ES2874699T3 - Conjugados de pirrolobenzodiazepina - Google Patents

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ES2874699T3 ES17791980T ES17791980T ES2874699T3 ES 2874699 T3 ES2874699 T3 ES 2874699T3 ES 17791980 T ES17791980 T ES 17791980T ES 17791980 T ES17791980 T ES 17791980T ES 2874699 T3 ES2874699 T3 ES 2874699T3
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Philip Wilson Howard
Stephen John Gregson
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Abstract

Un compuesto de fórmula I: **(Ver fórmula)** y sales y solvatos del mismo, en donde: los corchetes indican que el grupo NO2 es opcional; D representa el grupo D1 o el grupo D2: **(Ver fórmula)** la línea punteada indica la presencia opcional de un enlace doble entre C2 y C3, cuando existe un enlace doble entre C2 y C3, R2 se selecciona del grupo que consiste en: (ia) grupo arilo C5-10, opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que comprende: halo, nitro, ciano, éter, carboxi, éster, alquilo C1-7, heterociclilo C3-7 y bis-oxi-alquileno C1-3; (ib) alquilo C1-5 alifático saturado; (ic) cicloalquilo C3-6 saturado; (id) **(Ver fórmula)** en donde cada uno de R11, R12' y R13 se selecciona de forma independiente de H, alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3 y ciclopropilo, donde la cantidad total de átomos de carbono en el grupo R2 es no mayor de 5; (ie) **(Ver fórmula)** en donde uno de R15a y R15b es H y el otro se selecciona de: fenilo, estando el fenilo opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de halo, metilo, metoxi, piridilo y tiofenilo, y (if) **(Ver fórmula)** donde R14 se selecciona de: H; alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3, ciclopropilo; fenilo, estando el fenilo opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de halo, metilo, metoxi, piridilo y tiofenilo, cuando existe un enlace simple entre C2 y C3, R2 se selecciona de H, OH, F, diF y **(Ver fórmula)** donde R16a y R16b se seleccionan independientemente de H, F, alquilo C1-4 saturado, alquenilo C2-3, estando los grupos alquilo y alquenilo opcionalmente sustituidos por un grupo que se selecciona de alquilamido C1-4 y alquiléster C1-4; o, cuando uno de R16a y R16b es H, el otro se selecciona de nitrilo y un alquiléster C1-4; D' representa el grupo D'1 o el grupo D'2: **(Ver fórmula)** en donde la línea punteada indica la presencia opcional de un enlace doble entre C2' y C3', cuando existe un enlace doble entre C2' y C3', R12 se selecciona del grupo que consiste en: (iia) grupo arilo C5-10, opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que comprende: halo, nitro, ciano, éter, carboxi, éster, alquilo C1-7, heterociclilo C3-7 y bis-oxi-alquileno C1-3; (iib) alquilo C1-5 alifático saturado; (iic) cicloalquilo C3-6 saturado; (iid) **(Ver fórmula)** donde cada uno de R21, R22 y R23 se selecciona de forma independiente de H, alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3 y ciclopropilo, donde la cantidad total de átomos de carbono en el grupo R12 es no mayor de 5; (iie) **(Ver fórmula)** en donde uno de R25a y R25b es H y el otro se selecciona de: fenilo, estando el fenilo opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de halo, metilo, metoxi, piridilo y tiofenilo, y (iif) **(Ver fórmula)** donde R24 se selecciona de: H; alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3, ciclopropilo; fenilo, estando el fenilo opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de halo, metilo, metoxi, piridilo y tiofenilo, cuando existe un enlace simple entre C2' y C3', R12 se selecciona de H, OH, F, diF y **(Ver fórmula)** donde R26a y R26b se seleccionan independientemente de H, F, alquilo C1-4 saturado, alquenilo C2-3, estando los grupos alquilo y alquenilo opcionalmente sustituidos por un grupo que se selecciona de alquilamido C1-4 y alquiléster C1-4; o, cuando uno de R26a y R26b es H, el otro se selecciona de nitrilo y un alquiléster C1-4; R6 y R9 se seleccionan independientemente de H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', nitro, Me3Sn y halo; donde R y R' se seleccionan de forma independiente de los grupos alquilo C1-12, heterociclilo C3-20 y arilo C5-20 opcionalmente sustituidos; R7 se selecciona de H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', nitro, Me3Sn y halo; R" es un grupo alquileno C3-12 cuya cadena puede estar interrumpida por uno o más heteroátomos, por ejemplo, O, S, NRN2 (donde RN2 es H o alquilo C1-4) y/o anillos aromáticos, por ejemplo, benceno o piridina; Y e Y' se seleccionan de O, S o NH; R6', R7', R9' se seleccionan de los mismos grupos que R6, R7 y R9, respectivamente; R11b se selecciona de OH, ORA, donde RA es alquilo C1-4; y RL es un enlazador para la conexión a un agente de unión celular, que se selecciona de: **(Ver fórmula)** en donde Q es: **(Ver fórmula)** donde QX es tal que Q es un residuo de aminoácido, un residuo de dipéptido o un residuo de tripéptido; X es: **(Ver fórmula)** donde a = 0 a 5, b = 0 a 16, c = 0 o 1, d = 0 a 5; GL se selecciona de: **(Tabla)**

Description

DESCRIPCIÓN
Conjugados de pirrolobenzodiazepina
La presente invención se refiere conjugados que comprenden pirrolobenzodiazepinas y dímeros relacionados (PBD) y enlazadores de fármaco precursor utilizados para fabricar dichos conjugados.
