TW201808936A - 吡咯并苯并二氮呯類及其共軛物 - Google Patents

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喬沙 湯瑪士
亞歷克珊卓 尤可費茲基
派屈克 康隆
杜冰帆
尤金 凱勒
提摩西 勞文吉爾
唐恕一
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Abstract

本揭露大體上關於吡咯并苯并二氮呯類衍生物及其抗體-藥物共軛物及關於使用這些共軛物作為治療劑和/或診斷劑之方法。

Description

吡咯并苯并二氮呯類及其共軛物 相關申請案
此申請案依35 USC § 119(e)主張2016年5月18日所申請的美國臨時申請案第62/338,436號之優先權及利益。此申請案之內容係在此以引用方式全部併入。
本揭露係關於吡咯并苯并二氮呯類衍生物及其抗體-藥物共軛物及關於使用這些共軛物作為治療劑和/或診斷劑之方法。
吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮呯類(PBDs)係天然存在之單官能DNA烷化抗腫瘤抗生素類之家族，包括安曲黴素(anthramycin)、DC-81、托美黴素(tomaymycin)、及西伯利亞黴素(sibiromycin)。這些化合物只結合至小溝中的鳥嘌呤之環外N2且以序列特異性方式橫跨3個鹼基對(5’PuGPu)。第一個PBD抗腫瘤抗生素係安曲黴素，其在 1965年被發現(Leimgruber et al.,1965 J.Am.Chem.Soc.,87,5793-5795；and Leimgruber et al.,1965 J.Am.Chem.Soc.,87,5791-5793)。自此，業經報導了許多天然存在的PBDs及各種類似物。
PBDs具有下列之結構通式：
該等PBDs不同處在於它們芳族A環及吡咯并C環上的取代基的數目、種類及位置，以及該C環的飽和度。在B環上，有亞胺(N=C)、碳醇胺(carbinolamine)(NH-CH(OH))或碳醇胺甲基醚(NH-CH(OMe))在位置N10-C11上，其係負責烷化DNA的親電子中心。所有已知的天然產物在手性C11a位置具有(S)-組態，當從C環朝向A環觀視時，其具有右旋性(right-handed twist)。這給予它們針對B型DNA小溝的適當三維形狀等螺旋性(isohelicity)，而在結合位產生適配處(snug fit)(Kohn,1975 In Antibiotics III.Springer-Verlag,New York,pp.3-11；and Hurley and Needham-VanDevanter,1986 Acc.Chem.Res.,19,230-237)。它們在小溝形成加成物的能力使它們干擾DNA處理(DNA processing)，因此使它們用作為抗腫瘤劑。
第一個進入臨床的PBD為SJG-136(NSC 694501)，係一種強效細胞毒性劑，其造成DNA股間交聯(S.G Gregson et al.,2001,J.Med.Chem.,44：737-748；M.C.Alley et al.,2004,Cancer Res.,64：6700-6706；J.A.Hartley et al.,2004,Cancer Res.,64：6693-6699；C.Martin et al.,2005,Biochemistry.,44：4135-4147；S.Arnould et al.,2006,Mol.Cancer Ther.,5：1602-1509)。來自SJG-136第I期臨床評估結果顯現此藥物在極低劑量具毒性(最大耐受劑量45μg/m2)，且有注意到數種不良反應，包括血管滲漏症候群、周圍水腫、肝毒性及疲勞(fatigue)。注意到於所有劑量下的循環淋巴球中均有DNA損傷。
因此，對於可投遞具有最低副作用臨界DNA損傷的更具選擇性及療效藥物持續存有需求
在一個態樣中，本揭露特徵在於式(I)之化合物： 或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
在上述式(I)中， D係D1、D2或D3：、或其中，在D1中，C2與C3之間或C2與C1之間的虛線表示單鍵或雙鍵的存在；及m係0、1或2；當D係D1、C2與C3之間的虛線係雙鍵、且m係1時，則R1係：(i)C6-10芳基，隨意地經選自下列取代基之一或多者所取代：-OH、鹵基、-NO2、-CN、-N3、-OR2、-COOH、-COOR2、-COR2、-OCONR13R14、C1-10烷基、C3-10環烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、聚乙二醇單元-(OCH2CH2)r-ORa、3至14員雜環烷基、5至12員雜芳基、雙-氧C1-3伸烷基(bis-oxy-C1-3 alkylene)、-NR13R14、-S(=O)2R12、-S(=O)2NR13R14、-SR12、-SOxM、-OSOxM、-NR9COR19、-NH(C=NH)NH2；(ii)C1-5烷基；(iii)C3-6環烷基；(iv) (vi)(vii)(vii)；或(viii)鹵基；當D係D1、C2與C3之間的虛線係單鍵、且m係1時，則R1係：(i)-OH、=O、=CH2、-CN、-R2、-OR2、鹵基、=CH-R6、=C(R6)2、-O-SO2R2、-CO2R2、-COR2、-CHO、或-COOH；或(ii)當D係D1且m係2時，則各R1係獨立地為鹵基且R1兩者均係接附至相同碳原子或其中一個接附至C2且另一個接附至C3；T係C1-10伸烷基連接子(linker)； A係，其中A的-NH基團係連接至式(I)的-C(O)-T-部分且A的C=O部分係連接至E；且各係獨立地為、或 E係-OH、-NH-(C1-6伸烷基)-R13a、E1、E2、E3、或E4：、或；其中，在E1或E4中的虛線表示單鍵或雙鍵的存在；R2及R3各發生時係獨立地為隨意經取代之C1-8烷基、隨意經取代之C2-8烯基、隨意經取代之C2-8炔基、隨意經取代之C3-8環烷基、隨意經取代之3至20員雜環烷基、隨意經取代之C6-20芳基或隨意經取代之5至20員雜芳基，且， 隨意地關於NR2R3、R2及R3基團彼等所接附之氮原子一起形成隨意經取代之4、5、6、或7員雜環烷基或隨意經取代之5或6員雜芳基；R4、R5及R7係各獨立地為-H、-R2、-OH、-OR2、-SH、-SR2、-NH2、-NHR2，-NR2R3、-NO2、-SnMe3、鹵基或聚乙二醇單元-(OCH2CH2)r-ORa；或R4及R7一起形成雙-氧C1-3伸烷基；各R6係獨立地為-H、-R2、-CO2R2、-COR2、-CHO、-CO2H、或鹵基；各R8係獨立地為-OH、鹵基、-NO2、-CN、-N3、-OR2、-COOH、-COOR2、-COR2、-OCONR13R14、-CONR13R14、-CO-NH-(C1-6伸烷基)-R13a、C1-10烷基、C3-10環烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、聚乙二醇單元-(OCH2CH2)r-ORa、3至14員雜環烷基、5至12員雜芳基、-S(=O)2R12、-S(=O)2NR13R14、-SR12、-SOxM、-OSOxM、-NR9COR19、-NH(C=NH)NH2或-R20-R21-NR13R14；各R9係獨立地為C1-10烷基、C3-10環烷基、C2-10烯基或C2-10炔基；R10係-H或氮保護基；R11係-QRQ或-SOxM；或R10及R11與彼等所分別接附之氮原子及碳原子一起形成N=C雙鍵；各R12係獨立地為C1-7烷基、3至20員雜環烷基、5至20員雜芳基、或C6-20芳基； R13及R14各發生時係各獨立地為H、C1-10烷基、3至20員雜環烷基、5至20員雜芳基、或C6-20芳基；各R13a係獨立地為-OH或-NR13R14；R15、R16、R17及R18係各獨立地為-H、-OH、鹵基、-NO2、-CN、-N3、-OR2、-COOH、-COOR2、-COR2、-OCONR13R14、C1-10烷基、C3-10環烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、聚乙二醇單元-(OCH2CH2)r-ORa、3至14員雜環烷基、5至12員雜芳基、-NR13R14、-S(=O)2R12、-S(=O)2NR13R14、-SR12、-SOxM、-OSOxM、-NR9COR19或-NH(C=NH)NH2；各R19係獨立地為C1-10烷基、C3-10環烷基、C2-10烯基或C2-10炔基；各R20係獨立地為鍵結、C6-10伸芳基、3至14員雜伸環烷基或5至12員雜伸芳基；各R21係獨立地為鍵結或C1-10伸烷基；R31、R32及R33係各獨立地為-H、C1-3烷基、C2-3烯基、C2-3烯基或環丙基，其中R1基團中的碳原子總數係不多於5；R34係-H、C1-3烷基、C2-3烯基、C2-3炔基、環丙基、或苯基，其中該苯基係隨意地經鹵基、甲基、甲氧基、吡啶基或苯硫基的一或多者所取代；R35a及R35b中之一者係-H且另一者係隨意地以鹵基、甲基、甲氧基、吡啶基或苯硫基的一或多者所取代之苯基基團； R36a、R36b、R36c係各獨立地為-H或C1-2烷基；R36d係-OH、-SH、-COOH、-C(O)H、-N=C=O、-NHNH2、-CONHNH2、或NHRN，其中RN係-H或C1-4烷基；R37a及R37b係各獨立地為-H、-F、C1-4烷基、C2-3烯基，其中該等烷基及烯基基團係隨意地經C1-4烷基醯胺基(C1-4 alkyl amido)或C1-4烷基酯所取代；或當R37a及R37b中之一者係-H時，另一者係-CN或C1-4烷基酯；X0係CH2、NR6、C=O、BH、SO或SO2；Y0係O、CH2、NR6或S；Z0係不存在或(CH2)n；各X1係獨立地為CRb或N；各Y1係獨立地為NRa、O或S；各Z1係獨立地為NRa、O或S；各Ra係獨立地為H或C1-4烷基；各Rb係獨立地為H、OH、C1-4烷基、或C1-4烷氧基；X2係CH、CH2或N；X3係CH或N；X4係NH、O或S；Q係O、S或NH；當Q係S或NH時，則RQ係-H或隨意經取代之C1-7烷基；或當Q係O時，則RQ係-H或隨意經取代之C1-7烷基、或 -SOxM；各M係獨立地為H或單價的醫藥上可接受之陽離子；n係1、2或3；各r係獨立地為1至200之整數；s係1、2、3、4、5或6；t係0、1或2；及各x係獨立地為2或3。
在某些實施態樣中，當E係E4、虛線表示雙鍵的存在、X3係CH、且X4係O或S時，則s係2、3、4、5或6，例如，s係2、s係3、s係4、s係5或s係6。
在某些實施態樣中，當X4係O或S時，則s係2、3、4、5或6，例如，s係2、s係3、s係4、s係5或s係6。
式(I)化合物之次組包括式(II)、(II-1)或(II-2)所示者： 、或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
式(I)化合物之另一次組包括式(III)所示者：、或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
式(I)化合物之又另一次組包括式(IV)所示者：、或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
式(I)化合物之另外其他次組包括式(II-a)至(II-p)所示者： 或 、或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
式(I)化合物之其他次組包括式(III-a)、(III-b)或(III-c)中任何所示者： 、或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
式(I)化合物之又另一次組包括下式所示者：、或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
在另一態樣中，本揭露特徵在於一種式(I)化合物之共軛物，其中該共軛物包含直接或間接連接至該化合物之抗體或抗體片段。
在又另一態樣中，本揭露特徵在於一種式(I)化合物之共軛物，其中該共軛物包含間接連接至該化合物之抗體或抗體片段，其中該化合物係經由一或多個聚合物支架(polymeric scaffold)而連接至該抗體或抗體片段。在一個實施態樣中，該一或多個聚合物支架包含聚(1-羥甲基伸乙基羥甲基縮甲醛)(poly(1-hydroxymethylethylene hydroxymethyl-formal))(PHF)。在一個實施態樣中，該PHF具有範圍在約2kDa至約40kDa之分子量。在另一實施態樣中，該PHF具有範圍在約20kDa至約300kDa之分子量。
在某些實施態樣中，在與該抗體或抗體片段共軛時，該共軛物係式(VI)、或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物，其中：該抗體或抗體片段係直接或間接連接至該化合物在E"、D"、R" 7或R" 10中之一者的位置；且E"、D"、R" 7或 R" 10的其餘者分別係E、D、R7、或R10；其中：E"係E或；其中表示直接或間接經由E的官能基基團鍵聯至抗體或抗體片段；D"係D或；其中表示直接或間接經由D的官能基基團鍵聯至抗體或抗體片段；R" 7係R7或；其中表示直接或間接經由R7的官能基基團鍵聯至抗體或抗體片段；及R" 10係R10或；其中表示直接或間接經由R10的官能基基團鍵聯至抗體或抗體片段。
在本文中亦提供醫藥組成物，其包含式(I)化合物或其共軛物以及醫藥上可接受之載體。
在又另一態樣中，本揭露特徵在於用於醫療方法(例如用於治療癌症)之式(I)化合物或其共軛物。
在一個態樣中，本揭露特徵在於一種用於治療癌症之方法，該方法包含將有效量的式(I)化合物或式(VI)之共軛物至需要彼之個體。
除非另有提及，否則任何治療方法之說明包括使用該化合物以提供如本文中所述之治療或預防，和使用該化合物以製備藥物來治療或防止此病況。該治療包括治療人或非人動物(包括齧齒動物及其他疾病模式)。
進一步地，本文中所述之化合物或方法可用於研究及其他非治療性目的。
除非另外定義，否則本文中所使用之所有技術和科學用語具有與本揭露所屬技術領域中具有通常知識者通常理解的相同含義。在本說明書中，除非上下文另有明確指明，否則單數形式也包括複數形式。雖然與本文中所述之相似或等效的方法和材料可用於本揭露的實施或測試，但是下文描述了適合的方法和材料。在本文中所提及的所有公開發表、專利申請、專利和其他參考文獻以引用方式併入。在本文中所引用的參考文獻不被認為係所請發明之先前技術。在不一致的情況下，以本說明書(包括定義)為主。另外，材料、方法和實施例僅是說明性而非意欲為限制性。在本文中所揭示之化合物的化學結構與名稱之間不一致的情況下，以化學結構為主。
由下列詳細說明和申請專利範圍可更明瞭本揭露的其他特徵和優點。
圖1是腫瘤體積對時間的圖，顯示了在皮下接種NCI-N87細胞的小鼠(各組n=10)於第1日單劑IV投予媒劑(vehicle)或3mg/kg的曲妥珠單抗(trastuzumab)-PBD共軛物(即共軛物47及60A)之後的腫瘤反應。
本揭露特徵在於式(I)之化合物： 或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
在上述的式(I)化合物中，D係D1、D2或D3：、或其中，在D1中，C2與C3之間或C2與C1之間的虛線表示單鍵或雙鍵的存在；及m係0、1或2；當D係D1、C2與C3之間的虛線係雙鍵、且m係1時，則R1係：(i)C6-10芳基，隨意地經選自下列取代基之一或多者所取代：-OH、鹵基、-NO2、-CN、-N3、-OR2、-COOH、-COOR2、-COR2、-OCONR13R14、C1-10烷基、C3-10環烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、聚乙二醇單元-(OCH2CH2)r-ORa、3至14員雜環烷基、5至12員雜芳基、雙-氧C1-3伸烷基(bis-oxy-C1-3 alkylene)、-NR13R14、-S(=O)2R12、 -S(=O)2NR13R14、-SR12、-SOxM、-OSOxM、-NR9COR19、-NH(C=NH)NH2；(ii)C1-5烷基；(iii)C3-6環烷基；(iv)(vi)(vii)(vii)；或(viii)鹵基；當D係D1、C2與C3之間的虛線係單鍵、且m係1時，則R1係：(i)-OH、=O、=CH2、-CN、-R2、-OR2、鹵基、=CH-R6、=C(R6)2、-O-SO2R2、-CO2R2、-COR2、-CHO、或-COOH；或(ii)
當D係D1且m係2時，則各R1係獨立地為鹵基且R1兩者 均係接附至相同碳原子或其中一個接附至C2且另一個接附至C3；T係C1-10伸烷基連接子(linker)；A係，其中A的-NH基團係連接至式(I)的-C(O)-T-部分且A的C=O部分係連接至E；且各係獨立地為、或 E係-OH、-NH-(C1-6伸烷基)-R13a、E1、E2、E3、或E4： 或；其中，在E1或E4中的虛線表示單鍵或雙鍵的存在；R2及R3各發生時係獨立地為隨意經取代之C1-8烷基、 隨意經取代之C2-8烯基、隨意經取代之C2-8炔基、隨意經取代之C3-8環烷基、隨意經取代之3至20員雜環烷基、隨意經取代之C6-20芳基或隨意經取代之5至20員雜芳基，且，隨意地關於NR2R3、R2及R3基團彼等所接附之氮原子一起形成隨意經取代之4、5、6、或7員雜環烷基或隨意經取代之5或6員雜芳基；R4、R5及R7係各獨立地為-H、-R2、-OH、-OR2、-SH、-SR2、-NH2、-NHR2，-NR2R3、-NO2、-SnMe3、鹵基或聚乙二醇單元-(OCH2CH2)r-ORa；或R4及R7一起形成雙-氧C1-3伸烷基；各R6係獨立地為-H、-R2、-CO2R2、-COR2、-CHO、-CO2H、或鹵基；各R8係獨立地為-OH、鹵基、-NO2、-CN、-N3、-OR2、-COOH、-COOR2、-COR2、-OCONR13R14、-CONR13R14、-CO-NH-(C1-6伸烷基)-R13a、C1-10烷基、C3-10環烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、聚乙二醇單元-(OCH2CH2)r-ORa、3至14員雜環烷基、5至12員雜芳基、-S(=O)2R12、-S(=O)2NR13R14、-SR12、-SOxM、-OSOxM、-NR9COR19、-NH(C=NH)NH2或-R20-R21-NR13R14；各R9係獨立地為C1-10烷基、C3-10環烷基、C2-10烯基或C2-10炔基；R10係-H或氮保護基；R11係-QRQ或-SOxM；或R10及R11與彼等所分別接附之氮原子及碳原子一起形成 N=C雙鍵；各R12係獨立地為C1-7烷基、3至20員雜環烷基、5至20員雜芳基、或C6-20芳基；R13及R14各發生時係各獨立地為H、C1-10烷基、3至20員雜環烷基、5至20員雜芳基、或C6-20芳基；各R13a係獨立地為-OH或-NR13R14；R15、R16、R17及R18係各獨立地為-H、-OH、鹵基、-NO2、-CN、-N3、-OR2、-COOH、-COOR2、-COR2、-OCONR13R14、C1-10烷基、C3-10環烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、聚乙二醇單元-(OCH2CH2)r-ORa、3至14員雜環烷基、5至12員雜芳基、-NR13R14、-S(=O)2R12、-S(=O)2NR13R14、-SR12、-SOxM、-OSOxM、-NR9COR19或-NH(C=NH)NH2；各R19係獨立地為C1-10烷基、C3-10環烷基、C2-10烯基或C2-10炔基；各R20係獨立地為鍵結、C6-10伸芳基、3至14員雜伸環烷基或5至12員雜伸芳基；各R21係獨立地為鍵結或C1-10伸烷基；R31、R32及R33係各獨立地為-H、C1-3烷基、C2-3烯基、C2-3烯基或環丙基，其中R1基團中的碳原子總數係不多於5；R34係-H、C1-3烷基、C2-3烯基、C2-3炔基、環丙基、或苯基，其中該苯基係隨意地經鹵基、甲基、甲氧基、吡啶基或苯硫基的一或多者所取代； R35a及R35b中之一者係-H且另一者係隨意地以鹵基、甲基、甲氧基、吡啶基或苯硫基的一或多者所取代之苯基基團；R36a、R36b、R36c係各獨立地為-H或C1-2烷基；R36d係-OH、-SH、-COOH、-C(O)H、-N=C=O、-NHNH2、-CONHNH2、或NHRN，其中RN係-H或C1-4烷基；R37a及R37b係各獨立地為-H、-F、C1-4烷基、C2-3烯基，其中該等烷基及烯基基團係隨意地經C1-4烷基醯胺基(C1-4 alkyl amido)或C1-4烷基酯所取代；或當R37a及R37b中之一者係-H時，另一者係-CN或C1-4烷基酯；X0係CH2、NR6、C=O、BH、SO或SO2；Y0係O、CH2、NR6或S；Z0係不存在或(CH2)n；各X1係獨立地為CRb或N；各Y1係獨立地為NRa、O或S；各Z1係獨立地為NRa、O或S；各Ra係獨立地為H或C1-4烷基；各Rb係獨立地為H、OH、C1-4烷基、或C1-4烷氧基；X2係CH、CH2或N；X3係CH或N；X4係NH、O或S；Q係O、S或NH； 當Q係S或NH時，則RQ係-H或隨意經取代之C1-7烷基；或當Q係O時，則RQ係-H或隨意經取代之C1-7烷基、或-SOxM；各M係獨立地為H或單價的醫藥上可接受之陽離子；n係1、2或3；各r係獨立地為1至200之整數；s係1、2、3、4、5或6；t係0、1或2；及各x係獨立地為2或3。
當適用時，式(I)化合物可具有下列特徵的一或多者：舉例而言，式(I)化合物包括式(I-a)所示者： 或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
舉例而言，D係D1。
舉例而言，D係D2。
舉例而言，D係D3。
舉例而言，式(I)化合物包括式(II)、(II-1)或(II-2)所示者： 、或 或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
舉例而言，式(I)化合物包括式(III)所示者： 或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
舉例而言，式(I)化合物包括式(IV)所示者： 或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
舉例而言，當D係D1、C2與C3之間的虛線係雙鍵、且m係1時，則R1係C6-10芳基，隨意地經選自下列取代基之一或多者所取代：-OH、鹵基、-NO2、-CN、-N3、-OR2、-COOH、-COOR2、-COR2、-OCONR13R14、C1-10烷基、C3-10環烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、聚乙二醇單元-(OCH2CH2)r-ORa、3至14員雜環烷基、5至12員雜芳基、雙-氧C1-3伸烷基(bis-oxy-C1-3 alkylene)、-NR13R14、-S(=O)2R12、-S(=O)2NR13R14、-SR12、-SOxM、-OSOxM、-NR9COR19、及-NH(C=NH)NH2。
舉例而言，當D係D1、C2與C3之間的虛線係雙鍵、且m係1時，則R1係C6-10芳基，隨意地經選自下列取代基之一或多者所取代：-OH、鹵基、-NO2、-CN、-N3、-OR2、-COOH、-COOR2、-COR2、-OCONR13R14、C1-10烷基、C3-10環烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、聚乙二醇單元-(OCH2CH2)r-ORa、3至14員雜環烷基、5至12員雜芳基、-NR13R14、-S(=O)2R12、-S(=O)2NR13R14、-SR12、-NR9COR19、及-NH(C=NH)NH2。
舉例而言，當D係D1、C2與C3之間的虛線係 雙鍵、且m係1時，則R1係C6-10芳基，隨意地經選自下列取代基之一或多者所取代：-OH、鹵基、-OR2、-COOH、-COOR2、-COR2、3至14員雜環烷基、及-NR13R14。
舉例而言，當D係D1、C2與C3之間的虛線係雙鍵、且m係1時，則R1係C6-10芳基，其經選自下列取代基之一或多者所取代：-OH、鹵基、-OR2、-COOH、-COOR2、-COR2、3至14員雜環烷基、及-NR13R14。
舉例而言，當D係D1、C2與C3之間的虛線係雙鍵、且m係1時，則R1係C6-10芳基，其經選自下列的一個取代基所取代：-OH、鹵基、-OR2、-COOH、-COOR2、-COR2、3至14員雜環烷基、及-NR13R14。
舉例而言，當D係D1、C2與C3之間的虛線係雙鍵、且m係1時，則R1係C6-10芳基，其經選自下列的一個取代基所取代：-OH、-OR2、-COOH、-COOR2、3至14員雜環烷基、及-NR13R14。
舉例而言，當D係D1、C2與C3之間的虛線係雙鍵、且m係1時，則R1係C6-10芳基，其經選自下列的一個取代基所取代：-OH及-COOH。
舉例而言，當D係D1、C2與C3之間的虛線係雙鍵、且m係1時，則R1係C6-10芳基，其經選自下列的一個取代基所取代：-OR2及-COOR2。
舉例而言，當D係D1、C2與C3之間的虛線係雙鍵、且m係1時，則R1係C6-10芳基，其經一個3至14員雜環烷基所取代。
舉例而言，當D係D1、C2與C3之間的虛線係雙鍵、且m係1時，則R1係C6-10芳基，其經一個-NR13R14所取代。
舉例而言，當D係D1、C2與C3之間的虛線係雙鍵、且m係1時，則R1係C1-5烷基。
舉例而言，當D係D1、C2與C3之間的虛線係雙鍵、且m係1時，則R1係C3-6環烷基。
舉例而言，當D係D1、C2與C3之間的虛線係雙鍵、且m係1時，則R1係環丙基。
舉例而言，當D係D1、C2與C3之間的虛線係雙鍵、且m係1時，則R1係
舉例而言，當D係D1、C2與C3之間的虛線係雙鍵、且m係1時，則R1係
舉例而言，當D係D1、C2與C3之間的虛線係雙鍵、且m係1時，則R1係
舉例而言，當D係D1、C2與C3之間的虛線係雙鍵、且m係1時，則R1係
舉例而言，當D係D1、C2與C3之間的虛線係雙鍵、且m係1時，則R1係鹵基。
舉例而言，當D係D1、C2與C3之間的虛線係單鍵、且m係1時，則R1係：-OH、=O、=CH2、-CN、-R2、-OR2、鹵基、=CH-R6、=C(R6)2、-O-SO2R2、-CO2R2、-COR2、-CHO、或-COOH。
舉例而言，當D係D1、C2與C3之間的虛線係單鍵、且m係1時，則R1係：=CH2、=CH-R6或=C(R6)2。
舉例而言，當D係D1且m係2時，則各R1係獨立地為鹵基且R1兩者均係接附至相同碳原子或其中一個接附至C2且另一個接附至C3。
舉例而言，T係C2-6伸烷基連接子。
舉例而言，T係C2-4伸烷基連接子。
舉例而言，T係伸丁基。
舉例而言，T係伸丙基。
舉例而言，T係正伸丙基。
舉例而言，T係伸乙基。
舉例而言，各係獨立地為 ；或
舉例而言，各係獨立地為 ；或
舉例而言，s係1、2、3、4或5。
舉例而言，s係2、3、4、5或6。
舉例而言，s係1、2、3或4。
