ES2920123T3 - Conjugados de pirrolobenzodiazepina - Google Patents

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Luke Masterson
Thais Cailleau
Nazzareno Dimasi
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Abstract

Un conjugado de Fórmula I, en el que AB es un anticuerpo modificado que tiene al menos un sitio de conjugación libre en cada cadena pesada. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Conjugados de pirrolobenzodiazepina
La presente invención se refiere a conjugados que comprenden pirrolobenzodiazepinas y dímeros relacionados (PBD) y a los enlazadores de fármaco precursores usados para crear tales conjugados.
Antecedentes de la invención
Algunas pirrolobenzodiazepinas (las PBD) tienen la capacidad de reconocer y unirse a secuencias específicas de ADN; la secuencia preferida es PuGPu. El primer antibiótico antitumoral de PBD, la antramicina, se descubrió en 1965 (Leimgruber, et al., J. Am. Chem. Soc., 87, 5793-5795 (1965); Leimgruber, et al., J. Am. Chem. Soc., 87, 5791­ 5793 (1965)). Desde entonces, se ha informado de una serie de PBD de origen natural y se han desarrollado más de 10 rutas de síntesis para diversos análogos (Thurston, et al., Chem. Rev. 1994, 433-465 (1994)). Los miembros de la familia incluyen abeimicina (Hochlowski, et al., J. Antibiotics, 40, 145-148 (1987)), chicamicina (Konishi, et al., J. Antibiotics, 37, 200-206 (1984)), DC-81 (Patente Japonesa 58-180 487; Thurston, et al., Chem. Brit., 26, 767-772 (1990); Bose, et al., Tetrahedron, 48, 751-758 (1992)), mazetramicina (Kuminoto, et al., J. Antibiotics, 33, 665-667 (1980)), neotramicinas A y B (Takeuchi, et al., J. Antibiotics, 29, 93-96 (1976)), porotramicina (Tsunakawa, et al., J. Antibiotics, 41, 1366-1373 (1988)), protracarcina (Shimizu, et al, J. Antibiotics, 29, 2492-2503 (1982); Langley y Thurston, J. Org. Chem., 52, 91-97 (1987)), sibanomicina (DC-102) (Hara, et al., J. Antibiotics, 41, 702-704 (1988); Itoh, et al., J. Antibiotics, 41, 1281-1284 (1988)), sibiromicina (Leber, et al., J. Am. Chem. Soc., 110, 2992-2993 (1988)) y tomamicina (Arima, et al., J. Antibiotics, 25, 437-444 (1972)). Las PBD tienen la estructura general:
Figure imgf000002_0001
Difieren en el número, el tipo y la posición de los sustituyentes, tanto en sus anillos aromáticos A como en los anillos pirrolo C, y en el grado de saturación del anillo C. En el anillo B, hay una imina (N=C), una carbinolamina (NH-CH(OH)) o un metil éter de carbinolamina (NH-CH(OMe)) en la posición N10-C11, que es el centro electrófilo responsable de alquilar el ADN. Todos los productos naturales conocidos tienen una configuración (S) en la posición quiral C11a que les proporciona un giro dextrógiro cuando se observan desde el anillo C hacia el anillo A. Esto les da la forma tridimensional apropiada para la isohelicidad con el surco menor del ADN de forma B, dando lugar a un ajuste ceñido en el sitio de unión (Kohn, en Antibiotics III. Springer-Verlag, Nueva York, pág. 3-11 (1975); Hurley y Needham-VanDevanter, Acc. Chem. Res., 19, 230-237 (1986)). Su capacidad para formar un aducto en el surco menor les permite interferir con el procesamiento del ADN, de ahí su uso como agentes antitumorales.
Se ha divulgado anteriormente que la actividad biológica de esta molécula se puede potenciar uniendo dos unidades de PBD entre sí a través de sus funcionalidades C8/C'-hidroxilo a través de un enlazador de alquileno flexible (Bose, D.S., et al., J. Am. Chem. Soc., 114, 4939-4941 (1992); Thurston, D.E., et al., J. Org. Chem., 61, 8141-8147 (1996)). Se cree que los dímeros de PBD forman lesiones en el ADN selectivas de la secuencia, tales como el enlace cruzado 5'-Pu-GATC-Py-3' palindrómico entre cadenas (Smellie, M., et al., Biochemistry, 42, 8232-8239 (2003); Martin, C., et al., Biochemistry, 44, 4135-4147) que se cree que es el principal responsable de su actividad biológica. Un ejemplo de un dímero de PBD es SG2000 (SJG-136):
Figure imgf000002_0002
(Gregson, S., et al., J. Med. Chem., 44, 737-748 (2001); Alley, M.C., et al., Cancer Research, 64, 6700-6706 (2004); Hartley, J.A., et al., Cancer Research, 64, 6693-6699 (2004)) que ha participado en ensayos clínicos como agente independiente, por ejemplo, NCT02034227 que investiga su uso en el tratamiento de la leucemia mieloide aguda y la leucemia linfocítica crónica (véase: https://www.clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02034227).
Los compuestos de PBD diméricos que portan sustituyentes de arilo C2, tales como SG2202 (ZC-207), se divulgan en el documento WO 2005/085251:
Figure imgf000003_0001
y en el documento WO2006/111759, bisulfitos de tales compuestos de PBD, por ejemplo, SG2285 (ZC-423):
Figure imgf000003_0002
Se ha demostrado que estos compuestos son agentes citotóxicos muy útiles (Howard, P.W., et al., Bioorg. Med. Chem. (2009), doi: 10.1016/j.bmcl.2009.09.012).
El documento WO 2007/085930 describe la preparación de compuestos de PBD diméricos que tienen grupos de enlazador para la conexión con un agente de unión a células, tal como un anticuerpo. El enlazador está presente en el puente que enlaza las unidades de PBD monomérica del dímero.
En el documento WO 2011/130598, se describen compuestos de PBD diméricos que tienen grupos de enlazador para la conexión con un agente de unión a células, tal como un anticuerpo. En estos compuestos, el enlazador está unido a una de las posiciones N10 disponibles y, generalmente, se escinden mediante la acción de una enzima sobre el grupo de enlazador. Si la posición N10 no unida está protegida con un grupo de protección, los grupos de protección de ejemplo tienen el mismo desencadenante de la escisión que el enlazador al anticuerpo.
Los compuestos de PBD diméricos que tienen grupos de enlazador para la conexión con un agente de unión a células, tal como un anticuerpo, también se describen en los documentos WO 2011/130613, WO 2011/130616, WO 2013/053873, WO 2013/053871, WO 2013/041606, WO 2013/055993, WO2013/055990, WO 2014/057073 y WO 2015/052321. En estos compuestos, el enlazador está unido al núcleo de PBD a través de la posición C2 y, generalmente, se escinden mediante la acción de una enzima sobre el grupo de enlazador.
Resulta de particular interés la talirina que, cuando se conjuga con un anticuerpo anti-CD33, forma Vadastuximab talirina (SGN-CD33A) (Sutherland, M, et al., Blood 2013 122:1455-1463; doi: 10.1182/blood-2013-03-491506). Este ADC se somete en ensayos clínicos para el tratamiento de la LMA. SGN-CD33A tiene la estructura general:
Figure imgf000003_0003
Divulgación de la invención
La presente invención proporciona PBD y conjugados de dímeros de PBD relacionados en donde las PBD se conjugan con anticuerpos que se modifican para que tengan al menos un sitio de conjugación libre en cada cadena pesada y donde la conjugación es a través de sustituyentes en ambos grupos C2 de la PBD a través de los respectivos enlazadores.
La presente invención también proporciona enlazadores de fármaco de PBD y dímeros relacionados, adecuados para su conjugación con anticuerpos modificados, donde el dímero tiene grupos de enlace en los sustituyentes en ambos grupos C2.
Un primer aspecto de la presente invención proporciona un conjugado de fórmula I:
Figure imgf000004_0001
Ab es un anticuerpo modificado que tiene al menos un sitio de conjugación libre en cada cadena pesada;
R2 es de fórmula IIIa, de fórmula IIIb o de fórmula IIIc:
( .a) ^ Q 1' A - Q 2' X Illa
donde A es un grupo arilo C5-7 y
(i) Q1 es un enlace simple y Q2 se selecciona de un enlace simple y -Z-(CH2)n-, donde Z se selecciona de un enlace simple, O, S y NH y n es de 1 a 3; o
(ii) Q1 es -CH=CH- y Q2 es un enlace simple;
Figure imgf000004_0003
(c)
donde Q se selecciona de O-RL1, S-RL1 y NRN-RL1 y RN se selecciona de H, metilo y etilo
X se selecciona del grupo que comprende: O-RL1, S-RL1, CO2-R1-1, CO-RL1, NH-C(=O)-RL1, NHNH-RL1, CONHNH-RL1,
Figure imgf000004_0002
NRNRL1, en donde RN se selecciona del grupo que comprende H y alquilo C1-4;
RL1 es un enlazador para la conexión con el anticuerpo (Ab);
R2' se selecciona de los mismos grupos que R2 y está enlazado al mismo anticuerpo;
R6 y R9 se seleccionan independientemente de H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', nitro, Me3Sn y halo; donde R y R' se seleccionan independientemente de grupos alquilo C1-12, heterociclilo C3-20 y arilo C5-20 opcionalmente sustituidos;
R7 se selecciona de H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', nitro, Me3Sn y halo;
R" es un grupo alquileno C3-12, cuya cadena puede estar interrumpida por uno o más heteroátomos, por ejemplo, O, S, NRN2 (donde RN2 es H o alquilo C1-4) y/o anillos aromáticos, por ejemplo, benceno o piridina;
Y e Y' se seleccionan de O, S o NH;
R10 y R11 forman juntos un doble enlace entre los átomos de nitrógeno y de carbono a los que están unidos o; R10 es H y R11 se selecciona de OH, ORA y SOzM;
R30 y R31 forman juntos un doble enlace entre los átomos de nitrógeno y de carbono a los que están unidos o; R30 es H y R31 se selecciona de OH, ORA y SOzM;
R6', R7' y R9' se seleccionan de los mismos grupos que R6, R7 y R9, respectivamente.
Se cree que tales ADC que eficazmente tienen una relación de fármaco-anticuerpo (DAR) de 1 podrían ofrecer ventajas significativas, incluyendo la reducción de la toxicidad fuera de la diana y una ventana terapéutica potenciada mediante la reducción del requisito de dosis mínima eficaz sobre los ADC que consisten en mezclas heterogéneas con DAR más altas.
Un segundo aspecto de la presente invención comprende un compuesto con la fórmula II:
Figure imgf000005_0001
y sales y solvatos del mismo,
en donde R6, R7, R9, R10, R11, Y, R", Y', R6', R7', R9', R30 y R31 son como se definen en el primer aspecto de la invención;
R12 es de fórmula IVa, fórmula IVb o fórmula IVc:
Figure imgf000005_0002
a
donde A es un grupo arilo C5-7 y
(i) Q1 es un enlace simple y Q2 se selecciona de un enlace simple y -Z-(CH2)n-, donde Z se selecciona de un enlace simple, O, S y NH y n es de 1 a 3; o
(ii) Q1 es -CH=CH- y Q2 es un enlace simple;
Figure imgf000005_0003
donde;
RC1, RC2 y RC3 se seleccionan independientemente de H y alquilo C1-2 no sustituido;
Figure imgf000005_0004
(c)
donde Q* se selecciona de O-RG1, S-RG1 y NRN-RG1 y RN se selecciona de H, metilo y etilo
X* se selecciona del grupo que comprende: O-RG1, S-RG1, CO2-RG1, CO-RG1, NH-C(=O)-RG1, NHNH-RG1, CONHNH-RG1,
Figure imgf000005_0005
NRNRG1, en donde RN se selecciona del grupo que comprende H y alquilo C1-4;
RG1 es QX-Z-GL,
en donde
QX se selecciona del grupo que consiste en un residuo de aminoácido, un residuo dipeptídico y un residuo tripeptídico,
Z es
Figure imgf000006_0001
donde a = de 0 a 5, b = de 0 a 16, c = 0 o 1, d = de 0 a 5 y ees 0 o 1 y GLse selecciona de:
Figure imgf000006_0002
continuación
Figure imgf000007_0001
donde Ar representa un grupo arileno C5-6, por ejemplo, fenileno y X representa alquilo C1-4; R12' se selecciona de los mismos grupos que R12.
El tercer aspecto proporciona un conjugado para el primer aspecto de la invención para su uso en el tratamiento de una enfermedad proliferativa. El tercer aspecto también proporciona los conjugados para su uso en un método de tratamiento de una enfermedad proliferativa que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un conjugado del primer aspecto de la invención a un paciente que lo necesite.
Un experto habitual en la materia es capaz de determinar fácilmente si un conjugado experimental trata o no una afección proliferativa para cualquier tipo de célula en particular. Por ejemplo, los ensayos que pueden usarse convenientemente para evaluar la actividad ofrecida por un compuesto en particular se describen en los ejemplos, a continuación.
El conjugado del primer aspecto de la invención se puede sintetizar mediante la conjugación de un compuesto (enlazador de fármaco) del segundo aspecto de la invención con un anticuerpo como se define en el primer aspecto de la invención.
Breve descripción de las figuras
La Figura 1 muestra representaciones esquemáticas de (A) anticuerpos modificados adecuados para su uso en la presente invención, (B) un conjugado de anticuerpo-fármaco que comprende una PBD de la presente invención; la Figura 2 muestra las secuencias de cadena pesada y ligera de un Flexmab de Herceptin.
Definiciones
Sustituyentes
La expresión "opcionalmente sustituido", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo precursor que puede no estar sustituido o que puede estar sustituido.
A menos que se especifique de otra manera, el término "sustituido", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo precursor que porta uno o más sustituyentes. El término "sustituyente" se usa en el presente documento en el sentido convencional y se refiere a un resto químico que está covalentemente unido a o, si es adecuado, condensado a, un grupo precursor. Se conoce bien una amplia diversidad de sustituyentes y también se conocen bien los métodos para su formación e introducción en diversos grupos precursores.
A continuación, se describen con más detalle los ejemplos de sustituyentes.
