EA024118B1 - Конъюгаты пирролбензодиазепина направленного действия - Google Patents

Конъюгаты пирролбензодиазепина направленного действия Download PDF

Info

Publication number
EA024118B1
EA024118B1 EA201290838A EA201290838A EA024118B1 EA 024118 B1 EA024118 B1 EA 024118B1 EA 201290838 A EA201290838 A EA 201290838A EA 201290838 A EA201290838 A EA 201290838A EA 024118 B1 EA024118 B1 EA 024118B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
group
mmol
compound
attachment
methoxy
Prior art date
Application number
EA201290838A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201290838A1 (ru
Inventor
Филип Вилсон Ховард
Скот Джефри
Патрик Бурке
Питер Сентер
Original Assignee
Сиэтл Дженетикс, Инк.
Медимьюн Лимитед
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Сиэтл Дженетикс, Инк., Медимьюн Лимитед filed Critical Сиэтл Дженетикс, Инк.
Publication of EA201290838A1 publication Critical patent/EA201290838A1/ru
Publication of EA024118B1 publication Critical patent/EA024118B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A61K31/5513—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine
    • A61K31/5517—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine condensed with five-membered rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. imidazobenzodiazepines, triazolam
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • C07D519/06—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00 containing at least one condensed beta-lactam ring system, provided for by groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00, e.g. a penem or a cepham system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A61K31/5513—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/44—Antibodies bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68035—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a pyrrolobenzodiazepine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6861—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from kidney or bladder cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6867—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of a blood cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6871—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting an enzyme
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2812—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2875—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF/TNF superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3038—Kidney, bladder
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3061—Blood cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Предложены конъюгаты, содержащие пирролбензодиазепины (ПБД), конъюгированные с нацеливающим агентом, и способы применения указанных ПБД.

