solución de hidrato de hidrazina (5,88 mi, 6,05 g, 188 mmol) en 50 mi de MeOH, hasta el punto en el que se observa efervescencia vigorosa. Cuando la adición ha finalizado (~ 30 minutos) se agrega con precaución níquel Raney® adicional hasta que cesa la efervescencia y se descarga el color amarillo inicial de la mezcla de reacción. La mezcla se calienta a reflujo durante 30 minutos adicionales, punto en el cual la reacción se considera completa por CCD (90:10 v/v CHCl3/MeOH) y CL/EM (2,12 min (EN+) m/z (intensidad relativa) 597 ( [M + H]+, 100) ) . Se permite que la mezcla de reacción se enfrie a aproximadamente 40 °C y después el exceso de níquel se separa por filtración a través de un embudo de sinterización sin succión al vacío. El filtrado se reduce en volumen por evaporación al vacío punto en el cual se forma un precipitado incoloro el cual se recolecta por filtración y se seca en un desecador al vacío para proporcionar 3a (5,40 g, 96%).
Datos Analíticos: [a]27 = +404° (c = 0,10, DMF) ; RMN *H (400 MHz, DMSO-d6) d 10,2 (s, 2H, NH) , 7,26 (s, 2H) , 6,73 (s, 2H) , 5,11 (d, 2H, J = 3,98 Hz, OH), 4,32-4,27 (m, 2H) , 4,19-4,07 (m, 6H) , 3,78 (s, 6H) , 3,62 (dd, 2H, J = 12,1, 3, 60 Hz), 3,43 (dd, 2H, J = 12,0, 4,72 Hz) , 2, 67-2, 57 (m, 2H) , 2,26 (?, 2?, J = 5,90 ??), 1, 99-1, 89 (m, 2?) ; RMN 1JC (100 ???, DMSO-d6) d 169,1, 164,0, 149,9, 144,5, 129,8, 117,1, 111,3, 104,5, 54,8, 54,4, 53,1,33,5, 27,5; IR (ATR, puro) 3438, 1680, 1654, 1610, 1605, 1516, 1490, 1434, 1379, 1263, 1234, 1216, 1177, 1156, 1115, 1089, 1038, 1018, 952, 870 cm-1; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 619 ( [M + Na]+, 10), 597 ( [M + H]\ 52), 445 (12), 326 (11); HREM [M + H]+ teórico C29H32N1O10 m/z 597,2191, encontrado (EN+) m/z 597, 2205. (b) l,l'-[ [ (pentan-1, 5-diil) dioxi]bis (llaS,2R) -2- (hidroxi) -7-metoxi-l ,2, 3,10, 11, lla-hexahidro-5H-pirrolo [2, 1-c] [1,4] -benzodiazepin-5, 11-diona] (3b) La preparación a partir de 2b de acuerdo con el Procedimiento A proporciona el producto como un sólido blanco (22, 1 g, 86%) .
Datos Analíticos: EM (EN~) m/z (intensidad relativa) 623, 3 ( [M - H] ~, 100) ; (c) 1,1 '-[{ (propan-1 ,3-diil) dioxi]bis (llaS,2R) -2- (terc-butildi etilsililoxi) -7-metoxi -1 ,2,3,10,11 , 11a-hexahidro-5H-pirrolo [2, 1-c] [1,4] -benzodiazepin-5, 11-diona ] (4a) Se agregan TBSCI (317 mg, 2,1 mmol) e imidazol (342 mg, 5,03 mmol) a una solución turbia de la tetralactama 3a (250 mg, 0,42 mmol) en 6 mi de DMF anhidra. Se permite que la mezcla se agite bajo una atmósfera de nitrógeno durante 3 horas, después de lo cual el tiempo de reacción se considera completo según CL/EM (3,90 min (EN+) m/z (intensidad relativa) 825 ( [M + H]+, 100)) . La mezcla de reacción se vierte en hielo (~ 25 mi) y se permite que se caliente hasta la temperatura ambiente con agitación. El precipitado blanco resultante se recolecta por filtración al vacio, se lava con H20, dietiléter y se seca en el desecador al vacio para proporcionar 4a puro (252 mg, 73%) .
Datos Analíticos: [OÍ]23d = +234° (c = 0,41,CHC13); RMN XH (400 MHz, CDC13) d 8,65 (s, 2H, H) , 7,44 (s, 2H) , 6,54 (s, 2H), 4,50 (p, 2H, J = 5,38 Hz) , 4,21-4,10 (m, 6H) , 3,87 (s, 6H), 3, 73-3, 63 (m, 4H) , 2,85-2, 79 (m, 2H) , 2,36-2,29 (m, 2H) , 2,07-1,99 (m, 2H) , 0,86 (s, 18H) , 0,08 (s, 12H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) d 170, 4, 165, 7, 151, 4, 146, 6, 129,7, 118,9, 112,8, 105,3, 69,2, 65,4, 56,3, 55,7, 54,2, 35,2, 28,7, 25,7, 18,0, -4,82 y -4,86; IR (ATR, CHC13) 3235, 2955, 2926, 2855, 1698, 1695, 1603, 1518, 1491, 1446, 1380, 1356, 1251, 1220, 1120, 1099, 1033 cm"1; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 825 ( [M + H]+, 62), 721 (14), 440 (38); HREM [M + H]+ teórico C^Heo^OioSiz m/z 825, 3921, encontrado (EN+) m/z 825,3948. (c) 1,1 '-[ [ (pentan-1 , 5-diil) dioxi]bis (llaS,2R) -2- (terc-butildimetilsililoxi) -7-metoxi-l ,2, 3,10,11,11a-hexahidro-5H-pirrolo [2, 1 -c] [1,4] -benzodiazepin-5, 11-diona] (4b) La preparación a partir de 3b de acuerdo con el Procedimiento anterior proporciona el producto como un sólido blanco (27,3 g, 93%) .
Datos Analíticos: EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 853, 8 ( [ + H]+ 100), (EN") m/z (intensidad relativa) 851,6 ( [M - ?G, 100. (d) 1,1 ' - [ [ (propan-1 , 3-diil) dioxi]bis (llaS,2R) -2- (terc-bu ildimetilsililoxi) - 7-metoxi -10- ( (2- (trimetilsilil) etoxi)metil) -1,2,3,10,11, lla-hexahidro-5H-pirrolo[2, 1-c] [1 , ] -benzodiazepin-5, 11-diona] (5a) Una solución de n-BuLi (4,17 mi de una solución 1,6 M en hexano, 6,67 mmol) en 10 mi de THF anhidro se agrega a gotas a una suspensión agitada de la tetralactama 4a (2,20 g, 2,67 mmol) en 30 mi de THF anhidro a -30 °C (hielo seco/etilenglicol) bajo una atmósfera de nitrógeno. Se permite que la mezcla de reacción se agite a esta temperatura durante 1 hora (ahora un color naranja rojizo) punto en el cual se agrega a gotas una solución de SEMCI (1,18 mi, 1,11 g, 6,67 mmol) en 10 mi de THF anhidro. Se permite que la mezcla de reacción se caliente lentamente hasta la temperatura ambiente y se agita durante 16 horas bajo una atmósfera de nitrógeno. La reacción se considera completa según CCD (EtOAc) y CL/EM (4,77 min (EN+) m/z (intensidad relativa) 1085 ( [ + H]+ 100)) . Se separa el THF por evaporación al vacio y el residuo resultante se disuelve en 60 mi de EtOAc, se lava con 20 mi de H2O, 20 mi de salmuera, se seca con MgS04, se filtra y se evapora al vacio para proporcionar el producto crudo. La purificación por cromatografía instantánea (80:20 v/v de hexano/EtOAc) proporciona la tetralactama 5a protegida con N10-SEM pura como un aceite (2,37 g, 82%) .
Datos Analíticos: [OÍ]23d = +163° (c = 0, 1, CHC13) ; RMN H (400 MHz , CDCI3) d 7,33 (s, 2H) , 7,22 (s, 2H) , 5,47 (d, 2H, J = 9,98 Hz), 4,68 (d, 2H, J = 9,99 Hz) , 4,57 (p, 2H, J = 5,77 Hz), 4,29-4,19 (m, 6H) , 3,89 (s, 6H) , 3,79-3,51 (m, 8H) , 2,87-2,81 (m, 2H) , 2,41 (p, 2H, J = 5,81 Hz) , 2,03-1,90 (m, 2H), 1,02-0,81 (m, 22H) , 0,09 (s, 12H) , 0,01 (s, 18H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) d 170, 0, 165, 7, 151, 2, 147, 5, 133, 8, 121, 8, 111, 6, 106,9, 78, 1, 69, 6, 67, 1, 65,5, 56, 6, 56,3, 53,7, 35,6, 30,0, 25,8, 18,4, 18,1, -1,24, -4,73; IR (ATR, CHCI3) 2951, 1685, 1640, 1606, 1517, 1462, 1433, 1360, 1247, 1127, 1065 cm"1; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1113 ( [M + Na]+, 48), 1085 ( [M + H]+, 100), 1009 (5), 813 (6); HREM [M + H]+ teórica C53H88 4Oi2Si4 m/z 1085,5548, encontrado (EN+) m/z 1085,5542. (d) 1,1 ' - [ [ (pentan-1 , 5-diíl) dioxijbis (llaS,2R) -2- (terc-butildimetilsililoxi) -7-metoxi-10- ( (2- (trimetilsilil) etoxi)metil) -1 , 2, 3, 10, 11 , lla-hexahidro-5H-pirrolo[2, 1-c] [1,4] -benzodiazepin-5 , 11-diona] (Sb) La preparación a partir de 4b de acuerdo con el Procedimiento novedoso proporciona el producto como una espuma naranja claro (46,9 g, 100%), utilizada sin purificación adicional.
Datos Analíticos: EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1114 ( [M + H]+, 90), (EN") m/z (intensidad relativa) 1158 ( [M + 2Na] " 100) . (e) 1,1 '-[ [ (propan-1 , 3-diil) dioxi]bis (llaS,2R) -2-hidroxi-T-metoxi-10- ( (2- (trimetilsilil) etoxi) metil) -1,2,3, 10, 11, lla-hexahidro-5H-pirrolo [2, 1-c] [1,4]-benzodiazepin-5, 11-diona] (6a) Una solución de TBAF (5,24 mi de una solución 1,0 M en THF, 5,24 mmol) se agrega a una solución agitada de bis-silil éter 5a (2,58 g, 2,38 mmol) en 40 mi de THF a temperatura ambiente. Después de agitar durante 3,5 horas, el análisis de la mezcla de reacción por CCD (95:5 v/v CHCls/ eOH) mostró que la reacción había finalizado. La mezcla de reacción se vierte en una solución de 100 mi de NH4C1 saturado y se extrae con 30 mi de EtOAc, 3 veces. Las capas orgánicas combinadas se lavan con 60 mi de salmuera, se secan con MgSC>4, se filtran y evaporan al vacío para proporcionar el producto crudo. La purificación por cromatografía instantánea (gradiente de elusión: 100% de CHC13 a 96:4 v/v de CHCl3/MeOH) proporciona la tetralactama 6a pura como una espuma blanca (1,78 g, 87%) .
Datos Analíticos: [a]23D = +202° (c = 0,34, CHC13) ; RMN XH (400 MHz , CDC13) d 7,28 (s, 2H) , 7,20 (s, 2H) , 5,44 (d, 2H, J = 10,0 Hz), 4,72 (d, 2H, J = 10,0 Hz), 4,61-4,58 (m, 2H), 4,25 (t, 4H, J = 5,83 Hz) , 4,20-4,16 (m, 2H) , 3,91-3,85 (m, 8H) , 3, 77-3,54 (m, 6H) , 3,01 (s amplio, 2H, OH), 2,96-2,90 (m, 2H) , 2,38 (p, 2H, J = 5,77 Hz), 2,11-2,05 (m, 2H) , 1,00-0,91 (m, 4H) , 0,00 (s, 18H) ; RMN 13C (100 MHz , CDC13) d 169, 5, 165, 9, 151, 3, 147,4, 133,7, 121, 5, 111, 6, 106,9, 79,4, 69,3, 67,2, 65,2, 56,5, 56,2, 54,1,35,2, 29,1,18,4, -1,23; IR (ATR, CHCl3) 2956, 1684, 1625, 1604, 1518, 1464, 1434, 1361, 1238, 1058, 1021 cm"1; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 885 ( [M + 29]+, 70), 857 ( [M + H]+, 100), 711 (8), 448 (17); HREM [M + H]+ teórico C iHeo^OizSiz m/z 857,3819, encontrado (EN+) m/z 857,3826. (e) 1,1' - I I (pentan-l,5-diil) dioxi]bis (llaS,2R) -2-hidroxi-7-metoxi-10- ( (2- (trimetilsilil) etoxi) metil) - 1 , 2, 3, 10, 11 , lla-hexahidro-5H-pirrolo [2, 1-c] [1,4] -benzodiazepin-5, 11-diona] (6b) La preparación de 5b de acuerdo con el Procedimiento anterior proporciona el producto como una espuma blanca (15, 02 g) .
Datos Analíticos: EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 886 ( [M + H]\ 10), 739, 6 (100), (EN") m/z (intensidad relativa) 884 ( [M - H]~, 40) . (f) 1,1 '-[ [ (propan-1, 3-diil) dioxi]bis [ (llaS) -11-sulfo-7'-metoxi-2-oxo-10- ( (2- (trimetilsilil) etoxi) metil) - 1,2, 3, 10, 11, lia -hexahidro-5H-pirrolo [2, 1-cJ -[1 , 4] benzodiazepin-5 , 11-diona] ] (7a) Procedimiento A: Una solución de hipoclorito de sodio 0,37 M (142,5 mi, 52,71 mmol, 2,4 equivalentes) se agrega a gotas a una mezcla agitada vigorosamente del diol 6a (18,8 g, 21,96 mmol, 1 equivalente), TEMPO (0,069 g, 0,44 mmol, 0,02 equivalentes) y una solución de bromuro de potasio 0,5 M (8,9 mi, 4,4. mmol, 0,2 equivalentes) en 115 mi de DCM a 0 °C. La temperatura se mantiene entre 0 °C y 5 °C al ajustar la velocidad de adición. La emulsión amarilla resultante se agita de 0 °C a 5 °C durante 1 hora. La CCD (EtOAc) y CL/E [3,53 min (EN+) m/z (intensidad relativa) 875 ( [ + Na]+, 50), (EN") m/z (intensidad relativa) 852 ( [M - H]~, 100)] indica que la reacción ha finalizado.
La mezcla de reacción se filtra, la fase orgánica se separa y la fase acuosa se retrolava con DCM (2 veces) . Las porciones orgánicas combinadas se lavan con salmuera (1 vez) , se secan con MgS04 y se evaporan para proporcionar una espuma amarilla. La purificación por cromatografía en columna instantánea (gradiente de elusión 35/65 v/v de n-hexano/EtOAC, 30/70 a 25/75 v/v de n-hexano/EtOAC) proporciona la bis-cetona 7a como una espuma blanca (14,1 g, 75%) .
Se utiliza una solución de hipoclorito de sodio, grado reactivo, disponible con cloro 10-13%. Esto se supone que es 10% (10 g de NaClO en 100 g) y se calcula que es 1,34 M en NaClO. Se prepara una solución concentrada a partir de esto al diluirla a 0,37M con agua. Esto proporciona una solución de aproximadamente pH 14. Se ajusta el pH a 9,3 a 9,4 mediante la adición de NaHCC>3 sólido. Una alícuota de este concentrado se utiliza después de manera que proporciona 2,4 moles equivalentes para la reacción. Ante la adición de la solución blanqueadora se observa un incremento inicial en la temperatura. Se controla la velocidad de adición para mantener la temperatura entre 0 °C y 5 °C. La mezcla de reacción se forma como una emulsión de color amarillo limón espesa.
La oxidación es una adaptación del procedimiento descrito por Thomas Fey el al, J. Org. Chem., 2001, 66, 8154-8159.
Procedimiento B: Se agrega en porciones TCCA sólido (10,6 g, 45,6 mmol) a una solución agitada de alcohol 6a (18,05 g, 21,1 mmol) y TEMPO (123 mg, 0,78 mmol) en 700 mi de DCM anhidro a 0 °C (hielo/acetona) . La mezcla de reacción se agita a 0 °C bajo una atmósfera de nitrógeno durante 15 minutos tiempo después del cual la CCD (EtOAc) y CL/E [3,57 min (EN+) m/z (intensidad relativa) 875 ( [M + Na]+, 50)] muestra que la reacción ha finalizado. La mezcla de reacción se filtra a través de Celite y el filtrado se lava con 400 mi de NaHC03 acuoso saturado, 400 mi de salmuera, se seca con MgSC , se filtra y se evapora al vacio para proporcionar el producto crudo. La purificación por cromatografía instantánea en columna (80:20 v/v EtOAc/hexano) proporciona la bis-cetona 7a como una espuma (11,7 g, 65%) .
Procedimiento C: Una solución de DMSO anhidro (0,72 mi, 0,84 g, 10,5 mmol) en 18 mi de DCM seco se agrega a gotas durante un período de 25 min a una solución agitada de cloruro de oxalilo (2,63 mi de una solución 2,0 M en DCM, 5,26 mmol) bajo una atmósfera de nitrógeno a -60 °C (N2/CHCI3 líquido) . Después de agitar a -55 °C durante 20 minutos una suspensión del sustrato 6a (1,5 g, 1,75 mmol) en 36 mi de DCM seco se agrega a gotas durante un periodo de 30 min a la mezcla de reacción. Después de agitar durante 50 minutos adicionales a -55 °C, se agrega a gotas una solución de TEA (3,42 mi, 2,49 g; 24,6 mmol) en 18 mi de DCM seco durante un periodo de 20 min a la mezcla de reacción. Se permite que la mezcla de reacción agitada se caliente hasta la temperatura ambiente (-1,5 h) y después se diluye con 50 mi de DCM. La solución orgánica se lava con 25 mi de HC1 1N, 2 veces, 30 mi de H20, 30 mi de salmuera y se seca con MgS04. La filtración y evaporación del solvente al vacío proporciona el producto crudo el cual se purifica por cromatografía en columna instantánea (80:20 v/v de EtOAc/hexano) para proporcionar la bis-cetona 7a como una espuma (835 mg, 56%) Datos Analíticos: [ ]20D = +291° (c = 0,26, CHC13) ; RMN H (400 MHz, CDCI3) d 7,32 (s, 2H) , 7,25 (s, 2H) , 5,50 (d, 2H, J = 10,1 Hz), 4,75 (d, 2H, J = 10,1 Hz) , 4,60 (dd, 2H, J = 9, 85,3, 07 Hz), 4,31-4,18 (m, 6H) , 3, 89-3, 84 (m, 8H) , 3, 78-3, 62 (m, 4H) , 3,55 (dd, 2H. J= 19,2, 2,85 Hz), 2,76 (dd, 2H, J = 19,2. 9,90 Hz) , 2,42 (p, 2H, J = 5,77 Hz) , 0,98-0,91 (m, 4H) , 0,00 (s, 18H) ; RMN 13C (100 MHz, CDC13) d 206,8, 168,8, 165,9, 151,8, 148,0, 133,9, 120,9, 111,6, 107,2, 78,2, 67,3, 65,6, 56,3, 54,9, 52,4, 37,4, 29,0, 18,4, -1,24; IR (ATR, CHC13) 2957, 1763, 1685, 1644, 1606, 1516, 1457, 1434, 1360, 1247, 1209, 1098, 1066, 1023 cm"1; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 881 ( [M + 29]+ 38), 853 ( [M + H]\ 100), 707 (8), 542 (12); HREM [M + H]+ teórico C41H56N4Oi2SÍ2 m/z 853, 3506, encontrado (EN+) m/z 853, 3502. (f) 1,1 '-[ [ (pentan-1, 5-diil) dioxi]bis [ (llaS) -11-sulfo-7-metoxi-2-oxo-10- ( (2- (trimetilsilil) etoxi) metil) -1,2,3, 10 , 11 , lla-hexahidro-5H-pirrolo [2, 1-c]-[1 , 4]benzodiazepin-5 , 11-diona] ] (7b) La preparación a partir de 6b de acuerdo con el Procedimiento C proporciona el producto como una espuma blanca (10,5 g, 76%) .
Datos Analíticos: EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 882 ( [M + H]+, 30), 735 (100), (EN") m/z (intensidad relativa) 925 ( [M + 45]", 100), 880 ( [M - H] ", 70) . (g) !,!'-[[ (propan-1 , 3-diil) dioxi]bis (llaS) -7-metoxi-2-[ [ (trifluorometil) sulfonil] oxi] -10- ( (2- (trimetilsilil) etoxi)metil) -1 , 10, 11 , lla-tetrahidro-5H-pirrolo [2, 1-c] [1,4] -benzodiazepin-5, 11-diona (8a) Se inyecta 2,6-lutidina anhidra (5,15 mi, 4,74 g, 44,2 mmol) en una porción a una solución agitada vigorosamente de bis-cetona 7a (6,08 g, 7,1 mmol) en 180 mi de DCM seco a -45 °C (baño de enfriamiento con hielo seco/acetonitrilo) bajo una atmósfera de nitrógeno. Se inyecta rápidamente a gotas anhídrido tríflico anhidro, tomado de una ampolleta recién abierta (7,2 mi, 12,08 g, 42,8 mmol), mientras se mantiene la temperatura a -40 °C o inferior. Se permite que la mezcla de reacción se agite a -45 °C durante 1 hora, punto en el cual la CCD (50/50 v/v de n-hexano/EtOAc) muestra el consumo completo del material inicial. La mezcla de reacción fría se diluye de inmediato con 200 mi de DCM y, con agitación vigorosa, se lava con 100 mi de agua 1 vez, con 200 mi de una solución de ácido cítrico 5%, 1 vez, con 200 mi de NaHCC>3 saturado, 100 mi de salmuera y se seca con MgSO^. La filtración y evaporación del solvente al vacío proporciona el producto crudo el cual se purifica por cromatografía instantánea en columna (gradiente de elusión: 90, 10 v/v de n-hexano/EtOAc a 70:30 v/v de n-hexano/EtOAc) para proporcionar bis-enoltriflato 8a como una espuma amarilla (5,5 g, 70%) .
Datos Analíticos: [a]24D = +271° (c = 0,18, CHC13) ; RMN ?? (400 MHz, CDC13) d 7,33 (s, 2H) , 7,26 (s, 2H) , 7,14 (t, 2H, J = 1,97 Hz), 5,51 (d, 2H, J= 10,1 Hz), 4,76 (d, 2H, J= 10,1 Hz), 4,62 (dd, 2H, J = 11,0, 3,69 Hz) , 4,32-4,23 (m, 4H), 3, 94-3, 90 (m, 8H) , 3,81-3,64 (m, 4H) , 3,16 (ddd, 2H, J= 16,3, 11,0, 2,36 Hz) , 2,43 (p, 2H, J = 5,85 Hz) , 1,23-0,92 (m, 4H) , 0,02 (s, 18H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) d 167,1, 162,7, 151,9, 148,0, 138,4, 133,6, 120,2, 118,8, 111,9, 107,4, 78,6, 67,5, 65,6, 56,7, 56,3, 30,8, 29,0, 18,4, -1,25; IR (ATR, CHC13) 2958, 1690, 1646, 1605, 1517, 1456, 1428, 1360, 1327, 1207, 1136, 1096, 1060, 1022, 938, 913 cm"1; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1144 ( [M + 28]+, 100), 1117 ( [M + H]+ 48), 1041 (40), 578 (8); HREM [M + H]+ teórico C43H54 4Oi8SÍ2S2F6 m/z 1117, 2491, encontrado (EN+) m/z 1117,2465. (g) 1, 1 ' - [ [ (pentan-1, 5-diil) dioxi]bis (llaS) -7-metoxi-2-[ [ (trifluorometil) sulfonil] oxi] -10- ( (2- (trimetilsilil) etoxi) metil) -1 , 10, 11 , lla-tetrahidro-5H-pirrolo[2, 1-c] [1,4] -benzodiazepin-5, 11-diona] (8b) La preparación a partir de 7b de acuerdo con el procedimiento anterior proporciona el bis-enol triflato como una espuma amarilla claro (6,14 g, 82%) .
Datos Analíticos: (EN+) m/z (intensidad relativa) 1146 ( [M + H]+, 85) .
Ejemplo 1 (a) (S) -2- (4-aminofenil) -7-metoxi-8- (3- ( (S) -7-metoxi-2- (trifluoro etilsulfonil) -5, ll-dioxo-10- ( (2- (trimetilsilil) etoxi) metil) -5, 10,11, lla-tetrahidro-lH-pirrolo [2, 1-c] [1,4]benzodiazepin-8-iloxi)propoxi) -10- ( (2- (trimetilsilil) etoxi) metil) -lH-pirrolo [2, 1-c] -[1 , 4]benzodiazepin-5,11 (10H,llaH) -diona (9) Se agrega Pd(PPh3)4 sólido (20,18 mg, 17,46 mmol)a una solución agitada del triflato 8a (975 mg, 0,87 mmol) , 4- (4,4,5, 5-tetrametil-l, 3, 2-dioxaborolano-2-il ) anilina (172 mg, 0,79 mmol) y Na2C03 (138 mg, 3,98 moles) en 13 mi de tolueno, 6,5 mi de EtOH y 6,5 mi de H20. Se permite que la solución oscura se agite bajo una atmósfera de nitrógeno durante 24 horas tiempo después del cual el análisis por CCD (EtOAc) y CL/EM muestra la formación del producto monoacoplado deseado y asi como la presencia de material inicial que no ha reaccionado. Se separa el solvente por evaporación giratoria bajo presión reducida y el residuo resultante se divide entre 100 mi de H20 y 100 mi de EtOAc, después de separación posterior de las capas, la fase acuosa se extrae nuevamente con 25 mi de EtOAc, 2 veces. Las capas orgánicas combinadas se lavan con 50 mi de H20, 60 mi de salmuera, se secan con MgS04, se filtran y evaporan al vacio para proporcionar el producto de Suzuki crudo. El producto de Suzuki crudo se somete a cromatografía instantánea (EtOAc 40%/hexano 60% -» EtOAc 70%/hexano 30%) . La eliminación del exceso de eluyente por evaporación giratoria bajo presión reducida proporciona 399 mg del producto 9 deseado con un rendimiento de 43%.