Antecedentes de la invención
Algunas pirrolobenzodiazepinas (PBDs) tienen la capacidad de reconocer y unirse a secuencias específicas de ADN; la secuencia preferida es PuGPu. El primer antibiótico antitumoral de p Bd , la antramicina, se descubrió en 1965 (Leimgruber, et al., J. Am. Chem. Soc., 87, 5793-5795 (1965); Leimgruber, et al., J. Am. Chem. Soc., 87, 5791-5793 (1965)). Desde entonces, se ha informado de una serie de PBDs que se producen naturalmente, y se han desarrollado más de 10 rutas de síntesis para varios análogos (Thurston, et al., Chem. Rev. 1994, 433-465 (1994). Miembros de la familia incluyen abeimicina (Hochlowski, et al., J. Antibiotics, 40, 145-148 (1987)), chicamicina (Konishi, et al., J. Antibiotics, 37, 200-206 (1984)), DC-81 (Patente Japonesa 58-180 487; Thurston, et al., Chem. B rit, 26, 767-772 (1990); Bose, et al., Tetrahedron, 48, 751-758 (1992)), mazetramicina (Kuminoto, et al., J. Antibiotics, 33, 665-667 (1980)), neotramicinas A y B (Takeuchi, et al., J. Antibiotics, 29, 93-96 (1976)), porotramicina (Tsunakawa, et al., J. Antibiotics, 41, 1366-1373 (1988)), protracarcina (Shimizu, et al., J. Antibiotics, 29, 2492-2503 (1982); Langley y Thurston, J. Org. Chem., 52, 91-97 (1987)), sibanomicina (DC-102) (Hara, et al., J. Antibiotics, 41, 702-704 (1988); Itoh, et al., J. Antibiotics, 41, 1281-1284 (1988)), sibiromicina (Leber, et al., J. Am. Chem. Soc., 110, 2992-2993 (1988)) y tomamicina (Arima, et al., J. Antibiotics, 25, 437-444 (1972)). Las PBDs son de la estructura general:
Figure imgf000002_0001
Ellas difieren en el número, el tipo y la posición de los sustituyentes, tanto en sus anillos A aromáticos como en sus anillos C de pirrolo, y en el grado de saturación del anillo C. En el anillo B existe ya sea una imina (N=C), una carbinolamina (NH-CH(OH)), o un éter metílico de carbinolamina (NH-CH(OMe)) en la posición N10-C11 que es el centro electrófilo responsable de la alquilación del ADN. Todos los productos naturales conocidos tienen una configuración (S) en la posición C11a quiral que les proporciona un giro hacia la derecha cuando se miran desde el anillo C hacia el anillo A. Esto les da la forma tridimensional apropiada para isohelicidad con el surco menor del ADN de forma B, conduciendo a un encaje ajustado en el sitio de unión (Kohn, en Antibiotics III. Springer-Verlag, Nueva York, p.p. 3-11 (1975); Hurley y Needham-VanDevanter, Acc. Chem. Res., 19, 230-237 (1986)). Su capacidad para formar un aducto en el surco menor les permite interferir con el procesamiento del ADN, de ahí su uso como agentes antitumorales.
Se describió anteriormente que la actividad biológica de estas moléculas puede potenciarse mediante la unión de dos unidades de PBD entre sí a través de sus funcionalidades de C8/C'-hidroxilo mediante un enlazador de alquileno flexible (Bose, D.S., et ál., J. Am. Chem. Soc., 114, 4939-4941 (1992); Thurston, D.E., et ál., J. Org. Chem., 61, 8141­ 8147 (1996)). Se cree que los dímeros de PBD forman lesiones de ADN selectivas de la secuencia tales como reticulación intercatenarias 5'-Pu-GATC-Py-3' palindrómicas (Smellie, M., et ál., Biochemistry, 42, 8232-8239 (2003); Martin, C., et ál., Biochemistry, 44, 4135-4147), que se cree son las principales responsables de su actividad biológica.
Un ejemplo de un dímero de PBD es SG2000 (SJG-136):
Figure imgf000002_0002
(Gregson, S., et ál., J. Med. Chem., 44, 737-748 (2001); Alley, M.C., et ál., Cancer Research, 64, 6700-6706 (2004); Hartley, J.A., et ál., Cancer Research, 64, 6693-6699 (2004)), que se vio implicado en pruebas clínicas como un agente independiente, por ejemplo, NCT02034227 que investiga su uso en el tratamiento de leucemia mieloide aguda y leucemia linfocítica crónica (ver: https://www.clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02034227).
Los compuestos de PBD diméricos que contienen los sustituyentes de arilo C2, tales como SG2202 (ZC-207, se describen en WO 2005/085251:
Figure imgf000003_0001
y en WO2006/111759, bisulfitos de dichos compuestos de PBD, por ejemplo, SG2285 (ZC-423):
Figure imgf000003_0002
Estos compuestos mostraron ser agentes citotóxicos ampliamente útiles (Howard, P.W., et ál., Bioorg. Med. Chem. (2009), doi: 10.1016/j.bmcl.2009.09.012).
WO 2007/085930 describe la preparación de compuestos diméricos de PBD con grupos enlazadores para la conexión a un agente de unión celular, tal como un anticuerpo. El enlazador se encuentra presente en el puente que enlaza las unidades monoméricas de PBD del dímero.
Los compuestos diméricos de PBD que tienen grupos enlazadores para la conexión a un agente de unión celular, tal como un anticuerpo, se describen en WO 2011/130598. El enlazador en estos compuestos se une a una de las posiciones N10 disponibles y, en general, se escinde mediante la acción de una enzima en el grupo enlazador. Si la posición N10 no unida se encuentra protegida con un grupo de terminación, los grupos de terminación ejemplificados tienen la misma activación de escisión que el enlazador al anticuerpo.
WO 2014/057074 describe dos conjugados diméricos de PBD unidos mediante la posición N10 en un monómero, el otro monómero de PBD se encuentra en forma de imina.
WO 2015/052322 describe un conjugado de dímero de PBD unidos mediante la posición N10 en un monómero, el otro monómero de PBD se encuentra en forma de imina. También describe un conjugado dimérico de PBD específico enlazado mediante la posición N10 en un monómero, el otro monómero de PBD tiene un grupo de terminación con la misma activación de escisión que el enlazador al anticuerpo:
Figure imgf000004_0001
Descripción de la invención
La presente invención proporciona un PBD y conjugados diméricos relacionados donde el grupo N10-C11 que no se encuentra unido a la unidad de ligando es un grupo de terminación de p-glucurónido. La activación de escisión para la unidad enlazadora a la unidad de ligando es escindible de forma no glucurónida.
Se cree que el uso de una unidad de terminación glucurónida en estos conjugados es ventajoso, ya que si el conjugado es escindido del anticuerpo fuera de la célula diana, el compuesto protegido liberado permanece inactivo, ya que es incapaz de atravesar las membranas de la célula debido a su hidrofilicidad.
La presente invención también proporciona un PBD y enlazadores de fármaco diméricos relacionados adecuados para conjugarse en una unidad de ligando, donde el grupo N10-C11 que no se pretende que se encuentre unido a la unidad de ligando es un grupo de terminación de glucurónido. La activación de escisión para la unidad enlazadora es una unidad de terminación no glucurónida.