Description

Настоящее изобретение относится к конъюгатам пирролбензодиазепина (ПБД) направленного действия, в частности к димерам пирролбензодиазепина, которые конъюгированы с нацеливающим агентом через С2 положение одного из мономеров.
Уровень техники
Некоторые пирролбензодиазепины (ПБД) способны распознавать конкретные последовательности ДНК и связываться с ними; предпочтительной последовательностью является РиСРи. Первый противоопухолевый антибиотик на основе ПБД, антрамицин, был открыт в 1965 г. (ЪеипдгиЬег е! а1., 1. Ат. СЬет. 8ос, 87, 5793-5795 (1965); ЬешдгиЪег, е! а1., 1. Ат. СЬет. 8ос, 87, 5791-5793 (1965)). После этого появились сообщения о ряде природных ПБД, и были разработаны более 10 способов синтеза для получения ряда их аналогов (ТЬигк!оп, е! а1., СЬет. Кеу. 1994, 433-465 (1994)). Члены данного семейства включают эббимицин (аЪЪеутусш) (НосЫо\уккк е! а1., 1. АпНЪюйск, 40, 145-148 (1987)), чикамицин (сЫсатусш) (КоткЫ, е! а1., 1. АпСЫоНск, 37, 200-206 (1984)), ОС-81 (патент Японии 58-180 487; ТЬигк!оп, е! а1., СЬет. ВтЪ, 26, 767-772 (1990); Воке, е! а1., ТеЬаЬебтоп, 48, 751-758 (1992)), мазетрамицин (та/ебиатусш) (Китто!о, е! а1., 1. АпНЫоСск, 33, 665-667 (1980)), неотрамицины А и В (пеойтатусш) (Такеучи с соавт. (Такеисй, е! а1., 1. АпЬЪюИск, 29, 93-96 (1976)), поротрамицин (ротойтатусш) (Ткипаката, е! а1.), 1. АпЬЪюИск, 41, 1366-1373 (1988)), протракарцин (ртойтасатсш) (Οιπηί/ιτ е! а1., 1. АпСЫоНск, 29, 2492-2503 (1982); Ьапд1еу апб ТЬигк!оп, 1. Огд. СЬет., 52, 91-97 (1987)), сибаномицин (ОС-102) (Нага, е! а1., 1. АиЬЪюйск, 41, 702-704 (1988); 1!оЬ, е! а1., 1. АпСЫоСск, 41, 1281-1284 (1988)), сибиромицин (кЫготусш) (ЬеЪег, е! а1., 1. Ат. СЬет. 8ос, 110, 2992-2993 (1988)) и томамицин (!отатусш) (Апта, е! а1., 1. АпЬЪюйск, 25, 437-444 (1972)). ПБД имеют следующую общую структуру:
Они различаются числом, типом и положением заместителей в ароматических кольцах А и пиррольных кольцах С, а также степенью насыщения кольца С. В кольце В присутствуют иминная (N=0), карбиноламинная группа (ΝΗ-ΕΗ(ΟΗ)) или группа, представляющая собой метиловый эфир карбиноламина (NΗ-СΗ(ΟΜе)), в положении N10-01, которое представляет собой электрофильный центр, ответственный за алкилирование ДНК. Все известные природные продукты имеют (8)-конфигурацию хирального центра С11а, что обеспечивает правозакрученную форму, если смотреть от кольца С в направлении кольца А. Такая форма придает им подходящую трехмерную конфигурацию для изоспиральности с малой бороздкой В-формы ДНК, что приводит к плотному соединению в месте связывания (КоЬи, 1и АпОЪюйск III. 8рттдет-Уег1ад, №\у Уогк, рр. 3-11 (1975); Ниг1еу апб №ебЬат-УапОеуап!ет, Асс. СЬет. Кек., 19, 230-237 (1986)). Способность ПБД образовывать продукты присоединения в малой бороздке позволяет указанным соединениям влиять на процессинг ДНК, а следовательно, и применять их в качестве противоопухолевых агентов.
Биологическую активность этих молекул можно усиливать путем объединения двух звеньев ПБД посредством их С8/С'-гидроксильных функциональных групп через гибкие алкиленовые линкерные группы (Воке, Ό.8., е! а1., I. Ат. СЬет. 8ос, 114, 4939-4941 (1992); ТЬигк!оп, Ό.Ε., е! а1., I. Огд. СЬет., 61, 8141-8147 (1996)). Полагают, что димеры ПБД вызывают селективные повреждения последовательностей ДНК, такие как поперечные сшивки палиндромных участков 5'-Ри-САТС-Ру-3' цепей ДНК (8теШе, М., е! а1., ВюсЬетЪЬу, 42, 8232-8239 (2003); Майп, С, е! а1., ВюсЬетЪЬу, 44, 4135-4147), что считается основной причиной их биологической активности. Одним из примеров димера ПБД является 8С2000 (81С-136)
(Сгедкоп, 8., е! а1., I. Меб. СЬет., 44, 737-748 (2001); А11еу, М.С., е! а1., Сапсег КекеагсЬ, 64, 6700-6706 (2004); Натбеу, ЕА., е! а1., Сапсег КекеагсЬ, 64, 6693-6699 (2004)).
Благодаря особенности поведения этих высокоактивных соединений при поперечной сшивке ДНК были получены симметричные димеры ПБД, т.е. оба мономера в димере являются одинаковыми. Этот способ синтеза представляет собой прямой синтез, заключающийся либо в получении димерного фрагмента ПБД, уже содержащего линкерную группу димера, либо во взаимодействии синтезированных мономерных фрагментов ПБД с линкерной группой димера. Такие способы синтеза ограничивали возможность получения конъюгатов направленного действия, содержащих ПБД. Тем не менее, поскольку димеры ПБД обладают биологической активностью, существует необходимость в димерах ПБД, которые можно конъюгировать с нацеливающими агентами для применения в направленной терапии.
- 1 024118
Настоящее изобретение относится к конъюгатам, содержащим димеры ПБД, связанные с нацеливающим агентом, где мономер ПБД содержит заместитель в С2 положении, который обеспечивает место связывания данного соединения с нацеливающим агентом. Настоящее изобретение также относится к конъюгатам, содержащим димеры ПБД, конъюгированные с нацеливающим агентом, где мономеры ПБД в димере являются разлными. Один из мономеров ПБД содержит заместитель в С2 положении, который обеспечивает место связывания данного соединения с нацеливающим агентом. Конъюгаты, описанные в настоящей заявке, имеют высокую цитотоксическую и/или цитостатическую активность в отношении клеток, экспрессирующих молекулу-мишень, таких как раковые клетки или клетки иммунной системы. Такие конъюгаты имеют более высокую активность и сниженную токсичность по сравнению с соответствующими лекарственными средствами, не содержащими димеров ПБД.
В некоторых вариантах реализации конъюгаты имеют следующую формулу I:
Ь - (Ьи-О)р (I) где Ь представляет собой белок, полипептид или пептид (т.е. нацеливающий агент), ЬИ представляет собой линкер, а Ό представляет собой фрагмент лекарственного соединения, содержащий димер ПБД. Индекс р представляет собой целое число от 1 до 20. Соответственно, конъюгаты содержат лиганд, ковалентно связанный по меньшей мере с одним фрагментом лекарственного соединения при помощи линкера. Лиганд, более подробно описанный ниже, представляет собой нацеливающий агент, который связывается с фрагментом-мишенью. Лиганд может, например, специфично связываться с компонентом клетки (агент, связывающийся с клеткой) или с другими целевыми молекулами-мишенями. Соответственно, в настоящем изобретении также предложены способы лечения, например, разных типов рака и аутоиммунных заболеваний. Эти способы включают применение конъюгатов, где лиганд представляет собой нацеливающий агент, который специфично связывается с молекулой-мишенью. Лиганд может представлять собой, например, белок, полипептид или пептид, такой как антитело, антигенсвязывающий фрагмент антитела или другой связывающий агент, такой как гибридный белок Те.
Согласно первому аспекту, конъюгаты содержат конъюгат формулы I (указанной выше), где фрагмент лекарственного соединения содержит димер ПБД следующей формулы II:
где К2 имеет формулу III
где А представляет собой фенильную группу, X представляет собой -ΝΗ, 0' представляет собой простую связь, а О2 выбран из простой связи и -О-(СН2)П-, где η равен от 1 до 3;
К12 представляет собой фенильную или тиофенильную группу, замещенную одним заместителем, выбранным из группы, состоящей из простой эфирной группы, диметиламинопропилокси и пиперазинила;
К6, К6', К9 и К9' представляют собой Н;
К7 и К7 независимо представляют собой С1-4 алкилоксигруппу;
К10 и К11 образуют азот-углеродную двойную связь между атомами азота и углерода, к которым они присоединены;
К представляет собой С3-7 алкиленовую группу;
Υ и Υ' выбраны из О, δ или ΝΗ;
К10 и К11 являются такими же, как К10 и К11.
Согласно второму аспекту предложено применение конъюгата формулы I для изготовления лекарственного средства для лечения пролиферативного заболевания или аутоиммунного заболевания. Согласно родственному третьему аспекту предложено применение конъюгата формулы I для лечения пролиферативного заболевания или аутоиммунного заболевания.
Согласно другому аспекту предложено применение конъюгата формулы I для обеспечения доставки димера ПБД или его соли или сольвата в место действия.
Специалисты в данной области техники могут легко определить, подходит ли исследуемый конъюгат для лечения пролиферативного состояния для любого конкретного типа клеток.
Например, исследования, которые можно без труда применять для определения активности, обеспечиваемой конкретным соединением, описаны ниже в примерах.
Термин пролиферативное заболевание относится к нежелательной или неконтролируемой клеточной пролиферации с избыточным содержанием клеток в организме или атипичных клеток, что представляет собой нежелательный процесс, например неопластический или гиперпластический рост ίη νίίτο или ίη νίνο.
- 2 024118
Примеры пролиферативных состояний включают, но не ограничиваются ими, доброкачественную, предопухолевую и злокачественную пролиферацию клеток, включая, но не ограничиваясь ими, неоплазмы и опухоли (например, гистиоцитому, глиому, астроцитому, остеому), раковые заболевания (например, рак легких, мелкоклеточный рак легких, рак желудочно-кишечного тракта, колоректальный рак, рак толстой кишки, карциному молочной железы, карциному яичников, рак простаты, рак яичек, рак печени, рак почек, рак мочевого пузыря, рак поджелудочной железы, рак мозга, саркому, остеосаркому, саркому Капоши, меланому), лейкозы, псориаз, заболевания костей, фибропролиферативные нарушения (например, соединительных тканей) и атеросклероз. Другие раковые заболевания, представляющие интерес, включают, но не ограничиваются ими, гематологические злокачественные опухоли, такие как лейкозы и лимфомы, например неходжкинскую лимфому и ее подтипы, такие как ДКВКЛ (диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома), лимфому маргинальной зоны, мантийной зоны и фолликулярную лимфому, лимфому Ходжкина, ОМЛ (острый миелобластный лейкоз) и другие раковые заболевания В- или Тклеток.
Примеры аутоиммунных заболеваний включают следующие: ревматоидный артрит, аутоиммунные демиелинизирующие нарушения (например, рассеянный склероз, аллергический энцефаломиелит), псориатический артрит, эндокринную офтальмопатию, увеоретинит, системную красную волчанку, тяжелую миастению, болезнь Грейвса, гломерулонефрит, аутоиммунные нарушения печени, воспалительное заболевание кишечника (например, болезнь Крона), анафилаксию, аллергические реакции, синдром Шегрена, сахарный диабет I типа, первичный билиарный цирроз, гранулематоз Вегенера, фибромиалгию, полимиозит, дерматомиозит, множественную эндокринную недостаточность, синдром Шмидта, аутоиммунный увеит, болезнь Аддисона, адреналит, тироидит, тироидит Хашимото, аутоиммунный тироидит, пернициозную анемию, атрофию желудка, хронический гепатит, волчаночный гепатит, атеросклероз, подострую кожную красную волчанку, гипопаратиреоз, синдром Дресслера, аутоиммунную тромбоцитопению, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, гемолитическую анемию, вульгарную пузырчатку, пузырчатку, герпетиформный дерматит, алопецию Ареата, пемфигоид, склеродермию, прогрессирующий системный склероз, СКЕ8Т-синдром (кальциноз, синдром Рейно, нарушение моторики пищевода, склеродактилия и телеангиэктазия), мужское и женское аутоиммунное бесплодие, анкилозирующий спондилит, язвенный колит, смешанное заболевание соединительной ткани, нодозный полиартериит, системный некротизирующий васкулит, атопический дерматит, атопический ринит, синдром Гудпасчера, болезнь Шагаса, саркоидоз, ревматическую лихорадку, астму, привычный выкидыш, антифосфолипидный синдром, «легкое фермера», мультиформную эритему, посткардиотомный синдром, синдром Кушинга, аутоиммунный хронический активный гепатит, легкое птицевода, токсический эпидермальный некролиз, синдром Альпорта, альеволит, аллергический альвеолит, фиброзный альвеолит, интерстициальное заболевание легких, нодозную эритему, гангренозную пиодермию, трансфузионную реакцию, артериит Такаясу, ревматоидную полимиалгию, темпоральный артериит, шистосомоз, гигантоклеточный артериит, аскариаз, аспергиллез, синдром Самптера, экзему, лимфоматоидный гранулематоз, болезнь Бехчета, синдром Каплана, болезнь Кавасаки, лихорадку денге, энцефаломиелит, эндокардит, фиброз эндомиокарда, эндофтальмит, стойкую возвышающуюся эритему, псориаз, эритробластоз плода, эозинофильный фасциит, синдром Шульмана, синдром Фелти, филариаз, циклит, хронический циклит, гетерохромный циклит, циклит Фукса, нефропатию 1дА, пурпуру Геноха-Шенлейна, реакцию трансплантат против хозяина, отторжение трансплантата, кардиомиопатию, синдром Итона-Ламберта, рецидивирующий полихондрит, криоглобулинемию, макроглобулинемию Вальденстрема, синдром Эванса и аутоиммунную гонадную недостаточность.
В некоторых вариантах реализации аутоиммунное заболевание представляет собой нарушение, связанное с В лимфоцитами (например, системную красную волчанку, синдром Гудпасчера, ревматоидный артрит и диабет I типа), ТЬ1-лимфоцитами (например, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, псориаз, синдром Шегрена, тироидит Хашимото, болезнь Грейвса, первичный билиарный цирроз, гранулематоз Вегенера, туберкулез или реакцию трансплантат против хозяина) или ТЬ2-лимфоцитами (например, атопический дерматит, системную красную волчанку, атопическую астму, риноконъюнктивит, аллергический ринит, синдром Оменна, системный склероз или хроническую реакцию трансплантат против хозяина). В целом, нарушения, связанные с дендритными клетками, включают нарушения, связанные с ТЬ1-лимфоцитами и ТЬ2-лимфоцитами В некоторых вариантах реализации аутоиммунное нарушение представляет собой нарушение иммунной системы, опосредованное Т-клетками.
Согласно четвертому аспекту настоящее изобретение включает способ получения конъюгатов формулы I.
Димеры ПБД для применения согласно настоящему изобретению получают при помощи способов, отличающихся от применявшихся ранее для получения симметричных димеров ПБД. В частности, авторами настоящего изобретения разработан способ, заключающийся во введении каждого арильного заместителя при С2 в ядро симметричного димера ПБД на разных стадиях. Соответственно, согласно шестому аспекту настоящего изобретения предложен способ получения конъюгата формулы I, включающий по меньшей мере одну стадию, описанную в настоящем тексте.
- 3 024118
Краткое описание чертежей
На фиг. 1-6 показано действие конъюгатов на опухоли согласно настоящему изобретению. Определения
Если в настоящем описании используется название торговой марки, то ссылка на название торговой марки также относится к составу, содержащему продукт, дженерику и активному(ым) фармацевтическому(им) ингредиенту(ам), входящему(им) в состав продукта с указанным торговым названием, если в контексте не указано иное.
Связывающий агент и нацеливающий агент.
Термины связывающий агент и нацеливающий агент, используемые в настоящем описании, относятся к молекуле, например, белка, полипептида или пептида, которая специфично связывается с молекулой-мишенью. Примеры могут включать непосредственно антитело, антигенсвязывающий фрагмент антитела, другой агент (белок, полипептид или пептид), который включает вариабельную область тяжелых и/или легких цепей антител, которая специфично связывается с молекулой-мишенью, или гибридный белок Ре, содержащий внеклеточный домен белка, пептида, полипептида, который связывается с молекулой-мишенью и который присоединен к Рс области, домену или фрагменту антитела.
Специфичноее связывание.
Термины специфично связывается и специфичное связывание относятся к связыванию антитела или другого белка, полипептида или пептида с целевой молекулой (например, с антигеном). Как правило, антитело или другая молекула связывается с аффинностью, составляющей по меньшей мере примерно 1 χ 107 М-1, при этом аффинность связывания с целевой молекулой по меньшей мере в два раза выше аффинности связывания с другими молекулами (например, БСА, казеина), отличными от целевой молекулы или родственной ей молекулы.
Фармацевтически приемлемые катионы.
Примеры фармацевтически приемлемых одновалентных и бивалентных катионов приводятся в публикации Вегде, с1 а1., 1. РЬагт. 8с1., 66, 1-19 (1977), содержание которой включено в настоящую заявку посредством ссылки.
Фармацевтически приемлемый катион может быть неорганическим или органическим.
Примеры фармацевтически приемлемых одновалентных неорганических катионов включают, но не ограничиваются ими, ионы щелочных металлов, такие как Να' и К'. Примеры фармацевтически приемлемых бивалентных неорганических катионов включают, но не ограничиваются ими, катионы щелочноземельных металлов, такие как Са2' и Мд2'. Примеры фармацевтически приемлемых органических катионов включают, но не ограничиваются ими, ион аммония (т.е. ΝΗ4') и замещенные ионы аммония (например, ΝΗ3Κ', ΝΗ2Κ2', ΝΗΚ3', ΝΚ4'). Примерами некоторых подходящих замещенных ионов аммония являются ионы, полученные из этиламина, диэтиламина, дициклогексиламина, триэтиламина, бутиламина, этилендиамина, этаноламина, диэтаноламина, пиперазина, бензиламина, фенилбензиламина, холина, меглумина и трометамина, а также из аминокислот, таких как лизин и аргинин. Примером распространенного четвертичного иона аммония является Ν(ΟΗ3)4'.
Заместители.
Выражение возможно замещенный, используемое в настоящем описании, относится к исходной группе, которая может быть незамещенной или замещенной.
Если не указано иное, термин замещенный, используемый в настоящем описании, относится к исходной группе, которая содержит один или более заместителей. Термин заместитель используется в настоящем описании в традиционном значении и относится к химическому фрагменту, который ковалентно присоединен или, если это возможно, конденсирован с исходной группой. Хорошо известен широкий ряд заместителей, и способы их получения и введения в разнообразные исходные группы также хорошо известны.
Примеры заместителей более подробно описаны ниже.
С1-12 алкил. Термин С1-12 алкил, используемый в настоящем описании, относится к одновалентному фрагменту, полученному в результате удаления атома водорода от атома углерода в углеводороде, содержащем от 1 до 12 атомов углерода, который может быть алифатическим или алициклическим и который может быть насыщенным или ненасыщенным (например, частично ненасыщенным, полностью ненасыщенным). Таким образом, термин алкил включает подклассы алкенил, алкинил, циклоалкил и т.д., описанные ниже.
Примеры насыщенных алкильных групп включают, но не ограничиваются ими, метил (С3), этил (С2), пропил (С3), бутил (С4), пентил (С5), гексил (С6) и гептил (С7).
Примеры насыщенных линейных алкильных групп включают, но не ограничиваются ими, метил (С1), этил (С2), н-пропил (С3), н-бутил (С4), н-пентил (амил) (С5), н-гексил (С6) и н-гептил (С7).
Примеры насыщенных разветвленных алкильных групп включают изопропил (С3), изобутил (С4), втор-бутил (С4), трет-бутил (С4), изопентил (С5) и неопентил (С5).
С2-12 алкенил. Термин С2-12 алкенил, используемый в настоящем описании, относится к алкильной группе, содержащей одну или более двойных углерод-углеродных связей.
Примеры ненасыщенных алкенильных групп включают, но не ограничиваются ими, этенил (винил,
- 4 024118
-СН=СН2), 1-пропенил (-СН=СН-СН3), 2-пропенил (аллил, -СН-СН=СН2), изопропенил (1-метилвинил, -С(СН3)=СН2), бутенил (С4), пентенил (С5) и гексенил (С6).
С2-12 алкинил. Термин С2-12 алкинил, используемый в настоящем описании, относится к алкильной группе, содержащей одну или более тройных углерод-углеродных связей.
Примеры ненасыщенных алкинильных групп включают, но не ограничиваются ими, этинил (-С'.=СН) и 2-пропинил (пропаргил, -СН2-С=СН).
С3-12 циклоалкил. Термин С3-12 циклоалкил, используемый в настоящем описании, относится к алкильной группе, которая также является циклической группой; т.е. представляет собой одновалентный фрагмент, полученный в результате удаления атома водорода от атома алициклического кольца циклического углеводорода (карбоциклического соединения), содержащий от 3 до 7 атомов углерода, включая от 3 до 7 атомов в кольце.
Примеры циклоалкильных групп включают, но не ограничиваются ими, группы, полученные из насыщенных моноциклических углеводородов: циклопропана (С3), циклобутана (С4), циклопентана (С5), циклогексана (С6), циклогептана (С7), метилциклопропана (С4), диметилциклопропана (С5), метилциклобутана (С5), диметилциклобутана (С6), метилциклопентана (С6), диметилциклопентана (С7) и метилциклогексана (С7);
ненасыщенных моноциклических углеводородов: циклопропена (С3), циклобутена (С4), циклопентена (С5), циклогексена (С6), метилциклопропена (С4), диметилциклопропена (С5), метилциклобутена (С5), диметилциклобутена (С6), метилциклопентена (С6), диметилциклопентена (С7) и метилциклогексена (С7); и насыщенных полициклических углеводородов: норкарана (С7), норпинана (С7), норборнана (С7).
С3-2о гетероциклил. Термин С3-2о гетероциклил, используемый в настоящем описании, относится к одновалентному фрагменту, полученному в результате удаления атома водорода от атома кольца гетероциклического соединения, при этом фрагмент содержит от 3 до 20 атомов в кольце, среди которых от 1 до 10 атомов представляют собой гетероатомы кольца. Предпочтительно каждое кольцо содержит от 3 до 7 атомов, среди которых от 1 до 4 представляют собой гетероатомы кольца.
В указанном контексте префиксы (например, С3-20, С3-7, С5-6 и т.д.) обозначают количество атомов в кольце или диапазон числа атомов в кольце, включая атомы углерода и гетероатомы. Например, термин С5-6 гетероциклил, используемый в настоящем описании, относится к гетероциклильной группе, содержащей 5 или 6 атомов в кольце.
Примеры моноциклических гетероциклильных групп включают, но не ограничиваются ими, группы, полученные из
Ν1: азиридина (С3), азетидина (С4), пирролидина (тетрагидропиррола) (С5), пирролина (например, 3пирролина, 2,5-дигидропиррола) (С5), 2Н-пиррола или 3Н-пиррола (изопиррола, изоазола) (С5), пиперидина (С6), дигидропиридина (С6), тетрагидропиридина (С6), азепина (С7);
О1: оксирана (С3), оксетана (С4), оксолана (тетрагидрофурана) (С5), оксола (дигидрофурана) (С5), океана (тетрагидропирана) (С6), дигидропирана (С6), пирана (С6), оксепина (С7);
δ1: тиирана (С3), тиетана (С4), тиолана (тетрагидротиофена) (С5), тиана (тетрагидротиопирана) (С6), тиепана (С7);
О2: диоксолана (С5), диоксана (С6) и диоксепана (С7);
О3: триоксана (С6);
Ν2: имидазолидина (С5), пиразолидина (диазолидина) (С5), имидазолина (С5), пиразолина (дигидропиразола) (С5), пиперазина (С6);
Ν1Ο1: тетрагидрооксазола (С5), дигидрооксазола (С5), тетрагидроизоксазола (С5), дигидроизоксазола (С5), морфолина (С6), тетрагидрооксазина (С6), дигидрооксазина (С6), оксазина (С6);
Ν1δ1: тиазолина (С5), тиазолидина (С5), тиоморфолина (С6);
Ν2Ο1: оксадиазина (С6);
Οιδ4: оксатиола (С5) и оксатиана (тиоксана) (С6) и
Ν1Ο1δ1: оксатиазина (С6).
Примеры замещенных моноциклических гетероциклильных групп включают группы, полученные из сахаридов в циклической форме, например из фураноз (С5), таких как арабинофураноза, ликсофураноза, рибофураноза и ксилофураноза, и пираноз (С6), таких как аллопираноза, альтропираноза, глюкопираноза, маннопираноза, гулопираноза, идопираноза, галактопираноза и талопираноза.
С5-20 арил. Термин С5-20 арил, используемый в настоящем описании, относится к одновалентному фрагменту, полученному в результате удаления атома водорода от атома ароматического кольца ароматического соединения, который содержит от 3 до 20 атомов в кольце. Предпочтительно каждое кольцо содержит от 5 до 7 атомов в кольце.
В указанном контексте префиксы (например, С3-20, С5-7, С5-6 и т.д.) обозначают количество атомов в кольце или диапазон числа атомов в кольце, включая атомы углерода и гетероатомы. Например, термин С5-6 арил, используемый в настоящем описании, относится к арильной группе, содержащей 5 или 6 атомов в кольце.
Все атомы в кольце могут представлять собой атомы углерода, как в случае карбоарильных групп.
- 5 024118
Примеры карбоарильных групп включают, но не ограничиваются ими, группы, полученные из бензола (т.е. фенил) (С6), нафталина (Сю), азулена (Сю), антрацена (С14), фенантрена (С14), нафтацена (Οι8) и пирена (С16).
Примеры арильных групп, которые содержат конденсированные кольца, по меньшей мере одно из которых представляет собой ароматическое кольцо, включают, но не ограничиваются ими, группы, полученные из индана (например, 2,3-дигидро-1Н-индена) (С9), индена (С9), изоиндена (С9), тетралина (1,2,3,4-тетрагидронафталина (С10), аценафтена (С12), флуорена (С13), феналена (С13), ацефенантрена (С15) и ацеантрена (С16).
В качестве альтернативы атомы кольца могут включать один или более гетероатомов, как в случае гетероарильных групп. Примеры моноциклических гетероарильных групп включают, но не ограничиваются ими, группы, полученные из
Ν1: пиррола (азола) (С5), пиридина (азина) (С6);
О1: фурана (оксола) (С5); δ1: тиофена (тиола) (С5);
Ν1Ο1: оксазола (С5), изоксазола (С5), изоксазина (С6);
Ν2Ο1: оксадиазола (фуразана) (С5);
Ν3Ο1: оксатриазола (С5);
Ν1δ1: тиазола (С5), изотиазола (С5);
Ν2: имидазола (1,3-диазола) (С5), пиразола (1,2-диазола) (С5), пиридазина (1,2-диазина) (С6), пиримидина (1,3-диазина) (С6) (например, цитозина, тимина, урацила), пиразина (1,4-диазина)(С6);
Ν3: триазола (С5), триазина (С6); и Ν4: тетразола (С5).
Примеры гетероарильных групп, содержащих конденсированные кольца, включают, но не ограничиваются ими,
С9 (содержащие 2 конденсированных кольца), полученные из бензофурана (О1), изобензофурана (О1), индола (Ν1), изоиндола (Ν1), индолизина (Ν1), индолина (Ν1), изоиндолина (Ν1), пурина (Ν4) (например, аденина, гуанина), бензимидазола (Ν2), индазола (Ν2), бензоксазола (Ν1Ο1), бензизоксазола (Ν1Ο1), бензодиоксола (О2), бензофуразана (Ν2Ο1), бензотриазола (Ν3), бензотиофурана (δ1), бензотиазола (Ν1δ1), бензотиадиазола (Ν2δ);
С10 (содержащие 2 конденсированных кольца), полученные из хромена (О1), изохромена (О1), хромана (О1), изохромана (О1), бензодиоксана (О2), хинолина (Ν1), изохинолина (Ν1), хинолизина (Ν1), бензоксазина (Ν1Ο1), бензодиазина (Ν2), пиридопиридина (Ν2), хиноксалина (Ν2), хиназолина (Ν2), циннолина (Ν2), фталазина (Ν2), нафтиридина (Ν2), птеридина (Ν4);
С11 (содержащие 2 конденсированных кольца), полученные из бензодиазепина (Ν2);
С13 (содержащие 3 конденсированных кольца), полученные из карбазола (Ν1), дибензофурана (О1), дибензотиофена (δ1), карболина (Ν2), перимидина (Ν2), пиридоиндола (Ν2); и
С14 (содержащие 3 конденсированных кольца), полученные из акридина (Ν1), ксантена (О1), тиоксантена (δ1), оксантрена (О2), феноксатиина (Ο1δ1), феназина (Ν2), феноксазина (Ν1Ο1), фенотиазина (Ν1δ1), тиантрена (δ2), фенантридина (Ν1), фенантролина (Ν2), феназина (Ν2).
Представленные выше группы, как таковые или как часть другого заместителя, могут быть возможно замещены одной или более группами, выбранными из таких же указанных групп и дополнительных заместителей, перечисленных ниже.
Галогены: -Р, -С1, -Вг и -I.
Гидроксил: -ОН.
Простая эфирная группа: -ОК, где К представляет собой заместитель простого эфира, например С1-7 алкильную группу (в этом случае группу также называют С1-7 алкоксигруппой, описана ниже), С3-20 гетероциклильную группу (также называют С3-20 гетероциклилоксигруппой) или С5-20 арильную группу (также называют С5-20 арилоксигруппой), предпочтительно С1-7 алкильную группу.
Алкокси: -ОК, где К представляет собой алкильную группу, например С1-7 алкильную группу. Примеры С1-7 алкоксигрупп включают, но не ограничиваются ими, -ОМе (метокси), -ОЕ1 (этокси), -О(пРг) (нпропокси), -Ο(ίΡτ) (изопропокси), -О(пВи) (н-бутокси), -О(кВи) (втор-бутокси), -Ο(ίΒυ) (изобутокси) и -О(1Ви) (трет-бутокси).
Ацеталь: -СН(ОК1)(ОК2), где К1 и К2 независимо представляют собой заместители ацеталя, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу, или в случае циклической ацетальной группы К1 и К2, взятые совместно с двумя атомами кислорода, к которым они присоединены, и атомами углерода, к которым они присоединены, образуют гетероциклическое кольцо, содержащее от 4 до 8 атомов в кольце. Примеры ацетальных групп включают, но не ограничиваются ими, -СН(ОМе)2, -СН(ОЕ1)2 и -СН(ОМе)(ОЕ1).
Гемиацеталь: -СН(ОН)(ОК1), где К1 представляет собой заместитель гемиацеталя, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры гемиацетальных групп включают, но не ограничиваются ими, -СН(ОН)(ОМе) и -СН(ОН)(ОЕ1).
Кеталь: -СК(ОК1)(ОК2), где К1 и К2 такие же, как определены для ацеталей, а К представляет собой
- 6 024118 заместитель кеталя, отличный от водорода, например С1.7 алкильную группу, С3.20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры кеталей включают, но не ограничиваются ими, -С(Ме)(ОМе)2, -С(Ме)(ОЕ1)2, -С(Ме)(ОМе)(ОЕ1), -С(Е1)(ОМе)2, -С(Е1)(ОЕ1)2 и -С(Е1)(ОМе)(ОЕ1).
Гемикеталь: -СК(ОН)(ОК1), где К1 такой же, как определен для гемиацеталей, а К представляет собой заместитель гемикеталя, отличный от водорода, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры гемикеталей включают, но не ограничиваются ими, -С(Ме)(ОН)(ОМе), -С(Е1)(ОН)(ОМе), -С(Ме)(ОН)(ОЕ1) и -С(Е1)(ОН)(ОЕ1).
Оксогруппа (кето-, -он): =О.
Тион (тиокетон): =8.
Имино (иминная группа): =ΝΚ, где К представляет собой заместитель имина, например водород, С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно водород или С1-7 алкильную группу. Примеры иминов включают, но не ограничиваются ими, =N4, =NМе, =NЕΐ и =ΝΡΗ.
Формил (карбальдегид, карбоксальдегид): -С(=О)Н.
Ацил (кето-): -С(=О)К, где К представляет собой заместитель ацила, например С1-7 алкильную группу (в этом случае группу также называют С1-7 алкилацилом или С1-7 алканоилом), С3-20 гетероциклильную группу (также называют С3-20 гетероциклилацилом) или С5-20 арильную группу (также называют С5-20 арилацилом), предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры ацильных групп включают, но не ограничиваются ими, -С(=О)СН3 (ацетил), -С(=О)СН2СН3 (пропионил), -С(=О)С(СН3)3 (т-бутирил) и -С(=О)Рй (бензоил, фенон).
Карбоксигруппа (карбоновая кислота): -С(=О)ОН.
Тиокарбоксигруппа (тиокарбоновая кислота): -С(=8)8Н.
Тиолокарбоксигруппа (тиолокарбоновая кислота): -С(=О)8Н.
Тионокарбоксигруппа (тионокарбоновая кислота): -С(=8)ОН.
Имидокислота: -^=N4^^
Гидроксамовая кислота: -С(=NОН)ОН.
Сложноэфирная группа (карбоксилат, сложный эфир карбоновой кислоты, оксикарбонил): -С(=О)ОК, где К представляет собой заместитель сложноэфирной группы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сложноэфирных групп включают, но не ограничиваются ими, -С(=О)ОСН3, -С(=О)ОСН2СНз, -С(=О)ОС(СНз)з и -С(=О)ОРй.
Ацилокси (обращенный сложный эфир): -ОС(=О)К, где К представляет собой заместитель ацилокси, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры ацилоксигрупп включают, но не ограничиваются ими, -ОС(=О)СН3 (ацетокси), -ОС( О)С117С11;. -ОС(=О)С(СН3)3, -ОС(=О)Рй и -ОС(=О)СН2Рй.
Оксикарбонилокси: -ОС(=О)ОК, где К представляет собой заместитель сложноэфирной группы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сложноэфирных групп включают, но не ограничиваются ими, -ОС(=О)ОСН3, -ОС(=О)ОСН2СН3, -ОС(=О)ОС(СН3)3 и -ОС(=О)ОРй.
Аминогруппа: -ΝΕ^Ε2, где К1 и К2 независимо представляют собой заместители аминогруппы, например водород, С1-7 алкильную группу (в этом случае группу называют С1-7 алкиламиногруппой или диС1-7 алкиламиногруппой), С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно Н или С1-7 алкильную группу, или в случае циклической аминогруппы К1 и К2 совместно с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклическое кольцо, содержащее от 4 до 8 атомов в кольце. Аминогруппы могут быть первичными (-ΝΉ2), вторичными (-ΝΉ^) или третичными (-N4^^), а также в случае катионной формы, могут быть четвертичными (-+NΕ1К2К3). Примеры аминогрупп включают, но не ограничиваются ими, -Ν42, -ЫНСН3, -ЖС(СН3)2, -Ы(СН3)2, -Ы(СН2СН3)2 и -Ν^Κ Примеры циклических аминогрупп включают, но не ограничиваются ими, азиридино, азетидино, пирролидино, пиперидино, пиперазино, морфолино и тиоморфолино.
Амидная группа (карбамоил, карбамил, аминокарбонил, карбоксамид): -С(=О)NΕ1К2, где К1 и К2 независимо представляют собой заместители аминогруппы, определенные для аминогрупп. Примеры амидогрупп включают, но не ограничиваются ими, -С(=О)NН2, -С(=О)NНСН3, -С(=О)^СН3)2,
-С(=О)NНСН2СН3 и -С(=О)^СН2СН3)2, а также амидогруппы, в которых К1 и К2 совместно с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклическую структуру, как, например, в случае пиперидинокарбонила, морфолинокарбонила, тиоморфолинокарбонила и пиперазинокарбонила.
Тиоамид (тиокарбамил): -С(=8)NΕ1К2, где К1 и К2 независимо представляют собой заместители аминогруппы, определенные для аминогрупп. Примеры амидных групп включают, но не ограничиваются ими, -С(=8^2, ^(=8)Ν4^3, -С(=8ЖСН3Ъ и -С( 8)\НС1 ΚΊ 1;.
Ациламидогруппа (ациламиногруппа): -ЫК1С(=О)К2, где К1 представляет собой заместитель амидной группы, например водород, С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 ариль- 7 024118 ную группу, предпочтительно водород или С1.7 алкильную группу, а К2 представляет собой заместитель ацильной группы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно водород или С1-7 алкильную группу. Примеры ациламидогрупп включают, но не ограничиваются ими, -ИНС(=О)СН3, -ИНС(=О)СН2СН3 и -ИНС(=О)Рй. К1 и К2, взятые вместе, могут образовывать циклическую структуру, например, в сукцинимидиле, малеимидиле и фталимидиле
Аминокарбонилокси: -ОС(=О)ИК1К2, где К1 и К2 независимо представляют собой заместители аминогруппы, определенные для аминогрупп. Примеры аминокарбонилоксигрупп включают, но не ограничиваются ими, -ОС( О)\Н, -ОС( О)\НМе. -ОС(=О)ИМе2 и -ОС( О)\Е1;.
Уреидогруппа: -И(К1)СОИК2К3, где К2 и К3 независимо представляют собой заместители аминогруппы, определенные для аминогрупп, а К1 представляет собой заместитель уреидогруппы, например водород, С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно водород или С1-7 алкильную группу. Примеры уреидогрупп включают, но не ограничиваются ими, -ИНСОИН2, -ИНСОИНМе, -М1СОМ11Т -\НСО\Ме;. -ХНСОМт·. -\МеСО\Н;. -\МеСО\НМе. -ИМеСОИНЕ!, -\МеСО\Ме; и -ХМеСОХЕг.
Гуанидин: -ИН-С(=ИН)ИН2.
Тетразолил: пятичленное ароматическое кольцо, содержащее четыре атома азота и один атом углерода
Иминогруппа: =ΝΡ, где К представляет собой заместитель иминогруппы, например водород, С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно Н или С1-7 алкильную группу. Примеры иминогрупп включают, но не ограничиваются ими, =ΝΉ, =NМе и =ΝΕ1
Амидин (амидино): -Ε(=ΝΡ)ΝΡ2· где каждый К представляет собой заместитель амидиногруппы, например водород, С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно Н или С1-7 алкильную группу. Примеры амидиногрупп включают, но не ограничиваются ими, -С(=ИН)ИН2, -С(=ИН)ИМе2 и -С(=ИМе)ИМе2.
Нитрозо: -ИО.
Азидо: -Ν3.
Изоциано: -ИС.
Цианато: -ОСИ
Изоцианато: -ИСО.
Тиоциано (тиоцианато): -ЗСИ.
Изотиоциано (изотиоцианато): -ИСЗ.
Сульфгидрильная группа (тиол, меркаптогруппа): -ЗН.
Простой тиоэфир (сульфид): -ЗК, где К представляет собой заместитель простого тиоэфира, например С1-7 алкильную группу (в этом случае группу называют С1-7 алкилтиогруппой), С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры С1-7 алкилтиогрупп включают, но не ограничиваются ими, -ЗСН3 и -ЗСН2СН3.
Дисульфид: -ЗЗ-К, где К представляет собой заместитель дисульфида, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу (в этом случае группу называют С1-7 алкилдисульфидом). Примеры С1-7 алкилдисульфидных групп включают, но не ограничиваются ими, -ЗЗСН3 и -ЗЗСН2СН3.
Сульфин (сульфинил, сульфоксид): -З(=О)К, где К представляет собой заместитель сульфиногруппы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сульфиновых групп включают, но не ограничиваются ими,
-З(=О)СН3 и -З(=О)СН2СН3.
Сульфон (сульфонил): -З(=О)2К, где К представляет собой заместитель сульфоновой группы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу, включая, например, фторированную или перфторированную С1-7 алкильную группу. Примеры сульфоновых групп включают, но не ограничиваются ими, -З(=О)2СН3 (метансульфонил, мезил), -З(=О)2СР3 (трифлил), -З(=О)2СН2СН3 (эзил), -З(=О)2С4р9 (нонафлил), -З(=О)2СН2СР3 (трезил), -З(=О)2СН2СН2ИН2 (таурил), -З(=О)2Рй (фенилсульфонил, безил), 4-метилфенилсульфонил (то- 8 024118 зил), 4-хлорфенилсульфонил (хлозил), 4-бромфенилсульфонил (брозил), 4-нитрофенил (нозил), 2нафталинсульфонат (напсил) и 5-диметиламинонафталин-1-илсульфонат (дансил).
Сернистая кислота (сульфино): -8(=О)ОН, -8О2Н.
Сульфокислота (сульфо): -8(=О)2ОН, -8О3Н.
Сульфинат (сложный эфир сернистой кислоты): -8(=О)ОК; где К представляет собой заместитель сульфинатной группы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сульфинатных групп включают, но не ограничиваются ими, -8(=О)ОСН3 (метоксисульфинил; метилсульфинат) и -8(=О)ОСН2СН3 (этоксисульфинил; этилсульфинат).
Сульфонат (сложный эфир сульфокислоты): -8(=О)2ОК, где К представляет собой заместитель сульфонатной группы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сульфонатных групп включают, но не ограничиваются ими, -8(=О)2ОСН3 (метоксисульфонил; метилсульфонат) и -8(=О)2ОСН2СН3 (этоксисульфонил; этилсульфонат).
Сульфинилокси: -О8(=О)К, где К представляет собой заместитель сульфинилоксигруппы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сульфинилоксигрупп включают, но не ограничиваются ими, -О8(=О)СН3 и -О8(=О)СН2СНз.
Сульфонилокси: -О8(=О)2К, где К представляет собой заместитель сульфонилоксигруппы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сульфонилоксигрупп включают, но не ограничиваются ими, -О8(=О)2СН3 (мезилат) и -О8(=О)2СН2СН3 (эзилат).
Сульфат: -О8(=О)2ОК; где К представляет собой заместитель сульфатной группы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сульфатных групп включают, но не ограничиваются ими, -О8(=О)2ОСН3 и -8О(=О)2ОСН2СНз.
Сульфамил (сульфамоил; амид сернистой кислоты; сульфинамид): -8(=О)ПК?К2, где К1 и К2 независимо представляют собой заместители аминогруппы, определенные для аминогрупп. Примеры сульфамильных групп включают, но не ограничиваются ими, -8(=О)ПН2, -8(=О)ПН(СН3), -§(=О)Ы(СН3)2, -8(=О)ПН(СН2СН3), -8(=О)Ы(СН2СН3)2 и -8(=О)ПНРй.
Сульфонамидо (сульфинамоил, амид сульфокислоты, сульфонамид): -8(=О)2ПК1К2, где К1 и К2 независимо представляют собой заместители аминогруппы, определенные для аминогрупп. Примеры сульфонамидных групп включают, но не ограничиваются ими, -8(=О)2МН2, -8(=О)2МН(СН3), -8(=О)2П(СНз)2, -8(=О);\Н(СН;СН;). -8( О);\(СН;СН;); и -8(=ОуХНРП.
Сульфамино: -ЛК?8(=О)2ОН, где К1 представляет собой заместитель аминогруппы, определенный для аминогрупп. Примеры сульфаминогрупп включают, но не ограничиваются ими, -ЛН8(=О)2ОН и -П(СНз)8(=О)2ОН.
Сульфонамино: -ЛК?8(=О)2К, где К1 представляет собой заместитель аминогруппы, определенный для аминогрупп, а К представляет собой заместитель сульфонаминогруппы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сульфонаминогрупп включают, но не ограничиваются ими, -ЛН8(=О)2СН3 и -П(СНз)8(=О)2С6Н5.
Сульфинамино: -ЛК?8(=О)К, где К1 представляет собой заместитель аминогруппы, определенный для аминогрупп, а К представляет собой заместитель сульфинаминогруппы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сульфинаминогрупп включают, но не ограничиваются ими, -ЛН8(=О)СН3 и -Ы(СНз)8(=О)СбН5.
Фосфино (фосфин): -РК2, где К представляет собой заместитель фосфиногруппы, например -Н, С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно -Н, С1-7 алкильную группу или С5-20 арильную группу. Примеры фосфиновых групп включают, но не ограничиваются ими, -РН2, -Р(СН3)2, -Р(СН2СН3)2, -Р(1-Ви)2 и -Р(Рй)2.
Фосфогруппа: -Р(=О)2.
Фосфинил (фосфиноксид): -Р(=О)К2, где К представляет собой заместитель фосфинила, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу или С5-20 арильную группу. Примеры фосфинильных групп включают, но не ограничиваются ими, -Р(=О)(СНз)2, -Р(=О)(СН2СНз)2, -Р(=О)(1-Ви)2 и -Р(=О)(РЬ)2.
Фосфоновая кислота (фосфоно): -Р(=О)(ОН)2.
Фосфонатная группа (сложный эфир фосфоновой кислоты): -Р(=О)(ОК)2, где К представляет собой заместитель фосфонатной группы, например -Н, С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно -Н, С1-7 алкильную группу или С5-20 арильную группу. Примеры фосфонатных групп включают, но не ограничиваются ими, -Р(=О)(ОСН3)2, -Р(=О)(ОСН2СН3)2, -Р(=О)(О-1-Ви)2 и -Р(=О)(ОРй)2.
- 9 024118
Фосфорная кислота (фосфоноокси): -ОР(=О)(ОН)2.
Фосфатная группа (сложный эфир фосфоноокси): -ОР(=О)(ОК)2, где К представляет собой заместитель фосфатной группы, например -Н, Οι_7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно -Н, С1-7 алкильную группу или С5-20 арильную группу. Примеры фосфатных групп включают, но не ограничиваются ими, -ОР(=О)(ОСН3)2, -ОР(=О)(ОСН2СН3)2, -ОР(=О)(О-1-Ви)2 и -ОР(=О)(ОРй)2.
Фосфористая кислота: -ОР(ОН)2.
Фосфит: -ОР(ОК)2, где К представляет собой заместитель фосфитной группы, например -Н, С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно -Н, С1-7 алкильную группу или С5-20 арильную группу. Примеры фосфитных групп включают, но не ограничиваются ими, -ОР(ОСНз)2, -ОР(ОСН2СНз)2, -ОР(О-1-Ви)2 и -ОР(ОРй)2.
Фосфорамидит: -ОР(ОК1)-ПК22, где К1 и К2 представляют собой заместители фосфорамидитной группы, например -Н, (возможно замещенную) С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно -Н, С1-7 алкильную группу или С5-20 арильную группу. Примеры фосфорамидитных групп включают, но не ограничиваются ими, -ОР(ОСН2СН3)-Ы(СН3)2, -ОР(ОСН;СН;)-\(1-Рг); и -ОР(ОСН;СН;С\)-\(1-1Т);.
Фосфорамидат: -ОР(=О)(ОК1)-ЛК22, где К1 и К2 представляют собой заместители фосфорамидатной группы, например -Н, (возможно замещенную) С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно -Н, С1-7 алкильную группу или С5-20 арильную группу. Примеры фосфорамидатных групп включают, но не ограничиваются ими, -ОР(=О)(ОСН2СН3)-Ы(СН3)2, -ОР( О)(ОСН;СН;)-\(1-Рг); и -ОР( О)(ОС1 РС1 РС\)-\(1-РгР
Алкилен.
С3-7 алкилен. Термин С3-7 алкилен, используемый в настоящем описании, относится к бидентатному фрагменту, полученному в результате удаления двух атомов водорода, обоих от одного атома углерода или по одному от каждого из двух разных атомов углерода, в углеводороде, содержащем от 3 до 7 атомов углерода (если не указано иное), который может быть алифатическим или алициклическим и который может быть насыщенным, частично ненасыщенным или полностью ненасыщенным. Таким образом, термин алкилен включает такие подклассы, как алкенилен, алкинилен, циклоалкилен и т.д., описанные ниже.
Примеры линейных насыщенных С3-7 алкиленовых групп включают, но не ограничиваются ими, -(СН2)П-, где η представляет собой целое число от 3 до 7, например -СН2СН2СН2- (пропилен), -СН2СН2СН2СН2- (бутилен), -СН2СН2СН2СН2СН2- (пентилен) и -СН2СН2СН2СН2СН2СН2СН2- (гептилен).
Примеры разветвленных насыщенных С3-7 алкиленовых групп включают, но не ограничиваются ими, -СН(СН3)СН2-, -СН(СН3)СН2СН2-, -СН(СН3)СН2СН2СН2-, -СН2СН(СН3)СН2-, -СН2СН(СН3)СН2СН2-, -СН(СН2СН3)-, -СН(СН2СН3)СН2- и -СН2СН(СН2СН3)СН2-.
Примеры линейных частично ненасыщенных С3-7 алкиленовых групп (С3-7 алкениленовых и алкиниленовых групп) включают, но не ограничиваются ими, -СН=СН-СН2-, -СН2-СН=СН2-, -СН=СН-СН2СН2-, -СН=СН-СН2-СН2-СН2-, -СН=СН-СН=СН-, -СН=СН-СН=СН-СН2-, -СН=СН-СН=СН-СН2-СН2-, -СН=СН-СН2-СН=СН-, -СН=СН-СН2-СН2-СН=СН- и -СН2-С С-СН2-.
Примеры разветвленных частично ненасыщенных С3-7 алкиленовых групп (С3-7 алкениленовых и алкиниленовых групп) включают, но не ограничиваются ими, -С(СН3)=СН-, -С(СН3)=СН-СН2-, -СН=СНСН(СНз)- и -С С-СН(СН;)-.
Примеры алициклических насыщенных С3-7 алкиленовых групп (С3-7 циклоалкиленов) включают, но не ограничиваются ими, циклопентилен (например, циклопент-1,3-илен) и циклогексилен (например, циклогекс-1,4-илен).
Примеры алициклических частично ненасыщенных С3-7 алкиленовых групп (С3-7 циклоалкиленов) включают, но не ограничиваются ими, циклопентенилен (например, 4-циклопентен-1,3-илен), циклогексенилен (например, 2-циклогексен-1,4-илен; 3-циклогексен-1,2-илен; 2,5-циклогексадиен-1,4-илен).
Защитные группы атома кислорода: термин защитные группы атома кислорода относится к фрагменту, который защищает гидроксигруппу, и такие группы хорошо известны в данной области техники. Большое число подходящих групп описано в источнике Огеепе, Т.^. апй ХУиК О.М., РгоЮсБус Отоирз ίη Огдашс 8уп1йе818, 31'1 Εάίίίοη, 1ойп \УПеу & 8оп§, 1пс., 1999, стр. 23-100, содержание которого включено в настоящую заявку посредством ссылки. Классы защитных групп, представляющие наибольший интерес, включают простые силильные эфирные группы (например, триметилсилильную группу (ТМ8), третбутилдиметилсилильную группу (ΤΒΌΜ8)), замещенные простые метиловые эфирные группы (например, тетрагидропиранильную группу (ТНР)) и сложноэфирные группы (например, ацетатную).
Карбаматные защитные группы атома азота: термин карбаматные защитные группы атома азота относится к фрагменту, который защищает атом азота иминной связи, и такие группы хорошо известны в данной области техники. Указанные группы имеют следующую структуру:
- 10 024118
где К'10 представляет собой К, определенный выше. Большое число подходящих групп описано в источнике Огеепе, Т.У. апб ХУиК О.М., РгоЮсПус Огоирк ίη Огдашс БуиШекф 3гб ЕбФои, 1оЬп ХУПеу & 8опк, 1пс., 1999, стр. 503-549, содержание которого включено в настоящую заявку посредством ссылки.
Гемиаминальные защитные группы атома азота: термин гемиаминальные защитные группы атома азота относится к группе, имеющей следующую структуру:
где К'10 представляет собой К, определенный выше. Большое число подходящих групп описано в источнике Огееие, Т.У. апб Уи1к, О.М., РгсЛссПус Огоирк ίη Огдашс БуиШекф 3гб ЕбФои, ФНп ХУПеу & 8опк, 1ис., 1999, стр. 633-647, содержание которого включено в настоящую заявку посредством ссылки.
Подробное описание изобретения
В настоящем изобретении предложены конъюгаты, содержащие димер ПБД, связанный с лигандом при помощи линкера. В одном из вариантов реализации линкер включает удлиняющий фрагмент (А), специфичный фрагмент (Ь1) и фрагмент-спейсер (Ь2). Линкер связан одним концом с лигандом, а другим концом с димером ПБД.
Согласно одному аспекту указанный конъюгат представлен ниже формулой 1а Ь- (А^ДЛ-Су-ЦЪ (1а) где Ь представляет собой лиганд и
-А1а-Е18-Ь2у представляет собой линкер (ЬИ), где
-А1- представляет собой удлиняющий фрагмент, а равен 1 или 2,
Ь1 - представляет собой специфичный фрагмент, к представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 12,
-Ь2- представляет собой фрагмент-спейсер, у равен 0, 1 или 2;
-Ό представляет собой димер ПБД и р равен от 1 до 20.
Нагрузка лекарственного соединения определяется индексом р, числом молекул лекарственного соединения на один лиганд (например, антитела). Нагрузка лекарственного средства может находиться в диапазоне от 1 до 20 фрагментов лекарственного соединения (Ό) на один лиганд (например, АЬ или тАЬ). В случае композиций р представляет собой среднюю нагрузку лекарственного средства в конъюгатах, входящих в состав композиции, и р находится в диапазоне от 1 до 20.
В некоторых вариантах реализации р составляет от примерно 1 до примерно 8 фрагментов лекарственного соединения на один лиганд. В некоторых вариантах реализации р равен 1. В некоторых вариантах реализации р равен 2. В некоторых вариантах реализации р составляет от примерно 2 до примерно 8 фрагментов лекарственного соединения на один лиганд. В некоторых вариантах реализации р составляет от примерно 2 до примерно 6, от примерно 2 до примерно 5 или от примерно 2 до примерно 4 фрагментов лекарственного соединения на один лиганд. В некоторых вариантах реализации р равен примерно 2, примерно 4, примерно 6 или примерно 8 фрагментам лекарственного соединения на один лиганд.
Среднее число фрагментов лекарственного соединения на один лиганд, достигаемое в результате конъюгации, можно характеризовать при помощи традиционных способов, таких как массспектрометрия, ЕЬРЗА и ВЭЖХ. Также можно определять количественное распределение конъюгатов, выраженное при помощи индекса р. В некоторых случаях разделение, очистку и исследование гомогенных конъюгатов, где р имеет конкретное значение, от конъюгатов с другими нагрузками лекарственного средства можно осуществить при помощи таких способов, как обращенно-фазовая ВЭЖХ или электрофорез.
Предпочтительные варианты реализации изобретения
Представленные ниже предпочтительные варианты реализации можно применять для всех аспектов настоящего изобретения, как описано выше, или они могут относиться к одному аспекту. Предпочтительные варианты реализации можно объединять в любых комбинациях.
В одном из вариантов реализации указанный конъюгат имеет следующую формулу: ь- (ΑνιΛ-ιΛ-ϋχ,, где Ь, А1, а, Ь1, к, Ь2, Ό и р такие, как описано выше.
В одном из вариантов реализации лиганд (Ь) представляет собой связывающийся с клетками агент
- 11 024118 (СВА), который специфично связывается с молекулой-мишенью на поверхности клетки-мишени. Ниже приведена формула соединения в качестве примера
о где * означает место присоединения к фрагменту лекарственного соединения (Ό), СВА представляет собой связывающийся с клетками агент, Ь1 представляет собой специфичный фрагмент, А1 представляет собой удлиняющий фрагмент, соединяющий Ь1 и связывающийся с клетками агент, Ь2 представляет собой фрагмент-спейсер, который представляет собой ковалентную связь, саморасщепляющуюся группу, или совместно с -ОС(=О) образует саморасщепляющуюся группу, при этом наличие Ь2 является необязательным.
В другом варианте реализации лиганд (Ь) представляет собой связывающийся с клетками агент (СВА), который специфично связывается с молекулой-мишенью на поверхности клетки-мишени. Ниже представлена формула соединения в качестве примера
где * означает место присоединения к фрагменту лекарственного соединения (Ό), СВА представляет собой связывающийся с клетками агент, Ь1 представляет собой специфичный фрагмент, А1 представляет собой удлиняющий фрагмент, соединяющий Ь1 и связывающийся с клетками агент, Ь2 представляет собой фрагмент-спейсер, который представляет собой ковалентную связь или саморасщепляющуюся группу, а равен 1 или 2, 8 равен 0, 1 или 2 и у равен 0, 1 или 2.
В вариантах реализации, проиллюстрированных выше, Ь1 может представлять собой способный к расщеплению специфичный фрагмент и может именоваться триггер, который при расщеплении активирует саморасщепляющуюся группу (или саморасщепляющиеся группы) в Ь2, в случае, если саморасщепляющаяся(иеся) группа(ы) присутствует(ют). Когда специфичный фрагмент Ь1 расщепляется или линкер (т.е. ковалентная связь) между Ь1 и Ь2 расщепляется, то саморасщепляющаяся группа высвобождает фрагмент лекарственного соединения (Ό).
В другом варианте реализации лиганд (Ь) представляет собой связывающийся с клетками агент (СВА), который специфично связывается с молекулой-мишенью на поверхности клетки-мишени. Ниже приведена формула соединения в качестве примера
1Л
I
СВА-А’а -Ь2У-* где * означает место присоединения к фрагменту лекарственного соединения (Ό), СВА представляет собой связывающийся с клетками агент, Ь1 представляет собой специфичный фрагмент, связанный с Ь2, А1 представляет собой удлиняющий фрагмент, соединяющий Ь2 и связывающийся с клетками агент, Ь2 представляет собой саморасщепляющуюся группу, а равен 1 или 2, 8 равен 1 или 2 и у равен 1 или 2.
В различных вариантах реализации, описанных в настоящем описании, природа Ь1 и Ь2 может изменяться в широких пределах. Эти группы выбирают с учетом их характеристик, которые могут частично определяться условиями в том месте, в которое доставляется конъюгат. Если специфичный фрагмент Ь1 способен к расщеплению, то структуру и/или последовательность Ь1 выбирают таким образом, чтобы указанный фрагмент расщеплялся под действием ферментов, присутствующих в целевом участке (например, в клетке-мишени). Также можно применять фрагменты Ь1, которые способны расщепляться в результате изменений рН (например, фрагменты, лабильные к действию кислоты или основания), температуры или под действием облучения (например, фотолабильные фрагменты). Фрагменты Ь1, способные расщепляться в восстановительных или окислительных условиях, также можно использовать в указанных конъюгатах.