RMN XH: (CDC13, 400 MHz) d 7,40 (s, 1H) , 7,33 (s, 1 H) , 7,27 (s amplio, 3H) , 7,24 (d, 2H, J = 8,5 Hz) , 7,15 (t, 1H, J = 2,0 Hz), 6,66 (d, 2H, J = 8,5 Hz) , 5,52 (d, 2H, J = 10,0 Hz), 4,77 (d, 1H, J = 10,0 Hz), 4,76 (d, 1 H, J = 10,0 Hz), 4,62 (dd, 1 H, J = 3,7, 11,0 Hz) , 4,58 (dd, 1H, J = 3,4, 10,6 Hz), 4,29 (t, 4H, J = 5,6 Hz), 4,00-3,85 (m, 8H) , 3, 80 - 3, 60 (m, 4H) , 3,16 (ddd, 1H, J = 2,4, 11,0, 16,3 Hz), 3,11 (ddd, 1H, J = 2,2, 10,5, 16,1 Hz), 2,43 (p, 2H, J = 5,9 Hz), 1,1-0,9 (m, 4H) , 0,2 (s, 18H) . RMN 13C: (CDC13, 100 MHz) d 169,8, 168,3, 164,0, 162,7, 153,3, 152,6, 149,28, 149,0, 147,6, 139,6, 134,8, 134,5, 127,9 (metino) , 127,5, 125,1, 123,21, 121,5, 120,5 (metino), 120,1 (metino), 116,4 (metino), 113,2 (metino), 108,7 (metino), 79,8 (metileno) , 79,6 (metileno) , 68,7 (metileno) , 68,5 (metileno), 67,0 (metileno), 66,8 (metileno), 58,8 (metino) , 58,0 (metino) , 57,6 (metoxi) , 32,8 (metileno) , 32,0 (metileno), 30,3 (metileno), 19,7 (metileno), 0,25 (metilo) . (b) (S) -2- (4-aminofenil) -7-metoxi-8- (3- ( (S) -7-metoxi-2- (4 -metoxifenil) -5, ll-dioxo-10- ( (2- (trimetilsilil) etoxi) metil) -5,10,11, lla-tetrahidro-lH-pirrolo [2, 1-c] [1, 4]benzodiazepin-8-iloxi)propoxi) -10- ( (2- (trimetilsilil) etoxi) metil) -lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 ,4] -benzodiazepin-5, 11 (10H, llaH) -diona (10) Se agrega Pd(PPh3)4 sólido (10 mg, 8,69 µp???) a una solución agitada del mono-triflato 9 (230 mg, 0,22 mmol) en 3 mi de tolueno, 10 mi de EtOH, con ácido 4-metoxifenil borónico (43 mg, 0,28 mmol), Na2CC>3 (37 mg, 0,35 mmol), en 1,5 mi de H20 a temperatura ambiente. Se permite que la mezcla de reacción se agite bajo una atmósfera de nitrógeno durante 20 h punto en el cual la reacción se considera completa tomando en consideración CL/EM y TCL (EtOAc) . El solvente se separa por evaporación giratoria bajo presión reducida al vacio y el residuo resultante se divide entre 75 mi de EtOAc y 75 mi de H20. La fase acuosa se extrae con 30 mi de EtOAc, 3 veces, y las capas orgánicas combinadas se lavan con 30 mi de H20, 40 mi de salmuera, se secan con MgSC , se filtran y evaporan para proporcionar el producto crudo. El producto crudo se purifica por cromatografía instantánea (hexano 60%:EtOAc 40% ? EtOAc 80%: hexano 20%) para proporcionar el dímero puro como una espuma naranja. La separación del eluyente en exceso bajo presión reducida proporciona 434 mg del producto 10 deseado con un rendimiento de 74%.
RMN ½: (CDC13, 400 MHz) d 7,38 (s, 2H) , 7,34 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 7,30 (s amplio, 1H) , 7, 26-7,24 (m, 3H) , 7,22 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 6,86 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 6,63 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 5,50 (d, 2H, J = 10,0 Hz), 4,75 (d, 1H, J = 10,0 Hz), 4,74 (d, 1H, J = 10,0 Hz) , 4,56 (td, 2 H, J = 3,3, 10,1 Hz), 4,27 (t, 2H, J = 5,7 Hz), 4, 00-3, 85 (m, 8H) , 3,80 (s, 3H), 3, 77-3, 60 (m, 4H) , 3,20-3, 00 (m, 2H) , 2,42 (p, 2H, J = 5,7 Hz), 0,96 (t, 4H, J = 8,3 Hz) , 0,00 (s, 18H) . RMN 13C: (CDCI3, 100 MHz) d 169, 8, 169, 7, 162, 9, 162,7, 160,6, 152,7, 152,6, 149,0, 147,5, 134,8, 127,8 (metino), 127,4, 126,8, 125,1, 123,1, 123,0, 121,5 (metino) , 120,4 (metino), 116,4 (metino), 115,5 (metino), 113,1 (metino), 108,6 (metino), 79,6 (metileno) , 68,5 (metileno) , 66,9 (metileno), 58,8 (metino), 57,6 (metoxi) , 56,7 (metoxi), 32,8 (metileno), 30,3 (metileno), 19,7 (metileno), 0,0 (metilo) . (c) (S) -2- (4-a inofenil) -7-metoxi-8- (3- ( (S) -7-metoxi-2- (4 -metoxifenil) -5-oxo-5, lla-dihidro-lH-pirrolo [2,1-c] [1 ,4]benzodiazepin-8-iloxi)propo i) -lH-pirrol [2,1-c] [1,4]benzodiazepin-5 (llaH) -ona (11) Se agrega LiBH4 fresco (183 mg, 8,42 mmol) a una solución agitada de SEM-dilactama 10 (428 mg, 0,42 mmol) en 5 mi de THF y 5 mi de EtOH a temperatura ambiente. Después de 10 minutos, se observa efervescencia vigorosa retrasada que requiere que el recipiente de reacción sea colocado en un baño con hielo. Después de retirar del baño con hielo se permite que la mezcla se agite a temperatura ambiente durante 1 hora. El análisis por CL/EM en este punto muestra consumo total del material inicial con muy poco producto monorreducido . La mezcla de reacción se vierte en 100 mi de hielo y se permite que se caliente a temperatura ambiente con agitación. La mezcla acuosa se extrae con 30 mi de DCM tres veces y las capas orgánicas combinadas se lavan con 20 mi de H20, 30 mi de salmuera y se concentran al vacio. El residuo resultante se trata con 5 mi de DCM, 14 mi de EtOH, 7 mi de H20 y 10 g de gel de sílice. Se permite que la mezcla viscosa se agite a temperatura ambiente durante 3 días. La mezcla se filtra lentamente a través de un embudo de sinterización y el residuo de sílice se lava con CHCI3 90%: MeOH 10% (-250 mi) hasta que la actividad UV se extingue completamente del eluyente. La fase orgánica se lava con 50 mi de H2O, 60 mi de salmuera, se seca con MgS04, se filtra y se evapora al vacío para proporcionar el material crudo. El producto crudo se purifica por cromatografía instantánea (CHC13 97%: MeOH 3%) para proporcionar el dímero de PBD 11 C2/C2' aril puro (185 mg) , 61% de rendimiento.
RMN-^H: (CDCI3, 400 MHz) d 7,88 (d, 1H, J = 4,0 Hz) , 7,87 (d, 1H, J = 4,0 Hz), 7,52 (s, 2H) ; 7,39 (s amplio, 1H), 7,37-7,28 (m, 3H) , 7,20 (d, 2H, J = 8,5 Hz) , 6,89 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 6,87 (s, 1H) , 6,86 (s, 1H) , 6,67 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 4,40-4,20 (m, 6H) , 3,94 (s, 6H) , 3,82 (s, 3H) , 3,61-3,50 (m, 2H) , 3, 40-3, 30 (m, 2H) , 2, 47-2, 40 (m, 2H) . RMN-13C: (CDCI3, 100 MHz) d 162,5 (imina metino) , 161,3, 161, 1, 159, 3, 156, 0, 151, 1, 148, 1, 146,2, 140, 3, 126,2 (metino), 123,2, 122,0, 120,5 (metino), 119,4, 115,2 (metino), 114,3 (metino), 111,9 (metino), 111,2 (metino), 65,5 (metileno) , 56,2 (metoxi) , 55,4 (metoxi), 53,9 (metino), 35,6 (metileno), 28,9 (metileno) .
Ejemplo 2 2- (4-metoxifenil) -5, ll-dioxo-10- ( (2- (trimetilsilil) etoxi)metil) -5, 10, 11 , lla-tetrahidro-lH-pirrolo [2, 1-c] [1, 4]benzodiazepin-8-iloxi)pentiloxi) -10- ( (2- (trimetilsilil) etoxi) metil) -lH-pirrolo [2, 1 -c] [1 , 4]benzodiazepin-5 , 11 (10H,llaH) -diona (12) Se agrega Pd(PPh3)4 sólido (32 mg, 27,7 µ?t???) a una solución agitada del bis-triflato 8b (1,04 g, 0,91 mmol) en 10 mi de tolueno, 5 mi de EtOH con ácido 4-metoxifenilborónico (0,202 g, 1,32 mmol), Na2C03 (0,169 g, 1,6 mmol) en 5 mi de H20 a 30°C. Se permite que la mezcla de reacción se agite bajo una atmósfera de nitrógeno durante 20 horas. Se agregan 4- (4, 4, 5, 5-tetrametil-l , 3, 2-dioxaboralan-2-il) anilina sólida adicional (0,203 g, 0,93 mmol) y Na2C03 (0,056 g, 0,53 mmol) seguido por Pd(PPh3)4 sólido (10 mg, 8,6 µ????) . Se permite que la mezcla de reacción se agite bajo una atmósfera de nitrógeno durante 20 horas adicionales. La CL/EM indica la formación del producto deseado. Se agregan 100 mi de EtOAc y 100 mi de H20, la fracción acuosa se separa y se extrae con 30 mi de EtOAc tres veces. Las capas orgánicas combinadas se lavan con 100 mi de H20, 100 mi de salmuera, se secan con MgS04, se filtran y evaporan para proporcionar un aceite café oscuro. El aceite se disuelve en DCM y se aisla sobre 10 g de un cartucho SCX-2 preequilibrado con 1 volumen de DCM. El cartucho se lava con 3 volúmenes de DCM, 3 volúmenes de MeOH y el producto crudo se eluye con NH3 2M en 2 volúmenes de MeOH. La cromatografía instantánea (n-hexano 50%: EtOAc 50% -» n-hexano 20%: EtOAc 80%) proporciona el dimero 12 puro como una espuma amarilla (0,16 g, 34%) .
Datos analíticos: [a]23D = +388° (c = 0,22, CHC13) ; RMN^H: (CDC13, 400 MHz) d 7,39 (s, 2H) , 7,35 (d, 2H, J = 12,8 Hz), 7,32 (s amplio, 1H) , 7, 26-7, 23 (m, 5H) , 6,89 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 6,66 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 5,55 (d, 2H, J = 10,0 Hz), 4,73 (d, 1H, J = 10,0 Hz) , 4,72 (d, 1H, J = 10,0 Hz), 4,62 (td, 2 H, J = 3,2, 10,4 Hz) , 4,15-4,05 (m, 4H) , 4,00-3,85 (m, 8H) , 3,82 (s, 3H) , 3,77-3,63 (m, 4H) , 3,20-3,05 (m, 2H) , 2,05-1,95 (m, 4H) , 1,75-1,67 (m, 2H) , 1,01-0,95 (m, 4H) , 0,03 (s, 18H) ; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1047 ( [M + H]+; 45) . (b) (S) -2- (4-aminofenil) -T-metoxi-8- (5- ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5, lla-dihidro-lH-pirrolo [2,1- c] [1,4]benzodiazepin-8-iloxi)pentiloxi) -lH-pirrolo [2, 1 -c] [1 ,4]benzodiazepin-5 (llaH) -ona (13) Se agrega LiBH4 fresca (66 mg, 3,04 mmol) a una solución agitada de la SEM-dilactama 12 (428 mg, 0,42 mmol) en 3 mi de THF y 3 mi de EtOH en un baño con hielo a 0°C. Se retira el baño con hielo y la mezcla de reacción se permite que alcance la temperatura ambiente (efervescencia vigorosa) . Después de 2 horas, el análisis por CL/EM indica el consumo completo del material inicial. La mezcla de reacción se vierte en 50 mi de hielo y se permite que se caliente hasta la temperatura ambiente, con agitación. La mezcla acuosa se extrae con 50 mi de DCM, tres veces y las capas orgánicas combinadas se lavan con 50 mi de ¾0, 50 mi de salmuera, se secan con MgS04 y se concentran al vacio. El residuo resultante se trata con 2 mi de DCM, 5 mi de EtOH, 2,5 mi de H2O y 3,7 g de gel de sílice. Se permite que la mezcla viscosa se agite a temperatura ambiente durante 3 días. La mezcla se filtra a través de un embudo de sinterización y el residuo de sílice se lava con CHCI3 90%: MeOH 10% (~250 mi) hasta que la actividad UV se extingue por completo del eluyente. La fase orgánica se seca con MgS04, se filtra y se evapora al vacío para proporcionar el material crudo. El producto crudo se purifica por cromatografía instantánea (CHCI3 99,5%: MeOH 0,5% hasta CHC13 97,5%: MeOH 2,5% con incrementos de 0,5%)) para proporcionar el dímero 13 PBD aril C2/C2' puro (59 mg, 52%) .
Datos analíticos: [a]23D = +760° (c = 0,14, CHC13) ; RMN^H: (400 Hz, CDC13) d 7,89 (d, 1H, J = 4,0 Hz), 7,87 (d, 1H, J = 4,0 Hz), 7,52 (s, 2H) , 7,39 (s amplio, 1H) , 7,37-7,28 (m, 3H) , 7,22 (d, 2H, J = 8,4 Hz) , 6,91 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 6,815 (s, 1H) , 6,81 (s, 1H) , 6,68 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 4, 45-4,35 (m, 2H) , 4,2-4,0 (m, 4H) , 3,94 (s, 6H) , 3,85-3,7 (s, 3H), 3, 65-3, 50 (m, 2H) , 3,45-3,3 (m, 2H) , 2, 05-1, 9 (m, 4H) , 1, 75-1, 65 (m, 2H) ; EM (EN+) (intensidad relativa) 754, 6 ( [M + H]+; 100), (EN") (intensidad relativa) 752,5 ( [M - H]~; 100).
Ejemplo 3 (a) (S) -2- (tien-2-il) -7-metoxi-8- (3-((S) -7-metoxi-2- (trifluorometansulfoniloxi) -5, ll-dioxo-10- ( (2- (trimetilsilil) etoxi)metil) -5,10,11 , lla-tetrahidro-lH-pirrolo [2, 1-c] [1,4]benzodiazepin-8-iloxi)propiloxi) -10 ( (2- (trimetilsilil) etoxi)metil) -lH-pirrolo [2,1-c] [1 , 4]benzodiazepin-5, 11 (10H,llaH) -diona (14) Se agrega Pd(PPh3)4 sólido (41 mg, 0,036 mmol) a una solución agitada de bis-triflato 8a (1 g, 0,9 mmol) en 10 mi de tolueno, 5 mi de EtOH con ácido tien-2-il borónico (149 mg, 1,16 mmol), Na2C03 (152 mg, 1,43 mmol) en 5 mi de H20. Se permite que la mezcla de reacción se agite bajo una atmósfera de nitrógeno durante la noche a temperatura ambiente. El solvente se separa por evaporación al vacío y el residuo resultante se divide entre 100 mi de H20 y 100 mi de EtOAc. La capa acuosa se extrae con 30 mi de EtOAc, dos veces, y las capas orgánicas combinadas se lavan con 50 mi de H2O, 50 mi de salmuera, se secan con MgSC>4 se filtran y se evaporan al vacío para proporcionar el producto crudo el cual se purifica por cromatografía instantánea (hexano 80: EtOAc 20 -> hexano 50: EtOAc 50) para proporcionar el dímero 14 (188 mg, 20% de rendimiento) .
Datos analíticos: CL-EM RT 4,27 min, 1051 (M + H) ; RMN-1H : (400 MHz , CDC13) d 7,36 (s, 1H) , 7,31 (s amplio, 1H), 7,27 (s amplio, 1H) , 7,26-7,23 (m, 2H) , 7,22-7,17 (m, 1H), 7,12 (s amplio, 1H) , 7, 02- 6 , 96 (m, 2H) , 5,50 (d, J = 10,0 Hz, 2H) , 7,75 (d, J = 10,0 Hz, 2H) , 4, 65-4,55 (m, 2H) , 4,37-4,13 (m, 4H) , 4, 00-3, 85 (m, 8H) , 3,8-3 , 6 (m, 4H) , 3,20-3,10 (m, 2H) , 2, 50-2,35 (m, 2H) , 1,0-0, 9 (m, 4H) , 0 (s, 18H) . (b) (S) -2- (tien-2-il) -7-metoxi-8- (3- ( (S) -7-metoxi-2- (trifluorometansulfoniloxi) -5, ll-dioxo-10- ( (2- (trimetilsilil) etoxi)metil-5, 10, 11 , lla-te rahidro-lH-pirrolo [2, 1-c] [1,4]benzodiazepin-8-iloxi)pentiloxi) -10- ( (2- (trimetilsilil) etoxi)metil) -IH-pirrolo [2,1-c] [1 , 4]benzodiazepin-5, 11 (10H,llaH) -diona (15) .
Se agrega Pd(PPh3) sólido (7, 66 mg, 6 , 63 pmol) a una solución turbia y agitada de 14 (174 mg, 0,17 mmol) , Na2C03 (28 mg, 0,22 mmol) y 4- (4, 4, 5 , 5-tetrametil-l, 3 , 2-dioxaborolan-2-il) anilina (47 mg, 0,22 mmol) en 2-5 mi de tolueno, 1,25 mi de EtOH y 125 mi de H20 a temperatura ambiente. Se permite que la mezcla de reacción se agite bajo una atmósfera de N2 durante 24 horas, punto en el cual la reacción se considera completa por el pico principal de CL/E (@ 3,97 min, F = 1016, M+Na) y CCD (EtOAc) . El solvente se separa por evaporación al vacio y el residuo resultante se divide entre 60 mi de EtOAc y 30 mi de H20. Las capas se separan y la fase orgánica se lava con 20 mi de H20, 30 mi de salmuera y se seca con MgS04, se filtra y se evapora al vacio para proporcionar 123 mg del producto crudo, 75% de rendimiento.
Datos analíticos: CL-EM temperatura ambiente 3,98 min, 100% de área, 994 (M + H) ; RMN-Hi: (400 MHz CDC13) d 7,40 (d, J = 5,3 Hz, 2H) , 7,30 (t, J = 1,70 Hz, 1H) , 7,29-7,27 (m, 3H), 7,25 (d, J = 8,5 Hz, 2H) , 7,21 (dd, J = 1,4, 4,73 Hz, 1H) , 7,03-6,97 (m, 2H) , 6,66 (d, J = 8,5 Hz, 2H) , 5,52 (d, J = 10,0 Hz, 2H) , 4,78 (d, J = 10,0 Hz, 1H) , 4,77 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,62 (dd, J = 3,4, 10,5 Hz, 1H) , 4,59 (dd, J = 3,40, 10,6 Hz, 1H) , 4,30 (t, J = 5,85 Hz, 4H) , 3,85-4,03 (m, 8H), 3,84-3,64 (m, 6H) , 3,18 (ddd, J = 2,2, 10,5, 16,0 Hz, 1H) , 3,11 (ddd, J = 2,2, 10,5, 16,0 Hz, 1H) , 2,44 (p, J = 5,85 Hz, 2H) , 0,98 (t, J = 1,5 Hz, 4H) , 0 (s, 18H) . (c) (S) -2- (tien-2-il) -l-metoxi-8- (3- ( (S) -7-metoxi-2- (4-aminofenil) -5-oxo-5, lia -dihidro-lH-pirrolo [2, 1-c] [1, 4]benzodiazepin-8-iloxi)propiloxi) -lH-pirrolo[2,1- c] [1 , 4]benzodiazepin-5- (llaH) -ona (16) Se agrega L1BH4 fresco (47 mg, 2,22 mmol) a una solución agitada de SE -dilactama 15 (110 mg, 0,11 mmol) en 3 mi de THF seco y 3 mi de EtOH en un baño de hielo a 0°C. El baño con hielo se separa y la mezcla de reacción se agita bajo una atmósfera de N2 durante 1 hora. El análisis de la reacción por CL/EM muestra una formación significativa del producto deseado (Pk @ 2,57 min) (1=69,32), F = 702, M + H) y la semi-imina. Se permite que la mezcla de reacción se agite durante 1 hora adicional, tiempo después del cual no se observa avance de reacción adicional por CL/EM. La mezcla de reacción se vierte en hielo, se agita y se permite que se caliente hasta la temperatura ambiente. Después de la división entre 50 mi de DCM y 50 mi de agua, la fase acuosa se extrae con 20 mi de DCM, tres veces. Las capas orgánicas combinadas se lavan con 50 mi de H2O, 50 mi de salmuera y el solvente se separa por evaporación al vacio bajo presión reducida.
El residuo resultante se disuelve en 5 mi de DCM, 15 mi de EtOH y 7 mi de H2O, después de trata con 5 g de gel de sílice. Se permite que la reacción se agite a temperatura ambiente durante 48 h. La sílice se separa por filtración a través de un embudo de sinterización y el residuo se enjuaga con 90:10 de CHCl3;MeOH (100 mi) . Se agregan al filtrado 50 mi de H20 y las capas se separan después de agitación. La capa acuosa se extrae con 30 mi de CHCI3 2 veces y 50 mi de H20, 50 mi de salmuera, se seca con MgSOí, se filtra y se evapora al vacio para proporcionar el producto crudo. La cromatografía instantánea (CHC13 ? 98% CHCI3 : 2% MeOH) proporciona el producto (41 mg, 53%).
Datos analíticos: CL-EM RT 2,55 min, 702 (M + H) Ejemplo 4 (a) (S) -2- (4-metoxifenil) -7-metoxi-8- (3- ( (S) -7-metoxi-2- (trifluorometilsulfonil) -5, ll-dioxo-10- ( (2- (trimetilsilil) etoxi)metil) -5,10,11 , lla-tetrahidro-lH-pirrolo [2, l-c] [1,4]benzodiazepin-8-iloxi)propiloxi) -10- ( (2- (trimetilsilil) etoxi) metil) -lH-pirrolo [2, l-c] -[1 ,4]benzodiazepin-5,11 (10H,llaH) -diona (17) Se agrega ácido 4-metoxibencenborónico sólido (0,388 g, 2,55 mmol)a una solución del bistriflato (8a) protegido por SE (3,0 g, 2,69 mmol), carbonato de sodio (426 mg, 4,02 mmol) y tetraquis trifenilfosfina de paladio (0,08 mmol) en 54,8 mi de tolueno, 27 mi de etanol y 27 mi de agua. Se permite que la mezcla de reacción se agite a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla de reacción después se divide entre acetato de etilo y agua. La fase orgánica se lava con agua y salmuera y se seca sobre sulfato de magnesio. El exceso de solvente se separa por evaporación giratoria bajo presión reducida y el residuo resultante se somete a cromatografía en columna instantánea (gel de sílice; gradiente de elusión de EtOAc/hexano 30/70?35/65?40/60?45/55) para eliminar el bis-triflato (0,6 g) que no ha reaccionado. La eliminación del exceso de eluyente de las fracciones seleccionadas proporcionan el producto acoplado con 4-metoxifenilo (1,27 g, 1,18 mmoles ,41%) .
CL-E RT 4,30 min, 1076 (M + H) ; R N 1H (400 HZ, CDC13) d 7,41 (s, 1 H) , 7,39 (d, J = 8,8 Hz, 2H) , 7,35 (s, 1H), 7,34 (s amplio 1H) , 7,29 (s, 1H) , 7,16 (t, J = 1,9 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 8,8 Hz, 2H) , 5,53 (d, J = 10,0 Hz, 2H) , 4,79 (d, J = 10,0 Hz, 1H) , 4,78 (d, J = 10,0 Hz, 1H) , 4,66-4,60 (m, 2H), 4,30 (t, J = 5,7 Hz, 4H) , 4,0-3,94 (m, 2H) , 3,93 (s, 3H), 3,92 (s, 3H) , 3,84 (s, 3H) , 3,83-3, 60 (m, 4H), 3,22-3,10 (m, 2H) , 2,45 (t, J = 5,9 Hz, 2H) , 1,05-0,94 (m, 4H) , 0 (s, 18H) . (b) (S) -2- (3-aminofenil) -7-metoxi-8- (3- ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5, ll-dioxo-10- ( (2- (trimetilsilil) -etoxi) metil) -5,10, 11 , lla-tetrahidro-lH-pirrolo [2, 1-c] -[1,4]benzodiazepin-8-iloxi)propiloxi) -10- ( (2-(trimetilsilil) etoxi)metil) -lH-pirrolo [2,1-c] -[1 , 4]benzodiazepin-5 , 11 (10H,llaH) -diona (18) Se agrega ácido 3-aminobencenborónico sólido (0,143 g, 0,92 mmol) a una solución del monotriflato (17) (0,619 g, 0,58 mmol), carbonato de sodio (195 mg, 1,84 mmol) y tetraquis trifenilfosfina de paladio (26,6 mg, 0,023 mmol) en 10 mi de tolueno, 5 mi de etanol y 5 mi de agua. Se permite que la mezcla de reacción se agite a temperatura ambiente durante la noche a 30 °C. La mezcla de reacción después se diluye entre acetato de etilo y agua. La fase orgánica se lava con agua y salmuera y se seca sobre sulfato de magnesio. Se separa el exceso de solvente por evaporación giratoria bajo presión reducida y el residuo resultante se someta a cromatografía instantánea en columna (gel de sílice: gradiente de elusión EtOAc/hexano 70/30?85/15) . La separación del exceso de eluyente de las fracciones seleccionadas proporciona el producto deseado (0,502 g, 0,49 mmol, 85%) .
CL-EM RT 4,02 min, d 1019 (M + H) ; RMN *? (400 HZ, CDC13) d 7, 38-7,35 (m, 4H) , 7,33 (s amplio 1H) , 7,30 (s amplio, 1H) , 7,25 (s, 2H) , 7,10 (t, J = 7,8 Hz, 1H) , 6,88-6,80 (m, 3H), 6,72 (s amplio 1H) , 6,57 (dd, J = 7,9, 1,8 Hz, 1H) , 5,50 (d, J = 10,0 Hz, 2H) , 4,75 (d, 10,0 Hz, 2H) , 4,58 (dd, J = 10,6, 3,3 Hz, 2H) , 4,27 (t, J = 5,8 Hz, 4H) , 3,95-3,91 (m, 2H) , 3,90 (s, 6H) , 3,80 (s, 3H) , 3,77-3,60 (m. 6H) , 3,15-3,05 (m, 2H) , 2,41 (p, J = 5,8 Hz, 2H) , 0,95 (t, = 8,25 Hz, 4H) , 0 (s, 18H) . (c) (S) -2- (3-aminofenil) -T-metoxi-8- (3- ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5, lla-dihidro-lH-pirrólo [2, 1-c] -[1,4]benzodiazepin-8-iloxi)propiloxi) -lH-pirrolo [2,1-c] [l,4]benzodiazepin-5 (llaH) -ona (19) Una solución de superhidruro (0,56 mi, 0,56 mmol, 1,0 M en THF) se agrega a gotas a una solución de la dilactama SEM (18) (0,271 g, 0,27 mmol) en 10 mi de THF seco a -78 °C bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de 1 h se agrega una alícuota adicional de solución de superhidruro (0,13 mi, 0,13 mmol) y se permite que la mezcla de reacción se caliente durante otras 0,5 h, tiempo en el cual la CL-E indica que la reducción es completa. La mezcla de reacción se diluye con agua y se permite que se caliente hasta la temperatura ambiente. La mezcla de reacción se divide entre cloroformo y agua, las capas se separan y la fase acuosa se extrae con cloroformo adicional (emulsiones) . Finalmente, la fase orgánica combinada se lava con salmuera y se seca sobre sulfato de magnesio. El producto reducido se disuelve en metanol, cloroformo y agua y se permite que se agite en presencia de gel de sílice durante 72 horas. El producto crudo se somete a cromatografía instantánea en columna (gradiente de metanol/cloroformo) para proporcionar el producto imina deseado (150 mg, 0,21 mmol, 77%) después de separación del exceso de eluyente de las fracciones seleccionadas .