Alquilo C1-12: la expresión "alquilo C1-12", como se usa en el presente documento, se refiere a un resto monovalente obtenido mediante la eliminación de un átomo de hidrógeno de un átomo de carbono de un compuesto hidrocarbonado que tiene de 1 a 12 átomos de carbono, que puede ser alifático o alicíclico y que puede estar saturado o insaturado (por ejemplo, parcialmente insaturado, completamente insaturado). La expresión "alquilo C1-4", como se usa en el presente documento, se refiere a un resto monovalente obtenido mediante la eliminación de un átomo de hidrógeno de un átomo de carbono de un compuesto hidrocarbonado que tiene de 1 a 4 átomos de carbono, que puede ser alifático o alicíclico y que puede estar saturado o insaturado (por ejemplo, parcialmente insaturado, completamente insaturado). Por lo tanto, el término "alquilo" incluye las subclases alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, etc., que se analizan a continuación.
Los ejemplos de grupos alquilo saturados incluyen, pero sin limitación, metilo (C1), etilo (C2), propilo (C3), butilo (C4), pentilo (C5), hexilo (Ce) y heptilo (C7).
Los ejemplos de grupos alquilo lineales saturados incluyen, pero sin limitación, metilo (Ci ), etilo (C2), n-propilo (C3), n-butilo (C4), n-pentilo (amilo) (C5), n-hexilo (Ce) y n-heptilo (C7).
Los ejemplos de grupos alquilo ramificados saturados incluyen iso-propilo (C3), iso-butilo (C4), sec-butilo (C4), tercbutilo (C4), iso-pentilo (C5) y neo-pentilo (C5).
Alquenilo C2-12: la expresión "alquenilo C2-12", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo que tiene uno o más dobles enlaces carbono-carbono.
Los ejemplos de grupos alquenilo insaturados incluyen, pero sin limitación, etenilo (vinilo, -CH=CH2), 1-propenilo (-CH=CH-CH3), 2-propenilo (alilo, -CH-CH=CH2), isopropenilo (1-metilvinilo, -C(CH3)=CH2), butenilo (C4), pentenilo (C5) y hexenilo (Ce).
Alquinilo C2-12: La expresión "alquinilo C2-12", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo que tiene uno o más triples enlaces carbono-carbono.
Los ejemplos de grupos alquinilo insaturados incluyen, pero sin limitación, etinilo (-C=CH) y 2-propinilo (propargilo, -CH2-CECH).
Cicloalquilo C3-12: la expresión "cicloalquilo C3-12", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo que es también un grupo ciclilo; es decir, un resto monovalente obtenido mediante la eliminación de un átomo de hidrógeno de un átomo en el anillo alicíclico de un compuesto hidrocarbonado cíclico (carbocíclico), resto que tiene de 3 a 7 átomos de carbono, incluyendo de 3 a 7 átomos en el anillo.
Los ejemplos de grupos cicloalquilo incluyen, pero sin limitación, los derivados de:
compuestos hidrocarbonados monocíclicos saturados: ciclopropano (C3), ciclobutano (C4), ciclopentano (C5), ciclohexano (Ce), cicloheptano (C7), metilciclopropano (C4), dimetilciclopropano (C5), metilciclobutano (C5), dimetilciclobutano (Ce), metilciclopentano (Ce), dimetilciclopentano (C7) y metilciclohexano (C7); compuestos hidrocarbonados monocíclicos insaturados: ciclopropeno (C3), ciclobuteno (C4), ciclopenteno (C5), ciclohexeno (Ce), metilciclopropeno (C4), dimetilciclopropeno (C5), metilciclobuteno (C5), dimetilciclobuteno (Ce), metilciclopenteno (Ce), dimetilciclopenteno (C7) y metilciclohexeno (C7);
y compuestos hidrocarbonados policíclicos saturados: norcarano (C7), norpinano (C7), norbornano (C7).
Heterociclilo C3-20: la expresión "heterociclilo C3-20", como se usa en el presente documento, se refiere a un resto monovalente obtenido mediante la eliminación de un átomo de hidrógeno de un átomo del anillo de un compuesto heterocíclico, resto que tiene de 3 a 20 átomos en el anillo, de los que de 1 a 10 son heteroátomos en el anillo. Preferentemente, cada anillo tiene de 3 a 7 átomos en el anillo, de los que de 1 a 4 son heteroátomos en el anillo.
En este contexto, los prefijos (por ejemplo, C3-20, C3-7, C5-6, etc.) indican el número de átomos en el anillo o el intervalo del número de átomos en el anillo, ya sean átomos de carbono o heteroátomos. Por ejemplo, la expresión "heterociclilo C5-6", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo heterociclilo que tiene 5 o 6 átomos en el anillo.
Los ejemplos de grupos heterociclilo monocíclicos incluyen, pero sin limitación, los derivados de:
N1: aziridina (C3), azetidina (C4), pirrolidina (tetrahidropirrol) (C5), pirrolina (por ejemplo, 3-pirrolina, 2,5-dihidropirrol) (C5), 2H-pirrol o 3H-pirrol (isopirrol, isoazol) (C5), piperidina (Ce), dihidropiridina (Ce), tetrahidropiridina (Ce), azepina (C7);
O1: oxirano (C3), oxetano (C4), oxolano (tetrahidrofurano) (C5), oxol (dihidrofurano) (C5), oxano (tetrahidropirano) (Ce), dihidropirano (Ce), pirano Ce) y oxepina (C7);
S1: tiirano (C3), tietano (C4), tiolano (tetrahidrotiofeno) (C5), tiano (tetrahidrotiopirano) (Ce), tiepano (C7);
O2: dioxolano (C5), dioxano (Ce) y dioxepano (C7);
O3: trioxano (Ce);
N2: imidazolidina (C5), pirazolidina (diazolidina) (C5), imidazolina (C5), pirazolina (dihidropirazol) (C5), piperazina (Ce);
N1O1: tetrahidrooxazol (C5), dihidrooxazol (C5), tetrahidroisoxazol (C5), dihidroisoxazol (C5), morfolina (Ce), tetrahidrooxazina (Ce), dihidrooxazina (Ce), oxazina (Ce);
N1S1: tiazolina (C5), tiazolidina (C5), tiomorfolina (Ce);
N2O1: oxadiazina (Ce);
O1S1: oxatiol (C5) y oxatiano (tioxano) (Ce); y,
N1O1S1: oxatiazina (Ce).
Los ejemplos de grupos heterociclilo monocíclicos sustituidos incluyen los derivados de sacáridos, en forma cíclica, por ejemplo, furanosas (C5), tales como arabinofuranosa, lixofuranosa, ribofuranosa y xilofuranosa, y piranosas (Ce), tales como alopiranosa, altropiranosa, glucopiranosa, manopiranosa, gulopiranosa, idopiranosa, galactopiranosa y talopiranosa.
Arilo C5-20: la expresión "arilo C5-20", como se usa en el presente documento, se refiere a un resto monovalente obtenido mediante la eliminación de un átomo de hidrógeno de un átomo en el anillo aromático de un compuesto aromático, resto que tiene de 3 a 20 átomos en el anillo. La expresión "arilo C5-7", como se usa en el presente documento, se refiere a un resto monovalente obtenido mediante la eliminación de un átomo de hidrógeno de un átomo en el anillo aromático de un compuesto aromático, resto que tiene de 5 a 7 átomos en el anillo, y la expresión "arilo C5-10", como se usa en el presente documento, se refiere a un resto monovalente obtenido mediante la eliminación de un átomo de hidrógeno de un átomo en el anillo aromático de un compuesto aromático, resto que tiene de 5 a 10 átomos en el anillo. Preferentemente, cada anillo tiene de 5 a 7 átomos en el anillo.
En este contexto, los prefijos (por ejemplo, C3-20, C5-7, C5-e, C5-10, etc.) indican el número de átomos en el anillo o el intervalo del número de átomos en el anillo, ya sean átomos de carbono o heteroátomos. Por ejemplo, la expresión "arilo C5-e", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo arilo que tiene 5 o e átomos en el anillo.
Los átomos en el anillo pueden ser todos átomos de carbono, como en los "grupos carboarilo".
Los ejemplos de grupos carboarilo incluyen, pero sin limitación, los derivados de benceno (es decir, fenilo) (Ce), naftaleno (C10), azuleno (C10), antraceno (C14), fenantreno (C14), naptaceno (C18) y pireno (C1e).
Los ejemplos de grupos arilo que comprenden anillos condensados, siendo al menos uno de ellos un anillo aromático, incluyen, pero sin limitación, grupos derivados de indano (por ejemplo, 2,3-dihidro-1H-indeno) (C9), indeno (C9), isoindeno (C9), tetralina (1,2,3,4-tetrahidronaftaleno (C10), acenafteno (C12), fluoreno (C13), fenaleno (C13), acefenantreno (C15) y aceantreno (C1e).
Como alternativa, los átomos en el anillo pueden incluir uno o más heteroátomos, como en los "grupos heteroarilo". Los ejemplos de grupos heteroarilo monocíclicos incluyen, pero sin limitación, los derivados de:
N1: pirrol (azol) (C5), piridina (azina) (Ce);
O1: furano (oxol) (C5);
S1: tiofeno (tiol) (C5);
N1O1: oxazol (C5), isoxazol (C5), isoxazina (Ce);
N2O1: oxadiazol (furazano) (C5);
N3O1: oxatriazol (C5);
N1S1: tiazol (C5), isotiazol (C5);
N2: imidazol (1,3-diazol) (C5), pirazol (1,2-diazol) (C5), piridazina (1,2-diazina) (Ce), pirimidina (1,3-diazina) (Ce) (por ejemplo, citosina, timina, uracilo), pirazina (1,4-diazina) (Ce);
N3: triazol (C5), triazina (Ce); y,
N4: tetrazol (C5).
Los ejemplos de heteroarilo que comprenden anillos condensados, incluyen, pero sin limitación:
C9 (con 2 anillos condensados) derivados de benzofurano (O1), isobenzofurano (O1), indol (N1), isoindol (N1), indolizina (N1), indolina (N1), isoindolina (N1), purina (N4) (por ejemplo, adenina, guanina), bencimidazol (N2), indazol (N2), benzoxazol (N1O1), bencisoxazol (N1O1), benzodioxol (O2), benzofurazano (N2O1), benzotriazol (N3), benzotiofurano (S1), benzotiazol (N1S1), benzotiadiazol (N2S);
C10 (con 2 anillos condensados) derivados de cromeno (O1), isocromeno (O1), cromano (O1), isocromano (O1), benzodioxano (O2), quinolina (N1), isoquinolina (N1), quinolizina (N1), benzoxazina (N1O1), benzodiazina (N2), piridopiridina (N2), quinoxalina (N2), quinazolina (N2), cinnolina (N2), ftalazina (N2), naftiridina (N2), pteridina (N4); C11 (con 2 anillos condensados) derivados de benzodiazepina (N2);
C13 (con 3 anillos condensados) derivados de carbazol (N1), dibenzofurano (O1), dibenzotiofeno (S1), carbolina (N2), perimidina (N2), piridoindol (N2); y,
C14 (con 3 anillos condensados) derivados de acridina (N1), xanteno (O1), tioxanteno (S1), oxantreno (O2), fenoxatiina (O1S1), fenazina (N2), fenoxazina (N1O1), fenotiazina (N1S1), tiantreno (S2), fenantridina (N1), fenantrolina (N2), fenazina (N2).
Los grupos anteriores, bien solos o como parte de otro sustituyente, opcionalmente pueden estar ellos mismos sustituidos con uno o más grupos seleccionados de ellos mismos y los sustituyentes adicionales indicados a continuación.
Halo: -F, -CI, -Br y -I.
Hidroxi: -OH.
Éter: -OR, en donde R es un sustituyente de éter, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7 (también denominado como un grupo alcoxi C1-7, analizado más adelante), un grupo heterociclilo C3-20 (también denominado como un grupo heterocicliloxi C3-20) o un grupo arilo C5-20 (también denominado como un grupo ariloxi C5-20), preferentemente un grupo alquilo C1-7.
Alcoxi: -OR, en donde R es un grupo alquilo, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos alcoxi C1-7 incluyen, pero sin limitación, -OMe (metoxi), -OEt (etoxi), -O(nPr) (n-propoxi), -O(iPr) (isopropoxi), -O(nBu) (n-butoxi), -O(sBu) (sec-butoxi), -O(iBu) (isobutoxi) y -O(tBu) (ferc-butoxi).
Acetal: -CH(OR1)(OR2), en donde R1 y R2 son independientemente sustituyentes de acetal, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7 o, en el caso de un grupo acetal "cíclico", R1 y R2, tomados junto con los dos átomos de oxígeno a los que están unidos y los átomos de carbono a los que están unidos, forman un anillo heterocíclico que tiene de 4 a 8 átomos en el anillo. Los ejemplos de grupos acetal incluyen, pero sin limitación, -CH(OMe)2, -CH(OEt)2 y -CH(OMe)(OEt).
Hemiacetal: -CH(OH)(OR1), en donde R1 es un sustituyente de hemiacetal, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos hemiacetal incluyen, pero sin limitación, -CH(OH)(OMe) y -CH(OH)(OEt).
Cetal: -CR(OR1)(OR2), donde R1 y R2 son como se han definido para los acetales y R es un sustituyente de cetal diferente del hidrógeno, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos cetal incluyen, pero sin limitación, -C(Me)(OMe)2, -C(Me)(OEt)2, -C(Me)(OMe)(OEt), -C(Et)(OMe)2, -C(Et)(OEt)2 y -C(Et)(OMe)(OEt).
Hemicetal: -CR(OH)(OR1), donde R1 es como se ha definido para los hemicetales y R es un sustituyente de hemicetal diferente del hidrógeno, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos hemiacetal incluyen, pero sin limitación, -C(Me)(OH)(OMe), -C(Et)(OH)(OMe), -C(Me)(OH)(OEt) y -C(Et)(OH)(OEt).
Oxo (ceto, -ona): =O.
Tiona (tiocetona): =S.
Imino (imina): =NR, en donde R es un sustituyente de imina, por ejemplo, hidrógeno, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente hidrógeno o un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos éster incluyen, pero sin limitación, =NH, =NMe, =NEt y =NPh.
Formilo (carbaldehído, carboxaldehído): -C(=O)H.