В некоторых вариантах реализации Ь1 может содержать одну аминокислоту или непрерывную последовательность аминокислот. Последовательность аминокислот может представлять собой субстратмишень для фермента.
В одном из вариантов реализации Ь1 способен расщепляться под действием ферментов. В одном из вариантов реализации фермент представляет собой эстеразу или пептидазу. Например, Ь1 может расщепляться лизосомной протеазой, такой как катепсин.
В одном из вариантов реализации Ь2 присутствует и совместно с -С(=О)О- образует саморасщепляющуюся группу или саморасщепляющиеся группы. В некоторых вариантах реализации -С(=О)О- также представляет собой саморасщепляющуюся группу.
В одном из вариантов реализации, где Ь1 способен расщепляться под действием фермента, и Ь2 присутствует, фермент расщепляет связь между Ь1 и Ь2, в результате чего саморасщепляющаяся(иеся) группа(ы) высвобождает(ют) фрагмент лекарственного соединения.
Ь1 и Ь2, в случае если присутствуют, могут быть связаны с помощью связывающей группы, вы- 12 024118 бранной из
-0(=0)ΝΗ-,
-С(=О)О-,
-ΝΗΟ(=0)-,
-ОС(=О)-,
-ОС(=О)О-,
-ΝΗΟ(=0)0-,
-00(=0)ΝΗ-,
-ΝΗΟ(=0)ΝΗ и
-О- (гликозидная связь).
Аминогруппа в Ь1, которая связана с Ь2, может представлять собой Ν-конец аминокислоты или может быть получена из аминогруппы боковой цепи аминокислоты, например боковой цепи аминокислоты лизин.
Карбоксильная группа в Ь1, которая связана с Ь2, может представлять собой С-конец аминокислоты или может быть получена из карбоксильной группы боковой цепи аминокислоты, например боковой цепи аминокислоты глутаминовая кислота.
Г идроксигруппа в Ь1, которая связана с Ь2, может быть получена из гидроксигруппы боковой цепи аминокислоты, например боковой цепи аминокислоты серин.
В одном из вариантов реализации Υ представляет собой ΝΗ.
В одном из вариантов реализации η равен 0 или 1. Предпочтительно η равен 0.
Если Υ представляет собой ΝΗ и η равен 0, то саморасщепляющуюся группу можно назвать паминобензилкарбонильным линкером (РАВС).
Саморасщепляющаяся группа обеспечивает высвобождение фрагмента лекарственного соединения (т.е. несимметричного ПБД), если активируется удаленный участок линкера, при этом разложение происходит согласно представленному ниже уравнению (при η=0):
где * означает место присоединения к фрагменту лекарственного соединения, Ь* представляет собой активированную форму остатка линкера, высвобожденный фрагмент лекарственного соединения не показан. Эти группы обладают преимуществом, заключающимся в отделении места активации от лекарственного соединения.
В другом варианте реализации -С(=О)О- и Ь2, взятые вместе, образуют группу, выбранную из
где *, волнистая линия, Υ и η такие, как определено выше. Каждое фениленовое кольцо возможно замещено одним, двумя или тремя заместителями, описанными в настоящем тексте. В одном из вариантов реализации фениленовое кольцо, содержащее заместитель Υ, является возможно замещенным, а фениленовое кольцо, не содержащее заместитель Υ, является незамещенным.
В другом варианте реализации -С(=О)О- и Ь2, взятые вместе, образуют группу, выбранную из
где *, волнистая линия, Υ и η такие, как определено выше, Е представляет собой О, δ или ΝΡ. Ό представляет собой Ν, СН или СК, а Р представляет собой Ν, СН или СК.
В одном из вариантов реализации Ό представляет собой Ν.
- 13 024118
В одном из вариантов реализации Ό представляет собой СН.
В одном из вариантов реализации Е представляет собой О или 8.
В одном из вариантов реализации Р представляет собой СН.
В предпочтительном варианте реализации ковалентная связь между Ь1 и Ь2 представляет собой связь, лабильную к действию катепсина (например, способную к расщеплению).
В одном из вариантов реализации Ь1 включает дипептид. Аминокислоты в дипептиде могут представлять собой любую комбинацию природных аминокислот и неприродных аминокислот. В некоторых вариантах реализации дипептид содержит природные аминокислоты. Если линкер представляет собой линкер, лабильный к действию катепсина, то дипептид представляет собой участок расщепления, опосредованного катепсином. Дипептид, таким образом, является участком распознавания для катепсина.
В одном из вариантов реализации группа -Х1-Х2- в дипептиде, -ИН-Х1-Х2-СО-, выбрана из
-Рбе-Ьук-, -Уа1-А1а-, -Уа1-Ьук-, -А1а-Ьук-, -Уа1-Сб-, -РНе-С'б-. -Ьеи-Сб-, -Пе-Сб-, -Р1е-Агд- и -Ттр-Сб-; где С'б представляет собой цитруллин. В указанном дипептиде -ΝΗ- представляет собой аминогруппу в Х1, а СО представляет собой карбонильную группу в Х2.
Предпочтительно группа -Х1-Х2- в дипептиде, -ΝΗ-Х^Х^СО-, выбрана из
-Рбе-Ьук-, -Уа1-А1а-, -Уа1-Ьук-, -А1а-Ьук- и -Уа1-Сб-.
Наиболее предпочтительно группа -Х1-Х2- в дипептиде, -ΝΗ-Х^Х^СО-, представляет собой -Р1еЬук-, Уа1-Сй или -Уа1-А1а-.
Другие важные комбинации аминокислот в дипептиде включают -С1у-С1у-, -Рго-Рго- и -Уа1-С1ц-.
Можно применять другие комбинации аминокислот в дипептиде, включая комбинации, описанные в публикации ОиЬо\Ус1йк е1 а1., содержание которой включено в настоящий текст посредством ссылки.
В одном из вариантов реализации боковая цепь аминокислоты является химически защищенной, если это необходимо. Защитная группа боковой цепи может представлять собой группу, описанную ниже. Последовательности защищенных аминокислот способны расщепляться под действием ферментов. Например, последовательность аминокислот в дипептиде, содержащем остаток Ьук с Вос-защищенной боковой цепью, способен расщепляться под действием катепсина.
Защитные группы боковых цепей аминокислот хорошо известны в данной области техники и описаны в каталоге ШтаЫосНет (ШтаЫосНет С.'а1а1од). Дополнительные способы введения защитных групп представлены в Рго1есИуе дгоирк ίη Отдашс 8уиЛек1к, Отееие аиб \УШк.
Ниже приведены возможные защитные группы боковых цепей аминокислот, имеющих реакционноспособные функциональные группы в боковых цепях
Агд: Ζ, Μΐτ, Ток;
Аки: Тб, Хаи;
Акр: Βζ1, ί-Ви;
Сук: Аст, Βζ1, Βζ1-ОΜе, Βζ1-Μе, Тб;
О1и: Βζ1, ί-Ви;
О1и: Тб, Хаи;
Ηίκ: Вос, Эир. Ток, Тб;
Ьук: Вос, Ζ-Ο. Ртос, Ζ;
8ег: Βζ1, ТВОМ8. ТВОР8;
Т1г: Βζ;
Тгр: Вос;
Туг: Βζ1, Ζ, Ζ-Вг.
В одном из вариантов реализации -Х2- опосредованно связан с фрагментом лекарственного соединения. В указанном варианте реализации фрагмент-спейсер Ь2 присутствует.
В одном из вариантов реализации дипептид применяют в комбинации с саморасщепляющейся(имися) группой(ами) (фрагмент-спейсер). Саморасщепляющаяся(иеся) группа(ы) может быть соединена с -Х2-.
Если саморасщепляющаяся группа присутствует, то -Х2- связан непосредственно с саморасщепляющейся группой. В одном из вариантов реализации -Х2- связан с группой Υ саморасщепляющейся группы. Предпочтительно группа -Х2-СО- связана с Υ, где Υ представляет собой ΝΗ.
-Х1- связан непосредственно с А1. В одном из вариантов реализации -Х1- связан непосредственно с А1. Предпочтительно группа -ΝΗ-Х^ (Ν-конец Х1) связана с А1. А1 может содержать функциональную группу -СО- и, тем самым, образовывать амидную связь с -Х1-.
В одном из вариантов реализации Ь1 и Ь2, взятые совместно с -ОС(=О)-, содержат группу -Х1-Х2РАВС-. Группа РАВС связана непосредственно с фрагментом лекарственного соединения. В одном из примеров саморасщепляющаяся группа и дипептид, взятые вместе, образуют группу -РЬе-Еук-РАВС-, которая показана ниже
- 14 024118
где * означает место присоединения к фрагменту лекарственного соединения, а волнистая линия означает место присоединения к остальной части Ь1 или место присоединения к А1. Предпочтительно волнистая линия означает место присоединения к А1.
В качестве альтернативы саморасщепляющаяся группа и дипептид, взятые вместе, образуют группу -Уа1-Л1а-РЛВС-, которая показана ниже
где * и волнистая линия такие, как определено выше.
В другом варианте реализации Ь1 и Ь2, взятые совместно с -ОС(=О)-, представляют собой
где * означает место присоединения к фрагменту лекарственного соединения, волнистая линия означает место присоединения к Α1, Υ представляет собой ковалентную связь или функциональную группу, а Е представляет собой группу, которая способна к расщеплению и, тем самым, активировать саморасщепляющуюся группу.
Е выбирают таким образом, чтобы группа была способной к расщеплению, например, под действием света или фермента. Е может представлять собой -ΝΟ2 или глюкуроновую кислоту (например, βглюкуроновую кислоту). Первая из указанных групп может быть чувствительна к действию нитроредуктазы, а последняя - к действию β-глюкуронидазы.
Группа Υ может представлять собой ковалентную связь.
Группа Υ может представлять собой функциональную группу, выбранную из
-С(=О)-, -ΝΗ-, -Ο-, -С(=О)МИ-, -С(=О)О-, -МИС(=О)-, -ОС(=О)-, -ОС(=О)О-, -МИС(=О)О-, -ОС(=О)МИ-, -ΝΗ^=Θ)ΝΗ-, -ΝΗ^=Ο)ΝΗ, -С(=О)МИС(=О)-, 8О2 и -8-.
Группа Υ предпочтительно представляет собой -ΝΗ-, -СИ2-, -О- и -8-.
В некоторых вариантах реализации Ь1 и Ь2, взятые совместно с -ОС(=О)-, представляют собой
где * означает место присоединения в фрагменту лекарственного соединения, волнистая линия означает место присоединения к Α, Υ представляет собой ковалентную связь или функциональную группу, а Е представляет собой глюкуроновую кислоту (например, β-глюкуроновую кислоту), Υ предпочтительно представляет собой функциональную группу, выбранную из -ΝΗ-.
В некоторых вариантах реализации Ь1 и Ь2, взятые вместе, представляют собой
где * означает место присоединения к остатку Ь2 или фрагменту лекарственного соединения, волнистая линия означает место присоединения к Α1, Υ представляет собой ковалентную связь или функциональную группу, а Е представляет собой глюкуроновую кислоту (например, β-глюкуроновую кислоту), Υ предпочтительно представляет собой функциональную группу, выбранную из -ΝΗ-, -СН2-, -О- и -8-.
- 15 024118
В некоторых дополнительных вариантах реализации Υ представляет собой функциональную группу, предложенную выше, где функциональная группа связана с аминокислотой, а аминокислота связана с удлиняющим фрагментом А1. В некоторых вариантах реализации аминокислота представляет собой βаланин. В указанном варианте реализации аминокислоту можно рассматривать в качестве эквивалента удлиняющего фрагмента.
Специфичный фрагмент Ь1 и лиганд опосредованно связаны через удлиняющий фрагмент. Ь1 и А1 могут быть связаны посредством связывающей группы, выбранной из -С(=О)ЯН-, -С(=О)О-, -№НС(=О)-, -ОС(=О)-, -ОС(=О)О-, -ЫНС(=О)О-, -ОС(=О)МН- и -МНС(=О)МН-.
В одном из вариантов реализации группа А1 представляет собой
где * означает место присоединения к Ь1, волнистая линия означает место присоединения к лиганду, а η равен от 0 до 6. В одном из вариантов реализации η равен 5.
В одном из вариантов реализации группа А1 представляет собой
где * означает место присоединения к Ь1, волнистая линия означает место присоединения к лиганду, а η равен от 0 до 6. В одном из вариантов реализации η равен 5.
В одном из вариантов реализации группа А1 представляет собой
где * означает место присоединения к Ь1, волнистая линия означает место присоединения к лиганду, η равен 0 или 1, а т равен от 0 до 30. В предпочтительном варианте реализации η равен 1, а т равен от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, наиболее предпочтительно 4 или 8.
В одном из вариантов реализации группа А1 представляет собой
где * означает место присоединения к Ь1, волнистая линия означает место присоединения к лиганду, η равен 0 или 1, а т равен от 0 до 30. В предпочтительном варианте реализации η равен 1, а т равен от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, наиболее предпочтительно 4 или 8.
В одном из вариантов реализации группа А1 представляет собой
где * означает место присоединения к Ь1, волнистая линия означает место присоединения к лиганду, а η равен от 0 до 6. В одном из вариантов реализации η равен 5.
В одном из вариантов реализации группа А1 представляет собой
где * означает место присоединения к Ь1, волнистая линия означает место присоединения к лиганду, а η равен от 0 до 6. В одном из вариантов реализации η равен 5.
В одном из вариантов реализации группа А1 представляет собой
- 16 024118
где * означает место присоединения к Ь1, волнистая линия означает место присоединения к лиганду, η равен 0 или 1, ат равен от 0 до 30. В предпочтительном варианте реализации η равен 1, а т равен от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, наиболее предпочтительно 4 или 8.
В одном из вариантов реализации группа А1 представляет собой
где * означает место присоединения к Ь1, волнистая линия означает место присоединения к лиганду, η равен 0 или 1, а т равен от 0 до 30. В предпочтительном варианте реализации η равен 1, а т равен от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, наиболее предпочтительно 4 или 8.
В одном из вариантов реализации лиганд и А1 связаны посредством тиольного остатка лиганда и малеимидной группы в А1.
В одном из вариантов реализации лиганд и А1 связаны посредством
где * означает место присоединения к остатку А1, Ь1, Ь2 или Ό, а волнистая линия означает место присоединения к остатку лиганда. В этом варианте реализации атом δ, как правило, происходит из лиганда.
В каждом из вариантов реализации, предложенных выше, можно применять альтернативную функциональную группу вместо группы, полученной из малеимида, показанной ниже
где волнистая линия означает место присоединения к лиганду, как указано выше, а * означает связь с остатком группы А1 или с Ь1, Ь2 или Ό.
В одном из вариантов реализации группа, полученная из малеимида, замещена на группу
где волнистая линия означает место присоединения к лиганду, а * означает связь с остатком группы А1 или с Ь1, Ь2 или Ό.
В одном из вариантов реализации группа, полученная из малеимида, замещена на группу, которая, возможно взятая совместно с лигандом (например, связывающегося с клетками агента), выбрана из
-€(=0)ΝΗ-, -С(=О)О-, -МИС(=0)-, -ОС(=О)-, -0С(=0)-, -МИС(=0)0-, -0С(=0)МИ-, -ΝΗ^=0)ΝΗ-, -ΝΗ^=0)ΝΗ, -С(=0)МИС(=0)-, -δ-, -δ-δ-, -СИ2С(=0)-, -С(=0)СИ2-, =Ν-ΝΗ- и -ΝΗ-Ν=.
В одном из вариантов реализации группа, полученная из малеимида, замещена на группу, которая, возможно взятая совместно с лигандом, выбрана из
где волнистая линия означает место присоединения к лиганду или связь с остатком группы А1, а * озна- 17 024118 чает другое место присоединения к лиганду или связь с остатком группы А1.
Другие группы, подходящие для связывания Ь1 со связывающимся с клетками агентом, описаны в АО 2005/082023.
В одном из вариантов реализации удлиняющий фрагмент А1 присутствует, специфичный фрагмент Ь1 присутствует, а фрагмент-спейсер Ь2 отсутствует. Таким образом, Ь1 и фрагмент лекарственного соединения напрямую соединены посредством связи, и это эквивалентно тому, что в указанном варианте реализации Ь2 представляет собой связь.
Ь1 и Ό могут быть связаны при помощи связывающей группы, выбранной из -С(=Ο)NΗ-, -С(=О)О-, -ΝΗϋ(=Ο)-, -ОС(=О)-, -ОС(=О)О-, ^НС(=О)О-, -ОС(=О)1МН- и -ΝΗϋ^ΝΗ-.
В одном из вариантов реализации Ь1 и Ό предпочтительно соединены при помощи связывающей группы, выбранной из -С(=Ο)NΗ- и АНС(=О)-.
В одном из вариантов реализации Ь1 содержит дипептид, и один из концов дипептида связан с Ό. Как описано выше, аминокислоты, входящие в состав дипептида, могут представлять собой любую комбинацию природных аминокислот и неприродных аминокислот. В некоторых вариантах реализации дипептид содержит природные аминокислоты. Если линкер представляет собой линкер, лабильный к действию катепсина, то дипептид представляет собой участок расщепления, опосредованного катепсином. Дипептид, таким образом, является участком распознавания для катепсина.
В одном из вариантов реализации группа -Х1-Х2- в дипептиде, -ΝΗ-Х^Х^СО-, выбрана из -РЬе-Ьук-, -Уа1-А1а-, -Уа1-Ьук-, -А1а-Ьук-, -Уа1-СЬ-, -РЬе-СЬ-, -Ьеи-СЬ-, -Пе-СЬ-, -РЬе-Агд- и -Тгр-СЬ-;
где СП представляет собой цитруллин. В указанном дипептиде -ΝΗ- представляет собой аминогруппу в Х1, а СО представляет собой карбонильную группу в Х2.
Предпочтительно группа -Х1-Х2- в дипептиде, -ΝΗ-Х^Х^СО-, выбрана из -РЬе-Ьук-, -Уа1-А1а-, -Уа1-Ьук-, -А1а-Ьук- и -Уа1-СЬ-.
Наиболее предпочтительно группа -Х1-Х2- в дипептиде, -ΝΗ-Х^Х^СО-, представляет собой -РЬеЬук- или -Уа1-А1а-.
Другие важные комбинации аминокислот в дипептиде включают -С1у-С1у-, -Рго-Рго- и -Уа1-С1и-.
Можно применять другие комбинации аминокислот в дипептиде, включая описанные выше.
В одном из вариантов реализации Ь1-Э представляет собой
где -ΝΗ-Х^Х^СО представляет собой дипептид, -ΝΗ- является частью фрагмента лекарственного соединения, * означает место присоединения к остатку фрагмента лекарственного соединения, а волнистая линия означает место присоединения к остатку Ь1 или место присоединения к А1. Предпочтительно волнистая линия означает место присоединения к А1.
В одном из вариантов реализации дипептид представляет собой валин-аланин, а Ь1-Э представляет собой
где *, -ΝΗ- и волнистая линия такие, как определено выше.
В одном из вариантов реализации дипептид представляет собой фенилаланин-лизин, а Ь1-Э представляет собой
где *, -ΝΗ- и волнистая линия такие, как определено выше.
В одном из вариантов реализации дипептид представляет собой валин-цитруллин. В одном из вариантов реализации группы А1 -Ь1 представляют собой
где * означает место присоединения к Ь2 или Ό, волнистая линия означает место присоединения к лиганду, а п равен от 0 до 6. В одном из вариантов реализации п равен 5.
- 18 024118
В одном из вариантов реализации группы А1 -Ь1 представляют собой
где * означает место присоединения к Ό, волнистая линия означает место присоединения к лиганду, а η равен от 0 до 6. В одном из вариантов реализации η равен 5.
В одном из вариантов реализации группы А1 -Ь1 представляют собой
где * означает место присоединения к Ό, волнистая линия означает место присоединения к лиганду, η равен 0 или 1, а т равен от 0 до 30. В предпочтительном варианте реализации η равен 1, а т равен от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, наиболее предпочтительно 4 или 8.
В одном из вариантов реализации группы А1 -Ь1 представляют собой
где * означает место присоединения к Ό, волнистая линия означает место присоединения к лиганду, η равен 0 или 1, ат равен от 0 до 30. В предпочтительном варианте реализации η равен 1, а т равен от 0 до 10, от 1 до 7, предпочтительно от 3 до 7, наиболее предпочтительно 3 или 7.
В одном из вариантов реализации группы А1 -Ь1 представляют собой
где * означает место присоединения к Ь2 или Ό, волнистая линия означает место присоединения к лиганду, а η равен от 0 до 6. В одном из вариантов реализации η равен 5.
В одном из вариантов реализации группы А1 -Ь1 представляют собой
где * означает место присоединения к Ь2 или Ό, волнистая линия означает место присоединения к лиганду, а η равен от 0 до 6. В одном из вариантов реализации η равен 5.
В одном из вариантов реализации группы А1 -Ь1 представляют собой
где * означает место присоединения к Ь2 или Ό, волнистая линия означает место присоединения к лиганду, η равен 0 или 1, а т равен от 0 до 30. В предпочтительном варианте реализации η равен 1, а т равен от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, наиболее предпочтительно 4 или 8.
В одном из вариантов реализации группы А1 -Ь1 представляют собой
где * означает место присоединения к Ь2 или Ό, волнистая линия означает место присоединения к лиган- 19 024118 ду, η равен 0 или 1, а т равен от 0 до 30. В предпочтительном варианте реализации η равен 1, а т равен от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, наиболее предпочтительно 4 или 8.
В одном из вариантов реализации группы Ь-Л1-Ь1 представляют собой
где * означает место присоединения к Ό, δ представляет собой серосодержащую группу лиганда, волнистая линия означает место присоединения к остальной части лиганда, а η равен от 0 до 6. В одном из вариантов реализации η равен 5.
В одном из вариантов реализации группы Ь-Л1-Ь1 представляют собой
где * означает место присоединения к Ό, δ представляет собой серосодержащую группу лиганда, волнистая линия означает место присоединения к остальной части лиганда, а η равен от 0 до 6. В одном из вариантов реализации η равен 5.
В одном из вариантов реализации группы Ь-Л1-Ь1 представляют собой
где * означает место присоединения к Ό, δ представляет собой серосодержащую группу лиганда, волнистая линия означает место присоединения к остальной части лиганда, η равен 0 или 1, а т равен от 0 до 30. В предпочтительном варианте реализации η равен 1, а т равен от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, наиболее предпочтительно 4 или 8.
В одном из вариантов реализации группы Ь-Л1-Ь1 представляют собой
где * означает место присоединения к Ό, волнистая линия означает место присоединения к лиганду, η равен 0 или 1, а т равен от 0 до 30. В предпочтительном варианте реализации η равен 1, а т равен от 0 до 10, от 1 до 7, предпочтительно от 4 до 8, наиболее предпочтительно 4 или 8.
В одном из вариантов реализации группы Ь-Л1-Ь1 представляют собой
где * означает место присоединения к Ь2 или Ό, волнистая линия означает место присоединения к остатку лиганда, а η равен от 0 до 6. В одном из вариантов реализации η равен 5.
В одном из вариантов реализации группы Ь-Л1-Ь1 представляют собой
где * означает место присоединения к Ь2 или Ό, волнистая линия означает место присоединения к остатку лиганда, а η равен от 0 до 6. В одном из вариантов реализации η равен 5.
В одном из вариантов реализации группы Ь-Л1-Ь1 представляют собой
- 20 024118
где * означает место присоединения к Ь2 или Ό, волнистая линия означает место присоединения к остатку лиганда, η равен 0 или 1, а т равен от 0 до 30. В предпочтительном варианте реализации η равен 1, а т равен от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, наиболее предпочтительно 4 или 8.
В одном из вариантов реализации группы Ь-Л1-Ь1 представляют собой
где * означает место присоединения к Ь2 или Ό, волнистая линия означает место присоединения к остатку лиганда, η равен 0 или 1, а т равен от 0 до 30. В предпочтительном варианте реализации η равен 1, а т равен от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, наиболее предпочтительно 4 или 8.
В одном из вариантов реализации удлиняющий фрагмент представляет собой ацетамидное звено, имеющее формулу
где * означает место присоединения к остатку удлиняющего фрагмента, Ь1 или Ό, а волнистая линия означает место присоединения к лиганду.
В других вариантах реализации предложены лекарственные соединения, связанные с линкером, для конъюгации с лигандом. В одном из вариантов реализации лекарственные соединения, связанные с линкером, предназначены для соединения со связывающимся с клетками агентом.
В одном из вариантов реализации лекарственное соединение, связанное с линкером, имеет формулу
где * означает место присоединения к фрагменту лекарственного соединения, С1 представляет собой удлиняющий фрагмент (А1) для образования связи с лигандом, Ь1 представляет собой специфичный фрагмент, Ь2 (фрагмент-спейсер) представляет собой ковалентную связь или, взятый совместно с -ОС(=О)-, образует саморасщепляющуюся(иеся) группу(ы).
В другом варианте реализации лекарственное соединение, связанное с линкером, имеет формулу где * означает место присоединения к фрагменту лекарственного соединения, С1 представляет собой удлиняющий фрагмент (А1) для образования связи с лигандом, Ь1 представляет собой специфичный фрагмент, Ь2 (фрагмент-спейсер) представляет собой ковалентную связь или саморасщепляющуюся(иеся) группу(ы).
Ь1 и Ь2 являются такими, как определено выше. Выражение связывание с А1 можно рассматривать в данном случае как связывание с С1.
В одном из вариантов реализации, когда Ь1 содержит аминокислоту, боковая цепь этой аминокислоты может быть защищена. Можно использовать любые подходящие защитные группы. В одном из вариантов реализации защитные группы боковой цепи способны удаляться совместно с другими защитными группами, присутствующими в соединении. В других вариантах реализации защитные группы могут быть расположены ортогонально по отношению к другим защитным группам, присутствующим в молекуле.
Подходящие защитные группы боковых цепей аминокислот включают группы, описанные в каталоге ЫоуаЪюскет 2006/2007 (ЫоуаЪюскет Са!а1од 2006/2007). Защитные группы для линкера, лабильного к действию катепсина, также описаны в источнике ЭиЪозусЫк е! а1.
В конкретных вариантах реализации группа Ь1 включает остаток аминокислоты Ьук. Боковая цепь этой аминокислоты может быть защищена при помощи Вос- или А11ос-защитных групп. Вос-защитная группа является наиболее предпочтительной.
Функциональная группа С1 образует связывающую группу в результате взаимодействия с лигандом (например, со связывающимся с клетками агентом).
- 21 024118
В одном из вариантов реализации функциональная группа С1 представляет собой или содержит аминокислоту, карбоновую кислоту, гидроксигруппу, тиольную или малеимидную группу для взаимодействия с соответствующей группой лиганда. В предпочтительном варианте реализации С1 содержит малеимидную группу.
В одном из вариантов реализации группа С1 представляет собой алкилмалеимидную группу. Эта группа подходит для взаимодействия с тиольными группами, в частности с тиольными группами цистеина, присутствующими в связывающемся с клетками агенте, например присутствующими в антителе.
В одном из вариантов реализации группа С1 представляет собой
где * означает место присоединения к Ь1, Ь2 или Ό, а η равен от 0 до 6. В одном из вариантов реализации η равен 5.
В одном из вариантов реализации группа С1 представляет собой
где * означает место присоединения к Ь1, Ь2 или Ό, а η равен от 0 до 6. В одном из вариантов реализации η равен 5.
В одном из вариантов реализации группа С1 представляет собой
где * означает место присоединения к Ь1, η равен 0 или 1, а т равен от 0 до 30. В предпочтительном варианте реализации η равен 1, а т равен от 0 до 10, от 1 до 2, предпочтительно от 4 до 8 и наиболее предпочтительно 4 или 8.
В одном из вариантов реализации группа С1 представляет собой
где * означает место присоединения к Ь1, η равен 0 или 1, а т равен от 0 до 30. В предпочтительном варианте реализации η равен 1, а т равен от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8 и наиболее предпочтительно 4 или 8.
В одном из вариантов реализации группа С1 представляет собой
где * означает место присоединения к Ь1, Ь2 или Ό, а η равен от 0 до 6. В одном из вариантов реализации η равен 5.
В одном из вариантов реализации группа С1 представляет собой
где * означает место присоединения к Ь1, Ь2 или Ό, а η равен от 0 до 6. В одном из вариантов реализации η равен 5.
В одном из вариантов реализации группа С1 представляет собой
- 22 024118
где * означает место присоединения к Ь1, и равен 0 или 1, а т равен от 0 до 30. В предпочтительном варианте реализации п равен 1, а т равен от 0 до 10, от 1 до 2, предпочтительно от 4 до 8 и наиболее предпочтительно 4 или 8.
В одном из вариантов реализации группа О1 представляет собой
где * означает место присоединения к Ь1, и равен 0 или 1, а т равен от 0 до 30. В предпочтительном варианте реализации и равен 1, а т равен от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8 и наиболее предпочтительно 4 или 8.
В каждом из предложенных выше вариантов реализации можно использовать альтернативную функциональную группу вместо малеимидной группы, показанной ниже
где * означает связь с остатком группы О.
В одном из вариантов реализации группа, полученная из малеимида, замещена на группу
О
где * означает связь с остатком группы О.
В одном из вариантов реализации малеимидная группа замещена на группу, выбранную из
-С(=О)ОН, -ОН, -ΝΗ2, -8Η, -С(=О)СН2Х, где X представляет собой С1, Вг или I, -СНО, -ΝΗΝΗ2, -ОСН и -Ν3 (азид).
В одном из вариантов реализации Ь1 присутствует, а О1 представляет собой -ΝΗ2, -ИНМе, -СООН, -ОН или -8Η.
В одном из вариантов реализации, когда Ь1 присутствует, О1 представляет собой -ΝΗ2 или -NΗМе. Каждая из групп может представлять собой Ν-конец последовательности аминокислот в Ь1.
В одном из вариантов реализации Ь1 присутствует, О1 представляет собой -ΝΗ2, а Ь1 представляет собой последовательность аминокислот -Х1-Х2-, как определено выше.
В одном из вариантов реализации Ь1 присутствует, а О1 представляет собой СООН. Эта группа может представлять собой С-конец последовательности аминокислот в Ь1.
В одном из вариантов реализации Ь1 присутствует, а О1 представляет собой ОН.
В одном из вариантов реализации Ь1 присутствует, а О1 представляет собой 8Η.
Группа О1 способна превращаться из одной функциональной группы в другую. В одном из вариантов реализации Ь1 присутствует, а О1 представляет собой -ΝΗ2. Эта группа способна превращаться в другую группу О1, содержащую малеимидную группу. Например, группу -ΝΗ2 можно подвергать взаимодействию с кислотами или активированной кислотой (например, с Ν-сукцинимидными формами кислот) тех групп О1, содержащих малеимидную группу, показанную выше.
Группу О1, таким образом, можно превращать в функциональную группу, которая более подходит для взаимодействия с лигандом.
Как отмечалось выше, в одном из вариантов реализации Ь1 присутствует, а О1 представляет собой -ΝΗ2, -NΗМе, -СООН, -ОН или -8Η. В дополнительном варианте реализации эти группы предложены в химически защищенной форме. Химически защищенная форма, таким образом, является предшественником линкера, который содержит функциональную группу.
В одном из вариантов реализации О1 представляет собой -ΝΗ2 в химически защищенной форме. Эта группа может быть защищена карбаматной защитной группой. Карбаматная защитная группа может
- 23 024118 быть выбрана из группы, состоящей из А11ос, Ртос, Вое, Тгос, Теос, СЬ/ и ΡΝΖ.
Предпочтительно, если С1 представляет собой -ΝΗ2, то она защищена А11ос- или Ртос-группой.
В одном из вариантов реализации, если С1 представляет собой -ΝΗ2, то она защищена Ртосгруппой.
В одном из вариантов реализации защитная группа является такой же, как и карбаматная защитная группа кэппирующей группы.
В одном из вариантов реализации защитная группа отличается от карбаматной защитной группы кэппирующей группы. В этом варианте реализации предпочтительно, чтобы защитная группа была способна удаляться в условиях, при которых не происходит удаление карбаматной защитной группы кэппирующей группы.
Химическую защитную группу можно удалять для получения функциональной группы, связывающейся с лигандом. Эта функциональная группа затем необязательно может быть превращена в другую функциональную группу, описанную выше.
В одном из вариантов реализации активная группа представляет собой амин. Этот амин предпочтительно представляет собой Ν-терминальный амин, входящий в состав пептида, а также может представлять собой Ν-терминальный амин, входящий в состав предпочтительных дипептидов согласно настоящему изобретению.
Активную группу можно подвергать взаимодействию с образованием функциональной группы, предназначенной для образования связи с лигандом.
В других вариантах реализации линкер представляет собой предшественник линкера, содержащего активную группу. В этом варианте реализации линкер содержит активную группу, которая защищена с помощью защитной группы. Защитную группу можно удалить для получения линкера, содержащего активную группу.
Если активная группа представляет собой амин, то защитная группа может представлять собой защитную группу аминогруппы, например, описанную в источнике Сгссп ;·ιηύ \Уи18.
Защитная группа предпочтительно расположена ортогонально по отношению к другим защитным группам, присутствующим в линкере.
В одном из вариантов реализации защитная группа расположена ортогонально к кэппирующей группе. Таким образом, защитная группа активной группы способна удаляться с сохранением кэппирующей группы. В других вариантах реализации защитная группа и кэппирующая группа способна удаляться в тех же условиях, что и, например, условия для удаления кэппирующей группы.
В одном из вариантов реализации линкер представляет собой
где * означает место присоединения к фрагменту лекарственного соединения, а волнистая линия означает место присоединения к остатку линкера, если он присутствует, или место присоединения к С1. Предпочтительно волнистая линия означает место присоединения к С1.
В одном из вариантов реализации линкер представляет собой
где * и волнистая линия являются такими, как определено выше.
Другие функциональные группы, подходящие для применения для образования связи между Ь1 и связывающимся с клетками агентом, описаны в \УО 2005/082023.
Лиганд.
Лиганд может быть любым и включает белок, полипептид, пептид и непептидный агент, который специфично связывается с молекулой-мишенью. В некоторых вариантах реализации лиганд может представлять собой белок, полипептид или пептид. В некоторых вариантах реализации лиганд может представлять собой циклический полипептид. Эти лиганды могут включать антитела или фрагмент антитела, который содержит по меньшей мере один участок связывания с молекулой-мишенью, лимфокины, гормоны, факторы роста или любые другие связывающиеся с клетками молекулы или вещества, которые могут специфично связываться с мишенью.
Примеры лигандов включают агенты, описанных для применения в документе \УО 2007/085930,
- 24 024118 содержание которого включено в настоящий текст посредством ссылки.
В некоторых вариантах реализации лиганд представляет собой связывающийся с клетками агент, который связывается с внеклеточной мишенью на поверхности клетки. Указанный связывающийся с клетками агент может представлять собой белок, полипептид, пептид или непептидный агент. В некоторых вариантах реализации связывающийся с клетками агент может представлять собой белок, полипептид или пептид. В некоторых вариантах реализации связывающийся с клетками агент может представлять собой циклический полипептид. Связывающийся с клетками агент также может представлять собой антитело или антигенсвязывающий фрагмент антитела. Таким образом, в одном из вариантов реализации в настоящем изобретении предложен конъюгат антитело-лекарственное средство (АЭС).
В одном из вариантов реализации антитело представляет собой моноклональное антитело, химерное антитело, гуманизированное антитело, полностью человеческое антитело или одноцепочечное антитело. Один из вариантов реализации антитела представляет собой фрагмент одного из представленных антител, имеющих биологическую активность. Примеры указанных фрагментов включают фрагменты РаЬ, РаЬ', Р(аЬ')2 и Ρν.
Антитело может представлять собой диатело, доменное антитело (ΌΛΒ) или одноцепочечное антитело.
В одном из вариантов реализации антитело представляет собой моноклональное антитело.
Антитела для применения в настоящем изобретении включают антитела, описанные в документе \УО 2005/082023, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки. Особенно предпочтительными являются антитела к опухолеассоциированным антигенам. Примеры указанных антигенов, известных в данной области техники, включают, но не ограничиваются ими, опухолеассоциированные антигены, представленные в \УО 2005/082023. См., например, стр. 41-55.
В некоторых вариантах реализации указанные конъюгаты предназначены для направленного действия на опухолевые клетки через антигены, расположенные на поверхности клетки. Антигены могут представлять собой антигены, расположенные на поверхности клетки, которые сверхэкспрессируются или экспрессируются с отклонениями по времени или атипичными клетками. Предпочтительно антигенмишень экспрессируется только пролиферирующими клетками (предпочтительно опухолевыми клетками); тем не менее, это явление редко наблюдают на практике. В результате, антигены-мишени, как правило, выбирают на основании дифференциальной экспрессии между пролиферирующими и здоровыми тканями.
Были разработаны антитела для направленного действия на определенные опухолеассоциированные антигены, включая С’прЮ. СЭ19. СЭ20. СЭ22. СЭ30. СЭ33. гликопротеин ΝΜΒ, СапАд, Иег2 (ЕгЬВ2/№и), СЭ56 (ЫСАМ), СЭ70. СЭ79. СЭ138. Р8СА, ПСМА (простатспецифический мембранный антиген) (Р8МА), ВСМА, Е-селектин, ЕрЬВ2, меланотрансферин (Ме1апо1гап8Гегш), Мис16 и ТМЕРР2.
Лиганд связан с линкером. В одном из вариантов реализации лиганд связан с А, входящим в состав линкера, если А присутствует.
В одном из вариантов реализации лиганд связан с линкером посредством простой тиоэфирной связи.
В одном из вариантов реализации лиганд соединен с линкером посредством дисульфидной связи.
В одном из вариантов реализации лиганд соединен с линкером посредством амидной связи.
В одном из вариантов реализации лиганд соединен с линкером посредством сложноэфирной связи.
В одном из вариантов реализации связывание лиганда и линкера осуществляется посредством связывания тиольной группы остатка цистеина в лиганде и малеимидной группы в линкере.
Остатки цистеина в лиганде могут быть доступны для взаимодействия с функциональными группами линкера для образования связи. В других вариантах реализации, например, когда лиганд представляет собой антитело, тиольные группы антитела могут участвовать в образовании межцепочечных дисульфидных связей. Эти межцепочечные связи можно превращать в свободные тиольные группы, например, путем обработки антитела ЭТТ до взаимодействия с функциональной группой линкера.
В некоторых вариантах реализации остаток цистеина вводят в тяжелую или легкую цепь антитела. Положения, в которые вводят цистеин в результате реакции замещения в тяжелых или легких цепях антитела, включают положения, описанные в публикации заявки И8 2007/0092940 и публикации международной заявки \УО 2008070593, содержание которых включено в настоящее описание.
Способы лечения.
Конъюгаты согласно настоящему изобретению можно применять в способе терапии. Также предложен способ лечения, включающий введение субъекту, нуждающемуся в лечении, терапевтически эффективного количество конъюгата формулы I. Термин терапевтически эффективное количество означает количество, достаточное для достижения благоприятного действия для пациента. Указанное благоприятное действие может представлять собой, по меньшей мере, облегчение по меньшей мере одного симптома. Фактическое количество вводимого конъюгата, а также скорость и длительность введения будут зависеть от характера и степени тяжести состояния, подвергаемого лечению. Назначения для лечения, например выбор дозировки, входят в зону ответственности врачей общей практики и других лечащих врачей.
В некоторых вариантах реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от
- 25 024118 примерно 0,01 до примерно 10 мг/кг на дозу. В некоторых вариантах реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,01 до примерно 5 мг/кг на дозу. В некоторых вариантах реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,05 до примерно 5 мг/кг на дозу. В некоторых вариантах реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,1 до примерно 5 мг/кг на дозу. В некоторых вариантах реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,1 до примерно 4 мг/кг на дозу. В некоторых вариантах реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,05 до примерно 3 мг/кг на дозу. В некоторых вариантах реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,1 до примерно 3 мг/кг на дозу. В некоторых вариантах реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,1 до примерно 2 мг/кг на дозу. В некоторых вариантах реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,01 до примерно 1 мг/кг на дозу.
Конъюгат можно вводить индивидуально или в комбинации с другими способами лечения, например, одновременно или последовательно, в зависимости от состояния, подвергаемого лечению. Примеры способов лечения и терапий включают, но не ограничиваются ими, химиотерапию (введение активных агентов, включая, например, лекарственные средства, оперативное вмешательство и лучевую терапию).
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению и для применения согласно настоящему изобретению могут включать в дополнение к активному ингредиенту, т.е. к конъюгату формулы I, фармацевтически приемлемый наполнитель, носитель, буфер, стабилизатор или другие вещества, хорошо известные специалистам в данной области техники. Указанные вещества должны быть нетоксичными и не должны снижать эффективность активного ингредиента. Конкретная природа носителя или другого вещества будет зависеть от способа введения, который может быть пероральным или представлять собой инъекцию, например кожную, подкожную или внутривенную.
Фармацевтические композиции для перорального введения могут находиться в форме таблеток, капсул, порошка или в жидкой форме. Таблетка может содержать твердый носитель или адъювант. Жидкие фармацевтические композиции, как правило, содержат жидкий носитель, такой как вода, минеральные, животные или растительные масла, минеральные или синтетические масла. В такую композицию может быть включен физиологический солевой раствор, декстрозы или раствор другого сахарида, или гликоли, такие как этиленгликоль, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль. Капсула может включать твердый носитель, такой как желатин.
В случае внутривенной, кожной или подкожной инъекции или инъекции в очаг поражения активный ингредиент должен находиться в форме водного раствора, приемлемого для парентерального введения, который является апирогенным и имеет подходящие рН, изотоничность и стабильность. Специалисты в данной области техники могут приготовить подходящие растворы с применением, например, изотонических разбавителей, таких как хлорид натрия для инъекций, раствор Рингера для инъекций, лактированный раствор Рингера для инъекций. Консерванты, стабилизаторы, буферы, антиоксиданты и/или другие добавки можно вводить в состав при необходимости.
Другие формы.
Если не указано иное, предложенные выше заместители включают хорошо известные ионные формы, соли, сольваты и защищенные формы предложенных заместителей. Например, ссылка на карбоновую кислоту (-СООН) также включает анионную (карбоксилатную) форму (-СОО-), соль или сольват кислоты, а также традиционные защищенные формы. Аналогично, ссылка на аминогруппу включает протонированную форму (-Ν'ΗΚ,'Κ.2). соль или сольват аминогруппы, например гидрохлоридную соль, а также традиционные защищенные формы аминогруппы. Аналогично, ссылка на гидроксильную группу также включает анионную форму (-О-), соль или сольват указанной группы, а также традиционные защищенные формы.
Соли.
Могут быть удобными или желательными получение, очистка и/или обращение с соответствующей солью активного соединения (конъюгата), например фармацевтически приемлемой солью. Примеры фармацевтически приемлемых солей описаны в публикации Вегде, с1 а1., ί. РЬатт. δοΐ, 66, 1-19 (1977).
Например, если соединение является анионным или содержит функциональную группу, которая может быть анионной (например, -СООН может представлять собой -СОО-), в данном случае возможно образование соли с подходящим катионом. Примеры подходящих неорганических катионов включают, но не ограничиваются ими, ионы щелочных металлов, такие как №ί и К', катионы щелочно-земельных металлов, такие как Са2+ и Мд2', и другие катионы, такие как А13'. Примеры подходящих органических катионов включают, но не ограничиваются ими, ион аммония (ΝΗ4+) и замещенные ионы аммония (например, ΝΗ3Κ+, ΝΗ2Κ2 +, ΝΗΚ3+, ΝΚ4+). Примерами некоторых подходящих замещенных ионов аммония являются ионы, полученные из этиламина, диэтиламина, дициклогексиламина, триэтиламина, бутиламина, этилендиамина, этаноламина, диэтаноламина, пиперазина, бензиламина, фенилбензиламина, холина, меглумина и трометамина, а также из аминокислот, таких как лизин и аргинин. Примером распространенного четвертичного иона аммония является Ы(СН3)4 +.
Если конъюгат является катионным или содержит функциональную группу, которая может быть
- 26 024118 катионной (например, -ΝΉ2 может представлять собой -ΝΉ3+), в данном случае возможно образование соли с подходящим анионом. Примеры подходящих неорганических анионов включают, но не ограничиваются ими, анионы, полученные из следующих неорганических кислот: хлороводородной, бромоводородной, йодоводородной, серной, сернистой, азотной, азотистой, фосфорной и фосфористой.
Примеры подходящих органических анионов включают, но не ограничиваются ими, анионы, полученные из следующих органических кислот: 2-ацетилоксибензойной, уксусной, аскорбиновой, аспарагиновой, бензойной, камфорсульфокислоты, коричной, лимонной, этилендиаминтетрауксусной, этандисульфокислоты, этансульфокислоты, фумаровой, глюкогептоновой, глюконовой, глутаминовой, гликолевой, гидроксималеиновой, гидроксинафталинкарбоновой, изетионовой, молочной, лактобионовой, лауриновой, малеиновой, яблочной, метансульфокислоты, муциновой, олеиновой, щавелевой, пальмитиновой, памовой, пантотеновой, фенилуксусной, фенилсульфокислоты, пропионовой, виноградной, салициловой, стеариновой, янтарной, сульфаниловой, винной, толуолсульфокислоты и валериановой. Примеры подходящих полимерных органических анионов включают, но не ограничиваются ими, анионы, полученные из следующих полимерных кислот: дубильной кислоты, карбоксиметилцеллюлозы.
Сольваты.
Могут быть удобными или желательными получение, очистка и/или обращение с соответствующим сольватом конъюгата(ов). Термин сольват используют в настоящем описании в общепринятом значении для обозначения комплекса растворенного вещества (например, активного конъюгата, соли активного конъюгата) и растворителя. Если растворитель представляет собой воду, то сольват обычно называют гидратом, например моногидратом, дигидратом, тригидратом и т.д.
Карбиноламины.
Изобретение включает конъюгат, в котором происходит присоединение растворителя по иминной связи фрагмента ПБД, что показано ниже для мономера ПБД, где растворитель представляет собой воду или спирт (КАОН, где КА представляет собой С1-4 алкил)
Эти формы можно назвать карбиноламинной и простой эфирной карбиноламинной формой ПБД. Положение равновесия в этих реакциях зависит от формы, в которой находятся соединения, а также от природы самого фрагмента.
Указанные конкретные соединения можно выделить в твердом виде, например, путем лиофилизации.
Изомеры.
Конкретные соединения могут существовать в одной или более конкретных геометрических, оптических, энантиомерных, диастереомерных, эпимерных, атропоизмерных, стереоизомерных, таутомерных, конформационных или аномерных формах, включая, но не ограничиваясь ими, цис- и транс-формы; Е- и Ζ-формы; с-, I- и г-формы; эндо- и экзоформы; К-, 8- и мезоформы; И- и Ь-формы; б- и 1-формы; (+)и (-)-формы; кето-, -енольные и -енолятные формы; син- и антиформы; синклинальные и антиклинальные формы; α- и β-формы; аксиальные и экваториальные формы; конформации ванна, кресло, твист, конверт и полукресло; а также их комбинации, которые далее в целом называют изомерами (или изомерными формами).
Необходимо отметить, что за исключением описанного ниже для таутомерных форм из термина изомеры, используемого в настоящем описании, специально исключены структурные (или конституционные) изомеры (т.е. изомеры, имеющие различные связи между атомами, а не только различное положение атомов в пространстве). Например, ссылку на метоксигруппу -ОСН3 не следует рассматривать как ссылку на ее структурный изомер - гидроксиметильную группу -СН2ОН. Аналогично, ссылку на ортохлорфенил не следует рассматривать как ссылку на его структурный изомер метахлорфенил. Тем не менее, ссылка на класс структур вполне может включать структурные изомерные формы, входящие в состав этого класса (например, С1-7 алкил включает н-пропил и изопропил; бутил включает н-, изо-, втори трет-бутил; метоксифенил включает орто-, мета- и параметоксифенил).
Указанное выше исключение не относится к таутомерным формам, например, кето-, -енольным и -енолятным формам, как, например, в случае следующих таутомерных пар: кето/енол (показано ниже), имин/енамин, амид/иминоспирт, амидин/амидин, нитрозо/оксим, тиокетон/ентиол, Ν-нитрозо/гидроксиазо и нитро/аци-нитро.
\ ,он н* Λ
с=с с=с
I 4 / н* /
кето енол енолят
- 27 024118
Следует отметить, что в термин изомер специально включены соединения с замещением одного или более атомов изотопами. Например, Н может представлять собой любой изотоп, включая 'Н. 2Н (Ό) 3 12 13 14 и 3Н (Т); С может представлять собой любой изотоп, включая 12С, 13С и 14С; О может представлять собой любой изотоп, включая 16О и 18О; и т.п.
Если не указано иное, ссылка на конкретное соединение или конъюгат включает все указанные изомерные формы, включая (полностью или частично) рацемические и другие смеси. Способы получения (например, асимметрический синтез) и разделения (например, фракционная кристаллизация и хроматографические методы) указанных изомерных форм известны из уровня техники или легкодоступны за счет известной адаптации способов, описанных в настоящем тексте, или известных способов.
Общие способы синтеза
Синтез димеров ПБД широко обсуждается в следующих источниках, содержание которых включено в настоящее описание посредством ссылки:
a) \ΥΟ 00/12508 (стр. 14-30);
b) \ΥΟ 2005/023814 (стр.3-10);
c) \ΥΟ 2004/043963 (стр.28-29) и ά) \ΥΟ 2005/085251 (стр.30-39).
Способ синтеза.
Конъюгаты согласно настоящему изобретению, где К10 и К11 образуют двойную азот-углеродную связь между атомами азота и углерода, к которым они присоединены, можно синтезировать из соединения формулы 2
К9, К6', где К2, К6, К7
К7, К9, К12, X, X' и К являются такими, как определено для соединений формулы II, Рго!17 представляет собой защитную группу атома азота для проведения синтеза, а ΡγθΙο представляет собой защищенную кислородсодержащую группу для проведения синтеза или оксогруппу, путем снятия защиты иминной связи при помощи традиционных методов.
Получаемое соединение может находиться в карбиноламинной форме или простой эфирной карбиноламинной форме в зависимости от используемых растворителей. Например, если ΡγοΙν представляет собой А11ос, а ΡγοΙο представляет собой защитную группу атома кислорода для проведения синтеза, то снятие защиты проводят с применением палладия для удаления Ш0-защитной группы и последующим удалением защитной группы атома кислорода для проведения синтеза. Если Рго!7 представляет собой Тгос, а ΡγοΙο представляет собой защитную группу атома кислорода для проведения синтеза, то снятие защиты проводят с применением пары металлов С4/РЬ с получением соединения формулы (I). Если Рго!7 представляет собой δΕΜ или аналогичную группу, а ΡγοΙο представляет собой оксогруппу, то оксогруппу можно удалить путем восстановления, которое приводит к образованию промежуточного защищенного карбиноламина, который затем можно обработать для удаления δΕΜ-защитной группы, а затем удалить воду. Восстановление соединения формулы 2 можно проводить, например, при помощи тетраборгидрида лития, в то же время подходящим способом удаления δΕΜ-защитной группы является обработка силикагелем.
Соединения формулы 2 можно синтезировать из соединения формулы 3 а
где К2, К6, К7, К9, К6', К7', К9', X, X' и К являются такими, как определено для соединений формулы 2, путем сочетания с металлорганическим производным, содержащим К12, например с борорганическим производным. Борорганическое производное может представлять собой боронат или бороновую кислоту.
Соединения формулы 2 можно синтезировать из соединения формулы 3Ь
- 28 024118 где К12, К6, К7, К9, К6', К7', К9', X, X' и К являются такими, как определено для соединений формулы 2, путем сочетания с металлорганическим производным, содержащим К2, например с борорганическим производным. Борорганическое производное может представлять собой боронат или бороновую кислоту.
Соединения формул 3 а и 3Ь можно синтезировать из соединения формулы 4
где К2, К6, К7, К9, К6', К7', К9', X, X' и К являются такими, как определено для соединений формулы 2, путем сочетания примерно с одним эквивалентом (например, от 0,9 или 1 до 1,1 или 1,2) металлорганического производного, например борорганического производного, содержащего К2 или К12.
Реакции сочетания, описанные выше, как правило, проводят в присутствии палладиевого катализатора, например Рб(РРЬ3)4, Рб(0С0СИ3)2, РбС12 или Рб2(бЬа)3. Реакцию сочетания можно проводить в обычных условиях, но также можно проводить при микроволновом облучении.