CL-EM RT 2,63 min, 97 % de área, 726 (M + H) ; RMN XH (400 MHZ, CDC13) d 7,85 (d, J = 3, 9 Hz, 1H) , 7,84 (d, J= 3,9 Hz, 1H) , 7,50 (s, 1H) , 7,49 (s, 1H) , 7,42 (s, 1H) , 7,36 (s, 1H), 7,32 (d, J = 7,3 Hz, 2H) , 7,11 (t, (d, J = 7,8 Hz, 1H), 6, 90-6, 80 (m, 4H) , 6,77 (d, J = 7,9 Hz, 1 H) , 4,40- 4,20 (m, 6H), 3,92 (s, 6H) , 3,80 (s, 3H) , 3, 60-3, 27 (m, 6H), 2,48-2,29 (m, 2H) Ejemplo 5 (a) (terc-butildimetilsililoxi) -8- (5- ( (HS,llaS) -11 (terc-butildimetilsililoxi) -7'-metoxi-2- (4- etoxifenil) -5 oxo-10- ( (2, 2, 2-tricloroetoxi) carbonil) -5,10,11 ,11a- tetrahidro-lH-pirrolo [2, 1-c] [1 ,4]benzodiazepin-8- iloxi)pentiloxi) -7'-metoxi-5-oxo-2- (trifluorometilsulfoniloxi) -11 , lla-dihidro-pirrolo [2,1-c] [1 , 4]benzodiazepin-10 (5H) -carboxilato de (HS,llaS)-2 ,2, 2-tricloroetilo 21 Se agrega ácido 4-metoxibencenborónico sólido (59 mg, 0,39 mol) a una solución del bistriflato protegido con Troc (compuesto 44, WO 2006/111759) (600 mg, 0,41 mmol) , carbonato de sodio (65 mg, 0,61 mmol) y tetraquis trifenilfosfina de paladio (0,012 mmol) en 10,8 mi de tolueno, 5,4 mi de etanol y 5,4 mi de agua. Se permite que la mezcla de reacción se agite a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción después se divide entre acetato de etilo y agua. La fase orgánica se lava con agua y salmuera y se seca sobre sulfato de magnesio. Se elimina el exceso de solvente por evaporación giratoria bajo presión reducida y el residuo resultante se somete a cromatografía instantánea en columna gel de sílice; gradiente de elusión de EtOAc/hexano 20/80?30/70?40/60?60/40) para separar el bis-triflato que no ha reaccionado. La separación del exceso de eluyente de las fracciones seleccionadas proporciona el producto acoplado a 4-metoxifenilo (261 mg, 0,18 mmol, 46%).
CL-EM 4,17 min, 1427 (M + H) ; RMN XH (400 MHZ, CDC13) d 7,38 (s, 1H) , 7,33 (s, 1 H) , 7,31 (s, 1 H) , 7,30 (s, 1H) , 7,25 (s, 1H), 7,20 (s amplio 1H) , 6,92 (d, J = 8,6 Hz, 2H) , 6,77 (d, J = 8,7 Hz, 2H) , 6,0-5,90 (m, 2H) , 5,25 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 5,24 (d, J = 12,0 Hz, 1H) , 4,24 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,22 (d, J = 12,0 Hz, 1H) , 4,18-4,08 (m, 2H) , 4,07-3,89 (m, 10H) , 3,81 (s, 3H) , 3,44-3,25 (m, 2H) , 2,85 (d, J = 16,6 Hz, 2H) , 2,05-1,90 (m, 4H) , 1,76-1,64 (m, 2H) , 0, 93 (s, 9H) , 0,90 (s, 9H) , 0,30 (s, 6H) , 0,26 (s, 6H) . (b) 11- (terc-butildimetilsililoxi) -8-(5-( (HS,llaS) -11- (terc-butildimetilsililoxi) -2- (4-hidroxifenil) -7-metoxi-5-oxo-lO- ( (2 ,2 ,2-tricloroetoxi) carbonil) -5,10,11,11a-tetrahidro-lH-pirrolo [2, 1-c] [1, ]benzodiazepin-8-iloxi)pentiloxi) -7- etoxi-2- (4-metoxifenil } -5-oxo-ll ,11a-dihidro-lH-pirrolo [2, 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-10 (5H) -carboxilato de (11S, llaS) -2, 2, 2-tricloroetilo 22 El procedimiento de acoplamiento de Suzuki descrito en la etapa (a) se aplica a la síntesis del compuesto 21. El compuesto 20 (62,5 mg 0, 044 mmol) se trata con 1 equivalente de ácido 4-hidroxibencenborónico (10 mg) a 30 °C durante la noche para proporcionar el compuesto deseado después de filtración a través de una almohadilla de gel de sílice (40 mg, 0,029 mmol, 66% de rendimiento) . El compuesto se utiliza directamente en la etapa subsecuente.
CL-EM RT 4,27 min, 1371 (M + H) . (c) (S) -2- (4-hidroxifenil) -l-metoxi-8- (5- ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pi rolo [2, 1-c] -[1,4]benzodiazepin-8-iloxi)pentiloxi) -1H-pirrólo [2, 1-c] [1, 4]benzodiazepin-5 (llaH) -ona 23 Se agrega el par cadmio/plomo (100 mg, Q Dong y col. Tetrahedron Letters vol 36, edición 32,5681-5682, 1995) a una solución de 21 (40 mg, 0, 029 mmol) en 1 mi de THF y acetato de amonio (1 N, 1 mi) y se permite que la mezcla de reacción se agite durante 1 hora. La mezcla de reacción se divide entre cloroformo y agua, las fases se separan y la fase acuosa se extrae con cloroformo. Las capas orgánicas combinadas se lavan con salmuera y se secan sobre sulfato de magnesio. La evaporación giratoria bajo presión reducida proporciona el producto crudo al cual se somete a cromatografía en columna (gel de sílice, 0-.4% de MeOH/CHCl3) . La eliminación del exceso de eluyente por evaporación giratoria bajo presión reducida proporciona el producto imina deseado (17 mg 0,023 mmol, 79%) .
CL-EM RT 2,20 min, 755 (M + H) ; RMN XH (400 MHZ, CDC13) d 7,89 (d, J = 3,94 Hz, 1H) , 7,89 (d, J = 4,00 Hz, 1H), 7,53 (s, 1H) , 7,52 (s, 1H) , 7,38 (d, J = 8,7 Hz, 2H) , 7,33 (d, J = 8,6 Hz, 2H) , 7,28 (s, 1H) , 6,90 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,84 (d, J = 8,6 Hz, 2H) , 6,82 (s, 1H) , 6,81 (s, 1H), 5,68 (s amplio, 1H) , 4, 50-4, 30 (m, 2H) , 4,22-4,00 (m, 4H), 3,93 (s, 6H), 3,82 (s, 3H) , 3,69-3,45 (m, 2H) , 3,44-3,28 (m, 2H) , 2,64-1,88 (m, 4H) , 1,77-1,62 (m, 2H) .
Ejemplo 6 (a) 11- (terc-butildimetilsililoxi) -8- (5- ( (11S, llaS) -11- (terc-butildimetisililoxi) -2- (4-formilfenil) -7-metoxi-5-oxo-10- ( (2,2,2-tricloroetoxi) carbonil) -5,10,11 ,11a-tetrahidro-lH-pirrolo [2,1-c] [1,4]benzodiazepin-8-iloxi)pentiloxi) -7-metoxi-2- (4- etoxifenil) -5-oxo-ll ,11a-dihidro-lH-pirrolo [2, 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-10 (5H) -carboxilato de (11S, llaS) -2, 2, 2-tricloroetilo 24 El procedimiento de acoplamiento de Suzuki descrito en el ejemplo 5, etapa (a) se aplica a la síntesis del compuesto 24. El compuesto 21 (62,5 mg, 0,044 mmol) se trata con 1 equivalente de ácido 4-formilbencenborónico (10,5 mg) a temperatura ambiente durante la noche para proporcionar el compuesto deseado después de filtración a través de una almohadilla de gel de sílice (45 mg, 0,033 mmol, 75% de rendimiento) . El compuesto se utiliza directamente en la etapa subsecuente.
CL-E RT 4,42 min, 1383 (M + H) (b) 4- ( (S) -T-metoxi-8- (5- ( (S) -l-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5, 1 la-dihidro-lH-pirrolo [2, 1 - c] [1 , ]benzodiazepin-8-iloxi)pentiloxi) -5-oxo-5, 11a-dihidro-lH-pirrolo [2,1-c] [1,4]benzodiazepin-2-il) benzaldehido 25 Se desprotege el Compuesto 24 por el procedimiento descrito en el ejemplo 5, etapa (c) para proporcionar el compuesto deseado (18 mg, 0,023 mmol, 79%).
CL-E RT 3,18 min, 768 ( + H) ; RMN XH (400 MHZ , CDC13) d 9,98 (s, 1H), 7,91 (d, J = 3,90 Hz, 1H) , 7,90-7,80 (m, 3H) , 7,68 (s, 1H) , 7,60-7, 45 (m, 4H) , 7,39 (s, 1H) , 7,33 (d, J = 8,7 Hz, 1H) , 6,90 (d, J = 8,7 Hz, 2H) , 6,83 (s, 1 H) , 6,82 (s, 1H), 4, 55-4, 44 (m, 1H) , 4, 43-4, 36 (m, 1H), 4, 23-4, 00 (m, 4H) , 3,95 (s, 3H) , 3,94 (s, 3H) , 3,82 (s, 3H) , 3,66-3,51 (m, 2H) , 3,50-3, 34 (m, 2H) , 2,05-1,87 (m, 4H) , 1, 76-164 (m, 2H) .
Ejemplo 7 (a) 2- (3-aminofenil) -11- (terc-butildimetilsililoxi) -8- (5- ( (HS,llaS) -11- (terc-butildimetilsililoxi) -T-metoxi-5-oxo-10- ( (2,2, 2-tricloroetoxi) carbonil) -2- (trifluorometilsulfoniloxi) -5, 10, 11 , lla-tetrahidro-lH-pirrolo [2, 1-c] [1,4]benzodiazepin-8-iloxi)pentiloxi) -7-metoxi-5-oxo-ll , lia -dihidro-lH-pirrolo [2,1-c] [1 , 4]benzodiazepin-10 (5H) -carboxilato de (11S, llaS) -2,2,2-tricloroetilo 26 El procedimiento de acoplamiento de Suzuki descrito en el ejemplo 5, etapa (a) se aplica a la síntesis del Compuesto 26, utilizando ácido 3-aminobencenborónico para proporcionar el compuesto deseado con un rendimiento de 41% (230 mg, 0, 163 mmol) CL-E RT 4,28 min, 1411 ( + H) ; R N ¾ (400 MHZ , CDC13) d 7,44 (s amplio 1H) , 7,29 (s, 1H) , 7,25 (S, 1 H) , 7,20 (s, 1H) , 7,16 (t, J = 7,9 Hz, 1H) , 6, 84-6,73 (m, 3H) , 6,70 (s amplio, 1H) , 6,62 (dd, J = 7,9, 1,7 Hz, 1H) , 6,66-6,58 (m, 2H) , 5,25 (d, J = 12,0 Hz, 1H) , 5,24 (d, J = 12,0 Hz, 1H) , 4,24 (d, J = 12,0 Hz, 1H) , 4,22 (d, J = 12,0 Hz, 1H) , 4,17-4,07 (m, 2H) , 4,08-3, 89 (m, 10H) , 3, 43-3, 28 (m, 2H), 2,85 (d, J = 1,65 Hz, 2H) , 2,07-1,90 (m, 4H) , 1,78 -1,63 (m, 2H), 0,94 (s, 9H) , 0,90 (s, 9H) , 0,30 (s, 6H) , 0,27 (s, 6H) . (b) 2- (3-aminofenil) -11- (terc-butildimetil-sililoxi) -8- (5- ( (HS,llaS) -11- (terc-butildimetilsilil-oxi) -2- (4- (3- (dimetilamino)propoxi) fenil) -7-metoxi-5-oxo-10- ( (2,2,2-tricloroetoxi) carbonil) -5, 10, 11 , lla-tetrahidro-lH-pirrolo [2, 1-c] [1,4]benzodiazepin-8-iloxi)pentiloxi) -7-metoxi-5-oxo-ll , lla-dihidro-lH-pirrolo [2,1-c] [l,4]benzodiazepin-10 (5H) -carboxilato de (HS,llaS)-2,2,2-tricloroetilo 27 Se agrega éster pinacólico del ácido 4-[3- (dimetilamino) ropoxibencenborónico sólido (25 mg, 0,082 mmol) a una solución de 26 (73 mg, 0,052 mmol), carbonato de sodio (18 mg, 0,17 mmol) y 3 mg de tetraquis trifenilfosfina de paladio en 1 mi de tolueno, 0,5 mi de etanol y 0,5 mi de agua. Se permite que la mezcla de reacción se agite a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción después se divide entre acetato de etilo y agua. La fase orgánica se lava con agua y salmuera y se seca sobre sulfato de magnesio. Se separa el exceso de solvente por evaporación giratoria bajo presión reducida y el residuo resultante se eluye a través de un tapón de gel de sílice con cloroformo/metanol . La separación del exceso de eluyente de las fracciones seleccionadas proporciona el producto acoplado 4-metoxifenilo (50 mg, 0,035 mmol, 67%) . CL-EM RT 4,12 min, 1440 (M + H) (c) (S) -2- (3-aminofenil } -8- (5- ( (S) -2- (4- (3- (dimetilamino)propoxi) fenil) -7-metoxi-5-oxo-5, lla-dihidro-IH-pirrolo [2, 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-8-iloxi)pentiloxi) -7-metoxi-lH-pirrolo [2, 1-c] [1,4]benzodiazepin-5 (llaH) -ona 28 El compuesto 27 se desprotege por el procedimiento descrito en el ejemplo 5, etapa (c) para proporcionar el compuesto deseado. La mezcla de reacción se divide entre DCM y una emulsión de carbonato ácido de sodio acuoso y el producto crudo se purifica por cromatografía en columna de gradiente sobre gel de sílice (5% de metanol cloroformo ? 35% de metanol/cloroformo) para proporcionar la imina PBD asimétrica deseada (50 mg, 0,018 mmol, 58%) CL-EM RT 2,55 min, 826 (M + H) ; RMN ½ (400 MHZ, CDC13) d 7, 92-7, 82 (m, 2H) , 7,52 (s amplio 2H) , 7,45 (s amplio, 1H) , 7,39 (s amplio, 1H) , 7,31 (d, J = 8,6 Hz, 2H) , 7,14 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 6,89 (d, J = 8,6 Hz, 2H) , 6,85-6,75 (m, 3H) , 6,72 (s amplio, 1H) , 6,60 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4, 46-4, 33 (m, 2H) , 4,21-3,98 (m, 6H) , 3,94 (s, 6H) , 3, 63-3, 50 (m, 2H) , 3,43-3,29 (m, 2H) , 2, 64 - 2, 48 (m, 2H) , 2,34 (s, 6H) , 2,10-1,89 (m, 6H) , 1,57 (m, 2H) .
Ejemplo 8 (a) 2- (3-a inofenil) -11- (terc-butildimetil-sililoxi) -8- (5- ( (HS,llaS) -11- (terc-butildimetllsililoxi) -l-metoxi-2- (4- (4-metilpiperazin-l-il) fenil) -5-oxo-10- ( (2,2,2-tricloroetoxi) carbonil) -5,10,11, lla-tetrahidro-lH-pirrólo [2, 1-c] [1,4]benzodiazepin-8-iloxi)pentiloxi) -7-metoxi-5-oxo-ll , lia -dihidro-lH-pir olo [2,1-c] [l,4]benzodiazepin-10 (5H) -carboxilato de (11S, llaS) -2,2,2-tricloroetilo 29 El procedimiento del ejemplo 7, etapa (b) , se lleva a cabo para proporcionar el producto deseado (58 mg, 0,040 mmol, 78%) después de filtración a través de un tapón de gel de sílice (con 1/3 de metanol/cloroformo) y eliminación del exceso de solvente por evaporación giratoria bajo presión reducida.
CL-EM RT 4,08 min, 1439 (M + H) (b) (S) -2- (3-aminofenil) -7-metoxi-8- (5- ( (S) -7-metoxi-2- (4- (4-metilpiperazin-l -il) fenil) -5-oxo-5, lia -dihidro-lH-pirrolo (2, 1-c] [1, 4]benzodiazepin-8-iloxi)pentiloxi) -1H-pirrolo [2, le] [1,4]benzodiazepin-5 (llaH) -ona 30 Se utiliza el procedimiento del ejemplo 7, etapa (c) para desproteger el compuesto 29. El producto crudo se purifica por cromatografía en gradiente de gel de sílice (2% de metanol cloroformo ? 35% de metanol/cloroformo) para proporcionar la imina PBD asimétrica deseada (18 mg, 0,022 mmol, 59%) CL-EM RT 2,52 min, 823 (M + H) ; RMN 1H (400 H , CDC13) d 7,80 (d, J = 3,8Hz, 2H) , 7,45 (s, 2H) , 7,38 (s, 1H) , 7,30 (s, 1H) , 7,23 (d, J = 8,6Hz, 2H) , 7,07 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 6,83 (d, J = 8,6 Hz, 2H) , 6,79-6,89 (m, 3H) , 6, 65 (s, 1H) , 6,54 (d, J = 7,9 Hz, 1 H) , 4, 40-4,24 (m, 2H) , 4,15-3,93 (m, 4H) , 3,87 (s, 6H) , 3,56-3,42 (m, 2H) , 3,37-3,23 (m, 2H), 3, 22-3, 08 (m, 4H) , 2,61-2,41 (m, 4H) , 2,29 (s, 3H), 1,98-1,80 (m, 4H) , 1,67-1,54 (m, 2H) .
Ejemplo 9 (a) (S) -2-4- (aminometil) fenil) -7-metoxi-8- (3- ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5, ll-dioxo-10- ( (2-trimetilsilil) etoxi) metil) -5, 10, 11 , lla-tetrahidro-lH-pirrolo [2, 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-8-iloxi)propiloxi) -10- ( (2- (trimetilsilil) etoxi)metil) -lH-pirrolo [2, 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-5, 11 (10H,llaH) -diona 31 Se agrega clorhidrato de ácido 4- aminometilbencenborónico sólido (0,111 g, 0,59 mmol) a una solución de 17 (0, 394 g, 0,37 mmol), carbonato de sodio (175 mg, 1,654 mmol) y tetraquis trifenilfosfina de paladio (28,0 mg, 0,024 mmol) en 10 mi de tolueno y 5 mi de etanol y 5 mi de agua. Se permite que la mezcla de reacción se agite durante la noche a 30 °C. Al día siguiente la mezcla de reacción se calienta durante 3 horas adicionales a 70 °C. La mezcla de reacción después se divide entre acetato de etilo y agua. La fase orgánica se lava con agua y salmuera y se seca sobre sulfato de magnesio. Se separa el exceso de solvente por evaporación giratoria bajo presión reducida y el residuo resultante se somete a cromatografía instantánea en columna (gel de sílice; gradiente de elusión de EtOAc/hexano 2/98?15/85) . La eliminación del exceso de eluyente de las fracciones seleccionadas proporciona el producto deseado (0,230 mg, 0,22 mmol, 61%).
CL-EM RT 3,63 min, 1034 (M + 2H) ; RMN *H (400 MHz, DMSO d6) d 11,7 (s, 2H) , 7,52 (d, J = 8,2 Hz, 2H) , 7,48 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,40 (s, 1H) , 7,50 (d, J = 8,1 Hz,2H) ,7,38-7, 19 (m, 5H) 6,93 (d, J = 8,7 Hz, 2H) , 5,40 (d, J = 2,13 Hz, 1H) , 5,38 (d, J = 2,12 Hz, 1H) , 5,32 (d, J = 10,6 Hz, 2H) , 5,25 (d, J = 10,6 Hz, 2H) , 4, 87-4, 72 (m, 2H) , 4,35-4,15 (m, 4H) , 3,85 (s, 6H) , 3,79 (s, 3H) , 3,73-3,56 (m, 2H), 3, 55-3,39 (m, 4H) , 3,22-3, 02 (m, 2H) , 2,39-2,23 (m, 2H), 0,94-0,67 (m, 4H),-0,06 (s, 18H) . (b) (S) -2- (4- (aminometil) fenil) -7-metoxi-8- (3- ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5, lla-dihidro-lH-pirrolo [2, 1-c] [1,4]benzodiazepin-8-iloxi)propiloxi) -1H-pirrolo {2, 1-c] [1,4]benzodiazepin-5 (llaH) -ona 32 El compuesto 31 se desprotege siguiendo el procedimiento del ejemplo 1, etapa (c) . El producto crudo se purifica por cromatografía en columna en gradiente (5/95?30/70 MeOH/CHCl3) para proporcionar el producto como una mezcla de éteres de metilo de imina y carbonilamina CL-EM RT 2,58 min, 740 (M + H) .
Ejemplo 10 Sal disódica de (S) -2- (4-aminofenil) -7-metoxi-ll (S) -sulfo-8- (3- ( (S) -7-metoxi-ll (S) -sulfo-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5, 10, 11 , lla-tetrahidro-lH-pirrolo [2, 2-c] [1,4]benzodiazepin-8-iloxi)propiloxi) -lH-pirrolo [2, 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-5 (llaH) -ona (33) Se agrega bisulfito de sodio (8,5 mg, 3,1 equivalentes) a una suspensión agitada de bis-imina 11 (20 mg, 0,36 mmol) en 4 mi de isopropanol y 2 mi de agua. Se permite que la mezcla de reacción se agite vigorosamente y a la postre se vuelve clara (aproximadamente 1 hora) . La mezcla de reacción se transfiere a un embudo y se filtra a través de una pared de algodón (y después se lava con 2 mi de agua) . El filtrado se congela instantáneamente (liquido y a baño) y se liofiliza para proporcionar el producto deseado 33 con un rendimiento cuantitativo.
CL-EM RT 11,77 min, 727,2 (M + H) (Masa del compuesto original, los aductos bisulfito son inestables en espectrómetro de masas): RMN XH (400 MHz, CDC13) d 7,66-7,55 (m, 5H) , 7,43 (s, 1H) , 7,39 (d, J = 8,66 Hz, 2H) , 7,06 (m, 2H), 6,93 (d, J = 8,84 Hz, 2H) , 6,54 (m, 2H) , 5,29-5,21 (m, 2H), 4, 32-4, 28 (m, 2H) , 4,14-4,20 (m, 4H) , 3,96-3,83 (m, 2H) , 3,77 (s, 3H) , 3,73 (m, 6H) , 3, 52-3, 43 (m, 2H) , 3,30-3,08 (2,24-2-21 (m, 2H) .
Ejemplo 11 (a) (S) -2- (2-aminofenil) -7-metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5 , ll-dioxo-10- ( (2- (trimetilsilil) etoxi) metil) -5,10,11, lla-tetrahidro-pirrolo [2, 1-c] [1,4]benzodiazepin-8-il) oxi)propoxi) -10- ( (2- (trimetilsilil) etoxi) metil) -pirrolo[2,1-c] [1 , 4]benzodiazepin-5 , 11 (10H,llaH) -diona (103) A cantidad catalítica de tetraquis trifenilfosfinapaladio (0) (11,2 rag) se añadió a una mezcla del mono triflato 17 (380 mg) , el éster de pinacol del ácido 2-aminofenilborónico (124 mg) y carbonato sódico (120 mg) en etanol (5 mi), tolueno (5 mi) y agua (5 mi) . La mezcla de reacción se dejó en agitación durante una noche a temperatura ambiente y a 40 °C hasta que se completó la reacción (aprox., 2 h) . La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y la fase orgánica se lavó con agua y salmuera. La solución de acetato de etilo se secó sobre sulfato de magnesio y se filtró al vacio. La retirada del acetato de etilo por evaporación rotatoria a presión reducida proporcionó el producto en bruto que se sometió a cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, acetato de etilo/hexano) . Las fracciones puras se recogieron y se combinaron. La retirada del exceso de eluyente por evaporación rotatoria a presión reducida proporcionó el producto 103 puro (330 mg, rendimiento del 86%) . TR de CL/EM: 4,17 min, EN+1018,48. (b) (S) -2- (2-a inofenil) -?-metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5 , lla-dihidro-pirrolo [2, 1 -c] [1 ,4]benzodiazepin-8-il) oxi)propoxi) -pirrólo [2,1-c] [1 , 4]benzodiazepin-5 (llaH) -ona (104) Una solución de Superhidruro en tetrahidrofurano seco (1,0 M, 4,4 equiv.) se añadió a una solución del 2-analino, compuesto 103, (300 mg) en tetrahidrofurano seco (5 mi) a -78 °C en una atmósfera inerte. Según se realizaba lentamente la reducción, se añadió una alícuota de borohidruro de litio (20 equiv.) y se dejó que la mezcla de reacción volviera a temperatura ambiente. Se añadió agua/hielo a la mezcla de reacción para inactivas los hidruros sin reaccionar y la reacción se diluyó con diclorometano . La fase orgánica se lavó secuencialmente con agua (dos veces) , ácido cítrico y salmuera. El diclorometano en exceso se retiró por evaporación rotatoria a presión reducida y el residuo se disolvió de nuevo en etanol y agua, y se trató con gel de sílice durante 96 horas. La mezcla de reacción se filtró al vacio y el filtrado se evaporó a sequedad. El residuo se sometió a cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, gradiente de cloroformo/metanol ) . Las fracciones puras se recogieron y se combinaron, y el eluyente en exceso se retiró por evaporación rotatoria a presión reducida para proporcionar el producto puro 104 (30 mg, rendimiento del 14%). TR de CL/EM: 2,90 min, EN+ 726,09.
Ejemplo 12: determinación de citotoxicidad in vitro de Compuestos de PBD Representativos Análisis K562 Se mantienen células de leucemia mieloide crónica humana K562 en medio RPMI 1640 suplementado con suero bovino fetal 10% y glutamina 2 mM a 37 °C en una atmósfera humidificada que contiene C02 5% y se incuban con una dosis especificada de medicamento durante 1 hora o 96 horas a 37 °C en la oscuridad. La incubación se determina por centrifugación (5 min, 300 g) y las células se lavan una vez con medio libre de medicamento. Después del tratamiento apropiado con medicamento, las células se transfieren a placas de microtitulación de 96 pozos (104 células por pozo, 8 pozos por muestra) . Las placas después se mantienen en la oscuridad a 37 °C en una atmósfera humidificada que contiene CO2 5%. El análisis se basa en la capacidad de las células viables para reducir la sal tetrazolio soluble amarilla, bromuro de 3- ( 4 , 5-dimetiltiazol-2-il) -2 , 5-difenil-2H-tetrazolio (MTT, Aldrich-Sigma) a un precipitado de formazano púrpura insoluble. Después de incubación de las placas durante 4 días (para permitir que las células control aumenten en número en aproximadamente 10 veces), se agrega a cada pozo 20 µ? de solución MTT (5 mg/ml en solución salina amortiguada con fosfato) a cada pozo y las placas se incuban adicionalmente durante 5 h. Las placas después se centrifugan durante 5 min a 300 g y el volumen del medio pipeteado desde el sedimento celular deja 10-20 µ?, por pozo. Se agregan a cada pozo 200 µ? de DMSO y las muestras se agitan para asegurar mezclado completo. La densidad óptica después se lee a una longitud de onda de 550 nm en un lector de placa Titertek Multiscan ELISA y se construye una curva dosis-respuesta. Para cada curva se lee un valor CI50 como la dosis requerida para reducir la densidad óptica final a 50% del valor control.