Acilo (ceto): -C(=O)R, en donde R es un sustituyente de acilo, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7 (también denominado como alquilacilo C1-7 o alcanoílo C1.7), un grupo heterociclilo C3-20 (también denominado como heterociclilacilo C3-20) o un grupo arilo C5-20 (también denominado como arilacilo C5-20), preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos acilo incluyen, pero sin limitación, -C(=O)CH3 (acetilo), -C(=O)CH2CH3 (propionilo), -C(=O)C(CH3)3 (t-butirilo) y -C(=O)Ph (benzoílo, fenona).
Carboxi (ácido carboxílico): -C(=O)OH.
Tiocarboxi (ácido tiocarboxílico): -C(=S)SH.
Tiolocarboxi (ácido tiolocarboxílico): -C(=O)SH.
Tionocarboxi (ácido tionocarboxílico): -C(=S)OH.
Ácido imídico: -C(=NH)OH.
Ácido hidroxámico: -C(=NOH)OH.
Éster (carboxilato, éster de ácido carboxílico, oxicarbonilo): -C(=O)OR, en donde R es un sustituyente de éster, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos éster incluyen, pero sin limitación, -C(=O)OCH3, -C(=O)OCH2CH3, -C(=O)Oc (CH3)3 y C(=O)OPh.
Aciloxi (éster inverso): -OC(=O)R, en donde R es un sustituyente de aciloxi, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos aciloxi incluyen, pero sin limitación, -OC(=O)CH3 (acetoxi), -OC(=O)CH2CH3, -OC(=O)C(CH3)3, -OC(=O)Ph y -OC(=O)CH2Ph.
Oxicarboiloxi: -OC(=O)OR, en donde R es un sustituyente de éster, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos éster incluyen, pero sin limitación, -OC(=O)OCH3, -OC(=O)OCH2CH3, -OC(=O)OC(CH3)3 y -OC(=O)OPh.
Amino: -NR1R2, en donde R1 y R2 son independientemente sustituyentes de amino, por ejemplo, hidrógeno, un grupo alquilo C1-7 (también denominado como alquilamino C1-7 o di-alquil C1-7 amino), un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente H o un grupo alquilo C1-7 o, en el caso de un grupo amino "cíclico", R1 y R2, tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un anillo heterocíclico que tiene de 4 a 8 átomos en el anillo. Los grupos amino pueden ser primarios (-NH2), secundarios (-NHR1) o terciarios (-NHR1R2) y, en forma catiónica, pueden ser cuaternarios (-+NR1R2R3). Los ejemplos de grupos amino incluyen, pero sin limitación, -NH2, -NHCH3, -NhC(CH3)2, -N(CH3)2, -N(CH2CH3)2 y -NHPh. Los ejemplos de grupos amino cíclicos incluyen, pero sin limitación, aziridino, azetidino, pirrolidino, piperidino, piperazino, morfolino y tiomorfolino.
Amido (carbamoílo, carbamilo, aminocarbonilo, carboxamida): -C(=O)NR1R2, en donde R1 y R2 son independientemente sustituyentes de amino, como se define para los grupos amino. Los ejemplos de grupos amido incluyen, pero sin limitación, -C(=O)NH2, -C(=O)NHCH3, -C(=O)N(CH3)2, -C(=O)NHCH2CH3 y -C(=O)N(CH2CH3)2, así como grupos amido en los que R1 y R2, junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman una estructura heterocíclica como en, por ejemplo, piperidincarbonilo, morfolincarbonilo, tiomorfolincarbonilo y piperazincarbonilo.
Tioamido (tiocarbamilo): -C(=S)NR1R2, en donde R1 y R2 son independientemente sustituyentes de amino, como se define para los grupos amino. Los ejemplos de grupos amido incluyen, pero sin limitación, -C(=S)NH2, -c (=s )n h c h 3, -C(=S)N(CH3)2 y -C(=S)NHCH2CH3.
Acilamido (acilamino): -NR1C(=O)R2, en donde R1 es un sustituyente de amida, por ejemplo, hidrógeno, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente hidrógeno o un grupo alquilo C1-7, y R2 es un sustituyente de acilo, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente hidrógeno o un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos acilamida incluyen, pero sin limitación, -NHC(=O)CH3, -NHC(=O)CH2CH3 y -NHC(=O)Ph. R1 y R2 pueden formar juntos una estructura cíclica, como en, por ejemplo, succinimidilo, maleimidilo y ftalimidilo:
Figure imgf000011_0001
Aminocarboniloxi: -OC(=O)NR1R2, en donde R1 y R2 son independientemente sustituyentes de amino, como se define para los grupos amino. Los ejemplos de grupos aminocarboniloxi incluyen, pero sin limitación, -OC(=O)NH2, -OC(=O)NHMe, -OC(=O)NMe2 y -OC(=O)NEt2.
Ureido: -N(R1)CONR2R3, en donde R2 y R3 son independientemente sustituyentes de amino, como se define para los grupos amino, y R1 es un sustituyente de ureido, por ejemplo, hidrógeno, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente hidrógeno o un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos ureido incluyen, pero sin limitación, -NHCONH2, -NHCONHMe, -NHCONHEt, -NHCONMe2, -NHCONEt2, -NMeCONH2, -NMeCONHMe, -NMeCONHEt, -NMeCONMe2 y -NMeCONEt2.
Guanidino: -NH-C(=NH)NH2.
Tetrazolilo: un anillo aromático de cinco miembros que tiene cuatro átomos de nitrógeno y un átomo de carbono,
Figure imgf000011_0002
Imino: =NR, en donde R es un sustituyente de imina, por ejemplo, por ejemplo, hidrógeno, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente H o un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos imino incluyen, pero sin limitación, =NH, =NMe y =NEt.
Amidina (amidino): -C(=NR)NR2, en donde cada R es un sustituyente de amidina, por ejemplo, hidrógeno, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente H o un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos amidina incluyen, pero sin limitación, -C(=NH)NH2, -C(=NH)NMe2 y -C(=NMe)NMe2.
Nitro: -NO2.
Nitroso: -NO.
Azido: -N3.
Ciano (nitrilo, carbonitrilo): -CN.
Isociano: -NC.
Cianato: -OCN.
Isocianato: -NCO.
Tiociano (tiocianato): -SCN.
Isotiociano (isotiocianato): -NCS.
Sulfhidrilo (tiol, mercapto): -SH.
Tioéter (sulfuro): -SR, en donde R es un sustituyente de tioéter, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7 (también denominado como un grupo alquiltio C1-7), un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos alquiltio C1-7 incluyen, pero sin limitación, -SCH3 y -SCH2CH3.
Disulfuro: -SS-R, en donde R es un sustituyente de disulfuro, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7 (también denominado en el presente documento como disulfuro de alquilo C1-7). Los ejemplos de grupos disulfuro de alquilo C1-7 incluyen, pero sin limitación, -SSCH3 y -SSCH2CH3.
Sulfina (sulfinilo, sulfóxido): -S(=O)R, en donde R es un sustituyente de sulfina, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos sulfina incluyen, pero sin limitación, -S(=O)CH3y -S(=O)CH2CH3.
Sulfona (sulfonilo): -S(=O)2R, en donde R es un sustituyente de sulfona, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7, incluyendo, por ejemplo, un grupo alquilo C1.7 fluorado o perfluorado. Los ejemplos de grupos sulfona incluyen, pero sin limitación, -S(=O)2CH3 (metanosulfonilo, mesilo), -S(=O)2CF3 (triflilo), -S(=O)2CH2CH3 (esilo), -S(=O^C4Fg (nonaflilo), -S(=o )2c H2CF3 (tresilo), -S(=O)2CH2CH2NH2 (taurilo), -S(=O)2Ph (fenilsulfonilo, besilo), 4-metilfenilsulfonilo (tosilo), 4-clorofenilsulfonilo (closilo), 4-bromofenilsulfonilo (brosilo), 4-nitrofenilo (nosilo), 2-naftalenosulfonato (napsilo) y 5-dimetilamino-naftalen-1-ilsulfonato (dansilo).
Ácido sulfínico (sulfino): -S(=O)OH, -SO2H.
Ácido sulfónico (sulfo): -S(=O)2OH, -SO3H.
Sulfinato (éster de ácido sulfínico): -S(=O)OR; en donde R es un sustituyente de sulfinato, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos sulfinato incluyen, pero sin limitación, -S(=O)OCH3 (metoxisulfinilo; sulfinato de metilo) y -S(=O)OCH2CH3 (etoxisulfinilo; sulfinato de etilo).
Sulfonato (éster de ácido sulfónico): -S(=O)2OR, en donde R es un sustituyente de sulfonato, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos sulfonato incluyen, pero sin limitación, -S(=O)2OCH3 (metoxisulfonilo; sulfonato de metilo) y -S(=O)2OCH2CH3 (etoxisulfonilo; sulfonato de etilo).
Sulfiniloxi: -OS(=O)R, en donde R es un sustituyente de sulfiniloxi, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos sulfiniloxi incluyen, pero sin limitación, -OS(=O)CH3y -OS(=O)CH2CH3.
Sulfoniloxi: -OS(=O)2R, en donde R es un sustituyente de sulfoniloxi, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3.20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos sulfoniloxi incluyen, pero sin limitación, -OS(=O)2CH3 (mesilato) y -OS(=O)2CH2CH3 (esilato).
Sulfato: -OS(=O)2OR; en donde R es un sustituyente de sulfato, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos sulfato incluyen, pero sin limitación, -OS(=O)2OCH3 y -SO(=O)2OCH2CH3.
Sulfamilo (sulfamoílo; amida de ácido sulfínico; sulfinamida): -S(=O)NR1R2, en donde R1 y R2 son independientemente sustituyentes de amino, como se define para los grupos amino. Los ejemplos de grupos sulfamilo incluyen, pero sin limitación, -S(=O)NH2, -S(=O)NH(CH3), -S(=O)N(CH3)2, -S(=O)NH(CH2CH3), -S(=O)N(CH2CH3)2 y -S(=O)NHPh.
Sulfonamido (sulfinamoílo; amida de ácido sulfónico; sulfonamida): -S(=O)2NR1R2, en donde R1 y R2 son independientemente sustituyentes de amino, como se define para los grupos amino. Los ejemplos de grupos sulfonamido incluyen, pero sin limitación, -S(=O)2NH2, -S(=O)2NH(CH3), -S(=O)2N(CH3)2, -S(=O)2NH(CH2CH3), -S(=O)2N(CH2CH3)2 y -S(=O)2NHPh.
Sulfamino: -NR1S(=O)2OH, en donde R1 es un sustituyente de amino, como se define para los grupos amino. Los ejemplos de grupos sulfamino incluyen, pero sin limitación, -NHS(=O)2OH y -N(CH3)S(=O)2OH.
Sulfonamino: -NR1S(=O)2R, en donde R1 es un sustituyente de amino, como se define para los grupos amino, y R es un sustituyente de sulfonamino, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos sulfonamino incluyen, pero sin limitación, -NHS(=O)2CH3 y -N(CH3)S(=O)2CaH5.
Sulfinamino: -NR1S(=O)R, en donde R1 es un sustituyente de amino, como se define para los grupos amino, y R es un sustituyente sulfinamino, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos sulfinamino incluyen, pero sin limitación, -NHS(=O)CH3 y -N(CH3)S(=O)CaH5.
Fosfino (fosfina): -PR2, en donde R es un sustituyente de fosfino, por ejemplo, -H, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente -H, un grupo alquilo C1-7 o un grupo arilo C5-20. Los ejemplos de grupos fosfino incluyen, pero sin limitación, -PH2, -P(CH3)2, -P(CH2CH3)2, -P(t-Bu)2 y -P(Ph)2.
Fosfo: -P(=O)2.
Fosfinilo (óxido de fosfina): -P(=O)R2, en donde R es un sustituyente de fosfinilo, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7 o un grupo arilo C5-20. Los ejemplos de grupos fosfinilo incluyen, pero sin limitación, -P(=O)(CH3)2, -P(=O)(CH2CH3)2, -P(=O)(t-Bu)2 y -P(=O)(Ph)2.
Ácido fosfónico (fosfono): -P(=O)(OH)2.
Fosfonato (éster de fosfono): -P(=O)(OR)2, en donde R es un sustituyente de fosfonato, por ejemplo, -H, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente -H, un grupo alquilo C1-7 o un grupo arilo C5-20. Los ejemplos de grupos fosfonato incluyen, pero sin limitación, -P(=O)(OCH3)2, -P(=O)(OCH2CH3)2, -P(=O)(O-t-Bu)2 y -P(=O)(OPh)2.
Ácido fosfórico (fosfonoxi): -OP(=O)(OH)2.
Fosfato (éster de fosfonoxi): -OP(=O)(OR)2, donde R es un sustituyente de fosfato, por ejemplo, -H, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente -H, un grupo alquilo C1-7 o un grupo arilo C5-20. Los ejemplos de grupos fosfato incluyen, pero sin limitación, -OP(=O)(OCH3)2, -OP(=O)(OCH2CH3)2, -OP(=O)(O-t-Bu)2 y -OP(=O)(OPh)2.
Ácido fosforoso: -OP(OH)2.
Fosfito: -OP(OR)2, donde R es un sustituyente de fosfito, por ejemplo, -H, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente -H, un grupo alquilo C1-7 o un grupo arilo C5-20. Los ejemplos de grupos fosfito incluyen, pero sin limitación, -OP(OCH3)2, -OP(OCH2CH3)2, -OP(O-t-Bu)2 y -OP(OPh)2.
Fosforamidita: -OP(OR1)-NR22, donde R1 y R2 son sustituyentes de fosforamidita, por ejemplo, -H, un grupo alquilo C1-7 (opcionalmente sustituido), un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente -H, un grupo alquilo C1-7 o un grupo arilo C5-20. Los ejemplos de grupos fosforamidita incluyen, pero sin limitación, -OP(OCH2CH3) N(CHa)2, -OP(OCH2CHa)-N(i-Pr)2 y -OP(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2.
Fosforamidato: -OP(=O)(OR1)-NR22, donde R1 y R2 son sustituyentes de fosforamidato, por ejemplo, -H, un grupo alquilo C1-7 (opcionalmente sustituido), un grupo heterociclilo C3.20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente -H, un grupo alquilo C1-7 o un grupo arilo C5-20. Los ejemplos de grupos fosforamidato incluyen, pero sin limitación, -OP(=O)(OCH2CH3)-N(CH3)2, -OP(=O)(OCH2CH3)-N(i-Pr)2 y -OP(=O)(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2.