Две стадии реакции сочетания, как правило, проводят последовательно. Их можно проводить с проведением очистки между двумя стадиями или без нее. Если очистку не проводят, то две стадии можно проводить в одном реакционном сосуде. Проведение очистки обычно требуется после второй стадии реакции сочетания. Очистку соединения от нежелательных побочных продуктов можно проводить путем колоночной хроматографии или ион-обменного разделения.
Синтез соединений формулы 4, где РгоС представляет собой оксогруппу, а РгоР представляет собой δΕΜ, подробно описан в документе \У0 00/12508, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки. В частности, в настоящем описании приведена ссылка на схему 7 на стр. 24, где предложенное выше соединение обозначено как промежуточное вещество Р. Этот способ синтеза также описан в \У0 2004/043963.
Синтез соединений формулы 4, где Рго1° представляет собой защищенную кислородсодержащую группу, описан в документе \У0 2005/085251, в котором описан синтез, включенный в настоящее описание посредством ссылки.
Соединения формулы I, где К10 и К10' представляют собой Н, а К11 и К11' представляют собой δ0ζΜ, можно синтезировать из соединений формулы I, где К10 и К11 образуют двойную азот-углеродную связь между атомами азота и углерода, к которым они присоединены, путем присоединения соответствующей бисульфитной соли или сульфинатной соли и последующей стадии соответствующей очистки. Дополнительные способы описаны в документе ОВ 2053894, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки.
Защитные группы атома азота для проведения синтеза.
Защитные группы атома азот для проведения синтеза хорошо известны в данной области техники. В настоящем изобретении особое внимание уделяют карбаматным защитным группам атома азота и гемиаминальным защитным группам атома азота.
Карбаматные защитные группы атома азота имеют следующую структуру:
р·1— О^О где К'10 представляет собой К, определенный выше. Большое число подходящих групп описано в источнике Огсспс, Т.^. апб \УШ5, О.М., РгоЮсИус Отоирк ίη 0тдашс δνηΐΗοδίδ, 3гб Ε6ίίίοη, ίοΐιη \УПсу & δοηκ, Πίο., 1999, стр. 503-549, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки.
Особенно предпочтительные защитные группы включают Тгос, Ттос, Ртοс, В0С, Όο^ Ηο^ ТсВОС, 1-Абοс и 2-Α6ο^
Другими возможными группами являются нитробензилоксикарбонил (например, 4-нитробензилоксикарбонил) и 2-(фенилсульфонил)этоксикарбонил.
Защитные группы, которые можно удалить с помощью палладиевого катализа, например АШс, не являются предпочтительными.
Гемиаминальные защитные группы атома азота имеют следующую структуру:
где К'10 представляет собой К, определенный выше. Большое число подходящих групп описано в качестве защитных групп амидной группы в источнике Огсспс, Т.^. апб \УШ5, О.М., Р^οίесί^νе Огоирк ίη 0г- 29 024118 дате ЗуШЪе515, 3гб Ебйюп, ίο1ιπ \УПеу & Зопк, 1пс., 1999, стр. 633-647, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки. Группы, описанные в настоящем тексте, можно применять для соединений для применения согласно настоящему изобретению. Указанные группы включают, но не ограничиваются ими, ЗЕМ, МОМ, МТМ, МЕМ, ВОМ, нитро- или метоксизамещенный ВОМ и С13ССН2ОСН2-.
Защищенные группы атома кислорода для проведения синтеза.
Защищенные группы атома кислорода для проведения синтеза хорошо известны в данной области техники. Большое число подходящих защитных групп атома кислорода описано в источнике Сгеепе, Т.У. апб ХУиК С.М., Рго1ес1|уе Сгоирк ίη Огдатс Зуп1йе515, 3гб Ебйюп, ίοΐιη \УНеу & Зопк, 1пс., 1999, стр. 23-200, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки.
Особенно важные классы таких групп включают простые силильные эфиры, простые метиловые эфиры, простые алкильные эфиры, простые бензиловые эфиры, сложные эфиры, ацетаты, бензоаты, карбонаты и сульфонаты.
Предпочтительные защитные группы атома кислорода включают ацетаты, ТВЗ и ТГП (ТНР).
Дополнительные предпочтительные варианты реализации.
Предложенные ниже предпочтительные варианты реализации можно применять ко всем аспектам изобретения, описанным выше, или они могут относиться к единственному аспекту. Предпочтительные варианты реализации можно объединять в любой комбинации.
В некоторых вариантах реализации К6, К7, К9, К10, К11 и Υ' предпочтительно являются такими же, как К6, К7, К9, К10, К11 и Υ соответственно.
Линкер в димере.
Υ и Υ' предпочтительно представляют собой О.
К предпочтительно представляет собой С3-7 алкиленовую группу, не содержащую заместителей. Более предпочтительно К представляет собой С3, С5 или С7 алкилен.
К6-К9.
К9 предпочтительно представляет собой Н.
К6 предпочтительно выбран из Н, ОН, ОК, ЗН, ИН2, нитрогруппы и галогена, более предпочтительно из Н или галогена и наиболее предпочтительно представляет собой Н.
К7 предпочтительно выбран из Н, ОН, ОК, ЗН, ЗК, ИН2, ИНК, ΝΡΡ' и галогена и более предпочтительно независимо выбран из Н, ОН и ОК, где К предпочтительно выбран из возможно замещенных С1-7 алкильной, С3-10 гетероциклильной и С5-10 арильной групп. Более предпочтительно К может представлять собой С1-4 алкильную группу, которая может быть замещенной или незамещенной. Заместитель, представляющий интерес, представляет собой С5-6 арильную группу (например, фенил). Особенно предпочтительными заместителями в положении 7 являются ОМе и ОСН2Рй.
Указанные предпочтительные варианты реализации относятся к К9, К6 и К7 соответственно.
К 2.
А в К2 может представлять собой фенильную группу или С3-7 гетероарильную группу, например фуранил, тиофенил и пиридил. В некоторых вариантах реализации А предпочтительно представляет собой фенил. В других вариантах реализации А предпочтительно представляет собой тиофенил, например тиофен-2-ил и тиофен-3-ил.
X представляет собой группу, выбранную из списка, включающего -О-, -З-, -С(О)О-, -С(О)-, -ИН(С=О)- и -И(КИ)-, где КИ выбран из группы, включающей Н и С1-4 алкил. X предпочтительно может представлять собой -О-, -З-, -С(О)О-, -ИН(С=О)- или -ИН- и более предпочтительно может представлять собой -О-, -З- или -ΝΉ-, наиболее предпочтительно представляет собой -ИН-.
Ц2-Х может быть присоединен к любому доступному атому кольца С5-7 арильной группы, но предпочтительно присоединен к атому кольца, который не расположен по соседству со связью с остатком соединения, т.е. предпочтительно находится в β- или γ-положении относительно связи с остатком соединения. Таким образом, если С5-7 арильная группа (А) представляет собой фенил, то заместитель (Ц2-Х) предпочтительно находится в мета- или пара-положениях и более предпочтительно находится в параположении.
В некоторых вариантах реализации р1 представляет собой простую связь. В этих вариантах реализации р2 выбран из простой связи и -О-(СН2)п-, где п равен от 1 до 3. В некоторых из указанных вариантов реализации р2 представляет собой простую связь. В других вариантах реализации р2 представляет собой -О-(СН2)п-. В указанных вариантах реализации Ζ может представлять собой О или З, а п может быть равен 1 или п может быть равен 2. В других из указанных вариантов реализации Ζ может представлять собой простую связь, а п может быть равен 1.
В других вариантах реализации р1 представляет собой -СН=СН-.
В некоторых вариантах реализации К2 может представлять собой -А-СН2-Х и -А-Х. В этих вариантах реализации X может представлять собой -О-, -З-, -С(О)О-, -С(О)- и -ΝΉ-. В особенно предпочтительных вариантах реализации X может представлять собой -ΝΉ-.
К 12.
К12 может представлять собой С5-7 арильную группу. С5-7 арильная группа может представлять со- 30 024118 бой фенильную группу или С5-7 гетероарильную группу, например фуранил, тиофенил и пиридил. В некоторых вариантах реализации К12 предпочтительно представляет собой фенил. В других вариантах реализации К12 предпочтительно представляет собой тиофенил, например тиофен-2-ил и тиофен-3-ил.
К12 может представлять собой С9-10 арил, например хинолинильную или изохинолинильную группу. Хинолинильная или изохинолинильная группа может быть связана с ядром ПБД через любой доступный атом кольца. Например, хинолинил может представлять собой хинолин-2-ил, хинолин-3-ил, хинолин-4ил, хинолин-5-ил, хинолин-6-ил, хинолин-7-ил и хинолин-8-ил. Среди предложенных групп хинолин-3ил и хинолин-6-ил могут быть предпочтительными. Изохинолинил может представлять собой изохинолин-1-ил, изохинолин-3-ил, изохинолин-4-ил, изохинолин-5-ил, изохинолин-6-ил, изохинолин-7-ил и изохинолин-8-ил. Среди предложенных групп изохинолин-3-ил и изохинолин-6-ил могут быть предпочтительными.
К12 может иметь любое число заместителей. Предпочтительно он содержит от 1 до 3 заместителей, при этом К12 с 1 и 2 заместителями являются более предпочтительными, а К12, замещенные одним заместителем, являются наиболее предпочтительными. Заместители могут находиться в любом положении.
Если К12 представляет собой С5-7 арильную группу, то единственный заместитель предпочтительно расположен у атома кольца, который не расположен по соседству со связью с остатком соединения, т.е. предпочтительно находится в β- или γ-положении относительно связи с остатком соединения. Таким образом, если С5-7 арильная группа представляет собой фенил, то заместитель предпочтительно находится в мета- или пара-положениях, более предпочтительно в пара-положении.
Если К12 представляет собой С8-10 арильную группу, например хинолинил или изохинолинил, он может иметь любое число заместителей в любом положении хинолинового или изохинолинового колец. В некоторых вариантах реализации он содержит один, два или три заместителя, которые могут быть расположены в проксимальном или дистальном кольце или на обоих кольцах (если К12 содержит более одного заместителя).
Заместители в К12.
Если заместитель в К12 представляет собой галоген, то предпочтительно он представляет собой Р или С1, более предпочтительно С1.
Если заместитель в К12 представляет собой простую эфирную группу, то в некоторых вариантах реализации он может представлять собой алкоксигруппу, например С1-7 алкоксигруппу (например, метокси, этокси), или в некоторых вариантах реализации он может представлять собой С5-7 арилоксигруппу (например, фенокси, пиридилокси, фуранилокси). Алкоксигруппа может быть сама дополнительно замещена, например, аминогруппой (например, диметиламино).
Если заместитель в К12 представляет собой С1-7 алкил, то он предпочтительно может представлять собой С1-4 алкильную группу (например, метил, этил, пропил, бутил).
Если заместитель в К12 представляет собой С3-7 гетероциклил, то в некоторых вариантах реализации он может представлять собой С6 азотсодержащую гетероциклильную группу, например морфолино, тиоморфолино, пиперидинил, пиперазинил. Эти группы могут быть связаны с остальной частью фрагмента ПБД через атом азота. Эти группы могут быть дополнительно замещены, например, С1-4 алкильными группами. Если С6 азотсодержащая гетероциклильная группа представляет собой пиперазинил, то указанный дополнительный заместитель может быть расположен при втором атоме азота в кольце.
Если заместитель в К12 представляет собой бис-окси-С1-3 алкилен, то предпочтительно он представляет собой бис-окси-метилен или бис-окси-этилен.
Особенно предпочтительные заместители в К12 включают метокси, этокси, фтор, хлор, циано, бисокси-метилен, метилпиперазинил, морфолино и метилтиофенил. Другим особенно предпочтительным заместителем в К12 является диметиламинопропилокси.
Группы К12.
Особенно предпочтительные замещенные группы К12 включают, но не ограничиваются ими, 4метоксифенил, 3-метоксифенил, 4-этоксифенил, 3-этоксифенил, 4-фторфенил, 4-хлорфенил, 3,4бисоксиметиленфенил, 4-метилтиофенил, 4-цианофенил, 4-феноксифенил, хинолин-3-ил и хинолин-6-ил, изохинолин-3-ил и изохинолин-6-ил, 2-тиенил, 2-фуранил, метоксинафтил и нафтил. Другой возможной замещенной группой К12 является 4-нитрофенил.
М и ζ.
Предпочтительно М и М' представляют собой одновалентные фармацевтически приемлемые катионы и более предпочтительно Νη'.
Ζ предпочтительно равен 3.
Примеры
Общие методы проведения экспериментов
Оптическое вращение измеряли на поляриметре ΆΌΡ 220 (ВсШидНат §1аи1еу Ыб.), концентрации (с) представлены в виде г/100 мл. Температуру плавления измеряли при помощи цифрового измерителя температуры плавления (Е1ес1то1кегта1). ИК-спектры записывали на ИК-спектрометре Регкш-Е1тег §рес1тит 1000 РТ. Спектры 1Н и 13С ЯМР получали при 300 К на ЯМР спектрометре Вгикег Абсансе при 400
- 31 024118 и 100 МГц соответственно. Химические сдвиги представлены относительно ТМ8 (δ = 0,0 ррт), сигналы обозначены как 8 (синглет), б (дублет), ΐ (триплет), б1 (двойной триплет), бб (дублет дублетов), ббб (двойной дублет дублетов) или т (мультиплет), константы спин-спинового взаимодействия даны в герцах (Гц). Данные масс-спектрометрического анализа (МС) получали на оборудовании \Уа1ег5 Мктота88 Ζρ, соединенным с ВЭЖХ хроматографом \Уа1ег5 2695 и детектором \Уа1ег5 2996 РЭЛ. Использовались следующие параметры системы \Уа1ег5 Мкгота88 ΖΡ: капилляр (кВ), 3,38; конус (В), 35; экстрактор (В), 3,0; температура источника (°С), 100; температура десольватации (°С), 200; скорость потока подвижной фазы (л/ч), 50; расход десольватированного потока (л/ч), 250. Масс-спектрометрический анализ высокого разрешения (НКМ8) проводили в системе \Уа1ег5 Мкгота88 рТОР С1оЬа1 в положительном ^-режиме с использованием наконечников из борсиликатного стекла с металлическим покрытием для введения образцов в прибор. Тонкослойную хроматографию (ТСХ) проводили на алюминиевых пластинах с силикагелем (Мегск 60, Р254), а для флэш-хроматографии использовали силикагель (Мегск 60, 230-400 меш А8ТМ). За исключением НОВ! (ШуаВюсйет) и реагентов на твердой подложке (Агдопаи!) все остальные химические реактивы и растворители приобретали в 8рта-А1бпс11 и их применяли в поставляемом виде без дополнительной очистки. Безводные растворители получали путем перегонки в атмосфере сухого азота в присутствии соответствующего осушителя и хранили над молекулярными ситами 4А ' или над натриевой проволокой. Петролейный эфир представляет собой фракцию, кипящую при 40-60°С.
Соединение 1Ь синтезировали, как описано в документе \УО 00/012508 (соединение 210), содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки.
Общие условия ЖХ/МС: ВЭЖХ (^а1ет8 АШаисе 2695) проводили с применением следующих подвижных фаз: воды (А) (муравьиная кислота 0,1%) и ацетонитрила (В) (муравьиная кислота 0,1%). Градиент: начальный состав - 5% В, 1,0 мин, затем 5% В - 95% В, 3 мин. Состав подвижной фазы сохраняли в течение 0,5 мин на уровне 95% В, а затем возвращали к уровню 5% В за 0,3 мин. Общее время градиентного анализа составляет 5 мин. Скорость потока: 3,0 мл/мин, 400 мкл вводили при помощи тройника с нулевым мертвым объемом в масс-спектрометр. Диапазон длин волн детектирования: 220-400 нм.
Режим: диодная матрица (535 сканов). Колонка: Рйепотепех® Опух МопоШШс С18 50x4,60 мм.
Оособые условия ЖХ/МС для соединений, защищенных Тгос и ТВЭМ8 группами: хроматографическое разделение соединений с Тгос и ТВЭМ8 защитными группами проводили в системе ВЭЖХ \Уа1ег АШаисе 2695 на колонке с обращенной фазой Опух МопоШШс (размер зерна - 3 мкм, 50x4,6 мм) производства Рйепотепех Согр. Подвижная фаза А: смесь 5% ацетонитрила - 95% воды, содержащая 0,1% муравьиной кислоты, подвижная фаза В: смесь 95% ацетонитрила - 5% воды, содержащая 0,1% муравьиной кислоты. Через 1 мин при 5% В долю В повышали до 95% в течение следующих 2,5 мин и поддерживали на уровне 95% В еще 1 мин, затем изменяли состав до 95% А за 10 с и снова уравновешивали систему в течение 50 с, в результате чего общая продолжительность цикла составила 5,0 мин. Скорость подвижной фазы поддерживали на уровне 3,0 мл/мин.
Особые условия ЖХ/МС для соединения 33: ЖХ проводили на манипуляторе микропланшет \Уа1ег5 2767 8атр1е Мападег, соединенным с детектором на основе фотодиодной матрицы \Уа1ег5 2996 и одинарным квадрупольным масс-спектрометром \Уа1ег5 Ζρ. Использовали колонку Ьипа Рйепу1-Неху1 150x4,60 мм, 5 мкм, партия 00Р-4257-Е0 (Рйепотепех). Подвижные фазы: подвижная фаза А: 100% воды для ВЭЖХ (0,05% триэтиламина), рН 7, подвижная фаза В: 20% воды для ВЭЖХ и 80% ацетонитрила для ВЭЖХ (0,05% триэтиламина), рН 7.
Используемые градиенты:
Время Скорость потока %А %В (мин) (мл/мин)
Начало 1,50 90 10
ι,θ 1,50 90 10
16,0 1,50 64 36
30,0 1,50 5 95
31,0 1,50 90 10
32,0 1,50 90 10
Масс-спектрометрический анализ проводили в режиме детектирования положительных ионов с применением 81М (селективный мониторинг ионов), наблюдаемый ион имел т/ζ = 727,2.
- 32 024118
(а) 1,1'-[[(Пропан-1,3-диил)диокси]бис[(5-метокси-2-нитро-1,4-фенилен)карбонил]]-бис-[(28,4К)метил-4-гидроксипирролидин-2-карбоксилат] (2а)
Способ А. Каталитическое количество ДМФА (2 капли) добавляли при перемешивании в раствор нитрокислоты 1а (1,0 г, 2,15 ммоль) и оксалилхлорида (0,95 мл, 1,36 г, 10,7 ммоль) в сухом ТГФ (20 мл). Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 16 ч при комнатной температуре и растворитель удаляли путем выпаривания в вакууме. Полученный остаток перерастворяли в сухом ТГФ (20 мл) и в перемешиваемую смесь гидрохлорида (28,4К)-метил-4-гидроксипирролидин-2-карбоксилата (859 мг, 4,73 ммоль) и ТЭА (6,6 мл, 4,79 г, 47,3 ммоль) в ТГФ (10 мл) при -30°С (сухой лед/этиленгликоль) в атмосфере азота добавляли по каплям раствор хлорангидрида. Реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение еще 3 ч, после чего данные анализа ТСХ (95:5 (об./об.) СНС13/МеОН) и ЖХ/МС (2,45 мин (Ε8+) т/ζ (относительная интенсивность) 721 ([М + Н]+, 20)) показали получение продукта. Избыток ТГФ удаляли на роторном испарителе, а полученный остаток растворяли в ДХМ (50 мл). Органический слой промывали 1н. НС1 (2x15 мл), насыщенным ЫаНСО3 (2x15 мл), Н2О (20 мл), солевым раствором (30 мл) и сушили (М§8О4). В результате фильтрования и выпаривания растворителя получали неочищенный продукт в виде темной маслянистой жидкости. Очистка флэш-хроматографией (градиентное элюирование: с 100% СНС13 до 96:4 (об./об.) СНС13/МеОН) приводила к выделению чистого амида 2а в виде оранжевого стеклообразного вещества (840 мг, 54%).
Способ В. Оксалилхлорид (9,75 мл, 14,2 г, 111 ммоль) добавляли в перемешиваемую суспензию нитрокислоты 1а (17,3 г, 37,1 ммоль) и ДМФА (2 мл) в безводном ДХМ (200 мл). После начального вспенивания реакционная суспензия переходила в раствор, и смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 16 ч. Конверсию в хлорангидрид подтверждали обработкой пробы реакционной смеси МеОН и детектированием полученного бис-метилового эфира при помощи ЖХ/МС. Основную часть растворителя удаляли путем выпаривания в вакууме, полученный концентрированный раствор перерастворяли в минимальном количестве сухого ДХМ и растирали с диэтиловым эфиром. Полученный желтый осадок отфильтровывали, промывали холодным диэтиловым эфиром и сушили в течение 1 ч в вакуумируемом сушильном шкафу при 40°С. Твердый хлорангидрид добавляли порциями в течение 25 мин в перемешиваемую суспензию гидрохлорида (28,4К)-метил-4-гидроксипирролидин-2-карбоксилата (15,2 г, 84,0 ммоль) и ТЭА (25,7 мл, 18,7 г, 185 ммоль) в ДХМ (150 мл) при -40°С (сухой лед/СН3СЫ). По данным ЖХ/МС реакция проходила мгновенно (2,47 мин (Ε8+) т/ζ (относительная интенсивность) 721 ([М + Н]+, 100)). Смесь разбавляли ДХМ (150 мл) и промывали 1н. НС1 (300 мл), насыщенным ЫаНСО3 (300 мл), солевым раствором (300 мл), фильтровали (через разделитель фаз) и растворитель выпаривали в вакууме с получением чистого продукта 2а в виде оранжевого твердого вещества (21,8 г, 82%).
Данные анализа: [ а]22с = -46,1° (с = 0,47, СНС13); 1Н ЯМР (400 МГц, СИС13) (ротамеры) δ 7,63 (з, 2Н), 6,82 (з, 2Н), 4,79-4,72 (т, 2Н), 4,49-4,28 (т, 6Н), 3,96 (з, 6Н), 3,79 (з, 6Н), 3,46-3,38 (т, 2Н), 3,02 (ά, 2Н, 1=11,1 Гц), 2,48-2,30 (т, 4Н), 2,29-2,04 (т, 4Н);
13С ЯМР (100 МГц, СИС13) (ротамеры) δ 172,4, 166,7, 154,6, 148,4, 137,2, 127,0, 109,7, 108,2, 69,7, 65,1, 57,4, 57,0, 56,7, 52,4, 37,8, 29,0;
ИК (НПВО, СНС13) 3410 (Ьг), 3010, 2953, 1741, 1622, 1577, 1519, 1455, 1429, 1334, 1274, 1211, 1177, 1072, 1050, 1008, 871 см-1; МС (Ε8+) т/ζ (относительная интенсивность) 721 ([М + Н]+, 47), 388 (80); МСВР [М + Н]+, теория С31Н36Ы4О16 т/ζ 721,2199, эксперимент (Ε8+) т/ζ 721,2227.
- 33 024118 (a) 1,1'-[[(Пентан-1,5-диил)диокси]бис[(5-метокси-2-нитро-1,4-фенилен)карбонил]]-бис-[(28,4К)метил-4-гидроксипирролидин-2-карбоксилат] (2Ъ).
Синтез из 1Ъ в соответствии со способом В приводил к получению чистого продукта в виде оранжевой пены (75,5 г, 82%).
Данные анализа: (Ε8+) т/ζ (относительная интенсивность) 749 ([М+ Н]+, 100).
(b) 1,1'-[[(Пропан-1,3-диил)диокси]бис(11а8,2К)-2-(гидрокси)-7-метокси-1,2,3,10,11,11а-гексагидро5Н-пирроло [2,1-с][1,4] -бензодиазепин-5, 11 -дион] (3 а).
Способ А. Суспензию 10% Рб/С (7,5 г, 10% (мас./мас.)) в ДМФА (40 мл) добавляли в раствор нитропроизводного сложного эфира 2а (75 г, 104 ммоль) в ДМФА (360 мл). Суспензию гидрировали в аппарате Парра для гидрирования в течение 8 ч. За ходом реакции следили с помощью ЖХ/МС (2,12 мин (Ε8+) т/ζ (относительная интенсивность) 597 ([М + Н]+, 100), (Ε8-) т/ζ (относительная интенсивность) 595 ([М + Н]+, 100)) после завершения присоединения водорода. Твердый Рб/С удаляли путем фильтрования, фильтрат концентрировали на роторном испарителе в вакууме (ниже 10 мбар) при 40°С с получением темной маслянистой жидкости, содержащей следы ДМФА и остатки активированного угля. Остаток нагревали в Б1ОН (500 мл) при 40°С на водяной бане (баня роторного испарителя) и полученную суспензию фильтровали через целит и промывали этанолом (500 мл) с получением прозрачного фильтрата. Гидразин-гидрат (10 мл, 321 ммоль) добавляли в раствор и реакционную смесь кипятили с обратным холодильником. Через 20 мин наблюдали образование белого осадка и продолжали кипячение в течение 30 мин. Смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры и осадок отделяли путем фильтрования, промывали диэтиловым эфиром (2x1 объем осадка) и сушили в вакуумном эксикаторе с получением соединения 3а (50 г, 81%).
Способ В. Раствор нитропроизводного сложного эфира 2а (6,80 г, 9,44 ммоль) в МеОН (300 мл) добавляли к никелю Ренея™ (4 порции ~50% суспензии в Н2О на кончике крупного шпателя) и к гранулам для предотвращения вскипания в 3-горлую круглодонную колбу. Смесь кипятили с обратным холодильником, а затем обрабатывали добавлением по каплям раствора гидразин-гидрата (5,88 мл, 6,05 г, 188 ммоль) в МеОН (50 мл), при этом наблюдали интенсивное газообразование. После завершения добавления (~30 мин) осторожно добавляли дополнительную порцию никеля Ренея™ до прекращения газообразования, при этом начальный желтый цвет реакционной смеси исчезал. Смесь дополнительно кипятили с обратным холодильником в течение еще 30 мин, после чего реакцию считали завершенной в соответствии с данными анализа ТСХ (90:10 (об./об.) СНС13/МеОН) и ЖХ/МС (2,12 мин (Ε8+) т/ζ (относительная интенсивность) 597 ([М+ Н]+, 100)). Реакционную смесь оставляли охлаждаться примерно до 40°С, затем избыток никеля удаляли фильтрованием через воронку со стеклянным пористым фильтром без вакуумирования. Объем фильтрата уменьшали путем выпаривания в вакууме, в результате чего образовывался бесцветный осадок, который отфильтровывали и сушили в вакуумном эксикаторе с получением соединения 3а (5,40 г, 96%).
Данные анализа: |α|2 = +404° (с = 0,10, ДМФ); ΊI ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ 10,2 (к, 2Н, ΝΚ),
7,26 (к, 2Н), 6,73 (к, 2Н), 5,11 (б, 2Н, 1=3,98 Гц, ОН), 4,32-4,27 (т, 2Н), 4,19-4,07 (т, 6Н), 3,78 (к, 6Н), 3,62 (бб, 2Н, 1=12,1, 3,60 Гц), 3,43 (бб, 2Н, 1=12,0, 4,72 Гц), 2,67-2,57 (т, 2Н), 2,26 (р, 2Н, 1=5,90 Гц), 1,99-1,89 (т, 2Н);
13С ЯМР (100 МГц, ДМСО-б6) δ 169,1, 164,0, 149,9, 144,5, 129,8, 117,1, 111,3, 104,5, 54,8, 54,4, 53,1,
33,5, 27,5;
ИК (НПВО, чист.) 3438, 1680, 1654, 1610, 1605, 1516, 1490, 1434, 1379, 1263, 1234, 1216, 1177, 1156, 1115, 1089, 1038, 1018, 952, 870 см-1; МС (Ε8+) т/ζ (относительная интенсивность) 619 ([М + №]+, 10), 597 ([М+ Н]+, 52), 445 (12), 326 (11); МСВР (масс-спектрометрия высокого разрешения) [М + Н]+, теория С29Нз^4О10 т/ζ 597,2191, эксперимент (Ε8+) т/ζ 597,2205.
(b) 1,1'-[[(Пентан-1,5-диил)диокси]бис(11а8,2К)-2-(гидрокси)-7-метокси-1,2,3,10,11,11а-гексагидро5Н-пирроло [2,1-с][1,4] -бензодиазепин-5, 11 -дион] (3Ъ).
Синтез из 2Ъ согласно способу А приводил к получению продукта в виде белого твердого вещества (22,1 г, 86%).
Данные анализа: МС (Ε8-) т/ζ (относительная интенсивность) 623,3 ([М- Н]-, 100).
(c) 1,1 '-[[(Пропан- 1,3-диил)диокси]бис( 11а8,2К)-2-(трет-бутилдиметилсилилокси)-7 -метокси1,2,3,10,11,11а-гексагидро-5Н-пирроло [2,1-с][1,4] -бензодиазепин-5,11 -дион] (4а).
ТВ8С1 (317 мг, 2,1 ммоль) и имидазол (342 мг, 5,03 ммоль) добавляли в мутный раствор тетралактама 3а (250 мг, 0,42 ммоль) в безводном ДМФА (6 мл). Смесь оставляли перемешиваться в атмосфере азота в течение 3 ч, после чего реакцию считали завершенной согласно данным анализа ЖХ/МС (3,90 мин (Ε8+) т/ζ (относительная интенсивность) 825 ([М + Н]+, 100)). Реакционную смесь выливали на лед (~25 мл) и оставляли нагреваться до комнатной температуры при перемешивании. Выпавший белый осадок отфильтровывали в вакууме, промывали Н2О, диэтиловым эфиром и сушили в вакуумном эксикаторе с получением чистого соединения 4а (252 мг, 73%).
Данные анализа: [ α]23η = +234° (с = 0,41, СНС13); ' Н ЯМР (400 МГц, СПС13) δ 8,65 (к, 2Н, ΝΚ), 7,44 (к, 2Н), 6,54 (к, 2Н), 4,50 (р, 2Н, 1=5,38 Гц), 4,21-4,10 (т, 6Н), 3,87 (к, 6Н), 3,73-3,63 (т, 4Н), 2,85-2,79 (т,
- 34 024118
2Н), 2,36-2,29 (т, 2Н), 2,07-1,99 (т, 2Н), 0,86 (8, 18Η), 0,08 (8, 12Н);
13С ЯМР (100 МГц, δ 170,4, 165,7, 151,4, 146,6, 129,7, 118,9, 112,8, 105,3, 69,2, 65,4, 56,3,
55,7, 54,2, 35,2, 28,7, 25,7, 18,0, -4,82 и -4,86;
ИК (НПВО, СНС13) 3235, 2955, 2926, 2855, 1698, 1695, 1603, 1518, 1491, 1446, 1380, 1356, 1251, 1220, 1120, 1099, 1033 см-1; МС (Е8+) т/ζ (относительная интенсивность) 825 ([М + Н]+, 62), 721 (14), 440 (38); МСВР [М+ Н]+, теория С41Н6(0Н4О10812 т/ζ 825,3921, эксперимент (Е8+) т/ζ 825,3948.
(с) 1,1'-[[(Пентан-1,5-диил)диокси]бис(11а8,2К)-2-(трет-бутилдиметилсилилокси)-7-метокси1,2,3,10,11,11а-гексагидро-5Н-пирроло [2,1-с][1,4] -бензодиазепин-5,11 -дион] (4Ь).
Синтез из 3Ь согласно предложенному выше способу приводил к получению продукта в виде белого твердого вещества (27,3 г, 93%).
Данные анализа: МС (Е8+) т/ζ (относительная интенсивность) 853,8 ([М + Н]+, 100), (Е8-) т/ζ (относительная интенсивность) 851,6 ([М - Н]-, 100).
(ά) 1,1 '-[[(Пропан- 1,3-диил)диокси]бис(11а8,2К)-2-(трет-бутилдиметилсилилокси)-7 -метокси-10-((2(триметилсилил)этокси)метил)-1,2,3,10,11,11а-гексагидро-5Н-пирроло [2,1-с][1,4] -бензодиазепин-5,11 дион] (5а).
Раствор н-ВиЫ (4,17 мл 1,6 М раствора в гексане, 6,67 ммоль) в безводном ТГФ (10 мл) добавляли по каплям в перемешиваемую суспензию тетралактама 4а (2,20 г, 2,67 ммоль) в безводном ТГФ (30 мл) при -30°С (сухой лед/этиленгликоль) в атмосфере азота. Реакционную смесь оставляли перемешиваться при этой температуре в течение 1 ч (смесь имела красновато-оранжевый цвет), после чего по каплям добавляли раствор 8ЕМС1 (1,18 мл, 1,11 г, 6,67 ммоль) в безводном ТГФ (10 мл). Реакционную смесь оставляли медленно нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 ч в атмосфере азота. Реакцию считали завершенной согласно данным анализа ТСХ (ЕЮАс) и ЖХ/МС (4,77 мин (Е8+) т/ζ (относительная интенсивность) 1085 ([М + Н]+, 100)). ТГФ удаляли путем выпаривания в вакууме, а полученный остаток растворяли в ЕЮАс (60 мл), промывали Н2О (20 мл), солевым раствором (20 мл), сушили (Мд8О4), фильтровали и упаривали в вакууме с получением неочищенного продукта. Очистка флэш-хроматографией (80:20 (об./об.) гексан/ЕЮАс) приводила к получению чистого М0-8ЕМзащищенного тетралактама 5а в виде маслянистой жидкости (2,37 г, 82%).
Данные анализа: [α]23η = +163° (с = 0,41, СНС13); ’Н ЯМР (400 МГц, СИСЬ) δ 7,33 (8, 2Η), 7,22 (8, 2Η), 5,47 (ά, 2Η, 1=9,98 Гц), 4,68 (ά, 2Η, 1=9,99 Гц), 4,57 (р, 2Η ,1=5,77 Гц), 4,29- 4.19 (т, 6Н), 3,89 (8, 6Н), 3,79-3,51 (т, 8Н), 2,87-2,81 (т, 2Н), 2,41 (р, 2Н, 1=5,81 Гц), 2,03-1,90 (т , 2Н), 1,02-0,81 (т, 22Н), 0,09 (8, 12Η), 0,01 (8, 18Н);
13С ЯМР (100 МГц, СИСЬ) δ 170,0, 165,7, 151,2, 147,5, 133,8, 121,8, 111,6, 106,9, 78,1, 69,6, 67,1,
65,5, 56,6, 56,3, 53,7, 35,6, 30,0, 25,8, 18,4, 18,1, -1,24, -4,73;
ИК (НПВО, СНС13) 2951, 1685, 1640, 1606, 1517, 1462, 1433, 1360, 1247, 1127, 1065 см-1; МС (Е8+) т/ζ (относительная интенсивность) 1113 ([М+ Ν;·ι|'. 48), 1085 ([М + Н]+, 100), 1009 (5), 813 (6); МСВР [М+Н]+, теория С53Н8^4О12814 т/ζ 1085,5548, эксперимент (Е8+) т/ζ 1085,5542.
(ά) 1,1'-[[(Пентан-1,5-диил)диокси]бис(11а8,2К)-2-(трет-бутилдиметилсилилокси)-7-метокси-10-((2(триметилсилил)этокси)метил)-1,2,3,10,11,11а-гексагидро-5Н-пирроло [2,1-с][1,4] -бензодиазепин-5,11 дион] (5Ь).
Синтез из 4Ь согласно предложенному выше способу приводил к получению продукта в виде бледно-оранжевой пены (46,9 г, 100%), которую использовали без дополнительной очистки.
Данные анализа: МС (Е8+) т/ζ (относительная интенсивность) 1114 ([М + Н]+, 90), (Е8-) т/ζ (относительная интенсивность) 1158 ([М+2№]-, 100).
(е) 1,1'-[[(Пропан-1,3-диил)диокси]бис(11а8,2К)-2-гидрокси-7-метокси-10-((2-(триметилсилил) этокси)метил)-1,2,3,10,11,11а-гексагидро-5Н-пирроло[2,1-с][1,4]-бензодиазепин-5,11-дион] (6а).
Раствор ТВАР (5,24 мл 1,0 М раствора в ТГФ, 5,24 ммоль) добавляли в перемешиваемый раствор простого бис-силильного эфира 5а (2,58 г, 2,38 ммоль) в ТГФ (40 мл) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 3,5 ч анализ реакционной смеси методом ТСХ (95:5 (об./об.) СНС13/МеОН) свидетельствовал о завершении реакции. Реакционную смесь выливали в насыщенный раствор ΝΗ4Ο (100 мл) и экстрагировали ЕЮАс (3x30 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (60 мл), сушили (Мд8О4), фильтровали и упаривали в вакууме с получением неочищенного продукта. Очистка флэш-хроматографией (градиентное элюирование: 100% СНС13 - 96:4 (об./об.) СНС13/МеОН) приводила к получению чистого тетралактама 6а в виде белой пены (1,78 г, 87%).
Данные анализа: [α]23η = +202° (с = 0,34, СНС13); ’Н ЯМР (400 МГц, δ 7,28 (8, 2Η), 7.20 (8,
2Н), 5,44 (ά, 2Н, 1=10,0 Гц), 4,72 (ά, 2Н, 1=10,0 Гц), 4,61-4,58 (т, 2Н), 4,25 (ί, 4Н, 1=5,83 Гц), 4,20-4,16 (т, 2Н), 3,91-3,85 (т, 8Н), 3,77-3,54 (т, 6Н), 3,01 (Ьг 8, 2Н, ОН), 2,96-2,90 (т, 2Н), 2,38 (ρ, 2Н, 1=5,77 Гц), 2,11-2,05 (т, 2Н), 1,00-0,91 (т, 4Н), 0,00 (8, 18Н);
13С ЯМР (100 МГц, СИСЬ) δ 169,5, 165,9, 151,3, 147,4, 133,7, 121,5, 111,6, 106,9, 79,4, 69,3, 67,2, 65,2, 56,5, 56,2, 54,1, 35,2, 29,1, 18,4, -1,23;
ИК (НПВО, СНС13) 2956, 1684, 1625, 1604, 1518, 1464, 1434, 1361, 1238, 1058, 1021 см-1; МС (Е8+) т/ζ (относительная интенсивность) 885 ([М+ 29]+, 70), 857 ([М+ Н]+, 100), 711 (8), 448 (17); МСВР [М+
- 35 024118
Н]+ теория ^ιΗοΝΟ^δΐζ т/ζ 857,3819, эксперимент (Е8+) т/ζ 857,3826.
(е) 1,1'-[[(Пентан-1,5-диил)диокси]бис(11а8,2К)-2-гидрокси-7-метокси-10-((2-(триметилсилил) этокси)метил)-1,2,3,10,11,11а-гексагидро-5Н-пирроло[2,1-с][1,4]-бензодиазепин-5,11-дион] (6Ь).
Синтез из 5Ь согласно предложенному выше способу приводил к получению продукта в виде белой пены (15,02 г).
Данные анализа: МС (Е8+) т/ζ (относительная интенсивность) 886 ([М + Н]+, 10), 739,6 (100), (Е8-) т/ζ (относительная интенсивность) 884 ([М - Н]-, 40).
(ί) 1,1'-[[(Пропан-1,3-диил)диокси]бис[(11а8)-11-сульфо-7-метокси-2-оксо-10-((2-(триметплсилил) этокси)метил)-1,2,3,10,11,11а-гексагидро-5Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5,11-дион]] (7 а).
Способ А. 0,37 М раствор гипохлорита натрия (142,5 мл, 52,71 ммоль, 2,4 экв.) добавляли по каплям в интенсивно перемешиваемую смесь диола 6а (18,8 г, 21,96 ммоль, 1 экв.), ТЕМРО (0,069 г, 0,44 ммоль, 0,02 экв.) и 0,5 М раствора бромида натрия (8,9 мл, 4,4 ммоль, 0,2 экв.) в ДХМ (115 мл) при 0°С. Температуру поддерживали в диапазоне от 0 до 5°С, регулируя скорость добавления. Полученную желтую эмульсию перемешивали при температуре от 0 до 5°С в течение 1 ч. Результаты методов ТСХ (ЕЮАс) и ЖХ/МС [3,53 мин (Е8+) т/ζ (относительная интенсивность) 875 ([М + Ыа]+, 50), (Е8-) т/ζ (относительная интенсивность) 852 ([М - Н]-, 100)] подтверждали завершение реакции.
Реакционную смесь фильтровали, органический слой отделяли и водный слой промывали ДХМ (х2). Объединенные органические фазы промывали солевым раствором (х 1), сушили (Мд8О4) и упаривали с получением желтой пены. Очистка путем колоночной флэш-хроматографии (градиентное элюирование 35/65 (об./об.) н-гексан/ЕЮАс, 30/70 - 25/75 (об./об.) н-гексан/ЕЮАс) приводила к получению бискетона 7а в виде белой пены (14,1 г, 75%).
Применяли раствор гипохлорита натрия, чистый, с содержанием хлора 10-13%. Предполагали, что данный раствор был 10% (10 г ЫаС1О в 100 г), т.е. по расчетам представлял собой 1,34 М раствор ЫаСЮ. Исходный раствор готовили из данного раствора разбавлением до 0,37 М в воде, что приводило к получению раствора с рН, равным примерно 14. Значение рН доводили до 9,3-9,4 путем добавления твердого NаΗСОз. Аликвоту исходного раствора затем применяли в реакции в количестве, составляющем 2,4 мол.экв.
При добавлении раствора гипохлорита натрия наблюдали начальное повышение температуры. Скорость добавления контролировали для поддержания температуры в диапазоне от 0 до 5°С. Реакционная смесь превращалась в густую эмульсию лимонно-желтого цвета.
Окисление проводили при помощи модифицированного способа, описанного в источнике ТЬотак Реу с! а1., 1. Огд. СЬет., 2001, 66, 8154-8159.
Способ В. Твердую ТССА (10,6 г, 45,6 ммоль) добавляли порциями в перемешиваемый раствор спирта 6а (18,05 г, 21,1 ммоль) и ТЕМРО (123 мг, 0,78 ммоль) в безводном ДХМ (700 мл) при 0°С (лед/ацетон). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в атмосфере азота в течение 15 мин, после чего результаты ТСХ (ЕЮАс) и ЖХ/МС [3,57 мин (Е8+) т/ζ (относительная интенсивность) 875 ([М + Ыа]+, 50)] показали завершение реакции. Реакционную смесь фильтровали через целит, фильтрат промывали насыщенным водным NаΗСОз (400 мл), солевым раствором (400 мл), сушили (Мд8О4), фильтровали и упаривали в вакууме с получением неочищенного продукта. Очистка путем колоночной флэшхроматографии (80:20 (об./об.) ЕЮАс/гексан) приводила к получению бис-кетона 7а в виде пены (11,7 г, 65%).
Способ С. Раствор безводного ДМСО (0,72 мл, 0,84 г, 10,5 ммоль) в сухом ДХМ (18 мл) добавляли по каплям в течение 25 мин в перемешиваемый раствор оксалилхлорида (2,63 мл 2,0 М раствора в ДХМ, 5,26 ммоль) в атмосфере азота при -60°С (жидкий Ν2^ΗΟ3). После перемешивания при -55°С в течение 20 мин суспензию субстрата 6а (1,5 г, 1,75 ммоль) в сухом ДХМ (36 мл) добавляли по каплям в течение 30 мин в реакционную смесь. После дополнительного перемешивания в течение 50 мин при -55°С раствор ТЭА (3,42 мл, 2,49 г, 24,6 ммоль) в сухом ДХМ (18 мл) добавляли по каплям в течение 20 мин в реакционную смесь. Перемешиваемую реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры (~1,5 ч), а затем разбавляли ДХМ (50 мл). Органический раствор промывали 1н. ΗΟ (2х25 мл), Η2О (30 мл), солевым раствором (30 мл) и сушили (Мд8О4).
Фильтрование и выпаривание растворителя в вакууме приводили к получению неочищенного продукта, который очищали путем колоночной флэш-хроматографии (80:20 (об./об.) ЕЮАс/гексан) с получением бис-кетона 7а в виде пены (835 мг, 56%).
Данные анализа: [α]2% = +291° (с = 0,26, ϋΗΟ3); ’Η ЯМР (400 МГц, СОСЕ) δ 7,32 (к, 2Η), 7,25 (к, 2Η), 5,50 (б, 2Η, 1=10,1 Гц), 4,75 (б, 2Η, 1=10,1 Гц), 4,60 (бб, 2Η, 1=9,85, 3,07 Гц), 4,31-4,18 (т, 6Н), 3,893,84 (т, 8Н), 3,78-3,62 (т, 4Н), 3,55 (бб, 2Η, 1=19,2, 2,85 Гц), 2,76 (бб, 2Н, 1=19,2, 9,90 Гц), 2,42 (р, 2Н, 1= 5,77 Гц), 0,98-0,91 (т, 4Н), 0,00 (к, 18Η);
13С ЯМР (100 МГц, СПС13) δ 206,8, 168,8, 165,9, 151,8, 148,0, 133,9, 120,9, 111,6, 107,2, 78,2, 67,3,
65,6, 56,3, 54,9, 52,4, 37,4, 29,0, 18,4, -1,24;
ИК (НПВО, ^0.,) 2957, 1763, 1685, 1644, 1606, 1516, 1457, 1434, 1360, 1247, 1209, 1098, 1066, 1023 см-1; МС (Е8+) т/ζ (относительная интенсивность) 881 ([М+29]+; 38), 853 ([М+ Н]+', 100), 707 (8), 542
- 36 024118 (12); МСВР [М + Н]+' теория С41Н56М4О12§12 т/ζ 853,3506, эксперимент (Е§+) т/ζ 853,3502.
(ί) 1,1'-[[(Пентан-1,5-диил)диокси]бис[(11а§)-11-сульфо-7-метокси-2-оксо-10-((2-(триметилсилил) этокси)метил)-1,2,3,10,11,11а-гексагидро-5Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5,11-дион]] (7Ъ).
Синтез из 6Ъ согласно способу С приводил к получению продукта в виде белой пены (10,5 г, 76%).
Данные анализа: МС (Е§+) т/ζ (относительная интенсивность) 882 ([М+ Н]+, 30), 735 (100), (Е§-) т/ζ (относительная интенсивность) 925 ([М+ 45]-, 100), 880 ([М - Н]-, 70).
(д) 1,1'-[[(Пропан-1,3-диил)диокси]бис(11а§)-7-метокси-2-[[(трифторметил)сульфонил]окси]-10-((2(триметилсилил)этокси)метил)-1,10,11, 11а-тетрагидро-5Н-пирроло[2,1-с][1,4]-бензодиазепин-5,11-дион] (8а).
Безводный 2,6-лутидин (5,15 мл, 4,74 г, 44,2 ммоль) добавляли при помощи шприца за один раз в интенсивно перемешиваемый раствор бис-кетона 7а (6,08 г, 7,1 ммоль) в сухом ДХМ (180 мл) при -45°С (охлаждающая баня: сухой лед/ацетонитрил) в атмосфере азота. Безводный ангидрид трифторуксусной кислоты, взятый из свежевскрытой ампулы (7,2 мл, 12,08 г, 42,8 ммоль) быстро по каплям добавляли с помощью шприца, поддерживая температуру, равную -40°С или менее. Реакционную смесь оставляли перемешиваться при -45°С в течение 1 ч, после чего результаты ТСХ (50/50 н-гексан/Е!ОАс) показали полное израсходование исходных веществ. Холодную реакционную смесь немедленно разбавляли ДХМ (200 мл) и при интенсивном перемешивании промывали водой (1x100 мл), 5% раствором лимонной кислоты (1x200 мл), насыщенным ЫаНСО3 (200 мл), солевым раствором (100 мл) и сушили (Мд§О4). Фильтрование и выпаривание растворителя в вакууме приводили к получению неочищенного продукта, который очищали путем колоночной флэш-хроматографии (градиентное элюирование: 90:10 (об./об.) нгексан/Е!ОАс - 70:30 (об./об.) и-гексан/Е!ОАс) с получением трифлата бис-енола 8а в виде желтой пены (5,5 г, 70%).
Данные анализа: [α]24η = +271° (с = 0,18, СНС13); ' Н ЯМР (400 МГц, СПС13) δ 7,33 (к, 2Н), 7,26 (к, 2Н), 7,14 (!, 2Н, 1=1,97 Гц), 5,51 (й, 2Н, 1=10,1 Гц), 4,76 (й, 2Н, 1=10,1 Гц), 4,62 (йй, 2Н, 1=11,0, 3,69 Гц), 4,32-4,23 (т, 4Н), 3,94-3,90 (т, 8Н), 3,81-3,64 (т, 4Н), 3,16 (ййй, 2Н, 1=16,3, 11,0, 2,36 Гц), 2,43 (р, 2Н, 1= 5,85 Гц), 1,23-0,92 (т, 4Н), 0,02 (к, 18Н);
13С ЯМР (100 МГц, СИСЬ) δ 167,1, 162,7, 151,9, 148,0, 138,4, 133,6, 120,2, 118,8, 111,9, 107,4, 78,6, 67,5, 65,6, 56,7, 56,3, 30,8, 29,0, 18,4, -1,25;
ИК (НПВО, СНС13) 2958, 1690, 1646, 1605, 1517, 1456, 1428, 1360, 1327, 1207, 1136, 1096, 1060, 1022, 938, 913 см-1; МС (Е§+) т/ζ (относительная интенсивность) 1144 ([М+ 28]+, 100), 1117 ([М+ Н]+, 48), 1041 (40), 578 (8); МСВР [М+ Н]+ теория С43Н54Х4О16§12§2Р6 т/ζ 1117,2491, эксперимент (Е§+) т/ζ 1117,2465.
(д) 1,1'-[[(Пентан-1,5-диил)диокси]бис(11а§)-7-метокси-2-[[(трифторметил)сульфонил]окси]-10-((2(триметилсилил)этокси)метил)-1,10,11,11а-тетрагидро-5Н-пирроло [2,1-с][1,4] -бензодиазепин-5,11 -дион] (8Ъ).
Синтез из 7Ъ согласно предложенному выше способу приводил к получению трифлата бис-енола в виде бледно-желтой пены (6,14 г, 82%).
Данные анализа: (Е§+) т/ζ (относительная интенсивность) 1146 ([М+ Н]+, 85).
Пример 1
(а) (§)-2-(4-аминофенил)-7-метокси-8-(3-((§)-7-метокси-2-(трифторметилсульфонил)-5,11-диоксо10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8илокси)пропокси)-10 -((2-(триметилсилил)этокси)метил) -1Н-пирроло [2,1-с][1,4] бензодиазепин5,11(10Н,11аН)-дион (9).
Твердый Рй(РРЬ3)4 (20,18 мг, 17,46 ммоль) добавляли в перемешиваемый раствор трифлата 8а (975 мг, 0,87 ммоль), 4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)анилина (172 мг, 0,79 ммоль) и Ыа2СО3 (138 мг, 3,98 моль) в толуоле (13 мл), Е!ОН (6,5 мл) и Н2О (6,5 мл). Темный раствор оставляли перемешиваться в атмосфере азота в течение 24 ч, после чего результаты ТСХ (Е!ОАс) и ЖХ/МС показали получение целевого продукта моносочетания, а также присутствие непрореагировавших исходных реагентов. Растворитель удаляли на роторном испарителе при пониженном давлении, а полученный остаток
- 37 024118 обрабатывали Η2Ο (100 мл) и ЕЮАс (100 мл), после окончательного разделения слоев водную фазу снова экстрагировали ЕЮАс (2x25 мл). Объединенные органические слои промывали Η2Ο (50 мл), солевым раствором (60 мл), сушили (Мд8О4), фильтровали и упаривали в вакууме с получением неочищенного продукта сочетания по Сузуки. Неочищенный продукт сочетания по Сузуки подвергали очистке флэшхроматографией (40% ЕЮАс/60% гексан ^70% ЕЮАс/30% гексан). Удаление избытка элюента на роторном испарителе при пониженном давлении приводило к получению целевого продукта 9 (399 мг) с выходом 43%.
1Н ЯМР: (СОС13, 400 МГц) δ 7,40 (к, 1Η), 7,33 (к, 1Η), 7,27 (Ьк, 3Η), 7,24 (б, 2Η, 1=8,5 Гц), 7,15 (ί, 1Η, 1=2,0 Гц), 6,66 (б, 2Η, 1=8,5 Гц), 5,52 (б, 2Η, 1=10,0 Гц), 4,77 (б, 1Η, 1=10,0 Гц), 4,76 (б, 1Η, 1=10,0 Гц), 4,62 (бб, 1Η, 1=3,7, 11,0 Гц), 4,58 (бб, 1Η, 1=3,4, 10,6 Гц), 4,29 (1, 4Н, 1=5,6 Гц), 4,00-3,85 (т, 8Н), 3,80-3,60 (т, 4Н), 3,16 (ббб, 1Η, 1=2,4, 11,0, 16,3 Гц), 3,11 (ббб, 1Η, 1=2,2, 10,5, 16,1 Гц), 2,43 (р, 2Н, 1=5,9 Гц), 1,10,9 (т, 4Н), 0,2 (к, 18Н).
13С ЯМР: (СОС13, 100 МГц) δ 169,8, 168,3, 164,0, 162,7, 153,3, 152,6, 149,28, 149,0, 147,6, 139,6, 134,8, 134,5, 127,9 (метин), 127,5, 125,1, 123,21, 121,5, 120,5 (метин), 120,1 (метин), 116,4 (метин), 113,2 (метин), 108,7 (метин), 79,8 (метилен), 79,6 (метилен), 68,7 (метилен), 68,5 (метилен), 67,0 (метилен), 66,8 (метилен), 58,8 (метин), 58,0 (метин), 57,6 (метокси), 32,8 (метилен), 32,0 (метилен), 30,3 (метилен), 19,7 (метилен), 0,25 (метил).
(b) (8)-2-(4-аминофенил)-7-метокси-8-(3-((8)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5,11-диоксо-10-((2(триметилсшил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-Ш-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-илокси) пропокси)-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-1Н-пирроло [2,1-с][1,4]бензодиазепин-5,11 (10Н, 11аН)дион (10).
Твердый Рб(РР13)4 (10 мг, 8,69 мкмоль) добавляли в перемешиваемый раствор монотрифлата 9 (230 мг, 0,22 ммоль) в толуоле (3 мл), ЕίΟΗ (10 мл) и 4-метоксифенилбороновой кислоты (43 мг, 0,28 ммоль), №3СО3 (37 мг, 0,35 ммоль) в Н2О (1,5 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь оставляли перемешиваться в атмосфере азота в течение 20 ч, после чего реакцию считали завершенной согласно данным ЖХ/МС и ТСХ (ЕЮАс). Растворитель удаляли на роторном испарителе при пониженном давлении в вакууме, полученный остаток обрабатывали ЕЮАс (75 мл) и Н2О (75 мл). Водную фазу экстрагировали ЕЮАс (3x30 мл), объединенные органические слои промывали Н2О (30 мл), солевым раствором (40 мл), сушили (Мд8О4), фильтровали и упаривали с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали путем флэш-хроматографии (60% гексан: 40% ЕЮАс 80% ЕЮАс: 20% гексан) с получением чистого димера в виде оранжевой пены. Удаление избытка элюента при пониженном давлении приводило к получению целевого продукта 10 (434 мг) с выходом 74%.
Ή ЯМР: (СОС13, 400 МГц) δ 7,38 (к, 2Η), 7,34 (б, 2Η, 1=8,8 Гц), 7,30 (Ьк, 1Η), 7,26-7,24 (т, 3Η), 7,22 (б, 2Η, 1=8,5 Гц), 6,86 (б, 2Η, 1=8,8 Гц), 6,63 (б, 2Η, 1=8,5 Гц), 5,50 (б, 2Η, 1=10,0 Гц), 4,75 (б, 1Η, 1=10,0 Гц), 4,74 (б, 1Η, 1=10,0 Гц), 4,56 (1б, 2Н, 1=3,3, 10,1 Гц), 4,27 (1, 2Н, 1=5,7 Гц), 4,00-3,85 (т, 8Н), 3,80 (к, 3Н), 3,77-3,60 (т, 4Н), 3,20-3,00 (т, 2Н), 2,42 (р, 2Н, 1=5,7 Гц), 0,96 (1, 4Η, 1=8,3 Гц), 0,00 (к, 18Η).
13С ЯМР: (СОС13, 100 МГц) δ 169,8, 169,7, 162,9, 162,7, 160,6, 152,7, 152,6, 149,0, 147,5, 134,8, 127,8 (метин), 127,4, 126,8, 125,1, 123,1, 123,0, 121,5 (метин), 120,4 (метин), 116,4 (метин), 115,5 (метин), 113,1 (метин), 108,6 (метин), 79,6 (метилен), 68,5 (метилен), 66,9 (метилен), 58,8 (метин), 57,6 (метокси), 56,7 (метокси), 32,8 (метилен), 30,3 (метилен), 19,7 (метилен), 0,0 (метил).
(c) (8)-2-(4-аминофенил)-7-метокси-8-(3-((8)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-илокси)пропокси)-Ш-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5(11аН)он (11).
Свежий ΕίΒΗ4(183 мг, 8,42 ммоль) добавляли в перемешиваемый раствор 8ЕМ-дилактама 10 (428 мг, 0,42 ммоль) в ТГФ (5 мл) и Е1ΟΗ (5 мл) при комнатной температуре. Через 10 мин после добавления наблюдали интенсивное газообразование, что потребовало помещения реакционного сосуда в ледяную баню. После удаления ледяной бани смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 1 ч. Анализ ЖХ/МС в этот момент времени показал полное израсходование исходных реагентов и очень низкое содержание продукта моновосстановления. Реакционную смесь выливали на лед (100 мл) и оставляли нагреваться до комнатной температуры при перемешивании. Водную смесь экстрагировали в ДХМ (3x30 мл), объединенные органические слои промывали Н2О (20 мл), солевым раствором (30 мл) и концентрировали в вакууме. Полученный остаток обрабатывали ДХМ (5 мл), Е1ΟΗ (14 мл), Н2О (7 мл) и силикагелем (10 г). Вязкую смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 3 дней. Смесь медленно фильтровали фильтр из пористого стекла, остаток с оксидом кремния промывали 90% ΟΗΟ13:1θ% МеОН (~250 мл) до полного исчезновения УФ-свечения элюента. Органическую фазу промывали Н2О (50 мл), солевым раствором (60 мл), сушили (Мд8О4), фильтровали и упаривали в вакууме с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (97% ί'ΉΟ3: 3% МеОН) с получением чистого димера ПБД 11, содержащего С2/С2' арильные заместители, (185 мг) с выходом 61%.
Ή ЯМР: (СОС13, 400 МГц) δ 7,88 (б, 1Η, 1=4,0 Гц), 7,87 (б, 1Η, 1=4,0 Гц), 7,52 (к, 2Η), 7,39 (Ьк, 1Η), 7,37-7,28 (т, 3Н), 7,20 (б, 2Η, 1=8,5 Гц), 6,89 (б, 2Η, 1=8,8 Гц), 6,87 (к, 1Η), 6,86 (к, 1Η), 6,67 (б, 2Н, 1=8,5
- 38 024118
Гц), 4,40-4,20 (т, 6Н), 3,94 (5, 6Н), 3,82 (5, 3Н), 3,61-3,50 (т, 2Н), 3,40-3,30 (т, 2Н), 2,47-2,40 (т, 2Н).
13С ЯМР: (СПС13, 100 МГц) δ 162.5 (имин метин), 161,3, 161,1, 159,3, 156,0, 151,1, 148,1, 146,2,
140,3, 126,2 (метин), 123,2, 122,0, 120,5 (метин), 119,4, 115,2 (метин), 114,3 (метин), 111,9 (метин), 111,2 (метин), 65,5 (метилен), 56,2 (метокси), 55,4 (метокси), 53,9 (метин), 35,6 (метилен), 28,9 (метилен).
Пример 2
(a) (8)-2-(4-аминофенил)-7-метокси-8-(5-((8)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5,11-диоксо-10-((2(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-илокси) пентилокси)-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5,11(10Н, 11аН)дион (12).
Твердый РД(РРЬ3)4 (32 мг, 27,7 мкмоль) добавляли в перемешиваемый раствор бис-трифлата 8Ь (1,04 г, 0,91 ммоль) в толуоле (10 мл), ЕЮН (5 мл) и 4-метоксифенилбороновой кислоты (0,202 г, 1,32 ммоль), Ыа2СО3 (0,169 г, 1,6 ммоль) в Н2О (5 мл) при 30°С. Реакционную смесь оставляли перемешиваться в атмосфере азота в течение 20 ч. Дополнительно добавляли твердый 4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2диоксаборолан-2-ил)анилин (0,203 г, 0,93 ммоль) и Ыа2СО3 (0,056 г, 0,53 ммоль), затем твердый РД(РРЬ3)4 (10 мг, 8,6 мкмоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться в атмосфере азота в течение еще 20 ч. Результаты ЖХ/МС подтвердили образование целевого продукта. Добавляли ЕЮАс (100 мл) и Н2О (100 мл), водную фазу отделяли и экстрагировали ЕЮАс (3x30 мл). Объединенные органические слои промывали Н2О (100 мл), солевым раствором (100 мл), сушили (Мд8О4), фильтровали и упаривали с получением темно-коричневой маслянистой жидкости. Маслянистую жидкость растворяли в ДХМ и наносили на картридж с 10 г 8СХ-2, предварительно уравновешенный при помощи ДХМ (1 об.). Картридж промывали ДХМ (3 об.), МеОН (3 об.), неочищенный продукт элюировали 2 М ХН3 в МеОН (2 об.). Очистка путем флэш-хроматографии (50% н-гексан: 50% ЕЮАс 20% н-гексан: 80% ЕЮАс) приводила к получению чистого димера 12 в виде желтой пены (0,16 г, 34%).
Данные анализа: [α]2ζ = +388° (с = 0,22, СНС13); 'Н ЯМР: (СОС13, 400 МГц) δ 7,39 (5, 2Н), 7,35 (Д, 2Н, 1=12,8 Гц), 7,32 (Ь5, 1Н), 7,26-7,23 (т, 5Н), 6,89 (Д 2Н, 1=8,8 Гц), 6,66 (Д 2Н, 1=8,5 Гц), 5,55 (Д 2Н, 1= 10,0 Гц), 4,73 (Д 1Н, 1=10,0 Гц), 4,72 (Д 1Н, 1=10,0 Гц), 4,62 (1Д 2Н, 1=3,2, 10,4 Гц), 4,15-4,05 (т, 4Н), 4,00-3,85 (т, 8Н), 3,82 (5, 3Н), 3,77-3,63 (т, 4Н), 3,20-3,05 (т, 2Н), 2,05-1,95 (т, 4Н), 1,75-1,67 (т, 2Н), 1,01-0,95 (т, 4Н), 0,03 (5, 18Н);
МС (Е8+) т/ζ (относительная интенсивность) 1047 ([М+ Н]+, 45).
(b) (8)-2-(4-аминофенил)-7-метокси-8-(5-((8)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро1Н-пирроло [2,1-с][1,4]беизодиазепин-8-илокси)пентилокси)-1Н-пирроло [2,1 -с] [ 1,4]бензодиазепин5(11аН)-он (13).
Свежий ЫВН4 (66 мг, 3,04 ммоль) добавляли в перемешиваемый раствор 8ЕМ-дилактама 12 (428 мг, 0,42 ммоль) в ТГФ (3 мл) и ЕЮН (3 мл) при 0°С (ледяная баня). Ледяную баню удаляли и реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры (интенсивное газообразование). Через 2 ч анализ ЖХ/МС подтвердил полное израсходование исходных реагентов. Реакционную смесь выливали на лед (50 мл) и оставляли нагреваться до комнатной температуры при перемешивании. Водную смесь экстрагировали ДХМ (3x50 мл) и объединенные органические слои промывали Н2О (50 мл), солевым раствором (50 мл), сушили (Мд8О4) и концентрировали в вакууме. Полученный остаток обрабатывали ДХМ (2 мл), ЕЮН (5 мл), Н2О (2,5 мл) и силикагелем (3,7 г). Вязкую смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 3 дней. Смесь фильтровали через воронку с фильтром из пористого стекла и остаток с оксидом кремния промывали 90% СНС13: 10% МеОН (~250мл) до полного исчезновения УФ-свечения элюента. Органическую фазу сушили (Мд8О4), фильтровали и упаривали в вакууме с получением неочищенного вещества. Неочищенный продукт очищали путем флэш-хроматографии (99,5% СНС13: 0,5% МеОН - 97,5% СНС13: 2,5% МеОН с шагом 0,5%) с получением чистого димера ПБД 13, содержащего С2/С2' арильные заместители, (59 мг, 52%).
Данные анализа: [α]28Β = +760° (с = 0,14, СНС13); ' Н ЯМР (400 МГц, δ 7,89 (Д 1Н, 1=4,0 Гц),
7,87 (Д 1Н, 1=4,0 Гц), 7,52 (5, 2Н), 7,39 (Ь5, 1Н), 7,37-7,28 (т, 3Н), 7,22 (Д 2Н, 1=8.4 Гц), 6,91 (Д 2Н, 1=8,8 Гц), 6,815 (5, 1Н), 6,81 (5, 1Н), 6,68 (Д 2Н, 1=8,4 Гц), 4,45-4,35 (т, 2Н), 4,2-4,0 (т, 4Н), 3,94 (5, 6Н), 3,853,7 (5, 3Н), 3,65-3,50 (т, 2Н), 3,45-3,3 (т, 2Н), 2.05-1,9 (т, 4Н), 1,75-1,65 (т, 2Н);
МС (Е8+) (относительная интенсивность) 754,6 ([М + Н]+, 100), (Е8-) (относительная интенсив- 39 024118 ность) 752,5 ([М - Н]-, 100). Пример 3
(a) ^)-2-(тиен-2-ил)-7-метокси-8-(3-(^)-7-метокси-2-(трифторметансульфонилокси)-5,11-диоксо-10((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8илокси)пропилокси)-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин5,11(10Н,11аН)-дион (14).
Твердый Рб(РРЬ3)4 (41 мг, 0,036 ммоль) добавляли в перемешиваемый раствор бис-трифлата 8а (1 г, 0,9 ммоль) в толуоле (10 мл), ΕΐΟΗ (5 мл) и тиен-2-илбороновой кислоты (149 мг, 1,16 ммоль), Ν;·ι2ί'.Ό3 (152 мг, 1,43 ммоль) в Η2Ο (5 мл). Реакционную смесь оставляли перемешиваться в атмосфере азота в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель удаляли путем выпаривания в вакууме, а полученный остаток обрабатывали Η2Ο (100 мл) и ΕΐΟАс (100 мл). Водный слой экстрагировали в ΕΐΟАс (2x30 мл) и объединенные органические слои промывали Η2Ο (50 мл), солевым раствором (50 мл), сушили (Μ§δΟ4), фильтровали и выпаривали в вакууме с получением неочищенного продукта, который очищали путем флэш-хроматографии (80 гексан: 20 ΕΐΟАс 50 гексан: 50 БЮАс) с получением димера 14 (188 мг, выход 20%).
Данные анализа: ЖХ/МС КТ 4,27 мин, 1051 (М + Н); 1Н ЯМР (400 МГц, СОС1;) δ 7,36 (5, 1Н), 7,31 (Ь8, 1Н), 7,27 (Ь5, 1Н), 7,26-7,23 (т, 2Н), 7,22-7,17 (т, 1Н), 7,12 (Ь5, 1Н), 7,02-6,96 (т, 2Н), 5,50 (ά, 1=10,0 Гц, 2Н), 7,75 (ά, 1=10,0 Гц, 2Н), 4,65-4,55 (т, 2Н), 4,37-4,13 (т, 4Н), 4,00-3,85 (т, 8Н), 3,8-3,6 (т, 4Н), 3,20-3,10 (т, 2Н), 2,50-2,35 (т, 2Н), 1,0-0,9 (т, 4Н), 0 (5, 18Н).
(b) ^)-2-(тиен-2-ил)-7-метокси-8-(3-(^)-7-метокси-2-(трифторметансульфонилокси)-5,11-диоксо10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8илокси)пентилокси)-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-1Н-пирроло [2,1 -с] [ 1,4]бензодиазепин5,11(10Н,11аН)-дион (15).