舉例而言，s係2、3、4或5。
舉例而言，s係3、4、5或6。
舉例而言，s係1、2或3。
舉例而言，s係2、3或4。
舉例而言，s係3、4或5。
舉例而言，s係4、5或6。
舉例而言，s係1或2。
舉例而言，s係2或3。
舉例而言，s係3或4。
舉例而言，s係4或5。
舉例而言，s係5或6。
舉例而言，s係1。
舉例而言，s係2。
舉例而言，s係3。
舉例而言，s係4。
舉例而言，s係5。
舉例而言，s係6。
舉例而言，A係或
舉例而言，A係或，其中各X1係獨立地為CH或N。
舉例而言，A係 ；或
舉例而言，A係或；其中各X1係獨立地為CH或N。
舉例而言，A係： ；或
舉例而言，A係：或 ；其中各X1係獨立地為CH或N。
舉例而言，A係： ；或
舉例而言，t係0。
舉例而言，t係1。
舉例而言，t係2。
舉例而言，E係。舉例而言，E係 。舉例而言，X3係CH。舉例而言，X3係N。
舉例而言，當E係，則s係2、3、4、5或6，例如，s係2、s係3、s係4、s係5或s係6。
舉例而言，當X4係O或S時，則s係2、3、4、5或6，例如，s係2、s係3、s係4、s係5或s係6。
舉例而言，E係 或
舉例而言，E係-OH。
舉例而言，E係-NH-(C1-6伸烷基)-OH，其中C1-6伸烷基係直鏈或支鏈伸烷基。
舉例而言，E係-NH-(CH2)u-OH，其中u係1、2、3、4、5、或6。
舉例而言，E係-NH-(CH2)3-OH。
舉例而言，E係
舉例而言，E係
舉例而言，E係
舉例而言，E係
舉例而言，E係
舉例而言，E係
舉例而言，E係
舉例而言，E係
舉例而言，各R8係獨立地為-OH、-OR2、-COOH、-COOR2、-COR2、-OCONR13R14、-CONR13R14、-CO-NH-(C1-6伸烷基)-R13a、聚乙二醇單元-(OCH2CH2)r-ORa、3至7員雜環烷基、5至6員雜芳基、-S(=O)2R12、-S(=O)2NR13R14、-SR12或-R20-R21-NR13R14； 其中R13及R14係各獨立地為-H或C1-10烷基；各R20係伸苯基；且各R21係獨立地為C1-4伸烷基。
舉例而言，各R8係獨立地為-OH、-OR2、-COOH、-COOR2、-COR2、-S(=O)2R12、-SR12或-R20-R21-NR13R14。
舉例而言，各R8係獨立地為-OH或-OR2。
舉例而言，各R8係獨立地為-COOH、-COOR2、或-COR2。
舉例而言，各R8係獨立地為-S(=O)2R12或SR12。
舉例而言，各R8係獨立地為-CONR13R14或-CO-NH-(C1-6伸烷基)-R13a。
舉例而言，各R8係獨立地為-R20-R21-NR13R14。舉例而言，R8係-NH2。舉例而言，R8係-CH2NH2。舉例而言，R8係-CH2CH2NH2。舉例而言，R8係-CH2CH2CH2NH2。
舉例而言，各R13a係獨立地為OH或NHR13。
舉例而言，R13各發生時係獨立地為H或C1-10烷基(例如C1-6烷基)。
舉例而言，R14各發生時係獨立地為H或C1-10烷基(例如C1-6烷基)。
舉例而言，R13各發生時係獨立地為3至20員(例如4至14員)雜環烷基或5至20員(例如5至10員)雜芳基。
舉例而言，R14各發生時係獨立地為3至20員 (例如4至14員)雜環烷基或5至20員(例如5至10員)雜芳基。
舉例而言，R4、R5及R7係各獨立地為-H、-R2、-OH、-OR2、-SH、-SR2、-NH2、-NHR2，舉例而言，R4、R5及R7中的至少一者係-OR2。
舉例而言，R4、R5及R7中的至少一者係聚乙二醇單元-(OCH2CH2)r-ORa。
舉例而言，R4、R5及R7中的至少二者係-H。
舉例而言，R4、R5及R7中的二者係-H，且另一者係-OR2。
舉例而言，R4、R5及R7中的二者係-H，且另一者係-OCH3。
舉例而言，R4及R5各係-H，且R7係-OCH3。
舉例而言，R4及R5各係-H，且R7係-(OCH2CH2)r-ORa。
舉例而言，R4及R7一起形成雙-氧C1-3伸烷基。
舉例而言，R20及R21各係鍵結。
舉例而言，R20及R21中的一者係鍵結且另一者不為鍵結。
舉例而言，R20係鍵結且R21不為鍵結。
舉例而言，R20係鍵結且R21係C1-10伸烷基。
舉例而言，R21係鍵結且R20不為鍵結。
舉例而言，R21係鍵結且R20係C6-10伸芳基、3至14員雜伸環烷基或5至12員雜伸芳基。
舉例而言，R10及R11與彼等所分別接附之氮原子及碳原子一起形成N=C雙鍵。
舉例而言，R10係-H或氮保護基，且R11係-QRQ。
舉例而言，R10係-H且R11係-QRQ。
舉例而言，R10係氮保護基且R11係-QRQ，其中該氮保護基係烯丙氧羰基(allyloxycarbonyl)(alloc)、苄氧羰基(carbobenzyloxy)(Cbz)、對甲氧苄基羰基(Moz或MeOZ)、乙醯基(Ac)、苄醯基(Bz)、苄基(Bn)、三氯乙氧羰基(Troc)、三級丁氧羰基(BOC)或9-茀基亞甲基氧羰基(fluorenylmethylenoxycarbonyl)(Fmoc)。
舉例而言，R11係-OSOxM。
舉例而言，R11係-SOxM。
舉例而言，R15、R16、R17及R18係各獨立地為-H、-OH、鹵基、-NO2、-CN、-N3、-OR2、-COOH、-COOR2、-COR2、-OCONR13R14、C1-10烷基、C3-10環烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、聚乙二醇單元-(OCH2CH2)r-ORa、3至14員雜環烷基、5至12員雜芳基、-NR13R14、-S(=O)2R12、-S(=O)2NR13R14、-SR12或-NH(C=NH)NH2。
舉例而言，R15、R16、R17及R18中的至少一者係-H。
舉例而言，R15、R16、R17及R18中的至少二者係-H。
舉例而言，R15、R16、R17及R18中的至少三者係-H。
舉例而言，R15、R16、R17及R18各係-H或-NR13R14。
舉例而言，R15、R16、R17及R18中的至少一者係-NR13R14。
舉例而言，R15、R16、R17及R18中的至少一者係-NH2。
舉例而言，R15、R16、R17及R18中的一者係-NR13R14。
舉例而言，R15、R16、R17及R18中的一者係-NH2。
舉例而言，R16、R17及R18各係-H；且R15係-NH2。
舉例而言，R15、R17及R18各係-H；且R16係-NH2。
舉例而言，R15、R16及R18各係-H；且R17係-NH2。
舉例而言，R15、R16及R17各係-H；且R18係-NH2。
舉例而言，X0係CH2、NR6、或C=O。
舉例而言，Y0係O、CH2、或NR6。
舉例而言，Z0係不存在。
舉例而言，Z0係(CH2)n；且n係1或2。
舉例而言，當Q係S或NH時，則RQ係-H。
舉例而言，當Q係S或NH時，則RQ係隨意經取 代之C1-7烷基。
舉例而言，當Q係O時，則RQ係-H。
舉例而言，當Q係O時，則RQ係隨意經取代之C1-7烷基。
舉例而言，當Q係O時，則RQ係-SOxM。
舉例而言，式(I)化合物含有至多一個-SOxM或-OSOxM。舉例而言，R11係-OSOxM或-SOxM。
舉例而言，式(I)化合物包括式(II-a)至(II-p)中任何所示者： ，或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
舉例而言，式(I)化合物包括式(III-a)至(III-c)中任何所示者： 、或 ，或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
舉例而言，式(I)化合物包括 或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物，其中：R13係H；R14係H或甲基；及p係1、2、3或4。
本揭露特徵亦在於式(V)之化合物， 或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
在上述之式(V)之化合物中，X4係C=S、CH2、SO、SO2或BH；且E、A、T、D、R4、R5、R7、R10及R11係如在本文中所界定者。
舉例而言，式(V)化合物包括式(V-a)至(V-e)中任何所示者： 、或，或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
舉例而言，式(I)化合物包括下列者：針對D、T、E、A、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R31、R32、R33、R34、R35a、R35b、R36a、R36b、R36c、R36d、R37a、R37b、Ra、Rb、RN、RQ、X0、Y0、Z0、 X1、Y1、Z1、X2、X3、M、Q、m、n、r、s、t、及x中的一者所界定之部分各者，可與D、T、E、A、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R31、R32、R33、R34、R35a、R35b、R36a、R36b、R36c、R36d、R37a、R37b、Ra、Rb、RN、RQ、X0、Y0、Z0、X1、Y1、Z1、X2、X3、M、Q、m、n、r、s、t、及x中的其他者所界定之任何部分組合。
本揭露之化合物的代表性實例包括表1中所列者，或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
本揭露特徵亦在於式(I)化合物之修飾以包括連接子。具有連接子之式(I)化合物可進一步經修飾而可直接或間接連接至抗體或抗體片段以形成本揭露之共軛物。本揭露之共軛物亦被稱為抗體-藥物共軛物(ADC)。
具有連接子之式(I)化合物的代表性實例包括表2中所列者，或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
本揭露特徵亦在於一種式(I)化合物之共軛物，其中該共軛物包含直接或間接連接至該化合物之抗體或抗體片段。
舉例而言，式(I)化合物之共軛物進一步包括一或多個聚合物支架，其中該化合物係經由該一或多個聚合物支架而連接至該抗體或抗體片段。
舉例而言，該一或多個聚合物支架包含聚(1-羥甲基伸乙基羥甲基縮甲醛)(PHF)。
舉例而言，該PHF具有範圍在約2kDa至約300 kDa之分子量(例如約2至40kDa、約6至20kDa、約8至15kDa、20至150kDa、約40至150kDa、或約50至100kDa)。
舉例而言，為了共軛具有40kDa或更高(例如80kDa或更高、100kDa或更高、150kDa或更高、200kDa或更高或250kDa或更高)的分子量之抗體或抗體片段，所使用之PHF具有範圍在約2kDa至約40kDa(例如約6至20kDa或約8至15kDa)之分子量(即未經修飾PHF之MW)。
為了共軛具有200kDa或更低(例如150kDa或更低、100kDa或更低、80kDa或更低或50kDa或更低)的分子量之抗體或抗體片段，所使用之PHF具有範圍在約20kDa至約300kDa(例如約20至150kDa、約40至150kDa或約50至100kDa)之分子量(即未經修飾PHF之MW)。
舉例而言，式(I)化合物，在與抗體或抗體片段共軛時，係式(VI)：、或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物，其中：該抗體或抗體片段係直接或間接連接至該化合物在 E"、D"、R" 7或R" 10中之一者的位置；且E"、D"、R" 7或R" 10的其餘者分別係E、D、R7、或R10；其中：E"係E或；其中表示直接或間接經由E的官能基基團鍵聯至抗體或抗體片段；D"係D或；其中表示直接或間接經由D的官能基基團鍵聯至抗體或抗體片段；R" 7係R7或；其中表示直接或間接經由R7的官能基基團鍵聯至抗體或抗體片段；及R" 10係R10或；其中表示直接或間接經由R10的官能基基團鍵聯至抗體或抗體片段。
舉例而言，E"係；D"係D；R" 7係R7；及R" 10係R10。
舉例而言，D"係；E"係E；R" 7係R7；及R" 10係R10。
舉例而言，R" 7係；E"係E；D"係D；及R" 10係R10。
舉例而言，R" 10係；E"係E；D"係D； 及R" 7係R7。
舉例而言，式(VI)化合物包括下列者：針對E"、D"、R" 7、R" 10、D、T、E、A、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R31、R32、R33、R34、R35a、R35b、R36a、R36b、R36c、R36d、R37a、R37b、Ra、Rb、RN、RQ、X0、Y0、Z0、X1、Y1、Z1、X2、X3、M、Q、m、n、r、s、t、及x中的一者所界定之部分各者，可與E"、D"、R" 7、R" 10、D、T、E、A、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R31、R32、R33、R34、R35a、R35b、R36a、R36b、R36c、R36d、R37a、R37b、Ra、Rb、RN、RQ、X0、Y0、Z0、X1、Y1、Z1、X2、X3、M、Q、m、n、r、s、t、及x中的其他者所界定之任何部分組合。
本揭露之化合物-抗體共軛物或化合物-抗體片段共軛物的代表性實例包括表3中所列者，或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
如本文中所使用，“烷基”、“C1、C2、C3、C4、C5或C6烷基”或“C1-C6烷基”係意欲包括C1、C2、C3、C4、C5或C6直鏈(線形)飽和脂族烴基團及C3、C4、C5或C6 支鏈飽和脂族烴基團。舉例而言，C1-C6烷基係意欲包括C1、C2、C3、C4、C5及C6烷基。烷基的的實例包括具有一至六個碳原子之部份(moiety)，諸如但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、二級丁基、三級丁基、正戊基、二級戊基或正己基。
在某些實施態樣中，直鏈或支鏈烷基具有六或更少個碳原子(例如針對直鏈為C1-C6、針對支鏈為C3-C6)，且在另一實施態樣中，直鏈或支鏈烷基具有四或更少個碳原子。
如本文中所使用，用語“環烷基”係指具有3至30個碳原子(例如C3-C10)之飽和或不飽和非芳族烴單環或多環(例如稠合環、橋聯環或螺環)系。環烷基的實例包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、環戊烯基、環己烯基、環庚烯基、1,2,3,4-四氫萘基、及金剛烷基。用語"雜環烷基"係指具有一或多個雜原子(諸如O、N、S、P、或Se)作為環原子之飽和或不飽和非芳族環系，諸如3至8員單環、7至12員雙環(稠合環、橋聯環、或螺環)、或11至14員三環環系(稠合環、橋聯環、或螺環)，其具有例如1個或1至2個或1至3個或1至4個或1至5個或1至6個雜原子，或例如1、2、3、4、5、或6個雜原子，該等雜原子係獨立地選自由氮、氧及硫所組成之群組，除非另有指明。雜環烷基基團的實例包括但不限於哌啶基、哌基、吡咯啶基、二基、四氫呋喃基、異吲哚啉基、吲哚啉基、咪唑啶基、吡唑啶基、唑啶基、異 唑啶基、三唑啶基、氧基、吖呾基、氧呾基、硫呾基、1,2,3,6-四氫吡啶基、四氫哌喃基、二氫哌喃基、哌喃基、啉基、四氫噻喃基、1,4-二吖基、1,4-氧吖基、2-氧-5-氮雙環[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮雙環[2.2.1]庚烷基、2-氧-6-氮螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮螺[3.3]庚烷基、1,4-二氧-8-氮螺[4.5]癸基、1,4-二氧螺[4.5]癸基、1-氧螺[4.5]癸基、1-氮螺[4.5]癸基、3'H-螺[環己烷-1,1'-異苯并呋喃]-基、7'H-螺[環己烷-1,5'-呋喃并[3,4-b]吡啶]-基、3'H-螺[環己烷-1,1'-呋喃并[3,4-c]吡啶]-基等等。在多環芳環的情況中，只有該等環中的一者必須係非芳族(例如1,2,3,4-四氫萘基或2,3-二氫吲哚)。用語“環伸烷基”及“雜伸環烷基”係指分別對應的二價基團。
用語“隨意經取代之烷基(optionally substituted alkyl)”係指未經取代之烷基或具有指定之取代基(其置換烴骨架的一或多個碳上的一或多個氫原子)之烷基。此等取代基可包括例如烷基、烯基、炔基、鹵素、羥基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羧酸酯、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、胺基羰基、烷基胺基羰基、二烷基胺基羰基、烷硫基羰基、烷氧基、磷酸酯、膦酸根基(phosphonato)、亞膦酸根基(phosphinato)、胺基(包括烷基胺基、二烷基胺基、芳基胺基、二芳基胺基和烷基芳基胺基)、醯基胺基(包括烷基羰基胺基、芳基羰基胺基、胺甲醯基和脲基)、甲脒基、亞胺基、巰基(sulfhydryl)、烷硫基、芳硫基、硫代羧 酸酯(thiocarboxylate)、硫酸酯、烷亞磺醯基、磺酸根基、胺磺醯基、磺醯胺基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環基、烷基芳基、或芳族或雜芳族部分。
如本文中所使用，“烷基連接子(alkyl linker)”或“伸烷基連接子(alkylene linker)"係意欲包括C1、C2、C3、C4、C5或C6直(線形或支鏈)飽和二價脂族烴基團及C3、C4、C5或C6支鏈飽和脂族烴基團。舉例而言，C1-C6伸烷基連接子係意欲包括C1、C2、C3、C4、C5及C6伸烷基連接子基團。伸烷基的實例包括具有一至六個碳原子之部份(moiety)，諸如但不限於甲基(-CH2-)、乙基(-CH2CH2-)、正丙基(-CH2CH2CH2-)、異丙基(-CHCH3CH2-)、正丁基(-CH2CH2CH2CH2-)、二級丁基(-CHCH3CH2CH2-)、異丁基(-C(CH3)2CH2-)、正戊基(-CH2CH2CH2CH2CH2-)、二級戊基(-CHCH3CH2CH2CH2-)或正己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-)。
“烯基(alkenyl)”包括在長度上類似且可能取代上述烷基的不飽和脂族基團，但其包含至少一個雙鍵。例如，用語“烯基”包括直鏈烯基(例如，乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基)，和支鏈烯基。
在某些實施態樣中，直鏈或支鏈烯基在其骨幹內具有六或更少個碳原子(例如針對直鏈為C2-C6、針對支鏈為C3-C6)。用語“C2-C6”包括含有二至六個碳原子的烯基。用語“C3-C6”包括含有三至六個碳原子的烯基。
用語“隨意經取代之烯基(optionally substituted alkenyl)”係指未經取代之烯基或具有指定之取代基(其置換烴骨架的一或多個碳原子上的一或多個氫原子)之烯基。此等取代基可包括例如烷基、烯基、炔基、鹵素、羥基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羧酸酯、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、胺基羰基、烷基胺基羰基、二烷基胺基羰基、烷硫基羰基、烷氧基、磷酸酯、膦酸根基(phosphonato)、亞膦酸根基(phosphinato)、胺基(包括烷基胺基、二烷基胺基、芳基胺基、二芳基胺基和烷基芳基胺基)、醯基胺基(包括烷基羰基胺基、芳基羰基胺基、胺甲醯基和脲基)、甲脒基、亞胺基、巰基(sulfhydryl)、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸酯(thiocarboxylate)、硫酸酯、烷亞磺醯基、磺酸根基、胺磺醯基、磺醯胺基、硝基、三氟甲基、氰基、雜環基、烷基芳基、或芳族或雜芳族部分。
“炔基(alkynyl)”包括在長度上類似且可能取代上述烷基的不飽和脂族基團，但其包含至少一個參鍵。例如，“炔基”包括直鏈炔基(例如乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、庚炔基、辛炔基、壬炔基、癸炔基)，和支鏈炔基。在某些實施態樣中，直鏈或支鏈炔基在其骨幹內具有六或更少個碳原子(例如針對直鏈為C2-C6、針對支鏈為C3-C6)。用語“C2-C6”包括含有2至6個碳原子的炔基。用語“C3-C6”包括含有三至六個碳原子的炔基。
用語“隨意經取代之炔基(optionally substituted alkynyl)”係指未經取代之炔基或具有指定之取代基(其置換烴骨架的一或多個碳原子上的一或多個氫原子)之炔基。此等取代基可包括例如烷基、烯基、炔基、鹵素、羥基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羧酸酯、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、胺基羰基、烷基胺基羰基、二烷基胺基羰基、烷硫基羰基、烷氧基、磷酸酯、膦酸根基(phosphonato)、亞膦酸根基(phosphinato)、胺基(包括烷基胺基、二烷基胺基、芳基胺基、二芳基胺基和烷基芳基胺基)、醯基胺基(包括烷基羰基胺基、芳基羰基胺基、胺甲醯基和脲基)、甲脒基、亞胺基、巰基(sulfhydryl)、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸酯(thiocarboxylate)、硫酸酯、烷亞磺醯基、磺酸根基、胺磺醯基、磺醯胺基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環基、烷基芳基、或芳族或雜芳族部分。
其他隨意地經取代的部份(moiety)(例如隨意地經取代的環烷基、雜環烷基、芳基、或雜芳基)同時包括未經取代的部份和具有一或多個指定取代基的部份。例如，經取代的雜環烷基包括經一或多個烷基取代者，例如2,2,6,6-四甲基-哌啶基和2,2,6,6-四甲基-1,2,3,6-四氫吡啶基。
“芳基(aryl)”包括具有芳族性之基團，包括具有一或多個芳環的“共軛”或多環系統，且在環結構內不含有任何雜原子。實例包括苯基、萘基等等。用語“伸芳基 (arylene)”係指對應的二價基團，諸如伸苯基。
“雜芳基(heteroaryl)”為如上所定義的芳基，惟在環結構內具有一至四個雜原子，且亦可稱為“芳基雜環(aryl heterocycle)”或“雜芳族(heteroaromatic)”。如本文中所使用，用語“雜芳基(heteroaryl)”係意欲包括安定的芳族雜環，諸如安定的5-、6-、或7-員單環或7-、8-、9-、10-、11-或12-員雙環芳族雜環，其係由碳原子和一或多個雜原子組成，例如，1或1-2或1-3或1-4或1-5或1-6個雜原子，或例如1、2、3、4、5、或6個雜原子，其係選自由氮、氧和硫所組成之群組。氮原子可為經取代的或未經取代的(即，N或NR，其中R為H或其他取代基，如所定義)。氮和硫雜原子可隨意地被氧化(即，N→O和S(O)p，其中p=1或2)。應注意的是，芳族雜環內之S和O原子的總數不多於1。
雜芳基的實例包括吡咯、呋喃、噻吩、噻唑、異噻唑、咪唑、三唑、四唑、吡唑、唑、異唑、吡啶、吡、嗒、嘧啶等等。用語“雜伸芳基(heteroarylene)”係指對應的二價基團。
又，用語“芳基”和“雜芳基”包括多環芳基和雜芳基，例如，三環、雙環，例如，萘、苯并唑、苯并二唑、苯并噻唑、苯并咪唑、苯并噻吩、喹啉、異喹啉、啶、吲哚、苯并呋喃、嘌呤、苯并呋喃、去氮嘌呤、吲。
環烷基環、雜環烷基環、芳基環、或雜芳基 環在一或多環位置可經如上述之取代基所取代(例如形成環的碳或雜原子諸如N)，例如烷基、烯基、炔基、鹵素、羥基、烷氧基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羧酸酯、烷基羰基、烷基胺基羰基、芳烷基胺基羰基、烯基胺基羰基、烷基羰基、芳基羰基、芳烷基羰基、烯基羰基、烷氧基羰基、胺基羰基、烷硫基羰基(alkylthiocarbonyl)、磷酸酯、膦酸根基(phosphonato)、亞膦酸根基(phosphinato)、胺基(包括烷基胺基、二烷基胺基、芳基胺基、二芳基胺基和烷基芳基胺基)、醯基胺基(包括烷基羰基胺基、芳基羰基胺基、胺甲醯基和脲基)、甲脒基、亞胺基、巰基(sulfhydryl)、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸酯(thiocarboxylate)、硫酸酯、烷亞磺醯基、磺酸根基、胺磺醯基、磺醯胺基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環基、烷基芳基、或芳族或雜芳族部分。芳基和雜芳基亦可與脂環族或雜環稠合或橋接，其不為芳族以便形成多環系統(例如，四氫萘、亞甲基二氧基苯基，諸如苯并[d][1,3]二呃-5-基)。
如本文中所使用，“碳環(carbocycle或carbocyclic ring)”係意欲包括任何安定的單環、雙環或三環，其具有特定碳原子數目，其任何一者可為飽和、不飽和、或芳族。碳環包括環烷基和芳基。例如，C3-C14碳環係意欲包括單環、雙環或三環，其具有3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14個碳原子。碳環的實例包括但不限於：環丙基、環丁基、環丁烯基、環戊基、環戊烯 基、環己基、環庚烯基、環庚基、環庚烯基、金剛烷基、環辛基、環辛烯基、環辛二烯基、茀基、苯基、萘基、二氫茚基、金剛烷基和四氫萘基。橋聯環也亦包括在碳環定義中，其包括例如[3.3.0]雙環辛烷、[4.3.0]雙環壬烷、和[4.4.0]雙環癸烷和[2.2.2]雙環辛烷。當一或多個碳原子連結二個非相鄰的碳原子時出現橋聯環。於一個實施態樣中，橋接環為一或二個碳原子。要注意的是，橋接總是使單環轉換成三環。當環被橋接時，針對環所述之取代基亦可存在於橋上。稠合(例如萘基、四氫萘基)和螺環亦包括。
如本文中所使用，“雜環(heterocycle)”或“雜環基(heterocyclic group)”包括任何環結構(飽和、不飽和、或芳族)，其包含至少一個環雜原子(例如，1至4個雜原子，其選自N、O及S)。雜環包括雜環烷基和雜芳基。雜環的實例包括但不限於啉、吡咯啶、四氫噻吩、哌啶、哌、氧呾、哌喃、四氫哌喃、吖呾、及四氫呋喃。