Alquileno
Alquileno C3-12: la expresión "alquileno C3-12", como se usa en el presente documento, se refiere a un resto bidentado obtenido mediante la eliminación de dos átomos de hidrógeno, bien ambos del mismo átomo de carbono o bien uno de cada uno de dos átomos de carbono diferentes, de un compuesto hidrocarbonado que tiene de 3 a 12 átomos de carbono (salvo que se indique otra cosa), que puede ser alifático o alicíclico y que puede ser saturado, parcialmente insaturado o completamente insaturado. Por lo tanto, el término "alquileno" incluye las subclases alquenileno, alquinileno, cicloalquileno, etc., que se analizan a continuación.
Los ejemplos de grupos alquileno C3-12 lineales saturados incluyen, pero sin limitación, -(CH2V donde n es un número entero de 3 a 12, por ejemplo, -CH2CH2CH2-(propileno), -CH2CH2CH2CH2-(butileno), -CH2CH2CH2CH2CH2-(pentileno) y -CH2CH2CH2CH-2CH2CH2CH2-(heptileno).
Los ejemplos de grupos alquileno C3-12 ramificados saturados incluyen, pero sin limitación, -CH(CH3)CH2-, -CH(CH3)CH2CH2-, -CH(CH3)CH2CH2CH2-, -CH2CH(CH3)CH2-, -CH2CH(CH3)CH2CH2-, -CH(CH2CH3)-, -CH(CH2CH3)CH2- y -CH2CH(CH2CH3)CH2-.
Los ejemplos de grupos alquileno C3-12 lineales parcialmente insaturados (alquenileno C3-12 y grupos alquinileno) incluyen, pero sin limitación, -CH=CH-CH2-, -CH2-CH=CH2-, -CH=CH-CH2-CH2-, -CH=CH-CH2-CH2-CH2-, -CH=CH-CH=CH-, -CH=CH-CH=CH-CH2-, -CH=CH-CH=CH-CH2-CH2-, -CH=CH-CH2-CH=CH-, -CH=CH-CH2-CH2-CH=CH- y -CH2-C=C-CH2-.
Los ejemplos de grupos alquileno C3-12 ramificados parcialmente insaturados (grupos alquenileno y alquinileno C3-12) incluyen, pero sin limitación, -C(CH3)=CH-, -C(CH3)=CH-CH2-, -CH=CH-CH(CH3)- y -C=C-CH(CH3)-.
Los ejemplos de grupos alquileno C3-12 alicíclicos saturados (cicloalquilenos C3-12) incluyen, pero sin limitación, ciclopentileno (por ejemplo, ciclopent-1,3-ileno) y ciclohexileno (por ejemplo, ciclohex-1,4-ileno).
Los ejemplos de grupos alquileno C3-12 alicíclicos parcialmente insaturados (cicloalquilenos C3-12) incluyen, pero sin limitación, ciclopentenileno (por ejemplo, 4-ciclopenten-1,3-ileno), ciclohexenileno (por ejemplo, 2-ciclohexen-1,4-ileno; 3-ciclohexen-1,2-ileno; 2,5-ciclohexadien-1,4-ileno).
Unidad de ligando
Las unidades de ligando para su uso en la presente invención son agentes de unión a células, más específicamente anticuerpos modificados o fragmentos de unión a antígeno de los mismos, que tienen al menos un sitio de conjugación en cada cadena pesada. En el documento WO 2012/064733 (presentado como PCT/US2011/059775), se divulgan ejemplos de anticuerpos modificados particulares adecuados para su uso de acuerdo con la presente invención.
Anticuerpos
Anticuerpos
El término "anticuerpo" se usa en el presente documento en el sentido más amplio y específicamente abarca anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales, dímeros, multímeros, anticuerpos multiespecíficos (por ejemplo, anticuerpos biespecíficos) y fragmentos de anticuerpos, siempre que presenten la actividad biológica deseada (Miller et al. (2003) Jour. of Immunology 170:4854-4861). Los anticuerpos pueden ser murinos, humanos, humanizados, quiméricos u obtenidos de otras especies. Un anticuerpo es una proteína generada por el sistema inmunitario que es capaz de reconocer y unirse a un antígeno específico. (Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology, 5a ed., Garland Publishing, Nueva York). Un antígeno diana tiene generalmente numerosos sitios de unión, también llamados epítopos, reconocidos por las CDR en múltiples anticuerpos. Cada anticuerpo que se une específicamente a un epítopo distinto tiene una estructura distinta. Por lo tanto, un antígeno puede tener más de un anticuerpo correspondiente. Un anticuerpo incluye una molécula de inmunoglobulina de longitud completa o una porción inmunológicamente activa de una molécula de inmunoglobulina de longitud completa, es decir, una molécula que contiene un sitio de unión a antígeno que se une de forma inmunoespecífica a un antígeno de una diana de interés o parte del mismo, incluyendo tales dianas, pero sin limitación, una célula o células cancerosas que producen anticuerpos autoinmunitarios asociados a una enfermedad autoinmunitaria. La inmunoglobulina puede ser de cualquier tipo (por ejemplo, IgG, IgE, IgM, IgD e IgA), clase (por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2) o subclase de molécula de inmunoglobulina. Las inmunoglobulinas pueden obtenerse de cualquier especie, incluyendo el origen humano, murino o de conejo.
Los "fragmentos de anticuerpos" comprenden una porción de un anticuerpo de longitud completa, generalmente la región de unión a antígeno o variable del mismo. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpo incluyen F(ab')2, y fragmentos scFv, y fragmentos de unión a epítopos diméricos de cualquiera de los anteriores que se unen de forma inmunoespecífica a antígenos de células cancerosas, antígenos víricos o antígenos microbianos, moléculas de anticuerpo monocatenario; y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpos.
Los anticuerpos modificados adecuados para su uso en la presente invención incluyen aquellos en donde los residuos de cisteína intercatenarios naturales se han sustituido por residuos de aminoácidos que carecen de grupos tiol. Los anticuerpos pueden comprender al menos una sustitución adicional en cada cadena pesada de un residuo de aminoácido que comprende un grupo reactivo adecuado para la conjugación con un enlazador. El aminoácido adicionalmente sustituido puede ser una cisteína o un aminoácido no natural. La posición que se sustituye puede seleccionarse de las que se exponen a continuación:
Figure imgf000015_0001
Los ejemplos de anticuerpos modificados adecuados para su uso en la presente invención incluyen las estructuras Flexmab divulgadas en el documento WO 2012/064733. Tales Flexmab tienen cisteínas con grupos tiol libres en la región bisagra del anticuerpo que pueden usarse como sitios de conjugación para enlazarse a través de los grupos N10 de las PBD de la presente invención.
Otros ejemplos de anticuerpos modificados adecuados para su uso en la presente invención incluyen aquellos en que se han insertado cisteínas en sitios seleccionados en los anticuerpos. Estos se describen en Dimasi, N., et al., Molecular Pharmaceutics, 2017, 14, 1501-1516 (DOI: 10.1021/acs.molpharmaceut.6b00995) y el documento WO2015/157595. En particular, son útiles los anticuerpos que se han modificado mediante la inserción de una cisteína después de la posición S239 (es decir, entre las posiciones 239 y 240).
Se hace referencia a los enumerados en las páginas 60 a 62 del documento WO 2012/064733. En algunas realizaciones, el anticuerpo puede ser contra un antígeno asociado a tumor, por ejemplo: HER2 (ErbB2); EPHA2 (receptor de EPH A2); CD19; IL2RA (receptor de interleucina 2, alfa).
Los antígenos asociados a tumor y los anticuerpos afines para su uso en realizaciones de la presente invención se enumeran a continuación y se describen con más detalle en las páginas 14 a 86 del documento WO 2017/186894.1 (1) BMPR1B (receptor de tipo IB de proteína morfogenética ósea)
(2) E16 (LAT1, SLC7A5)
(3) STEAP1 (antígeno epitelial de próstata de seis transmembrana)
(4) 0772P (CA125, MUC16)
(5) MPF (MPF, MSLN, Sm R, factor potenciador de megacariocitos, mesotelina)
(6) Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, familia de vehículos de soluto 34 (fosfato de sodio), miembro 2, vehículo de fosfato dependiente de sodio de tipo II 3b)
(7) Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, Semaforina 5b Hlog, dominio sema 25, siete repeticiones de trombospondina (tipo 1 y similar a tipo 1), dominio transmembrana (TM) y dominio citoplasmático corto, (semaforina) 5B)
(8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, ADNc de RIKEN 2700050C12, gen de ADNc de RIKEN 2700050C12)
(9) ETBR (receptor de endotelina de tipo B)
(10) MSG783 (RNF124, proteína hipotética FLJ20315)
(11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, gen asociado a cáncer de próstata 1, proteína asociada a cáncer de próstata 1, antígeno epitelial de seis transmembrana de próstata 2, proteína de seis transmembrana de próstata)
(12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, canal catiónico receptor de potencial transitorio 5, subfamilia M, miembro 4)
(13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, factor de crecimiento derivado de teratocarcinoma)
(14) CD21 (CR2 (receptor del complemento 2) o C3DR (receptor de C3d/virus de Epstein-Barr) o Hs.73792) (15) CD79b (CD79B, CD79p, IGb (beta asociada a inmunoglobulina), B29)
(16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SpAp IA (proteína de anclaje de fosfatasa que contiene el dominio SH2 1a), SPAP1B, SPAP1C)
(17) HER2 (ErbB2)
(18) NCA (CEACAM6)
(19) MDP (DPEP1)
(20) IL20R-alfa (IL20Ra, ZCYTOR7)
(21) Brevican (BCAN, BEHAB)
(22) EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5)
(23) ASLG659 (B7h)
(24) PSCA (precursor de antígeno de células madre de próstata)
(25) GEDA
(26) BAFF-R (receptor del factor de activación de linfocitos B, BlyS de receptor 3, BR3)
(27) CD22 (isoforma CD22-B del receptor de linfocitos B, BL-CAM, Lyb-8, Lyb8, SIGLEC-2, FLJ22814) (27a) CD22 (molécula CD22)
(28) CD79a (CD79A, CD79alfa), alfa asociado a inmunoglobulina, una proteína específica de linfocitos B que interactúa covalentemente con Ig beta (CD79B) y forma un complejo sobre la superficie con moléculas de IgM, transduce una señal implicada en la diferenciación de linfocitos B), pl: 4,84, PM: 25028 TM: 2 [P] Cromosoma del gen: 19q13.2).
(29) CXCR5 (receptor de linfoma de Burkitt 1, un receptor acoplado a proteína G que se activa por la quimiocina CXCL13, actúa en la migración de linfocitos y la defensa humoral, tiene un papel en la infección por VIH-2 y quizás en el desarrollo de SIDA, linfoma, mieloma y leucemia); 372 aa, pl: 8,54 PM: 41959 TM: 7 [P] Cromosoma del gen: 11q23.3,
(30) HLA-DOB (subunidad beta de la molécula MHC de clase II (antígeno Ia) que se une a péptidos y 20 los presenta a linfocitos T CD4+); 273 aa, pl: 6,56, PM: 30820.TM: 1 [P] Cromosoma del gen: 6p21.3)
(31) P2X5 (canal de iones dependientes de ligando P2X de receptor prurinérgico 5, un canal de iones dependiente de ATP extracelular puede estar implicado en la transmisión sináptica y la neurogénesis, su deficiencia puede contribuir a la fisiopatología de la inestabilidad del detrusor idiopática); 422 aa), pl: 7,63, PM: 47206 TM: 1 [P] Cromosoma del gen: 17p13.3).
(32) CD72 (antígeno de diferenciación de linfocitos B CD72, Lyb-2); 359 aa, pl: 8,66, PM: 40225, TM: 15 [P] cromosoma del gen: 9p13.3).
(33) LY64 (antígeno linfocitario 64 (RP105), proteína de membrana de tipo I de la familia de repeticiones ricas en leucina (LRR), regula la activación y la apoptosis de linfocitos B, la pérdida de función se asocia a una actividad aumentada de la enfermedad en pacientes con lupus eritematoso sistémico); 661 aa, pl: 6,20, PM: 74147 TM: 1 [P] Cromosoma del gen: 5q12).