Se cree que el uso de una unidad de terminación glucurónida en estos enlazadores de fármaco es ventajoso, ya que aumenta la hidrofilicidad del enlazador de fármaco generalmente hidrofóbico, lo que hace que los enlazadores de fármaco puedan conjugarse más fácilmente en una unidad de ligando.
La invención se define por las reivindicaciones. Cualquier materia objeto que quede fuera del alcance de las reivindicaciones se proporciona únicamente con fines de información. Cualquier referencia en la descripción a métodos de tratamiento se refiere a los compuestos, las composiciones farmacéuticas y los medicamentos de la presente invención para su uso en un método de tratamiento del cuerpo humano o animal mediante terapia.
Un primer aspecto de la presente invención comprende un compuesto con la fórmula I:
Figure imgf000005_0001
y sales y solvatos de este, donde:
los paréntesis rectos indican que el grupo NO2 es opcional:
D representa cualquiera de los grupos D1 o D2:
Figure imgf000005_0002
D1 D2
la línea punteada indica la presencia opcional de un enlace doble entre C2 y C3; cuando existe un enlace doble entre C2 y C3, R2 se selecciona del grupo que consiste en:
(ia) grupo arilo C5-10, opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que comprende: halo, nitro, ciano, éter, carboxi, éster, alquilo C1-7, heterociclilo C3-7 y bis-oxi-alquileno C1-3;
(ib) alquilo C1-5 alifático saturado;
(ic) cicloalquilo C3-6 saturado;
(id)
Figure imgf000005_0003
donde cada uno de R11, R12 y R13 se selecciona de forma independiente de H, alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3 y ciclopropilo, donde la cantidad total de átomos de carbono en el grupo R2 es menos de 5;
(ie)
Figure imgf000005_0004
donde uno de R15a y R15b es H y el otro se selecciona de: fenilo, que se encuentra opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de halo, metilo o metoxi, piridilo y tiofenilo, y
(if)
Figure imgf000006_0001
donde R14 se selecciona de: H; alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3, ciclopropilo; fenilo, dicho fenilo se encuentra opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de halo, metilo, metoxi, piridilo y tiofenilo,
cuando existe un enlace simple entre C2 y C3,
R2 se selecciona de H, OH, F, diF y
Figure imgf000006_0002
donde R16a y R16b se seleccionan independientemente de H, F, alquilo C1-4 saturado, alquenilo C2-3, cuyos grupos alquilo y alquenilo están opcionalmente sustituidos por un grupo que se selecciona de alquilamido C1-4 y alquiléster C1-4; o, cuando uno de R16a y R16b es H, el otro se selecciona de nitrilo y un alquiléster C1-4;
D' representa ya sea al grupo D'1 o D'2:
Figure imgf000006_0003
donde la línea punteada indica la presencia opcional de un enlace doble entre C2' y C3';
cuando existe un enlace doble entre C2' y C3', R12 se selecciona del grupo que consiste en:
(iia) grupo arilo C5-10, opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que comprende: halo, nitro, ciano, éter, carboxi, éster, alquilo C1-7, heterociclilo C3-7 y bis-oxi-alquileno C1-3;
(iib) alquilo C1-5 alifático saturado;
(iic) cicloalquilo C3-6 saturado;
(iid)
Figure imgf000006_0004
donde cada uno de R21, R22 y R23 se selecciona de forma independiente de H, alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3 y ciclopropilo, donde la cantidad total de átomos de carbono en el grupo R12 es menos de 5; (iie)
Figure imgf000006_0005
donde uno de R25a y R25b es H y el otro se selecciona de: fenilo, que se encuentra opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de halo, metilo, metoxi, piridilo y tiofenilo, y
(iif)
Figure imgf000006_0006
donde R24 se selecciona de: H; alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3, ciclopropilo; fenilo, dicho fenilo se encuentra opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de halo, metilo, metoxi, piridilo y tiofenilo, cuando existe un enlace simple entre C2' y C3',
R12 se selecciona de H, OH, F, diF y
Figure imgf000007_0001
donde R26a y R26b se seleccionan independientemente de H, F, alquilo C1-4 saturado, alquenilo C2-3, cuyos grupos alquilo y alquenilo están opcionalmente sustituidos por un grupo que se selecciona de alquilamido C1-4 y alquiléster C1-4; o, cuando uno de R26a y R26b es H, el otro se selecciona de nitrilo y un alquiléster C1-4;
R6 y R9 se seleccionan independientemente de H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', nitro, Me3Sn y halo; donde R y R' se seleccionan de forma independiente de grupos alquilo C1-12, heterociclilo C3-20 y arilo C5-20 opcionalmente sustituidos;
R7 se selecciona de H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', nitro, Me3Sn y halo;
R" es un grupo alquileno C3-12 cuya cadena puede estar interrumpida por uno o más heteroátomos, por ejemplo, O, S, NRN2 (donde RN2 es H o alquilo C1-4) y/o anillos aromáticos, por ejemplo, benceno o piridina;
Y e Y' se seleccionan de O, S o NH;
R6', R7', R9' se seleccionan de los mismos grupos que R6, R7 y R9, respectivamente;
R11b se selecciona de OH, ORA, donde RA es alquilo C1-4; y
RL es un enlazador para la conexión a un agente de unión celular, que es:
(iiia):
Figure imgf000007_0002
donde
Q es:
Figure imgf000007_0003
donde QX es tal que Q es un residuo de aminoácidos, un residuo de dipéptido o un residuo de tripéptido; X es:
Figure imgf000007_0004
donde a = 0 a 5, b = 0 a 16, c = 0 o 1, d = 0 a 5;
GL es un enlazador para la conexión a una unidad de ligando; el enlazador GL usado en la presente invención es como se define en la reivindicación 1 y en el presente documento se divulga que RL es un enlazador para la conexión a un agente de unión celular que es
(iiib):
donde RL1 y RL2 se seleccionan independientemente de H y metilo, o junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un grupo ciclopropileno o ciclobutileno; y e es 0 o 1.