雜環基的實例包括但不限於吖啶基、吖基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫代呋喃基、苯并噻吩基、苯并唑基、苯并唑啉基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并異唑基、苯并異噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、唍基、唏基、啉基、十氫喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻基、二氫呋喃并[2,3-b]四氫呋喃、呋喃基、呋呫基、咪唑啶基、咪 唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、N-吲哚基(indolenyl)、吲哚啉基、吲基、吲哚基、3H-吲哚基、吲哚二酮基(isatinoyl)、異苯并呋喃基、異基、異吲唑基、異吲哚啉基、異吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異唑基、亞甲基二氧基苯基、啉基、啶基、八氫異喹啉基、二唑基、1,2,3-二唑基、1,2,4-二唑基、1,2,5-二唑基、1,3,4-二唑基、1,2,4-二唑5(4H)-酮、唑啶基、唑基、吲哚酮基(oxindolyl)、嘧啶基、啡啶基、啡啉基、啡基、啡噻基、啡噻基(phenoxathinyl)、啡基、呔基、哌基、哌啶基、哌啶酮基(piperidonyl)、4哌啶酮基、向日葵基、喋啶基、嘌呤基、哌喃基、吡基、吡唑啶基、吡唑啉基、吡唑基、嗒基、吡啶並唑、吡啶並咪唑、吡啶並噻唑、吡啶基、吡啶基、嘧啶基、吡咯啶基、吡咯啉基、2H吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H喹基、喹啉基、啶基、四氫呋喃基、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、四唑基、6H-1,2,5-噻二基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻嗯基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并唑基、噻吩并咪唑基、苯硫基、三基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基和基。
用語“經取代的”，如本文中所使用，意指在指定原子上之任何一或多個氫原子經自指定基團中之選取者置換，先決條件是不超過所指定之原子的正常價數，且 取代作用獲得安定化合物。當取代基為側氧基或酮基(即，=O)，則原子上之2個氫原子被置換。酮基取代基不存在於芳香族基團。環雙鍵，如本文中所使用，為2個相鄰之環原子間所形成之雙鍵(例如，C=C、C=N或N=N)。“安定的化合物”和“安定的結構”意指穩健到足以從反應混合物中分離成有用純度之化合物且調配成有效治療劑之化合物。
當顯示出結合至取代基之鍵是跨過連接環內之2個原子的鍵時，則此取代基可被鍵結至環內之任何原子。當所例示之取代基未指出經由該原子而使此取代基鍵結至具有特定化學式之化合物的剩餘部分之原子，則此取代基可經由此化學式之任何原子而被鍵結。允許取代基和/或變數的組合，但只要此組合獲得安定化合物。
當任何變數(例如，R1)在化合物之任何組成(constituent)或化學式中出現多於一次時，其在每一次出現時的定義與其在其他每一次出現時的定義係彼此獨立。因此，例如，若所示之基團經0-2個R1基團取代時，則該基團可隨意地經至多2個R1基團取代，且R1在每一次出現時係獨立地選自R1的定義。同樣地，允許取代基和/或變數的組合，但只要此組合獲得安定的化合物。
用語“羥基(hydroxy或hydroxyl)”包括具有-OH或-O-之基團。
如本文中所使用，“鹵基”或“鹵素”意指氟、氯、溴和碘。用語“全鹵化”一般意指所有氫原子經鹵素原 子置換之基團。用語“鹵基烷基”或“鹵基烴氧基”意指經一或多個鹵素原子取代的烷基或烴氧基。
如本文中所使用，用語“雙-氧基-伸烷基”係指-O-伸烷基-O-，其中伸烷基可係直鏈或支鏈，例如-CH2-、-CH(CH3)2-、或-(CH2)2-。
用語“羰基”包括含有以雙鍵連接至氧原子之碳的化合物和基團。含有羰基之基團的實例包括但不限於：醛類、酮類、羧酸類、醯胺類、酯類、酐類等等。
用語“羧基(carboxyl)”意指-COOH或其C1-C6烷基酯。
“醯基(acyl)”包括含有醯基(R-C(O)-)或羰基之部份。“經取代之醯基(substituted acyl)”包括一或多個氫原子係由例如下列所置換之醯基基團：烷基、炔基、鹵素、羥基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羧酸酯、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、胺基羰基、烷基胺基羰基、二烷基胺基羰基、烷硫基羰基、烷氧基、磷酸酯、膦酸根基(phosphonato)、亞膦酸根基(phosphinato)、胺基(包括烷基胺基、二烷基胺基、芳基胺基、二芳基胺基和烷基芳基胺基)、醯基胺基(包括烷基羰基胺基、芳基羰基胺基、胺甲醯基和脲基)、甲脒基、亞胺基、巰基(sulfhydryl)、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸酯(thiocarboxylate)、硫酸酯、烷亞磺醯基、磺酸根基、胺磺醯基、磺醯胺基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環基、烷基芳基、或芳族或雜芳族部分。
“芳醯基(aroyl)”包括具有鍵結至羰基之芳基或雜芳香族基團的基團。芳醯基的實例包括苯基羧基、萘基羧基等等。
“烴氧基烷基”、“烷基胺基烷基”和“硫烴氧基烷基”包括如上所述之烷基基團，其中氧、氮、或硫原子置換一或多個烴骨幹碳原子。
用語“烴氧基(alkoxy)或(alkoxyl)”包括共價連接至氧原子之經取代和未經取代的烷基、烯基和炔基。烴氧基的實例包括但不限於：甲氧基、乙氧基、異丙氧基、丙氧基、丁氧基和戊氧基。經取代的烴氧基的實例包括經鹵化的烴氧基。烷氧基可經基團所取代，諸如烯基、炔基、鹵素、羥基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羧酸酯、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、胺基羰基、烷基胺基羰基、二烷基胺基羰基、烷硫基羰基、烷氧基、磷酸酯、膦酸根基(phosphonato)、亞膦酸根基(phosphinato)、胺基(包括烷基胺基、二烷基胺基、芳基胺基、二芳基胺基和烷基芳基胺基)、醯基胺基(包括烷基羰基胺基、芳基羰基胺基、胺甲醯基和脲基)、甲脒基、亞胺基、巰基(sulfhydryl)、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸酯(thiocarboxylate)、硫酸酯、烷亞磺醯基、磺酸根基、胺磺醯基、磺醯胺基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環基、烷基芳基、或芳族或雜芳族部分。經鹵素取代的烴氧基的實例包括但不限於：氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、氯甲氧基、二氯甲氧基 和三氯甲氧基。
用語“醚”或“烴氧基”包括含有鍵結至2個碳原子或雜原子之氧的化合物或基團。例如，用語包括“烴氧基烷基”，其意指共價鍵結至氧原子(其共價鍵結至烷基)之烷基、烯基、或炔基。
用語“酯”包括含有鍵結至氧原子之碳或雜原子的化合物或基團，該氧原子鍵結至羰基的碳。用語“酯”包括烴氧基羧基，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、丁氧基羰基、戊氧基羰基等等。
用語“烷硫基”包括含有與硫原子連接之烷基的化合物或基團。烷硫基可經基團所取代，諸如烷基、烯基、炔基、鹵素、羥基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羧酸酯、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、胺基羰基、烷基胺基羰基、二烷基胺基羰基、烷硫基羰基、烷氧基、胺基(包括烷基胺基、二烷基胺基、芳基胺基、二芳基胺基和烷基芳基胺基)、醯基胺基(包括烷基羰基胺基、芳基羰基胺基、胺甲醯基和脲基)、甲脒基、亞胺基、巰基(sulfhydryl)、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸酯(thiocarboxylate)、硫酸酯、烷亞磺醯基、磺酸根基、胺磺醯基、磺醯胺基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環基、烷基芳基、或芳族或雜芳族部分。
用語“硫羰基”或“硫羧基”包括含有以雙鍵連接至硫原子之碳的化合物和基團。
用語“硫醚”包括含有鍵結至2個碳原子或雜原子之硫原子的基團。硫醚的實例包括但不限於：烴硫基(alkthio)烷基、烴硫基烯基、和烴硫基炔基。用語“烴硫基烷基”包括具有鍵結至硫原子(其鍵結至烷基)之烷基、烯基、或炔基的基團。類似地，用語“烴硫基烯基”意指其中烷基、烯基或炔基鍵結至硫原子(其共價鍵結至烯基)的基團；和“烴硫基炔基”意指其中烷基、烯基或炔基鍵結至硫原子(其共價鍵結至炔基)的基團。
如本文中所使用，“胺”或“胺基”意指未經取代的或經取代的-NH2。“烷基胺基”包括其中-NH2的氮鍵結至至少一個烷基之化合物的基團。烷基胺基的實例包括苄基胺基、甲基胺基、乙基胺基、苯乙基胺基等等。“二烷基胺基”包括其中-NH2的氮鍵結至至少兩個額外之烷基的基團。二烷基胺基的實例包括但不限於：二甲基胺基和二乙基胺基。“芳基胺基”和“二芳基胺基”包括其中氮分別鍵結至至少一個或兩個芳基的基團。“胺基芳基”和“胺基芳基氧基”意指經胺基取代的芳基和芳基氧基。“烷基芳基胺基”“烷基胺基芳基”或“芳基胺基烷基”意指鍵結至至少一個烷基和至少一個芳基的胺基。“烴胺基(alkamino)烷基”意指鍵結至氮原子(其亦鍵結至烷基)的烷基、烯基、或炔基。“醯基胺基”包括其中氮鍵結至醯基的基團。醯基胺基的實例包括但不限於：烷基羰基胺基、芳基羰基胺基、胺甲醯基和脲基。
用語“醯胺”或“胺基羧基”包括含有氮原子的化 合物或基團，該氮原子鍵結至羰基或硫羰基的碳。用語包括“烴胺基羧基”，其包含鍵結至胺基之烷基、烯基或炔基，該胺基鍵結至羰基或硫羰基的碳。其亦包括“芳基胺基羧基”，其包含鍵結至胺基之芳基或雜芳基，該胺基鍵結至羰基或硫羰基的碳。用語“烷基胺基羧基”、“烯基胺基羧基”、“炔基胺基羧基”和“芳基胺基羧基”包括其中烷基、烯基、炔基和芳基分別鍵結至氮原子的基團，該氮原子鍵結至羰基的碳。醯胺類可以經下列之取代基取代：例如直鏈烷基、支鏈烷基、環烷基、芳基、雜芳基或雜環。醯胺基上之取代基可進一步經取代。
本發明之含氮的化合物可以用氧化劑(例如，3-氯過氧苯甲酸(mCPBA)和/或氫過氧化物)處理而被轉換成N-氧化物，以提供本發明其他化合物。因此，當價數和結構允許時，考慮全部所顯示和主張之含氮的化合物，以同時包括如所顯示之化合物和其N-氧化物衍生物(其可以以N→O或N+-O-標出)。再者，在其他情況中，本發明化合物中的氮可以被轉換成N-羥基或N-烴氧基化合物。例如，N-羥基化合物可以藉由用氧化劑例如m CPBA氧化母胺而予以製備。當價數和結構允許時，亦考慮全部所顯示和主張之含氮的化合物，以同時涵蓋如所顯示之化合物和其N-羥基(即，N-OH)和N-烴氧基(即，N-OR，其中R為經取代或未經取代的C1-C6烷基、C1-C6烯基、C1-C6炔基、3-14員碳環或3-14員雜環)衍生物。
於本案說明書中，在一些情況中為了方便 性，化合物的結構式表示某一異構物，但本發明包括全部異構物，例如幾何異構物、建基於不對稱碳的光學異構物、立體異構物、互變異構物、和諸如此類者，要理解的是，並非全部異構物可具有相同程度的活性。此外，化學式所表示之化合物可存有結晶多形體。要注意的是，本發明的範圍包括任何晶形、晶形混合物、或其無水物或水合物。
再者，本發明的範圍包括所謂的代謝物，該代謝物係本發明化合物在活體內降解所產生的。“異構性”意指具有相同分子式但其原子之鍵結順序不同或其原子之空間排列不同的化合物。其原子之空間排列不同的異構物稱為“立體異構物”。彼此不為鏡像之立體異構物稱為“非鏡像異構物”，而彼此為不重疊鏡像之立體異構物稱為“鏡像異構物”或有時稱為光學異構物。含有相等量之相反掌性之個別鏡像異構物形式的混合物稱為“消旋混合物”。
鍵結至4個不同取代基之碳原子稱為“掌性中心”。
“掌性異構物”指具有至少一個掌性中心的化合物。具有多於一個掌性中心的化合物可以個別非鏡像異構物存在或以非鏡像異構物的混合物存在，稱為“非鏡像異構物的混合物”。當存有一個掌性中心時，立體異構物可以該掌性中心的絕對構形(R或S)為特徵。絕對構形意指連接至掌性中心之取代基的空間排列。依據Sequence Rule of Cahn,Ingold and Prelog.(Cahn et al.,Angew.Chem. Inter.Edit.1966,5,385；errata 511；Cahn et al.,Angew.Chem.1966,78,413；Cahn and Ingold,J.Chem.Soc.1951(London),612；Cahn et al.,Experientia 1956,12,81；Cahn,J.Chem.Educ.1964,41,116)排列考慮中的連接至掌性中心的取代基。
“幾何異構物”意指其因雙鍵或環烷基連結基(例如，1,3-環丁基)之阻礙旋轉而存在的非鏡像異構物。這些構形在其命名時以前綴詞順式和反式，或Z和E，予以區別，該前綴詞依據Cahn-Ingold-Prelog規則指出基團在分子內之雙鍵的相同側或是相反側。
要理解的是，本發明化合物可以不同掌性異構物或幾何異構物描述。亦要理解的是，當化合物具有掌性異構物或幾何異構物形式，本發明的範圍欲包括全部異構物形式，和化合物的命名不排除任何異構物形式，要理解的是，並非全部異構物可具有相同程度的活性。
再者，本發明所討論的結構和其他化合物包括其全部阻轉異構物，要理解的是，並非全部阻轉異構物可具有相同程度的活性。“阻轉異構物”為一類型的立體異構物，其中2個異構物的原子的空間排列是不同。阻轉異構物的存在是因中心鍵上的大基團的旋轉阻礙所導致的受限制之旋轉。此阻轉異構物典型地以混合物存在，然而由於層析術技術的最新進展，已可能在選取之情況中分離2個阻轉異構物的混合物。
“互變異構物”為二或多個結構異構物中之一 者，該等結構異構物係平衡地存在且輕易地從一種異構物形式轉換成另一種異構物形式。此轉換導致相鄰共軛雙鍵之變換所伴隨之氫原子的正式遷移。互變異構物於溶液中係以互變異構物組的混合物存在。在可能存有互變異構化作用之溶液中，將達到互變異構物的化學平衡。互變異構物的正確比例取決於數種因素，包括溫度、溶劑和pH。經由互變異構化作用所致之可轉換的互變異構物的觀念稱為互變異構性。
可能有各種類型的互變異構性，通常觀察到2種。於酮基-烯醇互變異構性中，電子和氫原子同時發生位移。環-鏈互變異構性係由於糖鏈分子內的醛基團(-CHO)與同一分子內的羥基(-OH)反應使糖鏈分子成為如葡萄糖所顯示之環狀(環形)形式而產生。
通常互變異構物對為：酮-烯醇、醯胺-腈、內醯胺-內醯亞胺、雜環上醯胺-醯亞胺酸互變異構性雜環(例如，在核鹼基上，例如鳥嘌呤、胸腺嘧碇和胞嘧啶)、亞胺-烯胺和烯胺-烯胺。
要理解的是，本發明化合物可以不同互變異構物描述。亦要理解的是，當化合物具有互變異構物形式時，本發明的範圍欲包括全部互變異構物形式，和化合物的命名不排除任何互變異構物形式。將理解的是，某些互變異構物可比其他者具有較高程度的活性。
用語“晶體多形體(crystal polymorph)”、“多形體(polymorph)”或“晶型(crystal form)”意指晶體結構，其 中化合物(或其鹽或溶劑化物)可以以不同晶體堆積排列方式結晶，其全部具有相同元素組成。不同晶型通常具有不同X-射線繞射圖、紅外線光譜、熔點、密度、硬度、晶體形狀、光學和電學性質、安定性和溶解性。再結晶溶劑、結晶速率、儲存溫度、和其他因素可導致一種晶型佔優勢。化合物的晶體多形體可以在不同條件下之結晶作用而予以製備。
本文中所述之任何式的化合物包括化合物本身及其鹽類、及其溶劑合物，若適用時。鹽類，例如，可以形成於本揭露之化合物上的陰離子和正電基團(例如，胺基)之間。適當的陰離子包括氯化物、溴化物、碘化物、硫酸鹽、硫酸氫鹽、胺磺酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽、甲磺酸酸鹽、三氟乙酸鹽、麩胺酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、戊二酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、琥珀酸鹽、反丁烯二酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽、水楊酸鹽、乳酸鹽、萘磺酸鹽、和乙酸鹽(例如，三氟乙酸鹽)。用語“醫藥上可接受之陰離子”意指適合形成醫藥上可接受之鹽的陰離子。同樣地，亦可以在經取代之苯化合物上的陽離子和負電荷基團(例如，羧酸酯)間形成鹽。適合的陽離子包括鈉離子、鉀離子、鎂離子、鈣離子、和銨陽離子例如四甲基銨離子。一些適合的經取代之銨離子實例係衍生自下列者：乙基胺、二乙基胺、二環己基胺、三乙基胺、丁基胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌、苄基胺、苯基苄基胺、膽鹼、美洛明(meglumine)、及三木甲胺 (tromethamine)，和胺基酸，諸如離胺酸及精胺酸。本揭露之化合物亦包括含有四級氮原子之鹽類者。
適合的無機陰離子的實例包括但不限於衍生自下列無機酸者：鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、亞硫酸、硝酸、亞硝酸、磷酸、及亞磷酸。適合的有機陰離子的實例包括但不限於衍生自下列有機酸類者：2-乙醯氧基苄酸、乙酸、抗壞血酸、天冬胺酸、苄酸、樟腦磺酸、肉桂酸、檸檬酸、伸乙二胺四乙酸(edetic acid)、乙二磺酸、乙磺酸、反丁烯二酸、葡萄庚酸、葡萄糖酸、麩胺酸、乙醇酸、羥基順丁烯二酸、羥基萘羧酸、羥乙磺酸、乳酸、乳糖醛酸、月桂酸、順丁烯二酸、蘋果酸、甲磺酸、黏酸、油酸、草酸、棕櫚酸、撲酸(pamoic acid)、泛酸、苯乙酸、苯磺酸、丙酸、丙酮酸、水楊酸，硬脂酸、琥珀酸、對胺基苯磺酸、酒石酸、甲苯磺酸、和戊酸。適合的聚合物有機陰離子的實例包括但不限於衍生自下列聚合物有機酸類者：單寧酸、羧甲基纖維素。
此外，本發明化合物，例如，化合物的鹽類，可以以水合形式或非水合(無水)形式存在，或可以以與其他溶劑分子之溶劑化物存在。水合物的非限制性實例包括單水合物、二水合物等等。溶劑化物的非限制性實例包括乙醇溶劑化物、丙酮溶劑化物等等。
“溶劑化物”意指含有化學計量或非化學計量含量溶劑之溶劑加成物形式。一些化合物在結晶固態內具有捕捉固定莫耳比之溶劑分子之傾向，藉此形成溶劑化物。 若溶劑為水，則所形成之溶劑化物為水合物；和若溶劑為醇，則所形成之溶劑化物為醇化物。水合物係藉由組合一或多個水分子與一分子物質而形成的，其中水保持其分子狀態如H2O。水合物係指例如單水合物、二水合物、三水合物等等。
便利或理想的是製備、純化、和/或處理對應活性化合物之溶劑合物。本揭露之化合物包括化合物係其中親核溶劑(H2O、RAOH、RANH2、RASH)加成跨PBD部分之亞胺鍵，其係描繪如下，其中，該溶劑係水或醇類(RAOH，其中RA係醚取代基，如上述者)：
這些形式可被稱為PBD的碳醇胺(carbinolamine)及碳醇胺醚(carbinolamine ether)形式。這些平衡的平衡態取決於化合物所在的條件，和該部分本身本質特性。
這些化合物可以固體形成而單離，例如，藉由凍乾。
如文中所定義，用語“衍生物(derivative)”意指具有共同核心結構且經如文中所述之各種基團取代的化合物。例如，式(I)所示之全部化合物為吡咯[2,1-c][1,4]苯并二氮呯類化合物(PBDs)，和具有式(I)作為共同核心。
用語“生物類性體(bioisostere)”意指得自原 子或一群原子與另一(廣泛地類似)原子或另一群原子交換之化合物。生物類性體的置換之目的是產生具有與母化合物相似之生物性質的新化合物。生物類性體的置換可建基於物化性或拓樸性。羧酸生物類性體的實例包括但不限於：醯基磺醯亞胺、四唑、磺酸鹽和膦酸鹽。參見例如Patani and LaVoie,Chem.Rev.96,3147-3176,1996。
本揭露係意欲包括存在於本案化合物之原子的全部同位素。同位素包括該等具有相同原子序但不同質量數之原子。作為一般實例但非限制性，氫的同位素包括氚和氘，和碳的同位素包括C-13和C-14。
本揭露提供合成任何本文中所述之式之化合物及其共軛物之方法。本揭露亦根據下列示於實施例中的反應圖提供用於合成各種本揭露所揭示之化合物及共軛物詳細方法。
在整個說明中，描述到組成物具有、包括、或包含特定組成時，其涵蓋組成物亦基本上由所記載組分組成、或由所記載組分組成。類似地，描述到方法或製程具有、包括、或包含特定程序步驟時，該製程涵蓋亦基本上由所記載處理步驟組成、或由所記載處理步驟組成。進一步地，應了解的是，的步驟順序或進行某些行為的順序並非攸關，只要本發明仍可操作即可。再者，二或更多個步驟或行為可同時進行。
本揭露的合成方法可以容許廣泛多種的官能基團，因此可以使用各種取代的起始物質。方法通常在整 個方法結束時或接近結束時提供所欲之最終化合物，雖然在某些情況中，可能想要進一步將化合物轉換成其醫藥上可接受之鹽類。
本揭露之化合物可以以各種方式予以製備，使用市場上購得之起始物、文獻已知之化合物、或來自輕易製備的中間物，藉由利用熟習該技術者已知之標準合成方法和程序，或按照文中教導對熟習該技術者而言為顯而易見之標準合成方法和程序。用於製備有機分子和官能基轉換和操作之標準合成方法和程序可以得自相關科學文獻或得自該領域之標準參考書。雖然未受限於任何一或數個來源、經典教科書例如Smith,M.B.,March,J.,March’s Advanced Organic Chemistry：Reactions,Mechanisms,and Structure,5th edition,John Wiley & Sons：New York,2001；Greene,T.W.,Wuts,P.G.M.,Protective Groups in Organic Synthesis,4th Edition,Wiley-Interscience,2007；R.Larock,Comprehensive Organic Transformations,VCH Publishers(1989)；L.Fieser and M.Fieser,Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1994)；and L.Paquette,ed.,Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1995)，彼等以引用方式併入本文中，為熟習該技術者所知道之有用和經認可的有機合成參考書。下列合成方法的描述係用於說明而非用於限制製備本揭露之化合物的一般程序。
具有文中所述之任何式之本揭露之化合物可 依據下面反應圖1及實施例所述之程序自市場上購得之起始物或可以使用文獻程序製備之起始物予以製備。反應圖1及實施例中之變數(例如m、t、R1、R7、R8、X1、Y1、Z1、X2、X3等等)為如文中所述之任何式中所定義者，除非另有具體指明。
熟悉該技術者將注意到，於文中所述之反應序列和合成流程期間，可改變某些步驟之順序，例如保護基的引入和移除。
熟悉該技術者將理解某些基團可能需要經由利用保護基而免受反應條件影響。亦可利用保護基以區別分子內之類似的官能基。所列示之保護基及如何引入和移除這些基團可以見於Greene,T.W.,Wuts,P.G.M.,Protective Groups in Organic Synthesis,4th Edition,Wiley-Interscience,2007。
較佳的保護基包括但不限於：就羥基部分而言：TBS、苄基、THP、Ac；就羧酸類而言：苄基酯、甲基酯、乙基酯、烯丙基酯；就胺類而言：Cbz、BOC、DMB；就二醇類而言：Ac(x2)TBS(x2)，或當一起為亞異丙基縮醛類(acetonides)；就硫醇類而言：Ac；就苯并咪唑而言：SEM、苄基、PMB、DMB； 就醛類而言：二-烷基縮醛類，例如二甲氧基縮醛或二乙基乙醯基。
於文中所述之反應圖中，可產生多種立體異構物。當未指明特定的立體異構物時，要理解的是，其意指可能產自反應之全部可能的立體異構物。熟悉該技術者將理解到反應可以被最有效地進行以優先地提供一種異構物，或可想出新的流程以產生單一異構物。若產生混合物，可利用技術如製備型薄層層析法、製備型HPLC、製備型掌性HPLC、或製備型SFC以分離異構物。
式(I)化合物可根據反應圖1的方式來製備。
在一個實施態樣中，如上面反應圖1中所描繪，在化合物A中的R8係使用標準保護基來保護。合成中的下一步，即I部分，係化合物A偶合至經保護之雜環化合物，接著去保護該新接上雜環化合物，以給出化合物B。 另外的偶合及去保護循環(II部分)給出化合物C。該偶合及去保護步驟係使用標準醯胺偶合及去保護試劑來進行。
將化合物C與化合物D共軛係在標準醯胺鍵形成條件下進行，例如，在HOBt或DMAP及EDC.HCl或EDAC存在下。在此步驟中(III部分)，在化合物D中，R10”係氮保護基，諸如像是烯丙氧羰基(allyloxycarbonyl)(alloc)、苄氧羰基(carbobenzyloxy)(Cbz)、對甲氧苄基羰基(Moz或MeOZ)、乙醯基(Ac)、苄醯基(Bz)、苄基(Bn)、三氯乙氧基羰基(Troc)、三級丁氧基羰基(BOC)或9-茀基亞甲基氧羰基(fluorenylmethylenoxycarbonyl)(Fmoc)；及R11”係氫或氧保護基，諸如像是四氫哌喃基(THP)、矽基醚、甲基醚、烷基醚、苄基醚。
該合成的最終步驟中(IV部分)涉及去保護化合物E及同步去保護R8基團以給出化合物F。
用於保護及去保護官能基基團之方法係本技術領域中已熟知且描述於例如Wuts,P.G.M.and Greene,T.W.,Protective Groups in Organic Synthesis,4th Edition,Wiley-Interscience,2007。若氮及羥基保護基兩者均存在，則這些較佳的是經選擇以可藉由相同條件下移除。
若此去保護係在式HQRQ之溶劑中來進行，則R10及R11將分別係H及QRQ。或者，這些基團可藉由將化合物加到會進行去保護的不同溶劑來引入。
如上述之式(I)化合物轉換至具有R11為-SOxM者可藉由加入適當亞硫酸氫鹽類或亞磺酸(sulphinate)鹽 類，接著純化步驟來達成。進一步方法係描述於美國專利第4,309,437號及WO2012/128868，彼等各以引用方式併入本文中。
本揭露之共軛物可以以各種方式予以製備，使用市場上購得且文獻已知之起始物、化合物、抗體、及抗體片段、或來自輕易製備的中間物，藉由利用熟習該技術者已知之標準合成方法和程序，或按照文中教導對熟習該技術者而言為顯而易見之標準合成方法和程序。舉例而言，針對合成式(I)化合物之共軛物，其中該抗體或抗體片段係直接或間接連接式(VI)化合物位置E”或D”，方法及連接子係揭示於WO2011/13063、WO2011/130616、WO2015/159076、WO2015/052535、WO2015/052534、WO2015/052321、WO2014/130879、WO2014/096365、WO2014/057122、WO2014/057073、WO2013/164593、WO2013/055993、WO2013/055990、WO2013/053873、WO2013/053871、WO2013/041606、WO2011/130616、及WO2011/130613可使用。這些專利公開之各者在本文中係以引用方式全部併入。