(34) FcRH1 (proteína similar al receptor de Fc 1, un supuesto receptor del dominio Fc de inmunoglobulina que contiene dominios similares a Ig de tipo C2 e ITAM, puede tener un papel en la diferenciación de linfocitos B); 429 aa, pl: 5,28, PM: 46925 TM: 1 [P] Cromosoma del gen: 1q21-1q22)
(35) IRTA2 (superfamilia del receptor de translocación 2 asociado a inmunoglobulina, un supuesto inmunorreceptor con posibles papeles en el desarrollo de linfocitos B y la linfomagénesis; la desregulación del gen por translocación se produce en algunas neoplasias malignas de linfocitos B); 977 aa, pl: 6,88, PM: 106468, TM: 1 [P] Cromosoma del gen: 1q21)
(36) TENB2 (TMEFF2, tomorregulina, TPEF, HPP1, TR, supuesto proteoglucano transmembrana, relacionado con la familia de factores de crecimiento de EGF/herregulina y folistatina); 374 aa)
(37) PSMA - FOLH1 (folato hidrolasa (antígeno de membrana específico de la próstata) 1)
(38) SST (receptor de somatostatina; cabe señalar que hay 5 subtipos)
(38.1) SsTr2 (Receptor de somatostatina 2)
(38.2) SSTR5 (Receptor de somatostatina 5)
(38.3) SSTR1
(38.4) SSTR3
(38.5) SSTR4
AvB6 - Ambas subunidades (39+40)
(39) ITGAV (integrina, alfa V)
(40) ITGB6 (integrina, beta 6)
(41) CEACAM5 (molécula de adhesión celular relacionada con el antígeno carcinoembrionario 5) (42) MET (protooncogén met; receptor del factor de crecimiento de hepatocitos)
(43) MUC1 (mucina 1, asociada a la superficie celular)
(44) CA9 (anhidrasa carbónica IX)
(45) EGFRvIII (receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), variante de transcrito 3,
(46) CD33 (molécula CD33)
(47) CD19 (molécula CD19)
(48) IL2RA (receptor de interleucina 2, alfa); secuencia de referencia del NCBI: NM_000417.2);
(49) AXL (receptor de tirosina cinasa AXL)
(50) CD30 - TNFRSF8 (superfamilia del receptor del factor de necrosis tumoral, miembro 8)
(51) BCMA (antígeno de maduración de linfocitos B) - TNFRSF17 (superfamilia del receptor del factor de necrosis tumoral, miembro 17)
(52) Ag de CT - ATC (antígenos de cáncer de testículo)
(53) CD174 (Lewis Y) - FUT3 (fucosiltransferasa 3 (galactósido 3(4)-L-fucosiltransferasa, grupo sanguíneo de Lewis)
(54) CLEC14A (familia de dominios de lectina de tipo C 14, miembro A; n.° de referencia de Genbank NM175060)
(55) GRP78 - HSPA5 (proteína de choque térmico de 70k Da 5 (proteína regulada por glucosa, 78 kDa) (56) CD70 (molécula CD70) L08096
(57) Antígenos específicos de células madre. Por ejemplo:
• 5T4 (véase la entrada (63), a continuación)
• CD25 (véase la entrada (48) anterior)
• CD32
• LGR5/GPR49
• Prominina/CD133
(58) ASG-5
(59) ENPP3 (ectonucleótido pirofosfatasa/fosfodiesterasa 3)
(60) PRR4 (rico en prolina 4 (lagrimal))
(61) GCC - GUCY2C (guanilato ciclasa 2C (receptor de enterotoxina termoestable)
(62) Liv-1 - SLC39A6 (familia de vehículos de soluto 39 (vehículo de zinc), miembro 6)
(63) 5T4, glucoproteína de trofoblastos, TPBG - TPBG (glucoproteína de trofoblastos)
(64) CD56 - NCMA1 (molécula de adhesión de células neurales 1)
(65) CanAg (antígeno asociado a tumor CA242)
(66) FOLR1 (receptor de folato 1)
(67) GPNMB (glucoproteína (transmembrana) nmb)
(68) TIM-1 - HAVCR1 (receptor celular del virus de la hepatitis A 1)
(69) RG-1/Diana de tumor de próstata Mindin - Mindin/RG-1
(70) B7-H4 - VTCN1 (dominio V-set que contiene el inhibidor de la activación de linfocitos T 1)
(71) PTK7 (proteína tirosina cinasa 7 PTK7)
(72) CD37 (molécula CD37)
(73) CD138 - SDC1 (sindecano 1)
(74) CD74 (molécula CD74, complejo principal de histocompatibilidad, cadena invariante de clase II)
(75) Claudinas - las CL (Claudinas)
(76) EGFR (receptor del factor de crecimiento epidérmico)
(77) Her3 (ErbB3) - ERBB3 (homólogo del oncogén vírico de la leucemia eritroblástica v-erb-b23 (aviar)) (78) RON - MST1R (receptor del estimulador de macrófagos 1 (tirosina cinasa relacionada con c-met)) (79) EPHA2 (receptor de EPH A2)
(80) CD20 - MS4A1 (4 dominios transmembrana, subfamilia A, miembro 1)
(81) Tenascina C - TNC (Tenascina C)
(82) FAP (proteína de activación de fibroblastos, alfa)
(83) DKK-1 (homólogo de Dickkopf 1 (Xenopus laevis)
(84) CD52 (molécula CD52)
(85) CS1 - SLAMF7 (miembro de la familia SLAM 7)
(86) Endoglina - ESP (endoglina)
(87) Anexina A1 -ANXA1 (Anexina A1)
(88) V-CAM (CD106) - VcAm 1 (molécula de adhesión de células vasculares 1)
Conexión de la unidad de enlazador a la unidad de ligando
La unidad de ligando puede conectarse a la unidad de enlazador a través de un enlace disulfuro.
En una realización, la conexión entre la unidad de ligando y el enlazador de fármaco se forma entre un grupo tiol de un residuo de cisteína de la unidad de ligando y un grupo maleimida de la unidad de enlazador de fármaco. Otros posibles grupos para el enlace, y los grupos de enlace resultantes, se muestran a continuación.
Los residuos de cisteína de la unidad de ligando pueden estar disponibles para la reacción con el grupo funcional de la unidad de enlazador para formar una conexión. En otras realizaciones, por ejemplo, donde la unidad de ligando es un anticuerpo, los grupos tiol del anticuerpo pueden participar en enlaces disulfuro intercatenarios. Estos enlaces intercatenarios se pueden convertir en grupos tiol libres, por ejemplo, mediante el tratamiento del anticuerpo con DTT antes de la reacción con el grupo funcional de la unidad de enlazador.
En algunas realizaciones, el residuo de cisteína se introduce en la cadena pesada o ligera de un anticuerpo. Las posiciones para la inserción de cisteínas por sustitución en cadenas pesadas o ligeras de anticuerpos incluyen las descritas en la Solicitud Publicada de Ee .UU. N.° 2007-0092940 y la publicación de la Patente Internacional WO2008/070593.
Compuestos para su uso en un método de tratamiento
Los compuestos de la presente invención se pueden usar en terapia. También se proporcionan compuestos para su uso en un método de tratamiento, que comprende administrar a un sujeto que necesita tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de un conjugado de fórmula I. La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" es una cantidad suficiente para mostrar beneficio a un paciente. Tal beneficio puede ser al menos la mejoría de al menos un síntoma. La cantidad real administrada y la velocidad y la evolución temporal de la administración dependerán de la naturaleza y la gravedad de lo que se está tratando. La prescripción del tratamiento, por ejemplo, las decisiones sobre la dosificación, está dentro de la responsabilidad de los facultativos generales y otros médicos.
Un conjugado puede administrarse solo o en combinación con otros tratamientos, de forma simultánea o secuencial dependiendo de la afección a tratar. Los ejemplos de tratamientos y terapias incluyen, pero sin limitación, quimioterapia (la administración de agentes activos, incluyendo, por ejemplo, fármacos; cirugía; y radioterapia. Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la presente invención, y para su uso de conformidad con la presente invención, pueden comprender, además del principio activo, es decir, un conjugado de fórmula I, un excipiente, un vehículo, un tampón, un estabilizante u otros materiales farmacéuticamente aceptables bien conocidos por los expertos en la materia. Tales materiales no deben ser tóxicos y no deben interferir con la eficacia del principio activo. La naturaleza precisa del vehículo o de otro material dependerá de la vía de administración, que puede ser oral, o por inyección, por ejemplo, cutánea, subcutánea o intravenosa.
Las composiciones farmacéuticas para la administración oral pueden ser en forma de comprimido, cápsula, polvo o líquido. Un comprimido puede comprender un vehículo sólido o un adyuvante. Las composiciones farmacéuticas líquidas, generalmente, comprenden un vehículo líquido, tal como agua, aceites de petróleo, animales o vegetales, aceite mineral o aceite sintético. Puede incluirse solución salina fisiológica, dextrosa u otra solución de sacáridos o glicoles, tales como etilenglicol, propilenglicol o polietilenglicol. Una cápsula puede comprender un vehículo sólido, tal como gelatina.
Para la inyección intravenosa, cutánea o subcutánea, o inyección en el sitio de la dolencia, el principio activo estará en forma de una solución acuosa parenteralmente aceptable, que está libre de pirógenos y tiene un pH, una isotonicidad y una estabilidad adecuados. Los expertos en la materia serán capaces de preparar soluciones adecuadas usando, por ejemplo, vehículos isotónicos, tales como inyección de cloruro de sodio, solución de Ringer, solución de Ringer lactada. Se pueden incluir conservantes, estabilizantes, antioxidantes y/u otros aditivos, según sea necesario.
Los conjugados se pueden usar para tratar una enfermedad proliferativa y una enfermedad autoinmunitaria. La expresión "enfermedad proliferativa" se refiere a una proliferación celular no deseada o incontrolada de células excesivas o anómalas que no es deseada, tal como, un crecimiento neoplásico o hiperplásico, ya sea in vitro o in vivo.
Los ejemplos de afecciones proliferativas incluyen, pero sin limitación, proliferación celular benigna, premaligna y maligna, incluyendo, pero no se limitan, neoplasias y tumores (por ejemplo, histocitoma, glioma, astrocitoma, osteoma), cánceres (por ejemplo, cáncer de pulmón, cáncer de pulmón microcítico, cáncer gastrointestinal, cáncer de intestino, cáncer de colon, carcinoma de mama, carcinoma de ovario, cáncer de próstata, cáncer testicular, cáncer de hígado, cáncer de riñón, cáncer de vejiga, cáncer de páncreas, cáncer de cerebro, sarcoma, osteosarcoma, sarcoma de Kaposi, melanoma), leucemias, psoriasis, osteopatías, trastornos fibroproliferativos (por ejemplo, de tejidos conectivos) y ateroesclerosis. Otros cánceres de interés incluyen, pero sin limitación, neoplasias malignas hemáticas, tales como leucemias, y linfomas, tales como linfoma no de Hodgkin, y subtipos, tales como LDCBG, de zona marginal, de zona del manto, y epidermoide, linfoma de Hodgkin, LMA y otros cánceres de origen en linfocitos B o T.
Los ejemplos de enfermedades autoinmunitarias incluyen los siguientes: artritis reumatoide, enfermedades desmielinizantes autoinmunitarias (por ejemplo, esclerosis múltiple, encefalomielitis alérgica), artropatía psoriásica, oftalmopatía endocrina, uveorretinitis, lupus eritematoso sistémico, miastenia grave, enfermedad de Graves, glomerulonefritis, trastorno hepatológico autoinmunitario, enfermedad inflamatoria intestinal (por ejemplo, enfermedad de Crohn), anafilaxia, reacción alérgica, síndrome de Sjogren, diabetes mellitus de tipo I, cirrosis biliar primaria, granulomatosis de Wegener, fibromialgia, polimiositis, dermatomiositis, insuficiencia endocrina múltiple, síndrome de Schmidt, uveítis autoinmunitaria, enfermedad de Addison, adrenalitis, tiroiditis, tiroiditis de Hashimoto, enfermedad tiroidea autoinmunitaria, anemia perniciosa, atrofia gástrica, hepatitis crónica, hepatitis lupoide, ateroesclerosis, lupus eritematoso cutáneo subagudo, hipoparatiroidismo, síndrome de Dressler, trombocitopenia autoinmunitaria, púrpura trombocitopénica idiopática, anemia hemolítica, pénfigo vulgar, pénfigo, dermatitis herpetiforme, alopecia areata, penfigoide, esclerodermia, esclerodermia generalizada, síndrome CREST (calcinosis, fenómeno de Raynaud, desmotilidad esofágica, esclerodactilia y telangiectasia), infertilidad autoinmunitaria masculina y femenina, espondolitis anquilosante, colitis ulcerosa, enfermedad mixta del tejido conjuntivo, poliarteritis nodosa, vasculitis necrosante sistémica, dermatitis atópica, rinitis atópica, síndrome de Goodpasture, enfermedad de Chagas, sarcoidosis, fiebre reumática, asma, aborto recurrente, síndrome antifosfolípido, enfermedad del pulmón del granjero, eritema multiforme, síndrome poscardiotomía, síndrome de Cushing, hepatitis activa crónica autoinmunitaria, enfermedad del pulmón del cuidador de aves, necrólisis epidérmica tóxica, síndrome de Alport, alveolitis, alveolitis alérgica, alveolitis fibrosante, enfermedad pulmonar intersticial, eritema nodular, piodermia gangrenosa, reacción a transfusiones, arteritis de Takayasu, polimialgia reumática, arteritis de la temporal, esquistosomiasis, arteritis de células gigantes, ascariasis, aspergilosis, síndrome de Sampter, eccema, granulomatosis linfomatoide, enfermedad de Behcet, síndrome de Caplan, enfermedad de Kawasaki, dengue, encefalomielitis, endocarditis, fibrosis endomiocárdica, endoftalmia, eritema elevado persistente, psoriasis, eritroblastosis fetal, fascitis eosinofílica, síndrome de Shulman, síndrome de Felty, filariosis, ciclitis, ciclitis crónica, ciclitis heterocrónica, ciclitis de Fuch, nefropatía por IgA, púrpura de Henoch-Schonlein, enfermedad de injerto contra el hospedador, rechazo de trasplantes, miocardiopatía, síndrome de Eaton-Lambert, policondritis recidivante, crioglobulinemia, macroglobulinemia de Waldenstrom, síndrome de Evan e insuficiencia gonadal autoinmunitaria. En algunas realizaciones, la enfermedad autoinmunitaria es un trastorno de los linfocitos B (por ejemplo, lupus eritematoso sistémico, síndrome de Goodpasture, artritis reumatoide y diabetes de tipo I), linfocitos Th1 (por ejemplo, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, psoriasis, síndrome de Sjogren, tiroiditis de Hashimoto, enfermedad de Graves, cirrosis biliar primaria, granulomatosis de Wegener, tuberculosis, o enfermedad de injerto contra hospedador), o linfocitos Th2 (por ejemplo, dermatitis atópica, lupus eritematoso sistémico, asma atópica, rinoconjuntivitis, rinitis alérgica, síndrome de Omenn, esclerosis generalizada y enfermedad del injerto contra el hospedador crónica). En general, los trastornos que implican células dendríticas implican trastornos de linfocitos Th1 o linfocitos Th2. En algunas realizaciones, el trastorno autoinmunitario es un trastorno inmunológico mediado por linfocitos T.
En algunas realizaciones, la cantidad del conjugado administrado varía de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 10 mg/kg por dosis. En algunas realizaciones, la cantidad del conjugado administrado varía de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 5 mg/kg por dosis. En algunas realizaciones, la cantidad del conjugado administrado varía de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 5 mg/kg por dosis. En algunas realizaciones, la cantidad del conjugado administrado varía de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 5 mg/kg por dosis. En algunas realizaciones, la cantidad del conjugado administrado varía de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 4 mg/kg por dosis. En algunas realizaciones, la cantidad del conjugado administrado varía de aproximadamente 0,05 varía de aproximadamente 3 mg/kg por dosis. En algunas realizaciones, la cantidad del conjugado administrado varía de aproximadamente 0,1 varía de aproximadamente 3 mg/kg por dosis. En algunas realizaciones, la cantidad del conjugado administrado varía de aproximadamente 0,1 varía de aproximadamente 2 mg/kg por dosis.