El compuesto 13 presenta una CI50 de 30 pM en este análisis .
Análisis A2780 La linea de células originales A2780 se hace crecer en medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM, por sus siglas en inglés) que contiene ~10% de suero bovino fetal (FCS, por sus siglas en inglés) y solución L-glutamina 200 mM, -1% y se hace crecer en matraces Corning Cellbind 15 cm2.
Se agregan 190 µ? de una suspensión celular (a 1 x 104) cada pozo de columna 2 a 11 de una placa de 96 pozos (placa TC de fondo plano Nunc 96F) . Se agregan 190 µ? de medio a cada pozo de las columnas 1 y 12. El medio es medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) (el cual incluye suero bovino fetal (FCS) ~10% y una solución de L-glutamina 200 mM -1%) .
Las placas se incuban durante la noche a 37 °C antes de la adición del medicamento si las células son adherentes. Una cantidad de 200 µ? de las soluciones del compuesto de prueba (en DMSO 100%) se diluye de manera seriada a través de una placa de 96 pozos. Cada punto resultante después se diluye adicionalmente 1/10 en agua destilada estéril (SDW, por sus siglas en inglés) .
A los blancos o testigos negativos de células y los pozos control negativos de compuesto se agregan DMSO 10% a 5%, v/v. Las placas de análisis se incuban por las siguientes duraciones a 37 °C en CO2 5% en un incubador humidificado durante 72 horas. Después de la incubación, se agrega a cada pozo una solución MTT hasta una concentración final de 1,5 µ?. Las placas después se incuban durante 4 horas adicionales a 37 °C en C02 5% en un incubador humidificador . El medio después se separa y el colorante se solubiliza en 200 µ? de DMSO (99,99%).
Las placas se leen a una absorbancia de 540 nm utilizando un lector de placa Envision. Los datos se analizan utilizando Microsoft Excel y GraphPad Prism y se obtienen los valores CI50.
El compuesto 11 presenta una CI50 de 11,7 pM en este análisis .
Ensayos con células renales y lineas celulares de LMA La citotoxicidad de varios compuestos de fármaco libre se analizó en una linea celular de cáncer de células renales, 786-0, una línea celular de linfoma de Hodgkin, L428 y dos líneas celulares de LMA, HL60 y HEL. Para un ensayo de 96 horas, las células cultivadas en crecimiento de fase logarítmico se sembraron durante 24 horas en placas de 96 pocilios que contienen 150 µ? de medio RPMI 1640 suplementado con FBS al 20 %. Se prepararon diluciones en serie del artículo de ensayo (es decir, fármaco libre) en medios de cultivo celular a 4x la concentración de trabajo; a las placas de 96 pocilios se añadieron 50 µ? de cada dilución. Tras la adición del artículo de ensayo, las células se incubaron con artículos de ensayo durante 4 días a 37 °C. Después se añadió resazurina a cada pocilio para alcanzar una concentración final de 50 µ? y las placas se incubaron durante 4 horas adicionales a 37 °C. Las placas se leyeron después para determinar la extensión de la reducción del pigmento en un lector de placas Fusión HT (Packard, Meriden, CT, EE.UU.) usando una longitud de onda de excitación y de emisión de 530 nm y 590 nm, respectivamente. El valor de CI50, determinado por triplicado, se define en el presente documento como la concentración que da lugar a una reducción del 50 % en el crecimiento celular respecto a los controles no tratados. En referencia a la Tabla 1 siguiente, el compuesto para-anilina 11 mostró un incremento de la actividad marcado en estas líneas celulares en comparación con el compuesto de meta-anilina 19 en este ensayo.
Tabla 1 : CI50 Resumen de los fármacos libres [n ] En referencia a la Tabla 2 siguiente, la actividad de los compuestos 28, 30 y 32 se muestra en células L428, 786-0, HEL, HL-60 y MCF-7, así como la actividad para el compuesto 19 en células MCF-7.
Tabla 2 : CI50 Resumen de los f rmacos libres [nM] En referencia a la Tabla 3 siguiente, las actividades de los compuestos 23, 25 se comparan con la del compuesto 11 en células 786-0, Caki-1, MCF-7, HL-60, THP-1, HEL y TF1 . Las células se sembraron en placas en 150 µ? de medio de crecimiento por pocilio en placas de 96 pocilios de fondo transparente con laterales negros (Costar, Corning) y se dejaron reposar durante 1 hora en la campana biológica antes de introducir en el incubador a 37 °C con C02 al 5 %. Al día siguiente se prepararon concentraciones 4X de reservas de fármaco y después se titularon como diluciones en serie por 10 que producen curvas de dosis de 8 puntos y se añadieron a 50 µ? por pocilio por duplicado. Después, las células se incubaron durante 48 horas a 37 °C, C02 al 5 % .. La citotoxicidad fue una medida mediante incubación con 100 µ? de solución Cell Titer Glo (Promega) durante 1 hora y después se midió la luminiscencia en un lector de placas Fusión HT (Perkin Elmer) . Los datos se procesaron con Excel (Microsoft) y GraphPad (Prism) para producir curvas de respuesta a la dosis y se generaron valores de CI50 y se recogieron los datos.
Tabla 3: CI50 Resumen de los fármacos libres [nH En los Ejemplos 13 a 16, se hace referencia los siguientes compuestos con los números de compuesto como se muestra más adelante: Ejemplo 13: Síntesis de Compuestos Enlazadores de Fármaco de PBD Información General. En los siguientes, todos los disolventes anhídridos disponibles en el mercado se usaron sin purificación adicional. La cromatografía analítica de capa fina se realizó sobre láminas de aluminio de gel de sílice 60 F254 (EMD Chemicals, Gibbstown, NJ) . La cromatografía radial se realizó en un aparato Chromatotron (Harris Research, Palo Alto, CA) . La HPLC analítica se realizó en un sistema de entrega de disolventes Varían ProStar 210 configurado con un detector Varían ProStar 330 PDA. Las muestras se eluyeron sobre una columna de fase inversa de C12 Phenomenex Synergi 2,0 x 150 mm, 4 µp?, 80 Á. La fase móvil ácida consistió en acetonitrilo y agua, conteniendo ambas 0,05% de ácido trifluoroacético o ácido fórmico al 0,1% (indicado para cada compuesto). Los compuestos se eluyeron con un gradiente lineal de acetonitrilo ácido del 5%, 1 min después de la inyección, a 95% a los 11 min, seguido de acetonitrilo al 95% isocrático a los 15 min (caudal = 1,0 ml/min) . La CL-EM se realizó en un espectrómetro de masas ZMD Micromass conectado a un instrumento de HPLC HP Agilent 1100, equipado con una columna de fase inversa C12 Phenomenex Synergi 2,0 x 150 mm, 4 µp?, 80 Á. El eluyente ácido consistió en gradiente lineal de acetonitrilo del 5% al 95% en ácido fórmico acuoso al 0,1% durante 10 min, seguido de acetonitrilo al 95% isocrático durante 5 min (caudal = 0,4 ml/min) . La HPLC preparativa se realizó en un sistema de entrega de disolventes Varían ProStar 210 configurado con un detector Varían ProStar 330 PDA. Los productos se purificaron sobre una columna de fase inversa C12 Phenomenex Synergi 10,0 x 250 mm, 4 µp?, 80 Á, eluyendo con ácido fórmico al 0,1% en agua (disolvente A) y ácido fórmico al 0,1% en acetonitrilo (disolvente B) . El procedimiento de purificación consistió en el siguiente gradiente de disolvente A a disolvente B: 90:10 de 0 a 5 min; 90:10 a 10:90 de 5 min a 80 min; seguido de 10:90 isocrático durante 5 min. EL caudal fue 4,6 ml/min con supervisión a 254 nm. Los datos de espectro de RMN se recogieron es un espectrómetro Varían Mercury 400 MHz . Las constantes de acoplamiento (J) se indican en hertzios .
Esquema 1 Ácido (S) -2- ( (S) -2- (6- (2 , 5-dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-l-il) hexanamido) -3-mefcilbutanamido) ropanoico (36): A una solución de dipéptido Val-Ala 34 (200 mg, 1,06 mmol) disuelto en 10,6 mi de D F anhidra se le añadió NHS éster de maleimidocaproilo 35 (327 mg, 1,06 mmol). Después, se añadió diisopropiletilamina (0,92 mi, 5,3 mmol) y la reacción se agitó en una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente durante 18 h, momento en el que la TLC y la HPLC de fase inversa revelaron la consumición del material de partida. La reacción se diluyó con HC1 0,1 M (100 mi) y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (100 mi, 3 x) . La fase orgánica combinada se lavó con agua y salmuera, después se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró. El producto en bruto se disolvió en una cantidad mínima de cloruro de metileno y se purificó por cromatografia radial sobre una placa Chromatotron de 2 mm eluyendo con mezclas de CH2Cl2/MeOH (CH2Cl2/MeOH de 95:5 a 90:10) para proporcionar 36 (158 mg, 39%) en forma de un residuo aceitoso. TLC: Fr = 0,26, eOH al 10% en CH2C12. RMN XH (CDC13) d (ppm) 0,95 (d, J = 17 Hz, 3H) , 0,98 (d, J = 17 Hz, 3H), 1,30 (m, 2H) , 1,40 (d, J = 17 Hz, 3H) , 1,61 (m, 4H), 2,06 (m, 1H) , 2,25 (dt, J = 4, 19 Hz, 2H) , 3,35 (s, 1H), 3,49 (t, J = 17 Hz, 2H) , 4,20 (d, J = 18 Hz, 1H) , 4,38 (m, 1H) , 6,80 (s, 2H) . HPLC analítica (ácido fórmico al 0,1%): Tr 9,05 min. CL-EM: Tr 11,17 min, m/z (EN+) encontrado 381,9 (M+H)+, m/z (EN") encontrado 379,9 (M-H)". 6- (2 , 5-dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-l-il) -N- ( (S) -1- ( ( (S) -1-( (4- ( (S) -7-metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4]benzod±azepin-8-il) oxi) propoxi) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 ,4]benzodiazepin-2-il) fenil) amino) -l-oxopropan-2-il) amino) -3-metil-l-oxobutan-2-il) hexanamida (38): Un matraz secado a la llama de 10 mi se cargó con el ácido 36 (3,6 mg, 9,5 µp???) , EEDQ (2,8 mg, 11,4 pmol) y 0,33 mi de CH2CI2 anhidro. Se añadió metanol (cuatro gotas, ~80 µ?) para facilitar la disolución y la mezcla se agitó en una atmósfera de nitrógeno durante 1 h. Después se añadió el dímero de PBD 37 (5,7 mg, 7,9 µ????) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 h, momento en el que la CL-EM reveló la conversión en el producto. La reacción se concentró, se disolvió en una cantidad mínima de CH2CI2/ y se purificó por cromatografía radial sobre una placa Chromatotron de 1 mm eluyendo con mezclas de CH2Cl2/ eOH (de 100:0 a 90:10 de CH2Cl2/MeOH) para proporcionar en engarce a fármaco 38 (3,9 mg, 45%) . TLC: Fr = 0,06, MeOH al 5% en CH2C12. HPLC analítica (ácido fórmico al 0,1%) : Tr 11,51 min. CL-EM: Tr 12,73 min, m/z (EN+) encontrado 1089,6 (M+H)+, m/z (EN") encontrado 1087, 3 ( -H) ~ .
Esquema 2 EEDQ, piridina, T??, CHCb 45% 6- (2 , 5-dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-l-il) -N- (4- ( (S) -7-metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5 , 11a-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4] benzodiazepin-8-il) oxi) propoxi) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4] benzodiazepin-2-il) fenil) hexanamida (40): En un matraz secado a la llama de 10 mi se añadió el dímero de PBD 37 (25 mg, 34,4 µp???) , que se disolvió en 1,4 mi de una mezcla de disolventes de MeOH al 10% en CHCI3. Se añadió ácido maleimidocaproico (39) (7,3 mg, 34,4 µp???) , seguido de EEDQ (10,2 mg, 41,3 µp???) y piridina (6 µ?, 68,8 µp???) . La reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante 14 h, momento en el que la CL-E reveló la conversión en el producto. La reacción se concentró, se disolvió en una cantidad mínima de CH2CI2 y se purificó por cromatografía radial sobre una placa Chromatotron de 1 mm eluyendo con mezclas de CH2Cl2/MeOH (de 100:0 a 90:10 de CH2Cl2/MeOH) para proporcionar un engarce a fármaco 40 (14,1 mg, 45%) . CL-EM: Tr 12,81 min, m/z (EN+) encontrado 918,9 (M+H)+, m/z (EN") encontrado 917,0 (M-H ) ~ .
Esquema 3 2-Bromo-N- (4- ( (S) -7-metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lff-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-8-il) oxi)propoxi) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4] benzodiazepin-2-il) enil) acetamida (41) : En un matraz secado a la llama de 10 mi se añadió el dímero de PBD 37 (16,5 g, 22,7 pmol) , que se disolvió en 0,9 mi de una mezcla de disolventes de MeOH al 10% en CHCI3. Se añadió ácido bromoacético (3,2 mg, 22,7 µp >1) , seguido de EEDQ (6,8 mg, 27,2 µp???) . La reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante 4 h, momento en el que la CL-EM reveló la conversión en el producto. La reacción se concentró, se disolvió en una cantidad mínima de CH2CI2 y se purificó por cromatografía radial sobre una placa Chromatotron de 1 mm eluyendo con mezclas de CH2Cl2/MeOH (de 100:0 a 95:5 de CH2Cl2/ eOH) para proporcionar un engarce a fármaco 41 (9,9 mg, 52%). TLC: Fr = 0,09, 5% MeOH en CH2C12, CL-EM: Tr 12,44 min, m/z (EN+) encontrado 848,1 (M+H)+, m/z (EN") encontrado 845,7 (M-H)~.
Esquema 4 6- (2 , 5-dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-l-il) -N- ( (S) -1- ( ( (S) -1- ( (3- ( (S) -7-metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5, lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1, 4]benzodiazepin-8-il) oxi) ropoxi) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-2-il) fenil) amino) -l-oxopropan-2-il) amino) -3-metil-l-oxobutan-2-il) hexanamida (43) : Un matraz secado a la llama de 10 mi se cargó con el ácido 36 (3,6 mg, 9,4 mol) , EEDQ (2,8 mg, 11,3 µ????) y 0,38 mi CH2C12 anhídrido que contenía metanol al 1%. La reacción se agitó en una atmósfera de nitrógeno durante 1 h; después, se añadió el dímero de PBD 42 (6,8 mg, 9,4 µp???) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h, momento en el que la CL-EM reveló la conversión en el producto. La reacción se concentró, se disolvió en una cantidad mínima de CH2CI2 y se purificó por cromatografía radial sobre una placa Chromatotron de 1 mm, eluyendo con mezclas de CH2Cl2/MeOH (de 100:0 a 90:10 de CH2Cl2/MeOH) para proporcionar un engarce a fármaco 43 (3,1 mg, 30%) . TLC: Fr = 0,31, 10% MeOH en CH2C12. HPLC analítica (ácido fórmico al 0,1%): Tr 11,49 min. CL-EM: Tr 12,28 min, m/z (EN+) encontrado 1089,5 ( +H)+, m/z (EN") encontrado 1087,3 (M-H) ".
Esquema 5 EEDQ, piridina, MeOH, CH2CI2 12% 6- (2 ,5-dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-l-il) -N- (3- ( (S) -7-metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5 , 11a-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4] benzodiazepin-8-il) oxi) ropoxi) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 ,4]benzodiazepin-2-il) fenil) hexanamida (44): En un matraz secado a la llama de 10 mi se añadió el dímero de PBD 42 (8,0 mg, 11 µp???) , que se disolvió en 0,44 mi de una mezcla de disolventes de MeOH al 10% en CH2C12. Se añadió ácido maleimidocaprónico (39) (2,3 mg, 11 µp???) , seguido de EEDQ (3,3 mg, 13,2 µ????) y piridina (1,8 µ?, 22 µ?t???) . La reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante 3 h, momento en el que la CL-EM reveló la conversión en el producto. La reacción se purificó por cromatografía radial sobre una placa Chromatotron de 1 mm eluyendo con mezclas de CH2Cl2/MeOH (de 100:0 a 90:10 de CH2Cl2/MeOH) para proporcionar un compuesto engarce a fármaco 44 (1,2 mg, 12%). TLC: Fr = 0,45, 10% MeOH en CH2C12. HPLC analítica (0,05% ácido trifluoroacético) : Tr 11,71 min. CL-EM: Tr 12,63 min, m/z (EN+) encontrado 919,1 (M+H)+, m/z (EN") encontrado 917,1 (M-H) " .
Esquema 6 Triacetato de (2S,3R,4S,5R, 6R) -2- (2- (3- ( ( ( (9H-fluoren-9-il) metoxi) carbonil) amino) ropanamido) -4- ( ( ( (3- ( (S) -7-metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5 , 11a-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4] benzodiazepin-8-il) oxi) propoxi) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 ]benzodiazepin-2-il) fenil) carbamoil) oxi)metil) fenoxi) -6-metiltetrahidro-2H-piran-3 , 4 , 5-tritilo (46): Un matraz secado a la llama se cargó con un intermedio d engarce de glucuronuro 45 (referencia: Jeffrey et al., Bioconjugate Chemistry, 2006, 27, 831-840) (15 mg, 20 µp???), 1,4 mi de CH2C12 anhídrido, piridina (20 µ?, 240 µ???) y después se enfrió a -78 °C en una atmósfera de nitrógeno. Después, se añadió difosgeno (3,0 µ?, 24 µp???) y la reacción se agitó durante 2 h a -78 °C, momento después del cual una pequeña alícuota se inactivo con metanol y se analizó por CL-EM para la formación del carbonato de metilo, lo que confirmó la formación del cloroformiato glucuronuro. Después, el dímero de PBD 42 (15 mg, 20 µp???) se disolvió en 0,7 mi de CH2CI2 anhídrido y se añadió gota a gota al recipiente de reacción. La reacción se calentó a 0 °C durante 2 h y después se diluyó con 50 mi de CH2CI2. La fase orgánica se lavó con agua (50 mi) y salmuera (50 mi) , se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró. El producto de reacción en bruto se purificó por cromatografía radial sobre una placa Chromatotron de 1 mm eluida con eOH 10% en CH2CI2 para proporcionar 46 (5,7 mg, 19%) . TLC: Fr = 0,47, 10% MeOH en CH2C12. HPLC analítica (ácido fórmico al 0,1%) : Tr 12,09 min. CL-EM: Tr 14,05 min, m/z (EN+) encontrado 1500,3 (M+H)+. Ácido (2S, 3S, 4S, 5R, 6S) -6- (2- (3-aminopropanamido) -4- ( ( ( (3- ( (S) -7-metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lff-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4] benzodiazepin-8-il) oxi) ropoxi) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1- s] [1 , 4]benzodiazepin-2-il) fenil) carbamoil) oxi) metil) fenoxi) -3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-carboxilico (47) : Un matraz que contenía 46 (5,7 mg, 3,8 µp???) disuelto en un mezcla de disolventes de 0,2 mi, cada uno de MeOH, tetrahidrofurano y agua se enfrió a 0 °C. A la solución agitada se le añadió hidróxido de litio monohidrato (0,8 mg, 19 µp?1) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h, momento en el que la CL-EM indicó la conversión en el producto. Se añadió ácido acético glacial (1,1 µ?, 19 µp???) y la reacción se concentró para proporcionar 47, que se llevó hacia adelante sin purificación adicional. CL-EM: Tr 11,59 min, m/z (EN+) encontrado 1138,4 (M+H)+. Ácido (2S, 3S, 4S, 5R, 6S) -6- (2- (3- (6- (2 , 5-dioxo-2 , 5-dihidro-lfí-pirrol-l-il) hexanamido) propanamido) -4- ( ( ( (3- ( (S) -7-metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-OXO-5 ,11a-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-8-il) oxi) ropoxi) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [l,4]benzodiazepin-2-il) fenil) carbamoil) oxi) metil) fenoxi) -3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-carboxilico (48) : A una solución de 47 (4,3 mg, 3,8 umol) disuelto en 0,38 mi de DMF anhidra se le añadió NHS éster de maleimidocaproílo 35 (1,2 mg, 3,8 umol), seguido de diisopropiletilamina (4,0 ul, 22,8 umol) . La reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante 2 h, momento en el que la CL-EM reveló la conversión en el producto. La reacción se diluyó con una mezcla de acetonitrilo (0,5 mi), DMSO (1 mi), agua (0,5 mi) y después se purificó por HPLC preparativa. La fase móvil consistió en A = agua y B = acetonitrilo, conteniendo ambos ácido fórmico al 0,1%. Se empleó un gradiente lineal de elusión de 90:10 de A:B a 10:90 de A:B durante 75 minutos y las fracciones que contenían el producto deseado se liofilizaron para proporcionar un compuestos de engarce a fármaco 48 (1,2 mg, 24% en dos etapas) . HPLC analítica (ácido fórmico al 0,1%) : Tr 10,85 min. CL-EM: Tr 12,12 min, m/z (EN+) encontrado 1331,4 (M+H)+, m/z (EN") encontrado 1329, 5 (M-H) ~ .
Esquema 7 6- (2,5-dioxo-2,5-dihidro-lH-pirrol-l-il) -N- ( (S) -1- ( ( (S) -1- ( (3- ( (S) -7-metoxi-8- ( (5- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4- (4-metilpiperazin-l-il) fenil) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-8-il) oxi) pentil) oxi) -5-oxo-5, lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1, 4]benzodiazepin-2-il) fenil) amino) -l-oxopropan-2-il) amino) -3-metil-l-oxobutan-2-il) hexanamida (51) : Un matraz secado a la llama de 10 mi se cargó con el ácido 36 (2,7 mg, 7,1 µ????) , EEDQ (2,1 mg, 8,5 µp???) y 0,28 mi de CH2CI2 anhídrido que contenía metanol al 1%. La reacción se agitó en una atmósfera de nitrógeno durante 1 h; después, se añadió el dímetro de PBD 49 (5,8 mg, 7,1 µ????) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 h, momento en el que la CL-EM reveló la conversión en el producto. La reacción se concentró y después se purificó por HPLC preparativa, y las fracciones que contenían el producto deseado se liofilizaron para proporcionar un compuesto de engarce a fármaco 51 (2,7 mg, 32%) . HPLC analítica (ácido fórmico al 0,1%) : Tr 9,17 min. CL-EM: Tr 11,25 min, m/z (EN+) encontrado 1185,3 (M+H)+, m/z (EN") encontrado 1182,9 ( -H) ~ .
N- ( (S) -1- ( ( (S) -1- ( (3- ( (S) -8- ( (5- ( ( (S) -2- (4- (3-(dimetilamino) ropoxi) fenil) -7-metoxi-5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4] benzodiazepin-8-il) oxi) pentil) oxi) -7-metoxi-5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-2-il) fenil) amino) -l-oxopropan-2-il) amino) -3-metil-l-oxobutan-2-il) -6- (2 , 5-dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-l-il) hexanamida (52) : Un matraz secado a la llama de 10 mi se cargó con el ácido 36 (3,7 mg, 9,7 µ?t???), EEDQ (2,9 mg, 11,6 mol) y 0,4 mi de CH2C12 anhídrido que contenía 1% de metanol . La reacción se agitó en una atmósfera de nitrógeno durante 1 h; Después, se añadió el dímero de PBD 50 (8,0 mg, 9,7 mol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 h, momento en el que la CL-EM reveló la presencia de producto. La reacción se concentró y después se purificó por HPLC preparativa, y las fracciones que contenían el producto deseado se liofilizaron para proporcionar un compuesto de engarce a fármaco 52 (3,1 mg, 25%). HPLC analítica (ácido fórmico al 0,1%) : Tr 9,45 min. CL-EM: Tr 11,75 min, m/z (EN+) encontrado 1188,4 (M+H)+, m/z (EN~) encontrado 1186 Es uema 8 4- (2 , 5-dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-l-il) -?- ( (S) -1- ( ( (S) -1-( (4- ( (S) -7-metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5, lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1, 4]benzodiazepin-8-il) oxi)propoxi) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-2-il) fenil) amino) -l-oxopropan-2-il) amino) -3-metil-l-oxobutan-2-il) benzamida (54): En un matraz secado a la llama de 10 mi se añadió un fragmento de engarce 53 (7,7 mg, 20 µ?t???) , que se disolvió en 0,33 mi de una mezcla de disolventes de MeOH al 5% CH2CI2. Se añadió EEDQ (6,1 mg, 25 µp???) y la reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante 15 minutos, momento en el que se añadió el dimero de PBD 37 (12 mg, 16,5 umol) . La reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante 3 h más, momento en el que la CL-EM reveló la conversión en el producto. La reacción se purificó por cromatografía radial sobre una placa Chromatotron de 1 mm, eluyendo con mezclas de CH2Cl2/ eOH (de 100:0 a 90:10 de CH2Cl2/MeOH) para proporcionar 54 (2,4 mg, 13%). TLC: Fr = 0,44, 10% MeOH en CH2C12. HPLC analítica (ácido trifluoroacético al 0,05%) : Tr 11,53 min. CL-EM: Tr 12,61 min, m/z (EN+) encontrado 1095,4 (M+H)+, m/z (EN") encontrado 1093,9 (M-H) ~ .
(S) -2- (2-yodoacetamido) -N- ( (S) -1- ( (4- ( (S) -7-metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lff-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4] benzodiazepin-8-il) oxi) propoxi) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-2-il) fenil) amino) -l-oxopropan-2-il) -3-metilbutanamida (56) : Un matraz secado a la llama se cargó con el engarce 55 (7,8 mg, 22 µp???) , que se disolvió en 0,37 mi de una mezcla de disolventes de MeOH al 5% en CH2C12. Se añadió EEDQ (6,8 mg, 27,5 mol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante 15 minutos, momento en el que se añadió el dimero de PBD 37 (13 mg, 18 µp???) . La reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante 4 h más, momento en el que la CL-EM reveló la conversión en el producto. La reacción se purificó por cromatografía radial sobre una placa Chromatotron de 1 mm, eluyendo con mezclas de CH2Cl2/MeOH (de 100:0 a 80:20 de CH2Cl2/MeOH) para proporcionar 56 (3,5 mg, 18%). HPLC analítica (ácido fórmico al 0,1%): Tr 11,43 min. CL-EM: Tr 12,49 min, m/z (EN+) encontrado 1064,6 (M+H)+, m/z (EN") encontrado 1098,9 (M+2H20-H)".