作為另一實例，針對合成式(I)化合物之共軛物，其中該抗體或抗體片段係直接或間接化合物位置R”7，方法及連接子係揭示於WO2014140174(A1)及WO2016/037644可使用。這些專利公開之各者在本文中係以引用方式全部併入。
作為另一實例，針對合成式(I)化合物之共軛 物，其中該抗體或抗體片段係直接或間接化合物位置R”10，方法及連接子係揭示於WO 2013/055987、WO 2016/044560、WO 2016/044396、WO2015/159076、WO2015/095227、WO2015/095124、WO2015/052535、WO2015/052534、WO2015/052322、WO2014/174111、WO2014/096368、WO2014/057122、WO2014/057074、WO2014/022679、WO2014/011519、WO2014/011518、WO2013/177481、WO2013/055987、WO2011/130598、及WO2011/128650可使用。這些專利公開之各者在本文中係以引用方式全部併入。
一般程序A：蛋白質(抗體 )的部分選擇性還原
與聚合物-藥物共軛物進行共軛之前，有關抗體中的鏈間雙硫基團(disulfide group)或未配對雙硫物(unpaired disulfide)之部分選擇性還原係藉由使用還原劑來達成，諸如例如TCEP、DTT或β-巰乙醇。在還原劑過量的情況下進行還原時，在與SEC共軛之前便先移除還原劑。抗體的二硫化物基團轉變成反應性巰基之程度，係取決於抗體的化學計量、還原劑、pH值、溫度及/或反應持續的時間。當抗體中部分但非全部的二硫化物基團被還原時，該還原的抗體即部分還原的抗體。
一般步驟B：部分還原的抗體與聚合物藥物共軛物之共軛
部分還原的抗體與聚合物-藥物共軛物的共 軛，係於中性或弱鹼性(pH 6.5-8.5)條件下進行，且抗體濃度為1-10mg/mL而聚合物-藥物共軛物的濃度為0.5-10mg/mL。聚合物-藥物共軛物通常比期望的蛋白質-聚合物-藥物共軛物的化學計量多出1-5.0倍。當抗體共軛至聚合物-藥物共軛物的馬來醯亞胺基團，可選擇性地經由加入水溶性馬來醯亞胺而阻斷化合物以終止共軛，例如，N-乙醯半胱胺酸、半胱胺酸甲酯、N-甲基半胱胺酸、2-巰基乙醇、3-巰基丙酸、2-巰基乙酸、2-巰基甲醇(即，HOCH2SH)、芐基硫醇和類似物。
所得到的抗體-聚合物-藥物共軛物通常經由滲濾的方式純化，以除去任何未共軛的聚合物-藥物共軛物、未共軛的藥物和小分子雜質。或者或更甚者，使用適當的色譜分離方法，如，例如，粒徑排阻層析法、疏水作用下色譜法、離子色譜法等，例如，WCX色譜、反相色譜、羥基磷灰石層析、親和性層析或使用上述方法的組合，以用於純化抗體-聚合物-藥物共軛物。所得的純化抗體-聚合物-藥物共軛物通常係製配於pH 5.0-6.5的緩衝液中。
其他抗體-藥物共軛物係以類似於本文中所描述之方法的方法合成，包括其他抗體及/或抗體片段。此外，改變抗體的巰基和藥物載量，可獲得藥物與抗體之比例不同的抗體-藥物共軛物。
經由如上所述之方法來設計、選擇及/或優化之化合物和共軛物，一旦生成後，可以使用各種該領域之 習知技藝者所知道的方法來加以辨別，以確定該化合物或共軛物是否具有生物活性。例如，該化合物或共軛物可經由常規的測定法來描繪其特性，包括但不限於以下所描述的測定法，以確定它們是否具有一個預測的活性、結合活性及/或結合特異性。
此外，可以使用高處理量的篩選，來加速採用這些測定法的分析。因此，可以使用本領域中已知的技術，迅速地篩選本文所述的共軛物分子之活性。例如，用於進行高處理量之篩選的一般方法，係描述於Devlin(1998)High Throughput Screening,Marcel Dekke和美國專利5763263號。高處理量之測定法可以使用一種或多種不同的分析技術，包括但不限於以下所描述的那些技術。
在某些實施態樣中，本文所揭示的化合物和共軛物的活性可經由以下方式來描繪其特徵：進行體外研究(例如，DNA結合分析法或CellTiter-發光法細胞活性檢測(CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay)或進行體內研究(例如，在小鼠進行的腫瘤異種移植物研究)。可使用如Rahman,K.M.,et al.,Journal of the American Chemical Society 2009,131,13756-12766及Narayanaswamy,M.,et al.,Analytical Biochemistry 2008,374,173-181所描述之離子對-逆相層析分離法(ion-pair reversed phase chromatography)來測量本揭露的化合物與DNA結合的能力，尤其是與寡核苷酸結合的能力。可以使用小牛胸腺DNA熱變性分析法，來評估DNA結合親和力， 如Wells,G.,et al.,Journal of Medicinal Chemistry 2006,49,5442-5461；Jenkins,T.C.,et al.,Journal of Medicinal Chemistry 1994,37,4529-4537；及Gregson,S.J.,et al.,Journal of Medicinal Chemistry 2001,44,737-748所描述。抗體-藥物共軛物於體外的效力，可以經由細胞增生分析來測量。CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay(Promega Corp.,Madison,Wis.)係市售的均相分析法，係根據鞘翅目螢光素酶(Coleoptera luciferase)的重組表現來進行分析(U.S.Pat.Nos.5,583,024；5,674,713及5,700,670)。
腫瘤生長抑制(%TGI)的定義為，在治療組和對照組之間的腫瘤體積之中位數(MTVs)的百分比差異。治療效果可從研究期間觀察到的腫瘤尺寸消退反應的發生率及規模來確定。治療可能會導致動物體內的腫瘤部分消退(PR)或完全消退(CR)。
尚包含在內係為如本文中揭示的一種或多種化合物及/或共軛物的藥物組成物之一種可接受的載劑，如穩定劑、緩衝液，及諸如此類。共軛物可以在有或沒有穩定劑、緩衝劑和類似物的條件下，經由標準方法投服並導入至一位個體，以形成藥物組成物。投服方式可以是局部(包括眼睛和黏膜，包括陰道和直腸投藥)，肺部，例如透過吸入或吹入粉末或氣溶膠，包括經由噴霧器、氣管內、鼻內、表皮和經皮、口服或腸胃外投服，包括靜脈內、動脈內、皮下、腹膜內或肌肉注射或輸液或顱內，例 如鞘內或腦室內投服。共軛物可以被配製並用作無菌溶液及/或可用於注射投服的懸浮液、用於注射前/輸液前重組的冷凍乾燥粉、局部用組成物；如口服投服的片劑、膠囊劑，或酏劑；或用於直腸投服的栓劑，以及本領域中已知的其他組成物。
醫藥組成物或製劑係指一種處於適合投服之形式的組成物或製劑，例如，全身性投服至細胞或個體，包括例如人類。合適的形式部分取決於用途或進入的途徑，例如口服、吸入、經皮或經由注射/輸液。這些形式不應阻止組成物或製劑到達目標細胞(即，藥物欲遞送的理想細胞)。例如，注射到血流中的醫藥組成物應該是可溶的。其他因素係本領域中已知的，包括如毒性等的考量，以及防止該組成物或製劑發揮其作用的形式。
“全身投服”係指在體內全身性吸收，或是經過修改的聚合物累積於血流之中，再分佈到整個身體中。導致全身性吸收的投服途徑包括但不限於：靜脈內、皮下、腹膜內、吸入、口服、肺內和肌肉內。這些投服途徑的每一種均會讓化合物或共軛物暴露至可接觸到的患病組織。活性劑進入循環的速率已證實為分子量或大小的函數。使用本揭露的共軛物可以將藥物遞送目標瞄準某些細胞，例如透過抗體的特異性而瞄準腫瘤細胞。
“醫藥上可接受的製劑”係指一種組成物或製劑，其允許共軛物有效地分佈至最適合它們發揮期望活性之生理位置。在一個實施態樣中，在網狀內皮系統清除或 與非目標物結合，而造成功效降低或造成毒性之前，有效的遞送藥物。適用於所述共軛物的製劑之非限制性的實例包括：P-糖蛋白抑制劑(例如Pluronic P85)，其可以增強活性劑進入中樞神經系統的量；生物可降解之聚合物，例如聚(DL-乳酸交酯-共乙交酯)微球體，植入腦內後可以持續釋放投遞的藥；以及載藥的奈米顆粒，例如由聚氰基丙烯酸正丁酯(polybutylcyanoacrylate)，可跨越血腦屏障投遞活性劑並可改變神經元的攝取機制。
本文還包括製備用於儲存或投服的藥物組成物，其包括在醫藥上可接受之載劑或稀釋劑中含有有效量的所欲之化合物及/或共軛物。可接受的載劑、稀釋劑及/或用於治療用途的賦形劑係製藥領域中所知的。例如，可以提供緩衝劑、防腐劑、填充劑、分散劑、穩定劑、染料。此外，可以使用抗氧化劑和懸浮劑。合適的載劑、稀釋劑及/或賦形劑的實例包括，但不限於：(1)Dulbecco氏磷酸鹽緩衝生理鹽水，pH值約6.5，這將含有約1mg/ml至25mg/mL的人血清白蛋白，(2)0.9%生理食鹽水(0.9%w/v的氯化鈉)及(3)5%(w/v)的葡萄糖。
如本文所使用的“有效量”一詞，係指治療、改善或阻止一種所識別的疾病或病症，或表現出可檢測的治療或抑制效果之藥劑的量。該效果可以經由本領域中已知的任何一種分析法或方法來檢測。針對個體之精準的有效量，將取決於個體的體重、體型大小和健康狀況；病症的性質和程度；和選擇用於投服之治療或治療的組合。針 對一給定情況的有效量可經由常規實驗來確定，此為臨床醫生的技能和判斷範圍內。在一個較佳的態樣中，該疾病或病症可以透過基因靜默來治療。
對於任何化合物或共軛物，一開始可以利用細胞培養分析來預估有效量，例如，腫瘤細胞，或在動物模型中，通常是大鼠、小鼠、兔、狗或豬。動物模型還可以用來確定適當的濃度範圍及投服途徑。然後，這些資訊可以用於確定人類投服時的有用劑量和投服途徑。治療/預防效果和毒性可以經由在細胞培養或實驗動物中的標準藥學程序來確定，例如，ED50(對於50%的群體產生治療效果的劑量)和LD50(造成50%的群體死亡的劑量)。產生毒性和產生療效的劑量之比率係治療指數，可以LD50/ED50的比率來表示。治療指數大的藥物組成物係較佳的。根據所採用的劑型、患者的敏感性和投服途徑，劑量會在此範圍內變化。
例如，藥物或其衍生物，藥物-聚合物共軛物或ADCs(包括抗體-藥物-聚合物共軛物和抗體-藥物共軛物)可以使用CellTiterGlo®來評估其在幾種細胞株中抑制腫瘤生長的能力。可以使用SoftMax Pro軟體來產生劑量反應曲線，也可以從四參數曲線擬合來確定IC50的值。所使用的細胞株可包括那些抗體的目標細胞，而對照組的細胞株則非測試的共軛物中所含抗體的目標細胞株。
在一個實施態樣中，本揭露的PBD化合物及/或共軛物經配製以經由注射的方式進行腸胃外投服，包括 使用常規的導管插入技術或輸液。用於注射的製劑可以單位劑量的形式呈現，例如，在安瓿中或在多重劑量的容器中，含有加入的防腐劑。化合物及/或共軛物可以在無菌介質中，以胃腸外的方式投服。取決於所使用的媒劑和濃度，化合物及/或共軛物可以懸浮或溶解在媒劑中。有利的是，佐劑，如局部麻醉劑、防腐劑和緩衝劑可以溶解在賦形劑中。如本文所使用的術語“腸胃外”一詞，包括經皮、皮下、血管內(例如，靜脈內)、肌肉內或鞘內注射或輸液技術等。一種或多種化合物及/或共軛物可存在於與一種或多種無毒的醫藥上可接受的載劑及/或稀釋劑及/或佐劑有關，以及如果需要的話，可使用其他活性成分。
無菌的可注射製劑也可以是一種無菌的可注射之溶液或懸浮液，存在於一種無毒的腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中，例如作為存在於1,3-丁二醇中的溶液。在可接受的媒劑和溶劑中，可採用的係水、林格氏溶液和等滲透壓的氯化鈉溶液。此外，無菌、不揮發性油通常會用作溶劑或懸浮介質。為了這個目的，可以使用的溫和的不揮發性油，包括合成的單或雙甘油酯。此外，脂肪酸如油酸也可用於注射劑的製備中。
本文中所描述之PBD化合物、共軛物和組成物可以適當的形式投服，較佳為腸胃外投服，更佳為靜脈內投服。針對腸胃外投服，化合物、共軛物或組成物可以是水性或非水性的無菌溶液、混懸劑或乳劑。丙二醇、植物油和可注射的有機酯，如油酸乙酯，可被用作溶劑或媒 劑。組成物還可以含有佐劑、乳化劑或分散劑。
針對本文所揭示的PBD化合物，適當的劑量將取決於多項因素，諸如，例如，欲治療之疾病的類型、疾病的嚴重性和病程、該化合物是否用於預防或治療目的、先前接受的治療、患者的臨床病史。根據疾病的類型和嚴重性，約100ng至約25mg的化合物(例如，約1μg/kg至15mg/kg，約0.1-20mg/kg)係給予患者的初始候選劑量，無論是經由一次或多次分別投服，或是經由連續的輸液投服。典型的每日劑量之範圍可以為約1μg/kg至100mg/kg或更多，取決於上述因素。要投服給患者的化合物之示例性劑量係在約0.1至約10mg/kg患者體重的範圍內。針對持續數天或更長時間的重複投服，根據狀況，持續治療直至疾病症狀發生所欲的抑制效果。一個示例性的投藥方案包括投服約4mg/kg的初始載入劑量的過程中，之後每週、兩週或三週給予額外劑量的化合物。其他劑量方案可能是有用的。此療法的進展可輕易地經由常規技術和分析法來監測。本文所揭示的範圍係表示為依據個體體重之投服量，以及本領域技術人員可以容易地將其表示為個體的每個體表面積之投服量。例如，成年人1mg/kg體重的劑量等效於約37mg/m2，且人類兒童1mg/kg體重的劑量等效於約25mg/m2。
針對本文所揭示的PBD結合物，約每天0.01mg至約200mg每公斤體重之間的劑量，對於目標病症的治療是有用的(介於每位個體每天約0.05mg至約7g之間)。在一 些實施態樣中，投服給患者的劑量係介於約0.01mg/kg至100mg/kg個體體重之間。在一些實施態樣中，投服給患者的劑量係介於約0.01mg/kg至15mg/kg個體體重之間。在一些實施態樣中，投服給患者的劑量係介於約0.1mg/kg至15mg/kg個體體重之間。在一些實施態樣中，投服給患者的劑量係介於約0.1mg/kg至20mg/kg個體體重之間。在一些實施態樣中，投服給患者的劑量係介於約0.1mg/kg至5mg/kg個體體重之間，或約0.1mg/kg至10mg/kg個體體重之間。在一些實施態樣中，投服給患者的劑量係介於約1mg/kg至15mg/kg個體體重之間。在一些實施態樣中，投服給患者的劑量係介於約1mg/kg至10mg/kg個體體重之間。
可與載劑材料組合以產生單一劑量形式的化合物或共軛物的量，取決於所治療的患者和特定的投服模式。劑量單位形式通常可從約0.01mg至約200mg之間；0.01mg至約150mg之間；0.01mg至約100mg之間；約0.01mg至約75mg之間；或約0.01mg至約50mg之間；或約0.01mg至約25mg之間的結合物。例如，本揭露的PBD化合物或共軛物可以約100mg每日3次，或約150mg每日2次，或約200mg每日2次，或約50-70mg每日3-4次，或約100-125mg每日2次的劑量投服給有需要的個體(例如，人類患者)。
在一些實施態樣中，可以如下的方式投服共軛物。可以每天以靜脈注射給予共軛物約5天、每天靜脈 推注共軛物約5天，或連續輸液共軛物約5天的時間。
或者，可以每週一次投服共軛物持續六週或更長的時間。作為另一種替代方案，可以每二週或每三週投服共軛物。可利用約50至約400ml的生理鹽水進行靜脈推注，其中可加入約5至約10ml的人類血清白蛋白。連續輸液係為約250至約500ml的一般生理食鹽水，其中可以每24小時加入約25至約50ml的人類血清白蛋白。
在一些實施態樣中，在治療後約一週或約四週，患者可以接受第二次治療的療程。關於投服途徑、賦形劑、稀釋劑、劑量的的具體臨床方案和投服時間，可以由本領域技術人員根據臨床情況需要來確定。
應當理解的是，用於特定個體的特定劑量係取決於多種因素，包括特定的化合物或共軛物、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、投服的時間、投服的途徑、排泄速率，以及與其他活性劑的組合，和正在接受治療之特定疾病的嚴重程度。
投服於非人類的動物時，該化合物或共軛物還可以添加到動物飼料或飲用水中。配製動物飼料和飲用水，使動物可以隨著飲食攝入治療上合適的化合物或共軛物的量，是方便的方法。亦便利的是將化合物或共軛物當作添加到飼料或飲用水的預混物。
在此所揭示的PBD化合物和本文共軛物也可以與其他治療化合物一起投服給個體，以增加整體的治療效果。使用多種化合物來治療適應症，可以增加有益的效 果，同時降低副作用的發生。在一些實施態樣中，該等化合物或共軛體係與化學治療劑組合使用，諸如U.S.Patent No.美國專利第7,303,749號、U.S.2016/0031887及U.S.2015/0133435中所揭示者，彼等各者係以引用方式全部併入本文中。在其他實施態樣中，該化學治療劑包括但不限於利妥唑(letrozole)、益樂鉑(oxaliplatin)、歐洲紫杉醇(docetaxel)、5-FU、拉帕替尼(lapatinib)、截瘤達(capecitabine)、菊白葉酸(leucovorin)、得舒緩(erlotinib)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、貝伐單抗(bevacizumab)、及吉西他濱(gemcitabine)。
本揭露也提供了一種或多種包含一種或多種填充了本揭露之化合物、共軛物及/或組成物的容器，包含一種或多種化療藥物的試劑盒。這樣的試劑盒也可以包括，例如，其他化合物及/或組成物、用於投服該化合物及/或組成物的裝置，以及依照管理藥物製造、藥物使用或銷售或生物製品之政府機構所規定的形式所寫成的書面說明書。
在另一個態樣中，本揭露的PBD化合物和共軛物係用於治療動物的方法中(較佳為哺乳動物，最佳為人類，包括男性、女性、嬰兒、兒童和成人)。
本揭露的共軛物可用於在標靶位置處提供PBD共軛物。
標靶位置較佳為增生性細胞群。該抗體係一種針對存在於增殖細胞群中的抗原之抗體。
在一個實施態樣中，相較於抗原存在於增殖細胞群中的量，例如腫瘤細胞群，抗原在非增殖細胞群中是不存在的或其量是減少的。
標靶位置可以在體外、體內或離體。
本揭露的抗體-藥物共軛物(ADC)包括那些具有抗癌活性的實用性。尤其是，該ADC包括共軛的抗體，即，經由連接子共價連接至一個PBD部分。
在標靶位置時，連接子可以不被切斷。本揭露的ADC可以在尚未切斷連接子而釋放PBD藥物部分的情況下，即具有細胞毒性。本揭露的ADC選擇性地遞送細胞毒性劑至腫瘤組織，因此具有更大的選擇性，也就是，只需較低的有效劑量便可達到效果。
在進一步的態樣中，如本文所述的共軛物係用於增生性疾病的治療。本揭露的第二個態樣提供了一種用於治療增生性疾病脂藥物的製造過程中使用的共軛化合物之用途。
本領域的普通技術人員能夠容易地確定候選的結合物是否能治療任何特定細胞類型的增生性疾病。例如，可方便地用於評估特定化合物所提供的活性之分析法，在以下的實施態樣中描述。
“增生性疾病”一詞係指不受歡迎的過度或異常細胞發生不需要的或失控的細胞增生，例如，腫瘤或增生性生長，無論是在體外或體內。
增生性疾病的實例包括，但不限於，良性、 潛在惡性和惡性細胞增生，包括但不限於贅生物和腫瘤(例如組織細胞瘤、神經膠質瘤、星狀細胞瘤、骨瘤)、癌症(例如肺癌、小細胞肺癌、胃腸道癌症、小腸癌、結腸癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、肝癌、腎癌、膀胱癌、胰臟癌、腦瘤、肉瘤、骨肉瘤、卡波西氏肉瘤、黑色素瘤)、白血病、銀屑病、骨骼疾病、纖維增生性障礙(例如結締組織)，和動脈粥樣硬化。特別值得關注的癌症包括，但不限於，白血病和卵巢癌。
任何類型的細胞都可以接受處理，包括但不限於，肺、胃腸(包括例如小腸、結腸)、乳腺(乳房)、卵巢、前列腺、肝臟(肝)、腎臟(腎)、膀胱、胰臟、腦和皮膚。
在一個實施態樣中，欲治療的是胰臟癌。
在一個實施態樣中，欲治療是細胞表面有αvβ6整合蛋白(integrin)的腫瘤。
所涵蓋的是，本揭露的ADC可以被用於治療各種疾病或病症，例如特徵為腫瘤抗原過度表現的疾病或病症。示例性的疾病或過度增生性疾病包括良性或惡性腫瘤；白血病、血液和淋巴惡性腫瘤。其他包括神經元、神經膠質、星狀膠質細胞、下丘腦、腺體、巨噬細胞、上皮、基質、囊胚腔、發炎性、血管發生性和免疫性，包括自體免疫疾病。
一般來說，欲治療的疾病或病症為過度增生性疾病如癌症。本文中欲治療的癌症的實例包括，但不限 於癌症、淋巴瘤、胚細胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴惡性腫瘤。此類癌症更具體的實例包括鱗狀細胞癌(例如上皮鱗狀細胞癌)、肺癌、包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌和肺上皮細胞癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌，包括胃腸癌、胰臟癌、膠質母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞瘤、乳腺癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜或子宮癌、唾腺癌、腎癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝腫瘤、肛門癌、陰莖癌，以及頭頸癌。
可以在治療中使用ADC化合物的自體免疫疾病包括風濕性疾病(如，例如，類風濕性關節炎、斯耶格倫氏症候群、硬皮病、狼瘡諸如SLE和狼瘡腎炎、多肌炎/皮肌炎、冷凝球蛋白血症、抗磷脂抗體症候群和銀屑病關節炎)、骨關節炎、自體免疫性胃腸和肝臟疾病(諸如，例如，發炎性腸道疾病(例如潰瘍性結腸炎和克羅恩氏病)、自體免疫性胃炎和惡性貧血、自體免疫性肝炎、原發性膽汁性肝硬化、原發性硬化性膽管炎和乳糜瀉病)、血管炎(諸如，例如，ANCA相關血管炎，包括丘-施二氏血管炎、韋格納肉芽腫病和多發性動脈炎)、自體免疫性神經病學病症(諸如，例如，多發性硬化症、眼陣攣-肌陣攣症候群、重症肌無力、視神經脊髓炎、帕金森氏病、阿茲海默症和自體免疫性多神經病)、腎病症(諸如，例如，腎小球腎炎、帕斯捷氏症候群，和貝格爾氏病)、自體免疫性皮膚病(諸如，例如，銀屑病、蕁麻疹、麻疹、尋常型天 皰瘡、大皰性類天皰瘡和皮膚紅斑性狼瘡)、血液疾病(諸如，例如，血小板過低紫斑症、血栓性血小板過低紫斑症、輸血後紫斑症，和自體免疫性溶血性貧血)、動脈粥樣硬化、葡萄膜炎、自體免疫性聽覺疾病(諸如，例如，內耳病和聽力損失)、貝切特氏病、雷諾氏症候群、器官移植和自體免疫性內分泌病症(諸如，例如，糖尿病相關的自體免疫病諸如胰島素依賴性糖尿病(IDDM)、阿狄森氏病和自體免疫性甲狀腺疾病(例如格雷夫斯氏病和甲狀腺炎))。此類疾病更佳者包括如類風濕性關節炎、潰瘍性結腸炎、ANCA相關血管炎、狼瘡、多發性硬化症、斯耶格倫氏症候群、格雷夫斯氏病、IDDM、惡性貧血、甲狀腺炎和腎小球腎炎。
如在本文中所使用的“治療”一詞，通常涉及治療和療法，無論其對象是人或動物(例如在獸醫應用中)，其中一些所需的治療效果，例如，抑制疾病的進程，並且包括減緩病程發展的速度、停止惡化的速度、病症的消退、病症的改善和治癒。作為預防措施(即，預防、防止)也包括在內。
有此需要的個體/患者可以為動物、哺乳動物、有胎盤的哺乳動物、有袋動物(例如袋鼠、袋熊)、單孔類動物(例如鴨嘴獸)、囓齒動物(例如，豚鼠、倉鼠、大鼠、小鼠)、鼠科動物(例如，小鼠)、兔科動物(例如，兔)、禽類(例如鳥)、犬科動物(例如，狗)、貓科動物(例如貓)、馬科動物(例如馬)、豬科動物(例如豬)、羊科動物 (例如綿羊)、牛科動物(例如母牛)、靈長類動物、猿猴(例如，猴或猿)、猴(例如狨猴、狒狒)、猿(例如大猩猩、黑猩猩、猩猩、長臂猿)或人類。
此外，個體/患者可以是處於任何發育形式，例如胎兒。在一個較佳的實施態樣中，個體/患者係人類。
在一個實施態樣中，該患者係一個群體，其中每位患者都有細胞表面上有αvβ6整合蛋白細胞的腫瘤。
在某些實施態樣中，在實施本揭露的方法時，共軛物還進一步包含診斷標記或與診斷標記有關。在某些示例性的實施態樣中，該診斷標記係選自於由以下各項所組成的組中：用於γ閃爍掃描和PET的放射性藥物或放射性同位素、用於磁共振成像(MRI)的顯影劑、用於電腦斷層掃描的顯影劑、用於X光成像的顯影劑、用於超音波診斷法的藥劑、用於中子活化的藥劑、可以反射、散射或影響X光的部分、超音波、無線電波和微波和螢光物質。在某些示例性實施態樣中，該共軛物係進一步於體內監控。
診斷標記物的實例包括，但不限於用於γ閃爍掃描和PET的診斷用放射性藥物或放射性同位素、用於磁共振成像(MRI)的顯影劑(例如順磁原子和超順磁性奈米晶體)、電腦斷層掃描使用的顯影劑、用於X光成像法的顯影劑、超音波診斷法所使用的藥劑、中子活化的藥劑，和 可以反射、散射或影響X光的部分、超音波、無線電波和微波、各種光學檢查程序所使用的螢光物質等。診斷用的放射性藥物包括竚-發射放射性核素，例如，銦-111、鎝-99m及碘-131等。用於MRI的顯影劑(磁共振成像)包括磁性化合物，例如，順磁性離子、鐵、錳、釓、鑭系元素，有機順磁性部分及超順磁性、鐵磁性和反鐵雌性化合物，例如，氧化鐵膠體、鐵氧體膠體等。用於電腦斷層掃描和其他X光成像方法的顯影劑包括可吸收X光的化合物，例如，碘、鋇等，用於超音波檢查法的顯影劑包括可吸收、反射和散射超音波的化合物，例如乳劑、晶體、氣泡等。其他實例包括用於中子活化的物質，例如硼和釓。此外，也可以採用可反射、折射、散射或以其他方式影響X光、超音波、無線電波和微波和診斷過程中所使用的其他射線之標記。螢光標記可用於光成像。在某些實施態樣中，改良劑包括順磁性離子或基團。
在本文中所引用之所有公開發表及專利文件係以引用方式併入本文中，如同各公開發表及文件係特定及個別指示以引用方式併入本文中。公開發表及專利文件之引用並非意欲為承認任何相關的現有技術，也不構成對其內容或日期的任何承認。本發明已藉由書面說明來描述，熟悉本技術領域者將理解本發明可以各種實施態樣來實施且前述說明及下文實施例係為說明目的而非限制後附之申請專利範圍。
實施例
下列操作實施例係例示性連接子、藥物分子及抗體或抗體片段、及用於製備彼等之方法。這些並非意欲限制且所屬技術領域中具有通常知識者即可理解其他試劑或方法可予利用。
縮寫
下列縮寫係用於之後的反應流程及合成實施例。此列表並非用意係作為使用於本案的縮寫之全部清單，因為有機合成技術領域中具有通常知識者即可理解的另外標準縮寫亦可用於該等合成流程及實施例。
縮寫：
一般資訊
4-((三級丁氧基羰基)胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸係購自Oakwood Chemical,Estill,SC。
4-((三級丁氧基羰基)胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酸係購自Chem-Impex International,Inc.,Wood Dale,IL。
腫瘤生長抑制(%TGI)係定義為經治療組及對照組之間中位數腫瘤體積(MTV)百分比差異。