Carga de fármaco
La carga de fármaco (p) es el número promedio de fármacos de PBD por agente de unión a células, por ejemplo, anticuerpo. En la presente invención, esta es siempre 1. Sin embargo, cualquier composición puede comprender anticuerpos en los que se conjuga una PBD y anticuerpos en los que no se conjuga una PBD. Así, para una composición, la carga de fármaco (o DAR) puede ser inferior a 1, por ejemplo, de 0,75 y superior, 0,80 y superior, 0,85 y superior, 0,90 y superior o 0,95 o superior.
Rutas de síntesis generales
La síntesis de los compuestos de PBD se analiza ampliamente en las siguientes referencias:
a) documento WO 00/12508 (páginas 14 a 30);
b) documento WO 2005/023814 (páginas 3 a 10);
c) documento WO 2004/043963 (páginas 28 a 29); y
d) documento WO 2005/085251 (páginas 30 a 39).
Ruta de síntesis
Los compuestos de la presente invención de fórmula II:
Figure imgf000020_0001
se pueden sintetizar mediante la construcción de los grupos de enlace C2 de una manera análoga a la divulgada en los documentos WO2010/043880, WO2011/130613, WO2011/130616 y WO2013/041606. Cuando los grupos de enlace C2 son los mismos, estos se pueden sintetizar en paralelo. Cuando los grupos de enlace C2 son diferentes, la protección ortogonal se puede usar de una manera similar a las referencias anteriores para sintetizar los grupos secuencialmente.
Síntesis de conjugados de fármacos
Los anticuerpos se pueden conjugar con el compuesto de enlazador de fármaco generalmente como se describe en Doronina et al., Nature Biotechnology, 2003, 21, 778-784). Brevemente, los anticuerpos (4-5 mg/ml) en PBS que contiene borato de sodio 50 mM a pH 7,4 se reducen con clorhidrato de tris(carboxietil)fosfina (TCEP) a 37 °C. El progreso de la reacción, que reduce los disulfuros entre cadenas, se controla mediante la reacción con ácido 5,5'-ditiobis(2-nitrobenzoico) y se deja avanzar hasta que se consigue el nivel deseado de tioles/mAb. El anticuerpo reducido se enfría entonces a 0 °C y se alquila con 3 equivalentes de enlazador de fármaco por anticuerpo. Después de 1 hora, la reacción se interrumpió mediante la adición de 5 equivalentes de N-acetil cisteína. El enlazador de fármaco inactivado se elimina filtración en gel sobre una columna de PD-10. El ADC se filtra luego en condiciones estériles a través de un filtro de jeringa de 0,22 pm. La concentración de proteína puede determinarse por análisis espectral a 280 nm y 329 nm, respectivamente, con corrección por la contribución de la absorbancia del fármaco a 280 nm. Se puede usar cromatografía de exclusión por tamaño para determinar el grado de agregación de los anticuerpos y se puede usar RP-HPLC para determinar los niveles de enlazador de fármaco remanentes inactivado por NAC.
Preferencias adicionales
Las siguientes preferencias pueden aplicarse a todos los aspectos de la invención como se han descrito anteriormente, o pueden referirse a un único aspecto. Las preferencias pueden combinarse entre sí en cualquier combinación.
R6', R7', R9' e Y' se seleccionan de los mismos grupos que R6, R7, R9 e Y, respectivamente. En algunas realizaciones, R6', R7', R9' e Y' son los mismos que R6, R7, R9 e Y, respectivamente.
Enlace del dímero
En algunas realizaciones, Y e Y' son ambos O.
En algunas realizaciones, R" es un grupo alquileno C3.7 sin sustituyentes. En algunas de estas realizaciones, R" es un alquileno C3, C5 o C7. En particular, R" puede ser un alquileno C3 o C5.
En otras realizaciones, R" es un grupo de fórmula:
Figure imgf000020_0002
donde r es 1 o 2.
R 6 a R 9
En algunas realizaciones, R9 es H.
En algunas realizaciones, R6 se selecciona de H, OH, OR, SH, NH2, nitro y halo, y puede seleccionarse de H o halo. En algunas de estas realizaciones R6 es H.
En algunas realizaciones, R7 se selecciona de H, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR' y halo. En algunas de estas realizaciones, R7 se selecciona de H, OH y OR, donde R se selecciona de grupos alquilo C1-7, heterociclilo C3-10 y arilo C5-10 opcionalmente sustituidos. R puede ser más preferentemente un grupo alquilo C1-4, que puede estar sustituido o no. Un sustituyente de interés es un grupo arilo C5-6 (por ejemplo, fenilo). Los sustituyentes particularmente preferidos en las posiciones 7 son OMe y OCH2Ph. Otros sustituyentes de particular interés son dimetilamino (es decir, -NMe2); -(OC2H4)qOMe, donde q es de 0 a 2; heterociclilos C6 que contienen nitrógeno, incluyendo morfolino, piperidinilo y N-metil-piperazinilo.
Estas realizaciones y preferencias se aplican a R9', R6' y R7', respectivamente.
R 10 y R 11
En algunas realizaciones, R10 y R11 forman juntos un doble enlace entre los átomos de nitrógeno y de carbono a los que están unidos.
En algunas realizaciones, R11 es OH.
En algunas realizaciones, R11 es OMe.
En algunas realizaciones, R11 es SOzM, donde z es 2 o 3 y M es un catión monovalente farmacéuticamente aceptable. R 30 y R 31
En algunas realizaciones, R30 y R31 forman juntos un doble enlace entre los átomos de nitrógeno y de carbono a los que están unidos.
En algunas realizaciones, R31 es OH.
En algunas realizaciones, R31 es OMe.
En algunas realizaciones, R31 es SOzM, donde z es 2 o 3 y M es un catión monovalente farmacéuticamente aceptable.
R 10, R 11, R 30 y R 31
En algunas realizaciones, R30 y R31 son iguales que R10 y R11, respectivamente.
R 2 /R 12
En algunas realizaciones, R2 es de fórmula IIIa.
A en R2, cuando es de fórmula IIIa, puede ser un grupo fenilo o un grupo heteroarilo C5-7, por ejemplo, furanilo, tiofenilo y piridilo. En algunas realizaciones, A es preferentemente fenilo.
Q2-X puede estar en cualquiera de los átomos disponibles en el anillo del grupo arilo C5-7, pero preferentemente está en un átomo en el anillo que no esté adyacente al enlace con el resto del compuesto, es decir, preferentemente está en p o y con respecto al enlace con el resto del compuesto. Por consiguiente, cuando el grupo arilo C5-7 (A) es fenilo, el sustituyente (Q2-X) está preferentemente en las posiciones meta- o para- y más preferentemente está en la posición para-.
En algunas realizaciones, Q1 es un enlace simple. En estas realizaciones, Q2 se selecciona de un enlace simple y -Z-(CH2)n-, donde Z se selecciona de un enlace simple, O, S y NH y es de 1 a 3. En algunas de estas realizaciones, Q2 es un enlace simple. En otras realizaciones, Q2 es -Z-(CH2)n-. En estas realizaciones, Z puede ser O u S y n puede ser 1 o n puede ser 2. En otras de estas realizaciones, Z puede ser un enlace simple y n puede ser 1.
En otras realizaciones, Q1 es -CH=CH-.
En otras realizaciones, R2 es de fórmula IIIb. En estas realizaciones, RC1, RC2 y RC3 se seleccionan independientemente de H y alquilo C1-2 no sustituido. En algunas realizaciones preferidas, RC1, RC2 y RC3 son todos H. En otras realizaciones, RC1, RC2 y RC3 son todos metilo. En determinadas realizaciones, RC1, RC2 y RC3 se seleccionan independientemente de H y metilo.
X es un grupo seleccionado de la lista que comprende: 0 -RL1, S-RL1, CO2-R1-1, CO-RL1, NH-C(=0 )-RL1, NHNH-RL1,
CONHNH-RL1, > > NRNRL1, en donde RN se selecciona del grupo que comprende H y alquilo C1-4. X puede ser preferentemente: O-RL1, S-RL1, CO2-RL1, NH-C(=O)-RL1 o NRNRL1. Los grupos particularmente preferidos incluyen: O-RL1, S-RL1 y NH-RL1, siendo NH-RL1 el grupo más preferido.
En algunas realizaciones, R2 es de fórmula IIIc. En estas realizaciones, es prefiere que Q sea NRN-RL1. En otras realizaciones, Q es O-RL1. En realizaciones adicionales, Q es S-RL1. RN se selecciona preferentemente de H y metilo. En alguna realización, RN es H. En otras realizaciones, RN es metilo.
En algunas realizaciones, R2 puede ser -A-CH2-X y -A-X. En estas realizaciones, X puede ser O-RL1, S-RL1, CO2-RL1, CO-RL1 y NH-RL1. En realizaciones particularmente preferidas, X puede ser NH-RL1.
Las preferencias anteriores se aplican a R12 según corresponda (estando RL1 reemplazado por RG1).
Las preferencias anteriores se aplican también a R2' y R12'.
Estas realizaciones y preferencias también se aplican al segundo aspecto de la invención.
Figure imgf000022_0001
donde
R1a se selecciona de metilo y bencilo;
RL1, R10, R11, R30 y R31 son como se han definido en cualquier parte.
Enlazador (RL1 y RG1)
En algunas realizaciones, RL1 es QX-Z-GLL
En algunas realizaciones, RG1 es QX-Z-GL.
QX
En una realización, QX es un residuo de aminoácido. El aminoácido puede ser un aminoácido natural o un aminoácido no natural.
En una realización, QX se selecciona de: Phe, Lys, Val, Ala, Cit, Leu, Ile, Arg y Trp, donde Cit es citrulina.
En una realización, QX comprende un residuo dipeptídico. Los aminoácidos del dipéptido pueden ser cualquier combinación de aminoácidos naturales y aminoácidos no naturales. En algunas realizaciones, el dipéptido comprende aminoácidos naturales. Cuando el enlazador es un enlazador lábil de catepsina, el dipéptido es el sitio de acción para la escisión mediada por la catepsina. El dipéptido es entonces un sitio de reconocimiento para la catepsina.
En una realización, QX se selecciona de:
CO-Phe-Lys-NH,
CO-Val-Ala-NH,
CO-Val-Lys-NH,
CO-Ala-Lys-NH,
CO-Val-Cit-NH,
CO-Phe-Cit-NH,
CO-Leu-Cit-NH,
CO-Ile-Cit-NH,
CO-Phe-Arg-NH, y
CO-Trp-Cit-NH;
donde Cit es citrulina.
Preferentemente, QX se selecciona de:
CO-Phe-Lys-NH,
CO-Val-Ala-NH,
CO-Val-Lys-NH,
CO-Ala-Lys-NH,
CO-Val-Cit-NH.
Más preferentemente, QX se selecciona de CO-Phe-Lys-NH, CO-Val-Cit-NH y CO-Val-Ala-NH
Otras combinaciones de dipéptidos de interés incluyen:
CO-Gly-Gly-NH,
CO-Pro-Pro-NH, y
CO-Val-Glu-NH.
Se pueden usar otras combinaciones de dipéptidos, incluyendo los descritos por Dubowchik et al, Bioconjugate Chemistry, 2002, 13855-869.
En algunas realizaciones, QX es un residuo de tripeptídico. Los aminoácidos del tripéptido pueden ser cualquier combinación de aminoácidos naturales y aminoácidos no naturales. En algunas realizaciones, el tripéptido comprende aminoácidos naturales. Cuando el enlazador es un enlazador lábil de catepsina, el tripéptido es el sitio de acción para la escisión mediada por catepsina. El tripéptido es entonces un sitio de reconocimiento para catepsina.
En una realización, la cadena lateral aminoacídica está protegida químicamente, cuando sea apropiado. El grupo protector de la cadena lateral puede ser un grupo como se analiza a continuación. Las secuencias de aminoácidos protegidas son escindibles por enzimas. Por ejemplo, una secuencia dipeptídica que comprende un residuo de Lis protegido con cadena lateral Boc es escindible mediante catepsina.
Los grupos protectores para las cadenas laterales de aminoácidos son bien conocidos en la técnica y se describen en el catálogo de Novabiochem y como se ha descrito anteriormente.
Z
Z es:
Figure imgf000024_0001
donde a = de 0 a 5, b = de 0 a 16, c = 0 o 1, d = de 0 a 5 y e es 0 o 1.
a puede ser 0, 1, 2, 3, 4 o 5. En algunas realizaciones, a es de 0 a 3. En algunas de estas realizaciones, a es 0 o 1. En realizaciones adicionales, a es 0.
b puede ser 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16. En algunas realizaciones, b es de 0 a 12. En algunas de estas realizaciones, b es de 0 a 8, y puede ser 0, 2, 4 u 8.
c puede ser 0 o 1.
d puede ser 0, 1, 2, 3, 4 o 5. En algunas realizaciones, d es de 0 a 3. En algunas de estas realizaciones, d es 1 o 2. En realizaciones adicionales, d es 2.
e puede ser 0 o 1.
En algunas realizaciones de Z, a es 0, b es 0, c es 0, d es 5 y e es 1.
En algunas realizaciones de Z, a es 0, c es 1, d es 2, e es 1 y b puede ser de 0 a 8. En algunas de estas realizaciones, b es 0, 4 u 8.
GLL GLL puede seleccionarse de:
Figure imgf000024_0002
(continuación)
Figure imgf000025_0002
donde Ar representa un grupo arileno C5-6, por ejemplo, fenileno y X representa alquilo C1-4.
En algunas realizaciones, GLL se selecciona de GLL1-1 y GLL1-2 En algunas de estas realizaciones, GLL es GLL1-1. G L GL puede seleccionarse de
Figure imgf000025_0001
continuación
Figure imgf000026_0001
donde Ar representa un grupo arileno C5-6, por ejemplo, fenileno y X representa alquilo C 1-4.
En algunas realizaciones, G L se selecciona de GL1-1 y GL1-2 En algunas de estas realizaciones, GL es GL1-1. En una realización particular, el primer aspecto de la invención comprende un conjugado de fórmula Id:
Figure imgf000027_0001
En una realización particular, el primer aspecto de la invención comprende un conjugado de fórmula le:
Figure imgf000027_0002
donde m es un número entero de 2 a 8.
En una realización particular, en el segundo aspecto de la invención, el enlazador de fármaco (DL) es de fórmula (Id'):
Figure imgf000027_0003
En una realización particular, en el segundo aspecto de la invención, el enlazador de fármaco (DL) es de fórmula (Ie'):
Figure imgf000027_0004
donde m es un número entero de 2 a 8.