Твердый Ρά(ΡΡΗ3)4 (7,66 мг, 6,63 мкмоль) добавляли в перемешиваемый мутный раствор соединения 14 (174 мг, 0,17 ммоль), Ν;·ι2ί.’Ο3 (28 мг, 0,22 ммоль) и 4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2ил)анилина (47 мг, 0,22 ммоль) в толуоле (2-5 мл), ΕίΟΗ (1,25 мл) и Н^ (125 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь оставляли перемешиваться в атмосфере Ν2 в течение 24 ч, после чего реакцию считали завершенной на основании присутствия основного пика в спектре ЖХ/МС (при 3,97 мин, Ρν=1016, Μ+№) и данных анализа ТСХ (ΕΐΟΑφ. Растворитель удаляли путем выпаривания в вакууме, полученный остаток обрабатывали ΕίΟΑс (60 мл) и Н^ (30 мл). Слои разделяли и органическую фазу промывали Н^ (20 мл), солевым раствором (30 мл), сушили (Μ§δΟ4), фильтровали и упаривали в вакууме с получением неочищенного продукта (123 мг, выход 75%).
Данные анализа: ЖХ/МС КТ 3,98 мин, площадь 100%, 994 (М + Н); 1Н ЯМР (400 МГц, СПС13) δ 7,40 (ά, 1=5,3 Гц, 2Н), 7,30 (ΐ, 1=1,70 Гц, 1Н), 7,29-7,27 (т, 3Н), 7,25 (ά, 1=8,5 Гц, 2Н), 7,21 (άά, 1=1,4, 4,73 Гц, 1Н), 7,03-6,97 (т, 2Н), 6,66 (ά, 1=8,5 Гц, 2Н), 5,52 (ά, 1=10,0 Гц, 2Н), 4,78 ( ά, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,77 (ά, 1= 10,0 Гц, 1Н), 4,62 (άά, 1=3,4, 10,5 Гц, 1Н), 4,59 (άά, ΐ=3,40, 10,6 Гц, 1Н), 4,30 (ΐ, 1=5,85 Гц, 4Н), 3,85-4,03 (т, 8Н), 3,84-3,64 (т, 6Н), 3,18 (άάά, 1=2,2, 10,5, 16,0 Гц, 1Н), 3,11 (άάά, 1=2,2, 10,5, 16,0 Гц, 1Н), 2,44 (р, 1=5,85 Гц, 2Н), 0,98 (ΐ, 1=1,5 Гц, 4Н), 0 (5, 18Н).
(c) ^)-2-(тиен-2-ил)-7-метокси-8-(3-(^)-7-метокси-2-(4-аминофенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Нпирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-илокси)пропилокси)-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5(11аН)он (16).
Свежий ЫВН4 (47 мг, 2,22 ммоль) добавляли в перемешиваемый раствор δΕΜ-дилактама 15 (110 мг, 0,11 ммоль) в сухом ТГФ (3 мл) и ΕΐΟΗ (3 мл) при 0°С (ледяная баня). Ледяную баню удаляли и реакционную смесь перемешивали в атмосфере Ν2 в течение 1 ч. Анализ ЖХ/МС реакционной смеси подтвердил образование значительного количества целевого продукта (пик при 2,57 мин) (1=69,32), Ρ\ν=702. Μ+Н, и продукта, содержащего только одну иминную группу. Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 1 ч, после чего не наблюдали дальнейшего протекания реакции согласно результатам анализа ЖХ/МС. Реакционную смесь выливали на лед, перемешивали и оставляли нагреваться до ком- 40 024118 натной температуры. После обработки ДХМ (50 мл) и водой (50 мл) водную фазу экстрагировали в ДХМ (3x20 мл). Объединенные органические слои промывали Н2О (50 мл), солевым раствором (50 мл) и растворитель удаляли путем выпаривания в вакууме при пониженном давлении.
Полученный остаток растворяли в ДХМ (5 мл), ЕЮН (15 мл) и Н2О (7 мл), затем обрабатывали силикагелем (5 г). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 48 ч. Оксид кремния удаляли путем фильтрования через воронку с фильтром из пористого стекла, а остаток промывали 90:10 СНС13:МеОН (100 мл). В фильтрат добавляли Н2О (50 мл) и разделяли слои (после встряхивания). Водный слой экстрагировали в СНС13 (2x30 мл) и Н2О (50 мл), солевом растворе (50 мл), сушили (М§§О4), фильтровали и упаривали в вакууме с получением неочищенного продукта. Очистка путем флэш-хроматографии (СНС13 98% СНС13: 2% МеОН) приводила к получению продукта (41 мг, 53%).
Данные анализа ЖХ/МС КТ 2,55 мин, 702 (М+Н).
Пример 4
(a) (8)-2-(4-метоксифенил)-7-метокси-8-(3-((8)-7-метокси-2-(трифторметилсульфонил)-5,11-диоксо10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8илокси)пропилокси)-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин5,11(10Н, 11аН)-дион (17).
Твердую 4-метоксибензолбороновую кислоту (0,388 г, 2,55 ммоль) добавляли в раствор 8ЕМзащищенного бис-трифлата 8а (3,0 г, 2,69 ммоль), карбоната натрия (426 мг, 4,02 ммоль) и тетракситрифенилфосфинпалладия (0,08 ммоль) в толуоле (54,8 мл), этаноле (27 мл) и воде (27 мл). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь затем обрабатывали этилацетатом и водой. Органический слой промывали водой и солевым раствором и сушили над сульфатом магния. Избыток растворителя удаляли на роторном испарителе при пониженном давлении, а полученный остаток подвергали очистке колоночной флэш-хроматографией (силикагель; градиентное элюирование ЕЮАс/гексан 30/70 35/65 40/60 45/55) для удаления непрореагировавшего бис-трифлата (0,6 г). Удаление избытка элюента из выбранных фракций приводило к получению продукта сочетания, содержащего 4-метоксифенил (1,27 г, 1,18 ммоль, 41%).
ЖХ/МС КТ 4,30 мин, 1076 (М + Н); 1Н ЯМР (400 МГц, δ 7,41 (5, 1Н), 7,39 (б, 1=8,8 Гц, 2Н),
7,35 (5, 1Н), 7,34 (Ь8, 1Н), 7,29 (5, 1Н), 7,16 (1, 1=1,9 Гц, 1Н), 6,90 (б, 1=8,8 Гц, 2Н), 5,53 (б, 1=10,0 Гц, 2Н), 4,79 (б, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,78 (б, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,66-4,60 (т, 2Н), 4,30 (1, 1=5,7 Гц, 4Н), 4,0-3,94 (т, 2Н), 3,93 (5, 3Н), 3,92 (5, 3Н), 3,84 (5, 3Н), 3,83-3,60 (т, 4Н), 3,22-3,10 (т, 2Н), 2,45 (1, 1=5,9 Гц, 2Н), 1,05-0,94 (т, 4Н), 0 (5, 18Н).
(b) (8)-2-(3-аминофенил)-7-метокси-8-(3-((8)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5,11-диоксо-10-((2(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-илокси) пропилокси)-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин5,11(10Н,11аН)-дион (18).
Твердую 3-аминобензолбороновую кислоту (0,143 г, 0,92 ммоль) добавляли в раствор монотрифлата 17 (0,619 г, 0,58 ммоль), карбоната натрия (195 мг, 1,84 ммоль) и тетракис-трифенилфосфинпалладия (26,6 мг, 0,023 ммоль) в толуоле (10 мл), этаноле (5 мл) и воде (5 мл). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи при 30°С. Реакционную смесь затем обрабатывали этилацетатом и водой. Органический слой промывали водой и солевым раствором и сушили над сульфатом магния. Избыток растворителя удаляли на роторном испарителе при пониженном давлении и полученный остаток подвергали очистке колоночной флэш-хроматографией (силикагель; градиентное элюирование Е1ОАс/гексан 70/30 85/15). Удаление избытка элюента из выбранных фракций приводило к получению целевого продукта (0,502 г, 0,49 ммоль, 85%).
ЖХ/МС КТ 4,02 мин, 1019 (М + Н); 1Н ЯМР (400 МГц, δ 7,38-7,35 (т, 4Н), 7,33 (Ь5, 1Н), 7,30 (Ь5, 1Н), 7,25 (5, 2Н), 7,10 (1, 1=7,8 Гц, 1Н), 6,88-6,80 (т, 3Н), 6,72 (Ь5, 1Н), 6,57 (бб, 1=7,9, 1,8 Гц, 1Н), 5,50
- 41 024118 (ά, 1=10,0 Гц, 2Н), 4,75 (ά, 10,0 Гц, 2Н), 4,58 (άά, 1=10,6, 3,3 Гц, 2Н), 4,27 (ί, 1=5,8 Гц, 4Н), 3,95-3,91 (т, 2Н), 3,90 (5, 6Н), 3,80 (5, 3Н), 3,77-3,60 (т, 6Н), 3,15-3,05 (т, 2Н), 2,41 (р, 1=5,8 Гц, 2Н), 0,95 (ί, 1=8,25 Гц, 4Н), 0 (5, 18Н).
(с) (§)-2-(3-аминофенил)-7-метокси-8-(3-((§)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро1Н-пирроло [2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-илокси)пропилокси)-1Н-пирроло [2,1 -с] [ 1,4]бензодиазепин5(11аН)-он (19).
Раствор супергидрида (0,56 мл, 0,56 ммоль, 1,0 М в ТГФ) добавляли по каплям в раствор δΕΜдилактама 18 (0,271 г, 0,27 ммоль) в сухом ТГФ (10 мл) при -78°С в атмосфере азота. Через 1 ч добавляли дополнительную аликвоту раствора супергидрида (0,13 мл, 0,13 ммоль) и реакционную смесь оставляли перемешиваться дополнительно в течение 0,5 ч, после чего анализ ЖХ/МС подтвердил завершение процесса восстановления. Реакционную смесь разбавляли водой и оставляли нагреваться до комнатной температуры. Реакционную смесь обрабатывали хлороформом и водой, слои разделяли и водный слой экстрагировали дополнительным количеством хлороформа (эмульсии). Затем объединенную органическую фазу промывали солевым раствором и сушили над сульфатом магния. Продукт восстановления растворяли в метаноле, хлороформе и воде и оставляли перемешиваться в присутствии силикагеле в течение 72 ч. Неочищенный продукт подвергали очистке путем колоночной флэш-хроматографии (метанол/хлороформ, градиент) с получением целевого имина (150 мг, 0,21 ммоль, 77%) после удаления избытка элюента из выбранных фракций.
ЖХ/МС КТ 2,63 мин, 97% площадь, 726 (М + Н); Ή ЯМР (400 МГц, СИС13) δ 7,85 (ά, 1=3,9 Гц, 1Н), 7,84 (ά, 1= 3,9 Гц, 1Н), 7,50 (5, 1Н), 7,49 (5, 1Н), 7,42 (5, 1Н), 7,36 (5, 1Н), 7,32 (ά, 1=7,3 Гц, 2Н), 7,11 (ί, (ά, 1=7,8 Гц, 1Н), 6,90-6,80 (т, 4Н), 6,77 (ά, 1=7,9 Гц, 1Н), 4,40-4,20 (т, 6Н), 3,92 (5, 6Н), 3,80 (5, 3Н), 3,603,27 (т, 6Н), 2,48-2,29 (т, 2Н).
(a) (11 δ,1 ^)-2,2,2-трихлорэтил 11-(трет-бутилдиметилсилилокси)-8-(5-((1^, 11;-^)-11-(третбутилдиметилсилилокси)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5-оксо-10-((2,2,2-трихлорэтокси)карбонил)5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-илокси)пентилокси)-7-метокси-5-оксо-2(трифторметилсульфонилокси)-11,11а-дигидропирроло [2,1-с][1,4]бензодиазепин-10(5Н)-карбоксилат 21.
Твердую 4-метоксибензолбороновую кислоту (59 мг, 0,39 ммоль) добавляли в раствор Тгосзащищенного бис-трифлата (соединение 44, \УО 2006/111759) (600 мг, 0,41 ммоль), карбоната натрия (65 мг, 0,61 ммоль) и тетракис-трифенилфосфинпалладия (0,012 ммоль) в толуоле (10,8 мл), этаноле (5,4 мл) и воде (5,4 мл). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь затем обрабатывали этилацетатом и водой. Органический слой промывали водой и солевым раствором и сушили над сульфатом магния. Избыток растворителя удаляли на роторном испарителе при пониженном давлении и полученный остаток подвергали очистке колоночной флэшхроматографией (силикагель; градиентное элюирование ЕЮАс/гексан 20/80 30/70 40/60 60/40) для удаления непрореагировавшего бис-трифлата. Удаление избытка элюента из выбранных фракций приводило к получению продукта сочетания, содержащего 4-метоксифенил (261 мг, 0,18 ммоль, 46%).
ЖХ/МС КТ, 4,17 мин, 1427 (М + Н); Ή ЯМР (400 МГц, СИС13) δ 7,38 (5, 1Н), 7,33 (5, 1Н), 7,31 (5, 1Н), 7,30 (5, 1Н), 7,25 (5, 1Н), 7,20 (Ь5, 1Н), 6,92 (ά, 1=8,6 Гц, 2Н), 6,77 (ά, 1=8,7 Гц, 2Н), 6,0-5,90 (т, 2Н), 5,25 (ά, 1=12,0 Гц, 1Н), 5,24 (ά, 1=12,0 Гц, 1Н), 4,24 (ά, 1=12,0 Гц, 1Н), 4,22 (ά, 1=12,0 Гц, 1Н), 4,18-4,08 (т, 2Н), 4,07-3,89 (т, 10Н), 3,81 (5, 3Н), 3,44-3,25 (т, 2Н), 2,85 (ά, 1=16,6 Гц, 2Н), 2,05-1,90 (т, 4Н), 1,76-1,64 (т, 2Н), 0,93 (5, 9Н), 0,90 (5, 9Н), 0,30 (5, 6Н), 0,26 (5, 6Н).
(b) (1^.11;^)-2.2.2-трихлорэтил 11-(трет-бутилдиметилсилилокси)-8-(5-((1^,1^)-11-(третбутилдиметилсилилокси)-2-(4-гидроксифенил)-7-метокси-5-оксо-10-((2,2,2-трихлорэтокси)карбонил)5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-илокси)пентилокси)-7-метокси-2-(4метоксифенил)-5-оксо-11,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-10(5Н)-карбоксилат 22.
Применяли способ сочетания по Сузуки, описанный на стадии (а) синтеза соединения 21. Соединение 20 (62,5 мг, 0,044 ммоль) обрабатывали 1 экв. 4-гидроксибензолбороновой кислоты (10 мг) при 30°С в течение ночи с получением целевого соединения после фильтрования через подложку с силикагелем (40 мг, 0,029 ммоль, выход 66%). Соединение использовали на следующей стадии без предварительной очистки.
ЖХ/МС КТ 4,27 мин, 1371 (М+Н).
- 42 024118 (с) (8)-2-(4-гидроксифенил)-7-метокси-8-(5-((8)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5-оксо-5,11адигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-илокси)пентилокси)-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5(11аН)-он 23.
Пару кадмий/свинец (100 мг, О Эопд е1 а1., ТеКаЬеШоп Ьейеге νοί. 36, 155ие 32, 5681-5682, 1995) добавляли в раствор соединения 21 (40 мг, 0,029 ммоль) в ТГФ (1 мл) и раствором ацетата аммония (1н., 1 мл) и реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 1 ч. Реакционную смесь обрабатывали хлороформом и водой, фазы разделяли и водную фазу экстрагировали хлороформом. Объединенные органические слои промывали солевым раствором и сушили над сульфатом магния. Концентрировали на роторном испарителе при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который подвергали очистке колоночной хроматографией (силикагель, 0 4% МеОИ/СИСЬ). Удаление избытка элюента на роторном испарителе при пониженном давлении приводило к получению целевого имина (17 мг, 0,023 ммоль, 79%).
ЖХ/МС КТ, 2,20 мин, 755 (М ' Н); ' Н ЯМР (400 МГц, С1)С1;) δ 7,89 (ά, ΐ=3,94 Гц, 1Η), 7,89 (ά, ΐ= 4,00 Гц, 1Η), 7,53 (5, 1Η), 7,52 (5, 1Η), 7,38 (ά, ΐ=8,7 Гц, 2Н), 7,33 (ά, ΐ=8,6 Гц, 2Н), 7,28 (5, 1Η), 6,90 (ά, ΐ= 8,7 Гц, 2Η), 6,84 (ά, ΐ=8,6 Гц, 2Η), 6,82 (5, 1Η), 6,81 (5, 1Η), 5,68 (Ь5, 1Η), 4,50-4,30 (т, 2Η), 4,22-4,00 (т, 4Η), 3,93 (5, 6Η), 3,82 (5, 3Η), 3,69-3,45 (т, 2Η), 3,44-3,28 (т, 2Η), 2,64-1,88 (т, 4Η), 1,77-1,62 (т, 2Η).
Пример 6
(a) (118,11а8)-2,2,2-трихлорэтил 11-(трет-бутилдиметилсилилокси)-8-(5-((118,11а8)-11-(третбутилдиметилсилилокси)-2-(4-формилфенил)-7-метокси-5-оксо-10-((2,2,2-трихлорэтокси)карбонил)5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-илокси)пентилокси)-7-метокси-2-(4метоксифенил)-5-оксо-11,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-10(5Н)-карбоксилат 24.
Способ сочетания по Сузуки, описанный в примере 5, стадия (а), применяли для синтеза соединения 24. Соединение 21 (62,5 мг, 0,044 ммоль) обрабатывали 1 экв. 4-формилбензолбороновой кислоты (10,5 мг) при комнатной температуре в течение ночи с получением после фильтрования через подложку с силикагелем целевого соединения (45 мг, 0,033 ммоль, выход 75%). Соединение использовали на следующей стадии без предварительной очистки.
ЖХ/МС КТ 4,42 мин, 1383 (М'Н).
(b) 4-((8)-7-метокси-8-(5-((8)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1с][1,4]бензодиазепин-8-илокси)пентилокси)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин2-ил)бензальдегид 25.
Снятие защиты соединения 24 проводили при помощи способа, описанного в примере 5, стадия (с), с получением целевого соединения (18 мг, 0,023 ммоль, 79%).
ЖХ/МС КТ, 3,18 мин, 768 (М ' Н); Ή ЯМР (400 МГц, СОС1;) δ 9,98 (5, 1Η), 7,91 (ά, 1=3,90 Гц, 1Η), 7,90-7,80 (т, 3Η), 7,68 (5, 1Η), 7,60-7,45 (т, 4Η), 7,39 (5, 1Η), 7,33 (ά, ΐ=8,7 Гц, 1Η), 6,90 (ά, ΐ=8,7 Гц, 2Η), 6,83 (5, 1Η), 6,82 (5, 1Η), 4,55-4,44 (т, 1Η), 4,43-4,36 (т, 1Η), 4,23-4,00 (т, 4Η), 3,95 (5, 3Η), 3,94 (5, 3Η), 3,82 (5, 3Η), 3,66-3,51 (т, 2Η), 3,50-3,34 (т, 2Η), 2,05-1,87 (т, 4Η), 1,76-164 (т, 2Η).
(а) (118,11а8)-2,2,2-трихлоэтил 2-(3-аминофенил)-11-(трет-бутилдиметилсилилокси)-8-(5((118,11а8)-11-(трет-бутилдиметилсилилокси)-7-метокси-5-оксо-10-((2,2,2-трихлорэтокси)карбонил)-2- 43 024118 (трифторметилсульфонилокси)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8илокси)пентилокси)-7-метокси-5-оксо-11,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-10(5Н)карбоксилат 26.
Способ сочетания по Сузуки, описанный в примере 5, стадия (а), применяли для синтеза соединения 26 с использованием 3-аминобензолбороновой кислоты с получением целевого соединения с выходом 41% (230 мг, 0,163 ммоль).
ЖХ/МС КТ 4,28 мин, 1411 (М + Н); !Н ЯМР (400 МГц, СПС13) δ 7,44 (Ьз, 1Н), 7,29 (з, 1Н), 7,25 (з, 1Н), 7,20 (з, 1Н), 7,16 (ΐ, 1=7,9 Гц, 1Н), 6,84-6,73 (т, 3Н), 6,70 (Ьз, 1Н), 6,62 (άά, 1=7,9, 1,7 Гц, 1Н), 6,666,58 (т, 2Н), 5,25 (ά, 1=12,0 Гц, 1Н), 5,24 (ά, 1=12,0 Гц, 1Н), 4,24 (ά, 1=12,0 Гц, 1Н), 4,22 (ά, 1=12,0 Гц, 1Н), 4,17-4,07 (т, 2Н), 4,08-3,89 (т, 10Н), 3,43-3,28 (т, 2Н), 2,85 (ά, 1=1,65 Гц, 2Н), 2,07-1,90 (т, 4Н), 1,781,63 (т, 2Н), 0,94 (з, 9Н), 0,90 (з, 9Н), 0,30 (з, 6Н), 0,27 (з, 6Н).
(b) (118,11а8)-2,2,2-трихлорэтил 2-(3-аминофенил)-11-(трет-бутилдиметилсилилокси)-8-(5((118,11а8)-11-(трет-бутилдиметилсилилокси)-2-(4-(3-(диметиламино)пропокси)фенил)-7-метокси-5оксо-10-((2,2,2-трихлорэтокси)карбонил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4] бензодиазепин8-илокси)пентилокси)-7-метокси-5-оксо-11,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-10(5Н)карбоксилат 27.
Твердый пинаколиновый эфир 4-[3-(диметиламино)пропокси]бензолбороновой кислоты (25 мг, 0,082 ммоль) добавляли в раствор соединения 26 (73 мг, 0,052 ммоль), карбоната натрия (18 мг, 0,17 ммоль) и тетракис-трифенилфосфинпалладия (3 мг) в толуоле (1 мл), этаноле (0,5 мл) и воде (0,5 мл). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь затем обрабатывали этилацетатом и водой. Органический слой промывали водой и солевым раствором и сушили над сульфатом магния. Избыток растворителя удаляли на роторном испарителе при пониженном давлении и полученный остаток элюировали через подложку с силикагелем смесью хлороформ/метанол. Удаление избытка элюента из выбранных фракций приводило к получению продукта сочетания, содержащего 4-метоксифенильный заместитель (50 мг, 0,035 ммоль, 67%).
ЖХ/МС КТ 4,12 мин, 1440 (М+Н).
(c) (8)-2-(3-аминофенил)-8-(5-((8)-2-(4-(3-(диметиламино)пропокси)фенил)-7-метокси-5-оксо-5,11адигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-илокси)пентилокси)-7-метокси-1Н-пирроло[2,1с][1,4] бензодиазепин-5 (11аН)-он 28.
Снятие защиты соединения 27 проводили при помощи способа, описанного в примере 5, стадия (с), с получением целевого соединения. Реакционную смесь обрабатывали ДХМ и водным гидрокарбонатом натрия (эмульсия) и неочищенный продукт очищали градиентной колоночной хроматографией на силикагеле (5% метанол/хлороформ 35% метанол/хлороформ) с получением целевого асимметричного имина ПБД (50 мг, 0,018 ммоль, 58%).
ЖХ/МС КТ 2,55 мин, 826 (М + Н); !Н ЯМР (400 МГц, СПС13) δ 7,92 - 7,82 (т, 2Н), 7,52 (Ьз, 2Н), 7,45 (Ьз, 1Н), 7,39 (Ьз, 1Н), 7,31 (ά, 1=8,6 Гц, 2Н), 7,14 (ΐ, 1=7,8 Гц, 1Н), 6,89 (ά, 1=8,6 Гц, 2Н), 6,85 - 6,75 (т, 3Н), 6,72 (Ьз, 1Н), 6,60 (ά, 1=8,0 Гц, 1Н), 4,46 - 4,33 (т, 2Н), 4,21 - 3,98 (т, 6Н), 3,94 (з, 6Н), 3,63 - 3,50 (т, 2Н), 3,43 - 3,29 (т, 2Н), 2,64 - 2,48 (т, 2Н), 2,34 (з, 6Н), 2,10-1,89 (т, 6Н), 1,57 (т, 2Н).
Пример 8
(а) (118,11а8)-2,2,2-трихлорэтил 2-(3-аминофенил)-11-(трет-бутилдиметилсилилокси)-8-(5((118,11а8)-11-(трет-бутилдиметилсилилокси)-7-метокси-2-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)фенил)-5-оксо-10((2,2,2-трихлорэтокси)карбонил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8илокси)пентилокси)-7-метокси-5-оксо-11,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-10(5Н)карбоксилат 29.
- 44 024118
Способ согласно примеру 7, стадия (Ь), применяли для получения целевого продукта (58 мг, 0,040 ммоль, 78%) после фильтрования через подложку с силикагелем (1/3 метанол/хлороформ) и удаления избытка растворителя на роторном испарителе при пониженном давлении.
ЖХ/МС КТ 4,08 мин, 1439 (М+Н).
(Ь) ^)-2-(3-аминофенил)-7-метокси-8-(5-(^)-7-метокси-2-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)фенил)-5оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-илокси)пентилокси)-Ш-пирроло[2,1с][1,4] бензодиазепин-5 (11 аН)-он 3 0.
Способ согласно примеру 7, стадия (с), применяли для снятия защиты соединения 29. Неочищенный продукт очищали градиентной хроматографией на силикагеле (2% метанол/хлороформ 35% метанол/хлороформ) с получением целевого асимметричного имина ПБД (18 мг, 0,022 ммоль, 59%).
ЖХ/МС КТ 2,52 мин, 823 (М + Н); 1Η ЯМР (400 МГц, СИСЬ) δ 7,80 (б, 1=3,8 Гц, 2Н), 7,45 (к, 2Н), 7,38 (к, 1Η), 7,30 (к, 1Η), 7,23 (б, 1=8,6 Гц, 2Н), 7,07 (ί, 1=7,8 Гц, 1Η), 6,83 (б, 1=8,6 Гц, 2Н), 6,79-6,89 (т, 3Η), 6,65 (к, 1Η), 6,54 (б, 1=7,9 Гц, 1Н), 4,40-4,24 (т, 2Н), 4,15-3,93 (т, 4Н), 3,87 (к, 6Н), 3,56-3,42 (т, 2Н), 3,37-3,23 (т, 2Н), 3,22-3,08 (т, 4Н), 2,61-2,41 (т, 4Н), 2,29 (к, 3Η), 1,98-1,80 (т, 4Н), 1,67-1,54 (т, 2Н).
Пример 9
(a) ^)-2-(4-(аминометил)фенил)-7-метокси-8-(3-(^)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5,11-диоксо-10((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Ы-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8илокси)пропилокси)-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-1Ы-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин5,11(10Н,11аН)-дион 31.
Твердый гидрохлорид 4-аминометилбензолбороновой кислоты (0,111 г, 0,59 ммоль) добавляли в раствор соединения 17 (0,394 г, 0,37 ммоль), карбоната натрия (175 мг, 1,654 ммоль) и тетракистрифенилфосфинпалладия (28,0 мг, 0,024 ммоль) в толуоле (10 мл), этаноле (5 мл) и воде (5 мл). Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение ночи при 30°С. На следующий день реакционную смесь дополнительно нагревали в течение 3 ч при 70°С. Реакционную смесь затем обрабатывали этилацетатом и водой. Органический слой промывали водой и солевым раствором и сушили над сульфатом магния. Избыток растворителя удаляли на роторном испарителе при пониженном давлении, а полученный остаток очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; градиентное элюирование ЕЮАс/гексан 2/98 15/85). Удаление избытка элюента из выбранных фракций приводило к получению целевого продукта (0,230 мг, 0,22 ммоль, 61%).
ЖХ/МС КТ 3,63 мин, 1034 (М + 2Н); Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО б6) δ 11.7 (к, 2Η), 7,52 (б, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,48 (б, 1=8,7 Гц, 2Н), 7,40 (к, 1Η), 7,50 (б, 1=8,1 Гц, 2Н),7,38-7,19 (т, 5Η) 6,93 (б, 1=8,7 Гц, 2Н), 5,40 (б, 1=2,13 Гц, 1Η), 5,38 (б, 1=2,12 Гц, 1Η), 5,32 (б, 1=10,6 Гц, 2Н), 5,25 (б, 1=10,6 Гц, 2Н), 4,87-4,72 (т, 2Η), 4,35-4,15 (т, 4Η), 3,85 (к, 6Η), 3,79 (к, 3Η), 3,73-3,56 (т, 2Η), 3,55-3,39 (т, 4Η), 3,22-3,02 (т, 2Η), 2,392,23 (т, 2Η), 0,94-0,67 (т, 4Η), -0,06 (к, 18Н).
(b) ^)-2-(4-(аминометил)фенил)-7-метокси-8-(3-(^)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5-оксо-5,11адигидро-Ш-пирроло [2,1-с][1 ,4]бензодиазепин-8-илокси)пропилокси)-1Н-пирроло [2,1-с][1,4]бензодиазепин-5(11аН)-он 32.
Снятие защиты соединения 31 проводили согласно способу из примера 1, стадия (с). Неочищенный продукт очищали пуем градиентной колоночной хроматографией (5/95 30/70 Ме0И/СИС13) с получением продукта в виде смеси метиловых эфиров имина и карбиноламина.
ЖХ/МС КТ 2,58 мин, 740 (М+Н).
- 45 024118
Динатриевая соль (§)-2-(4-аминофенил)-7-метокси-11 (§)-сульфо-8-(3-((§)-7-метокси-11(§)-сульфо2-(4-метоксифенил)-5-оксо-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]-бензодиазепин-8-илокси)пропилокси)-1Н-пирроло [2,1 -с] [ 1,4]бензодиазепин-5(11аН)-она 3 3.
Бисульфит натрия (8,5 мг, 3,1 экв.) добавляли в перемешиваемую суспензию бис-имина 11 (20 мг, 0,036 ммоль) в изопропаноле (4 мл) и воде (2 мл). Реакционную смесь оставляли при интенсивном перемешивании, после чего реакционная смесь становилась прозрачной (примерно через 1 ч). Реакционную смесь переносили в воронку и фильтровали через хлопчатый фильтр (а затем промывали 2 мл воды). Фильтрат быстро замораживали (жидким переносили на баню) и лиофилизировали с получением целевого продукта 33 с количественным выходом.
ЖХ/МС КТ 11,77 мин, 727,2 (М+Н) (масса исходного соединения, бисульфитные аддукты нестабильны в масс-спектрометре); 1Н ЯМР (400 МГц, СОСЪ) δ 7,66-7,55 (т, 5Н), 7,43 (5, 1Н), 7,39 (б, 1=8,66 Гц, 2Н), 7,06 (т, 2Н), 6,93 (б, 1=8,84 Гц, 2Н), 6,54 (т, 2Н), 5,29-5,21 (т, 2Н), 4,32-4,28 (т, 2Н), 4,14-4,20 (т, 4Н), 3,96-3,83 (т, 2Н), 3,77 (5, 3Н), 3,73 (т, 6Н), 3,52-3,43 (т, 2Н), 3,30-3,08 (т, 2Н), 2,24-2,21 (т, 2Н).
Пример 11
(a) (8)-2-(2-аминофенил)-7-метокси-8-(3-(((§)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5,11-диоксо-10-((2(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидропирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)пропокси)-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5,11(10Н,11аН)-дион (103) .
Каталитическое количество тетракис-трифенилфосфинпалладия(0) (11,2 мг) добавляли в смесь моно-трифлата 17 (380 мг), пинаколинового эфира 2-аминофенилбороновой кислоты (124 мг) и карбоната натрия (120 мг) в этаноле (5 мл), толуоле (5 мл) и воде (5 мл). Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение ночи при комнатной температуре и при 40°С до завершения реакции (примерно 2 ч). Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и органический слой промывали водой и солевым раствором. Раствор в этилацетате сушили над сульфатом магния и фильтровали под вакуумом. Удаление этилацетата на роторном испарителе при пониженном давлении приводило к получению неочищенного продукта, который подвергали очистке флэш-хроматографией (силикагель, этилацетат/гексан). Чистые фракции собирали и объединяли. Удаление избытка элюента на роторном испарителе при пониженном давлении приводило к получению чистого продукта 103 (330 мг, выход 86%). ЖХ/МС КТ 4,17 мин, Е§+ 1018,48.
(b) (8)-2-(2-аминофенил)-7-метокси-8-(3-(((§)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидропирроло [2,1-с][1,4] бензодиазепин-8 -ил)окси)пропокси)пирроло [2,1-с][1,4] -бензодиазепин-5 (11 аН)-он (104) .
Раствор супергидрида в сухом тетрагидрофуране (1,0 М, 4,4 экв.) добавляли в раствор 2анилинопроизводного соединения 103 (300 мг) в сухом тетрагидрофуране (5 мл) при -78°С в инертной атмосфере. Так как восстановление протекало медленно, добавляли аликвоту боргидрида лития (20 экв.) и реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры. Воду/лед добавляли в реакционную смесь для гашения непрореагировавших гидридов и реакционную смесь разбавляли дихлорметаном. Органический слой промывали последовательно водой (дважды), лимонной кислотой и солевым раствором. Избыток дихлорметана удаляли на роторном испарителе при пониженном давлении и остаток
- 46 024118 перерастворяли в этаноле и воде и обрабатывали силикагелем в течение 96 ч. Реакционную смесь фильтровали под вакуумом и фильтрат упаривали досуха. Остаток подвергали очистке колоночной флэшхроматографией (силикагель, градиент хлороформ/метанол). Чистые фракции собирали и объединяли, а избыток элюента удаляли на роторном испарителе при пониженном давлении с получением чистого продукта 104 (30 мг, выход 14%). ЖХ/МС КТ: 2,90 мин, Ε8+ 726,09.
Пример 12. Определение цитотоксичности ш х'йго типичных представителей ПБД.
Исследование К562.
Клетки К562 человеческого хронического миелоидного лейкоза выдерживали в среде КРМ1 1640, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 2 мМ глутамина при 37°С во влажной атмосфере, содержащей 5% СО2, и инкубировали с определенной дозой лекарственного средства в течение 1 ч или 96 ч при 37°С без доступа света. Инкубирование прекращали путем центрифугирования (5 мин, 300 г) и клетки промывали один раз средой, не содержащей лекарственное средство. После соответствующей обработки лекарственным средством клетки переносили в 96-луночные микротитрационные планшеты (104 клеток на лунку, 8 лунок на образец). Планшеты затем выдерживали без доступа света при 37°С во влажной атмосфере, содержащей 5% СО2. Исследование основано на способности жизнеспособных клеток восстанавливать желтую растворимую соль тетразолия, бромида 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5дифенил-2Н-тетразолия (МТТ, А1бйсЬ-81дта), до нерастворимого пурпурного осадка формазана. После инкубирования планшетов в течение 4 дней (для достижения примерно 10-кратного увеличения числа контрольных клеток) 20 мкл раствора МТТ (5 мг/мл в фосфатном солевом буфере) добавляли в каждую лунку и планшеты дополнительно инкубировали в течение 5 ч. Планшеты затем центрифугировали в течение 5 мин при 300 г и отбирали среду из клеточной массы, оставляя в лунке 10-20 мкл. ДМСО (200 мкл) добавляли в каждую лунку и образцы перемешивали для достижения полного перемешивания. Затем определяли оптическую плотность при длине волны 550 нм на планшетном анализаторе Тйейек Ми1йксап ΕΜ8Λ и строили кривую зависимости доза-эффект. Для каждой кривой определяли значение 1С50 как дозу, необходимую для снижения итоговой оптической плотности до 50% относительно контрольного значения.
В этом исследовании соединение 13 имело значение 1С50, составляющее 30 пМ.
Исследование А2780.
Родительскую клеточную линию А2780 выращивали в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла (ОМНМ). содержащей ~10% эмбриональной телячьей сыворотки (РС8) и ~1% 200 мМ раствора Ь-глутамина, в колбах Согшпд Се11Ъшб, 75 см2.
190 мкл клеточной суспензии добавляли (1х 104) в каждую лунку в рядах со 2 по 11 96-луночного планшета (Νιιικ 96Р плоскодонный ТС планшет). 190 мкл среды добавляли в каждую лунку в рядах 1 и 12. Среда представляла собой модифицированную по способу Дульбекко среду Игла (ЭМБМ) (которая содержала ~10% эмбриональной телячьей сыворотки (РС8) и ~1% 200 мМ раствора Ь-глутамина).
Планшеты инкубировали в течение ночи при 37°С перед добавлением лекарственного средства, если клетки слипались. Проводили последовательные разбавления 200 мкМ растворов исследуемых соединений (в 100% ДМСО) в 96-луночном планшете. Каждый полученный раствор затем дополнительно разбавляли 1/10 в стерильной дистиллированной воде (8ΌΆ).
В холостые лунки, не содержащие клетки, и контрольные лунки, не содержащие соединение, добавляли 10% ДМСО в количестве 5% (об./об.). Исследуемые планшеты инкубировали при 37°С в 5% СО2 в инкубаторе при высокой относительной влажности в течение 72 ч. После инкубирования раствор МТТ в конечной концентрации, составляющей 1,5 мкМ, добавляли в каждую лунку. Планшеты затем дополнительно инкубировали в течение 4 ч при 37°С в 5% СО2 в инкубаторе при высокой относительной влажности. Среду затем удаляли, а краситель растворяли в 200 мкл ДМСО (99,99%).
Планшеты анализировали при длине волны поглощения 540 нм при помощи планшетного анализатора Нпу1к1оп. Данные анализировали при помощи МюгокоП Εxсе1 и СгарЬРаб Рйкт, в результате чего получали значения 1С50.
В этом исследовании соединение 11 имело значение 1С50, составляющее 11,7 пМ.
Исследование клеток почки и клеточной линии ОМЛ.
Цитотоксичность различных лекарственных соединений в свободной форме исследовали на клеточной линии почечноклеточного рака, 786-0, клеточной линии лимфомы Ходжкина, Ь428, и двух клеточных линий ОМЛ (острый миелоидный лейкоз), НЬ60 и ННР Для 96-часового исследования культивируемые клетки в логарифмической фазе роста высевали на 24 ч в 96-луночные планшеты, содержащие 150 мкл КРМ1 1640, содержащей 20% РВ8. Проводили последовательные разбавления исследуемого соединения (т.е. свободного лекарственного средства) в клеточной культуральной среде до рабочей концентрации 4х; 50 мкл каждого разбавленного раствора добавляли в 96-луночные планшеты. После добавления исследуемого соединения клетки инкубировали с исследуемыми соединениями в течение 4 дней при 37°С. Затем в каждую лунку добавляли резазурин до достижения конечной концентрации 50 мкМ, и планшеты дополнительно инкубировали в течение 4 ч при 37°С. Затем планшеты анализировали, определяя степень снижения содержания красителя на планшетном анализаторе Риыоп НТ (Раскагб 1п- 47 024118
81гитеп18, Мепб1еп, СТ, И8А), длины волн возбуждения и испускания составляли 530 и 590 нм соответственно. Значение 1С50, измеренное в трех повторностях, определяют в настоящем описании как концентрацию, которая приводит к 50% снижению роста клеток по сравнению с контрольными опытами без добавления лекарственного средства.
Согласно приведенной ниже табл. 1 в этом исследовании параанилин 11 имел существенно более высокую активность в отношении этих клеточных линий по сравнению с метаанилином 19.
Таблица 1
Результаты 1С50 для свободных лекарственных средств [нМ]
Свободное лекарственное средство Ь428 786-0 НЬбО НЕЬ
Соединение 11 <0,00001 <0,00001 <0,00001 <0,00001
Соединение 19 1 0,5 0,6 0,2
В приведенной ниже табл. 2 приведена активность соединений 28, 30 и 32 в отношении клеток Ь428, 786-0, НЕЬ, НЬ-60 и МСР-7, а также активность соединения 19 в отношении клеток МСР-7.
Таблица 2
Результаты 1С50 для свободных лекарственных средств [нМ]
Свободное лека ро вен ное средство Ь428 786-0 НЕЬ НЬ-60 МСР-7
Соединение 28 <0,00001 <0,00001 <0,00001 <0,00001 <0,00001
Соединение 30 <0,00001 <0,00001 <0,00001 <0,00001 0,01
Соединение 32 <0,00001 <0,00001 <0,00001 <0,00001 1,0
Соединение 19 5
В приведенной ниже табл. 3 сравнивают активность соединений 23 и 25 и активность соединения 11 в отношении клеток 786-0, Сак1-1, МСР-7, НЬ-60, ТНР-1, НЕЬ и ТР1. Клетки помещали в 150 мкл питательной среды на лунку в 96-луночные планшеты с черными стенками и прозрачным дном (Со81аг, Соттпд) и оставляли отстаиваться в течение 1 ч в биолаборатории, после чего помещали в инкубатор при 37°С, 5% СО2. На следующий день готовили растворы лекарственного средства из исходного раствора в концентрациях до разбавления в 4 раза, а затем проводили 10-кратные последовательные разбавления для получения дозозависимых кривых, построенных по 8 точкам, и добавляли 50 мкл в лунки в двух повторностях. Клетки затем инкубировали в течение 48 ч при 37°С, 5% СО2. Цитотоксичность измеряли путем инкубирования со 100 мкл раствора Се11 ТНег С1о (Рготеда) в течение 1 ч, после чего измеряли люминесценцию на планшетном анализаторе Рикюп НТ (Регк1п Е1тег). Данные обрабатывали при помощи Ехсе1 (Мютокой) и СгарйРаб (Рпкт) с получением кривых зависимости доза-эффект, рассчитывали значения 1С50 и собирали данные.
Таблица 3
Результаты 1С50 для свободных лекарственных средств [нМ]
Свободное лекарственное средство 786-0 СаЫ-1 МСР-7 НЬ-60 ТНР-1 НЕЬ ТР1а
Соединение И 0,4 0,2 1 0,01 1 0,03 1
Соединение 23 0,06 0,02 0,7 0,005 0,4 0,009 0,2
Соединение 25 0,09 0,06 0,8 0,01 0,9 0,02 0,9
В примерах 13-16 следующие соединения имеют номера, показанные ниже
Соединение Альтернативное обозначение
11 37
13 57
19 42
25 95
28 50
30 49
104 66
Пример 13. Синтез лекарственных ПБД, содержащих линкерные группы.
Общая информация. В предложенных ниже примерах все коммерчески доступные безводные растворители применяли без дополнительной очистки. Аналитическую тонкослойную хроматографию проводили на алюминиевых пластинах с неподвижной фазой силикагеля 60 Р254 (ЕМЭ СйетюаЦ ОЛЬк1о\\п, Нью-Джерси). Радиальную хроматографию проводили на приборе СйготаЮйоп (Натк Кекеагсй, Ра1о А1!о, Калифорния). Аналитическую ВЭЖХ проводили с помощью системы подачи растворителя Уапап Рго81аг 210, оборудованной детектором Уапап Рго8!аг 330 РЭЛ. Образцы элюировали через ко- 48 024118 лонку с обращенной фазой С12 Рйепотепех Зупегд1 2,0x150 мм, 4 мкм, 80 А. Кислая мобильная фаза состояла из ацетонитрила и воды, которые содержали 0,05% трифторуксусной кислоты или 0,1% муравьиной кислоты (указано для каждого соединения). Соединения элюировали в линейном градиенте кислым ацетонитрилом в концентрации, составляющей от 5% через 1 мин после ввода образца до 95% через 11 мин, затем в изократическом режиме при концентрации ацетонитрила 95% до 15 мин (скорость потока = 1,0 мл/мин). ЖХ/МС проводили на масс-спектрометре ΖΙΗΩ Мтготакк, соединенным с хроматографом ВЭЖХ НР Адйеп! 1100, оборудованным колонкой с обращенной фазой С12 Рйепотепех Зупегд1 2,0x150 мм, 4 мкм, 80 А. Кислый элюент элюировали в линейном градиенте концентрации ацетонитрила в 0,1% водной муравьиной кислоте, изменяющейся от 5 до 95% в течение 10 мин, затем в изократическом режиме при концентрации ацетонитрила 95% в течение 5 мин (скорость потока = 0,4 мл/мин). Препаративную ВЭЖХ проводили с помощью системы подачи растворителя Уапап РгоЗ1аг 210, оборудованной детектором Уапап РгоЗ1аг 330 РЭА. Продукты очищали на колонке с обращенной фазой С12 Рйепотепех Зупегд1 10,0x250 мм, 4 мкм, 80 А, элюируя 0,1% муравьиной кислотой в воде (растворитель А) и 0,1% муравьиной кислотой в ацетонитриле (растворитель В). Способ очистки включал в себя элюирование с предложенным ниже градиентом соотношения растворителя А и растворителя В: 90:10 от 0 до 5 мин; 90:10 - 10:90 с 5 до 80 мин; затем в изократическом режиме 10:90 в течение 5 мин. Скосроть потока составляла 4,6 мл/мин, детектирование проводили при 254 нм. Спектры ЯМР получали на спектрометре Уапап Метситу 400 МГ ц. Значения констант спин-спинового взаимодействия (Э) даны в герцах.
(З)-2-((З)-2-(6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексанамидо)-3-метилбутанамидо)пропановая кислота (36).
В раствор дипептида Уа1-А1а 34 (200 мг, 1,06 ммоль) в 10,6 мл безводного ДМФА добавляли сложный эфир малеимидокапроновой кислоты и ИНЗ (Ν-гидроксисукцинимида) 35 (327 мг, 1,06 ммоль). Диизопропилэтиламин (0,92 мл, 5,3 ммоль) затем добавляли и реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота при температуре окружающей среды в течение 18 ч, после чего ТСХ и аналитическая ВЭЖХ подтвердили израсходование исходных реагентов. Реакционную смесь разбавляли 0,1 М НС1 (100 мл) и водный слой экстрагировали этилацетатом (100 мл, 3 раза). Объединенные органические слои промывали водой и солевым раствором, затем сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт растворяли в минимальном количестве метиленхлорида и очищали радиальной хроматографией на 2 мм пластине хроматотрона, элюируя смесями СН2С12/МеОН (95:5-90:10 СН2С12/МеОН), с получением соединения 36 (158 мг, 39%) в виде маслянистого остатка. ТСХ: К£ = 0,26, 10% МеОН в СН2С12.
Ή ЯМР (СЭС13) δ (ррт) 0,95 (б, 1=17 Гц, 3Н), 0,98 (б, 1=17 Гц, 3Н), 1,30 (т, 2Н), 1,40 (б, 1=17 Гц, 3Н), 1,61 (т, 4Н), 2,06 (т, 1Н), 2,25 (б1, 1=4, 19 Гц, 2Н), 3,35 (к, 1Н), 3,49 (1, 1=17 Гц, 2Н), 4,20 (б, 1=18 Гц, 1Н), 4,38 (т, 1Н), 6,80 (к, 2Н). Аналитическая ВЭЖХ (0,1% муравьиная кислота): 1К 9,05 мин. ЖХ/МС: 1К 11,17 мин, т/ζ (ЕЗ+) эксперимент 381,9 (М+Н)+, т/ζ (ЕЗ-) эксперимент 379,9 (М-Н)-.
6-(2,5-Диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-И-((З)-1-(((З)-1-((4-((З)-7-метокси-8-(3-(((З)-7-метокси2-(4-метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)пропокси)-5оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-2-ил)фенил)амино)-1-оксопропан-2-ил)амино)3 -метил-1 -оксобутан-2-ил)гексанамид (38).
В высушенную пламенем 10 мл колбу помещали кислоту 36 (3,6 мг, 9,5 мкмоль), ЕЕЭР (2,8 мг, 11,4 мкмоль) и 0,33 мл безводного СН2С12. Метанол (четыре капли, ~80 мкл) добавляли для ускорения растворения и смесь перемешивали в атмосфере азота в течение 1 ч. Затем добавляли димер ПБД 37 (5,7 мг, 7,9 мкмоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч, после чего анализ ЖХ/МС показал конверсию в продукт. Реакционную смесь концентрировали, растворяли в мини- 49 024118 мальном количестве СН2С12 и очищали радиальной хроматографией на 1 мм пластине хроматотрона, элюируя смесями СН2С12/МеОН (100:0 - 90:10 СН2С12/МеОН), с получением лекарственного соединения, связанного с линкерной группой, 38 (3,9 мг, 45%). ТСХ: К£ = 0,06, 5% МеОН в СН2С12. Аналитическая ВЭЖХ (0,1% муравьиная кислота): Ц 11,51 мин. ЖХ/МС: Ц 12,73 мин, т/ζ (Е§+) эксперимент 1089,6 (М+Н)+, т/ζ (Е§-) эксперимент 1087,3 (М-Н)-.
Схема 2
6-(2,5-Диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-Ы-(4-((§)-7-метокси-8-(3-(((§)-7-метокси-2-(4метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло [2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)пропокси)-5 -оксо5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-2-ил)фенил)гексанамид (40).
В высушенную пламенем 10 мл колбу добавляли димер ПБД 37 (25 мг, 34,4 мкмоль), который растворяли в 1,4 мл 10% смеси МеОН в СНС13. Добавляли малеимидокапроновую кислоту (39) (7,3 мг, 34,4 мкмоль), затем ЕЕЭЦ (10,2 мг, 41,3 мкмоль) и пиридин (6 мкл, 68,8 мкмоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 14 ч, после чего анализ ЖХ/МС показал конверсию в продукт. Реакционную смесь концентрировали, растворяли в минимальном количестве СН2С12 и очищали радиальной хроматографией на 1 мм пластине хроматотрона, элюируя смесями СН2С12/МеОН (100:0-90:10 СН2С12/МеОН), с получением лекарственного соединения, связанного с линкерной группой, 40 (14,1 мг, 45%). ЖХ/МС: Ц 12,81 мин, т/ζ (Е§+) эксперимент 918,9 (М+Н)+, т/ζ (Е§-) эксперимент 917,0 (М-Н)-.
Схема 3
2-Бром-Ы-(4-((§)-7-метокси-8-(3-(((§)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Нпирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)пропокси)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-2-ил)фенил)ацетамид (41).
В высушенную пламенем 10 мл колбу добавляли димер ПБД 37 (16,5 мг, 22,7 мкмоль), который растворяли в 0,9 мл смеси 10% МеОН в СНС13. Добавляли бромуксусную кислоту (3,2 мг, 22,7 мкмоль), затем ЕЕЭЦ (6,8 мг, 27,2 мкмоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 4 ч, после чего анализ ЖХ/МС показал конверсию в продукт. Реакционную смесь концентрировали, растворяли в минимальном количестве СН2С12 и очищали радиальной хроматографией на 1 мм пластине хроматотрона, элюируя смесями СН2С12/МеОН (100:0-95:5 СН2С12/МеОН), с получением лекарственного соединения, связанного с линкерной группой, 41 (9,9 мг, 52%). ТСХ: К£ = 0,09, 5% МеОН в СН2С12. ЖХ/МС: С-12,44 мин, т/ζ (Е§+) эксперимент 848,1 (М+Н)+, т/ζ (Е§-) эксперимент 845,7 (М-Н)-.
- 50 024118
Схема 4
6-(2,5-Диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-Ы-((8)-1-(((8)-1-((3-((8)-7-метокси-8-(3-(((8)-7-метокси2- (4-метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)пропокси)-5оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-2-ил)фенил)амино)-1-оксопропан-2-ил)амино)3- метил-1-оксобутан-2-ил)гексанамид (43).
В высушенную пламенем 10 мл колбу помещали кислоту 36 (3,6 мг, 9,4 мкмоль), ЕЕИЦ (2,8 мг, 11,3 мкмоль) и 0,38 мл безводного СН2С12, содержащего 1% метанола. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота в течение 1 ч; затем добавляли димер ПБД 42 (6,8 мг, 9,4 мкмоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, после чего анализ ЖХ/МС показал конверсию в продукт. Реакционную смесь концентрировали, растворяли в минимальном количестве СН2С12 и очищали радиальной хроматографией на 1 мм пластине хроматотрона, элюируя смесями СН2С12/МеОН (100:090:10 СН2С12/МеОН), с получением лекарственного соединения, связанного с линкерной группой, 43 (3,1 мг, 30%). ТСХ: К£ = 0,31, 10% МеОН в СН2С12. Аналитическая ВЭЖХ (0,1% муравьиная кислота): 1К 11,49 мин. ЖХ/МС: 1К 12,28 мин, т/ζ (Е8+) эксперимент 1089,5 (М+Н)+, т/ζ (Е8-) эксперимент 1087,3 (МН)-.
Схема 5
6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-Ы-(3-((8)-7-метокси-8-(3-(((8)-7-метокси-2-(4метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)пропокси)-5-оксо5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-2-ил)фенил)гексанамид (44).
В высушенную пламенем 10 мл колбу добавляли димер ПБД 42 (8,0 мг, 11 мкмоль), который растворяли в 0,44 мл смеси 10% МеОН в СН2С12. Добавляли малеимидокапроновую кислоту (39) (2,3 мг, 11 мкмоль), затем ЕЕИЦ (3,3 мг, 13,2 мкмоль) и пиридин (1,8 мкл, 22 мкмоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 3 ч, после чего анализ ЖХ/МС показал конверсию в продукт. Реакционную смесь очищали радиальной хроматографией на 1 мм пластине хроматотрона, элюируя смесями СН2С12/МеОН (100:0-90:10 СН2С12/МеОН), с получением лекарственного соединения, связанного с линкерной группой, 44 (1,2 мг, 12%). ТСХ: К£ = 0,45, 10% МеОН в СН2С12. Аналитическая ВЭЖХ (0,05% трифторуксусная кислота): 1К 11,71 мин. ЖХ/МС: 1К 12,63 мин, т/ζ (Е8+) эксперимент 919,1 (М+Н)+, т/ζ (Е8-) эксперимент 917,1 (М-Н)-.
- 51 024118
Схема 6
(28,3К,48,5К,6К)-2-(2-(3-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)пропанамидо)-4-((((3-((8)-7метокси-8-(3-(((8)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)пропокси)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4|бензодиазепин-2-ил)фенил) карбамоил)окси)метил)фенокси)-6-метилтетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триил триацетат (46).
В высушенную пламенем колбу помещали интермедиат глюкуронидного линкера, 45 (ссылка: ЛеГГгеу, е1 а1., В1осои)ида1е СНет181гу, 2006, 77, 831-840) (15 мг, 20 мкмоль), 1,4 мл безводного СН2С12, пиридин (20 мкл, 240 мкмоль), а затем охлаждали до -78°С в атмосфере азота. Затем добавляли дифосген (3,0 мкл, 24 мкмоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при -78°С, после чего небольшую аликвоту гасили метанолом и анализировали ЖХ/МС на образование метилкарбоната, что подтверждало образование хлорформиата глюкуронида. Димер ПБД 42 (15 мг, 20 мкмоль) затем растворяли в 0,7 мл безводного СН2С12 и добавляли по каплям в реакционный сосуд. Реакционную смесь нагревали до 0°С в течение 2 ч, а затем разбавляли 50 мл СН2С12. Органический слой промывали водой (50 мл), солевым раствором (50 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт реакции очищали радиальной хроматографией на 1 мм пластине хроматотрона, элюируя 10% МеОН в СН2С12, с получением соединения 46 (5,7 мг, 19%). ТСХ: КГ = 0,47, 10% МеОН в СН2С12. Аналитическая ВЭЖХ (0,1% муравьиная кислота): Ц 12,09 мин. ЖХ/МС: Ц 14,05 мин, т/ζ (Е8+) эксперимент 1500,3 (М+Н)+.
(28,38,48,5К,68)-6-(2-(3-аминопропанамидо)-4-((((3-((8)-7-метокси-8-(3-(((8)-7-метокси-2-(4метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)пропопкси)-5оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-2-ил)фенил)карбамоил)окси)метил)фенокси)3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-карбоновая кислота (47).
Колбу, содержащую соединение 46 (5,7 мг, 3,8 мкмоль), растворенное в смеси, содержащей по 0,2 мл МеОН, тетрагидрофурана и воды, охлаждали до 0°С. В перемешиваемый раствор добавляли моногидрат гидроксида лития (0,8 мг, 19 мкмоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч, после чего анализ ЖХ/МС показал конверсию в продукт. Добавляли ледяную уксусную кислоту (1,1 мкл, 19 мкмоль) и реакционную смесь концентрировали с получением кислоты 47, которую использовали далее без дополнительной очистки. ЖХ/МС: Ц 11,59 мин, т/ζ (Е8+) эксперимент 1138,4 (М+Н)+.
(28,38,48,5К,68)-6-(2-(3-(6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1- ил)гексанамидо)пропанамидо)-4((((3-((8)-7-метокси-8-(3-(((8)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с] [1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)пропокси)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-2ил)фенил)карбамоил)окси)метил)фенокси)-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-карбоновая кислота
- 52 024118 (48).
В раствор соединения 47 (4,3 мг, 3,8 мкмоль), растворенного в 0,38 мл безводного ДМФА, добавляли сложный эфир 35 малеимидокапроновой кислоты и ΝΗδ (1,2 мг, 3,8 мкмоль), затем диизопропилэтиламин (4,0 мкл, 22,8 мкмоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 2 ч, после чего анализ ЖХ/МС показал конверсию в продукт. Реакционную смесь разбавляли смесью ацетонитрила (0,5 мл), ДМСО (1 мл), воды (1 мл), а затем очищали препаративной ВЭЖХ.
Мобильная фаза состояла из: А = вода и В = ацетонитрил, содержащих 0,1% муравьиную кислоту. Применяли элюирование в линейном градиенте от 90:10 А:В до 10:90 А:В в течение 75 мин и фракции, содержащие целевой продукт, лиофилизировали с получением лекарственного соединения, связанного с линкерной группой, 48 (1,2 мг, 24% за две стадии). Аналитическая ВЭЖХ (0,1% муравьиная кислота): !к 10,85 мин. ЖХ/МС: !к12,12 мин, т/ζ (Е§+) эксперимент 1331,4 (М+Н)+, т/ζ (Е§-) эксперимент 1329,5 (МН)-.
6-(2,5-Диоксо-2,5-дигидро-1Η-пиррол-1-ил)-N-((§)-1-(((§)-1-((3-((§)-7-метокси-8-((5-(((§)-7метокси-2-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)фенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-Ш-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)пентил)окси)-5-оксо-5,11а-дигидро-Ш-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-2-ил)фенил)амино) -1 -оксопропан-2-ил)амино)-3 -метил-1 -оксобутан-2-ил)гексанамид (51).
В высушенную пламенем 10 мл колбу помещали кислоту 36 (2,7 мг, 7,1 мкмоль), ЕЕЭР (2,1 мг, 8,5 мкмоль) и 0,28 мл безводного СΗ2С12, содержащего 1% метанола. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота в течение 1 ч; димер ПБД 49 (5,8 мг, 7,1 мкмоль) затем добавляли и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч, после чего анализ ЖХ/МС показал конверсию в продукт. Реакционную смесь концентрировали, затем очищали препаративной ВЭЖХ и фракции, содержащие целевой продукт, лиофилизировали с получением лекарственного соединения, связанного с линкерной группой, 51 (2,7 мг, 32%). Аналитическая ВЭЖХ (0,1% муравьиная кислота): !к 9,17 мин. ЖХ/МС: !к 11,25 мин, т/ζ (Е§+) эксперимент 1185,3 (М+Н)+, т/ζ (Е§-) эксперимент 1182,9 (М-Н)-.
М-((§)-1-(((§)-1-((3-((§)-8-((5-(((§)-2-(4-(3-(диметиламино)пропокси)фенил)-7-метокси-5-оксо-5,11адигидро-Ш-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)пентил)окси)-7-метокси-5-оксо-5,11а-дигидро’Η-пирроло [2,1-с][1,4]бензодиазепин-2-ил)фенил)амино)-1-оксопропан-2-ил)амино)-3 -метил-1-оксобутан-2-ил)-6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-Ш-пиррол-1-ил)гексанамид (52).
В высушенную пламенем 10 мл колбу помещали кислоту 36 (3,7 мг, 9,7 мкмоль), ЕЕЭР (2,9 мг, 11,6 мкмоль) и 0,4 мл безводного СΗ2С12, содержащего 1% метанола. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота в течение 1 ч; затем добавляли димер ПБД 50 (8,0 мг, 9,7 мкмоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч, после чего анализ ЖХ/МС показал присутствие продукта. Реакционную смесь концентрировали, затем очищали препаративной ВЭЖХ и фракции, содержащие целевой продукт, лиофилизировали с получением лекарственного соединения, связанного с линкерной группой, 52 (3,1 мг, 25%). Аналитическая ВЭЖХ (0,1% муравьиная кислота): !к 9,45 мин. ЖХ/МС: !к 11,75 мин, т/ζ (Е§+) эксперимент 1188,4 (М+Н)+, т/ζ (Е§-) эксперимент 1186,0 (М-Н)-.
- 53 024118
Схема 8
4-(2,5-Диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-7-(^)-1-((^)-1-((4-(^)-7-метокси-8-(3-((^)-7-метокси2- (4-метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)пропокси)-5оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-2-ил)фенил)амино)-1-оксопропан-2-ил)амино)3- метил-1-оксобутан-2-ил)бензамид (54).
В высушенную пламенем 10 мл колбу добавляли линкерный фрагмент 53 (7,7 мг, 20 мкмоль), который растворяли в 0,33 мл смеси 5% МеОН в СН2С12. Добавляли ΕΕΌφ (6,1 мг, 25 мкмоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 15 мин, после чего добавляли димер ПБД 37 (12 мг, 16,5 мкмоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение еще 3 ч, после чего анализ ЖХ/МС показал конверсию в продукт. Реакционную смесь очищали радиальной хроматографией на 1 мм пластине хроматотрона, элюируя смесями СН2С12/МеОН (100:0-90:10 СН2С12/МеОН), с получением соединения 54 (2,4 мг, 13%). ТСХ: К£ = 0,44, 10% МеОН в СН2С12. Аналитическая ВЭЖХ (0,05% трифторуксусная кислота): !К 11,53 мин. ЖХ/МС: !К 12,61 мин, т/ζ (Εδ+) эксперимент 1095,4 (М+Н)+, т/ζ (Εδ-) эксперимент 1093,9 (М-Н)-.
^)-2-(2-йодацетамидо)-7-(^)-1-((4-(^)-7-метокси-8-(3-((^)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5-оксо5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)пропокси)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Нпирроло [2,1 -с] [ 1,4]бензодиазепин-2-ил)фенил)амино)-1 -оксопропан-2-ил)-3 -метилбутанамид (56).
В высушенную пламенем колбу помещали линкер 55 (7,8 мг, 22 мкмоль), который растворяли в 0,37 мл смеси 5% МеОН в СН2С12. Добавляли ΕΕΌφ (6,8 мг, 27,5 мкмоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 15 мин, после чего добавляли димер ПБД 37 (13 мг, 18 мкмоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение еще 4 ч, после чего анализ ЖХ/МС показал конверсию в продукт. Реакционную смесь очищали радиальной хроматографией на 1 мм пластине хроматотрона, элюируя смесями СН2С12/МеОН (100:0-80:20 СН2С12/МеОН), с получением соединения 56 (3,5 мг, 18%). Аналитическая ВЭЖХ (0,1% муравьиная кислота): !К 11,43 мин. ЖХ/МС: !К 12,49 мин, т/ζ (Εδ+) эксперимент 1064,6 (М+Н)+, т/ζ (Εδ-) эксперимент 1098,9 (М+2Н2О-Н)-.
- 54 024118
Схема 9
6-(2,5-Диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-Ы-((8)-1-(((8)-1-((4-((8)-7-метокси-8-((5-(((8)-7метокси-2-(4-метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-ЕИ-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)пентил)окси)-5-оксо-5,11а-дигидро-Ш-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-2-ил)фенил)амино)-1-оксопропан2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)гексанамид (58).
В высушенную пламенем 10 мл колбу добавляли линкерный фрагмент 36 (19 мг, 50 мкмоль), который растворяли в 0,33 мл смеси 5% МеОН в 0¾¾. Добавляли ЕЕЭО (12,4 мг, 50 мкмоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 15 мин, после чего добавляли димер ПБД 57 (12,5 мг, 16,6 мкмоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение еще 5 ч, после чего анализ ЖХ/МС показал конверсию в продукт. Реакционную смесь очищали радиальной хроматографией на 1 мм пластине хроматотрона, элюируя смесями СИ2С12/МеОН (100:0-80:20 СИ2С12/МеОН), с получением соединения 58 (2,1 мг, 11%). Аналитическая ВЭЖХ (0,1% муравьиная кислота): ΐκ 12,19 мин. ЖХ/МС: ΐκ 12,58 мин, т/ζ (Е8') эксперимент 1117,8 (М'Н)', т/ζ (Е8-) эксперимент 1133,7 (М'Н2О-Н)-.
(К)-2-((К)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-метилбутанамидо)пропановая кислота (60).