治療療效係自研究期間所觀察的腫瘤尺寸消退反應之發生率及量來判定。治療可造成動物的腫瘤部分消退(PR)或完全消退(CR)。在PR反應中，在研究排程期間三次連續測定，腫瘤體積係其第1日的50%或更低，且在這三次測定中的一或更多次腫瘤體積係等於或大於13.5mm3。在CR反應中，在研究排程期間三次連續測定，腫瘤 體積係小於13.5mm3。在研究終止時具有CR反應的動物係另分類為無腫瘤之存活者(TFS)。動物係予以監測消退反應。
HPLC純化係在Phenomenex Gemini 5μm 110Å、250 x 10mm、5微米的半製備管柱上進行。
無論何時，共軛物的藥物含量係光譜性判定，抑或係進行LC/MS或1H-NMR以定量判定藥物含量。
該蛋白質-聚合物-藥物共軛物的蛋白質含量係在280nm光譜性判定或藉由ELISA判定。
本文中所述之藥物-聚合物-抗體共軛物、藥物-聚合物共軛物、攜帶藥物聚合物支架、或攜帶抗體聚合物支架各通常具有1.5、例如<1.2的多分散性指數(PDI)。
抗體-聚合物-藥物共軛物、攜帶藥物聚合物支架、或攜帶抗體聚合物支架可藉由廣泛透濾(extensive diafiltration)來純化(即移除殘餘的未反應藥物、抗體、或聚合物起始材料)。若有必要，可進行藉由粒徑篩析層析術的額外純化以移除任何聚集的抗體-聚合物-藥物共軛物。一般而言，純化的抗體-聚合物-藥物共軛物作為純化通常藉由SEC判定含有少於5%(例如<2% w/w)聚集之抗體-聚合物-藥物共軛物；藉由RP-HPLC判定少於0.5%(例如<0.1% w/w)游離(未共軛之)藥物；藉由SEC判定少於1%聚合物-藥物共軛物及藉由HIC-HPLC判定少於2%(例如<1% w/w)未共軛之抗體或抗體片段。
實施例1 合成(S,Z)-N-(5-((5-(5-胺基-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-(4-((7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基)氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(8)
A部分：
將在ACN(5mL)中的(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)碳酸烯丙酯之溶液加至在ACN(10mL)及水(15mL)混合物中的1H-吲哚-5-胺及NaHCO3之冰冷混合物。將獲得的混合物在室溫下攪拌過夜、藉由旋轉蒸發來濃縮、並接著加入EtOAc(60mL)，將有機層以鹽水洗滌、以MgSO4 乾燥並藉由旋轉蒸發來濃縮，接著在矽凝胺(0-80% Hex：EtOAc)上純化，以提供1H-吲哚-5-基胺甲酸烯丙酯(2)。(1.54g,7.12mmol,94%產率)。ESI MS：C18H19ClN4O3(M+H)217.2；結果值217.1。
B部分：
將1,1'-二(1H-咪唑-1-基)甲酮(675mg,4.16mmol)加到在THF(6mL)中的4-((三級丁氧基羰基)胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸(833mg,3.47mmol)。將該混合物在室溫下攪拌18h且將殘餘的CO2副產物藉由旋轉蒸發來移除。將該殘留物溶於THF(6mL)中，並接著將化合物2(750mg,3.47mmol)加入，接著加入DBU(256μL,1.73mmol)。將該混合物於~50℃下攪拌18h。藉由旋轉蒸發將溶劑移除，將殘留物溶於EtOAc(60mL)，並接著接連以飽和NaHCO3(20mL)、水(20mL)、及NH4Cl(20mL)洗滌。將有機層以MgSO4乾燥，並且濃縮，接著在ISCO管柱上(0-60% EtOAc/己烷)純化以產出烯丙基1-(1-甲基-4-三甲基乙醯基醯胺基-1H-吡咯-2-羰基)-1H-吲哚-5-基胺甲酸酯(3)(0.87g,1.984mmol,57.2%產率)。1H NMR(CD3OD)：δ 8.15(1 H,d,J=9.1Hz),7.78(1 H,s),7.75(1 H,d,J=4.2Hz),7.28(1 H,D,J=8.9Hz),7.16(1 H,s),6.61(1 H,s),6.60(1 H,s),6.09-5.96(1 H,m),5.44-5.34(1 H,m),5.29-5.20(1 H,m)；4.66(2 H,d,J=5.7Hz),3.90(3 H,s)。ESI MS：C23H26N4O5(M+H)439.2；結果值439.1。
C部分：
將化合物3(360mg,0.821mmol)溶於二(5mL)並在氮下冷卻至0℃，接著加入在二中的HCl(5mL,32mmol)。使獲得的混合物緩慢回溫至室溫歷經~1h，接著藉由旋轉蒸發來濃縮以產出烯丙基(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡咯-2-羰基)-1H-吲哚-基)胺甲酸酯鹽酸鹽(4)(308mg,0.82mmol,100%產率)。ESI MS：C18H19ClN4O3(M+H)339.1；結果值339.2。
D部分：
在N2下，將DIEA(0.17mL,0.96mmol)加到在DCM(5mL)中的4-(4-((三級丁氧基羰基)胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸(174mg,0.48mmol，製自4-胺基-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸甲酯及4-(三級丁氧基羰基胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酸)、化合物4(180mg,0.48mmol)、N,N-二甲基吡啶-4-胺(106mg,0.864mmol)及EDAC(184mg,0.96mmol)之溶液。將獲得之溶液在室溫下攪拌18h。LC-MS顯示反應完全。將該混合物以DCM稀釋，以水及鹽水洗滌。將有機層以Na2SO4乾燥並濃縮。將殘留物在ISCO管柱(0-80% EtOAc/己烷)上純化以給出烯丙基1-(1-甲基-4-(1-甲基-4-(1-甲基-4-三甲基乙醯基醯胺基-1H-咪唑-2-甲醯胺基)-1H-吡咯-2-甲醯胺基)-1H-吡咯-2-羰基)-1H-吲哚-5-基胺甲酸酯(5)(220mg,0.32 mmol,67%產率)。ESI MS：C34H37N9O7(M+H)684.3；結果值684.2。
E部分：
在氮下於0℃下，將在二中的HCl(2mL,8mmol)加到溶於二(2mL)中的化合物5(220mg,0.322mmol)。使獲得的混合物緩慢回溫至室溫歷經~1h，接著藉由旋轉蒸發來濃縮以產出烯丙基(1-(4-(4-(4-胺基-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羰基)-1H-吲哚-5-基)胺甲酸酯鹽酸鹽(6)(200mg,0.322mmol,100%產率)。ESI MS：C29H30ClN9O5(M+H)584.2；結果值584.2。
F部分：
在N2下，將DIEA(0.085mL,0.484mmol)加到在DCM(3mL)中的4-((11aS)-10-(烯丙氧羰基)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-11-(四氫-2H-哌喃-2-基氧基)-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁酸(藉由US20150133435(A1)中所述之程序的修改版而製備)(86mg,0.16mmol)、化合物6(100mg,0.161mmol)、N,N-二甲基吡啶-4-胺(49.3mg,0.403mmol)及EDAC(61.8mg,0.323mmol)之溶液。將獲得之溶液在室溫下攪拌18h。LC-MS顯示反應完全。將該溶液以DCM稀釋、藉由水及鹽水來洗滌。將有機層以Na2SO4乾燥並濃 縮。將殘留物在ISCO管柱(0-20% MeOH/DCM)上純化以產出(11aS)-烯丙基-8-(4-((2-((5-((5-(5-(((烯丙基氧基)羰基)胺基)-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)胺甲醯基)-1-甲基-1H-咪唑-4-基)胺基)-4-側氧基丁氧基)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-11-((四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-10(5H)-甲酸酯(7)(100mg,0.09mmol,57%產率)。ESI MS：C56H61N11O13(M+H)1096.4；結果值1096.0。
G部分：
將三苯膦(5.98mg,0.023mmol)及吡咯啶(9.43μl,0.114mmol)加到在DCM(3mL)中的化合物7(100mg,0.091mmol)之溶液，在室溫下攪拌10min，再加肆(三苯膦)鈀(0)(5.27mg,4.56μmol)。將獲得之混合物在室溫下攪拌2h。LC-MS顯示反應完全。將溶劑藉由旋轉蒸發而移除，並將殘留物在ISCO管柱(0-20% MeOH/DCM)上純化以產出(S,Z)-N-(5-((5-(5-胺基-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-(4-((7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基)氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(8)(39mg,0.047mmol,51.8%產率)。ESI MS：C43H43N11O7(M+H)825.3；結果值826.2。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 2.16(2H,bs),2.65(2H,d),3.48(3H,s), 3.67(6H,bs),3.90(8H,m),5.03(1H,s),5.29(1H,s),6.42(1H,d),6.82(4H,m),7.29(2H,m),7.62(3H,m),8.13(1H,d),8.54(1H,s)。
實施例2 合成(S,Z)-N-(5-(5-胺基-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-(4-((7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基)氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(12)
A部分：
將N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(69mg,0.53mmol)加到在DCM(6mL)中的化合物4(如實施例1中所述來製備(100mg,0.267mmol))、4-((三級丁氧基羰基)胺 基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酸(64.4mg,0.267mmol)、EDAC(92mg,0.48mmol及N,N-二甲基吡啶-4-胺(65.2mg,0.53mmol)之溶液。將獲得之溶液在室溫下攪拌18h。LC-MS顯示反應完全。將該反應混合物以DCM稀釋，並以水及鹽水洗滌。將有機層以Na2SO4乾燥並濃縮。將殘留物在ISCO管柱(0-80% EtOAc/己烷)上純化以產出烯丙基(1-(4-(4-((三級丁氧基羰基)胺基)-1-甲基-1H-imidazole-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羰基)-1H-吲哚-5-基)胺甲酸酯(9)(130mg,0.231mmol,87%產率)。ESI MS：C28H31N7O6(M+H)562.2；結果值562.2。
B部分：
在0℃下於氮下，在二中的HCl(2mL,8mmol)加到在二(2mL)中的化合物9(130mg,0.231mmol)之溶液，並將獲得的混合物緩慢回溫至室溫歷經~1h，並接著藉由旋轉蒸發來濃縮以產出烯丙基(1-(4-(4-胺基-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羰基)-1H-吲哚-5-基)胺甲酸酯鹽酸鹽(10)(115mg,0.231mmol,100%產率)。ESI MS：C23H24ClN7O4(M+H)462.2；結果值462.1。
C部分：
在氬下，將DIEA(0.079mL,0.452mmol)加到在DCM(3mL)中的4-((11aS)-10-(烯丙氧羰基)-7-甲氧基- 2-亞甲基-5-側氧基-11-(四氫-2H-哌喃-2-基氧基)-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁酸(80mg,0.151mmol)(藉由US2015/0133435中所述之程序的修改版而製備)、化合物10(75mg,0.151mmol)、N,N-二甲基吡啶-4-胺(46.1mg,0.377mmol)及EDAC(57.8mg,0.302mmol)之溶液。將獲得之溶液在室溫下攪拌18h。LC-MS顯示反應完全。將該溶液以DCM稀釋，並以水及鹽水洗滌。將有機層以Na2SO4乾燥並濃縮。將殘留物在ISCO管柱(0-20% MeOH/DCM)上純化以產出(11aS)-烯丙基8-(4-((2-((5-(5-(((烯丙基氧基)羰基)胺基)-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)胺甲醯基)-1-甲基-1H-咪唑-4-基)胺基)-4-側氧基丁氧基)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-11-((四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-10(5H)-甲酸酯(11)(60mg,0.062mmol,40.9%產率)。C50H55N9O12(M+H)974.4；結果值974.2。
D部分：
將三苯膦(4.04mg,0.015mmol)及吡咯啶(6.37μl,0.077mmol)加到在DCM(3mL)中的化合物11(60mg,0.062mmol)之溶液(在室溫下，在氬下)並在室溫下攪拌10min。將肆(三苯膦)鈀(0)(3.56mg,3.08μmol)加至此中，且使該溶液在室溫下攪拌2h。LC-MS顯示反應完全。將溶劑藉由旋轉蒸發而移除，並將殘留物在ISCO管柱(0-20% MeOH/DCM)上純化以產出(S)-N-(5-(5-胺基-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-(4-((7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基)氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(12)(21mg,0.03mmol,48.4%產率)。ESI MS：C37H37N9O6(M+H)704.3；結果值704.1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)62.02(2H,bs),3.01(2H,bs),3.80(3H,s),3.85(4H,bs),3.94(3H,s),4.11(3H,bs),4.94(1H,s),5.12(1H,s),6.50(1H,s),6.73(1H,m),6.81(1H,s),6.88(1H,s),7.31(1H,s),7.45(1H,s),7.60(2H,m),7.74(1H,m),7.90(2H,d),10.11(1H,s),10.26(1H,s)。
實施例3 合成(S,Z)-N-(5-(4-胺基苄基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-(4-(7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(3A)
A部分：
將在二(30mL)中的氯碳酸烯丙酯(0.917mL,8.59mmol)之溶液加到在AcOH(3mL)及水(27mL)中的4-(胺基甲基)苯胺(0.926mL,8.19mmol)(13)之溶液。在加入氯碳酸烯丙酯期間，該混合物之顏色從黃色變成無色。將該混合物在室溫下攪拌16h、經濃縮以產出4-(胺基甲基)苯基胺甲酸烯丙酯(14)(1.6g,7.65mmol,93%產率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 3.90(2H,s),4.6(2H,d),5.21(2H,d),5.24(2H,d),5.95(1H,m),7.44(4H,m),8.49(2H,s),9.85(2H,s)。
B部分：
標題化合物3A係使用在實施例2中所述的化合物4至化合物12的程序從化合物14來製備。ESI MS：C36H39N9O6 694.3；結果值694.2。
實施例4 合成(S,Z)-N-(5-(5-(4-胺基苄基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-(4-(7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(4A)
標題化合物4A係使用在實施例1中所述的化合物2至化合物8的程序從化合物14來製備。ESI MS：C42H45N11O7 816.4；結果值816.2。
實施例5 合成(S,Z)-N-(5-(5-胺基異吲哚啉-2-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-(4-(7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫- 1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(5A)
A部分：
將在二(30mL)中的氯碳酸烯丙酯(0.835mL,7.83mmol)之溶液加到在AcOH(3mL)及水(27mL)中的異吲哚啉-5-胺(15)(1g,7.45mmol)之溶液。在加入氯碳酸烯丙酯期間，該混合物之顏色從棕色變成無色。將該混合物在室溫下攪拌16h、藉由旋轉蒸發經濃縮至乾以給出異吲哚啉-5-基胺甲酸烯丙酯(16)(1.545g,7.08mmol,95%產率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 4.67(4H,m), 5.24(1H,q),5.31(1H,q),5.95(1H,m),6.83(1H,s),7.16(1H,m),7.44(1H,s)。
B部分：
將在ACN(4mL)及DMF(5mL)中的化合物16(300mg,1.375mmol)、4-((三級丁氧基羰基)胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸(330mg,1.375mmol)、DMAP(336mg,2.75mmol)、EDC.HCl(474mg,2.474mmol)及DIEA(0.479mL,2.75mmol)之溶液在室溫下攪拌16h。將該反應混合物以EtOAc(150mL)稀釋，並以飽和NH4Cl(50mL)洗滌。該有機層以飽和NaHCO3及鹽水洗滌、以MgSO4乾燥並經濃縮，以提供暗色油狀物。將該粗產物在ISCO管柱(50-80% EtOAc/己烷)純化以產出烯丙基(2-(4-((三級丁氧基羰基)胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羰基)異吲哚啉-5-基)胺甲酸酯(17)。(350mg,0.795mmol,57.8%產率)。ESI MS：C23H28N4O5(M+H)441.2；結果值441.2。
標題化合物5A係使用在實施例2中所述的化合物3至化合物12的程序從化合物17來製備。ESI MS：C37H39N9O6 706.3；結果值706.2。
實施例6 合成(S,Z)-N-(5-(5-(5-胺基異吲哚啉-2-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-(4-(7-甲氧基- 2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(6A)
標題化合物6A係使用在實施例1中所述的化合物3至化合物8的程序從化合物17來製備。ESI MS：C43H45N11O7 828.4；結果值828.2。
實施例7 合成(S,Z)-N-(5-(5-甲氧基-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-(4-(7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(7A)
A部分：
將1,1'-二(1H-咪唑-1-基)甲酮(607mg,3.75mmol)加到在THF(10mL)中的4-((三級丁氧基羰基)胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸(750mg,3.12mmol)。將該混合物在室溫下攪拌18h且將殘餘的CO2副產物藉由旋轉蒸發來移除。單獨地，在0℃下，將氫化鈉(125mg,3.12mmol)加到在THF(10mL)中的5-甲氧基-1H-吲哚(459mg,3.12mmol)，且將該溶液攪拌10min。將此反應混合物加入至初反應混合物且在50℃下持續攪拌15h。加入EtOAc，且將該混合物依序以水及鹽水洗滌。將有機層以Na2SO4乾燥，並且濃縮，接著在ISCO管柱上(0-50% EtOAc/己烷)純 化以給出三級丁基5-(5-甲氧基-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲酸酯(18)(565mg,1.53mmol,49.0%產率))。ESI MS：C20H23N3O4(M+H)370.2；結果值370.2。
標題化合物7A係使用在實施例1中所述的化合物3至化合物8的程序從化合物18來製備。ESI MS：C44H44N10O8 841.3；結果值841.2。
實施例8 合成(S,Z)-甲基1-(4-(4-(4-(4-(7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羰基)-1H-吲哚-5-甲酸酯(8A)
標題化合物8A係使用在實施例1中所述的程序來製備，惟係使用1H-吲哚-5-甲酸甲酯(547mg,3.12mmol)而非1H-吲哚-5-胺。ESI MS：C45H44N10O9 869.3；結果值869.2。
實施例9 合成(S,Z)-4-(4-(7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-N-(1-甲基-5-(1-甲基-5-(5-(甲硫基)-1H-吲哚-1-羰基)-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1H-吡咯-3-基)-1H-咪唑-2-甲醯胺(19)
該標題化合物係使用在實施例7中所述的程序來製備，惟係使用甲基5-(甲硫基)-1H-吲哚(510mg,3.12mmol)而非5-甲氧基-1H-吲哚。ESI MS：C56H61N11O13 825.3；結果值826.2。
實施例10 合成(S,Z)-4-(4-(7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-[苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-N-(1-甲基-5-(1-甲基-5-(5-(甲磺醯基)-1H-吲哚-1-羰基)-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1H-吡咯-3-基)-1H-咪唑-2-甲醯胺(20)
在-40℃下，將m-CPBA(1.21mg,7μmol)加到在DCM(1mL)中的化合物19(6mg,7.00μmol)之溶液。將獲得之溶液攪拌1h。LC-MS顯示反應完全。將Na2S2O3及NaHCO3加到該反應混合物、以DCM稀釋、以鹽水洗滌，並將有機層乾燥及濃縮。將粗產物在ISCO管柱(0-20% MeOH/DCM)上純化以產出(S)-4-(4-((7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-[苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基)氧基)丁醯胺基)-1-甲基-N-(1-甲基-5-((1-甲基-5-(5-(甲磺醯基)-1H-吲哚-1-羰基)-1H-吡咯-3-基)胺甲醯基)-1H-吡咯-3-基)-1H-咪唑-2-甲醯胺(20)(3mg,3.37μmol,48.2%產率)。ESI MS：C44H44N10O9S(M+H)889.3；結果值889.2。
實施例11 合成(S,Z)-N-(5-(5-(4-胺基-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-(4-(7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(11A)
標題化合物11A係使用在實施例1中所述的程序來製備，惟係使用1H-吲哚-4-胺(1g,7.57mmol)而非1H-吲哚-5-胺。ESI MS：C56H61N11O13 825.3；結果值826.2。
實施例12 合成(S,Z)-N-(5-(5-(6-胺基-1H-吲唑-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-(4-(7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(28)
A部分：
將4-((三級丁氧基羰基)胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸(499mg,2.1mmol)、EDCI.HCl(531mg,2.76mmol)、DMAP(507mg,4.14mmol)、DIEA(482μL,2.76mmol)及DCM(16mL)之混合物在室溫下攪拌15分鐘，接著將3-碘基-6-硝基-1H-吲唑(400mg,1.38mmol)加入並使攪拌持續16h。將該混合物以DCM稀釋，接著以飽和NaHCO3及水洗滌。接著將有機層以Na2SO4乾燥並經濃縮以產出黃色粗產物，其藉由在ISCO管柱(20%EtOAc/己烷)層析來純化，以產出三級丁基5-(3-碘基-6-硝基-1H-吲唑-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲酸酯(21)，為黃色固體(443mg,866μmol,63%產率)。
B部分：
化合物21(443mg,867μmol)、鋅粉(1.7g 26mmol)、EtOH(22mL)及AcOH(5.5mL)之混合物在80℃加熱3.5h。將該反應混合物過濾，且將固體以MeOH淋洗，並將濾液蒸發。將該殘留物於ISCO管柱(5%MeOH/DCM)上層析以給出三級丁基5-(6-胺基-1H-吲唑-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲酸酯(22)，為黃褐色泡沬(147mg,48%產率)。