Esquema 9 6- (2 , 5-dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-l-il) -N- ( (S) -1- ( ( (S) -1- ( (4- ( (S) -7-metoxi-8- ( (5- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5, lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1, 4]benzodiazepin-8-il) oxi) entil) oxi) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-2-il) fenil) amino) -l-oxopropan-2-il) amino) -3-metil-l-oxobutan-2-il) hexanamida (58): En un matraz secado a la llama de 10 mi se añadió un fragmento de engarce 36 (19 mg, 50 µp???) , que se disolvió en 0,33 mi de una mezcla de disolventes de MeOH al 5% en CH2CI2. Se añadió EEDQ (12,4 mg, 50 µp???) y la reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante 15 minutos, momento en el que se añadió el dimero de PBD 57 (12,5 mg, 16,6 µ?t???). La reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante 5 h más, momento en el que la CL-EM reveló la conversión en el producto. La reacción se purificó por cromatografía radial sobre una placa Chromatotron de 1 mm eluyendo con mezclas de CH2Cl2/MeOH (de 100:0 a 80:20 de CH2Cl2/MeOH) para proporcionar 58 (2,1 mg, 11%). HPLC analítica (ácido fórmico al 0,1%) : Tr 12,19 min. CL-EM: Tr 12,58 min, m/z (EN+) encontrado 1117,8 (M+H)+, m/z (EN") encontrado 1133,7 (M+H20-H)".
Esquema 10 Ácido (R) -2- ( (R) -2- ( ( ( (9H-fluoren-9-il) metoxi) carbonil) amino) - 3-metilbutanamido) ropanoico (60) : Un matraz secado a la llama se cargó con Fmoc-D-Valina (200 mg, 0,59 mmol) y 5,9 mi de THF anhidro. Se añadió N-hidroxisuccinimida (75 mg, 0,65 mmol), seguido de diisopropilcarbodiimida (0,1 mi, 0,65 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche, momento en el que la CL-EM reveló la conversión en el producto. La mezcla de reacción se diluyó con CH2C12 y se lavó con agua (50 mi) y salmuera (50 mi) , se secó sobre sulfato sódico y se concentró a sequedad. El material se llevó hacia adelante sin purificación adicional. CL-EM: Tr 13,89 min, m/z (EN+) encontrado 437,0 (M+H)+. Se disolvió Fmoc-D-Val-OSu en bruto (0,59 mmol) en dimetoxietano (1,5 mi) y THF (0,8 mi). Se disolvió D- alanina (73 mg, 0,89 mmol) en 2,3 mi de agua y se añadió a la mezcla de reacción, seguido de bicarbonato sódico (99 mg, 1,2 mmol) . La suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante una noche, momento en el que la reacción se había aclarado y la CL-EM reveló su conclusión. La reacción se vertió en 50 mi de CH2CI2 y la fase orgánica se lavó con 50 mi HC1 de 0,1 M y después salmuera, se secó sobre sulfato sódico, y después se concentró a sequedad. El producto en bruto se purificó por cromatografía radial sobre una placa Chromatotron de 1 mm eluyendo con CH2CI2 para proporcionar 60 (128 mg, 54%) . TLC: Fr = 0,18, 10% MeOH en CH2C12. HPLC analítica (ácido fórmico al 0,1%) : Tr 9,47 min. CL-EM: Tr 13,09 min, m/z (EN+) encontrado 411,1 (M+H)+, m/z (EN") encontrado 409,2 (M-H) ~ . Ácido (R) -2- ( (R) -2- (6- (2 , 5-dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-l-il) hexanamido) -3-metilbutanamido) ropanoico (61) : El dipéptido protegido 60 (70 mg, 0,37 mmol) se suspendió en 6 mi de CH2CI2 anhidro, enfriado sobre hielo en una atmósfera de nitrógeno y se añadieron gota a gota 2 mi de dietilamina. La reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó en una atmósfera de nitrógeno durante 2 h, momento en el que HPLC reveló el consumición del material de partida. La reacción se diluyó con 6 mi de cloroformo y se concentró. El residuo de reacción en bruto se disolvió de nuevo en 6 mi cloroformo y se concentró dos veces, seguido de secado en una linea de vacio durante 2 h. Después, el dipéptido desprotegido se disolvió en 3,7 mi de DMF anhidra. Después, se añadió MC-OSu (138 mg, 0,44 mmol), seguido de diisopropiletilamina (0,32 mi, 1,9 mmol) . La reacción se agitó en una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente durante una noche. El tratamiento se consiguió vertiendo la reacción en 50 mi de HC1 0,1 M y extrayendo con acetato de etilo (50 mi, 3 x) . La fase orgánica combinada se lavó con agua (50 mi) y salmuera (50 mi) , se secó sobre sulfato sódico y se concentró. El producto en bruto se purificó por cromatografía radial sobre una placa Chromatotron de 1 mm eluyendo con mezclas de CH2Cl2/MeOH (de 99:1 a 95:5 de CH2Cl2/MeOH) para proporcionar 61 (14 mg, 22%) . RMN XH (CD3OD) d (ppm) 0,94 (d, J = 14 Hz, 3H) , 0,98 (d, J = 14 Hz, 3H) , 1,29 (m, 2H) , 1,39 (d, J = 7,4 Hz, 3H) , 1,61 (m, 4H), 2,05 (m, 1H) , 2,25 (dt, J = 1,2, 7,4 Hz, 2H) , 3,48 (t, J = 7 Hz, 2H), 4,19 (m, 1H) , 4,37 (m, 1H) , 6,78 (s, 2H) . HPLC analítica (ácido fórmico al 0,1%) : Tr 10,04 min. CL-EM: Tr 11,22 min, m/z (EN+) encontrado 382, 1 (M+H)+, m/z (EN") encontrado 380,0 (M-H)~. 6- (2 , 5-dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-l-il) -N- ( (R) -1- ( ( (R) -1-( (4- ( (S) -7-metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4] benzodiazepin-8-il) oxi) propoxi) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 ,4]benzodiazepin-2-il) fenil) amino) -l-oxopropan-2-il) amino) -3-metil-l-oxobutan-2-il) hexanamida (62): En un matraz secado a la llama de 10 mi se añadió el engarce 61 (9,5 mg, 25 mol), que se disolvió en 0,33 mi de una mezcla de disolventes de MeOH al 5% en CH2C12. Se añadió EEDQ (7,3 mg, 30 µ????) y la reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante 15 minutos, momento en el que se añadió el dimero de PBD 37 (12 mg, 16,5 pmol) . La reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante 3 h más, momento en el que la CL-EM reveló la conversión en el producto. La reacción se purificó por cromatografía radial sobre una placa Chromatotron de 1 mm eluyendo con mezclas de CH2Cl2/MeOH (de 100:0 a 80:20 de CH2Cl2/MeOH) para proporcionar 62 (2,8 mg, 16%). TLC: Fr = 0,39, 10% MeOH en CH2C12. HPLC analítica (ácido fórmico al 0,1%): Tr 11,50 min. CL-EM: Tr 12,50 min, m/z (EN*) encontrado 1089,7 (M+H)+, m/z (EN") encontrado 1088, 0 (M-H) " .
Esquema 11 Ácido (S) -2- (6- (2 , 5-dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-l-il)hexanamido)propanoico (64) : Se suspendió L-alanina (58 mg, 0,65 mmol) en 6,5 mi de DMF anhidra y después se añadió MC-OSu 35 (100 mg, 0,324 mmol). Se añadió diisopropiletilamina (0,28 mi, 1,6 mmol) y la reacción se agitó durante una noche a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno. Después, la reacción se diluyó con 50 mi de HCl 0,1 M y después la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (50 mi, 3 x) . Después, la fase orgánica combinada se lavó con agua (50 mi) y salmuera (50 mi) , se secó sobre sulfato sódico y después se concentró a sequedad. La reacción se purificó por cromatografía radial sobre una placa Chromatotron de 1 mm, eluyendo con mezclas de CH2Cl2/MeOH (de 97,5:2,5 a 90:10 de CH2Cl2/MeOH) para proporcionar 64 (25 mg, 27%). TLC: Fr = 0,25, MeOH al 10% en CH2C12. RMN XH (CD3OD) d (ppm) 1,30 (m, 2H) , 1,37 (d, J = 7,4 Hz, 3H) , 1,60 (m, 4H) , 2,21 (t, J = 7,4 Hz, 2H) , 3,48 (t, J = 7 Hz, 2H), 4,35 (c, J = 7,4 Hz, 1H) , 6,78 (s, 2H) . HPLC analítica (ácido fórmico al 0,1%) : Tr 9,06 min. 6- (2 , 5-dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-l-il) -N- ( (S) -1- ( (4- ( (S) - 7-metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5 , 11a-dihidro-lfí-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-8-il) oxi) propoxi) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-2-il) fenil) amino) -l-oxopropan-2-il) hexanamida (65) : En un matraz secado a la llama de 10 mi se añadió el engarce 64 (14 mg, 50 µp???) , que se disolvió en 0,66 mi de una mezcla de disolventes de MeOH al 5% en CH2CI2. Se añadió EEDQ (15 mg, 60 µp???) y la reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante 15 minutos, momento en el que se añadió el dímero de PBD 37 (24 mg, 33 µp\?1) . La reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante 4 h más. La reacción se purificó por cromatografía radial sobre una placa Chromatotron de 1 rara eluyendo con mezclas de CH2Cl2/MeOH (de 100:0 a 90:10 de CH2Cl2/MeOH) para proporcionar 65 (3,5 mg, 11%) . HPLC analítica (ácido fórmico al 0,1%) : Tr 11,40 min. CL-EM: Tr 12,39 min, m/z (EN+) encontrado 990, 6 (M+H)+, m/z (EN") encontrado 989,0 ( -H) ~ .
Esquema 12 Dimero de PBD 57 enlazado directamente a través de espaciador de maleimidocaproilo (Esquema 14) : El dimero de PBD 57 se acopló al ácido maleimidocaproico 39, empleado el procedimiento químico descrito en el Esquema 2.
Esquema 13 6- (2 , 5-Dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-l-il) -N- (2- ( (S) -7-metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5 , 11a-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4] benzodiazepin-8-il) oxi) ropoxi) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-2-il) fenil) hexanamida (68): A una mezcla de 66 (10 mg, 0,013 mmol) en CH2C12 (300 DI) se le añadieron DI PEA y MC-C1 (67) (3 mg, 0,013 mmol) . Después de 1 h, se añadieron 3 equiv. más de DIPEA (7 DI) y 2 equiv. del cloruro de ácido (6 mg, 0,026 mmol) . Después de 1 h, se añadieron una cantidad adicional de DIPEA (7 DI) y de cloruro de ácido (6 mg, 0,026 mmol) . Después de 3 h más, la mezcla de reacción se aspiró directamente sobre una placa de Chromatotron radial de lmm y se eluyó con diclorometano, seguido de un gradiente de metanol (del 1% al 5%) en diclorometano. Las fracciones que contenían el producto, en forma de una mezcla con la anilina de partida, se concentraron para dar un residuo y se disolvieron en una mezcla de 0,5 mi de DMSO, 0,5 mi de acetonitrilo y 0,5 mi de agua desionizada, y se purificaron adicionalmente por HPLC preparativa. El pico principal se recogió y las fracciones se combinaron, se congelaron y se liofilizaron para dar 2,1 mg (18%): EM (EN+) m/z 919,2 [M+H]+.
Nota: El cloruro de ácido 67 se preparó disolviendo 100 mg de 39 en cloruro de oxalilo (5 mi) . Se añadió una gota de D F y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante varias horas antes de que se concentrara a presión reducida. Se añadió diclorometano y la mezcla se concentró una segunda vez para proporcionar un sólido de color blanquecino que se usó directamente: RMN XH (400 MHz, CDC13) ? 6,70 (s, 2H), 3,46 (t, J = 7 Hz, 2H) , 2,82 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,72 (pent, J = 7,6 Hz, 2H) , 1,61 (pent, J = 7,4 Hz, 2H) , 1,35 (pent, J = 7,6 Hz, 2H) .
Esquema 14 O ^ O I 2- (2-Aminoacetamido) acetato de tere-butilo (69): A una mezcla de la sal cloruro de hidrógeno de éster fcerc-butilico de glicina (70) (484 mg, 2,9 mmol) en diclorometano (25 mi) se le añadieron Fmoc-Gly-OH (71) (0,861 mg, 2,99 mmol), DIPEA (756 mg, 4,35 mmol) y HATU (1,3 g, 3,5 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h, después se vertió en acetato de etilo y se lavó con agua (3 x) y salmuera (1 x) . La fase orgánica se secó sobre MgS0 , se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía radial sobre una placa de 2 mm eluyendo con metanol al 5%/diclorometano. Las fracciones gue contenían el producto se concentraron a presión reducida y se trataron con piperidina al 20%/diclorometano (10 mi) durante 1 h, antes de que se concentraran a presión reducida, y después se purificaron dos veces por cromatografía radial sobre una placa de 2 mm, eluyendo con un gradiente de metanol del 5 al 10%/diclorometano para proporcionar (200 mg, 37%): R N ½ (400 MHz , CDC13) ? 7,62 (s, 1H), 4,00 (s, 2H), 3,39 (s, 2H) , 1,47 (s, 9H) . Ácido 2- (2- (6- (2 ,5-dioxo-2 ,5-dihidro-lH-pirrol-l-il) hexanamido) acetamido) acético (72) : A una solución de la amina 69 (200 mg, 0,11 mmol) en DMF (1 mi) se le añadió 35 ( 350 mg, 0,11 mmol) y la mezcla de reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla se concentró a presión reducida y se purificó por cromatografía radial sobre una placa de 1 irati, eluyendo con diclorometano y un gradiente de metanol (del 1 al 5%) en diclorometano. Las fracciones que contenían el producto se concentraron a presión reducida, se disolvieron en diclorometano (4 mi) y se trataron con ácido trifluoroacético (4 mi) . Después de 40 min, la mezcla se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en diclorometano y se concentró para dar 22,5 mg (19%) de 72 en forma de un sólido de color blanco: RMN XH (400 MHz, CD3OD) ?. 6,79 (s, 2H) , 3,93 (s, 2H) , 3,89 (s, 2H) , 3,49 (t, J = 6,8 Hz, 2H) , 2,26 (t, J = 6,8 Hz, 2H) , 1,61 (m, 4H), 1,34 (m, 2H) ; EM (EN+) /z 326,21 [M+H] + . 6- (2 , 5-dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-l-il) -N- (2- ( (2- ( (4- ( (S) - 7-metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5 , 11a-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , ] benzodiazepin-8- il) oxi) propoxi) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , ] benzodiazepin-2-il) fenil) amino) -2-oxoetil) amino) -2-oxoetil) hexanamida (73): A una mezcla de 72 (15 mg, 0,046 mmol) en metanol al 5%/diclorometano (0,5 mi) se le añadió EEDQ (11 mg, 0, 046 mmol) y la mezcla se agitó durante 30 min a temperatura ambiente, momento en el que se añadió 37 (16 mg, 0,023 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 3 h y se purificó directamente sobre una placa de Chromatotron radial de 1 mm, eluyendo con un gradiente de metanol del 1% al 4%/diclorometano para dar 6,8 mg (29%) de 73 en forma de un sólido de color amarillo: EM (EN+) m/z 1033,57 [M+H]\ Esquema 15 1- ( (S) -Pirrolidin-2-carbonil)pirrolidin-2-carboxilato de (S) -tere-butilo (74): A una mezcla de sal cloruro de hidrógeno de éster terc-butilico de L-prolina 75 (0,5 g, 2,9 mmol) en diclorometano (50 mi) se le añadieron 76 (0,98 g, 2,99 mmol), DIPEA (756 mg, 4,35 mmol) y HATU (1,3 g, 3,5 mmol) . La mezcla de reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla se vertió en acetato de etilo (100 mi) y se lavó con HC1 0,2 N (50 mi), agua (50 mi) y salmuera (50 mi), y se secó sobre MgSC>4. La cromatografía se realizó en una placa radial Chromatotron de 2 mm, eluyendo con acetato de etilo al 10% en hexanos . Las fracciones que contenían el producto se concentraron a presión reducida, se disolvieron de nuevo en diclorometano (8 mi) y se trataron con piperidina (2 mi) . La mezcla se agitó durante 1 h, se concentró a presión reducida y se purificó sobre una placa Chromatotron radial de 2 mm, eluyendo con metanol al 5%/diclorometano . Esto produjo 200 mg (26%) del dipéptido 74: RMN XH (400 MHz, CDCI3) ? 4,41 (m, 1H) , 4,17 (m, 1H) , 3,82 (m, 1H) , 3,57 (m, 4H) , 3,2 (m, 1H), 2,82 (m, 1H) , 2,83-1,65 (m, 5H) , 1,44 (m, 9H) . 1- ( (S) -1- (6- (2 , 5-Dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-l-il) hexanoil) pirrolidina-2-carbonil) pirrolidina-2-carboxilato de (S) -tere-butilo (77) : A una mezcla de la amina 74 (200 mg, 0,75 mmol) , 39 (190 mg, 0,9 mmol) y DIPEA (0,32 mi, 1,8 mmol) se le añadió HATU (342 mg, 0,9 mmol) y la mezcla se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 5 h. La mezcla se vertió en acetato de etilo (100 mi) y se lavó con agua (3 x 100 mi) y salmuera (1 x 100 mi) . La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró. El residuo resultante se sometió a cromatografia radial sobre una placa Chromatotron radial de 2 mm, eluyendo con diclorometano seguido de un gradiente creciente de metanol del 1 al 5% en diclorometano. Dos purificaciones adicionales, ambas eluyendo con un gradiente de metanol del 1 al 5% en diclorometano, primero en una placa de 2 mm y después en una placa de 1 mm proporcionaron 113 mg (33%) de 77 en forma de un sólido de color blanco: R N JH (400 MHz, CDC13) ?. 4,63 (m, 1H) , 4,41 (m, 1H) , 3,82 (m, 1H) , 3,6 3 (m, 1H) , 3,55 (m, 1H) , 3,45 (m, 3H) , 2,38-1,83 (m, 10H), 1, 70-1, 50 (m, 5H) , 1,45 (m, 9H) , 1,35 (m, 2H) ; EM (EN+) m/z 462,33 [M+H]+. Ácido (S) -1- ( (S) -1- (6- (2 ,5-dioxo-2 ,5-dihidro-lH-pirrol-l-il) hexanoil) pirrolidin-2-carbonil) pirrolidina-2-carboxilico (78) : A una mezcla del éster terc-butilico 77 en diclorometano (4 mi) se le añadió ácido trifluoroacético (4 mi) . Después de 40 min, se determinó que la reacción se había completado por análisis HPLC. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en diclorometano y se concentró una segunda vez para dar 37 mg (100%) de 78 en forma de un sólido de color blanco: RMN 1ti (400 MHz , CDC13) ? 6,68 (s, 2H) , 4,62 (m, 2H) , 3,81 (m, 1H), 3,70 (m, 1H), 3,57 (m, 2H) , 3,45 (m, 2H) , 2,40-1,91 (m, 10H), 1,70-1, 45 (m, 4H) , 1,33 (m, 2H) ; EM (EN+) m/z 406,2 [M+H]+. 1- (1- (6- (2 , 5-dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-l-il) hexanoil) irrolidina-2-carbonil) -N- (4- ( (S) -7-metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lfí-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-8-il) oxi) ropoxx) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4] benzodiazepin-2-il) fenil) pirrolidina-2-carboxamida (79): A una mezcla de 78 (9,3 mg, 0,023 mmol) en metanol al 5% /diclorometano (0,4 mi) se le añadió EEDQ (7 mg, 0, 027 mmol) . La mezcla se agitó durante 15 min a temperatura ambiente y después se añadió 37 (15 mg, 0,021 mmol). La mezcla se agitó durante 4 h, la mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (2 mi) y se aspiró directamente sobre una placa Chromatotron radial de 1 mm. El producto se eluyó con un gradiente de metanol del 1 al 5% en diclorometano para proporcionar 6,8 mg (29%) de 79 en forma de un sólido de color amarillo: E (EN+) m/z 1113,51 [M+H] + .
Esquema 16 Ácido (S) -5- (aliloxi) -2- ( (S) -2- ( ( (aliloxi) carbonil) amino) -3-metilbutanamido) -5-oxopentanoico (80) : A una mezcla de la resina de 2-clorotritilo (1,0 g, 1,01 mmol) suspendida en diclorometano (10 mi) se le añadieron Fmoc-Glu- (OAlil) -OH (81) (409 mg, 1,0 mmol) y DIPEA (173 DI, 1,0 mmol) . La mezcla de reacción se agitó durante 5 min, se añadió una porción adicional de DIPEA (260 DI, 1,5 mmol) y la mezcla se agitó durante 1 h. Se añadió metanol (0,8 mi) y la mezcla se agitó durante 5 min, antes de que se filtrara, se lavó con DMF (6 x) , diclorometano (6 x) , éter dietilico (6 x) y se secó a presión reducida. La resina resultante se sometió a piperidina al 20% en diclorometano (10 mi) durante 1 h, antes de que se filtrara, se lavó con DMF (6 x) , diclorometano (6 x) , éter dietilico (6 x) y se secó a presión reducida.
A una mezcla del Fmoc-Val-OH (82) (1,03 g, 3,30 mmol) ) en DMF (7 mi) se le añadió DI PEA (1,0 mi) y HATU (1,1 g, 3,03 mmol). Después de mezclar minuciosamente, la solución se aspiró en una jeringa de 10 mi que contenia la resina preparada anteriormente. La mezcla se tapó y se agitó durante 16 h. La resina se lavó con DMF (6 x) , diclorometano (6 x) y éter (6 x) . Una pequeña porción (10 mg) se aisló y se trató con TFA al 20%/Diclorometano y la solución resultante se analizó por CL-EM, que reveló un pico de alta pureza que mostró la masa correcta (EM (EN+) m/z 509,28 [M+H]+). Después, la resina restante se trató con piperidina al 20%/DMF (8 mi) durante 2 h, antes de que se lavara con DMF (6 x) , diclorometano (6 x) , éter dietilico (6 x) y se secara a presión reducida.
Se preparó una mezcla de cloroformiato de alilo (529 ?1, 5,05 mmol), DI PEA (1,7 mi, 10 mmol) en diclorometano (10 mi) y se aspiró en una jeringa que contenia la resina anterior. La mezcla se tapó y se agitó. Después de aproximadamente 2 h, la mezcla de reacción se drenó y se lavó con diclorometano (6 x) . Una pequeña porción de la resina (-10 mg) se escindió con TFA al 20%/diclorometano y se analizó por CL-EM para masas de material de partida y producto. El componente principal era todavía la amina sin reaccionar, por lo que la resina se sometió de nuevo a las condiciones descritas anteriormente. Después de 4 h, la resina se lavó con diclorometano (6 x) y después se trató repetidamente con TFA al 5% en diclorometano (4 x 7 mi) . La solución resultante se concentró a presión reducida. La mezcla se purificó sobre una placa Chromatotron radial de 2 mm eluyendo con metanol al 5%/diclorometano para dar 107 mg de 80: RMN XH (400 Hz , CDC13) ?. 7,05 (s, 1H) , 5,90 (m, 2H) , 5,57 (d, 1H), 5,29 (d, J = 14,7 Hz, 2H) , 5,22 (t, J = 10,9 Hz, 2H) , 4,59 (m, 5H) , 4,02 (m, 1H) , 2, 60-2,40 (m, 2H), 2,37-2,18 (m, 1H) , 2,17-2,02 (m, 2H) , 0,96 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 0,93 (d, J = 6,6 Hz, 3H) ; EM (EN+) m/z 371,12 [M+H]+. 4- ( (S) -2- ( ( (Aliloxi) carbonil) amino) -3-metilbutanamido) -5-( (4- ( (S) -7-metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-8-il) oxi) ropoxi) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , ]benzodiazepin-2-il) fenil) amino) -5-oxopentanoato de (S)-alilo (83) : A una mezcla del ácido 80 (30, 0,04 mmol) en metanol al 5%/diclorometano (1 mi) se le añadió EEDQ (20 mg, 0, 082 mmol) . La mezcla se agitó durante 30 min a temperatura ambiente, después se añadió 37 (30 mg, 0,04 mmol) y la mezcla se agitó durante aproximadamente 5 h. La purificación parcial aspirando directamente sobre una placa Chromatotron radial de 1 mm y eluyendo con un gradiente de metanol del 1% al 5%/diclorometano proporcionó una mezcla del producto deseado y 37 (26 mg; ~3:1, respectivamente) que se llevó hacia adelante sin purificación adicional. Ácido (S) -4- ( (S) -2-amino-3-metilbutanamido) -5- ( (4- ( (S) -7-metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5 , 11a-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4] benzodiazepin-8-il) oxi) propoxi) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 ,4]benzodiazepin-2-il) fenil) amino) -5-oxopentanoico (84) : A la mezcla de 83 y 37 (26 mg) en diclorometano anhidro (3 mi) se le añadieron Ph3P (0,3 mg, 0,0012 mmol) , pirrolidina (4 DI, 0,048 mmol) y tetraquis paladio (0,7 mg, 0,6 Oriol) . Después de 2 h, se añadió una cantidad adicional (0,7 mg, 0,6 Oriol) de de tetraquis paladio y la reacción se dejó en agitación durante 1 h más antes de concentrar a presión reducida. El residuo se disolvió en DMSO (1 mi), acetonitrilo con ácido fórmico al 0,05% (1 mi) y agua con ácido fórmico al 0,05% (1 mi) y se purificó por HPLC de fase inversa. Una sola fracción del producto se recogió y se liofilizó para dar 6 mg (14% en dos etapas) de 84: EM (EN+) m/z 1078, 6 [M+H] + . Ácido (S) -4- ( (S) -2- (6- (2 , 5-dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-l-il)hexanamido) -3-metilbutanamido) -5- ( (4- ( (S) -7-metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4 ]benzodiazepin-8-il) oxi) propoxi) -5-oxo-5,lla-dihidro-lff-pirrolo[2,l-c] [1 , 4] benzodiazepin-2- il) fenil) amino) -5-oxopentanoioo (85) : A una mezcla de 84 (6 mg, 6 Gmol) y 35 (2 mg, 6 Gmol) en DMF (200 Gl) se le añadió DIPEA (3 DI, 18 Dmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente. Después de 1 h, se añadió una cantidad equivalente de 35 (2 mg, 6 Gmol) y la reacción la reacción continuar en agitación a temperatura ambiente durante 3 h. Se añadió un tercer equivalente de 35 (2 mg, 6 ?mol) y la mezcla se agitó durante aproximadamente 1 h, se concentró a presión reducida, se disolvió en diclorometano y se aspiró directamente sobre una placa Chromatotron radial de 1 mm y se eluyó con metanol al 5% en diclorometano. Esto produjo 2,5 mg (36%) de 85 de alta pureza: EM (EN+) m/z 1147,49 [M+H]+. Ácido (21S , 24S) -1- (2 , 5-dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-l-il) -21-isopropil-24- ( (4- ( (S) -7-metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-8-il) oxi) propoxi) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-2-il) fenil) carbamoil) -3,19 , 22-trioxo-7 ,10,13, 16-tetraoxa-4 , 20 , 23-triazaheptacosan-27-oico (86) : A una mezcla de 84 (8 mg, 8,4 Dmol) y Mal-PEG4-NHS (87) (6,5 mg, 12,6 Dmol) en DMF (200 DI) se le añadió DIPEA (4,3 DI, 25 Gmol) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se disolvió en diclorometano y se aspiró en sobre una placa Chromatotron radial de 1 mm. El material fue polar y no se sometió a cromatografía sobre la placa Chromatotron basada en gel de sílice. La placa se eluyó con metanol para recuperar la mezcla, que se aisló a presión reducida. El material residual se purificó por HPLC preparativa de fase inversa. Un sólo pico principal se eluyó y las fracciones se combinaron, se congelaron y se liofilizaron para dar un residuo de 0,9 mg (8%) de 86: E (EN+) m/z 1353,04 [M+H]+.