Un segundo aspecto de la presente invención proporciona Conjugados de fórmula II:
L -( D L)p (II)
donde L es una unidad de ligando (es decir, un agente de direccionamiento), DL es una unidad de enlazador de fármaco de fórmula I':
Figure imgf000008_0001
donde D, R2, R6, R7, R9, R11b, Y, R”, Y', D', R6', R7', R9' and R12 (que incluye la presencia o ausencia de enlaces dobles entre C2 y C3 y C2' y C3' respectivamente, y el grupo NO2) son como se definen en el primer aspecto de la invención;
RLL es un enlazador para la conexión a un agente de unión celular, que es:
(iiia)
Figure imgf000008_0002
donde Q y X son como se definen en el primer aspecto y GLL es un enlazador conectado a una unidad de ligando; y en el presente documento se divulga que RLL es un enlazador para la conexión a un agente de unión celular (iiib):
Figure imgf000008_0003
donde RL1 y RL2 son como se definen en el primer aspecto;
donde p es un número entero de 1 a 20.
La unidad de ligando, descrita en más detalle más adelante, es un agente de direccionamiento que se une a un resto diana. La unidad de ligando puede, por ejemplo, unirse específicamente a un componente celular (un agente de unión) o a otras moléculas diana de interés. La unidad de ligando puede ser, por ejemplo, una proteína, polipéptido o péptido, tal como un anticuerpo, un fragmento de unión al antígeno del anticuerpo u otro agente de unión, tal como una proteína de fusión Fc.
En el presente documento se describe el uso de un conjugado del segundo aspecto de la invención en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad proliferativa. El tercer aspecto también proporciona un conjugado del segundo aspecto de la invención para el uso en el tratamiento de una enfermedad proliferativa. El tercer aspecto también proporciona un conjugado del segundo aspecto de la invención para su uso para el tratamiento de una enfermedad proliferativa que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un conjunto del segundo aspecto de la invención a un paciente que lo necesita.
Un experto en la técnica puede determinar si un conjugado candidato trata o no una afección proliferativa para cualquier tipo de célula particular. Por ejemplo, en los ejemplos que se encuentran más adelante se describen ensayos que se pueden utilizar de forma conveniente para evaluar la actividad que ofrece un compuesto particular.
Un cuarto aspecto de la presente invención proporciona la síntesis de un conjugado del segundo aspecto de la invención que comprende conjugar un compuesto (enlazador de fármaco) del primer aspecto de la invención con una unidad del ligando.
Breve descripción de las figuras
La Figura 1 muestra el efecto en la viabilidad de células SKOV3 luego de la incubación con un conjugado de la presente invención;
La Figura 2 muestra el efecto en la viabilidad de células SKOV3 luego de la incubación con un conjugado diferente de la presente invención;
La Figura 3 muestra el efecto en el volumen de un tumor de xenoinjerto NCI-N87 luego del tratamiento con un conjugado diferente de la presente invención;
La Figura 4 muestra el efecto en el volumen de un tumor de xenoinjerto JIMT-1 luego del tratamiento con un conjugado igual de la presente invención, como se observa en la Figura 3
Definiciones
Sustituyentes
La expresión “opcionalmente sustituido”, tal como se usa en la presente, hace referencia a un grupo original que puede estar no sustituido o que puede estar sustituido.
A menos que se especifique lo contrario, el término “sustituido”, tal como se usa en la presente, hace referencia a un grupo original que contiene uno o más sustituyentes. El término “sustituyente” se utiliza en la presente en el sentido convencional y hace referencia a un resto químico que se encuentra unido de manera covalente, o si corresponde, fusionado, a un grupo original. Se conoce una amplia variedad de sustituyentes y también se conocen métodos para su formación e introducción en varios grupos originales.
A continuación se describen en más detalle ejemplos de sustituyentes.
Alquilo C1-12: El término “alquilo C1-12”, tal como se usa en la presente, hace referencia a un resto monovalente que se obtiene al quitar un átomo de hidrógeno de un átomo de carbono de un compuesto hidrocarburo que tiene de 1 a 12 átomos de carbono, el que puede ser alifático o alicíclico, y que se puede encontrar saturado o insaturado (por ejemplo, parcialmente no saturado, totalmente no saturado). El término “alquilo C1-4”, tal como se usa en la presente, hace referencia a un resto monovalente que se obtiene al quitar un átomo de hidrógeno de un átomo de carbono de un compuesto hidrocarburo que tiene de 1 a 4 átomos de carbono, el que puede ser alifático o alicíclico, y que se puede encontrar saturado o insaturado (por ejemplo, parcialmente insaturado, totalmente no saturado). Por lo tanto, el término “alquilo” incluye las subclases alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, etc., las que se discuten más adelante.
Los ejemplos de grupos alquilo saturados incluyen, de modo no taxativo, metilo (C1), etilo (C2), propilo (C3), butilo (C4), pentilo (C5), hexilo (Ce) y heptilo (C7).
Los ejemplos de grupos alquilo lineales saturados incluyen, de modo no taxativo, metilo (C1), etilo (C2), n-propilo (C3), n-butilo (C4), n-pentilo (amilo) (C5), n-hexilo (Ce) y n-heptilo (C7).
Los ejemplos de grupos alquilo ramificados saturados incluyen iso-propilo (C3), iso-butilo (C4), sec-butilo (C4), tercbutilo (C4), iso-pentilo (C5) y neo-pentilo (C5).
Alquenilo C2-12: El término “alquenilo C2-12”, tal como se usa en la presente, se refiere a un grupo alquilo que tiene uno o más enlaces dobles carbono-carbono.
Los ejemplos de grupos alquenilo insaturados incluyen, de modo no taxativo, etenilo (vinilo, -CH=CH2), 1-propenilo (-CH=Ch -Ch 3), 2-propenilo (alilo, -CH-CH=CH2), isopropenilo (1-metilvinilo, -C(CH3)=CH2), butenilo (C4), pentenilo (C5) y hexenilo (Ce).
Alquinilo C2-12: El término “alquinilo C2-12”, tal como se usa en la presente, se refiere a un grupo alquilo que tiene uno o más enlaces triples carbono-carbono.
Los ejemplos de grupos alquinilo insaturados incluyen, de modo no taxativo, etinilo (-C=CH) y 2-propinilo (propargilo, -CH2CECH).
Cicloalquilo C3-12: El término “cicloalquilo C3-12” tal como se usa en la presente, se refiere a un grupo alquilo que es también un grupo ciclilo; es decir, un resto monovalente que se obtiene al quitar un átomo de hidrógeno de un átomo del anillo alicíclico de un compuesto de hidrocarburo cíclico (carbocíclico), cuyo resto tiene de 3 a 7 átomos de carbono, incluyendo de 3 a 7 átomos del anillo.