C部分：
在-40℃下，將在THF(3mL)的氯甲酸烯丙酯(46μL,350μmol)之溶液逐滴加入(歷時5分鐘)在THF(3mL)中的化合物22(147mg,334μmol)及吡啶(42μL,417μmol)之溶液。使該反應混合物回溫至室溫並攪拌過夜，接著以DCM稀釋，並接著以水、5%水性HCl及鹽水洗滌。有機層以Na2SO4乾燥且經蒸發以產出灰白色固體，其不進一步純化而用在下個步驟(部分D)。(141mg,321μmol,78%產率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.25(s,1H),10.03(s,1H),9.15(s,1H),7.72(s,1H),7.68(s,1H),7.40(dd,1H),6.96(d,2H),5.92-6.03(m,1H),5.30(dd,2H),4.63(d,2H),3.79(s,3H),1.45(s,9H)。
D部分：
在室溫下，將4M HCl/二(2mL)加到在二 (2mL)中的化合物23(141mg,397μmol)之溶液。將獲得之混合物在室溫下攪拌20h，並接著藉由旋轉蒸發來濃縮以產出烯丙基1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡咯-2-羰基)-1H-吲唑-6-基胺甲酸酯(24)，為黃褐色粉末(121mg,100%產率)。
E部分：
4-(4-((三級丁氧基羰基)amino)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸(173mg,476μmol)、EDCI.HCl(152mg,0.74mmol)、DMAP(146mg,1.2mmol)、DIEA(70μL,397μmol)及DCM(5mL)之混合物在室溫下攪拌15分鐘，接著將在DCM(2mL)中的化合物24(121mg,397μmol)及DIEA(210μL,1.2mmol)加入，且攪拌持續15.5h。將該混合物以DCM稀釋，接著以飽和NaHCO3及水洗滌。接著將有機層以Na2SO4乾燥並經濃縮以產出黃色泡沬物，其藉由在ISCO管柱(10% MeOH/DCM)層析來純化，以產出化合物25(128mg,187μmol,46%產率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.27(s,1H),10.06(s,1H),10.01(s,1H),9.93(s,1H),9.32(s,1H),7.77(d,1H),7.70(d,1H),7.42(dd,1H),7.35(d,1H),7.28(d,1H),7.20(br s,1H),7.17(dd,2H),5.93-6.03(m,1H),5.30(dd,2H),4.63(d,2H),3.93(s,3H),3.85(s,3H),3.83(s,3H),1.45(s,9H)。
F部分：
將在二(2mL)中的4M HCl之溶液加到在二(2mL)中的化合物25(128mg,187μmol)之溶液。將獲得之反應混合物在室溫下攪拌15.5h，並接著濃縮並在高真空下乾燥以產出化合物26，為黃褐色固體(120mg,100%產率)。
G部分：
4-((11aS)-10-(烯丙氧羰基)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-11-(四氫-2H-哌喃-2-基氧基)-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁酸(藉由US20150133435(A1)中所述之程序的修改版而製備)(164mg,309μmol)、EDCI.HCl(79mg,412μmol)、DMAP(75mg,618μmol)、DIEA(36μL,206μmol)及DCM(10mL)之混合物係在室溫下攪拌15分鐘。接著，加入在DCM(2mL)中的化合物26(120mg,206μmol)及DIEA(108μL,618μmol)之溶液，且將獲得之混合物在室溫下攪拌14.5h。LC-MS顯示反應完全。將該反應混合物以DCM稀釋，接著以水及飽和NaHCO3溶液洗滌。將有機層以Na2SO4乾燥並濃縮。將此粗產物ISCO管柱(5%MeOH/DCM)上以產出(11S,11aS)-烯丙基8-(4-(2-(5-(5-(6-(烯丙氧基羰基胺基)-1H-吲唑-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-咪唑-4-基胺基)-4-側氧基丁氧基)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-11-(四氫-2H-哌喃 -2-基氧基)-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-10(5H)-甲酸酯(27)，為黃色泡沫(60mg,55μmol,28%產率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10,31(s,1H),10.18(s,1H),10.01(s,1H),9.95(s,1H),7.98(d,1H),7.83(d,1H),7.40-7.46(m,3H),7.28(d,1H),7.16(d,1H),7.08(d,1H),6.92(s,1H),6.82(s,1H),5.93-6.06(m,2H),5.75(s,1H),5.62(dd,2H),5.38(dd,2H),5.25(dd,2H),5.12(m,2H),5.02(d,2H),4.65(d,2H),4.63(d,1H),4.32-4.60(m,2H),4.10(m,2H),3.76-4.02(m,14H),3.50(m,2H),3.16(d,1H),2.91(m,1H),2.02(m,2H),1.63(br s,2H),1.30-1.55(m,4H)。
H部分：
將化合物27(49mg,45μmol)、DCM(5mL)、DABCO(50mg,0.45mmol)、肆(三苯膦)鈀(IV)(10mg,9μmol)之溶液在室溫下攪拌0.5h。將溶劑藉由旋轉蒸發而移除，並將殘留物在ISCO管柱(5%MeOH/DCM)上純化以給出(S,Z)-N-(5-(5-(6-胺基-1H-吲唑-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-(4-(7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(28)，為澄清油狀物(20mg,24μmol,54%產率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.10(s,1H),8.53(s,1H),8.42(s,1H),7.75(s,2H),7.61(d,1H),7.51(s,1H),7.33(s,1H), 7.25-7.30(m,3H),7.02(d,1H),6.86(s,1H),6.73(d,1H),5.30(s,2H),5.12(s,1H),5.05(s,1H),4.24(m,1H),4.12(s,2H),3.92-4.03(m,10H),3.79(s,3H),3.70(m,1H),2.65-2.98(m,4H),2.27(m,2H)。
實施例13 合成(S,Z)-N-(5-(5-(6-胺基-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-(4-(7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(13A)
標題化合物13A係使用在實施例1中所述的程序來製備，惟係使用1H-吲哚-6-胺(1g,7.57mmol)而非1H-吲哚-5-胺。ESI MS：C43H43N11O7(M+H)826.3；結果值825.8。
實施例14 合成(11S,11aS)-4-((2S,5S)-19-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H- 吡咯-1-基)-5-異丙基-2-甲基-4,7,17-三側氧基-10,13-二氧-3,6,16-三吖十九醯胺基)苄基11-羥基-7-甲氧基-8-(4-(2-(5-(5-(5-甲氧基-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-咪唑-4-基胺基)-4-側氧基丁氧基)-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-10(5H)-甲酸酯(38)
A部分：
將在乾燥DCM(2mL)中的乙醯氯(0.498mL,6.98mmol)之溶液緩慢加入在乾燥DCM(10mL)中的三級丁基(S)-2-(羥甲基)-4-亞甲基吡咯啶-1-甲酸酯(1.24g,5.81mmol；如WO 2014/058538中所述來製備)及TEA(0.97mL,6.98mmol)之冰冷溶液。將該冰浴移除，並將該混合物在室溫下攪拌~5h，直到TLC指示該反應完成。將該反應混合物以DCM稀釋至30mL，並依序以0.1M HCl及鹽水洗滌。該有機相以MgSO4乾燥、藉由旋轉蒸發來濃縮、接著在矽凝膠(Hex：EtOAc,0-40%B)上純化以給出三級丁基(S)-2-(乙醯氧基甲基)-4-亞甲基吡咯啶-1-甲酸酯(30)，為無色油狀物(1.24g,84%產率)。1H NMR(CDCl3)：δ 4.99(2 H,s),δ 4.28(1 H,bs),4.16(2 H,dd),4.11-3.90(2,m H),3.86(1 H,d),2.73(1 H,bs),2.55-2.28(1 H,m),2.04(3 H,s),1,47(9 H,s)。
B部分：
在氬下，將TFA(5mL)加到在乾燥DCM(5mL)中的化合物30(1.2g,4.7mmol)之冰冷溶液。將該混合物在0℃下攪拌3-4小時，並接著藉由旋轉蒸發來濃縮。將油狀殘留物溶於乙腈並經濃縮。將殘留物再懸浮於甲苯中並經濃縮。將該粗TFA鹽在高真空下乾燥過夜，並不進一步純化而用在下個步驟。
在分開的燒瓶中，將草醯氯(2M，在DCM中，3mL,6.13mmol)緩慢加至冰冷溶液，在乾燥DCM(14mL)中的5-甲氧基-4-(4-甲氧基-4-側氧基丁氧基)-2-硝苄酸(1.48g,4.72mmol；根據J.Med.Chem.2006,49,5442-5461中的程序來製備)之溶液，接著加入幾滴乾燥DMF。使該混合物緩慢達到室溫，同時藉由驟停等分試樣於MeOH中並藉由LCMS來分析以監測反應。將該粗反應在室溫下攪拌過夜。在真空下將溶劑移除，並將殘留物予以在THF或甲苯中數次溶解/濃縮循環，接著在高真空下最終濃縮(~45min)以移除殘餘的草醯氯。接著將該粗醯氯溶於乾燥THF(14mL)中，並在氬下逐滴加入DIEA(2.44g,18.9mmol)及先前已製備之在乾燥THF(10mL)中的粗TFA鹽之冰冷混合物。將該冰浴移除，並使該混合物達到室溫。在2h後，LCMS指示反應完成。將該反應混合物以EtOAc(60mL)稀釋，並依序以水、0.1M HCl及鹽水洗滌。將有機相以MgSO4乾燥並在真空下濃縮。將粗物質在矽凝膠(Hex：EtOAc,0-90%B)上純化以給出甲基(S)-4-(4-(2-(乙醯氧基甲基)-4-亞甲基吡咯啶-1-羰基)-2-甲氧基-5-硝基苯氧基)丁酸酯(31)，為黃色油狀物(1.76g,83%產率)。1H NMR(CDCl3)：δ 7.70(1 H,s),6.81(1 H,s),5.13(1 H,d,J=11.4Hz),5.03(1 H,s),4.90(1 H,s),4.85-4.76(1 H,m),4.62(1 H,d,J=16.8Hz),4.15(2 H,t,J=5.7Hz),3.97(3 H,s),3.71(3 H,s),2.92-2.76(1 H,m),2.57(2 H,t,J=6.8Hz),2.27-2.18(2 H,m),2.07(3 H,s)。ESI-MS 針對C21H27N2O9計算值451.17(M+H)；結果值451.1。
C部分：
將SnCl2加到化合物31在乾燥MeOH(35mL)中之溶液並將該混合物回流攪拌~3.5h，在TLC指示反應完成時點。將該粗反應混合物加至冰冷NaHCO3飽和水溶液，同時攪拌。在~20min之後，將EtOAc加入，並將混合物攪拌~40min。將漿液以矽藻土過濾，並使濾液分相。將有機相以MgSO4乾燥並接著藉由旋轉蒸發來濃縮。將粗殘留物在矽凝膠(DCM：MeOH,0-5%)上純化以給出甲基(S)-4-(4-(2-(乙醯氧基甲基)-4-亞甲基吡咯啶-1-羰基)-5-胺基-2-甲氧基苯氧基)丁酸酯(32)，為黃色油狀物(862mg,53%產率)。1H NMR(CDCl3)：δ 6.74(1 H,s),6.27(1 H,s),5.02(1 H,s),4.97(1 H,s)4.81(1H,s),4.29-4.08(4 H,m),4.03(3 H,t,J=6.31Hz),3.79(3 H,s),3.69(3 H,s),2.84-2.72(1 H,m),2.54(2 H,t,J=7.1Hz),2.46(1 H,d,J=15.8Hz),2.2-2.11(2 H,m),2.04(3 H,s)。ESI-MS針對C21H29N2O7計算值421.2(M+H)；結果值421.2。
D部分：
將在~4mL NMP(~4L)中的烯丙基((S)-3-甲基-1-(((S)-1-((4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-1-側氧基丁-2-基)胺甲酸酯(藉由WO 2016038383A1中所述之程序的修改版來製備)加到 化合物32(0.862g,2.1mmol)、DIEA(0.357mL,2.1mmol)、及HOAt(0.140g,1mmol)在乾燥NMP(2mL)中之溶液。將該混合物在50℃下攪拌~8.5h並接著過夜(在室溫下)。加入另外的烯丙基((S)-3-甲基-1-(((S)-1-((4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-1-側氧基丁-2-基)胺甲酸酯(0.417g)，並將該混合物在50℃攪拌~6h。將該反應混合物以EtOAc(150mL)稀釋並依序以飽和NH4Cl水溶液、水、飽和NaHCO3及鹽水(各50mL)洗滌。將有機層以MgSO4乾燥並濃縮。將粗物質在矽凝膠(DCM：MeOH,0-7%B)上純化以給出甲基4-(4-((S)-2-(乙醯氧基甲基)-4-亞甲基吡咯啶-1-羰基)-5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基)氧基)羰基)胺基)-2-甲氧基苯氧基)丁酸酯(33)，為半純(~80%)無色固體(1.41g,63%產率)。ESI-MS針對C41H54N5O13計算值824.4(M+H)；結果值824.2。
E部分：
將碳酸鉀在水(2mL)中之溶液加到化合物33在MeOH(13mL)中之溶液。將該混合物在室溫下攪拌7.5h，並接著在真空下將溶劑移除，且將殘留物以0.1M HCl(60mL)稀釋。以1M HCl將pH調整至1-2，且將該混合物以EtOAc萃取。將有機層以MgSO4乾燥並濃縮。將粗產物藉由凝膠層析術來純化以給出4-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基) 氧基)羰基)胺基)-4-((S)-2-(羥甲基)-4-亞甲基吡咯啶-1-羰基)-2-甲氧基苯氧基)丁酸(34)，為無色固體(0.540g,56%產率)。1H NMR(CD3OD)：δ 7.58(2 H,d,J=8.3Hz),7.34(2 H,d,8.6Hz),7.18(1 H,s),6.99(1 H,s),6.0-5.86(1 H,m),5.3(H,d,J=17Hz),5.17(1 H,d,J=10.9Hz),5.09(2 H,s),4.99(H,bs),4.9-4.87(1 H,bs，部分埋在溶劑峰之下),4.87-4.82(1 H埋在溶劑峰之下),4.63-4.53(2 H,m),4.53-4.43(2 H,m),4.12-4.0(3 H,m),4.0-3.91(2 H,m),3.83(3 H,s),3.74-3.56(1 H,m),2.79-2.54(2 H,m),2.51(2 H,t,J=6.8Hz),2.13-2.0(3 H,m),1.44(3 H,d,J=6.8Hz),1.0-0.91(m,6 H,m)。ESI-MS針對C38H50N5O12計算值768.4(M+H)。結果值768.2。
F部分：
將TEMPO(9.4mg,60μmol)、接著BAIB(213mg,66.2μmol)加到化合物34(462mg,60.2μmol)在DCM(5mL)中之懸浮液。該反應混合物快速變成均質且在氬下攪拌過夜。將粗反應混合物吸附至矽凝膠上並在矽凝膠(DCM：MeOH,0-15%B)上純化以給出4-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基)氧基)羰基)-11-羥基-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基)氧基)丁酸(35)，為無色固體(355mg,77%產率)。1H NMR(DMSO-d6)：12.17(1 H,s),10.0(1 H, s),8.16(1 H,t,J=7.1Hz),7.53(2 H,d,J=7.2Hz),7.31(1 H,bs),7.27-7.21(1 H,m),7.17(2 H,d,J=7.9Hz),7.05(1 H,s),6.72(1 H,s),6.60(1 H,bs),5.99-5.82(1 H,m),5.44-5.34(1 H,m),5.30(1 H,d,J=16Hz),5.21-4.98(4 H,m),4.83(1 H,d,J=11.9Hz),4.56-4.45(2 H,m),4.45-4.34(1 H,m),4.16-4.05(1 H,m),4.02-3.85(3 H,m),3.79(3 H,s),3.45(1 H,t,J=8.5Hz),2.95-2.81(1 H,m),2.58-2.50(1 H,m，部分埋在溶劑峰),2.44-2.30(2 H,m),2.04-1.85(3 H,m),1.30(3 H,d,J=6.9Hz),0.93-0.79(6H,m)。ESI-MS針對C38H48N5O12計算值766.3(M+H)；結果值766.2。
G部分：
將NMP(0.1mL)加到化合物35(40mg,0.052mmol)在THF(04mL)中之溶液，接著加EDC(9.73mg,0.063mmol)。將混合物攪拌~5min，之後加入4-胺基-N-(5-(5-(5-甲氧基-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(28.8mg,0.052mmol，如實施例7中所述來製備)、DIEA(19μL,0.125mmol)、及DMAP(6.4mg,0.052mmol)在NMP(0.2mL)中之混合物。將該反應混合物在室溫下攪拌過夜。將該反應混合物以EtOAc(90mL)稀釋，並接著依序以飽和NH4Cl、水及鹽水(各30mL)洗滌。該有機相以MgSO4乾燥、濃縮、並在矽凝膠(DCM：MeOH,0-15%B)上 純化以給出4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基(11S,11aS)-11-羥基-7-甲氧基-8-(4-((2-((5-((5-(5-甲氧基-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)胺甲醯基)-1-甲基-1H-咪唑-4-基)胺基)-4-側氧基丁氧基)-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-10(5H)-甲酸酯(36)，為黃色固體(17.4mg,57%)。ESI-MS針對C64H72N13O15計算值1262.5(M+H)；結果值1262.0。
H部分：
將三苯膦(0.88mg,3μmol)及吡咯啶(1.2mg,17μmol)加到化合物36(17mg,0.013mmol)在乾燥THF(0.75mL，先前藉由通氣泡過THF除氣5-10min)之溶液，並將混合物攪拌~5min。在氬下，將參三苯膦鈀(0.8mg,0.7μmol)加到此混合物，且該反應混合物係在室溫下攪拌，同時藉由LCMS監測。在~2h後，加入更多三苯膦(0.25equiv)、吡咯啶(1.25equiv)、及肆三苯膦鈀(0.05equiv)。在5h後，將該反應混合物在真空下濃縮，接著藉由凝膠層析術(DCM：MeOH，含有0.5% TEA在移動相A及B兩者中(梯度=0-10%B))純化以給出4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基(11S,11aS)-11-羥基-7-甲氧基-8-(4-((2-((5-((5-(5-甲氧基-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)胺甲醯基)- 1-甲基-1H-咪唑-4-基)胺基)-4-側氧基丁氧基)-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-10(5H)-甲酸酯(37)，在半純形式。此物質用於下一步驟(見I部分)而未進一步純化。ESI-MS針對C60H68N13O13計算值1178.5(M+H)；結果值1178.0。
I部分：
將HOBt(3.7mg,27μmol)、2,5-二側氧基吡咯啶-1-基3-(2-(2-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)乙氧基)乙氧基)丙酸酯(11.6mg,27μmol)及三乙胺(2.1μL,15μmol)加到化合物37(~16mg,14μmol)在乾燥(~1mL)中之溶液。將該混合物在室溫下攪拌~1.5h，在此時點，LCMS指示反應完成。接著，該反應混合物藉由製備性HPLC來純化(水：ACN，兩者均含有0.1%蟻酸；梯度：10-90%，歷時25min)以給出(11S,11aS)-4-((2S,5S)-19-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-5-異丙基-2-甲基-4,7,17-三側氧基-10,13-二氧-3,6,16-三吖十九醯胺基)苄基11-羥基-7-甲氧基-8-(4-(2-(5-(5-(5-甲氧基-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-咪唑-4-基胺基)-4-側氧基丁氧基)-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-10(5H)-甲酸酯(38)，為無色固體(3.2mg,15%產率(針對自化合物37起始之二步驟)。ESI-MS針對C74H86N15O19計算值1488.6(M+H)；結果值1487.8。
實施例15 製備化合物38之曲妥珠單抗(trastuzumab)共軛物(39)
將TCEP(0.087mg,0.304μmol)溶液加到曲妥珠單抗(trastuzumab)(20mg,0.135μmol)在TEAA緩衝液(50mM,1mM EDTA,pH 7,2mL)中之溶液，獲得之混合物在37℃下培育1h。使反應混合物冷卻至室溫，並接著以TEAA緩衝液(1mL)及丙二醇(0.7mL)稀釋。化合物38(如實施例13中所述來製備)在0.435mL ACN/丙二醇(7：3)中之溶液接著緩慢加入，同時用力攪拌該反應混合物。將該反應混合物在室溫下攪拌~1h，之後以半胱胺酸(0.344mg,2.84μmol,16.4mg/mL儲液在TEAA緩衝液，21.5μL)驟停歷時~1h。將該粗產物以SEC(Biosep SEC 3000,pH 5.5,50mM磷酸鹽，300mM NaCl)純化，接著緩衝液交換成調合物緩衝液(25mM檸檬酸鹽，75mM NaCl,50mg/mL繭糖，pH 5.5)以給出該共軛物(8.1mg,41%產率)。該純化共軛物具有PBD對曲妥珠單抗(trastuzumab)比率係4.9(藉由UV- Vis，使用莫耳消光，針對化合物38，ε320nm=28,013cm-1M-1及ε280nm=24,217cm-1M-1，而針對曲妥珠單抗(trastuzumab)係ε280nm=226,107cm-1M-1。
實施例16 合成(11S,11aS)-4-((2S,5S)-19-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-5-異丙基-2-甲基-4,7,17-三側氧基-10,13-二氧-3,6,16-三吖十九醯胺基)苄基11-羥基-7-甲氧基-8-(4-(2-(5-(5-(5-(甲氧基羰基)-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-咪唑-4-基胺基)-4-側氧基丁氧基)-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-10(5H)-甲酸酯(40)
該標題化合物係使用在實施例14中所述的程序來製備，惟係使用2-(5-(5-(5-(甲氧基羰基)-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(如實施例8中所述 來製備)而非在G部分中的4-胺基-N-(5-(5-(5-甲氧基-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺。
實施例17 製備化合物40之曲妥珠單抗(trastuzumab)共軛物(41)
該標題化合物係使用在實施例15中所述的程序來製備，惟係使用化合物40而非化合物38。該經純化之共軛物具有PBD對曲妥珠單抗(trastuzumab)比率係5.8(藉由UV-Vis，使用莫耳消光，針對化合物38，ε320nm=37,404cm-1M-1且ε280nm=37,028cm-1M-1，而針對曲妥珠單抗(trastuzumab)係ε280nm=226,107cm-1M-1)。
實施例18 合成(11S,11aS)-4-((2S,5S)-19-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-5-異丙基-2-甲基-4,7,17-三側氧基-10,13-二氧- 3,6,16-三吖十九醯胺基)苄基11-羥基-7-甲氧基-8-(4-(1-甲基-2-(1-甲基-5-(1-甲基-5-(5-(甲硫基)-1H-吲哚-1-羰基)-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1H-咪唑-4-基胺基)-4-側氧基丁氧基)-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,11,11a-四氫-1H-[苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-10(5H)-甲酸酯(42)