En algunas realizaciones, cada RL1 es diferente. En otras realizaciones, ambos RL1 son iguales.
En algunas realizaciones, cada RG1 es diferente. En otras realizaciones, ambos RG1 son iguales.
En particular, en las realizaciones en las que los grupos de enlace son diferentes, las diferencias pueden estar solo en los grupos G, de manera que el resto de los grupos de enlace son iguales (de manera que los desencadenantes de la escisión son iguales).
En algunas realizaciones de la presente invención, el sustituyente C 11 puede estar en la siguiente disposición estereoquímica con respecto a los grupos vecinos:
Figure imgf000028_0001
En otras realizaciones, el sustituyente C11 puede estar en la siguiente disposición estereoquímica con respecto a los grupos vecinos:
Figure imgf000028_0002
Los compuestos de interés particular incluyen los de los ejemplos.
Ejemplos
El progreso de la reacción se controló mediante cromatografía en capa fina (forma siglada de Thin-Layer Chromatography) usando gel de sílice Merck Kieselgel 60 F254, con indicador fluorescente en placas de aluminio.
La visualización de la TLC se realizó con luz ultravioleta o vapor de yodo, a menos que se indique otra cosa. La cromatografía ultrarrápida se realizó usando gel de sílice Merck Kieselgel 60 F254. Los disolventes de extracción y cromatografía se compraron y usaron sin purificación adicional de Fisher Scientific, R. U. Todos los productos químicos se compraron de Aldrich, Lancaster o BDH.
Los espectros de RMN 1H y 13C se obtuvieron en un espectrómetro Bruker Avance 400. Las constantes de acoplamiento se indican en hercios (Hz). Los desplazamientos químicos se recogen en partes por millón (ppm) con referencia a tetrametilsilano. Las multiplicidades de espín se denominan s (singlete), sa (singlete ancho), d (doblete), t (triplete), c (cuadruplete), q (quintuplete) y m (multiplete).
Las condiciones de LC/MS fueron las siguientes:
los datos de LCMS se obtuvieron usando un LC/MS de la serie Shimadzu Nexera con un MS de cuadrupolo Shimadzu LCMS-2020, con ionización por electropulverización. Fase móvil A: ácido fórmico al 0,1 % en agua. Fase móvil B: ácido fórmico al 0,1 % en acetonitrilo.
3 min de LCMS: la composición inicial fue B al 5 % mantenida durante 0,25 min y, a continuación, se aumentó de B al 5 % a B al 100 % durante un período de 2 min. La composición se mantuvo durante 0,50 min al 100 % de B y, a continuación, volvió a B al 5% en 0,05 minutos y se mantuvo ahí durante 0,05 min. El tiempo total del ciclo del gradiente es igual a 3 min. Caudal de 0,8 ml/min. Intervalo de detección de longitud de onda: de 190 a 800 nm. Temperatura del horno: 50 °C. Columna: Waters Acquity UPLC BEH Shield RP18, 1,7 pm, 2,1 x 50 mm.
15 min de LCMS: la composición inicial fue B al 5 % mantenida durante 1 min y, a continuación, se aumentó de B al 5 % a B al 100% durante un período de 9 min. La composición se mantuvo durante 2 min al 100 % de B y, a continuación, volvió a B al 5% en 0,10 minutos y se mantuvo ahí durante 3 min. El tiempo total del ciclo del gradiente es igual a 15 min. Caudal de 0,6 ml/min. Intervalo de detección de longitud de onda: de 190 a 800 nm. Temperatura del horno: 50 °C. Columna: ACE Excel 2 C18-AR, 2 p, 3,0 x 100 mm.
Ejemplo 1
Figure imgf000029_0001
El Compuesto (1) es el Compuesto 8a del documento WO2010/043880.
a) _____ (11aS.11a'S)-8.8'-(propano-1.3-d¡¡lb/s(ox¡))b¡s(2-(4-am¡nofen¡l)-7-metox¡-10-((2-(tr¡met¡ls¡l¡l)etox¡)met¡l)-1.11ad¡h¡dro-5H-benzo[e1p¡rrolo[1.2-a1[1.41d¡azep¡na-5.11(10H)-d¡ona) (2)
Se añad¡ó Pd(PPh3)4 (164 mg. 0.14 mmol) a una mezcla ag¡tada del tr¡flato de b¡s-enol 1 (4 g. 3.6 mmol). éster borón¡co (1.96 g. 8.9 mmol) y Na2CO3 (3.41 g. 32.2 mmol) en una mezcla a 2:1:1 de tolueno/MeOH/H2O (80 ml). Se dejó que la mezcla de reacc¡ón se ag¡tara a 30 °C en una atmósfera de n¡trógeno durante 1 hora. tras lo que se había hecho reacc¡onar todo el tr¡flato de b¡s-enol 1. A cont¡nuac¡ón. la mezcla de reacc¡ón se evaporó hasta sequedad antes de que el res¡duo se recog¡era en CH2Cl2 (150 ml) y se lavó con H2O (2 x 75 ml) y salmuera (75 ml). se secó (MgSO4). se f¡ltró y se evaporó a pres¡ón reduc¡da para proporc¡onar el producto en bruto. La pur¡f¡cac¡ón med¡ante cromatografía ultrarráp¡da (eluc¡ón de grad¡ente: de hexano/EtOAc a 1:1 en v/v a EtOAc al 100%) proporc¡onó el producto 2 en forma de una espuma de color naranja oscuro (3.08 g. 86 %). LC/MS 1.88 m¡n (ES+) m/z = 1.003.30 [M H]+.
b) __________________((2S.2'S)-(((2S.2'S)-((((11aS.11a'S)-(propano-1.3-d¡¡l)b/s(ox¡))b/s(7-metox¡-5.11-d¡oxo-10-((2-(tr¡met¡ls¡l¡l)etox¡)met¡l)-5.10.11.11a-tetrah¡dro-1H-benzo[e1p¡rrolo[1.2-a1[1.41d¡azep¡na-8.2-d¡¡l))b/s(4.1-fen¡leno))b/s(azanod¡¡l))b/s(1-oxopropano-1.2-d¡¡l))b/s(azanod¡¡l))b/s(3-met¡l-1-oxobutano-1.2-d¡¡l))d¡carbamato____de d¡al¡lo (3)
A una soluc¡ón de 2 (2.71 g. 2.7 mmol) en CH2Ch seco (40 ml) se le añad¡ó el pépt¡do proteg¡do (1.61 g. 5.9 mmol) y EEDQ (1.46 mg. 5.9 mmol). La mezcla se ag¡tó a temperatura amb¡ente hasta la f¡nal¡zac¡ón (16 h). A cont¡nuac¡ón. la mezcla de reacc¡ón se lavó con H2O (2 x 50 ml) y salmuera (50 ml). se secó (MgSO4). se f¡ltró y se evaporó a pres¡ón reduc¡da para proporc¡onar el producto en bruto. La pur¡f¡cac¡ón med¡ante cromatografía ultrarráp¡da (eluc¡ón de grad¡ente: de CHCl3 al 100 % a CHCl3/MeOH a 93/7) proporc¡onó el producto 3 en forma de una espuma de color amar¡llo. LC/MS 1.90 m¡n (ES+) m/z = 1.511.65 [M H1+.
c) ________________(2S.2'S)-N.Nl-((2S.2'S)-((((11aS.11a'S)-(propano-1.3-d¡¡lb/s(ox¡))b/s(7-metox¡-5.11 -d¡oxo-10-((2-(tr¡met¡ls¡l¡l)etox¡)met¡l)-5.10.11.11a-tetrah¡dro-1H-benzo[e1p¡rrolo[1.2-a1[1.41d¡azep¡na-8.2-d¡¡l))b/s(4.1-fen¡leno))b/s(azanod¡¡l))b/s(1-oxopropano-1.2-d¡¡l))b/s(2-am¡no-3-met¡lbutanam¡da) (4)
Se añadieron pirrolidina (1,1 ml, 13 mmol) y Pd(PPh3)4 (183 mg, 0,16 mmol) a una solución de 3 (supuestamente al 100 % , 2,69 mmol) en CH2Ch seco (40 ml). La mezcla de reacción se diluyó con CH2Ch (60 ml) y la fase orgánica se lavó con H2O (2 x 100 ml) y salmuera (100 ml). La fase orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y el exceso de disolvente se eliminó mediante evaporación rotatoria a presión reducida. La purificación mediante cromatografía ultrarrápida (elución de gradiente: de CHCh al 100 % a CHCh/MeOH a 93/7) proporcionó el producto 4 en forma de una espuma de color amarillo (1,5 g, rendimiento del 41 %). LC/MS 1,33 min (Es +) m/z = 1.344,40 ([M H]+). d)__________N.N'-((2S,2'S)-(((2S,2'S)-((((11aS,11a'S)-(propano-1,3-d\ilb/s(oxi))b/s(7-metoxi-5-oxo-5,11a-d^hiidro-1 H-benzo[e1p¡rrolo[1.2-a1[1.41d¡azep¡na-8.2-d¡¡l))b/s(4.1-fen¡leno))b/s(azanod¡ol))b/s(1-oxopropano-1,2-d¡¡l))b/s(azanod¡¡l))b/s(3-met¡l-1-oxobutano-1.2-d¡¡l))b/s(6-(2.5-d¡oxo-2,5-d¡h¡dro-1H-p¡rrol-1-¡l)hexanam¡da) (5) Se añadió gota a gota una solución de Super-Hydride® (0,186 ml, 1 M en THF) a una solución de SEM-dilactama 4 (100 mg, 0,074 mmol) en THF seco (5 ml) a -78 °C en una atmósfera de argón. La adición se finalizó durante 5 minutos con el fin de mantener constante la temperatura interna de la mezcla de reacción. Después de 40 minutos, se inactivó una alícuota con agua para el análisis de LC/MS, lo que reveló que la reacción se había finalizado. Se añadió agua (20 ml) a la mezcla de reacción y se eliminó el baño frío. La capa orgánica se extrajo con CH2Ch (3 x 50 ml) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron con MgSO4, se filtraron y el disolvente se eliminó mediante evaporación rotatoria a presión reducida. El producto en bruto se disolvió en CH2Cl2 seco en un matraz de fondo redondo purgado con argón. Se añadieron ácido maleimida caproico (31,4 mg, 0,148 mmol) y EDCI.HCl (28,5 mg, 0,148 mmol) y la mezcla se dejó en agitación a temperatura ambiente. Después de un par de horas, se añadieron más ácido maleimida caproico (5 mg) y EDCI.HCI (5 mg) para impulsar la reacción hasta su finalización. El material en bruto se purificó mediante HPLC de fase inversa para producir el producto 5 con el 80 % de pureza (2,2 mg, rendimiento del 2 %). LC/MS 1,46 min (ES+) m/z = 1.438,25 [M H]+; LC/MS15m¡n 6,20 min (ES+) m/z = 1.438,20 [M H]+.
Ejemplo 2
Figure imgf000030_0001
N. N,-((2S.2'S)-(((2S.2'S)-((((11aS.11a'S)-(propano-1.3-d¡¡lb/s(oxi))b/s(7-metox¡-5-oxo-5.11a-d¡h¡dro-1 H-benzo[e1p¡rrolo[1.2-a1[1.41d¡azep¡na-8.2-d¡¡l))b/s(4.1-fen¡leno))b/s(azanod¡¡l))b/s(1-oxopropano-1,2-d¡¡l))b/s(azanod¡¡l))b/s(3-met¡l-1-oxobutano-1.2-d¡¡l))b/s(1-(3-(2.5-d¡oxo-2.5-dih¡dro-1H-p¡rrol-1-¡l)propanam¡do)-3.6.9,12.15.18.21.24-octaoxaheptacosan-27-am¡da) (6)
Se añadió gota a gota una solución de Super-Hydride® (0,37 ml, 1 M en THF) a una solución de SEM-dilactama 4 (200 mg, 0,15 mmol) en THF seco (5 ml) a -78 °C en una atmósfera de argón. La adición se finalizó durante 5 minutos con el fin de mantener constante la temperatura interna de la mezcla de reacción. Después de 40 minutos, se inactivó una alícuota con agua para el análisis de LC/MS, lo que reveló que la reacción se había finalizado. Se añadió agua (20 ml) a la mezcla de reacción y se eliminó el baño frío. La capa orgánica se extrajo con CH2Ch (3 x 50 ml) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron con MgSO4, se filtraron y el disolvente se eliminó mediante evaporación rotatoria a presión reducida. El producto en crudo se disolvió en CH2Cl2 seco en un matraz de fondo redondo purgado con argón. Se añadieron ácido de Mal-dPEGa-OH (31,4 mg, O, 148 mmol) y EDCl.HCl (28,5 mg, 0,148 mmol) y la mezcla se dejó en agitación a temperatura ambiente hasta finalizarse. El material en bruto se purificó mediante HPLC de fase inversa para producir el producto 6 con el 82 % de pureza (37 mg, rendimiento del 11 %). LC/MS 1,38 min (ES+) m/z = 1.101,05 [M 2H12+; LC/MS15m¡n 5,84 min (ES+) m/z = 1.101,05 [M 2Hf+.
Producción de anticuerpos Flexmab de Herceptin y Flexmab de NIP228
Aspectos generales
Las líneas celulares SKBR-3 (HER2+, 1,5 x 106 receptores/célula), MDA-MB-453 (HER2+, 7,7 x 104 receptores/célula) y MCF-7 (HER2‘) se obtuvieron de la ATCC y se mantuvieron en matraces de cultivo de tejidos T 175 (Corning) usando los medios recomendados por el fabricante (SKBR-3: McCoys 5A FBS al 10 % , MDA-MB-453: DMEM FBS al 10% y MCF-7: DMEM FBS al 10%). Las células 293F (Invitrogen) usadas para la trasfección se mantuvieron en medios 293F Freestyle (Invitrogen). Las células SKBR-3, MDA-MB-453 y mCF-7 se cultivaron en una incubadora a 37 °C con CO2 al 5 % . Las células 293F se cultivaron en matraces de agitación (2 l, Corning) a 37 °C con CO2 al 8 % y rotación a 120 rpm. Todos los reactivos se adquirieron de Sigma Aldrich, VWR o JT Baker, a menos que se indique otra cosa, y se usaron sin purificación adicional.