Los ejemplos de grupos cicloalquilo incluyen, de modo no taxativo, aquellos derivados de:
compuestos de hidrocarburos monocíclicos saturados:
ciclopropano (C3), ciclobutano (C4), ciclopentano (C5), ciclohexano (Ce), cicloheptano (C7), metilciclopropano (C4), dimetilciclopropano (C5), metilciclobutano (C5), dimetilciclobutano (Ce), metilciclopentano (Ce), dimetilciclopentano (C7) y metilciclohexano (C7);
compuestos de hidrocarburos monocíclicos no saturados:
ciclopropeno (C3), ciclobuteno (C4), ciclopenteno (C5), ciclohexeno (Ce), metilciclopropeno (C4), dimetilciclopropeno (C5), metilciclobuteno (C5), dimetilciclobuteno (Ce), metilciclopenteno (Ce), dimetilciclopenteno (C7) y metilciclohexeno (C7); y
compuestos de hidrocarburos policíclicos saturados:
norcarano (C7), norpinano (C7), norbornano (C7).
Heterociclilo C3-20: El término “heterociclilo C3-20”, tal como se usa en la presente, se refiere a un resto monovalente que se obtiene al quitar un átomo de hidrógeno de un átomo del anillo de un compuesto heterocíclico, cuyo resto tiene de 3 a 20 átomos del anillo, de los cuales de 1 a 10 son heteroátomos del anillo. Preferentemente, cada anillo tiene de 3 a 7 átomos del anillo, de los cuales de 1 a 4 son heteroátomos del anillo.
En este contexto, los prefijos (por ejemplo, C3-20, C3-7, C5-e, etc.) indican la cantidad de átomos del anillo o intervalo de números de átomos del anillo, ya sean átomos de carbono o heteroátomos. Por ejemplo, el término “heterociclilo C5-e”, tal como se usa en la presente, se refiere a un grupo heterociclilo que tiene 5 o e átomos del anillo.
Los ejemplos de grupos heterociclilo monocíclicos incluyen, de modo no taxativo, aquellos derivados de:
N1: aziridina (C3), azetidina (C4), pirrolidina (tetrahidropirrol) (C5), pirrolina (por ejemplo, 3-pirrolina, 2,5-dihidropirrol) (C5), 2H-pirrol o 3H-pirrol (isopirrol, isoazol) (C5), piperidina (Ce), dihidropiridina (Ce), tetrahidropiridina (Ce), azepina (C7);
O1: oxirano (C3), (C4), oxolano (tetrahidrofurano) (C5), oxol (dihidrofurano) (C5), oxano (tetrahidropirano) (Ce), dihidropirano (Ce), pirano (Ce), oxepin (C7);
S1: tiirano (C3), tietano (C4), tiolano (tetrahidrotiofeno) (C5), tiano (tetrahidrotiopiran) (Ce), tiepano (C7);
O2: dioxolano (C5), dioxano (Ce) y dioxepano (C7);
O3: trioxano (Ce);
N2: imidazolidina (C5), pirazolidina (diazolidina) (C5), imidazolina (C5), pirazolina (dihidropirazol) (C5), piperazina (Ce);
N1O1: tetrahidrooxazol (C5), dihidrooxazol (C5), tetrahidroisoxazol (C5), dihidroisoxazol (C5), morfolina (Ce), tetrahidrooxazina (Ce), dihidrooxazina (Ce), oxazina (Ce);
N1S1: tiazolina (C5), tiazolidina (C5), tiomorfolina (Ce);
N2O1: oxadiazina (Ce);
O1S1: oxatiol (C5) y oxatiano (tioxano) (Ce); y
N1O1S1: oxatiazina (Ce).
Los ejemplos de grupos heterociclilo monocíclicos sustituidos incluyen aquellos derivados de sacáridos, en forma cíclica, por ejemplo, furanosas (C5), tales como arabinofuranosa, lixofuranosa, ribofuranosa y xilofuransa, y piranosas (Ce), tales como alopiranosa, altropiranosa, glucopiranosa, manopiranosa, gulopiranosa, idopiranosa, galactopiranosa y talopiranosa.
Arilo C5-20: El término “arilo C5-20”, tal como se usa en la presente, se refiere a un resto monovalente que se obtiene al quitar un átomo de hidrógeno de un átomo de un anillo aromático de un compuesto aromático, cuyo resto tiene de 3 a 20 átomos del anillo. El término “arilo C5-7”, tal como se usa en la presente, hace referencia a un resto monovalente que se obtiene al quitar un átomo de hidrógeno de un átomo de un anillo aromático de un compuesto aromático, cuyo resto tiene de 5 a 7 átomos del anillo y el término “arilo C5-10”, tal como se usa en la presente, hace referencia a un resto monovalente que se obtiene al quitar un átomo de hidrógeno de un átomo de un anillo aromático de un compuesto aromático, cuyo resto tiene de 5 a 10 átomos del anillo. Preferentemente, cada anillo tiene de 5 a 7 átomos del anillo.
Tal como se usa en la presente, los prefijos (por ejemplo, C3-20, C5-7, C5-e, C5-10, etc.) indican la cantidad de átomos del anillo o el intervalo de números de átomos del anillo, ya sean átomos de carbono o heteroátomos. Por ejemplo, el término "arilo C5-e", tal como se utiliza en la presente, hace referencia a un grupo arilo que tiene 5 o e átomos del anillo.
Todos los átomos del anillo pueden ser átomos de carbono, tal como en los “grupos carboarilo”.
Los ejemplos de grupos carboarilo incluyen, de modo no taxativo, aquellos derivados de benceno (es decir, fenilo) (Ce), naftaleno (C10), azuleno (C10), antraceno (C14), fenantreno (C14), naftaceno (C18) y pireno (Cía).
Los ejemplos de grupos arilo que comprenden anillos fusionados, de los cuales al menos uno es un anillo aromático, incluyen, de modo no taxativo, grupos derivados de indano (por ejemplo, 2,3-dihidro-1H-indeno) (C9), indeno (C9), isoindeno (C9), tetralina (1,2,3,4-tetrahidronaftaleno (C10), acenafteno (C12), fluoreno (C13), fenaleno (C13), acefenantreno (C15) y aceantreno (C1a).