該標題化合物係使用在實施例14中所述的程序來製備，惟係使用1-甲基-2-(1-甲基-5-(1-甲基-5-(5-(甲硫基)-1H-吲哚-1-羰基)-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1H-咪唑-2-甲醯胺(如實施例9中所述來製備)而非在G部分中的4-胺基-N-(5-(5-(5-甲氧基-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺。
實施例19 製備化合物42之曲妥珠單抗(trastuzumab)共軛物(43)
該標題化合物係使用在實施例15中所述的程序來製備，惟係使用化合物42而非化合物38。該純化共軛物具有PBD對曲妥珠單抗(trastuzumab)比率係4.3(藉由UV-Vis，使用莫耳消光，針對化合物42，ε320nm=38,978cm-1M-1及ε280nm=34,095cm-1M-1，而針對曲妥珠單抗(trastuzumab)係ε280nm=226,107cm-1M-1)。
實施例20 合成N-(5-((5-(5-((2S,5S)-19-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-5-異丙基-2-甲基-4,7,17-三側氧基-10,13-二氧-3,6,16-三吖十九醯胺基)-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-(4-(((S)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基)氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(46)
A部分：
將(S)-2-((S)-2-(烯丙氧基羰基胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙酸(7mg,0.026mmol)及EEDQ(7.63mg,0.031mmol)加到化合物8(21.23mg,0.026mmol，如實施例1中所述來製備)在THF(1mL)及DMA(0.2ml)中之溶液。將獲得之溶液在室溫下攪拌18h。LC-MS顯示反應完全。將該粗產物在矽凝膠(0-15%MeOH/DCM)上純化以給出烯丙基((S)-1-(((S)-1-((1-(4-(4-(4-(4-(((S)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-[苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基)氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羰基)-1H-吲哚-5-基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺甲酸酯(44)(22mg,0.02mmol,79%產率)。ESI MS：C55H61N13O11(M+H)1080.5；結果值1080.2。
B部分：
將肆(三苯膦)鈀(0)(23.54mg,0.02mmol)及1,4-二吖雙環[2.2.2]辛烷(11.42mg,0.102mmol)加到化合物44(22mg,0.02mmol)在DCM(1mL)中之溶液。在氬下將獲得之溶液在室溫下攪拌1h。將該反應混合物濃縮，並將粗產物在矽凝膠(0-15% MeOH/DCM)上純化以給出N-(5-((5-(5-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-(4-(((S)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基)氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(45)(6mg,6.02μmol,29.6%產率)。ESI MS：C51H57N13O9(M+H)996.4；結果值996.2。
C部分：
將HOBt(0.298mg,2.209μmol)、2,5-二側氧基吡咯啶-1-基3-(2-(2-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)乙氧基)乙氧基)丙酸酯(0.940mg,2.209μmol)及三乙胺(0.308μl,2.209μmol)加到化合物45(6mg,6.02μmol)在DMF(0.5ml)中之溶液。將該混合物在室溫下攪拌16hr。LC-MS顯示反應完全。將該溶劑移除，並將粗產物以HPLC(0.1N蟻酸10-90% ACN/水)純化以給出N- (5-((5-(5-((2S,5S)-19-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-5-異丙基-2-甲基-4,7,17-三側氧基-10,13-二氧-3,6,16-三吖十九醯胺基)-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-(4-(((S)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基)氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(46)(6mg,0.765μmol,38.1%產率)。ESI MS：C65H75N15O15(M+H)1306.6；結果值1306.6。
實施例21 製備化合物46之曲妥珠單抗(trastuzumab)共軛物(47)
該標題化合物係使用在實施例15中所述的程序來製備，惟係使用化合物46而非化合物38。該純化共軛物具有PBD對曲妥珠單抗(trastuzumab)比率係33(藉由UV-Vis，使用莫耳消光，針對化合物46，ε322nm=38,072cm-1M-1及ε280nm=34,191cm-1M-1，而針對曲妥珠單抗(trastuzumab)係ε280nm=226,107cm-1M-1)。
實施例21A 製備共軛物47之亞硫酸鹽衍生物(47A)
該標題共軛物係使用實施例15中所述之程序，惟，在與經還原之蛋白反應1h後，將該粗製共軛物以亞硫酸氫鈉(每藥5equiv)處理~2h。將該粗反應混合物離心以沈澱不可溶物質、傾析、並接著藉由WCX來純化(移動相A：20mM MES,pH 5.8；移動相B：20mM MES,300mM NaCl,pH 5.8；梯度：20-50%B歷時32min)。該經純化之共軛物係經緩衝液交換成為亞硫酸氫鹽調合物緩衝液(50μM的亞硫酸氫鈉，25mM的檸檬酸鹽，75mM NaCl，50mg/mL繭糖，pH 5.5)。該純化共軛物具有PBD對曲妥珠單抗(trastuzumab)比率係4.7(藉由UV-Vis，使用莫耳消光，針對化合物46，ε322nm=38,072cm-1M-1及ε280nm=34,191cm-1M-1，而針對曲妥珠單抗(trastuzumab)係ε280nm=226,107cm-1M-1)。
實施例22 合成(S,Z)-N-(5-(5-(6-胺基-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-2-(4-(7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)噻唑-4-甲醯胺(48)
標題化合物(48)係如實施例1中所述來製備，惟係使用4-(2-(三級丁氧基羰基胺基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸(100mg,0.273mmol)而非4-(4-((三級丁氧基羰基胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸。ESI MS：C42H40N10O7S(M+H)829.3；結果值828.7。
實施例23 合成(S,Z)-4-(4-(4-(4-(7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸(51)
A部分：
將氫氧化鈉(0.095ml,0.095mmol)加到化合物49(10mg,9.48μmol)在1,4-二(1mL)中之溶液。將獲得之溶液在室溫下攪拌2h。LC-MS顯示反應完全。將粗產物在ISCO管柱(0-15% MeOH/DCM)上純化以給出4-(4-(4-(4-(((11aS)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-11-((四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基)氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸(50)(4.6mg,5.12μmol,53.9%產率)。ESI MS：C44H51N9O12(M+H)898.4；結果值898.2。
B部分：
該標題化合物(51)係使用在實施例1中G部分所述的程序來製備。ESI MS：C35H37N9O6(M+H)712.3；結果值711.9。
實施例24 (R,Z)-N-(3-羥丙基)-4-(4-(4-(4-(7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺(55)
A部分：
在0℃下，將4N HCl(在二中)(3mL,12mmol)加到化合物52(140mg,0.258mmol)在MeOH(3ml)中之溶液，並將獲得之混合物攪拌1h，接著使之回溫至室 溫。藉由LC/MS監測反應，其在16h後完成。將該反應混合物藉由旋轉蒸發、接著藉由真空泵來濃縮，以獲得化合物53，為定量產出之HCl鹽類。ESI MS：C21H27N7O4(M=H)442.5；結果值442.1。
B部分：
將在DMF(2ml)中之4-(((11aR)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-11-((四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基)氧基)丁酸(132mg,0.249mmol)、EDC(95mg,0.498mmol)及DMAP(76mg,0.622mmol)在室溫下攪拌30分鐘。將化合物53(110mg,0.249mmol)加到該獲得之混合物。藉由LC/MS監測反應。2h後，反應完成，並將該混合物倒入冰水中，將有機層以EtOAc洗滌、稀NaHCO3、以Na2SO4乾燥並經濃縮。將殘留物以凝膠層析術純化，使用DCM/MeOH作為移動相帶有5-20%MeOH梯度，以給出標題化合物(54)，為琥珀玻璃固體(121mg,51%產率)。ESI MS：C48H59N9O12(M+H)955；結果值954.2。
C部分：
將三苯膦(4.12mg,0.016mmol)及吡咯啶(6.24μl,0.075mmol)加到在DCM(5mL)中的化合物54(60mg,0.063mmol)之溶液(在室溫下，在氬下)並在室溫下攪拌10 min。將肆(三苯膦)鈀(0)(3.63mg,3.14μmol)加至此中，且使該溶液在室溫下攪拌2h。LC-MS顯示反應完全。將溶劑藉由旋轉蒸發而移除，並將殘留物藉由逆相層析法、使用乙腈/水梯度(以0.1%蟻酸緩衝)來純化以給出標題化合物(55)，為非晶形固體(22mg,45%產率)。ESI MS：C39H45N9O8(M+H)767.8；結果值768.1。
實施例25 合成(S,Z)-N-(5-(5-(3-羥丙基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-(4-(7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(56)
標題化合物係使用在實施例24中所述的程序來製備，惟係使用三級丁基(2-((5-((5-((3-羥丙基)胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)胺甲醯基)-1-甲基-1H-咪唑-4-基)胺甲酸酯而非三級丁基(5-((5-((5-((3-羥丙基)胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)胺甲酸酯以給出21mg,74.5%產率。ESI MS：C38H44N10O8(M+H)769.8；結果值769.2。
實施例26 (R)-3-(4-(4-(4-(4-((S,Z)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)丙基16-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2-異丙基-4,14-二側氧基-7,10-二氧-3,13-二吖十六-1-酸酯
A部分：
在0℃下，將DIC(0.051mL,0.33mmol)加到(R)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁酸(33.2mg, 0.165mmol)在DCM(2mL)中之溶液，且將獲得之混合物攪拌15分鐘，並接著加到化合物57(150mg,0.165mmol)及DMAP(60.5mg,0.495mmol)。將獲得之混合物攪拌至室溫2h。將第二等分(R)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁酸加入，並攪拌再持續2h。LC/MS顯示反應基本上完成。將反應混合物以EtOAc稀釋、將有機層以NaHCO3、鹽水洗滌、以Na2SO4乾燥、並經濃縮。將殘留物藉由凝膠層析術、使用0-10% MeOH(在DCM中)作為溶析液來純化，以給出(11aS)-烯丙基8-(4-((2-((5-((5-((3-(((R)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)丙基)胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)胺甲醯基)-1-甲基-1H-咪唑-4-基)胺基)-4-側氧基丁氧基)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-11-((四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-10(5H)-甲酸酯(58)，為固體(40mg,67%產率)。ESI MS：C56H71N11O15(M+H)1139.2；結果值1139.8。
B部分：
標題化合物係使用在實施例24的C部分中所述程序從化合物58來製備，以給出化合物59(22mg,72%產率)。ESI MS：C43H53N11O9(M+H)868.9；結果值868.3。
C部分：
標題化合物係使用在實施例14的I部分中所述 程序從化合物59來製備，以給出化合物60，(R)-3-(4-(4-(4-(4-(((S)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基)氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)丙基16-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2-異丙基-4,14-二側氧基-7,10-二氧-3,13-二吖十六-1-酸酯(18mg,60%產率)。ESI MS：C57H71N13O15(M+H)1179.2；結果值1178.4。
實施例27 製備化合物60之曲妥珠單抗(trastuzumab)共軛物(60A)
該標題化合物係使用在實施例15中所述的程序來製備，惟係使用化合物60而非化合物38。該純化共軛物具有PBD對曲妥珠單抗(trastuzumab)比率係4.1(藉由UV-Vis，使用莫耳消光，針對化合物60，10nm=37,500cm-1M-1及ε280nm=25,394cm-1M-1，而針對曲妥珠單抗(trastuzumab)係ε280nm=226,107cm-1M-1)。
實施例28 合成(R)-3-(4-(4-(4-(4-((R,Z)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)丙基16-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2-甲基-4,14-二側氧基-7,10-二氧-3,13-二吖十六-1-酸酯(63)
A部分：
在0℃下，將DIC(0.051mL,0.33mmol)加到(R)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)丙酸(8.35mg,0.048mmol)在DCM(2mL)中之溶液，並將獲得之混合物攪拌15分鐘，並接著加到化合物54(46mg,0.048mmol)及DMAP(17.67mg,0.145mmol)。將獲得之混合物攪拌至室溫1h。 將第二等分(R)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁酸加入，並攪拌再持續1h。LC/MS顯示反應基本上完成。將反應混合物以EtOAc稀釋、將有機層以NaHCO3、鹽水洗滌、以Na2SO4乾燥、並經濃縮。將殘留物藉由凝膠層析術、使用0-10% MeOH(在DCM中)作為溶析液來純化，以給出化合物61，為固體(26.5mg,50%產率)。ESI MS：C56H71N11O15(M+H)1109.2，結果值1109.1。
B部分：
標題化合物係使用在實施例24的C部分中所述程序從化合物61來製備，以給出化合物62(16.2mg,81%產率)。ESI MS：C42H50N10O9(M+H)838.9，結果值839.1。
C部分：
標題化合物係使用在實施例14的I部分中所述程序從化合物662來製備，以給出化合物63，(R)-3-(4-(4-(4-(4-(((R)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基)氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)丙基16-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2-甲基-4,14-二側氧基-7,10-二氧-3,13-二吖十六-1-酸酯(2.5mg,48%產率)。ESI MS：C56H68N12O15(M+H)1149.2，結果值1149.1。
實施例29 製備化合物63之曲妥珠單抗(trastuzumab)共軛物(63A)
該標題化合物係使用在實施例15中所述的程序來製備，惟係使用化合物63而非化合物38。該純化共軛物具有PBD對曲妥珠單抗(trastuzumab)比率係3.4(藉由UV-Vis，使用莫耳消光，針對化合物60，310nm=37,500cm-1M-1及ε280nm=25,394cm-1M-1，而針對曲妥珠單抗(trastuzumab)係ε280nm=226,107cm-1M-1)。
實施例30 合成6K PHF-BA(22%)-PEG2-MI(3%)化合物62(64)
將化合物62(7.71mg,8.7μmol)在NMP(0.632mL)中之溶液加到6 KPHF-BA(22%)-EG2-MI(3.5%)(47.8mg，如US2015010440的實施例2中所述來製備)在MES緩衝液(10mM,pH 5.8,2.54mL)中之溶液，接著加NHS(1.6mg)。將EDC分三部分(3 x 1.7mg)加到此混合物歷時2h並將該混合物在室溫下攪拌過夜。將該粗產物於C-18 RP HPLC上直接純化(移動相A：20mM MES,pH 6.0；移動相B：乙腈；梯度：10-70%歷時23min)。將經純化之共軛物先在真空下濃縮以移除乙腈，並接著進一步在1K MWCO攪拌槽膜(1K MWCO stir cell membrane)上濃縮以提供標題化合物(64)，為水溶液(3.7mL,3.85mg/mL,14.25mg；分子量7.3kDa)；曲妥珠單抗(trastuzumab)對化合物64比率係1.5。
實施例31 製備化合物64之曲妥珠單抗(trastuzumab)共軛物(65)
將TCEP(27.3μL，0.112mg,0.390μmol)溶液加到曲妥珠單抗(trastuzumab)(21mg,0.142μmol)在2.1TEAA緩衝液(pH 7,50mM，含有1mM EDTA)中之溶液。將該混合物在37℃下攪動90分鐘，接著冷卻至室溫並緩慢加入化合物64(1.9mL,7.3mg)在TEAA緩衝液(pH 7)中之溶液。將該混合物在室溫下攪拌45分鐘，並接著在室溫下藉由與半胱胺酸(0.145mL,4.8mg)反應將反應驟停~60min。將該粗混合物離心，並將上清液藉由WCX來純化(移動相A：20mM MES,pH 5.8；移動相B：20mM MES,300mM NaCl；梯度：10-65%歷時35分鐘)以提供標題共軛物，為水溶液(14.5mg,4mL,3.63mg/mL)；曲妥珠單抗(trastuzumab)對化合物65比率係3.4。
實施例32 合成(S,Z)-N-(3-羥丙基)-4-(4-(4-(4-(7-甲氧基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺(66)
標題化合物係使用在實施例24的B部分中所述程序來製備，惟係使用4-((11aR)-10-(烯丙氧基羰基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧基-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁酸而非4-((11aR)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-11-((四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基)氧基)丁酸，以給出化合物66(15mg,68%產率)。ESI MS：C38H45N9O8(M+H)755.8；結果值756.2。
實施例33 合成(Z)-3-(4-(4-(4-(4-(7-甲氧基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)丙基6-(2,5-二側氧基-2,5-二 氫-1H-吡咯-1-基)己酸酯(67)
在0℃下，將DIC(6.18μl,0.04mmol)加到6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己酸(4.19mg,0.02mmol)在DCM(0.5mL)中之溶液，並將獲得之混合物攪拌10分鐘，並接著加到化合物66(15mg,0.02mmol)、DMAP(7.27mg,0.06mmol)及DCM(0.5ml)。將獲得之混合物攪拌至室溫1h。將第二等分之6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己酸(4.19mg,0.02mmol)、DIC(6.18μl,0.04mmol)及DCM(0.5ml)加入並攪拌過夜。LC/MS顯示反應基本上完成。將反應混合物以EtOAc稀釋、將有機層以NaHCO3、鹽水洗滌、以Na2SO4乾燥、並經濃縮。將殘留物藉由C18逆相層析法、使用CH3CN對水(以0.1%蟻酸緩衝)作為溶析液來純化，以給出化合物67，為非晶形固體(8mg,42%產率)。ESI MS：C48H56N10O11(M+H)949.0，結果值949.3。
實施例34 製備化合物67之曲妥珠單抗(trastuzumab)共軛物(68)
該標題化合物係使用在實施例15中所述的程序來製備，惟係使用化合物67而非化合物38。該純化共軛物具有PBD對曲妥珠單抗(trastuzumab)比率係5.6(藉由UV-Vis，使用莫耳消光，針對化合物67，10nm=37,500cm-1M-1及ε280nm=25,394cm-1M-1，而針對曲妥珠單抗(trastuzumab)係ε280nm=226,107cm-1M-1)。
實施例35 合成(R)-3-(4-(4-(4-(4-(((S)-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二吖呯并[1,2-a]吲哚-9-基)氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)丙基2-胺基丙酸酯(71)
A部分：
使用化合物69(如實施例24中所述來製備，惟係使用4-(((12S,12aS)-11-((烯丙氧基)羰基)-8-甲氧基-6-側氧基-12-((四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-11,12,12a,13-四氫-6H-苯并[5,6][1,4]二吖呯并[1,2-a]吲哚-9-基)氧基)丁酸而非使用4-((11aR)-10-(烯丙氧基羰基)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-11-(四氫-2H-哌喃-2-基氧基)-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁酸)以實施例26的B部分中所述之程序來製備化合物70，惟係使用(R)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)丙酸(3.88mg,0.022mmol)而非(R)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁酸。(19mg,88%產率)。ESI MS：C49H54N10O11(M+H)959.4；結果值959.0。
B部分：
標題化合物係使用在實施例24的C部分中所述程序從化合物70來製備，以給出化合物71(5.8mg,33.5%產率)。ESI MS：C45H50N10O9(M+H)875.4；結果值875.1
實施例36 製備6K PHF-BA(22%)-PEG2-MI(3.5%) - 化合物71之曲妥珠單抗(trastuzumab)共軛物(72)
標題化合物係如實施例31中所述來製備，惟係使用6K PHF-BA(22%)-EG2-MI(3.5%)-化合物71(5%)而非6K PHF-BA(22%)-PEG2-MI(3%)-化合物62(3%)。該經純化之共軛物具有PBD對曲妥珠單抗(trastuzumab)比率係6.7。
實施例37 合成(S,Z)-N-(5-(5-(5-胺基吲哚啉-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-(4-(7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(77)
A部分：
化合物75係如實施例1的F部分中所述來製備，惟係使用4-胺基-1-甲基-N-(1-甲基-5-(1-甲基5-(5-硝基吲哚啉-1-羰基)-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1H-吡咯-3-基)-1H-咪唑-2-甲醯胺鹽酸鹽(119mg,0.210mmol，自(4-胺基-1-甲基-1H-吡咯-2-基)(5-硝基吲哚啉-1-基)甲酮鹽酸鹽來製備，如實施例1的C部分中所述)而非化合物6。ESI MS：C52H58N11O13 1044.4(M+H)；結果值1043.6。