В высушенную пламенем колбу помещали Ртос-Э-валин (200 мг, 0,59 ммоль) и 5,9 мл безводного ТГФ. Добавляли Ν-гидроксисукцинимид (75 мг, 0,65 ммоль), затем диизопропилкарбодиимид (0,1 мл, 0,65 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи, после чего анализ ЖХ/МС показал конверсию в продукт. Реакционную смесь разбавляли СИ2С12 и промывали водой (50 мл), солевым раствором (50 мл), сушили над сульфатом натрия и концентрировали досуха. Вещество использовали далее без дополнительной очистки. ЖХ/МС: ΐκ 13,89 мин, т/ζ (Е8') эксперимент 437,0 (М'Н)'. Неочищенный Ртос-О-Уа1-О8и (0,59 ммоль) растворяли в диметоксиэтане (1,5 мл) и ТГФ (0,8 мл). Ό-аланин (73 мг, 0,89 ммоль) растворяли в 2,3 мл воды и добавляли в реакционную смесь, затем добавляли бикарбонат натрия (99 мг, 1,2 ммоль). Полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, после чего реакционная смесь становилась прозрачной, и анализ ЖХ/МС подтверждал завершение реакции. Реакционную смесь выливали в 50 мл СИ2С12 и органический слой промывали 50 мл 0,1 М ΗΟ, а затем солевым раствором, сушили над сульфатом натрия, а затем концентрировали досуха. Неочищенный продукт очищали радиальной хроматографией на 1 мм пластине хроматотрона, элюируя 6¾¾. с получением соединения 60 (128 мг, 54%). ТСХ: КГ = 0,18, 10% МеОН в
- 55 024118
СШСЕ. Аналитическая ВЭЖХ (0,1% муравьиная кислота): 1Е 9,47 мин. ЖХ/МС: 1К 13,09 мин, т/ζ (Е8+) эксперимент 411,1 (М+Н)+, т/ζ (Е8-) эксперимент 409,2 (М-Н)-.
(К)-2-((К)-2-(6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексанамидо)-3-метилбутанамидо)пропановая кислота (61).
Защищенный дипептид 60 (70 мг, 0,37 ммоль) суспендировали в 6 мл безводного ΟΗ2Ο12, охлаждали на ледяной бане в атмосфере азота и добавляли по каплям 2 мл диэтиламина. Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в атмосфере азота в течение 2 ч, после чего анализ ВЭЖХ показал израсходование исходных реагентов. Реакционную смесь разбавляли 6 мл хлороформа и концентрировали. Неочищенный остаток реакционной смеси перерастворяли в 6 мл хлороформа и дважды концентрировали, затем сушили при помощи вакуумной линии в течение 2 ч. Дипептид со снятой защитой затем растворяли в 3,7 мл безводного ДМФА. Добавляли МС-О8и (138 мг, 0,44 ммоль), затем диизопропилэтиламин (0,32 мл, 1,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре в течение ночи. Обрабатывали реакционную смесь, выливая ее в 50 мл 0,1 М ΗΟ и экстрагируя этилацетатом (50 мл, 3 раза). Объединенный органический слой промывали водой (50 мл) и солевым раствором (50 мл), сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Неочищенный продукт очищали радиальной хроматографией на 1 мм пластине хроматотрона, элюируя смесями С^СЦ/МеОН (99:1-95:5 С^СЬ/МеОН), с получением соединения 61 (14 мг, 22%). 'Η ЯМР (СО3ОЭ) δ (ррт) 0,94 (б, 1=14 Гц, 3Η), 0,98 (б, 1=14 Гц, 3Η), 1,29 (т, 2Η), 1,39 (б, 1=7,4 Гц, 3Η), 1,61 (т, 4Η), 2,05 (т, 1Η), 2,25 (б1, 1=1,2, 7,4 Гц, 2Η), 3,48 (1, 1=1 Гц, 2Η), 4,19 (т, 1Η), 4,37 (т, 1Η), 6,78 (к, 2Η). Аналитическая ВЭЖХ (0,1% муравьиная кислота): 1К 10,04 мин. ЖХ/МС: 1К 11,22 мин, т/ζ (Е8+) эксперимент 382,1 (М+Н)+, т/ζ (Е8-) эксперимент 380,0 (М-Н)-.
6-(2,5-Диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-^(К)-1-(((К)-1-((4-((8)-7-метокси-8-(3-(((8)-7-метокси2- (4-метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-Ш-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)пропокси)-5оксо-5,11а-дигидро-Ш-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-2-ил)фенил)амино)-1-оксопропан-2-ил)амино)3- метил-1-оксобутан-2-ил)гексанамид (62).
В высушенную пламенем 10 мл колбу добавляли линкер 61 (9,5 мг, 25 мкмоль), который растворяли в 0,33 мл смеси 5% МеОН в ΟΗ2Ο12. Добавляли ЕЕЭЦ (7,3 мг, 30 мкмоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 15 мин, после чего добавляли димер ПБД 37 (12 мг, 16,5 мкмоль). Реакционную смесь дополнительно перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч, после сего анализ ЖХ/МС показал конверсию в продукт. Реакционную смесь очищали радиальной хроматографией на 1 мм пластине хроматотрона, элюируя смесями С^СЦ/МеОН (100:080:20 С^СЬ/МеОН), с получением соединения 62 (2,8 мг, 16%). ТСХ: Кг = 0,39, 10% МеОН в О ЕСЕ. Аналитическая ВЭЖХ (0,1% муравьиная кислота): 1К 11,50 мин. ЖХ/МС: 1К 12,50 мин, т/ζ (Е8+) эксперимент 1089,7 (М+Н)+, т/ζ (Е8-) эксперимент 1088,0 (М-Н)-.
Схема 11
(8)-2-(6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-Ш-пиррол-1-ил)гексанамидо)пропановая кислота (64).
Ь-аланин (58 мг, 0,65 ммоль) суспендировали в 6,5 мл безводного ДМФА, а затем добавляли МСО8и 35 (100 мг, 0,324 ммоль). Добавляли диизопропилэтиламин (0,28 мл, 1,6 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре в атмосфере азота. Реакционную смесь затем разбавляли 50 мл 0,1 М ΗΟ1 и водный слой затем экстрагировали этилацетатом (50 мл, 3 раза). Объединенный органический слой затем промывали водой (50 мл) и солевым раствором (50 мл), сушили над сульфатом натрия, а затем концентрировали досуха. Реакционную смесь очищали радиальной хроматографией на 1 мм пластине хроматотрона, элюируя смесями СΗ2С12/МеОН (97,5:2,5-90:10 СΗ2С12/МеОН), с получением соединения 64 (25 мг, 27%). ТСХ: Кг = 0,25, 10% МеОН в О ЕСЕ. 1Η ЯМР (ОСОЕ) δ (ррт) 1,30 (т, 2Η), 1,37 (б, 1=7,4 Гц, 3Η), 1,60 (т, 4Η), 2,21 (1, 1=7,4 Гц, 2Η), 3,48 (1, 1=7 Гц,
- 56 024118
2Н), 4,35 (с|. 1=7,4 Гц, 1Н), 6,78 (5, 2Н). Аналитическая ВЭЖХ (0,1% муравьиная кислота): ίκ9,06 мин. 6-(2,5-Диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-М-((8)-1-((4-((8)-7-метокси-8-(3-(((8)-7-метокси-2-(4метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло [2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)пропокси)-5 -оксо5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-2-ил)фенил)амино)-1-оксопропан-2-ил)гексанамид (65): В высушенную пламенем 10 мл колбу добавляли линкер 64 (14 мг, 50 мкмоль), который растворяли в 0,66 мл смеси 5% МеОН в СН2С12. Добавляли ЕЕЭО (15 мг, 60 мкмоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 15 мин, после чего добавляли димер ПБД 37 (24 мг, 33 мкмоль). Реакционную смесь дополнительно перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 4 ч. Реакционную смесь очищали радиальной хроматографией на 1 мм пластине хроматотрона, элюируя смесями СН2С12/МеОН (100:0-90:10 СН2С12/МеОН), с получением соединения 65 (3,5 мг, 11%). Аналитическая ВЭЖХ (0,1% муравьиная кислота): ίκ 11,40 мин. ЖХ/МС: ίκ 12,39 мин, т/ζ (Е8+) эксперимент 990,6 (М+Н)+, т/ζ (Е8-) эксперимент 989,0 (М-Н)-.
Схема 12
Димер ПБД 57, связанный непосредственно при помощи малеимидокапроильного спейсера (схема 14). Проводили реакцию сочетания димера ПБД 57 и малеимидокапроновой кислоты 39 при помощи способа, описанного на схеме 2.
Схема 13
6-(2,5-Диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-М-(2-((8)-7-метокси-8-(3-(((8)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)пропокси)-5-оксо-5,11адигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-2-ил)фенил)гексанамид (68).
В смесь соединения 66 (10 мг, 0,013 ммоль) в СН2С12 (300 мкл) добавляли Э1РЕА и МС-С1 (67) (3 мг, 0,013 ммоль). Через 1 ч дополнительно добавляли 3 экв. Э1РЕА (7 мкл) и 2 экв. хлорангидрида (6 мг, 0,026 ммоль). Через 1 ч дополнительно добавляли Э1РЕА (7 мкл) и хлорангидрид (6 мг, 0,026 ммоль). Еще через 3 ч реакционную смесь распыляли непосредственно на 1 мм пластину хроматотрона для радиальной хроматографии и элюировали дихлорметаном, а затем в градиенте смесями метанола (1-5%) в дихлорметане. Фракции, содержащие продукт в виде смеси с исходным анилином, концентрировали с получением остатка, который растворяли в смеси 0,5 мл ДМСО, 0,5 мл ацетонитрила и 0,5 мл деионизованной воды и дополнительно очищали препаративной ВЭЖХ. Фракции, содержащие продукт, характеризующийся основным пиком, собирали и объединяли, замораживали и лиофилизировали с получением 2,1 мг (18%): МС (Е8+) т/ζ 919,2 [М+Н]+.
Примечание: хлорангидрид 67 получали растворением 100 мг соединения 39 в оксалилхлориде (5 мл). Добавляли каплю ДМФА и смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение нескольких часов, затем концентрировали при пониженном давлении. Дихлорметан добавляли и смесь концентрировали второй раз с получением беловатого твердого вещества, которое применяли непосредственно без очистки.
Ή ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 6,70 (5, 2Н), 3,46 (ί, 1=7 Гц, 2Н), 2,82 (ί, 1=7,2 Гц, 2Н), 1,72 (рей, 1=7,6 Гц, 2Н), 1,61 (рей, 1=7,4 Гц, 2Н), 1,35 (реи!, 1=7,6 Гц, 2Н).
- 57 024118
трет-Бутил 2-(2-аминоацетамидо)ацетат (69).
В смесь гидрохлоридной соли трет-бутилового эфира глицина (70) (484 мг, 2,9 ммоль) в дихлорметане (25 мл) добавляли Ртос-С1у-ОН (71) (0,861 мг, 2,99 ммоль), ΌΙΡΕΑ (756 мг, 4,35 ммоль) и НАТИ (1,3 г, 3,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 16 ч, а затем выливали в этилацетат и промывали водой (3 раза) и солевым раствором (1 раз). Органическую фазу сушили над М§8О4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали радиальной хроматографией на 2 мм пластине, элюируя смесью 5% метанол/дихлорметан. Фракции, содержащие продукт, концентрировали при пониженном давлении и обрабатывали смесью 20% пиперидин/дихлорметан (10 мл) в течение 1 ч, после чего концентрировали при пониженном давлении, а затем очищали дважды радиальной хроматографией на 2 мм пластине, элюируя в градиенте 5-10% смесями метанол/дихлорметан, с получением соединения 69 (200 мг, 37%).
Ή ЯМР (400 МГц, СОС13) δ 7,62 (5, 1Н), 4,00 (5, 2Н), 3,39 (5, 2Н), 1,47 (5, 9Н).
2-(2-(6-(2,5-Диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексанамидо)ацетамидо)уксусная кислота (72).
В раствор амина 69 (200 мг, 0,11 ммоль) в ДМФА (1 мл) добавляли соединение 35 (350 мг, 0,11 ммоль) и реакционную смесь оставляли перемешиваться при температуре окружающей среды в течение 2 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали радиальной хроматографией на 1 мм пластине, элюируя дихлорметаном и в градиенте смесью (1-5%) метанола в дихлорметане. Фракции, содержащие продукт, концентрировали при пониженном давлении, растворяли в дихлорметане (4 мл) и обрабатывали трифторуксусной кислотой (4 мл). Через 40 мин смесь концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток растворяли в дихлорметане и концентрировали с получением 22,5 мг (19%) 72 в виде белого твердого вещества.
Ή ЯМР (400 МГц, СО3ОО) δ 6,79 (5, 2Н), 3,93 (5, 2Н), 3,89 (5, 2Н), 3,49 (ΐ, 1=6,8 Гц, 2Н), 2,26 (ΐ, 1= 6,8 Гц, 2Н), 1,61 (т, 4Н), 1,34 (т, 2Н); МС (Е8+) т/ζ 326,21 [М+Н]+.
6-(2,5-Диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-^(2-((2-((4-((8)-7-метокси-8-(3-(((8)-7-метокси-2-(4метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)пропокси)-5-оксо5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-2-ил)фенил)амино)-2-оксоэтил)амино)-2-оксоэтил) гексанамид (73).
В смесь соединения 72 (15 мг, 0,046 ммоль) в 5% смеси метанол/дихлорметан (0,5 мл) добавляли ΕΕΌΟ (11 мг, 0,046 ммоль) и смесь перемешивали в течение 30 мин при температуре окружающей среды, после чего добавляли соединение 37 (16 мг, 0,023 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч и очищали непосредственно на 1 мм пластине хроматотрона для радиальной хроматографии, элюируя в градиенте 1-4% смесью метанол/дихлорметан, с получением 6,8 мг (29%) соединения 73 в виде желтого твердого продукта. МС (Е8+) т/ζ 1033,57 [М+Н]+.
(З)-трет-бутил 1-((8)-пирролидин-2-карбонил)пирролидин-2-карбоксилат (74).
В смесь гидрохлоридной соли трет-бутилового эфира Ь-пролина 75 (0,5 г, 2,9 ммоль) в дихлорметане (50 мл) добавляли соединение 76 (0,98 г, 2,99 ммоль), ΌΙΡΕΑ (756 мг, 4,35 ммоль) и НАТИ (1,3 г, 3,5 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при температуре окружающей среды в течение 16 ч. Смесь выливали в этилацетат (100 мл) и промывали 0,2н. НС1 (50 мл), водой (50 мл), солевым раствором (50 мл) и сушили над М§8О4. Хроматографию проводили на 2 мм пластине хроматотрона для
- 58 024118 радиальной хроматографии, элюируя 10% смесью этилацетата в гексане. Фракции, содержащие продукт, концентрировали при пониженном давлении, растворяли в дихлорметане (8 мл) и обрабатывали пиперидином (2 мл). Смесь перемешивали в течение 1 ч, концентрировали при пониженном давлении и очищали на 2 мм пластине хроматотрона для радиальной хроматографии, элюируя 5% смесью метанол/дихлорметан, что приводило к получению 200 мг (26%) дипептида 74.
!Н ЯМР (400 МГц, СИС13) δ 4,41 (т, 1Н), 4,17 (т, 1Н), 3,82 (т, 1Н), 3,57 (т, 4Н), 3,2 (т, 1Н), 2,82 (т, 1Н), 2,83-1,65 (т, 5Н), 1,44 (т, 9Н).
(8)-трет-бутил 1-((8)-1-(6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексаноил)-пирролидин-2карбонил)пирролидин-2-карбоксилат (77).
В смесь амина 74 (200 мг, 0,75 ммоль), соединения 39 (190 мг, 0,9 ммоль) и ΩΙΓΕΑ (0,32 мл, 1,8 ммоль) добавляли НАТИ (342 мг, 0,9 ммоль) и смесь оставляли перемешиваться при температуре окружающей среды в течение 5 ч. Смесь выливали в этилацетат (100 мл) и промывали водой (3x100 мл) и солевым раствором (1x100 мл). Органическую фазу сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали. Полученный остаток очищали радиальной хроматографией на 2 мм пластине хроматотрона, элюируя дихлорметаном, затем в градиенте 1-5% смесью метанола в дихлорметане. Две дополнительные очистки с градиентным элюированием 1-5% смесью метанола в дихлорметане, сначала на 2 мм пластине, а затем на 1 мм пластине, приводили к получению 113 мг (33%) соединения 77 в виде белого твердого продукта.
!Н ЯМР (400 МГц, СОСЕ) δ 4,63 (т, 1Н), 4,41 (т, 1Н), 3,82 (т, 1Н), 3,63 (т, 1Н), 3,55 (т, 1Н), 3,45 (т, 3Н), 2,38-1,83 (т, 10Н), 1,70-1,50 (т, 5Н), 1,45 (т, 9Н), 1,35 (т, 2Н); МС (Ε8+) т/ζ 462,33 [М+Н]+.
(8)-1-((8)-1-(6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексаноил)пирролидин-2-карбонил)пирролидин-2-карбоновая кислота (78).
В смесь трет-бутилового эфира 77 в дихлорметане (4 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (4 мл). Через 40 мин реакцию считали завершенной согласно результатам ВЭЖХ. Смесь концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток растворяли в дихлорметане и концентрировали повторно с получением 37 мг (100%) соединения 78 в виде белого твердого продукта.
!Н ЯМР (400 МГц, СОСЕ) δ 6,68 (з, 2Н), 4,62 (т, 2Н), 3,81 (т, 1Н), 3,70 (т, 1Н), 3,57 (т, 2Н), 3,45 (т, 2Н), 2,40-1,91 (т, 10Н), 1,70-1,45 (т, 4Н), 1,33 (т, 2Н); МС (Ε8+) т/ζ 406,2 [М+Н]+.
1-(1-(6-(2,5-Диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексаноил)пирролидин-2-карбонил)-Ы-((8)-7метокси-8-(3-(((8)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)пропокси)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-2-ил)фенил) пирролидин-2-карбоксамид (79).
В смесь соединения 78 (9,3 мг, 0,023 ммоль) в смеси 5% метанол/дихлорметан (0,4 мл) добавляли ΕΕΩΟ (7 мг, 0,027 ммоль). Смесь перемешивали в течение 15 мин при температуре окружающей среды, затем добавляли соединение 37 (15 мг, 0,021 ммоль). Смесь перемешивали в течение 4 ч, разбавляли дихлорметаном (2 мл) и распыляли непосредственно на 1 мм пластину хроматотрона для радиальной хроматографии. Продукт элюировали с градиентом 1-5% смесью метанола в дихлорметане с получением 6,8 мг (29%) соединения 79 в виде желтого твердого вещества: МС (Ε8+) т/ζ 1113,51 [М+Н]+.
(8)-5-(аллилокси)-2-((8)-2-(((аллилокси)карбонил)амино)-3-метилбутанамидо)-5-оксопентановая кислота (80).
В смесь 2-хлортритильной смолы (1,0 г, 1,01 ммоль), суспендированной в дихлорметане (10 мл), добавляли Ртос-О1и-(О-аллил)-ОН (81) (409 мг, 1,0 ммоль) и ΩΙΓΕΑ (173 мкл, 1,0 ммоль). Реакционную
- 59 024118 смесь встряхивали в течение 5 мин, добавляли еще одну порцию И1РЕА (260 мкл, 1,5 ммоль) и смесь встряхивали в течение 1 ч. Метанол (0,8 мл) добавляли и смесь встряхивали в течение 5 мин, затем фильтровали и промывали ДМФА (6х), дихлорметаном (6х), диэтиловым эфиром (6х) и сушили при пониженном давлении. Полученную смолу обрабатывали в смесью 20% пиперидина в дихлорметане (10 мл) в течение 1 ч, затем фильтровали и промывали ДМФА (6х), дихлорметаном (6х), диэтиловым эфиром (6х) и сушили при пониженном давлении.
В смесь Ртос-Уа1-ОН (82) (1,03 г, 3,30 ммоль) в ДМФА (7 мл) добавляли И1РЕА (1,0 мл) и НАТИ (1,1 г, 3,03 ммоль). После тщательного перемешивания раствор отбирали 10 мл шприцем, содержащим смолу, полученную, как указано выше. Смесь закрывали и встряхивали в течение 16 ч. Смолу промывали ДМФА (6х), дихлорметаном (6х) и диэтиловым эфиром (6х). Отделяли небольшую часть (10 мг) и обрабатывали ее смесью 20% ТФА/дихлорметан и полученный раствор анализировали ЖХ/МС, в спектре которой наблюдали один пик соединения с высокой чистотой, который точно соответствовал правильной массе (МС (Е8+) т/ζ 509,28 [М+Н]+). Оставшуюся смолу затем обрабатывали смесью 20% пиперидин/ДМФ (8 мл) в течение 2 ч, затем промывали ДМФА (6х), дихлорметаном (6х), диэтиловым эфиром (6х) и сушили при пониженном давлении.
Готовили смесь аллилхлорформиата (529 мкл, 5,05 ммоль), И1РЕА (1,7 мл, 10 ммоль) в дихлорметане (10 мл) и отбирали шприцем, содержащим смолу, указанную выше. Смесь закрывали и встряхивали. Примерно через 2 ч реакционную смесь сушили и промывали дихлорметаном (6х). Небольшую часть смолы (~10 мг) разлагали в смеси 20%ТФА/дихлорметан и анализировали ЖХ/МС для определения масс исходных реагентов и продукта. Основным компонентом все еще оставался непрореагировавший амин, поэтому смолу снова подвергали обработке в условиях, описанных выше. Через 4 ч смолу промывали дихлорметаном (6х), а затем несколько раз обрабатывали 5% ТФА в дихлорметане (4x7 мл). Полученный раствор концентрировали при пониженном давлении. Смесь очищали на 2 мм пластине хроматотрона для радиальной хроматографии, элюируя смесью 5% метанол/дихлорметан, с получением 107 мг соединения 80.
'Н ЯМР (400 МГц, СИС13) δ 7,05 (5, 1Н), 5,90 (т, 2Н), 5,57 (б, 1Н), 5,29 (б, 4=14,7 Гц, 2Н), 5,22 (1, 1=10,9 Гц, 2Н), 4,59 (т, 5Н), 4,02 (т, 1Н), 2,60-2,40 (т, 2Н), 2,37-2,18 (т, 1Н), 2,17-2,02 (т, 2Н), 0,96 (б, 1=6,4 Гц, 3Н), 0,93 (б, 1=6,6 Гц, 3Н); МС (Е8+) т/ζ 371,12 [М+Н]+.
(8)-аллил 4-((8)-2-(((аллилокси)карбонил)амино)-3-метилбутанамидо)-5-((4-((8)-7-метокси-8-(3(((8)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8ил)окси)пропокси)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-2-ил)фенил)амино)-5оксопентаноат (83).
В смесь кислоты 80 (30 мг, 0,04 ммоль) в смеси 5% метанол/дихлорметан (1 мл) добавляли ЕЕИЦ (20 мг, 0,082 ммоль). Смесь перемешивали в течение 30 мин при температуре окружающей среды, а затем добавляли соединение 37 (30 мг, 0,04 ммоль) и смесь перемешивали в течение примерно 5 ч. Неполная очистка путем распыления непосредственно на 1 мм пластину хроматотрона для радиальной хроматографии и элюирования в градиенте 1-5% смесью метанол/дихлорметан приводила к получению смеси целевого продукта и соединения 37 (26 мг; ~3:1 соответственно), которую использовали далее без дополнительной очистки.
(8)-4-((8)-2-амино-3-метилбутанамидо)-5-((4-((8)-7-метокси-8-(3-(((8)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)пропокси)-5-оксо-5,11адигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-2-ил)фенил)амино)-5-оксопентановая кислота (84).
В смесь соединений 83 и 37 (26 мг) в безводном дихлорметане (3 мл) добавляли РЬ3Р (0,3 мг, 0,0012 ммоль), пирролидин (4 мкл, 0,048 ммоль) и тетракис-палладий (0,7 мг, 0,6 мкмоль). Через 2 ч добавляли дополнительное количество тетракис-палладия (0,7 мг, 0,6 мкмоль) и реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение еще 1 ч, после чего ее концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в смеси из ДМСО (1 мл), ацетонитрила, содержащего 0,05% муравьиной кислоты, (1 мл) и воды, содержащей 0,05% муравьиной кислоты (1 мл), и очищали препаративной обращенно-фазовой ВЭЖХ. Одну фракцию, содержащую продукт, собирали и лиофилизировали с получением 6 мг (14% за две стадии) соединения 84: МС (Е8+) т/ζ 1078,6 [М+Н]+.
(8)-4-((8)-2-(6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексанамидо)-3-метилбутанамидо)-5-((4((8)-7-метокси-8-(3-(((8)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4] бензодиазепин-8-ил)окси)пропокси)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-2ил)фенил)амино)-5-оксопентановая кислота (85).
В смесь соединений 84 (6 мг, 6 мкмоль) и 35 (2 мг, 6 мкмоль) в ДМФА (200 мкл) добавляли И1РЕА (3 мкл, 18 мкмоль) и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды. Через 1 ч дополнительно добавляли эквивалентное количество соединения 35 (2 мг, 6 мкмоль) и реакционную смесь оставляли перемешиваться при температуре окружающей среды в течение 3 ч. Добавляли третью порцию эквивалентного количества соединения 35 (2 мг, 6 мкмоль) и смесь оставляли перемешиваться в течение примерно 1 ч, концентрировали при пониженном давлении, растворяли в дихлорметане и распыляли непосредственно на 1 мм пластину хроматотрона для радиальной хроматографии и элюировали
- 60 024118 смесью 5% метанола в дихлорметане, что приводило к получению 2,5 мг (36%) соединения 85 высокой чистоты: МС (Εδ+) т/ζ 1147,49 [М+Н]+.
(21δ,24δ)-1-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-21-изопропил-24-((4-((δ)-7-метокси-8-(3((^)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8ил)окси)пропокси)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-2-ил)фенил)карбамоил)3,19,22-триоксо-7,10,13,16-тетраокса-4,20,23-триазагептакозан-27-овая кислота (86).
В смесь соединения 84 (8 мг, 8,4 мкмоль) и Ма1-РЕО4-М^ (87) (6,5 мг, 12,6 мкмоль) в ДМФА (200 мкл) добавляли ΌΙΡΕΑ (4,3 мкл, 25 мкмоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 ч и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в дихлорметане и распыляли на 1 мм пластину хроматотрона для радиальной хроматографии. Вещество было полярным и на пластине хроматотрона с неподвижной фазой силикагеля хроматография не происходила. Пластину элюировали метанолом с получением смеси, которую выделяли при пониженном давлении. Оставшееся вещество очищали препаративной обращенно-фазовой ВЭЖХ. Элюировали с получением единственного основного пика, фракции объединяли, замораживали и лиофилизировали с получением 0,9 мг (8%) остатка соединения 86: МС (Εδ+) т/ζ 1353,04 [М+Н]+.
^)-6-(диметиламино)-2-(6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексанамидо)гексановая кислота (88).
В смесь 2-хлортритильной смолы (1 г, 1,01 ммоль) в СН2С12 (10 мл) добавляли Ртос-Ьу5(Ме)2-ОН (89) (432 мг, 1,0 ммоль) и ΌΙΡΕΑ (433 мкл, 2,5 ммоль). Реакционную смесь встряхивали в течение 1 ч. Метанол (0,8 мл) добавляли и смесь дополнительно встряхивали в течение 5 мин, после чего фильтровали и промывали ДМФА (6х), дихлорметаном (6х), диэтиловым эфиром (6х) и сушили при пониженном давлении. Высушенную смолу обрабатывали смесью 20% пиперидина в ДМФА (10 мл) в течение 1 ч, после чего фильтровали и промывали ДМФА (6х ), дихлорметаном (6х ), диэтиловым эфиром (6х ).
В смесь соединения 39 (3,0 ммоль, 633 мг) в ДМФА (7 мл) добавляли ΌΙΡΕΑ (1,0 мл) и НАТИ (1,1 г, 3,03 ммоль). После тщательного перемешивания раствор отбирали 10 мл шприцем, содержащим смолу, описанную выше. Смесь закрывали, встряхивали в течение 16 ч, фильтровали и смолу промывали ДМФА (6х), дихлорметаном (6х) и диэтиловым эфиром (6х). Смолу несколько раз обрабатывали смесью 5% ТФА/дихлорметан (5 раз по 6 мл), встряхивали в течение 1 мин, а затем фильтровали. Полученный раствор концентрировали при пониженном давлении в глубоком вакууме. Вещество очищали препаративной обращенно-фазовой ВЭЖХ с получением 208 мг соединения 88.
Ή ЯМР (400 МГц, смесь СО3ОН/СОС13 1:1) δ 6,73 (5, 2Н), 4,41 (т, 1Н), 3,48 (ί, 2Н), 3,31 (5, 1Н), 3,03 (т, 2Н), 2,84 (5, 6Н), 2,22 (т, 2Н), 1,87 (т, 2Н), 1,78-1,52 (т, 6Н), 1,43 (т, 2Н), 1,31 (рей, 2Н); МС (Εδ+) т/ζ 386,28 [М+Н]+.
^)-6-(диметиламино)-2-(6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексанамидо)-Ы-(4-(^)-7метокси-8-(3-((^)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)пропокси)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-2-ил)фенил) гексанамид (90).
В смесь соединения 88 (9,3 мг, 0,023 ммоль) в смеси 5% метанол/дихлорметан (400 мкл) добавляли ΕΕΌΟ (7 мг, 0,027 ммоль). Смесь перемешивали в течение 30 мин при температуре окружающей среды, а затем добавляли соединение 37 (15 мг, 0,021 ммоль). Через 4 ч смесь концентрировали при пониженном давлении, растворяли в смеси ДМСО (1 мл), ацетонитрила (2 мл, содержащего 0,05% муравьиной кислоты) и воды (1 мл, содержащей 0,05% муравьиной кислоты) и очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (способ А). Фракции, содержащие продукт, содержали примесь соединения 37, поэтому указанные фракции лиофилизировали с получением остатка, который повторно очищали, как описано выше, с получением 0,5 мг (2%) чистого соединения 90: МС (Εδ+) т/ζ 537,46 [М+Н]/2+.
- 61 024118
Аллил (^)-1-((^)-1-((4-(^)-7-метокси-8-(3-((^)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5-оксо-5,11адигидро-1И-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)пропокси)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-пирроло [2,1-с][1,4]бензодиазепин-2-ил)фенил)амино)-1 -оксопропан-2-ил)амино)-3 -метил-1-оксобутан-2ил)карбамат (91).
В смесь соединения 92 (45 мг, 0,123 ммоль) в смеси 5% метанол/дихлорметан (1 мл) добавляли ЕЕЭЦ (30,4 мг, 0,123 ммоль). Смесь перемешивали в течение 30 мин при температуре окружающей среды, а затем добавляли соединение 37 (30 мг, 0,041 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение примерно 5 ч, а затем очищали на 1 мм пластине хроматотрона для радиальной хроматографии, элюируя смесью 5% метанол/дихлорметан, с получением 22 мг (55%) соединения 91, которое не анализировали и непосредственно использовали далее.
1-(3-(2,5-Диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)пропанамидо)-М-(^)-1-((^)-1-((4-(^)-7-метокси-8(3-((^)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-Ш-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8ил)окси)пропокси)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Ы-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-2-ил)фенил)амино)-1оксопропан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)-3,6,9,12-тетраоксапентадекан-15-амид (93). В раствор соединения 91 (22 мг, 0,022 ммоль) в безводном дихлорметане (3 мл) добавляли РЬ3Р (0,3 мг, 0,0012 ммоль), пирролидин (4 мкл, 0,048 ммоль) и тетраксис-палладий (0,7 мг, 6 мкмоль). Примерно через 2 ч реакционную смесь очищали на 1 мм пластине хроматотрона для радиальной хроматографии, элюируя смесью 5-10% метанол/дихлорметан. Фракции основного пика собирали и концентрировали с получением остатка, который растворяли в ДМФА (0,2 мл) и подвергали взаимодействию со сложным эфиром ΝΗδ соединения 87 (10 мг, 0,19 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 30 мин, концентрировали и очищали радиальной хроматографией на 1 мм пластине, элюируя смесью 5% метанол/дихлорметан, с получением 3,2 мг (11%) соединения 93: МС (Εδ+) т/ζ 1294,7 [М+Н]+.
Схема 19
(Е)-6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-Ш-пиррол-1-ил)-№-(4-(^)-7-метокси-8-((5-((^)-7-метокси-2-(4метоксифенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1-Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)пентил)окси)-5оксо-5,11а-дигидро-1И-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-2-ил)бензилиден)гексангидразид (94).
В смесь альдегида 95 (5,4 мг, 7 мкмоль) в смеси 5% метанол/дихлорметан при 0°С добавляли соль гидразида и ТФА соединения 96 (4,5 мг, 14 мкмоль). Реакционную смесь оставляли нагреваться до температуры окружающей среды и перемешивали в течение 5 ч, после чего концентрировали при пониженном давлении и очищали на колонке с силикагелем, элюируя смесью 3% метанол/дихлорметан, с получением 2,2 мг (32%) соединения 94: МС (Εδ+) т/ζ 974,49 [М+Н]+.
- 62 024118
(§)-трет-бутил 2-((§)-2-амино-3-метилбутанамидо)пропаноат (97).
В смесь гидрохлоридной соли О-трет-бутилового эфира аланина (98) (500 мг, 2,76 ммоль) в дихлорметане (5 мл) добавляли Ртос-Ь-Уа1-О§и (99) (1,09 г, 2,51 ммоль). Добавляли Э1РЕА (0,96 мл, 5,5 ммоль) и реакционную смесь оставляли перемешиваться при температуре окружающей среды в течение 16 ч. Смесь выливали в дихлорметан (100 мл) и промывали 1н. НС1 (50 мл) и водой (50 мл), после чего сушили над сульфатом магния. Вещество хроматографировали на 2 мм пластине хроматотрона для радиальной хроматографии, элюируя градиентом 1-5% метанол/дихлорметан, фракции, содержащие продукт, объединяли и концентрировали. Полученный остаток растворяли в дихлорметане (16 мл) и добавляли пиперидин (4 мл). Смесь перемешивали в течение 10 мин, после чего концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток хроматографировали на 2 мм пластине, элюируя сначала насыщенным раствором аммиака в дихлорметане, затем смесью 5% метанола в насыщенном растворе аммиака в дихлорметане, с получением 494 мг (2,02 ммоль, 81% за две стадии) соединения 97.
Ή ЯМР (400 МГц, СИСЕ) δ 7,78 (Ък, 1Н), 4,47 (т, 1Н), 3,30 (й, 1Н), 2,30 (т, 1Н), 1,38 (й, 3Н), 1,47 (к, 9Н), 1,00 (й, 1=7,0 Гц, 3Н), 0,84(й, 1=6,9Гц, 3Н).
(§)-трет-бутил 2-((§)-2-(4-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)бензамидо)-3-метилбутанамидо) пропаноат (100).
В смесь соединения 97 (100 мг, 0,41 ммоль) и 4-малеимидобензойной кислоты (101) (98 мг, 0,45 ммоль) добавляли дихлорметан (5 мл), затем ТВТИ (157 мг, 0,49 ммоль) и Э1РЕА (212 мкл, 1,23 ммоль). Смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 16 ч, затем очищали на 2 мм пластине хроматотрона для радиальной хроматографии, элюируя смесью 50% этилацетата в гексане, с получением 95 мг (51%) соединения 100.
Ή ЯМР (400 МГц, СИСЕ) δ 7,85 (й, 1=6,6 Гц, 2Н), 7,42 (й, 1=6,6 Гц, 2Н), 6,81 (к, 2Н), 6,38 (Ък, 1Н), 4,43 (т, 2Н), 2,14 (кер!, 1=6,6 Гц, 1Н), 1,41 (к, 9Н), 1,31 (й, 1=7,0 Гц, 3Н), 0,98 (т, 6Н); МС (Е§-) т/ζ 441,90 [М-Н]-.
(К)-2-((§)-2-(4-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)бензамидо)-3-метилбутанамидо)пропановая кислота (53).
В смесь соединения 100 (47 мг, 0,11 ммоль) в дихлорметане (5 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (5 мл) и проводили мониторинг реакционной смеси методом ТСХ (50% этилацетат в гексане после выдерживания пластины ТСХ в глубоком вакууме в течение 5 мин). Через 75 мин анализ ТСХ не показал присутствие исходных реагентов. Реакцию проводили повторно в тех же условиях, вещества, полученные в двух реакциях, объединяли и очищали на 2 мм пластине хроматотрона для радиальной хроматографии, элюируя в градиенте смесью 5-10% метанола в дихлорметане. Выход составил 42 мг (49%) соединения 53.
Ή ЯМР (400 МГц, СПС13) δ 7,92 (й, 1=6,6 Гц, 2Н), 7,51 (й, 1=6,6 Гц, 2Н), 7,0 (т, 1Н), 6,89 (к, 2Н), 6,70 (к, 1Н), 4,60 (т, 1Н), 2,22 (т, 1Н), 1,18 (й, 1=6,6 Гц, 3Н), 1,04 (т, 6Н); МС (Е§+) т/ζ 388,02 [М+Н]+.
трет-Бутиловый эфир (§)-2-((§)-2-(2-йодацетамидо)-3-метилбутанамидо)пропановой кислоты (102).
В смесь соединения 97 (100 мг, 0,41 ммоль) в дихлорметане добавляли сложный эфир йодацетамида и ΝΉ§ (103) (115 мг, 0,41 ммоль) и смесь перемешивали при температуре окружающей среды. Через 30 мин смесь распыляли на 1 мм пластину хроматотрона и элюировали этилацетатом в гексане (1:1). Собирали фракции основного пика и подтверждали структуру.
Ή ЯМР (400 МГц, СПС13) δ 6,70 (й, 1=7,8 Гц, 1Н), 6,27 (й, 1=7,0 Гц, 1Н), 4,45 (т, 1Н), 4,26 (йй, 1= 8,6, 6,3 Гц, 1Н), 3,72 (циай, 1=11,3 Гц, 2Н), 2,13 (кер!, 1=6,5 Гц, 1Н), 1,47 (к, 9Н), 1,38 (й, 1=7,1 Гц, 3Н), 0,99 (т, 6Н); МС (Е§+) т/ζ 412,87 [М+Н]+.
(§)-2-((§)-2-(2-йодацетамидо)-3-метилбутанамидо)пропановая кислота (55).
См. способ синтеза (К)-2-((§)-2-(4-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)бензамидо)-3метилбутанамидо)пропановой кислоты (53). Получали 22 мг (15% за две стадии): 1Н ЯМР (400 МГц, й6- 63 024118
ДМСО) δ 8,27 (ά, 1=9,4 Гц, 1Н), 4,24 (т, 2Н), 3,97 (Ь5, 2Н), 3,83 (ά, 1=9,4 Гц, 1Н), 3,71 (ά, 1=9,6 Гц, 1Н), 2,07 (т, 1Н), 1,33 (ά, 1=7,3 Гц, 3Н), 0,93 (ά, 1=6,7 Гц, 3Н), 0,89 (ά, 1=6,9 Гц, 3Н); ΜС (Εδ-) т/ζ 354,84 [ΜН]-.
Димеры ПБД, связанные посредством алифатических аминов (схема 21).
Димеры ПБД, содержащие алифатические амины, такие как бензиламин (пример 9), синтезировали путем введения пептидных линкеров, глюкуронидного линкера и/или линкеров, для которых высвобождение лекарственного соединения связано с разложением тАЬ (т.е. неспособных к расщеплению линкеров). Соединения линкер-лекарственное соединение, конъюгированные посредством бензиламина, включают: (1) способный к расщеплению пептид, который вводят при помощи способа, аналогичного схеме 1; (2) непосредственно присоединяемую малеимидокапроильную группу (неспособный к расщеплению линкер) (схема 2); (3) глюкуронидный линкер, полученный, как описано на схеме 6.
Типичные пептиды, связанные 2-, 3- и 4-анилинпроизводными димеров ПБД (схема 22).
Димеры ПБД, содержащие группы анилина в положениях 2, 3 и 4, конъюгируют с пептидными линкерами при помощи способа, описанного на схеме 1, или присоединяют непосредственно к малеимидокапроновой кислоте, как предложено на схеме 2.
Пример 14. Получение конъюгатов димеров ПБД.
Конъюгаты антитело-лекарственное соединение получали согласно предложенному ранее способу (см. Потита е! а1., №Лиге В1о!ссЬпо1о§у, 21, 778-784 (2003)). Краткое описание способа: в случае лекарственного средства, связанного с малеимидным линкером, восстанавливали тАЬ (4-5 мг/мл) в буфере ΡΒδ, содержащем 50 мМ борат натрия, при рН 7,4 гидрохлоридом трис(карбоксиэтил)фосфина (ТСЕР)
- 64 024118 при 37°С. Степень полноты протекания реакции восстановления межцепочечных дисульфидных связей отслеживали путем взаимодействия с 5,5'-дитиобис(2-нитробензойной кислотой), восстановление продолжали до достижения желаемого соотношения тиол/тАЬ. Восстановленное антитело затем охлаждали до 0°С и алкилировали 1,5 экв. лекарственного соединения, связанного с малеимидным линкером, на 1 экв. тиольных групп антитела. Через 1 ч реакцию гасили путем добавления 5 экв. Ν-ацетилцистеина (ИАС) и лекарственное соединение, связанное с линкером, удаляли путем гель-фильтрации на колонке ΡΌ-10. АЭС (конъюгат антитело-лекарственное средство) затем подвергали стерильной фильтрации через 0,22 мкм шприцевой фильтр. Концентрацию белка определяли путем спектрального анализа при 280 и 329 нм соответственно, с поправкой на поглощение лекарственным соединением при 280 нм. Использовали гельпроникающую хроматографию для определения агрегации антител, анализ ОФ ВЭЖХ подтверждал отсутствие остатка лекарственного соединения, связанного с линкером, обработанного в результате гашения NАС.
В случае лекарственных соединений, связанных с галогенацетамидными линкерами, конъюгацию обычно проводили согласно предложенному ниже описанию. В 10 мг/мл раствор восстановленного и повторно окисленного антитела (содержащего введенные остатки цистеина, заменяющие 8239С в тяжелых цепях (см. ниже)) в 10 мМ Тп8 (рН 7,4), 50 мМ №С1 и 2 мМ ЭТРА добавляли 0,5 объема пропиленгликоля. 10 мМ раствор лекарственного соединения, связанного с ацетамидным линкером, в диметилацетамиде получали непосредственно перед проведением конъюгации. Количество пропиленгликоля, эквивалентное добавленному в раствор антитела, добавляли к лекарственному соединению, связанному с линкером, в 6-кратном мольном избытке. Разбавленный раствор лекарственного соединения, связанного с линкером, добавляли в раствор антитела и доводили рН до 8,0-8,5 раствором 1 М Тп8 (рН 9). Реакцию конъюгации проводили в течение 45 мин при 37°С. Протекание реакции конъюгации подтверждали с помощью восстановительной и денатурирующей обращенно-фазовой хроматографии на колонке РЬКР8. Избыток лекарственного соединения, связанного с линкером, удаляли при помощи смолы СиайгаБП МР (81дта АИпск; кат. № 679526), буфер заменяли на 10 мМ Тп8 (рН 7,4), 50 мМ №С1 и 5% пропиленгликоль с помощью обессоливающей колонки ΡΌ-10 (СЕ НеаШсаге; кат. № 17-0851-01).
Инженерные антитела Ы§С1, содержащие введенный цистеин. Антитела СЭ70, содержащие остаток цистеина в положении 239 тяжелой цепи (1ι1Ρ6ά), полностью восстанавливали путем добавления 10 экв. ТСЕР и 1 мМ ЭДТА и доведения рН до 7,4 при помощи 1 М буфера Тп8 (рН 9,0). После инкубирования в течение 1 ч при 37°С реакционную смесь охлаждали до 22°С и добавляли 30 экв. дегидроаскорбиновой кислоты для селективного окисления исходных дисульфидов и сохранения цистеина 239 в восстановленном состоянии. Значение рН доводили до 6,5 при помощи 1 М буфера Тп8 (рН 3,7) и реакцию проводили в течение 1 ч при 22°С. рН раствора затем снова повышали до 7,4 путем добавления 1 М буфера Тг18 (рН 9,0). 3,5 экв. ПБД, связанного с линкером, в ДМСО помещали в подходящий контейнер и разбавляли пропиленгликолем перед добавлением в реакционную смесь. Для сохранения ПБД, связанного с линкером, в растворенном состоянии антитело сначала разбавляли пропиленгликолем до конечной концентрации 33% (например, если раствор антитела имел объем 60 мл, то добавляли 30 мл пропиленгликоля). Тот же объем пропиленгликоля (в данном случае примерно 30 мл) затем добавляли к ПБД, связанному с линкером, в качестве разбавителя. После перемешивания раствора ПБД, связанного с линкером, в пропиленгликоле добавляли в раствор антитела для проведения конъюгации; конечная концентрация пропиленгликоля составляла 50%. Реакцию проводили в течение 30 мин, а затем гасили путем добавления 5 экв. Ν-ацетилцистеина. АЭС затем очищали путем ультрафильтрации через мембрану 30 кДа. (Необходимо отметить, что концентрацию пропиленгликоля, применяемого в реакции, можно снижать в случае любого определенного ПБД, так как единственным назначением пропиленгликоля является сохранение лекарственного соединения, связанного с линкером, в растворенном состоянии в водной среде).
Пример 15. Определение активности выбранных конъюгатов ίη νίΙΐΌ.
Цитотоксическую активность выбранных конъюгатов антитело-лекарственное средство ίη νίΙΐΌ определяли при помощи исследования восстановления резазурина (8Цта, 8ΐ. Ьош8, Миссури, США) (ссылка: Эстоита е1 а1., №Циге Бю^сНио^у, 2003, 21, 778-784). Конъюгаты антитело-лекарственное соединение получали согласно описанному выше в примере 13.
Для 96-часового исследования культивируемые клетки в логарифмической фазе роста помещали на 24 ч в 96-луночные планшеты, содержащие 150 мкл КРМ1 1640, содержащей 20% РВ8. Проводили последовательные разбавления АЭС в питательной среде до рабочей концентрациях; 50 мкл каждого разбавленного раствора добавляли в 96-луночные планшеты. После добавления АЭС клетки инкубировали с исследуемыми конъюгатами в течение 4 дней при 37°С. Затем в каждую лунку добавляли резазурин до достижения конечной концентрации 50 мкМ, и планшеты дополнительно инкубировали в течение 4 ч при 37°С. Планшеты затем анализировали, определяя степень снижения содержания красителя на планшетном анализаторе Ри8ЮП НТ (РаскаМ Ιι^Ιπιιι^ηΚ Ме^еи Коннектикут, США), длины волн возбуждения и испускания составляли 530 и 590 нм соответственно. Значение 1С50, измеренное в трех повторностях, определяют в настоящем описании как концентрацию, которая приводит к 50% снижению роста клеток по сравнению с контрольными опытами без добавления лекарственного средства.
В табл. 4 (см. ниже) показана цитотоксичность АЭС, содержащих димеры ПБД с параанилиновыми
- 65 024118 заместителями, в 96-часовом ίη νίΐΐΌ исследовании. Исследовали цитотоксичность АЭС в отношении клеточных линий СЭ70' СЭ30- и контрольной клеточной линии СЭ70- СЭ30-. Применяли антитело СЭ70. гуманизированное 1Р6 (см. публикацию заявки И8 2009-148942), антитело СЭ30. химерное АС10 (см. публикацию заявки И8 2008-0213289) и антитело СЭ70 (гуманизированное 1Р6), содержащее остаток цистеина в положении 239 тяжелой цепи аминокислот (согласно системе нумерации ЕС) (обозначено 1ι1Ρ6ά). Конъюгаты, содержащие малеимидилпептидный линкер (лекарственное соединение, связанное с линкером, 38), имели более низкие значения 1С50 по сравнению с конъюгатами, содержащими малеимидильные или ацетамидные линкеры (соединения 40 и 41 соответственно).
Цитотоксическая активность ίη νίΙΐΌ конъюгатов АЭС, содержащих лекарственные соединения на основе димера ПБД с параанилиновым заместителем, 37.
Таблица 4
Цитотоксическая активность в отношении клеточной линии СЭ70' (нг/мл), все АЭС содержали 2 молекулы лекарственного соединения/тАЬ почечноклеточная карцинома
ОМЛ
786-0 Сай-1 769-Р АСИИ НЕЬ9217
МГ60-38 30 5 1378
ЫР6-38 4 118 26
сАС 10-38 1052 4005 508
И1Р6-40 7113 1764
сАС 10-40 2644 1264
ЫР6-41 580 1243
сАСЮ-41 1153 1121
В табл. 5 показана цитотоксичность ίη νίΐΐΌ конъюгатов димеров ПБД в отношении клеточной линии СЭ30' в 96-часовом исследовании. Исследовали цитотоксичность АИС в отношении клеточных линий ί'.Ό30'ί'.Ό70' и клеточной линии СЭ70-СЭ30'. Применяли антитело СЭ70. гуманизированное 1Р6 (см. публикацию заявки И8 2009-148942), и антитело СЭ30. химерное АС10 (см. публикацию заявки И8 2008-0213289). Конъюгаты, содержащие малеимидилпептидный линкер (лекарственное соединение, связанное с линкером, 38), в целом, имели более низкие значения 1С50 по сравнению с конъюгатами, содержащими малеимидильные или ацетамидные линкеры (соединения 40 и 41 соответственно).
Цитотоксическая активность в отношении клеточной линии СЭ30' (нг/мл),
Таблица 5 все АЭС содержали 2 молекулы лекарственного соединения/тАЬ
АККЛ
С070-/30+
Лимфома Ходжкина С070+/30+
Кагцаа 299 1.428 Ь540су Ы236 Нз445
ЫР6-38 1165 59 4 >10000 5
сАС1038 0.8 7 3 2012 0.2
ЫР6-40 2195 7867 2557
сАС 10-40 621 3172 134
ЫР6-41 1330 3549 755
сАС 10-41 340 957 13
Цитотоксическая активность ίη νίΙΐΌ АИС, содержащих лекарственные соединения на основе димера ПБД с метаанилиновым заместителем, 42.
В табл. 6 показана цитотоксичность ίη νίΐΐΌ конъюгатов димеров ПБД в отношении клеточной линии СЭ30' в 96-часовом исследовании. Исследовали активность в отношении клеточных линий ί'.Ό30'ί'.Ό70' и клеточной линии СЭ70-СЭ30'. Применяли антитело СЭ70. гуманизированное 1Р6 (см. публикацию заявки И8 2009-148942), и антитело СЭ70 (гуманизированное 1Р6), содержащее остаток цистеина в положении 239 тяжелой цепи аминокислот (согласно нумерации ЕС) (обозначено 1ι1Ρ6ά). Конъюгаты, содержащие малеимидилпептидный линкер (лекарственное соединение, связанное с линкером, 43) и глюкуронидный линкер (48), в целом, имели более низкие значения 1С50 по сравнению с конъюгатами, содержащими малеимидильный линкер (соединение 44).
- 66 024118
Цитотоксическая активность ш νίΙΤΌ в отношении клеточных линий СЭ70' (нг/мл)
Таблица 6
Лимфома почечноклеточная карцинома
Ходжкина
Сакт-1 786-0 Ь428
ЫР66-43 (2 ЛС/тАЬ) 7 39 >10000
ΤβΟ43 (2 ЛС/тАЫ >10000 >10000
И1Р6-44 (3,5 ЛС/тАЬ) 1124 2142
1ρίτ-44 (3.5 ЛС/тАЬ! 1491 1242
ЫТ66-48 (2 ЛС/тАЬ) 89 4093
ТаС48 (2 ЛС/тАЬ) 2939 6376
Цитотоксическая активность ш νίΙΤΌ АЭС, содержащих лекарственные соединения на основе димеров ПБД с пара- и метаанилиновыми заместителями, 38 и 42 (соответственно).
В табл. 7 показана цитотоксичность ш νίΙΤΌ конъюгатов димеров ПБД в отношении клеточных линий ί'Ό70' в 96-часовом исследовании. Исследовали активность в отношении клеточных линий СЭ70' Ь428 и 786О и клеточной линии СЭ70- ОМЛ. Применяли антитело СЭ70, гуманизированное 1Р6 (см. публикацию заявки И8 2009-148942) и антитело СЭ70 (гуманизированное 1Р6), содержащее остаток цистеина в положении 239 тяжелой цепи аминокислот (согласно нумерации ЕС) (обозначено Ь1Р6б). Конъюгаты, содержащие малеимидилпептидный линкер, связанный с метаанилиновой группой (лекарственное соединение, связанное с линкером, 43), были незначительно менее активными по сравнению с конъюгатами, содержащими малеимидилпептидный линкер, связанный с параанилиновой группой (лекарственное соединение, связанное с линкером, 38). Снижение содержания соединения с метаанилиновым заместителем до 2 молекул на антитело снижало активность. Конъюгаты, содержащие глюкуронидный линкер из соединения с параанилиновой группой (48), как правило, имели более низкие значения 1С50 по сравнению с конъюгатами, содержащими малеимидильный линкер (соединение 39). Кроме того, соединение с параанилиновым заместителем, содержащее арилмалеимид, (54), не обладало активностью в отношении указанных клеточных линий. Также конъюгат, содержащий малеимидильный линкер, конъюгированный непосредственно с соединением 42, обладал сниженной активностью по сравнению с конъюгатом Ь1Р6-43 (данные не представлены).
Таблица 7
Цитотоксическая активность ш νίΙΤΌ в отношении клеточных линий СЭ70' (нг/мл)
Лимфома Поч,-кл.
контроль _кШ_ЖС__
ЫР6-43(4 ЛС/тАЬ) 404 И 1205
ЫР6с1- 43(2 ЛС/тАЫ Макс.инг = 40% 200_1625
Н1Р6б48(2 ЛС/тАЬ) 4093 89 1964
Ь1Р6 54(4 ЛС/тАЬ) Неактивен Неактивен_Неактивен
ЫР6- 38 (2 ЛС/тАЬ) 230 <п=2> 25 (п=3) 503
Цитотоксическая активность ш уйго АЭС, содержащих лекарственные соединения на основе димеров ПБД, связанных посредством анилиновых заместителей.
В табл. 8 показана цитотоксичность ш νίΙΤΌ конъюгатов димеров ПБД в отношении клеточных линий СЭ70+ в 96-часовом исследовании. Исследовали активность в отношении клеточных линий СЭ70+ СакЫ и Ь428 клеточной линии СЭ70-. Применяли антитело СЭ70 (гуманизированное 1Р6), содержащее остаток цистеина в положении 239 тяжелой цепи аминокислот (согласно нумерации ЕС) (обозначено Ь1Р6б). Связывание ПБД через аминогруппу в орто-положении посредством линкера, не способного к расщеплению (соединение 68), значительно снижало активность по сравнению с АЭС, связанным посредством присоединенного к параанилиновой группе способного к расщеплению линкера (соединение 54). Соединения 73 и 85, содержащие способный к расщеплению линкер, имели активность, сопоставимую с активностью соединения 54; оба этих соединения связаны через параанилин. Соединения с линкерами, способными к расщеплению, требующими более жестких условий для расщепления, 79 и 90, имели активность, незначительно сниженную по сравнению с соединением 54.
- 67 024118
Цитотоксическая активность ш уйго в отношении клеточных линий СЭ70' (нг/мл)
Таблица 8
СаН-1 786-0
ЫР6Й- 68 (2 ЛС/тАЬ) 3236 3486 5501
ЫР64- 73 (2 ЛС/тАЬ) 2 7 482
ЫРбй- 79 (2 ЛС/тАЬ) 24 348 5385
ЫР66- 54 (2 ЛС/тАЬ) 6 17 4665
ЫРбй- 85 (2 ЛС/тАЬ) ЫР6Й- 90(1,4 ЛС/тАЬ)
4700
678
Цитотоксическая активность ш уйго АЭС, содержащих соединения линкер-лекарственное соединение на основе димеров ПБД, связанных с анилинсодержащими группами.
В табл. 9 показана цитотоксичность ш уйго конъюгатов димеров ПБД в отношении клеточных линий ί'Ό70' в 96-часовом исследовании. Исследовали активность в отношении клеточных линий СЭ70' Сак1-1 и Ь428 и двух клеточных линий лейкоза СЭ70-. Применяли антитело СЭ70, гуманизированное 1Р6 (см. публикацию заявки ИЗ 2009-148942), и антитело ί'Ό70 (гуманизированное 1Р6), содержащее остаток цистеина в положении 239 тяжелой цепи аминокислот (согласно нумерации ЕС) (обозначено й1Р6б). Соединение 56, содержащее способный к расщеплению линкер, связанное с антителом посредстом ацетамида, имело активность, сопоставимую с активностью соединения 38. Связанный с глюкуронидной группой аналог димера ПБД, связанного с метаанилиновой группой, соединение 48, имело низкую активность в этом исследовании. Соединение 58, содержащее пять метиленовых групп в мостике ПБД, имело активность, сопоставимую с активностью соединения 38, содержащего три метиленовые группы в мостике ПБД.
Таблица 9
Цитотоксическая активность ш уйго в отношении клеточных линий СЭ70' (нг/мл)
Почечноклеточная карцинома Лейкоз
АВС Сак|-1 (СО70 #135000) 786-0 (СОЮ #190000) СЛ 70'линия 1 СВ70'линия 2
ЫР64-56 (1,8 ЛС/АЬ) 3 6 1672 Макс.инг.=50%
ЫР66-48 (0.6 ЛС/АЬ) Макс.инг.=45% Макс.инг.=35% Неактивен Неактивен
ЫР6Й-58 (1,9 ЛС/АЬ) 0,5 2 1750 4847
5 15
ЫР64-38 (2 ЛС/АЬ) (3-5, п=4) (5-30, п=4) 2082 7188
Пример 16. Определение цитотоксичности выбранных конъюгатов ш у1уо.
Все исследования проводили в соответствии с протоколом комитета по содержанию и использованию лабораторных животных в условиях, полностью одобренных ассоциацией оценки и аккредитации лабораторных исследований на животных. Сначала определяли переносимость ш у1уо для подтверждения переносимости конъюгатов в клинически значимых дозах. Мышам ВАЬВ/с вводили возрастающие дозы АЭС в буфере РВЗ, содержащем 0,01% Т\уееп 20. Исследовали потерю массы у мышей после введения лекарственного средства; мышей, у которых наблюдали потерю 20% массы тела или другие признаки заболевания, подвергали эвтаназии. Применяли антитело СЭ70, гуманизированное 1Р6 (см. публикацию заявки ИЗ 2009-148942) и антитело СО30, химерное АС10 (см. публикацию заявки ИЗ 20080213289).
На фиг. 1 показаны результаты исследования потери массы тела с применением сАС10-Уа1-А1аЗС3132(2) (сАС10-соединение 38). Введение одной 5 мг дозы конъюгата интраперитонеально или внутривенно приводило к небольшой потере массы тела. Более высокая доза конъюгата (15 мг/кг) приводила к потере массы тела у мышей.
На фиг. 2 показаны результаты исследования потери массы тела с применением й1Р6-Уа1-А1аЗС3132(2) (й1Р6-соединение 38). Введение одной 5 мг дозы конъюгата интраперитонеально приводило к незначительной потере массы тела. Более высокая доза конъюгата (10 мг/кг) приводила к значительной потере массы тела у мышей.
Исследования лечения проводили на двух моделях ксенотрансплантатов ί'Ό70' почечно-клеточной карциномы. Фрагменты опухолей (786-О и Сак1-1) имплантировали в правый бок бестимусных мышей. Мышей случайно разбивали в исследуемые группы (п=5) на восьмой (786-О) или девятый (Сак1-1) день, средний размер опухоли в каждой группе составлял примерно 100 мм3. АЭС или контроль вводили интраперитонеально согласно схеме с]4б\4. Определяли зависимость объема опухоли от времени, используя формулу объема (ЬхУ2)/2. Животных подвергали эвтаназии, если объем опухоли достигал 1000 мм3. Исследование мышей, у которых наблюдали продолжительную регрессию опухоли, прекращали при- 68 024118 мерно на 100 день после введения импланта.
На фиг. 3 показаны результаты исследования лечения с применением конъюгата Н1Р6-Уа1-А1а§О3132(2) (Ь1Р6-соединение 38). Также применяли контрольный конъюгат сАС10-Уа1-А1а-8О3132(2) (сАС10-соединение 38). У мышей, которым вводили 0,1 мг/кг дозу конъюгата Ь1Р6, наблюдали незначительное уменьшение опухоли, в то же время более высокие дозы, составляющие 0,3 и 1 мг/кг, приводили к полному исчезновению опухоли. Контрольный конъюгат (без связывания) был менее активным по сравнению с конъюгатами Ь1Р6.
На фиг. 4 показаны результаты исследования лечения с применением конъюгата Н1Р6-тс-уа1-а1а§О3132(2) (Ь1Р6-соединение 38). Также применяли контрольный конъюгат сАС10-тс-уа1-а1а-8С3132(2) (сАС10-соединение 38). У мышей, которым вводили 1 мг/кг дозы конъюгата Ь1Р6, наблюдали полное исчезновение опухоли. У мышей, которым вводили более низкие дозы - 0,3 и 0,1 мг/кг, наблюдали сниженное уменьшение опухоли соответственно. Контрольный конъюгат (без связывания) был менее активным по сравнению с конъюгатом Ь1Р6, который вводили в равной дозе, но был более активным по сравнению с конъюгатом Ь1Р6, который вводили в уменьшенных дозах. Конъюгат Ь1Р6 также был более активным по сравнению с конъюгатом Ь1Р6-ус-ММАЕ (публикация заявки на патент США № 20090148942), который вводили в более высоких дозах.
На фиг. 5 показано сравнение результатов исследования лечения с применением антитела Ь1Р6б, связанного с двумя молекулами соединения 38 (Ь1Р6б-38), и лечения с применением контроля, не обеспечивающего связывание, Η006, конъюгированного с двумя молекулами того же соединения (Ь00б-38). Применяли модель подкожной инъекции Сак! бестимусным мышам. Дозы составляли 0,1, 0,3 и 1 мг/кг по схеме с.|7б\2. Две самые высокие дозы конъюгата Ь1Р6 приводили к полному исчезновению опухоли при 1 мг/кг дозе и к значительной задержке развития опухоли при 0,3 мг/кг дозе. Не обеспечивающий связывание контроль приводил к задержке развития опухоли при 1 мг/кг дозе.
На фиг. 6 предложено сравнение результатов исследования лечения с применением антитела Ь1Р6б, связанного с двумя молекулами соединения 38 (Ь1Р6б-38), и не обеспечивающего связывание контроля, Η006, конъюгированного с двумя молекулами того же соединения (Ь00б-38). Применяли модель подкожной инъекции 786-О бестимусным мышам. Дозы составляли 0,1, 0,3 и 1 мг/кг по схеме с.|7б\2. Все три дозы конъюгата Ь1Р6 приводили к полному исчезновению или задержке развития опухоли, в то же время не обеспечивающий связывание контроль приводил к задержке развития опухоли.