De manera alternativa, los átomos del anillo pueden incluir uno o más heteroátomos, como en los “grupos heteroarilo”. Los ejemplos de grupos heteroarilo monocíclicos incluyen, de modo no taxativo, aquellos derivados de:
N1: pirrol (azol) (C5), piridina (azina) (Ce);
O1: furano (oxol) (C5);
S1: tiofeno (tiol) (C5);
N1O1: oxazol (C5), isoxazol (C5), isoxazina (Ce);
N2O1: oxadiazol (furazan) (C5);
N3O1: oxatriazol (C5);
N1S1: tiazol (C5), isotiazol (C5);
N2: imidazol (1,3-diazol) (C5), pirazol (1,2-diazol) (C5), piridazina (1,2-diazina) (Ce), pirimidina (1,3-diazina) (Ce) (por ejemplo, citosina, timina, uracilo), pirazina (1,4-diazina) (Ce);
N3: triazol (C5), triazina (Ce); y,
N4: tetrazol (C5).
Los ejemplos de heteroarilo que comprende anillos fusionados incluyen, de modo no taxativo:
C9 (con 2 anillos fusionados) derivado de benzofurano (O1), isobenzofurano (O1), indol (N1), isoindol (N1), indolizina (N1), indolina (N1), isoindolina (N1), purina (N4) (por ejemplo, adenina, guanina), bencimidazol (N2), indazol (N2), benzoxazol (N1O1), benzisoxazol (N1O1), benzodioxol (O2), benzofurazano (N2O1), benzotriazol (N3), benzotiofurano (S1), benzotiazol (N1S1), benzotiadiazol (N2S);
C10 (con 2 anillos fusionados) derivado de cromeno (O1), isocromeno (O1), croman (O1), isocroman (O1), benzodioxano (O2), quinolina (N1), isoquinolina (N1), quinolizina (N1), benzoxazina (N1O1), benzodiazina (N2), piridopiridina (N2), quinoxalina (N2), quinazolina (N2), cinolina (N2), ftalazina (N2), naftiridina (N2), pteridina (N4); C11 (con 2 anillos fusionados) derivados de benzodiazepina (N2);
C13 (con 3 anillos fusionados) derivados de carbazol (N1), dibenzofurano (O1), dibenzotiofeno (S1), carbolina (N2), perimidina (N2), piridoindol (N2); y
C14 (con 3 anillos fusionados) derivados de acridina (N1), xanteno (O1), tioxanteno (S1), oxantreno (O2), fenoxatiin (O1S1), fenazina (N2), fenoxazina (N1O1), fenotiazina (N1S1), tiantrena (S2), fenantridina (N1), fenantrolina (N2), fenazina (N2).
Los grupos anteriores, ya sea solos o como parte de otro sustituyente, pueden estar ellos mismos opcionalmente sustituidos con uno o más grupos seleccionados para ellos mismos y los sustituyentes adicionales indicados a continuación.
Halo: -F, -Cl, -Br, y-I.
Hidroxi: -OH.
Éter: -OR, donde R es un sustituyente éter, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7 (también denominado grupo alquiloxi C1-7, descrito más adelante), un grupo heterociclilo C3-20 (también denominado grupo heterocicliloxi C3-20), o un grupo arilo C5-20 (también denominado grupo ariloxi C5-20), preferentemente un grupo alquilo C1-7
Alcoxi: -OR, donde R es un grupo alquilo, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos alcoxi C1-7 incluyen, de modo no taxativo, -OMe (metoxi), -OEt (etoxi), -O(nPr) (n-propoxi), -O(iPr) (isopropoxi), -O(nBu) (nbutoxi), -O(sBu) (sec-butoxi), -O(iBu) (isobutoxi) y -O(tBu) (terc-butoxi).
Acetal: -CH(OR1)(OR2), en el que R1 y R2 son independientemente sustituyentes de acetal, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7 o, en el caso de un grupo acetal "cíclico", R1 y R2, junto con los dos átomos de oxígeno a los que se encuentran unidos, y los átomos de carbono a los que se encuentran unidos, forman un anillo heterocíclico que tiene de 4 a 8 átomos del anillo. Los ejemplos de grupos acetal incluyen, de modo no taxativo, -CH(OMe)2, -CH(OEt)2 y -CH(OMe)(OEt).
Hemiacetal: -CH(OH)(OR1), donde R1 es un sustituyente hemiacetal, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos acetal incluyen, de modo no taxativo, -CH(OH)(OMe) y -CH(OH)(OEt).
Cetal: -CR(OR1)(OR2), donde R1 y R2 son como se definieron para los acetales, y R es un sustituyente cetal diferente de hidrógeno, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7 , un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos cetal incluyen, de modo no taxativo, -C(Me)(OMe)2, -C(Me)(OEt)2, -C(Me)(OMe)(OEt), -C(Et)(OMe)2, -C(Et)(OEt)2 y -C(Et)(OMe)(OEt).
Hemicetal: -CR(OH)(OR1), donde R1 es como se definió para los hemiacetales, y R es un sustituyente hemicetal diferente de hidrógeno, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7 , un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos hemiacetal incluyen, de modo no taxativo, -C(Me)(OH)(OMe), -C(Et)(OH)(OMe), -C(Me)(OH)(OEt) y -C(Et)(OH)(OEt).
Oxo (ceto, -ona): =O.
Tiona (tiocetona): =S.
Imino (imina): =NR, en el que R es un sustituyente imino, por ejemplo, hidrógeno, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente hidrógeno o un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos éster incluyen, de modo no taxativo, =NH, =NMe, =NEt y =NPh.
Formilo (carbaldehído, carboxaldehído): -C(=O)H.
Acilo (ceto): -C(=O)R, donde R es un sustituyente acilo, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7 (también denominado alquilacilo C1-7 o alcanoílo C1.7), un grupo heterociclilo C3-20 (también denominado heterociclilacilo C3-20) o un grupo arilo C5-20 (también denominado arilacilo C5-20), preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos acilo incluyen, de modo no taxativo, -C(=O)CH3 (acetilo), -C(=O)CH2CH3 (propionilo), -C(=O)C(CH3)3 (tbutirilo) y -C(=O)Ph (benzoil, fenona).
Carboxi (ácido carboxílico): -C(=O)OH.
Tiocarboxi (ácido tiocarboxílico): -C(=S)SH.
Tiolocarboxi (ácido tiolocarboxílico): -C(=O)SH.
Tionocarboxi (ácido tionocarboxílico): -C(=S)OH.