B部分及C部分：
將化合物75(100mg,0.096mmol)與鐵(16.05mg,0.287mmol)在EtOH(3.0ml)合併。將飽和氯化銨(1mL)水溶液及蒸餾水(1mL)加入，並將該異質混合物加熱至80℃。2h後，將混合物稀釋於EtOAc中，並以水及鹽水洗滌。將有機相以MgSO4乾燥、經過濾、並於減壓下濃縮，並接著純化，以給出化合物76(36mg,37.1%產率)。ESI MS：C52H60N11O11 1014.5(M+H)；結果值1013.7。標題化合物係使用在實施例1的H部分中之程序從化合物76來製備，以給出1.1mg,3.74%產率。ESI MS：C43H46N11O7(M+H)828.4；結果值827.8。
實施例38 合成(S)-N-(5-((5-(5-胺基-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-(4-((8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二吖呯并[1,2-a]吲哚-9-基)氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(78)
標題化合物係使用在實施例1的F及G部分中之程序來製備，惟在F部分中係使用4-(((12S,12aS)-11-((烯丙氧基)羰基)-8-甲氧基-6-側氧基-12-((四氫-2H-哌喃-2- 基)氧基)-11,12,12a,13-四氫-6H-苯并[5,6][1,4]二吖呯并[1,2-a]吲哚-9-基)氧基)丁酸而非4-((11aR)-10-(烯丙氧基羰基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧基-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁酸，以給出化合物78(12.5mg,23.13%產率)。ESI MS：C46H44N11O7(M+H)862.3；結果值861.7。
實施例39 合成(S,Z)-N-(5-(5-(5-胺基-1H-吲唑-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-(4-(7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(79)
該標題化合物係使用在實施例1中所述的程序來製備，惟在A部分中係使用烯丙基1-(4-(4-胺基-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羰基)-1H-吲唑-5-基胺甲酸酯鹽酸鹽(61mg,0.132mmol)而非烯丙基1-(4-(4-胺基-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羰 基)-1H-吲哚-5-基胺甲酸酯鹽酸鹽。ESI MS：C42H42N12O7(M+H)827.9；結果值826。
實施例40 合成(S,Z)-N-(5-(5-(1H-吲哚-5-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-(4-(7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(82)
A部分及B部分：
使用在實施例1的A部分中所述之程序，將化合物80(37mg,0.045mmol)與1H-吲哚-5-胺(5mg,0.038mmol)反應，以給出化合物81，其係使用而未進一步純化，使用實施例1的H部分中之程序，以給出標題化合物82，獲得3mg,10%產率。ESI MS：C43H43N11O7(M+H)826.8；結果值825.9。
實施例41 合成(S,Z)-N-(5-(5-(5-(胺基甲基)-1H-吲哚-1-羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-(4-(7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(83)
標題化合物83係如實施例12中所述來製備，惟係使用烯丙基(1-(4-(4-(4-胺基-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羰基)-1H-吲哚-5-基)甲基胺甲酸酯鹽酸鹽(127mg,0.2mmol)而非化合物26。ESI MS：C44H46N11O7(M+H)840.4；結果值839.7。
實施例42 合成(S,Z)-N-(5-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-5-基胺甲醯基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-(4-(7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺(84)
該標題化合物係如實施例40中所述來製備，惟係使用1H-吡咯[2,3-b]吡啶-5-胺(4.3mg,0.032mmol)而非1H-吲哚-5-胺。ESI MS：C42H42N12O7(M+H)827.9；結果值826.9。
實施例43 合成(S,Z)-甲基1-(4-(4-(4-(4-(7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二吖呯-8-基氧基)丁醯胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羰基)-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-5-甲酸酯(85)
標題化合物85係使用在實施例1中所述的程序來製備，惟係使用1H-吲哚-5-甲酸甲酯(5.72mg,0.032mmol)而非1H-吲哚-5-胺。C44H43N11O9(M+H)870.9；結果值869.8
實施例44 針對抗體-聚合物-藥物共軛物之細胞存活性檢定
使用CellTiter-Glo®(Promega Corp)來評估PBD化合物和其共軛物在腫瘤細胞株之中，於體外的抗增生特性。將細胞平板接種於黑壁的96孔盤中，並使其在37℃、5%CO2的濕潤氣氛中附著過夜。BT474、SKBR3、NCI-N87細胞(HER2表現細胞)、JIMT1細胞(HER2表現量中等的細胞)和MCF-7細胞(HER2表現量低的細胞)，以每孔5000個細胞的密度來平板接種。接下來一天，將培養基以50μL的新鮮培養基替換，且將50μL的PBD化合物或抗體-PBD共軛物2x儲液加入適當的孔中、混合，並培養72小時。在室溫下將CellTiter-Glo®試劑加入孔中，10分鐘後，使用SpectraMax M5孔盤讀數器(Molecular Devices)來 測量發光訊號。使用SoftMax Pro軟體來產生劑量反應曲線。從四參數曲線適插法來判定IC50的值。
表I和表II分別提供PBD化合物和其共軛物的抗增生性質之例示性結果。
如在表I和II中所示，該化合物和抗體-藥物共軛物在所測試的細胞株中顯示療效。
實施例45 投予抗體聚合物藥物共軛物的腫瘤生長反應
將雌性CB-17 SCID小鼠皮下接種NCI-N87細胞(每組n=10)。在第1日，將測試化合物或媒劑以單劑來IV給劑。使用數位測徑器，在圖1中所指示的時間點測量腫瘤大小。計算腫瘤體積並用於判定腫瘤生長的延遲。當腫瘤尺寸達到800mm3，便將小鼠犧牲。每組的腫瘤體積以平均值±SEM呈現。
圖1提供了皮下接種NCI-N87細胞之小鼠，於第1日以單劑來IV投予3mg/公斤的媒劑、曲妥珠單抗(trastuzumab)-藥物共軛物、共軛物47、實施例21，或共軛物60A、實施例27後，個別的腫瘤反應結果(每組n=10)。結果顯示，在第78日時，3mg/kg的共軛物47導致5個局部反應、5個完全反應，且2個在第78日無腫瘤。
本發明可以其他特定形式而不悖離其基本特 徵之精神而實施。因此，前述之實施態樣在所有方面係視為說明性而非限制本文中所述之發明。由此，本發明之範圍係由後附之申請專利範圍而非前述之說明所示，且所有落在申請專利範圍等效意義及範圍變化均意欲包含於其中。

Claims (72)

  1. 一種式(I)之化合物： 或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物，其中：D係D1、D2或D3： 、或 其中，在D1中，C2與C3之間或C2與C1之間的虛線表示單鍵或雙鍵的存在；m係0、1或2；當D係D1、C2與C3之間的虛線係雙鍵、且m係1時，則R 1係：(i)C 6-10芳基，隨意地經選自下列取代基之一或多者所取代：-OH、鹵基、-NO 2、-CN、-N 3、-OR 2、-COOH、-COOR 2、-COR 2、-OCONR 13R 14、C 1-10烷基、C 3-10環烷基、C 2-10烯基、C 2-10炔基、聚乙二醇單元-(OCH 2CH 2) r-OR a、3至14員雜環烷基、5至12員雜芳基、雙-氧C 1-3伸烷 基(bis-oxy-C 1-3 alkylene)、-NR 13R 14、-S(=O) 2R 12、-S(=O) 2NR 13R 14、-SR 12、-SO xM、-OSO xM、-NR 9COR 19、-NH(C=NH)NH 2；(ii)C 1-5烷基；(iii)C 3-6環烷基；(iv) (vi) (vii) (vii) ；或(viii)鹵基；或當D係D1、C2與C3之間的虛線係單鍵、且m係1時，則R 1係：(i)-OH、=O、=CH 2、-CN、-R 2、-OR 2、鹵基、=CH-R 6、=C(R 6) 2、-O-SO 2R 2、-CO 2R 2、-COR 2、-CHO、或-COOH；或(ii) ；或 當D係D1且m係2時，則各R 1係獨立地為鹵基且R 1兩者均係接附至相同碳原子或其中一個接附至C2且另一個接附至C3；T係C 1-10伸烷基連接子(linker)；A係 ，其中A的-NH基團係連接至式(I)的-C(O)-T-部分且A的C=O部分係連接至E；且各 獨立係 、或 E係-OH、-NH-(C 1-6伸烷基)-R 13a、E1、E2、E3、或E4： 或 ；其中，在E1或E4中的虛線表示單鍵或雙鍵的存在；R 2及R 3各發生時係獨立地為隨意經取代之C 1-8烷基、隨意經取代之C 2-8烯基、隨意經取代之C 2-8炔基、隨意經取代之C 3-8環烷基、隨意經取代之3至20員雜環烷基、隨意 經取代之C 6-20芳基或隨意經取代之5至20員雜芳基，且，隨意地關於NR 2R 3、R 2及R 3基團彼等所接附之氮原子一起形成隨意經取代之4、5、6、或7員雜環烷基或隨意經取代之5或6員雜芳基；R 4、R 5及R 7係各獨立地為-H、-R 2、-OH、-OR 2、-SH、-SR 2、-NH 2、-NHR 2，-NR 2R 3、-NO 2、-SnMe 3、鹵基或聚乙二醇單元-(OCH 2CH 2) r-OR a；或R 4及R 7一起形成雙-氧C 1-3伸烷基；各R 6係獨立地為-H、-R 2、-CO 2R 2、-COR 2、-CHO、-CO 2H、或鹵基；各R 8係獨立地為-OH、鹵基、-NO 2、-CN、-N 3、-OR 2、-COOH、-COOR 2、-COR 2、-OCONR 13R 14、-CONR 13R 14、C 1-10烷基、-CO-NH-(C 1-6伸烷基)-R 13a、C 3-10環烷基、C 2-10烯基、C 2-10炔基、聚乙二醇單元-(OCH 2CH 2) r-OR a、3至14員雜環烷基、5至12員雜芳基、-S(=O) 2R 12、-S(=O) 2NR 13R 14、-SR 12、-SO xM、-OSO xM、-NR 9COR 19、-NH(C=NH)NH 2或-R 20-R 21-NR 13R 14；各R 9係獨立地為C 1-10烷基、C 3-10環烷基、C 2-10烯基或C 2-10炔基；R 10係-H或氮保護基；R 11係-QR Q或-SO xM；或R 10及R 11與彼等所分別接附之氮原子及碳原子一起形成N=C雙鍵；各R 12係獨立地為C 1-7烷基、3至20員雜環烷基、5至20 員雜芳基、或C 6-20芳基；R 13及R 14各發生時係各獨立地為H、C 1-10烷基、3至20員雜環烷基、5至20員雜芳基、或C 6-20芳基；各R 13a係獨立地為-OH或-NR 13R 14；R 15、R 16、R 17及R 18係各獨立地為-H、-OH、鹵基、-NO 2、-CN、-N 3、-OR 2、-COOH、-COOR 2、-COR 2、-OCONR 13R 14、C 1-10烷基、C 3-10環烷基、C 2-10烯基、C 2-10炔基、聚乙二醇單元-(OCH 2CH 2) r-OR a、3至14員雜環烷基、5至12員雜芳基、-NR 13R 14、-S(=O) 2R 12、-S(=O) 2NR 13R 14、-SR 12、-SO xM、-OSO xM、-NR 9COR 19或-NH(C=NH)NH 2；各R 19係獨立地為C 1-10烷基、C 3-10環烷基、C 2-10烯基或C 2-10炔基；各R 20係獨立地為鍵結、C 6-10伸芳基、3至14員雜伸環烷基或5至12員雜伸芳基；各R 21係獨立地為鍵結或C 1-10伸烷基；R 31、R 32及R 33係各獨立地為-H、C 1-3烷基、C 2-3烯基、C 2-3烯基或環丙基，其中R 1基團中的碳原子總數係不多於5；R 34係-H、C 1-3烷基、C 2-3烯基、C 2-3炔基、環丙基、或苯基，其中該苯基係隨意地經鹵基、甲基、甲氧基、吡啶基或苯硫基的一或多者所取代；R 35a及R 35b中之一者係-H且另一者係隨意地以鹵基、甲基、甲氧基、吡啶基或苯硫基的一或多者所取代之苯基 基團；R 36a、R 36b、R 36c係各獨立地為-H或C 1-2烷基；R 36d係-OH、-SH、-COOH、-C(O)H、-N=C=O、-NHNH 2、-CONHNH 2、 或NHR N，其中R N係-H或C 1-4烷基；R 37a及R 37b係各獨立地為-H、-F、C 1-4烷基、C 2-3烯基，其中該等烷基及烯基基團係隨意地經C 1-4烷基醯胺基(C 1-4 alkyl amido)或C 1-4烷基酯所取代；或當R 37a及R 37b中之一者係-H時，另一者係-CN或C 1-4烷基酯；X 0係CH 2、NR 6、C=O、BH、SO或SO 2；Y 0係O、CH 2、NR 6或S；Z 0係不存在或(CH 2) n；各X 1係獨立地為CR b或N；各Y 1係獨立地為NR a、O或S；各Z 1係獨立地為NR a、O或S；各R a係獨立地為H或C 1-4烷基；各R b係獨立地為H、OH、C 1-4烷基、或C 1-4烷氧基；X 2係CH、CH 2或N；X 3係CH或N；X 4係NH、O或S；Q係O、S或NH；當Q係S或NH時，則R Q係-H或隨意經取代之C 1-7烷基；或 當Q係O時，則R Q係-H或隨意經取代之C 1-7烷基、或-SO xM；各M係獨立地為H或單價的醫藥上可接受之陽離子；n係1、2或3；各r係獨立地為1至200之整數；s係1、2、3、4、5或6；t係0、1或2；及各x係獨立地為2或3，且當E係E4、虛線表示雙鍵的存在、X 3係CH、且X 4係O或S時，則s係2、3、4、5或6。
  2. 如請求項1之化合物，其中D係D1。
  3. 如請求項1之化合物，其中D係D2。
  4. 如請求項1之化合物，其中D係D3。
  5. 如前述請求項中任一項之化合物，其中T係C 2-6伸烷基連接子(linker)。
  6. 如前述請求項中任一項之化合物，其中T係C 2-4伸烷基連接子。
  7. 如前述請求項中任一項之化合物，其中T係伸丙基。
  8. 如前述請求項中任一項之化合物，其中該化合物係式(II)、(II-1)或(II-2)： 、或 或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
  9. 如前述請求項中任一項之化合物，其中該化合物係式(III)： 或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
  10. 如前述請求項中任一項之化合物，其中該化合物係式(IV)： 或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
  11. 如前述請求項中任一項之化合物，其中R 1係C 6-10芳基，其隨意地經選自下列取代基之一或多者所取代：-OH、鹵基、-NO 2、-CN、-N 3、-OR 2、-COOH、-COOR 2、-COR 2、-OCONR 13R 14、C 1-10烷基、C 3-10環烷基、C 2-10烯基、C 2-10炔基、聚乙二醇單元-(OCH 2CH 2) r-OR a、3至14員雜環烷基、5至12員雜芳基、雙-氧C 1-3伸烷基、-NR 13R 14、-S(=O) 2R 12、-S(=O) 2NR 13R 14、-SR 12、-SO xM、-OSO xM 、-NR 9COR 19、及-NH(C=NH)NH 2。
  12. 如前述請求項中任一項之化合物，其中R 1係C 6-10芳基，其隨意地經選自下列取代基之一或多者所取代：-OH、鹵基、-NO 2、-CN、-N 3、-OR 2、-COOH、-COOR 2、-COR 2、-OCONR 13R 14、C 1-10烷基、C 3-10環烷基、C 2-10烯基、C 2-10炔基、聚乙二醇單元-(OCH 2CH 2) r-OR a、3至14員雜環烷基、5至12員雜芳基、-NR 13R 14、-S(=O) 2R 12、-S(=O) 2NR 13R 14、-SR 12、及-NH(C=NH)NH 2。
  13. 如前述請求項中任一項之化合物，其中R 1係C 1-5烷基。
  14. 如前述請求項中任一項之化合物，其中R 1係C 3-6環烷基。
  15. 如前述請求項中任一項之化合物，其中R 1係
  16. 如前述請求項中任一項之化合物，其中R 1係
  17. 如前述請求項中任一項之化合物，其中R 1係
  18. 如前述請求項中任一項之化合物，其中R 1係
  19. 如前述請求項中任一項之化合物，其中R 1係鹵基。
  20. 如前述請求項中任一項之化合物，其中R 1係-OH、=O、=CH 2、-CN、-R 2、-OR 2、鹵基、=CH-R 6、=C(R 6) 2、-O-SO 2R 2、-CO 2R 2、-COR 2、-CHO、或-COOH。
  21. 如前述請求項中任一項之化合物，其中R 1係
  22. 如前述請求項中任一項之化合物，其中m係2且各R 1係獨立地為鹵基且R 1兩者均係接附至相同碳原子或其中一個接附至C2且另一個接附至C3。
  23. 如前述請求項中任一項之化合物，其中各 係獨立地為 ；或
  24. 如前述請求項中任一項之化合物，其中各 係獨立地為 ；或
  25. 如前述請求項中任一項之化合物，其中A係 ；或
  26. 如前述請求項中任一項之化合物，其中A係： 或 其中各X 1係獨立地為CH或N。
  27. 如前述請求項中任一項之化合物，其中A係： ；或
  28. 如前述請求項中任一項之化合物，其中A係： 或 其中各X 1係獨立地為CH或N。
  29. 如前述請求項中任一項之化合物，其中A係： ；或
  30. 如前述請求項中任一項之化合物，其中A係 或 其中各X 1係獨立地為CH或N。
  31. 如前述請求項中任一項之化合物，其中A係： ；或
  32. 如前述請求項中任一項之化合物，其中t係0。
  33. 如前述請求項中任一項之化合物，其中t係1。
  34. 如前述請求項中任一項之化合物，其中t係2。
  35. 如前述請求項中任一項之化合物，其中E係：-OH、-NH-(C 1-6伸烷基)-OH、 或
  36. 如前述請求項中任一項之化合物，其中R 4、R 5及R 7係 各獨立地為-H、-R 2、-OH、-OR 2、-SH、-SR 2、-NH 2、-NHR 2、-NR 2R 3、-NO 2、鹵基或聚乙二醇單元-(OCH 2CH 2) r-OR a。
  37. 如前述請求項中任一項之化合物，其中R 4及R 7一起形成雙-氧C 1-3伸烷基。
  38. 如前述請求項中任一項之化合物，其中各R 8係獨立地為-OH、鹵基、-NO 2、-CN、-N 3、-OR 2、-COOH、-COOR 2、-COR 2、-OCONR 13R 14、-CONR 13R 14、-CO-NH-(C 1-6伸烷基)-R 13a、C 1-10烷基、C 3-10環烷基、C 2-10烯基、C 2-10炔基、聚乙二醇單元-(OCH 2CH 2) r-OR a、3至14員雜環烷基、5至12員雜芳基、-S(=O) 2R 12、-S(=O) 2NR 13R 14、-SR 12、-NH(C=NH)NH 2或-R 20-R 21-NR 13R 14。
  39. 如前述請求項中任一項之化合物，其中R 20及R 21各者係鍵結。
  40. 如前述請求項中任一項之化合物，其中R 20及R 21中的一者係鍵結且另一者不為鍵結。
  41. 如前述請求項中任一項之化合物，其中R 20係鍵結且R 21係C 1-10伸烷基。
  42. 如前述請求項中任一項之化合物，其中R 21係鍵結且 R 20係C 6-10伸芳基、3至14員雜伸環烷基或5至12員雜伸芳基。
  43. 如前述請求項中任一項之化合物，其中各R 8係獨立地為-OH、-OR 2、-COOH、-COOR 2、-COR 2、-OCONR 13R 14、-CONR 13R 14、-CO-NH-(C 1-6伸烷基)-R 13a、聚乙二醇單元-(OCH 2CH 2) r-OR a、3至7員雜環烷基、5至6員雜芳基、-S(=O) 2R 12、-S(=O) 2NR 13R 14、-SR 12或-R 20-R 21-NR 13R 14；其中R 13及R 14係各獨立地為-H或C 1-10烷基；各R 20係伸苯基；且各R 21係獨立地為C 1-4伸烷基。
  44. 如前述請求項中任一項之化合物，其中R 10及R 11與彼等所分別接附之氮原子及碳原子一起形成N=C雙鍵。
  45. 如前述請求項中任一項之化合物，其中R 10係-H或氮保護基，且R 11係-QR Q。
  46. 如前述請求項中任一項之化合物，其中R 15、R 16、R 17及R 18係各獨立地為-H、-OH、鹵基、-NO 2、-CN、-N 3、-OR 2、-COOH、-COOR 2、-COR 2、-OCONR 13R 14、C 1-10烷基、C 3-10環烷基、C 2-10烯基、C 2-10炔基、聚乙二醇單元-(OCH 2CH 2) r-OR a、3至14員雜環烷基、5至12員雜芳基、-NR 13R 14、-S(=O) 2R 12、-S(=O) 2NR 13R 14、-SR 12或 -NH(C=NH)NH 2。
  47. 如前述請求項中任一項之化合物，其中R 15、R 16及R 18各係-H；且R 17係-NH 2。
  48. 如前述請求項中任一項之化合物，其中R 15、R 16及R 17各係-H；且R 18係-NH 2。
  49. 如前述請求項中任一項之化合物，其中m係0。
  50. 如前述請求項中任一項之化合物，其中m係1。
  51. 如前述請求項中任一項之化合物，其中m係2。
  52. 如前述請求項中任一項之化合物，其中該化合物係式(II-a)至(II-p)中任何者： ，或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
  53. 如前述請求項中任一項之化合物，其中該化合物係式(III-a)至(III-c)中任何者： ，或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
  54. 如前述請求項中任一項之化合物，其中該化合物係含有至多一個-SO xM或-OSO xM。
  55. 如前述請求項中任一項之化合物，其中R 11係-OSO xM或SO xM。
  56. 如前述請求項中任一項之化合物，其中該化合物係： 或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
  57. 如前述請求項中任一項之化合物，其中該化合物係： 或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物，其中：R 13係H；R 14係H或甲基；及p係1、2、3或4。
  58. 一種如前述請求項中任一項之化合物之共軛物，其中該共軛物包含直接或間接連接至該化合物之抗體或抗體片段。
  59. 如前述請求項中任一項之共軛物，其進一步包含一或多個經連接至該抗體或抗體片段及該化合物兩者之聚合物支架，其中該化合物係經由該一或多個聚合物支架而連接至該抗體或抗體片段。
  60. 如前述請求項中任一項之共軛物，其中該一或多個聚合物支架獨立地包含聚(1-羥甲基伸乙基羥甲基縮甲醛)(poly(1-hydroxymethylethylene hydroxymethyl-formal))(PHF)。
  61. 如前述請求項中任一項之共軛物，其中該PHF具有範圍在約2kDa至約40kDa之分子量。
  62. 如前述請求項中任一項之共軛物，其中該如前述請求項中任一項之化合物在與該抗體或抗體片段共軛時係式(VI) 、或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物，其中：該抗體或抗體片段係直接或間接連接至該化合物在E "、D "、R " 7或R " 10中之一者的位置；且E "、D "、R " 7或R " 10的其餘者分別係E、D、R 7、或R 10；其中：E "係E或 ；其中 表示直接或間接經由E的官能基基團鍵聯至抗體或抗體片段；D "係D或 ；其中 表示直接或間接經由D的官能基基團鍵聯至抗體或抗體片段；R " 7係R 7或 ；其中 表示直接或間接經由R 7的官能基基團鍵聯至抗體或抗體片段；及R " 10係R 10或 ；其中 表示直接或間接經由R 10的官能基基團鍵聯至抗體或抗體片段。
  63. 如前述請求項中任一項之共軛物，其中E "係 ；D "係D；R " 7係R 7；及R " 10係R 10。
  64. 如前述請求項中任一項之共軛物，其中D "係 ；E "係E；R " 7係R 7；及R " 10係R 10。
  65. 如前述請求項中任一項之共軛物，其中R " 7係 ；E "係E；D "係D；及R " 10係R 10。
  66. 如前述請求項中任一項之共軛物，其中R " 10係 ；E "係E；D "係D；及R " 7係R 7。
  67. 如前述請求項中任一項之共軛物，其中該共軛物係 或其互變異構物、或該化合物或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽類或溶劑合物。
  68. 一種醫藥組成物，其包含如前述請求項中任一項之化合物或共軛物以及醫藥上可接受之載體。
  69. 如前述請求項中任一項之化合物或共軛物，其係用於醫療方法。
  70. 如前述請求項中任一項之化合物或共軛物，其係用於治療癌症之方法。
  71. 一種用於治療癌症之方法，該方法包含將有效量的如前述請求項中任一項之化合物或共軛物投與至需要彼之個體。
  72. 一種如前述請求項中任一項之化合物或共軛物用於製造供治療癌症的藥物之用途。
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