Esquema 17 Ácido (S) -6- (dimetilamino) -2- (6- (2 , 5-dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-1-il)hexanamido) hexanoico (88) : A una mezcla de la resina de 2-clorotritilo (1 g, 1,01 mmol) en CH2Cl2 (10 mi) se le añadieron Fmoc-Lys (Me) 2-OH (89) (432 mg, 1,0 mmol) y DIPEA (433 DI, 2,5 mmol) . La mezcla de reacción se agitó durante 1 h. Se añadió metanol (0,8 mi) y la mezcla se agitó durante 5 min más antes de que se filtrara, se lavó con DMF (6 x) , diclorometano (6 x) , éter dietílico (6 x) y se secó a presión reducida. La resina seca sometió a piperidina al 20% en DMF (10 mi) durante 1 h antes de que se filtrara y se lavó con DMF (6 x) , diclorometano (6 x), éter dietílico (6 x) .
A una mezcla de 39 (3,0 mmol, 633 mg) en DMF (7 mi) se le añadió DIPEA (1,0 mi) y HATU (1,1 g, 3,03 mmol). Después de mezclar minuciosamente, la solución se aspiró en una jeringa de 10 mi que contenia la resina anterior. La mezcla se tapó, se agitó durante 16 h, se filtró y la resina se lavó con DMF (6 x) , diclorometano (6 x) y éter etílico (6 x) . La resina trató repetidamente con TFA al 5%/diclorometano (6 mi x 5), se agitó durante 1 min, y después se filtró. La solución resultante se concentró a presión reducida y a alto vacío. El material se purificó por HPLC preparativa de fase inversa para dar 208 mg de 88: RMN XH (400 MHz , mezcla 1 : 1 de CD30H/CDC13) ? 6,73 (sr 2H) , 4,41 (m, 1H), 3,48 (t, 2H) , 3,31 (s, 1H) , 3,03 (m, 2H) , 2,84 (s, 6H) , 2,22 (m, 2H) , 1,87 (m, 2H) , 1, 78-1, 52 (m, 6H), 1,43 (m, 2H) , 1,31 (pent, 2H) ; EM (EN+) m/z 386,28 [M+H]+.
(S) -6- (Dimetilamino) -2- (6- (2 , 5-dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-1-il) hexanamido) -N- (4- ( (S) -7-metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2-(4-metoxifenil) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4] benzodiazepin-8-il) oxi) propoxi) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-2-±l) fenil) hexanamida (90): A una mezcla de 88 (9,3 mg, 0,023 mmol) en metanol al 5%/diclorometano (400 DI) se le añadió EEDQ (7 mg, 0,027 mmol) . La mezcla se agitó durante 30 min a temperatura ambiente y después se le añadió 37 (15 mg, 0,021 mmol). Después de 4 h, la mezcla se concentró a presión reducida, se disolvió en una mezcla de DMSO (1 mi), acetonitrilo (2 mi que contenia ácido fórmico al 0,05%) y agua (1 mi, que contenia ácido fórmico al 0,05%) y se purificó por HPLC de fase inversa (procedimiento A) . Las fracciones que contenían el producto estaban contaminadas con 37, de manera que las fracciones se liofilizaron para dar un residuo y se purificaron de nuevo como se ha descrito anteriormente para dar 0,5 mg (2%) de 90 puro: EM (EN+) m/z 537,46 [M+H]/2+.
Esquema 18 ( (S) -1- ( ( (S) -1- ( (4- ( (S) -7-Metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-8-il) oxi) propoxi) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , l-c] [1 , 4] benzodiazepin-2-il) fenil) amino) -1-oxopropan-2-il) amino) -3-metil-l-oxobutan-2-il) carbamato de alilo (91) : A una mezcla de 92 (45 mg, 0,123 mmol) en metanol al 5%/diclorometano (1 mi) se le añadió EEDQ (30,4 mg, 0,123 mmol) . La mezcla se agitó durante 30 min a temperatura ambiente y después se añadió 37 (30 mg, 0,041 mmol) . La mezcla de reacción se agitó durante aproximadamente 5 h y después se purificó sobre una placa Chromatotron radial de 1 mm, eluyendo con metanol al 5%/diclorometano para dar 22 mg (55%) de 91 que no se caracterizó, sino que se llevó directamente hacia adelante. 1- (3- (2 , 5-dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-l-il)propanamido) -N- ( (S) -1- ( ( (S) -1- ( (4- ( (S) -7-metoxi-8- (3- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4]benzodiazepin-8-il) oxi) propoxi) -5-???-5 , lla-dihidro- ??-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4] benzodiazepin-2-il) fenil) amino) -1-oxopropan-2-il) mino) -3-metil-l-oxobutan-2-il) -3,6,9, 12-tetraoxapentadecan-15-amida (93) : A una solución de 91 (22 mg, 0, 022 mmol) en diclorometano anhidro (3 mi) se le añadieron Ph3P (0,3 mg, 0,0012 mmol), pirrolidina (4 DI, 0,048 mmol) y tetraquis paladio (0,7 mg, 6 Omol) . Después de aproximadamente 2 h, la mezcla de reacción se purificó sobre una placa Chromatotron radial de 1 mm eluyendo con metanol del 5% al 10%/diclorometano . La banda principal se recogió y se concentró para dar un residuo que se disolvió en DMF (0,2 mi) y se hizo reaccionar con el éster de NHS 87 (10 mg, 0,19 mmol) . La reacción se dejó en agitación durante 30 min, se concentró y se purificó por cromatografía radial sobre una placa de 1 mm, eluyendo con metanol al 5%/diclorometano para dar 3,2 mg (11%) de 93: EM (EN+) m/z 1294, 7 [ +H] + .
Esquema 19 (E) -6- (2 , 5-dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-l-il) -N ' - (4- ( (S) -7 metoxi-8- ( (5- ( ( (S) -7-metoxi-2- (4-metoxifenil) -5-oxo-5 , lia dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [1 , 4] benzodiazepin-8-il) oxi) entil) oxi) -5-oxo-5 , lla-dihidro-lH-pirrolo [2 , 1-c] [l,4]benzodiazepin-2-il)bencilideno)hexanohidrazida (94) : A una mezcla del aldehido 95 (5,4 mg, 7 Dmol) en metanol al 5%/diclorometano a 0 °C se le añadió la sal hidrazida-TFA 96 (4,5 mg, 14 Dmol) . La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 5 h antes de que se concentrara a presión reducida y se purificara sobre una columna de gel de sílice, eluyendo con metanol al 3%/diclorometano para dar 2,2 mg (32%) de 94: EM (EN+) m/z 974, 49 [M+H] + .
Esquema 20 2- ( (S) -2-Amino-3-metilbutanamido) propanoato de ( S) - texrc-butilo (97) : A una mezcla de la sal cloruro de hidrógeno de alanin-O- terc-butil éster hidrógeno (98) (500 mg, 2,76 mmol) en diclorometano (5 mi) se le añadió Fmoc-val-OSu (99) (1,09 g, 2,51 mmol) . Se añadió DI PEA (0,96 mi, 5,5 mmol) y la mezcla de reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla se vertió en diclorometano (100 mi) y se lavó con HC1 1 N (50 mi) y agua (50 mi), antes de secar sobre sulfato de magnesio. El material se sometió a cromatografía sobre una placa Chromatotron radial de 2 mm eluyendo con un gradiente de metanol del 1 al 5%/diclorometano y las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron. El residuo resultante se disolvió en diclorometano (16 mi) y se añadió piperidina (4 mi) . La mezcla se agitó durante 10 min antes de concentrar a presión reducida. El residuo resultante se sometió a cromatografía sobre una placa de 2 mm, eluyendo en primer lugar con amoniaco-diclorometano saturado, seguido de metanol al 5% en amoniaco-diclorometano saturado para dar 494 mg (2,02 mmol, 81% en dos etapas) de 97: RMN XH (400 MHz, CDC13) ? 7,78 (s a, 1H) , 4,47 (m, 1H) , 3,30 (d, 1H) , 2,30 (m, 1H) , 1,38 (d, 3H), 1,47 (s, 9H) , 1,00 (d, J = 7,0 Hz, 3H) , 0,84 (d, J = 6, 9 Hz, 3H) . 2- ( (S) -2- (4- (2 , 5-Dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-l-il) benzamido) -3-metilbutanamido) propanoato de (S) -tere-butilo (100): A una mezcla de 97 (100 mg, 0,41 mmol) y ácido 4-maleimidobenzoico (101) (98 mg, 0,45 mmol) se le añadió diclorometano (5 mi), seguido de TBTU (157 mg, 0,49 mmol) y DIPEA (212 ul, 1,23 mmol) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 h y después se purificó sobre una placa Chromatotron radial de 2 mm eluyendo con acetato de etilo al 50% en hexanos para dar 95 mg (51%) de 100: RMN XH (400 MHz, CDC13) d 7,85 (d, J = 6,6 Hz, 2H) , 7, 42 (d, J = 6,6 Hz, 2H) , 6,81 (s, 2H) , 6,38 (s a, 1H) , 4,43 (m, 2H) , 2,14 (sept., J = 6,6 Hz, 1H) , 1,41 (s, 9H) , 1,31 (d, J= 7,0 Hz, 3H), 0,98 (m, 6H) ; EM (EN") m/z 441,90 [ -H]". Ácido (R) -2- ( (S) -2- (4- (2 , 5-dioxo-2 , 5-dihidro-lH-pirrol-l-il)benzamido) -3-metilbutanamido) propanoico (53) : A una mezcla de 100 (47 mg, 0,11 mmol) en diclorometano (5 mi) se le añadió ácido trifluoroacético (5 mi) y la mezcla de reacción se controló por TLC (acetato de etilo al 50% en hexano, después de bombear la placa de TLC a alto vacio durante 5 min) . Después de 75 min, no pudo detectarse material de partida por TLC. La reacción se realizó una segunda vez usando las mismas condiciones y los materiales de ambas reacciones se combinaron y se purificaron sobre una placa Chromatotron radial de 2 mm eluyendo con un gradiente de metanol al 5-10% en diclorometano. El rendimiento fue 42 mg (49%) de 53: RMN 2H (400 MHz, CDCI3) ? 7,92 (d, J = 6, 6 Hz, 2H) , 7,51 (d, J = 6,6 Hz, 2H) , 7,0 (m, 1H) , 6,89 (s, 2H) , 6,70 (s, 1H), 4,60 M, 1H) , 2,22 (m, 1H) , 1,18 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , 1,04 (m, 6H) ; EM (EN+) m/z 388,02 [M+H]+. Ácido (S) -2- ( (S) -2- (2-yodoacetamido) -3-metilb tanamido) ropanoico (102) : A una mezcla de 97 (100 mg, 0,41 mmol) en diclorometano se le añadió yodoacetamida-éster de NHS (103) (115 mg, 0,41 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente. Después de 30 min, la mezcla se aspiró sobre una placa Chromatotron de 1 mm y se eluyó con acetato de etilo en hexanos (1:1). Se recogió una sola banda y se confirmó la estructura: RMN XH (400 Hz, CDC13) ? 6,70 (d, J= 7,8 Hz, 1H) , 6,27 (d, J = 7,0 Hz, 1H) , 4,45 (m, 1H) , 4,26 (dd, J = 8,6, 6,3 Hz, 1H) , 3,72 (cuart., J = 11,3 Hz, 2H) , 2,13 (sept., J = 6,5 Hz, 1H) , 1,47 (s, 9H) , 1,38 (d, J= 7,1 Hz, 3H), 0,99 (m, 6H) ; EM (EN+) m/z 412,87 [M+H] +. Ácido (S) -2- ( (S) -2- (2-yodoacetamido) -3-metilbutanamido) propanoico (55) : Véase procedimiento para la síntesis de ácido (R) -2- ( (S) -2- (4- (2, 5-dioxo-2, 5-dihidro-lH-pirrol-l-il) benzamido) -3-metilbutanamido) propanoico (53). Esto produjo 22 mg (15% en dos etapas): RMN XH (400 MHz, D6-DMSO) ? 8,27 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 4,24 (m, 2H) , 3,97 (s a, 2H) , 3,83 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 3,71 (d, J = 9,6 Hz, 1H) , 2,07 (m, 1H) , 1,33 (d, J = 7,3 Hz, 3H), 0,93 (d, J= 6,7 Hz, 3H) , 0,89 (d, J= 6,9 Hz, 3H); EM (EN") m/z 354, 84 [M-H] ~ .
Esquema 21 Dimeros de PBD enlazados a través de aminas alifáticas (Esquema 21) . Las aminas alifáticas que contenían dimeros de PBD, tales como una bencilamina (Ejemplo 9) , se sintetizaron con engarces peptídicos, el engarce de glucuronuro y/o engarces dependientes de la degradación de mAb para su liberación (es decir, engarces no escindibles) . Los engarces de fármaco conjugados a través de una bencilamina incluirán: (1) un péptido escindible empleando una química similar al Esquema 1; (2) unión directa con un grupo maleimidocaproilo (un engarce no escindible) (Esquema 2); (3) un engarce de glucuronuro, preparado como se ha descrito en el Esquema 6.
Esquema 22 Dimeros de PBD de anilina enlazados en 2 , 3 y 4 a péptidos genéricos (Esquema 22) . Los dimeros de PBD con anilinas en las posiciones 2, 3 y 4 se conjugaron con engarces basados en péptidos, empleando la química descrita en el Esquema 1, o unieron directamente con ácido maleimidocaproico, como se ilustra en el Esquema 2.
Ejemplo 14: Preparación de Conjugados de damero de PDB Se prepararon conjugados anticuerpo-fármaco como se ha descrito previamente (véase Doronina et al., Nature Biotechnology, 21, 778-784 (2003) ) o como se describe a continuación. Brevemente, para el engarce de fármaco de maleimida, los niAb (4-5 mg/ml) en PBS que contenían borato sódico 50 mM a pH 7,4 se redujeron con clorhidrato de tris (carboxietil) fosfina (TCEP) a 37 °C. El progreso de la reacción, que redujo disulfuros intercatenarios , se controló por reacción con 5, 5' -ditiobis (ácido 2-nitrobenzoico) y se dejó continuar hasta que se consiguió el nivel de deseado de tioles/mAb . Después, el anticuerpo reducido se enfrió a 0 °C y se alquiló con 1,5 equivalentes de engarce de fármaco de maleimida por tiol de anticuerpo. Después de 1 h, la reacción se interrumpió mediante la adición de 5 equivalentes de N-acetil cisteina. El engarce de fármaco inactivado se retiró filtración de gel sobre una columna de PD-10. Después, el ADC se filtró estéril a través de un filtro de jeringa de 0,22 ym. La concentración de proteína se determinó por análisis espectral a 280 nm y 329 nm, respectivamente, con corrección para la contribución de la absorbancia de fármaco a 280 nm. Se usó cromatografía de exclusión de tamaño para determinar la extensión de la agregación de anticuerpo y la HPLC de FI confirmó la ausencia de engarce de fármaco inactivado con NAC restante.
Para engarces de fármaco basados en halo acetamida, la conjugación se realizó generalmente como se indica a continuación: A una solución de 10 mg/ml de anticuerpo reducido y oxidado (que tiene cisteínas introducidas por sustitución de S239C en las cadenas pesadas (véase más adelante)) en Tris 10 mM (pH 7,4), NaCl 50 mM y DTPA 2 mM se le añadieron 0,5 volúmenes de propilenglicol . Una solución 10 mM de engarce de fármaco basado en acetamida, en dimetilacetamida se preparó inmediatamente antes de la conjugación. Según se añadía a la solución de anticuerpo, una cantidad equivalente de propilenglicol se añadió a un exceso 6 veces molar del engarce de fármaco. La solución diluida de fármaco-engarce se añadió a la solución de anticuerpo y el pH se ajustó a 8,0-8,5 usando Tris 1 M (pH 9) . La reacción de conjugación se dejó continuar durante 45 minutos a 37 °C. La conjugación se verificó reduciendo y desnaturalizando por cromatografía PLRP-S de fase inversa. El exceso de engarce a fármaco se retiró con resina MP de Quadrasil (Sigma Aldrich; N° de Producto 679526) y el tampón se intercambió en Tris 10 mM (pH 7,4), NaCl 50 mM y propilenglicol al 5%, usando una columna de desalado PD-10 (GE Heathcare; N° de Producto 17-0851-01) .
Anticuerpos hlgGl sometidos a ingeniería con cisteínas introducidas: Los anticuerpos CD70 que contienen un residuo de cisteína en la posición 239 de la cadena pesada (hl F6d) se redujeron completamente mediante la adición de 10 equivalentes de TCEP y EDTA 1 mM y ajustando el pH a 7,4 con tampón Tris 1M (pH 9,0). Tras una incubación de 1 hora a 37 °C, la reacción se enfrió hasta 22 0 y se añadieron 30 equivalentes de ácido dehidroascórbico para reoxidar selectivamente los disulfuros nativos al tiempo que se deja la cisteína 239 en estado reducido. El pH se ajustó hasta 6,5 con tampón Tris 1M (pH 3,7) y se dejó proceder la reacción durante 1 hora a 22 °C. El pH de la solución se elevó después de nuevo hasta 7,4 mediante la adición de tampón Tris 1 (pH 9,0). 3,5 equivalentes del conector de fármaco PBD en DMSO se introdujeron en un contenedor adecuado para la dilución con propilenglicol antes de la adición a la reacción. Para mantener la solubilidad del conector de fármaco PBD, el propio anticuerpo se diluyó primero con propilenglicol hasta una concentración final del 33 % (p. ej . , si la solución de anticuerpos estaba en un volumen de reacción 60 mi, se añadieron 30 mi de propilenglicol) . Este mismo volumen de propilenglicol (30 mi en este ejemplo) se añadió después al conector de fármaco PBD como diluyente. Después de mezclar, la solución del conector de fármaco PBD en propilenglicol se añadió a la solución de anticuerpos para efectuar la conjugación; la concentración final de propilenglicol es 50 %. La reacción se dejó proceder durante 30 minutos y después se inactivo mediante la adición de 5 equivalentes de N-acetilcisteina . La ADC se purificó después mediante ultrafiltración a través de una membrana de 30 kD. (Obsérvese que la concentración de propilenglicol usado en la reacción se puede reducir para cualquier PBD concreto, dado que su único propósito es mantener la solubilidad del conector del fármaco en el medio acuoso . ) Ejemplo 15: Determinación de la citotoxidad in vitro de conjugados seleccionados La actividad citotóxica in Vitro de los conjugados fármaco-anticuerpo seleccionados se evaluó usando un ensayo de reducción de resazurina (Sigma, St. Louis, MO, EE.UU.) (referencia: Doronina y col., Nature Biotechnology, 2003, 21,778-784) .
Los conjugados fármaco-anticuerpo se prepararon como se ha descrito anteriormente en el Ejemplo 13.
Para un ensayo de 96 horas, las células cultivadas en crecimiento de fase logarítmico se sembraron durante 24 horas en placas de 96 pocilios que contienen 150 µ? de medio RPMI 1640 suplementado con FBS al 20 %. Se prepararon diluciones en serie de ADC en medios de cultivo celular a 4x la concentración de trabajo; a las placas de 96 pocilios se añadieron 50 µ? de cada dilución. Tras la adición de ADC, las células se incubaron con artículos de ensayo durante 4 días a 37 °C. Después se añadió resazurina a cada pocilio para alcanzar una concentración final de 50 µ? y las placas se incubaron durante 4 horas adicionales a 37 °C. Las placas se leyeron después para determinar la extensión de la reducción del pigmento en un lector de placas Fusión HT (Packard, Meriden, CT, EE.UU.) usando una longitud de onda de excitación y de emisión de 530 nm y 590 nm, respectivamente. El valor de CI50, determinado por triplicado, se define en el presente documento como la concentración que da lugar a una reducción del 50 % en el crecimiento celular respecto a los controles no tratados.
En referencia a la Tabla 4 (más adelante) , se muestra la citotoxicidad in vitro de las ADC que tienen dimeros de para-anilina PBD usando el ensayo de 96 horas. Las ADC se analizaron frente a las líneas celulares CD70+ CD30" y una línea celular control CD70" CD30". Los anticuerpos usados fueron un anticuerpo CD70, 1F6 humanizado (véase la solicitud de EE.UU. publicada n° 2009-148942), un anticuerpo CD30, AC10 quimérico (véase la solicitud de EE.UU. publicada n° 2008-0213289) y un anticuerpo CD70 (1F6 humanizad) en el que se han introducido residuos de cisteína en la posición de aminoácidos 239 de la cadena pesada (de acuerdo con el sistema de numeración en la UE) (indicado como hlF6d) . Los conjugados que tienen un conector de maleimidil-péptido (compuesto conector de fármaco 38) tenía una CI50 menor que los conjugados con un conector a base de maleimidilo o acetamida (compuestos 40 y 41, respectivamente) .
La actividad citotóxica in Vitro de las ADC portadoras de conectores de fármaco derivados del dímero para-anilina PBD 37: Tabla 4. Actividad citotóxica in vitro en lineas celulares CD70+ (ng/ml), todas las ADC 2 fármacos /mAb Carcinoma de células renales LMA CD70+/30- CD70/30 786-0 Caki-1 769-P ACHN HEL9217 hlF6d38 30 5 1378 hlF638 4 118 26 CAC1038 1052 4005 508 hlF640 7113 1764 CAC1040 2644 1264 hlF641 580 1243 CAC1041 1153 1121 En referencia a la Tabla 5, se muestra la citotoxicidad in vitro de ADC conjugadas con los dimeros PSD en las lineas celulares CD30+ usando un ensayo de 96 horas. Las ADC se analizaron frente a las lineas celulares CD30+CD70+y una linea celular CD70" CD30". Los anticuerpos usados fueron un anticuerpo CD70, 1F6 humanizado (véase la solicitud de EE.UU. publicada n° 2009-148942) y un anticuerpo CD30, AC10 quimérico (véase la solicitud de EE.UU. publicada n° 2008-0213289) . Los conjugados que tienen un conector de maleimidil-péptido (compuesto conector de fármaco 38) tenían, generalmente, una CI5o menor que los conjugados con un conector a base de maleimidilo o acetamida (compuestos 40 y 41, respectivamente) .
Tabla 5. Actividad citotóxica in vitro en lineas celulares CD30+ (ng/ml), todas las ADC 2 fármacos/mAb ALCL Linfoma de Hodgkin CD70-/CD30+ CD70+/30+ Karpas 299 L428 L540cy L1236 Hs445 hlF6-38 1165 59 4 >10.000 5 CaclO-38 0,8 7 3 2012 0,2 hlF6-40 2195 7867 2557 Cacl0-40 621 3172 134 hlF6-41 1330 3549 755 Cacl0-41 340 957 13 La actividad citotóxica in Vitro de las ADC portadoras de conectores de fármaco derivados del dímero meta-anilina PBD 42: En referencia a la Tabla 6, se muestra la citotoxicidad in vitro de ADC conjugadas con los dimeros PSD en las lineas celulares CD30+ usando un ensayo de 96 horas. La actividad se analizó frente a las lineas celulares CD30+CD70+y una linea celular CD70" CD30+. Los anticuerpos usados fueron un anticuerpo CD70, 1F6 humanizado (véase la solicitud publicada n° 2009-148942) y un anticuerpo CD70 1F6 humanizado) en el que se han introducido residuos de cisteina en la posición de aminoácidos 239 de la cadena pesada (de acuerdo con el sistema de numeración en la UE) (indicado como hlF6d) . Los conjugados que tienen un conector de maleimidil-péptido (compuesto conector de fármaco 43) y un conector glucurónido (48) tenían, generalmente, una CI50 menor que los conjugados con un conector a base de maleimidilo o acetamida (compuesto 44) .
Tabla 6. Actividad citotóxica in vitro en líneas celulares CD70+ (ng/ml) Carcinoma de células Linfoma de renales Hodgkin Caki-1 786-0 L428 hlF6d-43 (2 7 39 >10.000 dr/mAb) IgG-43 (2 >10.000 >10.000 dr/mAb) hlF6-44 (3,5 1124 2142 dr/mAb) hlF6d-48 (2 89 4093 dr/mAb) IgG 2939 6376 La actividad citotóxica in vitro de las ADC portadoras de conectores de fármaco derivados del dimero para y meta- anilina PBD 38 y 42 (respectivamente) .
En referencia a la Tabla 7, se muestra la citotoxicidad in vitro de ADC conjugadas con los dimeros PBD en las líneas celulares CD70+ usando un ensayo de 96 horas. La actividad se analizó frente a las líneas celulares CD70+ y una línea celular de LMA CD70" L428 y 7860. Los anticuerpos usados fueron un anticuerpo CD70, 1F6 humanizado (véase la solicitud publicada n° 2009-148942) y un anticuerpo CD70 1F6 humanizado) en el que se han introducido residuos de cisteína en la posición de aminoácidos 239 de la cadena pesada (de acuerdo con el sistema de numeración en la UE) (indicado como hlF6d) . Los conjugados que tienen un conector de maleimidil-péptido con una jneta-anilina (compuesto conector de fármaco 43) fueron algo menos activo que los que tienen un conector de maleimidil-péptido con una para-anilina (compuesto conector de fármaco 38) . La reducción de la carga de fármaco del compuesto meta-anilina a 2 por anticuerpo redujo la actividad. Los conjugados con un conector glucurónido del compuesto para-anilina (48) generalmente tenían una CIso menor que los conjugados con un conector a base de maleimidilo (compuesto 39) . Además, una arilmaleimida del compuesto para-anilina (54) no tiene actividad sobre estas líneas celulares. Además, un conjugado que tiene un conector de maleimidilo conjugado directamente con el compuesto 42 tiene una actividad reducida en comparación con el conjugado hlF6-43 (datos no mostrados) .
Tabla 7. Actividad citotóxica in vitro en lineas celulares CD70+ (ng/ml) Carcinoma Linforna control de células Hodgkin renales L428 7860 hlF6-43 (4 404 11 1205 dr/mAB) hlF6d-43 (2 Inhib. Max = 200 1625 dr/mAb) 40% hlF6d-48 (2 4093 89 1964 dr/mAb) hlF6-54 (4 Sin Sin efecto Sin efecto dr/mAb) efecto hlF6-38 (2 230 (n = ) 25 (n = 3) 503 dr/mAb) La actividad citotóxica in vitro de las ADC portadoras de conectores de fármaco derivados del dímero PBD unido a anilina En referencia a la Tabla 8, se muestra la citotoxicidad in vitro de ADC conjugadas con los dimeros PBD en las lineas celulares CD70+ usando un ensayo de 96 horas. La actividad se analizó frente a las lineas celulares CD70+ Caki-1 y L428 y una linea celular de CD70". El anticuerpo usado fue el anticuerpo CD70 (1F6 humanizado) en el que se han introducido residuos de cisteina en la posición de aminoácidos 239 de la cadena pesada (de acuerdo con el sistema de numeración en la UE) (indicado como hlF6d) . La unión de un PBD a través de una amina en la posición orto mediante un conector no escindible (compuesto 68) redujo marcadamente la actividad, en comparación con una ADC unida mediante un conector escindible unido a para-anilina (compuesto 54) . Los compuestos 73 y 85, que tiene un conector escindible, mostró actividad comparable a la del compuesto 54; estos dos compuestos están unidos mediante una para-anilina. Los compuestos con conectores escindibles que requieren una escisión más rigurosa, los compuestos 79 y 90, mostraron una actividad algo reducida en comparación con el compuesto 54.