Ácido imídico: -C(=NH)OH.
Ácido hidroxámico: -C(=NOH)OH.
Éster (carboxilato, éster de ácido carboxílico, oxicarbonilo): -C(=O)OR, donde R es un sustituyente éster, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos éster incluyen, de modo no taxativo, -C(=O)OCH3, -C(=O)OCH2CH3, -C(=O)OC(CH3)3 y -C(=O)OPh.
Aciloxi (éster inverso): -OC(=O)R, donde R es un sustituyente aciloxi, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente grupo alquilo C1.7. Los ejemplos de grupos aciloxi incluyen, de modo no taxativo, -OC(=O)CH3 (acetoxi), -OC(=O)CH2CH3, -OC(=O)C(CH3)3, -OC(=O)Ph y -OC(=O)CH2Ph. Oxicarboiloxi: -OC(=O)OR, en el que R es un sustituyente éster, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos éster incluyen, de modo no taxativo, -OC(=O)OCH3, -OC(=O)OCH2CH3, -OC(=O)OC(CH3)3 y --OC(=O)OPh.
Amino: -NR1R2, en el que R1 y R2 son independientemente sustituyentes amino, por ejemplo, hidrógeno, un grupo alquilo C1-7 (al que también se hace referencia como alquilamino C1-7 o dialquilamino C1-7), un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente H o un grupo alquilo C1-7 o, en el caso de un grupo amino "cíclico", R1 y R2, junto con el átomo de nitrógeno al que se encuentran unidos, forman un anillo heterocíclico que tiene de 4 a 8 átomos del anillo. Los grupos amino pueden ser primarios (-NH2), secundarios (-NHR1) o terciarios (-NHR1R2), y en forma catiónica, pueden ser cuaternarios (-+n R1R2R3). Los ejemplos de grupos amino incluyen, de modo no taxativo, -NH2, -NHCH3, -NHC(CH3)2, -N(CH3)2, -N(CH2Ch 3)2 y -NHPh. Los ejemplos de grupos amino cíclicos incluyen, de modo no taxativo, aziridino, azetidino, pirrolidino, piperidino, piperazino, morfolino y tiomorfolino. Amido (carbamoil, carbamilo, aminocarbonilo, carboxamida): -C(=O)NR1R2, donde R1 y R2 son independientemente sustituyentes amino, como se definió para los grupos amino. Los ejemplos de grupos amido incluyen, de modo no taxativo, -C(=O)NH2, -C(=O)NHCH3, -C(=O)N(CH3)2, -C(=O)NHCH2CH3 y -C(=O)N(CH2CH3)2, así como también grupos amido en los que R1 y R2, junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman una estructura heterocíclica como en, por ejemplo, piperidinocarbonilo, morfolinocarbonilo, tiomorfolinocarbonilo y piperazinocarbonilo.
Tioamido (tiocarbamilo): -C(=S)NR1R2, donde R1 y R2 son independientemente sustituyentes amino, como se definió para los grupos amino. Los ejemplos de grupos amido incluyen, de modo no taxativo, -C(=S)NH2, -C(=S)NHCHa, -C(=S)N(CHs)2 y -C(=S)NHCH2CHa.
Acilamido (acilamino): -NR1C(=O)R2, donde R1 es un sustituyente amida, por ejemplo, hidrógeno, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3.20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente hidrógeno o un grupo alquilo C1-7, y R2 es un sustituyente acilo , por ejemplo, un grupo alquilo C1-7 , un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente hidrógeno o un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos acilamida incluyen, de modo no taxativo, -NHC(=O)CH3, -NHC(=O)CH2CH3 y -NHC(=O)Ph. R1 y R2 juntos pueden formar una estructura cíclica, como en, por ejemplo, succinimidilo, maleimidilo y ftalimidilo:
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Aminocarboniloxi: -OC(=O)NR1R2, donde R1 y R2 son independientemente sustituyentes amino, como se definió para los grupos amino. Los ejemplos de grupos aminocarboniloxi incluyen, de modo no taxativo, -OC(=O)NH2, -OC(=O)NHMe, -OC(=O)NMe2 y -OC(=O)NEt2.
Ureido: -N(R1)CONR2R3 donde R2 y R3 son independientemente sustituyentes amino, como se define para los grupos amino, y R1 es un sustituyente ureido, por ejemplo, hidrógeno, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20 , preferentemente hidrógeno o un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos ureido incluyen, de modo no taxativo, -NHCONH2, -NHCONHMe, NHCONHEt, -NHCONMe2, -NHCONEt2, -NMeCONH2, -NMeCONHMe, NMeCONHEt, -NMeCONMe2 y -NMeCONEt2.
Guanidino: -NH-C(=NH)NH2.
Tetrazolilo: un anillo aromático de cinco miembros que tiene cuatro átomos de nitrógeno y un átomo de carbono:
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Imino: =NR, en el que R es un sustituyente imino, por ejemplo, hidrógeno, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente H o un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos imino incluyen, de modo no taxativo, =NH, =NMe y =NEt.
Amidina (amidino): -C(=NR)NR2, en el que cada R es un sustituyente amidina, por ejemplo, hidrógeno, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente H o un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos amidino incluyen, de modo no taxativo, -C(=Nh )NH2, -C(=NH)NMe2 y -C(=NMe)NMe2.
Nitro: -NO2.
Nitroso: -NO.
Azido: -N3.
Ciano (nitrilo, carbonitrilo): -CN.
Isociano: -NC.
Cianato: -OCN.
Isocianato: -NCO.
Tiociano (tiocianato): -SCN.
Isotiociano (isotiocianato): -NCS.
Sulfhidrilo (tiol, mercapto): -SH.
Tioéter (sulfuro): SR, donde R es un sustituyente tioéter, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7 (también denominado grupo alquiltio C1-7), un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos alquiltio C1-7 incluyen, de modo no taxativo, SCH3 y SCH2CH3.
Disulfuro: -SS-R, en el que R es un sustituyente disulfuro, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7 (al que también se hace referencia en la presente como disulfuro de alquilo C1-7). Los ejemplos de grupos alquil disulfuro C1-7 incluyen, de modo no taxativo, -SSCH3 y -SSCH2CH3.
Sulfino (sulfinil, sulfóxido): -S (=O)R, en el que R es un sustituyente sulfino, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente, un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos de sulfino incluyen, de modo no taxativo, S(=O)c H3 y S(=O)CH2CH3.