Claims (19)

1. Конъюгат, имеющий формулу I ь - (ьи-о)р (ΐ) или его фармацевтически приемлемая соль или сольват, где Ь представляет собой белок, полипептид или пептид, который специфично связывается с молекулоймишенью,
ЬИ представляет собой линкер, который имеет формулу 1а
-А1-!? - (1а), где -А1- выбран из где * означает место присоединения к Ь1, волнистая линия означает место присоединения к Ь, а и равен от 0 до 6;
где * означает место присоединения к Ь1, волнистая линия означает место присоединения к Ь, и равен 0 или 1, а т равен от 0 до 30; и где * означает место присоединения к Ь1, волнистая линия означает место присоединения к Ь, и равен 0
- 69 024118 или 1, а т равен от 0 до 30;
Ь1 - представляет собой последовательность аминокислот, расщепляемую под действием ферментов, присутствующих в клетке-мишени;
или ЬИ представляет собой линкер, который имеет формулу X где * означает место присоединения к Ό, волнистая линия означает место присоединения к Ь; -А1- выбран из где * означает место присоединения к ΝΚ волнистая линия означает место присоединения к Ь, а η равен от 0 до 6;
где * означает место присоединения к ΝΚ волнистая линия означает место присоединения к Ь, η равен 0 или 1, а т равен от 0 до 30;
где * означает место присоединения к ΝΚ волнистая линия означает место присоединения к Ь, η равен 0 или 1, а т равен от 0 до 30;
где * означает место присоединения к ИН, волнистая линия означает место присоединения к Ь;
Е представляет собой остаток глюкуроновой кислоты; р равен от 1 до 20,
Ό представляет собой фрагмент лекарственного соединения, содержащий димер пирролбензодиазепина (ПБД), имеющий следующую формулу II:
>-Х где К2 имеет формулу III о о где А представляет собой фенильную группу, X представляет собой -ИН, ф1 представляет собой простую связь, а ф2 выбран из простой связи и -Ο-(ίΉ2)η-, где η равен от 1 до 3;
К12 представляет собой фенильную или тиофенильную группу, замещенную одним заместителем, выбранным из группы, состоящей из простой эфирной группы, диметиламинопропилокси и пиперазинила;
К6, К6', К9 и К9' представляют собой Н;
К7 и К7 независимо представляют собой С1-4 алкилоксигруппу;
К10 и К11 образуют азот-углеродную двойную связь между атомами азота и углерода, к которым они присоединены;
К представляет собой С3-7 алкиленовую группу и Υ и Υ' представляют собой О;
К10 и К11 являются такими же, как К10 и К11.
- 70 024118
2. Конъюгат по п.1, отличающийся тем, что Ц2 представляет собой простую связь.
3. Конъюгат по п.1, отличающийся тем, что Ц2 представляет собой -О-(СН2)п-, где п равен от 1 до 3.
4. Конъюгат по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что К7, К10 и К11 являются такими же, как К7, К10 и К11 соответственно.
5. Конъюгат по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что линкер (ЬИ) имеет формулу 1а.
6. Конъюгат по п.1, отличающийся тем, что А1 представляет собой где * означает место присоединения к Ь1, волнистая линия означает место присоединения к лиганду, а п равен от 0 до 6.
7. Конъюгат по п.6, отличающийся тем, что п равен 5.
8. Конъюгат по п.1, отличающийся тем, что Ь1 представляет собой дипептид.
9. Конъюгат по п.8, отличающийся тем, что Ь1 выбран из группы, состоящей из дипептидов валиналанин, валин-цитруллин и фенилаланин-лизин.
10. Конъюгат по п.1, отличающийся тем, что Ό выбран из
11. Конъюгат по п.1, отличающийся тем, что ЬИ-Э представляет собой
12. Конъюгат по п.1, отличающийся тем, что ЬИ-Э представляет собой
13. Конъюгат по любому из пп.1-12, отличающийся тем, что р равно 2.
14. Фармацевтическая композиция, содержащая конъюгат по любому из пп.1-13 и фармацевтически приемлемый наполнитель, носитель, буфер или стабилизатор.
15. Фармацевтическая композиция по п.14, отличающаяся тем, что средняя нагрузка лекарственно- 71 024118 го соединения в коньюгате в композиции равна 2.
16. Применение конъюгата или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата по любому из пп.1-13 для получения лекарственного средства для лечения пролиферативного заболевания или аутоиммунного заболевания.
17. Применение конъюгата или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата по любому из пп.1-13 для лечения пролиферативного заболевания или аутоиммунного заболевания.
18. Способ лечения млекопитающего, имеющего пролиферативное заболевание или аутоиммунное заболевание, включающий введение эффективного количества конъюгата по любому из пп.1-13 или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата.
19. Лекарственное соединение, имеющее формулу или его фармацевтически приемлемая соль или сольват.
- 72 024118
СРЕДНИЙ ОБЪЕМ ОПУХОЛИ
Фиг. 3
Эффективность Н1Р6-уа1-а1а-8О3132(2) в отношении опухоли почечно-клеточной карциномы 786-О у бестимусных мышей
Эффективность Н1Р6-1910(2) в отношении опухолей Сак1-1 (ПКК) у самок бестимусных мышей
- 73 024118
Активность АЭС ЫО6Д-38 в отношении опухолей Сак1-1, подкожно вводившихся бестимусным мышам
Активность АЭС ЫО6Д-38 в отношении опухолей 786-О, подкожно вводившихся бестимусным мышам
EA201290838A 2010-04-15 2011-04-15 Конъюгаты пирролбензодиазепина направленного действия EA024118B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US32462310P 2010-04-15 2010-04-15
PCT/US2011/032664 WO2011130613A1 (en) 2010-04-15 2011-04-15 Targeted pyrrolobenzodiazapine conjugates