Tabla 8. Actividad citotóxica in vitro en lineas celulares CD70+ (ng/ml) carcinoma de célula renal control Caki-1 786-0 hlF6d-68 (2 dr/mAb) 3236 3486 5501 hlF6d-73 (2 dr/mAb) 2 7 482 hlF6d-79 (2 dr/mAb) 24 348 5385 hlF6d-54(2 dr/mAb) 6 17 4665 hlF6d-85 (2 dr/mAb) 3 5 4700 hlF6d-90 (1,4 dr/mAb) ...12 47 678 La actividad citotóxica in vitro de las ADC portadoras de conectores de fármaco derivados del dimero PBD unido a anilina En referencia a la Tabla 9, se muestra la citotoxicidad in vitro de ADC conjugadas con los dimeros PBD en las líneas celulares CD70+ usando un ensayo de 96 horas. La actividad se analizó frente a las líneas celulares CD70+ Caki-1 y L428 y dos líneas celulares de leucemia CD70". Los anticuerpos usados fueron un anticuerpo CD70, 1F6 humanizado (véase la solicitud publicada n° 2009-148942) y un anticuerpo CD70 1F6 humanizado) en el que se han introducido residuos de cisteína en la posición de aminoácidos 239 de la cadena pesada (de acuerdo con el sistema de numeración en la UE) (indicado como hlF6d) . El compuesto 56, que tiene un conector escindible unido al anticuerpo mediante una acetamida mostró actividad comparable con el compuesto 38. Una versión unida a glucurónido del dimero de PBD unido a meta-anilina, compuesto 48, demostró poca actividad en este ensayo. El compuesto 58, que tiene cinco grupos metileno en el puente PBD, demostró actividad comparable a la del compuesto 38, que tiene tres grupos metileno en el puente de PBD.
Tabla 9: Actividad citotóxica in vitro en líneas celulares CD70+ (ng/ml) Células renales Leucemia Caki-1 786-0 Linea 2 Línea 1 ADC (CD70 ° (CD70 n° CD70" CD70" 135, 000) 190, 000) hlF6d-56 1672 Inh. (1, 8dr/Ab) máx=50% hlF6d-48 Inh. Inh. Sin Sin (0, 6dr/Ab) máx=45% máx=35% efecto efecto hlF6d-58 0, 5 2 1750 4847 (1, 9dr/Ab) 5 15 hlF6d-38 (3-5, n=4) (5-30, n=4 2082 7188 (2dr/Ab) Ejemplo 16: Determinación de la citotoxidad in vivo de conjugados seleccionados Todos los estudios se realizaron de acuerdo con el Comité de Atención y Uso de Animales en un centro completamente acreditado por la Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care. La tolerabilidad in vivo se evaluó primero para asegurar que los conjugados se toleraban a dosis clínicamente relevante. Ratones BALB/c fueron tratados con dosis crecientes de ADC formuladas en PBS con 0,01 % de Tween 20. Se monitorizó a los ratones para detectar la pérdida de peso tras el tratamiento farmacológico; se sacrificó a aquellos que experimentaron un 20 % de pérdida de peso u otros signos de morbididad. Los anticuerpos usados fueron un anticuerpo CD70, 1F6 humanizado (véase la solicitud de EE.UU. publicada n° 2009-148942) y un anticuerpo CD30, AC10 quimérico (véase la solicitud de EE.UU. publicada n° 2008-0213289) .
En referencia a la Figura 1, los resultados de un estudio de pérdida de peso se muestran usando cAClO val-alaSG3132 ( 2) (cAClO-compuesto 38). Una única dosis del conjugado administrado a 5 mg administrados IP o IV tuvo como resultado poca pérdida de peso. Una dosis más alta del conjugado (15 mg/kg) produjo pérdida de peso en los ratones.
En referencia a la Figura 2, los resultados de un estudio de pérdida de peso se muestran usando hlF6 val-alaSG3132(2) (hlF6-compuesto 38) .) . Una única dosis del conjugado administrado a 5 mg administrados IP o IV tuvo como resultado algo de pérdida de peso. Una dosis más alta del conjugado (10 mg/kg) produjo una significativa pérdida de peso en los ratones.
Los estudios de tratamiento se realizaron en dos modelos de xenoinjerto de carcinoma de células renales CD70+. Los fragmentos de tumor (786-0 y Caki-1) se implantaron en el flanco derecho de ratones atimicos. Los ratones se aleatorizaron a grupos de estudio (n= 5) el dia ocho (786-0) o nueve (Caki-1), con una media en cada grupo de 100 mm3. Las ADC o los controles se administraron ip de acuerdo con un calendario c4dx4. El volumen del tumor como función del tiempo se determinó usando la fórmula (L x W2)/2. Se sacrificó a los animales cuando los volúmenes tumorales alcanzaron 1.000 mm3. Se sacrificó a los ratones que mostraban regresiones duraderas aproximadamente 100 días después del implante.
En referencia a la Figura 3, se muestran los resultados de un estudio de tratamiento usando un conjugado hlF6-val-ala-SG3132 (2) (hlF6-compuesto 38). También se usó un conjugado control cAC10-val-ala-SG3132 (2 ) (cAClO-compuesto 38) . Los ratones a los que se administró dosis del conjugado hlF6 a 0,1 mg/kg exhibió alguna reducción del tumor, mientras que dosis más altas a 0,3 mg/kg y 1 mg/kg parecían exhibir una reducción completa del tumor. El conjugado control (no unión) fue menos activo que los conjugados hlF6.
En referencia a la Figura 4, se muestran los resultados de un estudio de tratamiento usando un conjugado hlF6-mc-val-ala-SG3132 (2) (hlF6-compuesto 38) . También se usó un conjugado control cAC10-mc-val-ala-SG3132 (2 ) (cAClO-compuesto 38) . Los ratones a los que se administró dosis del conjugado hlF6 a 1 mg/kg parecían exhibir una reducción completa del tumor. Los ratones a los que se administraron dosis menores a 0,3 mg/kg y 0,1 mg/kg exhibieron una reducción menor del tumor, respectivamente. El conjugado control (no unión) fue menos activo que el conjugado hlF6 administrado a una dosis similar, aunque exhibió más actividad que el conjugado hlF6 administrado a dosis menores. El conjugado hlF6 también fue más activo que un conjugado hlF6-vc- MAE (solicitud de EE.UU. publicada n° 2009-0148942) administrado a dosis mayores.
En referencia a la Figura 5, los resultados de un estudio de tratamiento usando un anticuerpo de dos cargas hlF6d unido al compuesto 38 (hlF6d-38) en comparación con un control de no unión de dos cargas, HOOd conjugado al mismo compuestos (h00d-38) .
El modelo fue un modelo subcutáneo Caki en ratones atímicos. Las dosis fueron 0,1, 0,3 y 1 mg/kg c7dX2. Las dos dosis más altas del conjugado hlF6 demostraron regresiones completas como 1 mg/kg y un retraso sustancial de tumor a 0,3 mg/kg. El control de no unión demostró un retraso del tumor a la dosis de 1 mg/kg.
En referencia a la Figura 6, los resultados de un estudio de tratamiento usando un anticuerpo hlF6d de dos cargas unido al compuesto 38 (hlF6d-38) comparados con un control de no unión de dos cargas, HOOd conjugado con el mismo compuesto (h00d-38) . El modelo fue un modelo subcutáneo 786-0 en ratones atímicos. Las dosis fueron 0,1, 0,3 y 1 mg/kg c7dX2. Las tres dosis del conjugado hlF6 demostraron regresiones completas o retrasos del tumor, aunque el control de no unión también demostró un retraso tumoral .

Claims (3)

REIVINDICACIONES Un Conjugado que tiene la fórmula I: L - (LU-D)p (I) o una sal farmacéuticamente aceptable o solvato del mismo; en la que L es un Agente de Unión a Célula que se enlaza específicamente a una molécula diana sobre la superficie de una célula diana, LU es una unidad de Engarce, p es de 1 a 20; y D una unidad de Fármaco que comprende un dimero de PBD que tiene la siguiente fórmula II : en la que: R2 es de fórmula III: \Q1.A^Q2.X J en la que A es un grupo arilo C5-7/ X es un grupo activable para conjugación a la unidad de Engarce y se selecciona entre el grupo que comprende: -O-, -S-, -C(0)0-, -C(O)-, -NH(C=0)-, -N ( RN) - , en el que RN se selecciona entre el grupo que comprende H, alquilo C1-4 y (C2H40)mCH3, en el que m es de 1 a 3, y: (i) Q1 es un enlace sencillo y Q2 se selecciona entre un enlace sencillo y -Z-(CH2)n-/ en el que Z se selecciona entre un enlace sencillo, 0, S y NH y es de
1 a 3; o (ii) Q1 es -CH=CH- y Q2 es un enlace sencillo; R12 es un grupo arilo C5-i0, opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo que comprende: halo, nitro, ciano, éter, alquilo Ci-7, heterociclilo C3-7, dimetilaminopropiloxi, piperazinilo y bis-oxi- alquileno C1-3; R6 y R9 se seleccionan independientemente entre H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR' , nitro, Me3Sn y halo; en el que R y R' se seleccionan independientemente entre alquilo C1-12 opcionalmente sustituido, heterociclilo C3-20 y grupos arilo C5-20; R7 se selecciona entre H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NHRR' , nitro, Me3Sn y halo; o: (a) R10 es H, y R11 es OH u ORA, en el que RA es alquilo Ci-4; (b) R10 y R11 forman un doble enlace nitrógeno-carbono entre los átomos de nitrógeno y carbono a los que están enlazados; o (c) R10 es H y R11 es SOzM, en el que z es 2 ó 3 y M es un catión monovalente farmacéuticamente aceptable; R" es un grupo alquileno C3-12, cuya cadena puede estar interrumpida por uno o más heteroátomos , seleccionados entre el grupo que consiste en O, S, NH y un anillo aromático; Y se selecciona entre O, S o NH; R6' , R7' , R9' se seleccionan entre los mismos grupos que R6, R7 y R9, respectivamente, y R10' y R11' son iguales que R10 y R11, en los que si R11 y R11' son SOzM, M puede representar un catión monovalente farmacéuticamente aceptable.
2. El Conjugado de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R7 se selecciona entre H, OH y OR. 3. El Conjugado de acuerdo con la reivindicación 2, en el que R7 es un grupo alquiloxi Ci_4. 4. El Conjugado de acuerdo con una de las reivindicaciones anteriores, en el que Y es O. 5. El Conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que R' ' es alquileno C3-6. El Conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que R9 es H. 7. El Conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que R6 se selecciona entre H y halo. 8. El Conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que A es fenilo. 9. El Conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que X se selecciona entre -0-, -S- o -NH- . 10. El Conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que Q1 es un enlace sencillo . 11. El Conjugado de acuerdo con la reivindicación 10, en el que Q2 es un enlace sencillo. 12. El Conjugado de acuerdo con la reivindicación 10, en el que Q2 es -Z-(CH2)n-, Z es 0 o S y n es 1 ó 2. 13. El Conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que Q1 es -CH=CH- . 14. El Conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en el que R12 es un grupo arilo C5-7 - 15. El Conjugado de acuerdo con la reivindicación 14, en el que R12 es fenilo. 16. El Conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en el que R12 es un grupo arilo C8-10 · 17. El Conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, en el que R12 porta de uno a tres grupos sustituyentes . 18. El Conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, en el que R10 y R11 forman un doble enlace nitrógeno-carbono. 19. El Conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, en el que R5' , R7', R9' , R10' , R11' e Y' son iguales que R6, R7, R9, R10, R11 e Y, respectivamente. 20. El Conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-19, en el que la unidad de Engarce (LU) tiene la fórmula la o Ib: -A1a-L13-L2y- , (la) en la que: -A1- es una unidad de Extensión, a es 1 ó 2, L1 - es una unidad de Especificidad, s es un número entero que varia de 0 a 12, -L2- es una unidad de Espaciado, e y es 0, 1 ó 2, y p es de 1-20; o L1, I L - (A L2y—D)p (Ib) en la que: -A1- es una unidad de Extensión enlazada a una unidad de Extensión (L2) , a es 1 ó 2, L1 - es una unidad de Especificidad enlazada a una unidad de Extensión (L2) , s es un número entero que varia de 1 a 12, -L2- es una unidad de Espaciado, y es 1 ó 2, y p es de 1 a 20. 21. El Conjugado de la reivindicación 20, en el que la unidad de Engarce (LU) tiene la fórmula la. 22. El Conjugado de la reivindicación 21, en el que A1 se selecciona entre: en la que el asterisco indica el punto de unión a L1, la linea ondulada indica el punto de unión a la unidad de Ligando y n es de 0 a 6; en la que el asterisco indica el punto de unión a L1, la linea ondulada indica el punto de unión a la unidad de Ligando y n es de 0 a 6; en la que el asterisco indica el punto de unión a L1, la linea ondulada indica el punto de unión a la unidad de Ligando, n es 0 ó 1 y m es de 0 a 30; o en la que el asterisco indica el punto de unión L1, la linea ondulada indica el punto de unión la unidad de Ligando, n es 0 ó 1 y m es de 0 30. Conjugado de la reivindicación 21, en el que A es en la que el asterisco indica el punto de unión a L1, la linea ondulada indica el punto de unión a la unidad de Ligando y n es de 0 a 6. Conjugado de la reivindicación 23, en el que 25. El Conjugado de cualquiera de las reivindicaciones 20-24, en el que L1 comprende una secuencia de aminoácidos. 26. El Conjugado de la reivindicación 25, en el que L1 es un dipéptido. 27. El Conjugado de la reivindicación 26, en el que L1 se selecciona entre el grupo que consiste en valina-alanina, valina-citrulina y fenilalanina-lisina . 28. El Conjugado de cualquiera de las reivindicaciones 20-27, en el que y es 0. 29. El Conjugado de cualquiera de las reivindicaciones 20-27, en el que y es 1 ó 2. El Conjugado de la reivindicación 29, en el que en la que el asterisco indica el punto de unión la unidad de Fármaco, la linea ondulada indica el punto de unión al L , Y es -N (H) -, -O-, -C(=0)N(H)- o -C(=0)0-, y n es de 0 a 3. 31. El Conjugado de la reivindicación 30, en el que L2 es: 32. El uso de un Conjugado, o una sal farmacéuticamente aceptable o solvato del mismo, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la fabricación de un medicamento para tratar una enfermedad autoproliferativa o una enfermedad autoinmune. 33. El uso de un Conjugado o una sal farmacéuticamente aceptable o solvato del mismo, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores para tratar una enfermedad proliferativa o una enfermedad autoinmune.
3 . Un procedimiento de tratamiento de un mamífero que tenga una enfermedad proliferativa o enfermedad autoinmune, que comprende administrar una cantidad eficaz del Conjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 1-32, o una sal farmacéuticamente aceptable o solvato del mismo. RESUMEN DE LA INVENCIÓN Se proporcionan Conjugados que comprenden conjugados de PBD a un agente diana y procedimientos de uso de dichos PBD.
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Families Citing this family (177)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5356648B2 (ja) 2003-02-20 2013-12-04 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド 抗ｃｄ７０抗体−医薬結合体、ならびに癌および免疫障害の処置のためのそれらの使用
DK2099823T4 (da) 2006-12-01 2022-05-09 Seagen Inc Målbindingsmiddelvarianter og anvendelser deraf
GB0819095D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
NZ594177A (en) 2009-02-05 2014-02-28 Immunogen Inc Novel benzodiazepine derivatives
AU2011239522B2 (en) 2010-04-15 2014-10-23 Medimmune Limited Targeted pyrrolobenzodiazapine conjugates
CA2795353C (en) 2010-04-15 2018-01-09 Spirogen Developments Sarl Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
US9353127B2 (en) 2011-02-15 2016-05-31 Immunogen, Inc. Methods of preparation of conjugates
US20130058947A1 (en) 2011-09-02 2013-03-07 Stem Centrx, Inc Novel Modulators and Methods of Use
BR112014006703A8 (pt) 2011-09-20 2018-01-09 Spirogen Sarl "pirrolobenzodiazepinas
MX341523B (es) 2011-10-14 2016-08-24 Medimmune Ltd Pirrolobenzodiazepinas.
EP2755642B1 (en) 2011-10-14 2018-07-18 Seattle Genetics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and targeted conjugates
KR101961976B1 (ko) 2011-10-14 2019-03-25 시애틀 지네틱스, 인크. 피롤로벤조디아제핀 및 표적 접합체
EA027386B1 (ru) * 2011-10-14 2017-07-31 Медимьюн Лимитед Пирролобензодиазепины
SG11201405130UA (en) 2012-02-24 2014-11-27 Stemcentrx Inc Anti sez6 antibodies and methods of use
PT2817338T (pt) 2012-02-24 2017-11-13 Abbvie Stemcentrx Llc Moduladores de dll3 e métodos de utilização
US20130309223A1 (en) 2012-05-18 2013-11-21 Seattle Genetics, Inc. CD33 Antibodies And Use Of Same To Treat Cancer
WO2013177481A1 (en) 2012-05-25 2013-11-28 Immunogen, Inc. Benzodiazepines and conjugates thereof
LT2906251T (lt) * 2012-10-12 2017-12-11 Adc Therapeutics Sa Pirolobenzodiazepino-anti-cd22 antikūno konjugatai
EP2906298B1 (en) 2012-10-12 2018-10-03 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
HUE034505T2 (en) * 2012-10-12 2018-02-28 Adc Therapeutics Sa Pirrolobenzodiazepine anti-her2 antibody conjugates
RS58921B1 (sr) 2012-10-12 2019-08-30 Medimmune Ltd Pirolobenzodiazepini i njihovi konjugati
PT2906253T (pt) 2012-10-12 2018-11-05 Medimmune Ltd Conjugados de anticorpo anti-psma de pirrolobenzodiazepina
WO2014057118A1 (en) * 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd22 antibody conjugates
MX364328B (es) 2012-10-12 2019-04-23 Medimmune Ltd Conjugados del anticuerpo pirrolobenzodiazepina.
EP2906297B1 (en) 2012-10-12 2017-12-06 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
EP2906249B1 (en) 2012-10-12 2018-06-27 MedImmune Limited Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation
EP2906250B1 (en) * 2012-10-12 2018-05-30 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-anti-psma antibody conjugates
DK2906248T3 (en) * 2012-10-12 2019-03-04 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and their conjugates
PL2917195T3 (pl) * 2012-11-05 2018-04-30 Pfizer Inc. Analogi spliceostatyny
WO2014089177A2 (en) 2012-12-04 2014-06-12 Massachusetts Institute Of Technology Compounds, conjugates and compositions of epipolythiodiketopiperazines and polythiodiketopiperazines
JP6307519B2 (ja) 2012-12-21 2018-04-04 メドイミューン・リミテッドＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ ピロロベンゾジアゼピンおよびその結合体
AU2013366490B9 (en) * 2012-12-21 2018-02-01 Medimmune Limited Unsymmetrical pyrrolobenzodiazepines-dimers for use in the treatment of proliferative and autoimmune diseases
US9968687B2 (en) * 2013-02-22 2018-05-15 Abbvie Stemcentrx Llc Anti-DLL3 antibody drug conjugates
WO2014143622A1 (en) * 2013-03-13 2014-09-18 Seattle Genetics, Inc. ACTIVATED CARBON FILTRATION FOR PURIFICATION OF BENZODIAZEPINE ADCs
NZ710746A (en) 2013-03-13 2018-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US20160031887A1 (en) 2013-03-13 2016-02-04 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
MX2015011367A (es) * 2013-03-13 2015-12-16 Seattle Genetics Inc Ciclodextrina y formulaciones de conjugados anticuerpo-farmaco.
SG11201507214SA (en) 2013-03-13 2015-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US10208125B2 (en) 2013-07-15 2019-02-19 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Anti-mucin 1 binding agents and uses thereof
SG11201601005XA (en) * 2013-08-12 2016-03-30 Genentech Inc 1-(chloromethyl)-2,3-dihydro-1h-benzo[e]indole dimer antibody-drug conjugate compounds, and methods of use and treatment
JP2016531915A (ja) 2013-08-28 2016-10-13 ステムセントリックス， インコーポレイテッド 部位特異的抗体コンジュゲーション方法および組成物
US9993566B2 (en) 2013-08-28 2018-06-12 Abbvie Stemcentrx Llc SEZ6 modulators and methods of use
SG11201601375VA (en) * 2013-08-28 2016-03-30 Stemcentrx Inc Engineered anti-dll3 conjugates and methods of use
WO2015028850A1 (en) 2013-09-02 2015-03-05 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd Novel cytotoxic agents for conjugation of drugs to cell binding molecule
JP6282745B2 (ja) 2013-09-12 2018-02-21 ハロザイム インコーポレイテッド 修飾抗上皮成長因子受容体抗体およびその使用法
EP3054986B1 (en) 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US9950078B2 (en) 2013-10-11 2018-04-24 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
EP3054983B1 (en) 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GB201317982D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
GB201317981D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EA201690780A1 (ru) 2013-10-15 2016-08-31 Сиэтл Дженетикс, Инк. Пегилированные лекарственные средства-линкеры для улучшенной фармакокинетики конъюгатов лиганд-лекарственное средство
US10053511B2 (en) 2013-11-06 2018-08-21 Abbvie Stemcentrx Llc Anti-claudin antibodies and methods of use
US10457976B2 (en) 2013-11-25 2019-10-29 Seattle Genetics, Inc. Preparing antibodies from CHO cell cultures for conjugation
PE20160993A1 (es) 2013-12-12 2016-10-14 Abbvie Stemcentrx Llc Nuevos anticuerpos anti-dpep3 y metodos de uso
WO2015095212A1 (en) 2013-12-16 2015-06-25 Genentech, Inc. 1-(chloromethyl)-2,3-dihydro-1h-benzo[e]indole dimer antibody-drug conjugate compounds, and methods of use and treatment
KR102442906B1 (ko) 2013-12-19 2022-09-14 씨젠 인크. 표적화된-약물 컨쥬게이트와 함께 사용되는 메틸렌 카바메이트 링커
CN106550593A (zh) 2014-02-21 2017-03-29 艾伯维施特姆森特克斯有限责任公司 用于黑素瘤的抗‑dll3抗体和药物缀合物
MX371403B (es) 2014-03-20 2020-01-29 Bristol Myers Squibb Co Moleculas de andamiaje a base de fibronectina estabilizada.
CN110845615B (zh) 2014-03-21 2023-10-20 艾伯维公司 抗-egfr抗体及抗体药物偶联物
GB201406767D0 (en) 2014-04-15 2014-05-28 Cancer Rec Tech Ltd Humanized anti-Tn-MUC1 antibodies anf their conjugates
TW201617368A (zh) 2014-09-05 2016-05-16 史坦森特瑞斯公司 新穎抗ｍｆｉ２抗體及使用方法
CN106687141A (zh) 2014-09-10 2017-05-17 麦迪穆有限责任公司 吡咯并苯并二氮杂卓及其缀合物
GB201416112D0 (en) 2014-09-12 2014-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
SG10201809668TA (en) 2014-09-12 2018-11-29 Genentech Inc Anti-her2 antibodies and immunoconjugates
MX2017006323A (es) 2014-11-21 2017-08-21 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos que comprenden regiones constantes pesadas modificadas.
HUE050596T2 (hu) 2014-11-21 2020-12-28 Bristol Myers Squibb Co Antitestek CD73 ellen és azok felhasználásai
CA2969067A1 (en) 2014-11-25 2016-06-02 Bristol-Myers Squibb Company Novel pd-l1 binding polypeptides for imaging
MX2017006770A (es) 2014-11-25 2018-02-09 Adc Therapeutics Sa Conjugados de pirrolobenzodiazepina y anticuerpo.
US9526801B2 (en) 2015-01-14 2016-12-27 Bristol-Myers Squibb Company Heteroarylene-bridged benzodiazepine dimers, conjugates thereof, and methods of making and using
CA2973354A1 (en) 2015-01-14 2016-07-21 Bristol-Myers Squibb Company Benzodiazepine dimers, conjugates thereof, and methods of making and using
EP3268048B1 (en) 2015-03-10 2019-05-08 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies conjugatable by transglutaminase and conjugates made therefrom
GB201506411D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Bergenbio As Humanized anti-axl antibodies
GB201506402D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506389D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
LT3303396T (lt) 2015-05-29 2023-01-10 Bristol-Myers Squibb Company Antikūnai prieš ox40 ir jų panaudojimo būdai
TW201709932A (zh) 2015-06-12 2017-03-16 西雅圖遺傳學公司 Ｃｄ１２３抗體及其共軛物
EP3313854A1 (en) 2015-06-23 2018-05-02 Bristol-Myers Squibb Company Macrocyclic benzodiazepine dimers, conjugates thereof, preparation and uses
PL3316909T3 (pl) 2015-06-30 2023-11-20 Seagen Inc. Przeciwciała anty-ntb-a i powiązane kompozycje i sposoby
US9873708B2 (en) * 2015-07-21 2018-01-23 Immunogen, Inc. Methods of preparing cytotoxic benzodiazepine derivatives
US10584160B2 (en) 2015-09-23 2020-03-10 Bristol-Myers Squibb Company Glypican-3-binding fibronectin based scaffold molecules
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
CA3006610A1 (en) 2015-11-30 2017-06-08 Abbvie Inc. Anti-hulrrc15 antibody drug conjugates and methods for their use
WO2017095805A1 (en) 2015-11-30 2017-06-08 Abbvie Inc. ANTI-huLRRC15 ANTIBODY DRUG CONJUGATES AND METHODS FOR THEIR USE
US11793880B2 (en) 2015-12-04 2023-10-24 Seagen Inc. Conjugates of quaternized tubulysin compounds
TWI814699B (zh) 2015-12-04 2023-09-11 美商思進公司 四級胺化妥布賴森(tubulysin)化合物之結合物
CA3006738A1 (en) * 2015-12-04 2017-06-08 Abbvie Stemcentrx Llc Novel anti-claudin antibodies and methods of use
GB201521709D0 (en) * 2015-12-09 2016-01-20 Kings College London And Sec Dep For Health The PBD Antibacterial agents
BR112018012524A2 (pt) 2015-12-21 2018-12-11 Bristol Myers Squibb Co anticorpos variantes para conjugação sítio-específica
GB201601431D0 (en) * 2016-01-26 2016-03-09 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB201602356D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
GB201602359D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
BR112018067368A2 (pt) 2016-03-04 2019-01-15 Bristol-Myers Squibb Company terapia de combinação com anticorpos anti-cd73
EP3442584B1 (en) 2016-03-15 2021-07-28 Seagen Inc. Combinations of pbd-based antibody drug conjugates with bcl-2 inhibitors
WO2017161206A1 (en) 2016-03-16 2017-09-21 Halozyme, Inc. Conjugates containing conditionally active antibodies or antigen-binding fragments thereof, and methods of use
WO2017165851A1 (en) 2016-03-25 2017-09-28 Seattle Genetics, Inc. Process for the preparation of pegylated drug-linkers and intermediates thereof
MA45328A (fr) 2016-04-01 2019-02-06 Avidity Biosciences Llc Compositions acide nucléique-polypeptide et utilisations de celles-ci
WO2017180768A1 (en) * 2016-04-15 2017-10-19 Seattle Genetics, Inc. Combinations of cd33 antibody drug conjugates with hypomethylating agents
CA3021098A1 (en) 2016-04-21 2017-10-26 Abbvie Stemcentrx Llc Novel anti-bmpr1b antibodies and methods of use
GB201607478D0 (en) 2016-04-29 2016-06-15 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
US10918627B2 (en) 2016-05-11 2021-02-16 Massachusetts Institute Of Technology Convergent and enantioselective total synthesis of Communesin analogs
US10143695B2 (en) 2016-05-18 2018-12-04 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP3463463A4 (en) 2016-06-03 2020-01-15 Seattle Genetics, Inc. COMBINATION OF CD33 ANTIBODY-ACTIVE SUBSTANCE CONJUGATES WITH CHEMOTHERAPEUTICS
US20200002421A1 (en) 2016-06-08 2020-01-02 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
TW202304996A (zh) 2016-06-08 2023-02-01 美商艾伯維有限公司 抗-b7-h3抗體及抗體藥物結合物
EP3469000A1 (en) 2016-06-08 2019-04-17 AbbVie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
MX2018015274A (es) 2016-06-08 2019-10-07 Abbvie Inc Anticuerpos anti-cd98 y conjugados de anticuerpo y farmaco.