Diseño y construcción de anticuerpos Flexmab de Herceptin y Flexmab de NIP228
El anticuerpo Herceptin de tipo silvestre se usó como molde para genomanipular el Flexmab de Herceptin. La cadena ligera de Flexmab de Herceptin consiste en dos mutaciones, F118C y C214V, mientras que la cadena pesada contiene tres mutaciones, L124C, C216V y C225V (véanse las Figuras 1 y 2). La mutación F118C en la cadena ligera forma un enlace disulfuro con la mutación L124C en la cadena pesada. Este disulfuro genomanipulado no está expuesto a disolvente, sino que sirve para preservar la unión covalente entre las cadenas ligera y pesada. La cisteína de la bisagra C222 se dejó sin modificar y sirvió como la localización para la conjugación específica de sitio con el enlazador de fármaco basado en pBD. Se optimizaron los codones de las secuencias de la cadena ligera y la cadena pesada para el Flexmab de Herceptin para la expresión en mamífero y se adquirieron en GeneArt (Life Technologies). La construcción del Flexmab de Herceptin optimizada se subclonó con técnicas convencionales de biología molecular usando los sitios BssHII/Nhel (cadena ligera) y los sitios Sall/Notl (cadena pesada) en un vector de expresión en mamífero patentado por Medlmmune que contiene un péptido de señal de la cadena ligera de IgG para la secreción y promotores de citomegalovirus para la expresión recombinante. El plásmido de expresión en mamífero finalizado, pOE-Flexmab de Herceptin se confirmó por secuenciación del ADN. El anticuerpo Flexmab de NIP228 de control negativo se generó como se ha descrito para el Flexmab de Herceptin, aunque usando el anticuerpo NIP228 de tipo silvestre (patentado por Medlmmune) como molde.
Expresión y purificación de los anticuerpos Flexmab de Herceptin y Flexmab de NIP228
La expresión y purificación de los anticuerpos Flexmab de Herceptin y Flexmab de NIP228 se realizó de acuerdo con los métodos publicados previamente (Dimasi, N., et al., Journal of Molecular Biology, 2009, 393, 672-692; DOI: 10.1016/j.jmb.2009.08.032). Tras la expresión transitoria en 293F y la purificación por proteína A, los anticuerpos se formularon en el tampón de conjugación (1X PBS, EDTA 0,1 mM, pH 7,2) usando casetes de diálisis Slide-A-Lyzer a 4 °C (MWCO 10 kDa, Thermo) y se concentraron a 8,0 mg/ml (Flexmab de Herceptin) y 5,52 mg/ml (Flexmab de NIP228) usando concentradores Vivaspin (MWCO (forma siglada de Molecular Weight Cut-Off, límite de peso molecular) 10 kDa, GE Healthcare). Las concentraciones finales se determinaron usando un espectrofotómetro Nanodrop (A280, Thermo). Los rendimientos de la expresión transitoria después de 6 días fueron de 500 mg/l y 150 mg/l para Flexmab de Herceptin y Flexmab de NIP228, respectivamente.
Conjugaciones
Los anticuerpos Herceptin y R347 genomanipulados para tener una cisteína insertada entre las posiciones 239 y 240 se produjeron siguiendo los métodos descritos en Dimasi, N., et al., Molecular Pharmaceutics, 2017, 14, 1501-1516 (DOI: 10.1021/acs.molpharmaceut.6b00995).
Se llevaron a cabo conjugaciones con los siguientes anticuerpos con el Compuesto 6: Herceptin-C239i; y R347-C239i con una concentración de anticuerpos de 4,0 mg/ml, 6 equivalentes del Compuesto 6 y un tiempo de ciclo de 1 hora. Se observó formación de especies DAR=1.

Claims (25)

REIVINDICACIONES
1. Un conjugado de fórmula I:
Figure imgf000032_0001
en la que
Ab es un anticuerpo modificado que tiene al menos un sitio de conjugación libre en cada cadena pesada R2 es de fórmula Illa, de fórmula lllb o de fórmula lile:
Illa
a
donde A es un grupo arilo C5-7 y
(i) Q1 es un enlace simple y Q2 se selecciona de un enlace simple y -Z-(CH2)n-, donde Z se selecciona de un enlace simple, O, S y NH y n es de 1 a 3; o
(ii) Q1 es -CH=CH- y Q2 es un enlace simple;
Figure imgf000032_0003
donde Q se selecciona de O-RL1, S-RL1 y NRN-RL1 y RN se selecciona de H, metilo y etilo
X se selecciona del grupo que comprende: 0 -RL1, S-RL1, C02-RL1, CO-RL1, NH-C(=0 )-RL1, NHNH-RL1,
Figure imgf000032_0002
N— RL1
h
CONHNH-RL1, (_ )n-rL1 . NRNRL1, en donde RN se selecciona del grupo que comprende H y alquilo C m ;
RL1 es un enlazador para la conexión con el anticuerpo (Ab);
R2' se selecciona de los mismos grupos que R2 y está enlazado al mismo anticuerpo;
R6 y R9 se seleccionan independientemente de H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', nitro, Me3Sn y halo; donde R y R' se seleccionan independientemente de grupos alquilo C1-12, heterociclilo C3-20 y arilo C5-20 opcionalmente sustituidos;
R7 se selecciona de H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', nitro, Me3Sn y halo;
R" es un grupo alquileno C3-12, cuya cadena puede estar interrumpida por uno o más heteroátomos, por ejemplo, O, S, NRN2 (donde RN2 es H o alquilo C-m) y/o anillos aromáticos, por ejemplo, benceno o piridina; Y e Y' se seleccionan de O, S o NH;
R10 y R11 forman juntos un doble enlace entre los átomos de nitrógeno y de carbono a los que están unidos o; R10 es H y R11 se selecciona de OH, ORA y SOzM;
R30 y R31 forman juntos un doble enlace entre los átomos de nitrógeno y de carbono a los que están unidos o; R30 es H y R31 se selecciona de OH, ORA y SOzM;
R6', R7' y R9' se seleccionan de los mismos grupos que R6, R7 y R9, respectivamente.
2. Un conjugado de acuerdo con la reivindicación 1, en donde:
a) tanto Y como Y' son O; y/o
b) R'' es alquileno C3 -7; o
c) R" es un grupo de fórmula:
Figure imgf000033_0001
donde r es 1 o 2; y/o
d) R9 es H; y/o
e) R6 es H; y/o
f) R7 se selecciona de H, OH y OR, opcionalmente, en donde R7 es un grupo alquiloxi c1 -4.
3. Un conjugado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en donde:
a) R10 y R11 forman juntos un doble enlace entre los átomos de nitrógeno y de carbono a los que están unidos; b) R10 es H y R11 es OH;
c) R10 es H y R11 es OMe; o
d) R10 es H y R11 es SOzM, donde z es 2 o 3 y M es un catión monovalente farmacéuticamente aceptable.
4. Un conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde:
a) R30 y R31 forman juntos un doble enlace entre los átomos de nitrógeno y de carbono a los que están unidos; b) R30 es H y R31 es OH;
c) R30 es H y R31 es OMe; o
d) R30 es H y R31 es SOzM, donde z es 2 o 3 y M es un catión monovalente farmacéuticamente aceptable.
5. Un conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde:
a) R2 es de fórmula IIIa y A es fenilo;
b) R2 es de fórmula IIIa y Q2-X está preferentemente en un átomo en el anillo que no es adyacente al enlace con el resto del compuesto;
c) R2 es de fórmula IIIa y Q1 es un enlace simple;
d) R2 es de fórmula IIIa y Q1 es -CH=CH-;
e) R2 es de fórmula IIIb y RC1, RC2 y RC3 se seleccionan independientemente de H y metilo;
f) R2 es de fórmula III y Q es NRn-RL1, opcionalmente en donde RN es H o metilo; o
g) R2 es de fórmula III y Q es O-RL1 o S-RL1.
6. Un conjugado de acuerdo con la reivindicación 5, en donde Q2 es un enlace simple o Z-(CH2 )n-, donde Z puede ser O u S y n es 1 o 2.
7. Un conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde X se selecciona del grupo que consiste en: O-RL1, S-RL1, CO2-R1-1, NH-C(=O)-RL1 y NRNRL1.
8. Un conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde R2', R6', R7', R9', R30, R31 e Y' son los mismos que R2, R6, R7, R9, R10, R11 e Y, respectivamente.
9. Un conjugado de acuerdo con la reivindicación 1, que es de las fórmulas la, Ib o Ic:
Figure imgf000034_0001
donde
R1a se selecciona de metilo y bencilo.
10. Un conjungado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde RL1 es QX-Z-GLL,
en donde
QX se selecciona del grupo que consiste en un residuo de aminoácido, un residuo dipeptídico y un residuo tripeptídico,
Z es
Figure imgf000034_0002
donde a = de 0 a 5, b = de 0 a 16, c = 0 o 1, d = de 0 a 5 y e es 0 o 1, y
GLL se selecciona de:
Figure imgf000035_0001
donde Ar representa un grupo arileno C5-6, por ejemplo, fenileno y X representa alquilo C1-4
11. Un conjugado de acuerdo con la reivindicación 10, en donde QX es:
a) un residuo de aminoácido seleccionado de Phe, Lys, Val, Ala, Cit, Leu, Ile, Arg y Trp;
b) un residuo dipeptídico seleccionado de:
CO-Phe-Lys-NH,
CO-Val-Ala-NH,
CO-Val-Lys-NH,
CO-Ala-Lys-NH,
CO-Val-Cit-NH,
CO-Phe-Cit-NH,
CO-Leu-Cit-NH,
CO-Ile-Cit-NH,
CO-Phe-Arg-NH, y
CO-Trp-Cit-NH; o
c) un residuo tripeptídico.
12. Un conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en donde:
a) es de 0 a 3; y/o
b) b es de 0 a 12; y/o
c) d es de 0 a 3; o
d) a es 0, b es 0, c es 0, d es 5 y e es 1; o
e) c es 1, d es 2, e es 1 y b puede ser de 0 a 8.
13. Un conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en donde Ar es un grupo fenileno.
14. Un conjugado de acuerdo con la reivindicación 1 de fórmula Id:
Figure imgf000036_0001
donde m es un número entero de 2 a 8.
15. El conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en donde el anticuerpo modificado que tiene al menos un sitio de conjugación libre en cada cadena pesada es:
a) un anticuerpo IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4; y/o
b) un anticuerpo humano; o
c) un anticuerpo humanizado.
16. El conjugado de acuerdo con la reivindicación 15, en donde los residuos de cisteína intercatenarios naturales han sido sustituidos por residuos de aminoácidos que carecen de grupos tiol.
17. El conjugado de acuerdo con la reivindicación 16, que comprende al menos una sustitución adicional en cada cadena pesada de un residuo de aminoácido que comprende un grupo reactivo adecuado para su conjugación con un enlazador, opcionalmente en donde el aminoácido adicionalmente sustituido es una cisteína o un aminoácido no natural, opcionalmente en donde la posición que está sustituida es seleccionada de las que se exponen a continuación:
Figure imgf000037_0002
18. El conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, para su uso en terapia.
19. Una composición farmacéutica que comprende el conjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18 y un diluyente, un vehículo o un excipiente farmacéuticamente aceptables.
20. El conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 19, para su uso en el tratamiento de una enfermedad proliferativa en un sujeto, opcionalmente en donde la enfermedad tratada es cáncer.
21. Un compuesto de fórmula II:
Figure imgf000037_0001
y sales y solvatos del mismo,
en donde R6, R7, R9, R10, R11, Y, R", Y', R6', R7', R9', R30 y R31 son tal como se definen en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8;
R12 es de fórmula IVa, fórmula IVb o fórmula IVc:
Figure imgf000038_0001
donde A es un grupo arilo C5-7 y
(i) Q1 es un enlace simple y Q2 se selecciona de un enlace simple y -Z-(CH2)n-, donde Z se selecciona de un enlace simple, O, S y NH y n es de 1 a 3; o
(ii) Q1 es -CH=CH- y Q2 es un enlace simple;
Figure imgf000038_0004
donde Q* se selecciona de O-RG1, S-RG1 y NRN-RG1 y RN se selecciona de H, metilo y etilo
X* se selecciona del grupo que comprende: 0-R G1, S-RG1, CÜ2-RG1, CO-RG1, NH-C(=0)-RG1, NHNH-RG1,
Figure imgf000038_0002
CONHNH-RG1, > > NRNRG1, en donde RN se selecciona del grupo que comprende H y alquilo C 1-4;
RG1 es QX-Z-GL,
en donde
QX se selecciona del grupo que consiste en un residuo de aminoácido, un residuo dipeptídico y un residuo tripeptídico,
Z es
Figure imgf000038_0003
donde a = de 0 a 5, b = de 0 a 16, c = 0 o 1, d = de 0 a 5 y e es 0 o 1, y
GL se selecciona de:
Figure imgf000038_0005
continuación
Figure imgf000039_0001
donde Ar representa un grupo arileno C5-6, por ejemplo, fenileno y X representa alquilo C1-4; R12' se selecciona de los mismos grupos que R12
22. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 21, en donde QX es:
a) un residuo de aminoácido seleccionado de Phe, Lys, Val, Ala, Cit, Leu, Ile, Arg y Trp; b) un residuo dipeptídico seleccionado de:
CO-Phe-Lys-NH,
CO-Val-Ala-NH,
CO-Val-Lys-NH,
CO-Ala-Lys-NH,
CO-Val-Cit-NH,
CO-Phe-Cit-NH,
CO-Leu-Cit-NH,
CO-Ile-Cit-NH,
CO-Phe-Arg-NH, y
CO-Trp-Cit-NH; o
c) un residuo tripeptídico.
23. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 21 o 22, en donde;
a) es de 0 a 3; y/o
b) b es de 0 a 12; y/o
c) d es de 0 a 3; o
d) a es 0, b es 0, c es 0, d es 5 y e es 1; o
e) c es 1, d es 2, e es 1 y b puede ser de 0 a 8.
24. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 21 a 23, en donde Ar es un grupo fenileno.
25. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 21, en donde el compuesto es de fórmula Id':
Figure imgf000040_0001
o fórmula (Ie'):
Figure imgf000040_0002
donde m es un número entero de 2 a 8.
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