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201290838A1 EA201290838A1 (ru) 2013-05-30
EA024118B1 true EA024118B1 (ru) 2016-08-31

Family

ID=44150264

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201290838A EA024118B1 (ru) 2010-04-15 2011-04-15 Конъюгаты пирролбензодиазепина направленного действия

Country Status (14)

Country Link
US (5) US9242013B2 (ru)
EP (2) EP2558127B1 (ru)
JP (1) JP5870400B2 (ru)
KR (2) KR101671360B1 (ru)
CN (2) CN107019804A (ru)
AU (1) AU2011239522B2 (ru)
BR (1) BR112012026801B8 (ru)
CA (1) CA2795349C (ru)
EA (1) EA024118B1 (ru)
IL (2) IL222269A (ru)
MX (2) MX2012011900A (ru)
NZ (1) NZ602932A (ru)
WO (1) WO2011130613A1 (ru)
ZA (1) ZA201207317B (ru)

Families Citing this family (182)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2516455C (en) 2003-02-20 2012-05-01 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders
PL2099823T5 (pl) 2006-12-01 2023-02-20 Seagen Inc. Wariant środków wiążących cel i jego zastosowania
GB0819095D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
IL271761B (en) 2009-02-05 2022-09-01 Immunogen Inc (12as)-8-methoxy-9-benzyloxy-11,12,12a,13-tetrahydro-6h-indolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine-6-one, 4-benzyloxy-5-methoxy -2-nitrobenzoic acid and a process for their preparation
AU2011239525B2 (en) 2010-04-15 2015-04-09 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
AU2011239522B2 (en) 2010-04-15 2014-10-23 Medimmune Limited Targeted pyrrolobenzodiazapine conjugates
US9534000B2 (en) 2011-02-15 2017-01-03 Immunogen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives and methods of preparation
US20130058947A1 (en) 2011-09-02 2013-03-07 Stem Centrx, Inc Novel Modulators and Methods of Use
CA2849039C (en) 2011-09-20 2018-09-18 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines as unsymmetrical dimeric pbd compounds for inclusion in targeted conjugates
BR112014008888A2 (pt) 2011-10-14 2017-04-18 Seattle Genetics Inc pirrolobenzodiazepinas
EA036202B1 (ru) 2011-10-14 2020-10-14 Сиэтл Дженетикс, Инк. Пирролбензодиазепины и конъюгаты направленного действия
US9388187B2 (en) 2011-10-14 2016-07-12 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines
EP3388435B1 (en) 2011-10-14 2023-05-03 Seagen Inc. Pyrrolobenzodiazepines and targeted conjugates
WO2013126746A2 (en) 2012-02-24 2013-08-29 Stem Centrx, Inc. Novel modulators and methods of use
SG10201801444WA (en) 2012-02-24 2018-04-27 Abbvie Stemcentrx Llc Anti sez6 antibodies and methods of use
US20130309223A1 (en) 2012-05-18 2013-11-21 Seattle Genetics, Inc. CD33 Antibodies And Use Of Same To Treat Cancer
WO2013177481A1 (en) 2012-05-25 2013-11-28 Immunogen, Inc. Benzodiazepines and conjugates thereof
EP2906297B1 (en) 2012-10-12 2017-12-06 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
CA3060520C (en) 2012-10-12 2022-05-17 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
AU2013328673B2 (en) 2012-10-12 2017-07-13 Medimmune Limited Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation
MX364328B (es) 2012-10-12 2019-04-23 Medimmune Ltd Conjugados del anticuerpo pirrolobenzodiazepina.
WO2014057118A1 (en) * 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd22 antibody conjugates
DK2906251T3 (da) 2012-10-12 2017-11-20 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepin-anti-CD22-antistofkonjugater
PL2766048T3 (pl) 2012-10-12 2015-05-29 Medimmune Ltd Pirolobenzodiazepiny i ich koniugaty
CA2887896A1 (en) * 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine-anti-her2 antibody conjugates
NZ707486A (en) * 2012-10-12 2018-09-28 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine - anti-psma antibody conjugates
NZ707534A (en) * 2012-10-12 2018-08-31 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
WO2014057114A1 (en) * 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-anti-psma antibody conjugates
KR101762047B1 (ko) * 2012-11-05 2017-07-27 화이자 인코포레이티드 스플라이세오스타틴 유사체
US9353150B2 (en) 2012-12-04 2016-05-31 Massachusetts Institute Of Technology Substituted pyrazino[1′,2′:1 ,5]pyrrolo[2,3-b]-indole-1,4-diones for cancer treatment
CA2894959C (en) * 2012-12-21 2022-01-11 Spirogen Sarl Unsymmetrical pyrrolobenzodiazepines-dimers for use in the treatment of proliferative and autoimmune diseases
CN110452242A (zh) 2012-12-21 2019-11-15 麦迪穆有限责任公司 吡咯并苯并二氮杂卓及其结合物
CN105164159A (zh) 2013-02-22 2015-12-16 施特姆森特克斯股份有限公司 新的抗体缀合物及其用途
CA2901312C (en) 2013-03-13 2022-09-06 Seattle Genetics, Inc. Activated carbon filtration for purification of benzodiazepine adcs
US20160031887A1 (en) * 2013-03-13 2016-02-04 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
AU2014244245C1 (en) * 2013-03-13 2018-04-19 Genentech, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CN105189546B (zh) * 2013-03-13 2022-09-02 西雅图基因公司 环糊精和抗体-药物偶联物制剂
CN105142674B (zh) 2013-03-13 2018-11-13 麦迪穆有限责任公司 吡咯并苯并二氮杂卓和其结合物
US10208125B2 (en) 2013-07-15 2019-02-19 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Anti-mucin 1 binding agents and uses thereof
EA201690195A1 (ru) * 2013-08-12 2016-05-31 Дженентек, Инк. Конъюгатные соединения антитело-лекарство на основе димера 1-(хлорметил)-2,3-дигидро-1h-бензо[e]индола и способы применения и лечения
WO2015031693A1 (en) * 2013-08-28 2015-03-05 Stem Centrx, Inc. Engineered anti-dll3 conjugates and methods of use
CN105848671B (zh) 2013-08-28 2019-12-13 艾伯维施特姆森特克斯有限责任公司 位点特异性抗体缀合方法和组合物
KR20160046914A (ko) 2013-08-28 2016-04-29 스템센트알엑스 인코포레이티드 신규한 ｓｅｚ6 조절물질 및 사용방법
NZ717003A (en) 2013-09-02 2019-05-31 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Novel cytotoxic agents for conjugation of drugs to cell binding molecule
MX2016003256A (es) 2013-09-12 2016-06-07 Halozyme Inc Anticuerpos modificados del receptor de factor de crecimiento anti-epidermico y metodos de uso de los mismos.
GB201317981D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP3054986B1 (en) 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
WO2015052534A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US10010624B2 (en) 2013-10-11 2018-07-03 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GB201317982D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CA2921707C (en) 2013-10-15 2023-03-28 Seattle Genetics, Inc. Pegylated drug-linkers for improved ligand-drug conjugate pharmacokinetics
PE20160870A1 (es) 2013-11-06 2016-09-09 Abbvie Stemcentrx Llc Anticuerpos anti-claudina novedosos y metodos de uso
MX2016006551A (es) 2013-11-25 2016-09-06 Seattle Genetics Inc Preparacion de anticuerpos de cultivos de celula de ovario de hamster chino para conjugacion.
CN106104273A (zh) 2013-12-12 2016-11-09 施特姆森特克斯股份有限公司 新型抗dpep3抗体和使用方法
MX2016007578A (es) 2013-12-16 2016-10-03 Genentech Inc Compuestos de conjugado anticuerpo-farmaco dimerico de 1-(clorometil)-2,3-dihidro-1h-benzo [e] indol, y metodos de uso y tratamiento.
IL290330B2 (en) 2013-12-19 2023-09-01 Seagen Inc Methylene carbamate binders for use with drug-targeting conjugates
MX2016010677A (es) 2014-02-21 2017-04-10 Abbvie Stemcentrx Llc Conjugados de anticuerpos anti-drosophila similar a delta 3 (anti-dll3) y medicamentos para usarse en el tratamiento contra melanoma.
MX371403B (es) 2014-03-20 2020-01-29 Bristol Myers Squibb Co Moleculas de andamiaje a base de fibronectina estabilizada.
RU2016141267A (ru) 2014-03-21 2018-04-24 Эббви Инк. Антитела против egfr и конъюгаты антитело-лекарственное средство
GB201406767D0 (en) 2014-04-15 2014-05-28 Cancer Rec Tech Ltd Humanized anti-Tn-MUC1 antibodies anf their conjugates
TW201617368A (zh) * 2014-09-05 2016-05-16 史坦森特瑞斯公司 新穎抗ｍｆｉ２抗體及使用方法
EP3193940A1 (en) 2014-09-10 2017-07-26 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
TWI758784B (zh) 2014-09-12 2022-03-21 美商建南德克公司 抗her2抗體及免疫結合物
GB201416112D0 (en) 2014-09-12 2014-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
HUE050596T2 (hu) 2014-11-21 2020-12-28 Bristol Myers Squibb Co Antitestek CD73 ellen és azok felhasználásai
DK3221346T3 (da) 2014-11-21 2020-10-12 Bristol Myers Squibb Co Antistoffer omfattende modificerede konstante områder af tungkæden
KR20170101895A (ko) 2014-11-25 2017-09-06 에이디씨 테라퓨틱스 에스에이 피롤로벤조디아제핀-항체 접합체
EP3224277B1 (en) 2014-11-25 2020-08-26 Bristol-Myers Squibb Company Novel pd-l1 binding polypeptides for imaging
CN107428780B (zh) 2015-01-14 2020-09-04 百时美施贵宝公司 苯并二氮杂*二聚体、其缀合物及制备和使用方法
WO2016115201A1 (en) 2015-01-14 2016-07-21 Bristol-Myers Squibb Company Heteroarylene-bridged benzodiazepine dimers, conjugates thereof, and methods of making and using
JP2018510864A (ja) 2015-03-10 2018-04-19 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ トランスグルタミナーゼによって結合可能な抗体およびそれによって製造される結合体
GB201506389D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506402D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506411D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Bergenbio As Humanized anti-axl antibodies
HRP20230060T1 (hr) 2015-05-29 2023-03-17 Bristol-Myers Squibb Company Antitijela protiv ox40 i njihova primjena
TW201709932A (zh) 2015-06-12 2017-03-16 西雅圖遺傳學公司 Ｃｄ１２３抗體及其共軛物
KR20180019592A (ko) 2015-06-23 2018-02-26 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 마크로시클릭 벤조디아제핀 이량체, 그의 접합체, 제조법 및 용도
AU2016287647A1 (en) 2015-06-30 2017-12-07 Seagen Inc. Anti-NTB-A antibodies and related compositions and methods
KR102660070B1 (ko) * 2015-07-21 2024-04-24 이뮤노젠 아이엔씨 세포독성 벤조다이아제핀 유도체의 제조 방법
JP6951340B2 (ja) 2015-09-23 2021-10-20 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ グリピカン−３結合フィブロネクチンベース足場分子
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
US10188660B2 (en) 2015-11-30 2019-01-29 Abbvie Inc. Anti-huLRRC15 antibody drug conjugates and methods for their use
EP3383910A1 (en) 2015-11-30 2018-10-10 AbbVie Inc. ANTI-huLRRC15 ANTIBODY DRUG CONJUGATES AND METHODS FOR THEIR USE
MX2018006218A (es) 2015-12-04 2018-09-05 Seattle Genetics Inc Conjugados de compuestos de tubulisina cuaternizada.
US11793880B2 (en) 2015-12-04 2023-10-24 Seagen Inc. Conjugates of quaternized tubulysin compounds
PE20181302A1 (es) * 2015-12-04 2018-08-09 Abbvie Stemcentrx Llc Nuevos anticuerpos anti-claudina y sus metodos de uso
GB201521709D0 (en) * 2015-12-09 2016-01-20 Kings College London And Sec Dep For Health The PBD Antibacterial agents
US20180362619A1 (en) 2015-12-21 2018-12-20 Bristol-Myers Squibb Company Variant antibodies for site-specific conjugation
GB201601431D0 (en) * 2016-01-26 2016-03-09 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB201602356D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
GB201602359D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
US20190284293A1 (en) 2016-03-04 2019-09-19 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy with anti-cd73 antibodies
US11027021B2 (en) 2016-03-15 2021-06-08 Seagen Inc. Combinations of PBD-based antibody drug conjugates with Bcl-2 inhibitors
WO2017161206A1 (en) 2016-03-16 2017-09-21 Halozyme, Inc. Conjugates containing conditionally active antibodies or antigen-binding fragments thereof, and methods of use
UA125510C2 (uk) 2016-03-25 2022-04-13 Сіджен Інк. Спосіб отримання пегильованої сполуки лікарський препарат-лінкер, де лікарським препаратом є ауристатин, та її проміжних сполук
MA45328A (fr) 2016-04-01 2019-02-06 Avidity Biosciences Llc Compositions acide nucléique-polypeptide et utilisations de celles-ci
EP3442591A4 (en) * 2016-04-15 2019-11-20 Seattle Genetics, Inc. PHARMACOLOGICAL CONJUGATES BASED ON ANTI-CD33 ANTIBODIES ASSOCIATED WITH HYPOMETHYLING AGENTS
AU2017254674A1 (en) 2016-04-21 2018-11-01 Abbvie Stemcentrx Llc Novel anti-BMPR1B antibodies and methods of use
GB201607478D0 (en) * 2016-04-29 2016-06-15 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
US10918627B2 (en) 2016-05-11 2021-02-16 Massachusetts Institute Of Technology Convergent and enantioselective total synthesis of Communesin analogs
TW201808936A (zh) 2016-05-18 2018-03-16 美商梅爾莎納醫療公司 吡咯并苯并二氮呯類及其共軛物
WO2017210621A1 (en) 2016-06-03 2017-12-07 Seattle Genetics, Inc. Combination of cd33 antibody drug conjugates with chemotherapeutic agents
EP3468599A2 (en) 2016-06-08 2019-04-17 AbbVie Inc. Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
CN109563167A (zh) 2016-06-08 2019-04-02 艾伯维公司 抗b7-h3抗体和抗体药物偶联物
AU2017279554A1 (en) 2016-06-08 2019-01-03 Abbvie Inc. Anti-B7-H3 antibodies and antibody drug conjugates
TWI762487B (zh) 2016-06-08 2022-05-01 美商艾伯維有限公司 抗-b7-h3抗體及抗體藥物結合物
US20200002432A1 (en) 2016-06-08 2020-01-02 Abbvie Inc. Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
US11191771B2 (en) 2016-06-09 2021-12-07 Seagen Inc. Combinations of PBD-based antibody drug conjugates with FLT3 inhibitors
JP2019522050A (ja) 2016-06-17 2019-08-08 マジェンタ セラピューティクス インコーポレイテッドＭａｇｅｎｔａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ． 細胞の枯渇のための組成物および方法
US10526294B2 (en) 2016-06-24 2020-01-07 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US20190218294A1 (en) 2016-09-09 2019-07-18 Bristol-Myers Squibb Company Use of an anti-pd-1 antibody in combination with an anti-mesothelin antibody in cancer treatment
GB201617466D0 (en) 2016-10-14 2016-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
GB201619490D0 (en) * 2016-11-17 2017-01-04 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
CA3049424A1 (en) 2017-01-06 2018-07-12 Avidity Biosciences Llc Nucleic acid-polypeptide compositions and methods of inducing exon skipping
WO2018134787A2 (en) 2017-01-20 2018-07-26 Magenta Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the depletion of cd137+ cells
DK3579883T3 (da) 2017-02-08 2021-09-06 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepin-antistofkonjugater
AU2018217926B2 (en) 2017-02-08 2019-10-03 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GB201702031D0 (en) 2017-02-08 2017-03-22 Medlmmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
KR20190122739A (ko) 2017-02-28 2019-10-30 시애틀 지네틱스, 인크. 컨쥬게이션을 위한 시스테인 변이된 항체
BR112019015915A2 (pt) 2017-02-28 2020-04-07 Daiichi Sankyo Co Ltd método para o tratamento de câncer de pulmão de células não pequenas resistentes a egfr-tki através da administração do conjugado de anticorpo anti-her3-fármaco
US11730822B2 (en) 2017-03-24 2023-08-22 Seagen Inc. Process for the preparation of glucuronide drug-linkers and intermediates thereof
TW201836647A (zh) 2017-04-06 2018-10-16 美商艾伯維有限公司 抗－ｐｒｌｒ抗體藥物軛合物（ａｄｃ）及其用途
EP3612537B1 (en) 2017-04-18 2022-07-13 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine conjugates
US20200129637A1 (en) 2017-04-20 2020-04-30 Adc Therapeutics Sa Combination therapy with an anti-axl antibody-drug conjugate
US11932650B2 (en) 2017-05-11 2024-03-19 Massachusetts Institute Of Technology Potent agelastatin derivatives as modulators for cancer invasion and metastasis
CN116333129A (zh) 2017-05-25 2023-06-27 百时美施贵宝公司 包含经修饰的重链恒定区的抗体
KR102442736B1 (ko) 2017-06-14 2022-09-16 에이디씨 테라퓨틱스 에스에이 항-cd19 adc의 투여를 위한 투약량 체제
KR20200062161A (ko) 2017-06-23 2020-06-03 벨로스바이오 인코포레이티드 Ror1 항체 면역접합체
GB201711809D0 (en) 2017-07-21 2017-09-06 Governors Of The Univ Of Alberta Antisense oligonucleotide
JP7220203B2 (ja) 2017-08-18 2023-02-09 メドイミューン・リミテッド ピロロベンゾジアゼピン複合体
US20200297863A1 (en) * 2017-09-02 2020-09-24 Abbvie Inc. Anti-egfr antibody drug conjugates (adc) and uses thereof
IL273387B2 (en) 2017-09-20 2023-10-01 Ph Pharma Co Ltd Thylanstatin analogs
US11628223B2 (en) 2017-09-29 2023-04-18 Daiichi Sankyo Company, Limited Antibody-drug conjugates comprising substituted benzo[e]pyrrolo[1,2-α][1,4]diazepines
CN111655268B (zh) 2017-10-04 2024-03-26 艾维迪提生物科学公司 核酸-多肽组合物及其用途
US10640508B2 (en) 2017-10-13 2020-05-05 Massachusetts Institute Of Technology Diazene directed modular synthesis of compounds with quaternary carbon centers
ES2920123T3 (es) 2017-11-14 2022-08-01 Medimmune Ltd Conjugados de pirrolobenzodiazepina
EP3717021A1 (en) 2017-11-27 2020-10-07 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
KR20240007965A (ko) 2017-12-06 2024-01-17 어비디티 바이오사이언시스 인크. 근위축증 및 근긴장성 이영양증을 치료하는 조성물 및 방법
WO2019118937A1 (en) 2017-12-15 2019-06-20 Juno Therapeutics, Inc. Anti-cct5 binding molecules and methods of use thereof
US20220305127A1 (en) 2017-12-21 2022-09-29 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
GB201721802D0 (en) * 2017-12-22 2018-02-07 Almac Discovery Ltd Ror1-specific antigen binding molecules
GB201803342D0 (en) 2018-03-01 2018-04-18 Medimmune Ltd Methods
GB201806022D0 (en) 2018-04-12 2018-05-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP3829648A1 (en) 2018-07-27 2021-06-09 Promega Corporation Quinone-containing conjugates
CA3113207A1 (en) 2018-09-20 2020-03-26 Daiichi Sankyo Company, Limited Treatment of her3-mutated cancer by administration of anti-her3 antibody-drug conjugate
JP7401456B2 (ja) 2018-11-14 2023-12-19 第一三共株式会社 抗ｃｄｈ６抗体－ピロロベンゾジアゼピン誘導体コンジュゲート
CN113348177A (zh) 2018-11-28 2021-09-03 百时美施贵宝公司 包含经修饰的重链恒定区的抗体
PT3886914T (pt) 2018-11-30 2023-05-05 Bristol Myers Squibb Co Anticorpo compreendendo uma extensão c-terminal de cadeia leve contendo glutamina, conjugados do mesmo, e métodos e utilizações
KR20210102334A (ko) 2018-12-12 2021-08-19 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 트랜스글루타미나제 접합을 위해 변형된 항체, 그의 접합체, 및 방법 및 용도
GB201820725D0 (en) 2018-12-19 2019-01-30 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine resistance
EP3899048A1 (en) 2018-12-19 2021-10-27 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine resistance
KR102630499B1 (ko) 2018-12-21 2024-01-30 어비디티 바이오사이언시스 인크. 항트랜스페린 수용체 항체 및 이의 용도
US20220096641A1 (en) * 2019-01-03 2022-03-31 Legochem Biosciences, Inc. Pyrrolobenzodiazepine dimer compound with improved safety and use thereof
CA3127113A1 (en) 2019-01-30 2020-08-06 Dongxu Sun Anti-gal3 antibodies and uses thereof
GB201902495D0 (en) * 2019-02-25 2019-04-10 Medimmune Ltd Methods of synthesis and intermediates
US20220160881A1 (en) * 2019-03-15 2022-05-26 Medimmune Limited Azetidobenzodiazepine dimers and conjugates comprising them for use in the treatment of cancer
KR20220022112A (ko) 2019-03-21 2022-02-24 이뮤노젠 아이엔씨 세포-결합 제제-약물 콘쥬게이트를 준비하는 방법
CN113631229A (zh) 2019-03-25 2021-11-09 第一三共株式会社 抗体－吡咯并苯并二氮杂卓衍生物偶联物
SG11202109860VA (en) 2019-03-25 2021-10-28 Daiichi Sankyo Co Ltd Anti-her2 antibody-pyrrolobenzodiazepine derivative conjugate
EP3949988A4 (en) 2019-03-27 2022-11-16 Daiichi Sankyo Company, Limited COMBINATION OF AN ANTIBODY-DERIVATIVE CONJUGATE OF PYRROLOBENZODIAZEPINE AND A PARP INHIBITOR
WO2020247054A1 (en) 2019-06-05 2020-12-10 Massachusetts Institute Of Technology Compounds, conjugates, and compositions of epipolythiodiketopiperazines and polythiodiketopiperazines and uses thereof
CN114375297A (zh) 2019-06-06 2022-04-19 艾维迪提生物科学公司 Una亚酰胺及其用途
JP2022535588A (ja) 2019-06-06 2022-08-09 アビディティー バイオサイエンシーズ，インク． 核酸ポリペプチド組成物およびその使用
GB201908128D0 (en) 2019-06-07 2019-07-24 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
KR20220041915A (ko) 2019-08-06 2022-04-01 글락소스미스클라인 인털렉츄얼 프로퍼티 디벨로프먼트 리미티드 바이오제약 조성물 및 관련 방법
EP4019544A4 (en) * 2019-08-19 2023-10-18 Shenyang Pharmaceutical University ANTIBODY MUTANT AND APPLICATION THEREOF
WO2021055306A1 (en) 2019-09-16 2021-03-25 Bristol-Myers Squibb Company Dual capture method for analysis of antibody-drug conjugates
WO2021080608A1 (en) 2019-10-25 2021-04-29 Medimmune, Llc Branched moiety for use in conjugates
EP4121063A4 (en) 2020-03-19 2024-07-03 Avidity Biosciences Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING FACIO-SCAPULO-HUMERAL MUSCULAR DYSTROPHY
KR20220161378A (ko) 2020-03-27 2022-12-06 어비디티 바이오사이언시스 인크. 근이영양증의 치료용 조성물 및 방법
AU2021273009A1 (en) 2020-05-13 2022-12-15 Bonum Therapeutics, Inc. Compositions of protein complexes and methods of use thereof
TW202216212A (zh) 2020-07-17 2022-05-01 日商第一三共股份有限公司 抗體-藥物結合物之製造方法
JPWO2022050300A1 (ru) 2020-09-02 2022-03-10
KR20230146521A (ko) 2021-01-13 2023-10-19 메모리얼 슬로안 케터링 캔서 센터 항체-피롤로벤조디아제핀 유도체 접합체
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
EP4370555A1 (en) 2021-07-13 2024-05-22 TrueBinding, Inc. Methods of preventing protein aggregation
TW202323822A (zh) 2021-08-03 2023-06-16 英商葛蘭素史密斯克藍智慧財產發展有限公司 生藥組合物及穩定同位素標記肽之圖譜定位方法
WO2023043953A1 (en) 2021-09-16 2023-03-23 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
TW202334238A (zh) 2021-11-30 2023-09-01 日商第一三共股份有限公司 蛋白酶分解性遮蔽抗體
CA3241529A1 (en) 2021-12-23 2023-06-29 Mirecule, Inc. Compositions for delivery of polynucleotides
WO2024026474A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for transferrin receptor (tfr)-mediated delivery to the brain and muscle
US20240173426A1 (en) 2022-11-14 2024-05-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for fibroblast growth factor receptor 3-mediated delivery to astrocytes

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006111759A1 (en) * 2005-04-21 2006-10-26 Spirogen Limited Pyrrolobenzodiazepines
EP1813614A1 (en) * 2006-01-25 2007-08-01 Sanofi-Aventis Cytotoxic agents comprising new tomaymycin derivatives
WO2010043880A1 (en) * 2008-10-17 2010-04-22 Spirogen Limited Unsymmetrical pyrrolobenzodiazepine-dimers for treatment of proliferative diseases

Family Cites Families (116)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3361742A (en) 1964-12-07 1968-01-02 Hoffmann La Roche 5-oxo-1h-pyrrolo-[2, 1-c][1, 4]-benzodiazepin-2-crylamides
US3523941A (en) 1967-03-06 1970-08-11 Hoffmann La Roche Benzodiazepine compounds and process for their preparation
US3524849A (en) 1967-10-27 1970-08-18 Hoffmann La Roche Process for the preparation of pyrrolo-benzodiazepine acrylamides and intermediates useful therein
DE1965304A1 (de) 1968-12-30 1970-07-23 Fujisawa Pharmaceutical Co Benzdiazepinon-Verbindungen und Verfahren zu ihrer Herstellung
IL33558A (en) 1968-12-30 1973-10-25 Fujisawa Pharmaceutical Co Antibiotic pyrrolo-benzodiazepine compound,its derivatives and processes for their production
JPS4843755B1 (ru) 1969-06-26 1973-12-20
JPS5382792U (ru) 1976-12-10 1978-07-08
JPS6053033B2 (ja) 1976-12-28 1985-11-22 財団法人微生物化学研究会 新制癌抗生物質マゼスラマイシン及びその製造方法
JPS585916B2 (ja) 1977-12-27 1983-02-02 株式会社ミドリ十字 新規ベンゾジアゼピン系化合物
JPS5615289A (en) 1979-07-17 1981-02-14 Green Cross Corp:The Novel benzodiazepinnbased compound 3
JPS57131791A (en) 1980-12-31 1982-08-14 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd Benzodiazepine derivative and its preparation
JPH0353356Y2 (ru) 1981-02-06 1991-11-21
CA1173441A (en) 1981-02-27 1984-08-28 Hoffmann-La Roche Limited Imidazodiazepines
CA1184175A (en) 1981-02-27 1985-03-19 Walter Hunkeler Imidazodiazepines
CA1185602A (en) 1981-02-27 1985-04-16 Emilio Kyburz Imidazodiazepines
JPS58180487A (ja) 1982-04-16 1983-10-21 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 抗生物質ｄｃ−８１およびその製造法
JPS58180487U (ja) 1982-05-28 1983-12-02 松下電工株式会社 光線式報知器の組立体
US4427588A (en) 1982-11-08 1984-01-24 Bristol-Myers Company Process for conversion of oxotomaymycin to tomaymycin
US4427587A (en) 1982-11-10 1984-01-24 Bristol-Myers Company Total synthesis of antitumor antibiotics BBM-2040A and BBM-2040B
JPS59152329A (ja) 1983-02-17 1984-08-31 Green Cross Corp:The 局所障害抑制剤
FR2586683B1 (fr) 1985-08-29 1988-07-01 Centre Nat Rech Scient Nouveaux derives de neothramycine, leur procede de preparation et leur application en tant que medicaments
JP2660201B2 (ja) 1988-08-05 1997-10-08 塩野義製薬株式会社 新規ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン誘導体および老人性痴呆薬
FR2676230B1 (fr) 1991-05-07 1993-08-27 Centre Nat Rech Scient Nouveaux derives de pyrrolo [1,4]-benzodiazepines, leur procede de preparation et medicaments les contenant.
GB9205051D0 (en) 1992-03-09 1992-04-22 Cancer Res Campaign Tech Pyrrolobenzodiazepine derivatives,their preparation,and compositions containing them
FR2696176B1 (fr) 1992-09-28 1994-11-10 Synthelabo Dérivés de pipéridine, leur préparation et leur application en thérapeutique.
GB9316162D0 (en) 1993-08-04 1993-09-22 Zeneca Ltd Fungicides
ATE349722T1 (de) 1998-07-08 2007-01-15 E Ink Corp Verbesserte farbige mikroverkapselte elektrophoretische anzeige
GB9818731D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Compounds
GB9818732D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Collection of compounds
GB9818730D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Collections of compounds
PT1413582E (pt) 1998-08-27 2006-07-31 Spirogen Ltd Pirrolobenzodiazepinas dimericas
US6909006B1 (en) 1999-08-27 2005-06-21 Spirogen Limited Cyclopropylindole derivatives
DK1320522T3 (da) 2000-09-19 2006-04-03 Moses Lee Achirale analoger af CC-1065 og af duocarmyciner samt præparater og metoder til anvendelse deraf
US6362331B1 (en) 2001-03-30 2002-03-26 Council Of Scientific And Industrial Research Process for the preparation of antitumor agents
US6660856B2 (en) 2002-03-08 2003-12-09 Kaohsiung Medical University Synthesis of pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine analogues
AU2003263964C1 (en) 2002-07-31 2010-08-19 Seagen Inc. Drug conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
US20040138269A1 (en) 2002-10-11 2004-07-15 Sugen, Inc. Substituted pyrroles as kinase inhibitors
GB0226593D0 (en) 2002-11-14 2002-12-24 Consultants Ltd Compounds
DE60326060D1 (de) 2003-03-31 2009-03-19 Council Scient Ind Res Nichtvernetzende pyrroloä2,1-cüä1,4übenzodiazepine als potentielle antitumor-agentien und ihre herstellung
GB0321295D0 (en) 2003-09-11 2003-10-15 Spirogen Ltd Synthesis of protected pyrrolobenzodiazepines
GB0416511D0 (en) 2003-10-22 2004-08-25 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
ATE516288T1 (de) 2003-10-22 2011-07-15 Us Gov Health & Human Serv Pyrrolobenzodiazepinderivate, zusammensetzungen, die diese enthalten, und damit in zusammenhang stehende verfahren
WO2005082023A2 (en) 2004-02-23 2005-09-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
SI1720881T1 (sl) 2004-03-01 2013-04-30 Spirogen Sarl 11-hidroksi-5H-pirolo(2,1-c)(1,4)benzodiazepin-5onski derivati kot ključni intermediati za pipravo C2 substituiranih pirolobenzodiazepinov
GB0404577D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0404578D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0404574D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Amino acids
DE102004010943A1 (de) 2004-03-03 2005-09-29 Degussa Ag Verfahren zur Herstellung von N-geschützten 4-Ketprolinderivaten
JP5166861B2 (ja) 2004-03-09 2013-03-21 スピロゲン リミティッド ピロロベンゾジアゼピン
FR2869231B1 (fr) 2004-04-27 2008-03-14 Sod Conseils Rech Applic Composition therapeutique contenant au moins un derive de la pyrrolobenzodiazepine et la fludarabine
GB0410725D0 (en) 2004-05-13 2004-06-16 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepine therapeutic agents
WO2006034488A2 (en) 2004-09-23 2006-03-30 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
CN101080506B (zh) 2004-12-24 2012-06-13 昭和电工株式会社 热电半导体合金的制造方法、热电转换模块以及热电发电设备
JP5122441B2 (ja) 2005-04-19 2013-01-16 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド ヒト化抗ｃｄ７０結合剤およびその使用
GB0508084D0 (en) * 2005-04-21 2005-06-01 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
CA2616005C (en) * 2005-07-18 2015-09-22 Seattle Genetics, Inc. Beta-glucuronide-linker drug conjugates
US20070154906A1 (en) 2005-10-05 2007-07-05 Spirogen Ltd. Methods to identify therapeutic candidates
WO2007039752A1 (en) 2005-10-05 2007-04-12 Spirogen Limited Alkyl 4- [4- (5-oxo-2, 3, 5, 11a-tetrahyd0-5h-pyrr0l0 [2, 1-c] [1, 4] benzodiazepine-8-yloxy) -butyrylamino]-1h-pyrrole-2-carboxylate derivatives and related compounds for the treatment of a proliferative disease
ES2673822T3 (es) 2006-07-18 2018-06-25 Sanofi Anticuerpo antagonista contra EphA2 para el tratamiento de cáncer
EP1914242A1 (en) 2006-10-19 2008-04-23 Sanofi-Aventis Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
WO2008050140A2 (en) 2006-10-27 2008-05-02 Spirogen Limited Compounds for treatment of parasitic infection
PL2099823T5 (pl) 2006-12-01 2023-02-20 Seagen Inc. Wariant środków wiążących cel i jego zastosowania
ES2435779T3 (es) 2007-07-19 2013-12-23 Sanofi Agentes citotóxicos que comprenden nuevos derivados de tomaimicina y su uso terapéutico
GB0722088D0 (en) 2007-11-09 2007-12-19 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0722087D0 (en) 2007-11-09 2007-12-19 Spirogen Ltd Polyamides
GB0813432D0 (en) 2008-07-22 2008-08-27 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0819097D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
IL271761B (en) 2009-02-05 2022-09-01 Immunogen Inc (12as)-8-methoxy-9-benzyloxy-11,12,12a,13-tetrahydro-6h-indolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine-6-one, 4-benzyloxy-5-methoxy -2-nitrobenzoic acid and a process for their preparation
FR2949469A1 (fr) 2009-08-25 2011-03-04 Sanofi Aventis Derives anticancereux, leur preparation et leur application en therapeutique
ES2449379T3 (es) 2010-02-09 2014-03-19 Bristol-Myers Squibb Company Derivados de bencilpirrolidinona como moduladores de la actividad de receptores de quimiocinas
GB201006340D0 (en) 2010-04-15 2010-06-02 Spirogen Ltd Synthesis method and intermediates
PE20130342A1 (es) 2010-04-15 2013-04-20 Spirogen Sarl Pirrolobenzodiacepinas y conjugados de las mismas
AU2011239522B2 (en) 2010-04-15 2014-10-23 Medimmune Limited Targeted pyrrolobenzodiazapine conjugates
AU2011239525B2 (en) 2010-04-15 2015-04-09 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
US9534000B2 (en) 2011-02-15 2017-01-03 Immunogen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives and methods of preparation
CA2849039C (en) 2011-09-20 2018-09-18 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines as unsymmetrical dimeric pbd compounds for inclusion in targeted conjugates
HUE025661T2 (en) 2011-10-14 2016-04-28 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and their conjugates
EA029046B1 (ru) 2011-10-14 2018-02-28 Медимьюн Лимитед Пирролобензодиазепины и промежуточные соединения для их получения, способы их синтеза
US9388187B2 (en) 2011-10-14 2016-07-12 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines
EP3388435B1 (en) 2011-10-14 2023-05-03 Seagen Inc. Pyrrolobenzodiazepines and targeted conjugates
EA036202B1 (ru) 2011-10-14 2020-10-14 Сиэтл Дженетикс, Инк. Пирролбензодиазепины и конъюгаты направленного действия
BR112014008888A2 (pt) 2011-10-14 2017-04-18 Seattle Genetics Inc pirrolobenzodiazepinas
BR112014027190B1 (pt) 2012-04-30 2020-03-03 Medimmune Limited Composto de pirrolobenzodiazepinas, sua composição farmacêutica e seu uso
EP2855482B1 (en) 2012-04-30 2017-03-01 MedImmune Limited Pyrrolobenzodiazepines
MA37840B1 (fr) 2012-07-09 2020-05-29 Genentech Inc Immunoconjugués comprenant des anticorps anti-cd79b
CA2873889A1 (en) 2012-07-09 2014-01-16 Genentech, Inc. Anti-cd22 antibodies and immunoconjugates
BR112015002193A2 (pt) 2012-08-02 2017-07-04 Genentech Inc anticorpos anti-etbr e imunoconjugados
KR101412875B1 (ko) 2012-10-04 2014-07-02 삼성전기주식회사 게이트 구동 회로 및 이를 갖는 인버터
WO2014057118A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd22 antibody conjugates
PL2766048T3 (pl) 2012-10-12 2015-05-29 Medimmune Ltd Pirolobenzodiazepiny i ich koniugaty
AU2013328673B2 (en) 2012-10-12 2017-07-13 Medimmune Limited Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation
WO2014057114A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-anti-psma antibody conjugates
DK2906251T3 (da) 2012-10-12 2017-11-20 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepin-anti-CD22-antistofkonjugater
NZ707486A (en) 2012-10-12 2018-09-28 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine - anti-psma antibody conjugates
CA3060520C (en) 2012-10-12 2022-05-17 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP2906297B1 (en) 2012-10-12 2017-12-06 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
CA2887896A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine-anti-her2 antibody conjugates
NZ707534A (en) 2012-10-12 2018-08-31 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
MX364328B (es) 2012-10-12 2019-04-23 Medimmune Ltd Conjugados del anticuerpo pirrolobenzodiazepina.
CN110452242A (zh) 2012-12-21 2019-11-15 麦迪穆有限责任公司 吡咯并苯并二氮杂卓及其结合物
CA2894959C (en) 2012-12-21 2022-01-11 Spirogen Sarl Unsymmetrical pyrrolobenzodiazepines-dimers for use in the treatment of proliferative and autoimmune diseases
CN105164159A (zh) 2013-02-22 2015-12-16 施特姆森特克斯股份有限公司 新的抗体缀合物及其用途
CN105142674B (zh) 2013-03-13 2018-11-13 麦迪穆有限责任公司 吡咯并苯并二氮杂卓和其结合物
AU2014244245C1 (en) 2013-03-13 2018-04-19 Genentech, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US20160031887A1 (en) 2013-03-13 2016-02-04 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
WO2014174111A1 (en) 2013-04-26 2014-10-30 Pierre Fabre Medicament Axl antibody-drug conjugate and its use for the treatment of cancer
EP3054986B1 (en) 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GB201317981D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
GB201317982D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
WO2015052534A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US10010624B2 (en) 2013-10-11 2018-07-03 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US20160256561A1 (en) 2013-10-11 2016-09-08 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
BR112016014126B1 (pt) 2013-12-16 2023-02-14 Medimmune Limited Composto não-peptídico, conjugados de anticorpo-fármaco do mesmo, uso dos ditos conjugados para o tratamento de câncer e composição farmacêutica que compreende os mesmos
GB201406767D0 (en) 2014-04-15 2014-05-28 Cancer Rec Tech Ltd Humanized anti-Tn-MUC1 antibodies anf their conjugates
EP3193940A1 (en) 2014-09-10 2017-07-26 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
GB201416112D0 (en) 2014-09-12 2014-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006111759A1 (en) * 2005-04-21 2006-10-26 Spirogen Limited Pyrrolobenzodiazepines
EP1813614A1 (en) * 2006-01-25 2007-08-01 Sanofi-Aventis Cytotoxic agents comprising new tomaymycin derivatives
WO2010043880A1 (en) * 2008-10-17 2010-04-22 Spirogen Limited Unsymmetrical pyrrolobenzodiazepine-dimers for treatment of proliferative diseases

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BURKE P.J. ET AL.: "Novel immunoconjugates comprised of streptonigrin and 17-amino-geldanamycin attached via a dipeptide-p-aminobenzyl-amine 1 inker system", BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS, PERGAMON, ELSEVIER SCIENCE, GB, vol. 19, no. 10, 15 May 2009 (2009-05-15), pages 2650-2653, XP026085936, ISSN: 0960-894X, DOI: 10.1016/J.BMCL.2009.03.145 [retrieved on 2009-04-05] schemes 2, 3 *
JEFFREY SC. ET AL.: "DESIGN, SYNTHESIS, AND IN VITRO EVALUATION OF DIPEPTIDE-BASED ANTIBODY MINOR GROOVE BINDER CONJUGATES", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, US, vol. 48, no. 5, 10 May 2005 (2005-05-10), pages 1344-1358, XP008079143, ISSN: 0022-2623, DOI: 10.1021/JM040137Q table 1 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN103068405A (zh) 2013-04-24
US20160129013A1 (en) 2016-05-12
US10561739B2 (en) 2020-02-18
CA2795349A1 (en) 2011-10-20
US20190336614A1 (en) 2019-11-07
US20130028919A1 (en) 2013-01-31
US9242013B2 (en) 2016-01-26
IL222269A (en) 2017-06-29
EP2558127B1 (en) 2022-01-19
US20170143846A1 (en) 2017-05-25
BR112012026801A2 (pt) 2016-09-20
CN107019804A (zh) 2017-08-08
KR101772354B1 (ko) 2017-08-28
ZA201207317B (en) 2015-04-29
AU2011239522A1 (en) 2012-11-01
EP2558127A1 (en) 2013-02-20
AU2011239522B2 (en) 2014-10-23
BR112012026801B8 (pt) 2021-05-25
KR20130038254A (ko) 2013-04-17
KR101671360B1 (ko) 2016-11-01
US20180228916A1 (en) 2018-08-16
NZ602932A (en) 2014-08-29
WO2011130613A1 (en) 2011-10-20
IL252864B (en) 2018-01-31
KR20160128443A (ko) 2016-11-07
US9592240B2 (en) 2017-03-14
JP5870400B2 (ja) 2016-03-01
MX2018013332A (es) 2020-11-12
EA201290838A1 (ru) 2013-05-30
JP2013523896A (ja) 2013-06-17
CA2795349C (en) 2016-11-29
EP4039280A1 (en) 2022-08-10
IL222269A0 (en) 2012-12-31
IL252864A0 (en) 2017-08-31
BR112012026801B1 (pt) 2021-05-04
MX2012011900A (es) 2013-03-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA024118B1 (ru) Конъюгаты пирролбензодиазепина направленного действия
JP7123635B2 (ja) ピロロベンゾジアゼピンおよび標的コンジュゲート
JP5995441B2 (ja) 増殖性疾患治療用非対称ピロロベンゾジアゼピン−二量体
JP6170494B2 (ja) ピロロベンゾジアゼピン
EP2789622B1 (en) Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
JP6170497B2 (ja) ピロロベンゾジアゼピン
EA026643B1 (ru) Пирролбензодиазепины и конъюгаты направленного действия
EA027386B1 (ru) Пирролобензодиазепины

Legal Events

Date Code Title Description
TC4A Change in name of a patent proprietor in a eurasian patent