BR112018075644A2 (pt) 2016-06-08 2019-04-09 Abbvie Inc. anticorpos anti-cd98 e conjugados de anticorpo e fármaco
WO2017214433A1 (en) 2016-06-09 2017-12-14 Seattle Genetics, Inc. Combinations of pbd-based antibody drug conjugates with flt3 inhibitors
BR112018076263A2 (pt) 2016-06-17 2019-03-26 Magenta Therapeutics, Inc. composições e métodos para a depleção de células
TWI760344B (zh) 2016-06-24 2022-04-11 美商梅爾莎納醫療公司 吡咯並苯並二氮呯類和彼等之共軛物類
WO2018048975A1 (en) 2016-09-09 2018-03-15 Bristol-Myers Squibb Company Use of an anti-pd-1 antibody in combination with an anti-mesothelin antibody in cancer treatment
GB201617466D0 (en) 2016-10-14 2016-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
GB201619490D0 (en) * 2016-11-17 2017-01-04 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
WO2018129384A1 (en) 2017-01-06 2018-07-12 Avidity Biosciences Llc Nucleic acid-polypeptide compositions and methods of inducing exon skipping
BR112019014991A2 (pt) 2017-01-20 2020-04-07 Magenta Therapeutics Inc composições e métodos para a supressão de células cd137+
ES2871001T3 (es) 2017-02-08 2021-10-28 Adc Therapeutics Sa Conjugados de pirrolobenzodiazepinas y anticuerpos
ES2890934T3 (es) 2017-02-08 2022-01-25 Adc Therapeutics Sa Conjugados de pirrolobenzodiazepinas y anticuerpos
GB201702031D0 (en) 2017-02-08 2017-03-22 Medlmmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
CN110352074A (zh) 2017-02-28 2019-10-18 西雅图遗传学公司 用于偶联的半胱氨酸突变抗体
JP7181181B2 (ja) 2017-02-28 2022-11-30 第一三共株式会社 抗ｈｅｒ３抗体－薬物コンジュゲート投与によるｅｇｆｒ－ｔｋｉ抵抗性の非小細胞肺癌の治療方法
IL269398B1 (en) 2017-03-24 2024-01-01 Seagen Inc A process for the preparation of glucuronide-drug binders and their intermediates
TW201836647A (zh) 2017-04-06 2018-10-16 美商艾伯維有限公司 抗－ｐｒｌｒ抗體藥物軛合物（ａｄｃ）及其用途
PT3612537T (pt) 2017-04-18 2022-08-29 Medimmune Ltd Conjugados de pirrolobenzodiazepina
JP7408396B2 (ja) 2017-04-20 2024-01-05 アーデーセー セラピューティクス ソシエテ アノニム 併用療法
US11932650B2 (en) 2017-05-11 2024-03-19 Massachusetts Institute Of Technology Potent agelastatin derivatives as modulators for cancer invasion and metastasis
JP2020521751A (ja) 2017-05-25 2020-07-27 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 修飾重鎖定常領域を含む抗体
WO2018229222A1 (en) 2017-06-14 2018-12-20 Adc Therapeutics Sa Dosage regimes for the administration of an anti-cd19 adc
TWI804499B (zh) 2017-06-23 2023-06-11 美商維洛斯生物公司 Ror1抗體免疫接合物
GB201711809D0 (en) 2017-07-21 2017-09-06 Governors Of The Univ Of Alberta Antisense oligonucleotide
MY194477A (en) 2017-08-18 2022-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
CN111278462A (zh) * 2017-09-02 2020-06-12 艾伯维公司 抗egfr抗体药物结合物(adc)和其用途
BR112020004307A2 (pt) 2017-09-20 2020-11-10 Ph Pharma Co., Ltd. análogos de tailanestatina
IL301638A (en) 2017-09-29 2023-05-01 Daiichi Sankyo Co Ltd Conjugation of an antibody with a pyrrolobenzodiazepine derivative
WO2019071028A1 (en) 2017-10-04 2019-04-11 Avidity Biosciences Llc NUCLEIC ACID-POLYPEPTIDE COMPOSITIONS AND USES THEREOF
US10640508B2 (en) 2017-10-13 2020-05-05 Massachusetts Institute Of Technology Diazene directed modular synthesis of compounds with quaternary carbon centers
EP3710066B1 (en) 2017-11-14 2022-06-08 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine conjugates
US11638760B2 (en) 2017-11-27 2023-05-02 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
MA51103A (fr) 2017-12-06 2020-10-14 Avidity Biosciences Inc Compositions et procédés de traitement de l'atrophie musculaire et de la dystrophie myotonique
WO2019118937A1 (en) 2017-12-15 2019-06-20 Juno Therapeutics, Inc. Anti-cct5 binding molecules and methods of use thereof
TW201929908A (zh) 2017-12-21 2019-08-01 美商梅爾莎納醫療公司 吡咯并苯并二氮呯抗體共軛物
GB201721802D0 (en) * 2017-12-22 2018-02-07 Almac Discovery Ltd Ror1-specific antigen binding molecules
GB201803342D0 (en) 2018-03-01 2018-04-18 Medimmune Ltd Methods
GB201806022D0 (en) 2018-04-12 2018-05-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
WO2020023871A1 (en) 2018-07-27 2020-01-30 Promega Corporation Quinone-containing conjugates
CN112912109A (zh) 2018-09-20 2021-06-04 第一三共株式会社 通过施用抗her3抗体-药物缀合物治疗her3-突变的癌症
SG11202104993SA (en) 2018-11-14 2021-06-29 Daiichi Sankyo Co Ltd Anti-cdh6 antibody-pyrrolobenzodiazepine derivative conjugate
EP3887397A1 (en) 2018-11-28 2021-10-06 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies comprising modified heavy constant regions
WO2020112588A1 (en) 2018-11-30 2020-06-04 Bristol-Myers Squibb Company Antibody comprising a glutamine-containing light chain c-terminal extension, conjugates thereof, and methods and uses
KR20210102334A (ko) 2018-12-12 2021-08-19 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 트랜스글루타미나제 접합을 위해 변형된 항체, 그의 접합체, 및 방법 및 용도
US20220347309A1 (en) 2018-12-19 2022-11-03 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine resistance
GB201820725D0 (en) 2018-12-19 2019-01-30 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine resistance
AU2019406199A1 (en) 2018-12-21 2021-07-29 Avidity Biosciences, Inc. Anti-transferrin receptor antibodies and uses thereof
US20220096641A1 (en) * 2019-01-03 2022-03-31 Legochem Biosciences, Inc. Pyrrolobenzodiazepine dimer compound with improved safety and use thereof
WO2020160156A2 (en) 2019-01-30 2020-08-06 Immutics, Inc. Anti-gal3 antibodies and uses thereof
GB201902495D0 (en) * 2019-02-25 2019-04-10 Medimmune Ltd Methods of synthesis and intermediates
CA3133802A1 (en) 2019-03-21 2020-09-24 Immunogen, Inc. Methods of preparing cell-binding agent-drug conjugates
TW202102228A (zh) 2019-03-25 2021-01-16 日商第一三共股份有限公司 抗體-吡咯并苯二氮呯衍生物結合物
TW202102225A (zh) 2019-03-25 2021-01-16 日商第一三共股份有限公司 抗her2抗體-吡咯并苯二氮呯衍生物結合物
CA3139180A1 (en) 2019-03-27 2020-10-01 Daiichi Sankyo Company, Limited Combination of antibody-pyrrolobenzodiazepine derivative conjugate and parp inhibitor
WO2020247054A1 (en) 2019-06-05 2020-12-10 Massachusetts Institute Of Technology Compounds, conjugates, and compositions of epipolythiodiketopiperazines and polythiodiketopiperazines and uses thereof
AU2020289464A1 (en) 2019-06-06 2022-01-20 Avidity Biosciences, Inc. Nucleic acid-polypeptide compositions and uses thereof
GB201908128D0 (en) 2019-06-07 2019-07-24 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US20220289859A1 (en) 2019-08-06 2022-09-15 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Biopharmacuetical Compositions and Related Methods
CN113330029A (zh) * 2019-08-19 2021-08-31 沈阳药科大学 抗体的突变体及其应用
WO2021055306A1 (en) 2019-09-16 2021-03-25 Bristol-Myers Squibb Company Dual capture method for analysis of antibody-drug conjugates
WO2021080608A1 (en) 2019-10-25 2021-04-29 Medimmune, Llc Branched moiety for use in conjugates
TW202144572A (zh) 2020-03-19 2021-12-01 美商亞維代堤生物科學公司 治療臉肩胛肱骨肌肉失養症之組合物及方法
EP4126066A4 (en) 2020-03-27 2024-04-24 Avidity Biosciences Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING MUSCULAR DYSTROPHY
GB2621482A (en) 2020-05-13 2024-02-14 Bonum Therapeutics Inc Compositions of protein complexes and methods of use thereof
JPWO2022014698A1 (es) 2020-07-17 2022-01-20
CA3191395A1 (en) 2020-09-02 2022-03-10 Daiichi Sankyo Company, Limited Novel endo-.beta.-n-acetylglucosaminidase
WO2022153194A1 (en) 2021-01-13 2022-07-21 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Antibody-pyrrolobenzodiazepine derivative conjugate
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
KR20240040786A (ko) 2021-08-03 2024-03-28 글락소스미스클라인 인털렉츄얼 프로퍼티 디벨로프먼트 리미티드 생물제약 조성물 및 안정한 동위원소 표지 펩티드 맵핑 방법
AU2022345098A1 (en) 2021-09-16 2024-04-04 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
WO2023122347A2 (en) 2021-12-23 2023-06-29 Mirecule, Inc. Compositions for delivery of polynucleotides
WO2024026474A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for transferrin receptor (tfr)-mediated delivery to the brain and muscle

Family Cites Families (119)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3361742A (en) 1964-12-07 1968-01-02 Hoffmann La Roche 5-oxo-1h-pyrrolo-[2, 1-c][1, 4]-benzodiazepin-2-crylamides
US3523941A (en) 1967-03-06 1970-08-11 Hoffmann La Roche Benzodiazepine compounds and process for their preparation
US3524849A (en) 1967-10-27 1970-08-18 Hoffmann La Roche Process for the preparation of pyrrolo-benzodiazepine acrylamides and intermediates useful therein
FR2027356A1 (en) 1968-12-30 1970-09-25 Fujisawa Pharmaceutical Co Benzodiazepinone antibiotics
JPS4843755B1 (es) 1969-06-26 1973-12-20
IL33558A (en) 1968-12-30 1973-10-25 Fujisawa Pharmaceutical Co Antibiotic pyrrolo-benzodiazepine compound,its derivatives and processes for their production
JPS5382792U (es) 1976-12-10 1978-07-08
JPS6053033B2 (ja) 1976-12-28 1985-11-22 財団法人微生物化学研究会 新制癌抗生物質マゼスラマイシン及びその製造方法
JPS585916B2 (ja) 1977-12-27 1983-02-02 株式会社ミドリ十字 新規ベンゾジアゼピン系化合物
JPS5615289A (en) 1979-07-17 1981-02-14 Green Cross Corp:The Novel benzodiazepinnbased compound 3
JPS57131791A (en) 1980-12-31 1982-08-14 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd Benzodiazepine derivative and its preparation
JPH0353356Y2 (es) 1981-02-06 1991-11-21
CA1184175A (en) 1981-02-27 1985-03-19 Walter Hunkeler Imidazodiazepines
CA1173441A (en) 1981-02-27 1984-08-28 Hoffmann-La Roche Limited Imidazodiazepines
CA1185602A (en) 1981-02-27 1985-04-16 Emilio Kyburz Imidazodiazepines
JPS58180487A (ja) 1982-04-16 1983-10-21 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 抗生物質ｄｃ−８１およびその製造法
JPS58180487U (ja) 1982-05-28 1983-12-02 松下電工株式会社 光線式報知器の組立体
US4427588A (en) 1982-11-08 1984-01-24 Bristol-Myers Company Process for conversion of oxotomaymycin to tomaymycin
US4427587A (en) 1982-11-10 1984-01-24 Bristol-Myers Company Total synthesis of antitumor antibiotics BBM-2040A and BBM-2040B
JPS59152329A (ja) 1983-02-17 1984-08-31 Green Cross Corp:The 局所障害抑制剤
FR2586683B1 (fr) 1985-08-29 1988-07-01 Centre Nat Rech Scient Nouveaux derives de neothramycine, leur procede de preparation et leur application en tant que medicaments
JP2660201B2 (ja) 1988-08-05 1997-10-08 塩野義製薬株式会社 新規ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン誘導体および老人性痴呆薬
FR2676230B1 (fr) 1991-05-07 1993-08-27 Centre Nat Rech Scient Nouveaux derives de pyrrolo [1,4]-benzodiazepines, leur procede de preparation et medicaments les contenant.
GB9205051D0 (en) 1992-03-09 1992-04-22 Cancer Res Campaign Tech Pyrrolobenzodiazepine derivatives,their preparation,and compositions containing them
FR2696176B1 (fr) 1992-09-28 1994-11-10 Synthelabo Dérivés de pipéridine, leur préparation et leur application en thérapeutique.
GB9316162D0 (en) 1993-08-04 1993-09-22 Zeneca Ltd Fungicides
AU5094699A (en) 1998-07-08 2000-02-01 E-Ink Corporation Methods for achieving improved color in microencapsulated electrophoretic devices
GB9818730D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Collections of compounds
ATE240334T1 (de) 1998-08-27 2003-05-15 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepine
GB9818731D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Compounds
GB9818732D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Collection of compounds
US6909006B1 (en) 1999-08-27 2005-06-21 Spirogen Limited Cyclopropylindole derivatives
DK1320522T3 (da) 2000-09-19 2006-04-03 Moses Lee Achirale analoger af CC-1065 og af duocarmyciner samt præparater og metoder til anvendelse deraf
US6362331B1 (en) 2001-03-30 2002-03-26 Council Of Scientific And Industrial Research Process for the preparation of antitumor agents
US6660856B2 (en) 2002-03-08 2003-12-09 Kaohsiung Medical University Synthesis of pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine analogues
JP4741838B2 (ja) 2002-07-31 2011-08-10 シアトル ジェネティクス，インコーポレーテッド 癌、自己免疫疾患または感染症を治療するための薬物結合体およびその使用
US20040138269A1 (en) 2002-10-11 2004-07-15 Sugen, Inc. Substituted pyrroles as kinase inhibitors
GB0226593D0 (en) 2002-11-14 2002-12-24 Consultants Ltd Compounds
DE60326060D1 (de) 2003-03-31 2009-03-19 Council Scient Ind Res Nichtvernetzende pyrroloä2,1-cüä1,4übenzodiazepine als potentielle antitumor-agentien und ihre herstellung
GB0321295D0 (en) 2003-09-11 2003-10-15 Spirogen Ltd Synthesis of protected pyrrolobenzodiazepines
AU2004284075A1 (en) 2003-10-22 2005-05-06 Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Pyrrolobenzodiazepine derivatives, compositions comprising the same and methods related thereto
GB0416511D0 (en) 2003-10-22 2004-08-25 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
US7375078B2 (en) 2004-02-23 2008-05-20 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
AU2005219626B2 (en) * 2004-03-01 2010-11-18 Medimmune Limited 11-hydroxy-5H-pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-one derivatives as key intermediates for the preparation of C2 substituted pyrrolobenzodiazepines
GB0404578D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0404577D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0404574D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Amino acids
DE102004010943A1 (de) 2004-03-03 2005-09-29 Degussa Ag Verfahren zur Herstellung von N-geschützten 4-Ketprolinderivaten
JP5166861B2 (ja) 2004-03-09 2013-03-21 スピロゲン リミティッド ピロロベンゾジアゼピン
FR2869231B1 (fr) 2004-04-27 2008-03-14 Sod Conseils Rech Applic Composition therapeutique contenant au moins un derive de la pyrrolobenzodiazepine et la fludarabine
GB0410725D0 (en) 2004-05-13 2004-06-16 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepine therapeutic agents
DK1791565T3 (en) 2004-09-23 2016-08-01 Genentech Inc Cysteingensplejsede antibodies and conjugates
WO2006068325A2 (en) 2004-12-24 2006-06-29 Showa Denko K. K. Production method of thermoelectric semiconductor alloy, thermoelectric conversion module and thermoelectric power generating device
EP1871418B1 (en) 2005-04-19 2014-03-19 Seattle Genetics, Inc. Humanized anti-cd70 binding agents and uses thereof
GB0508084D0 (en) * 2005-04-21 2005-06-01 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
DK1879901T3 (da) 2005-04-21 2010-05-03 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepiner
SI1912671T1 (en) * 2005-07-18 2018-01-31 Seattle Genetics, Inc. Conjugates beta-glucuronide linker-drug
ATE427949T1 (de) 2005-10-05 2009-04-15 Spirogen Ltd 4-a4-(5-oxo-2,3,5,11a-tetrahydro-5h-pyrrolo a2, 1-cua1,4ubenzodiazepin-8-yloxy)-butyrylaminou-1 - pyrrol-2-carbonsaurealkylesterderivate und verwandte verbindung zur behandlung einer proliferativen erkrankung
US20070154906A1 (en) 2005-10-05 2007-07-05 Spirogen Ltd. Methods to identify therapeutic candidates
EP1813614B1 (en) 2006-01-25 2011-10-05 Sanofi Cytotoxic agents comprising new tomaymycin derivatives
ZA200900545B (en) 2006-07-18 2010-03-31 Sanofi Aventis Antagonist antibody against EPHA2 for the treatment of cancer
EP1914242A1 (en) 2006-10-19 2008-04-23 Sanofi-Aventis Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
WO2008050140A2 (en) 2006-10-27 2008-05-02 Spirogen Limited Compounds for treatment of parasitic infection
DK2099823T4 (da) 2006-12-01 2022-05-09 Seagen Inc Målbindingsmiddelvarianter og anvendelser deraf
DK2019104T3 (da) 2007-07-19 2013-12-16 Sanofi Sa Cytotoksiske midler, der omfatter nye tomaymycinderivater, og terapeutisk anvendelse deraf
GB0722088D0 (en) 2007-11-09 2007-12-19 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0722087D0 (en) 2007-11-09 2007-12-19 Spirogen Ltd Polyamides
GB0813432D0 (en) 2008-07-22 2008-08-27 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0819095D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0819097D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
NZ594177A (en) 2009-02-05 2014-02-28 Immunogen Inc Novel benzodiazepine derivatives
FR2949469A1 (fr) 2009-08-25 2011-03-04 Sanofi Aventis Derives anticancereux, leur preparation et leur application en therapeutique
ES2449379T3 (es) 2010-02-09 2014-03-19 Bristol-Myers Squibb Company Derivados de bencilpirrolidinona como moduladores de la actividad de receptores de quimiocinas
AU2011239522B2 (en) 2010-04-15 2014-10-23 Medimmune Limited Targeted pyrrolobenzodiazapine conjugates
SI2528625T1 (sl) 2010-04-15 2013-11-29 Spirogen Sarl Pirolobenzodiazepini in njihovi konjugati
CA2795353C (en) 2010-04-15 2018-01-09 Spirogen Developments Sarl Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
GB201006340D0 (en) 2010-04-15 2010-06-02 Spirogen Ltd Synthesis method and intermediates
US9353127B2 (en) 2011-02-15 2016-05-31 Immunogen, Inc. Methods of preparation of conjugates
BR112014006703A8 (pt) 2011-09-20 2018-01-09 Spirogen Sarl "pirrolobenzodiazepinas
MX341523B (es) 2011-10-14 2016-08-24 Medimmune Ltd Pirrolobenzodiazepinas.
EP2755642B1 (en) 2011-10-14 2018-07-18 Seattle Genetics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and targeted conjugates
KR101961976B1 (ko) 2011-10-14 2019-03-25 시애틀 지네틱스, 인크. 피롤로벤조디아제핀 및 표적 접합체
KR101877598B1 (ko) 2011-10-14 2018-07-11 메디뮨 리미티드 피롤로벤조디아제핀 및 그의 컨주게이트
JP6166728B2 (ja) 2011-10-14 2017-07-19 メドイミューン・リミテッドＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ ピロロベンゾジアゼピンの製造に有用な合成方法及び中間体
EA027386B1 (ru) 2011-10-14 2017-07-31 Медимьюн Лимитед Пирролобензодиазепины
AU2013255612B2 (en) 2012-04-30 2017-06-22 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines
EP2855482B1 (en) 2012-04-30 2017-03-01 MedImmune Limited Pyrrolobenzodiazepines
MA37840B1 (fr) 2012-07-09 2020-05-29 Genentech Inc Immunoconjugués comprenant des anticorps anti-cd79b
MX2015000357A (es) 2012-07-09 2015-05-12 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados anti-cd22.
JP2015528818A (ja) 2012-08-02 2015-10-01 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｅｔｂｒ抗体およびイムノコンジュゲート
KR101412875B1 (ko) 2012-10-04 2014-07-02 삼성전기주식회사 게이트 구동 회로 및 이를 갖는 인버터
EP2906250B1 (en) 2012-10-12 2018-05-30 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-anti-psma antibody conjugates
EP2906249B1 (en) 2012-10-12 2018-06-27 MedImmune Limited Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation
RS58921B1 (sr) 2012-10-12 2019-08-30 Medimmune Ltd Pirolobenzodiazepini i njihovi konjugati
WO2014057118A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd22 antibody conjugates
DK2906248T3 (en) 2012-10-12 2019-03-04 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and their conjugates
EP2906297B1 (en) 2012-10-12 2017-12-06 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
PT2906253T (pt) 2012-10-12 2018-11-05 Medimmune Ltd Conjugados de anticorpo anti-psma de pirrolobenzodiazepina
HUE034505T2 (en) 2012-10-12 2018-02-28 Adc Therapeutics Sa Pirrolobenzodiazepine anti-her2 antibody conjugates
EP2906298B1 (en) 2012-10-12 2018-10-03 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
MX364328B (es) 2012-10-12 2019-04-23 Medimmune Ltd Conjugados del anticuerpo pirrolobenzodiazepina.
LT2906251T (lt) 2012-10-12 2017-12-11 Adc Therapeutics Sa Pirolobenzodiazepino-anti-cd22 antikūno konjugatai
JP6307519B2 (ja) 2012-12-21 2018-04-04 メドイミューン・リミテッドＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ ピロロベンゾジアゼピンおよびその結合体
AU2013366490B9 (en) 2012-12-21 2018-02-01 Medimmune Limited Unsymmetrical pyrrolobenzodiazepines-dimers for use in the treatment of proliferative and autoimmune diseases
US9968687B2 (en) 2013-02-22 2018-05-15 Abbvie Stemcentrx Llc Anti-DLL3 antibody drug conjugates
US20160031887A1 (en) 2013-03-13 2016-02-04 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
SG11201507214SA (en) 2013-03-13 2015-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
NZ710746A (en) 2013-03-13 2018-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US20160106861A1 (en) 2013-04-26 2016-04-21 Spirogen Sarl Axl antibody-drug conjugate and its use for the treatment of cancer
GB201317982D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
GB201317981D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US20160256561A1 (en) 2013-10-11 2016-09-08 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
EP3054983B1 (en) 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
EP3054986B1 (en) 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US9950078B2 (en) 2013-10-11 2018-04-24 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
EA033456B1 (ru) 2013-12-16 2019-10-31 Genentech Inc Конъюгаты антитело-лекарственное средство, содержащие пептидомиметические линкеры
GB201406767D0 (en) 2014-04-15 2014-05-28 Cancer Rec Tech Ltd Humanized anti-Tn-MUC1 antibodies anf their conjugates
CN106687141A (zh) 2014-09-10 2017-05-17 麦迪穆有限责任公司 吡咯并苯并二氮杂卓及其缀合物
GB201416112D0 (en) 2014-09-12 2014-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof

Also Published As

Publication number Publication date
IL252864A0 (en) 2017-08-31
US20160129013A1 (en) 2016-05-12
CA2795349A1 (en) 2011-10-20
IL252864B (en) 2018-01-31
EP2558127B1 (en) 2022-01-19
CN103068405A (zh) 2013-04-24
KR101671360B1 (ko) 2016-11-01
CN107019804A (zh) 2017-08-08
AU2011239522B2 (en) 2014-10-23
EA024118B1 (ru) 2016-08-31
US20170143846A1 (en) 2017-05-25
KR20160128443A (ko) 2016-11-07
US9592240B2 (en) 2017-03-14
WO2011130613A1 (en) 2011-10-20
IL222269A0 (en) 2012-12-31
KR20130038254A (ko) 2013-04-17
BR112012026801B1 (pt) 2021-05-04
MX2018013332A (es) 2020-11-12
ZA201207317B (en) 2015-04-29
AU2011239522A1 (en) 2012-11-01
CA2795349C (en) 2016-11-29
US20130028919A1 (en) 2013-01-31
BR112012026801B8 (pt) 2021-05-25
US20180228916A1 (en) 2018-08-16
IL222269A (en) 2017-06-29
US9242013B2 (en) 2016-01-26
EP2558127A1 (en) 2013-02-20
US20190336614A1 (en) 2019-11-07
JP2013523896A (ja) 2013-06-17
US10561739B2 (en) 2020-02-18
KR101772354B1 (ko) 2017-08-28
NZ602932A (en) 2014-08-29
EP4039280A1 (en) 2022-08-10
BR112012026801A2 (pt) 2016-09-20
JP5870400B2 (ja) 2016-03-01
EA201290838A1 (ru) 2013-05-30

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