Sulfono (sulfonilo): -S(=O)2R, en el que R es un sustituyente sulfona, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente, un grupo alquilo C1-7 que incluye, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7 fluorado o perfluorado. Los ejemplos de grupos de sulfono incluyen, de modo no taxativo, -S(=O)2CH3 (metanosulfonilo, mesilo), -S(=O)2CF3 (triflilo), -S(=O)2CH2CH3 (esilo), -S(=O)2C4Fg (nonaflilo), -S(=O^c H2CF3 (tresilo), -S(=O)2CH2CH2NH2 (taurilo), -S(=O)2Ph (fenilsulfonilo, besilo), 4-metilfenilsulfonilo (tosilo), 4-clorofenilsulfonilo (closilo), 4-bromofenilsulfonilo (brosilo), 4-nitrofenilo (nosilo), 2-naftalenosulfonato (napsilo), y 5-dimetilamino-naftalen-1-ilsulfonato (dansilo).
Ácido sulfínico (sulfino): -S(=O)OH, -SO2H.
Ácido sulfónico (sulfo): -S(=O)2OH, -SO3H.
Sulfinato (éster de ácido sulfínico): -S(=O)OR; donde R es un sustituyente de sulfinato, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20, o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos de sulfinato incluyen, de modo no taxativo, -S(=O)OCH3 (metoxisulfinilo; sulfinato de metilo) y -S(=O)OCH2CH3 (etoxisulfinilo; sulfinato de etilo).
Sulfonato (éster de ácido sulfónico): -S(=O)2OR, donde R es un sustituyente de sulfonato, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20, o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos de sulfonato incluyen, de modo no taxativo, -S(=O)2OCH3 (metoxisulfonilo; sulfonato de metilo) y -S(=O)2OCH2CH3 (etoxisulfonilo; sulfonato de etilo).
Sulfiniloxi: -OS(=O)R, en el que R es un sustituyente sulfiniloxi, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente, un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos de sulfiniloxi incluyen, de modo no taxativo, -OS(=O)CH3 y -OS(=O)CH2CH3.
Sulfoniloxi: -OS (=O)2R, en el que R es un sustituyente sulfoniloxi, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente, un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos de sulfoniloxi incluyen, de modo no taxativo, -Os (=O)2CH3 (mesilato) y -OS(=O)2CH2CH3 (esilato).
Sulfato: -OS(=O)2OR, donde R es un sustituyente de sulfato, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20, o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos de sulfato incluyen, de modo no taxativo, -OS(=O)2Oc H3 y -SO(=O)2OCH2Ch 3.
Sulfamilo (sulfamoílo; amida de ácido sulfínico; sulfinamida): -S(=O)NR1R2, donde R1 y R2 son independientemente sustituyentes de amino, tal como se define para los grupos amino. Los ejemplos de grupos de sulfamilo incluyen, de modo no taxativo, -S(=O)NH2, -S(=O)NH(CH3), -S(=O)N(CH3)2, -S(=O)NH(CH2CH3), -S(=O)N(CH2CH3)2, y -S(=O)NHPh.
Sulfonamido (sulfinamoílo; amida de ácido sulfónico; sulfonamida): -S(=O)2NR1R2, donde R1 y R2 son independientemente sustituyentes de amino, tal como se define para los grupos amino. Los ejemplos de grupos de sulfonamido incluyen, de modo no taxativo, -S(=O)2NH2, -S(=O)2NH(CH3), -S(=O)2N(CH3)2, -S(=O)2NH(CH2CH3), -S(=O)2N(CH2CH3)2, y -S(=O)2NHPh.
Sulfamino: NR1S(=O)2OH, donde R1 es un sustituyente amino, tal como se define para los grupos amino. Los ejemplos de grupos de sulfamino incluyen, de modo no taxativo, NHS(=O)2OH and N(CH3)S(=O)2Oh .
Sulfonamino: -NR1S(=O)2R, donde R1 es un sustituyente amino, tal como se define para los grupos amino, y R es un sustituyente sulfonamino, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20, o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo C1-7. Los ejemplos de grupos de sulfonamino incluyen, de modo no taxativo, -NHS(=O)2CH3 y -N(CH3)S(=O)2CaH5.
Sulfinamino: -NR1S(=O)R, donde R1 es un sustituyente amino, tal como se define para los grupos amino, y R es un sustituyente sulfinamino, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20, o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo C1-7. Los ejemplos de grupos de sulfinamino incluyen, de modo no taxativo, -NHS(=O)CH3 y -N(CH3)S(=O)CaH5.
Fosfino (fosfina): -PR2, en el que R es un sustituyente fosfino, por ejemplo, - H, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente, -H, un grupo alquilo C1-7 o un grupo arilo C5-20. Ejemplos de grupos fosfino incluyen, de modo no taxativo, -PH2, -P(CH3)2, -P(CH2CH3)2, -P(t-Bu)2, y -P(Ph)2.
Fosfo: -P(=O)2.
Fosfinilo (óxido de fosfina): -P(=O)R2, donde R es un sustituyente fosfinilo, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente, un grupo alquilo C1-7 o un grupo arilo C5-20. Los ejemplos de grupos fosfinilo incluyen, de modo no taxativo, -P(=O)(c H3)2, -P(=O)(CH2CH3)2, -P(=O)(t-Bu)2, y -P(=O)(Ph)2.
Ácido fosfónico (fosfono): -P(=O)(OH)2.
Fosfonato (éster de fosfonato): -P(=O)(OR)2, en el que R es un sustituyente fosfonato, por ejemplo, -H, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente, H, un grupo alquilo C1-7 o un grupo arilo C5-20. Los ejemplos de grupos fosfonato incluyen, de modo no taxativo, -P(=O)(OCH3)2, -P(=O)(OCH2CH3)2, P(=O)(O-tBu)2, y P(=O)(OPh)2.
Ácido fosfórico (fosfonooxi): -OP(=O)(OH)2.
Fosfato (éster de fosfonooxi): -OP(=O)(OR)2, donde R es un sustituyente fosfato, por ejemplo, -H, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente, -H, un grupo alquilo C1-7 o un grupo arilo C5-20. Los ejemplos de grupos fosfato incluyen, de modo no taxativo, -OP(=O)(OCH3)2, -OP(=O)(OCH2CH3)2, -OP(=O)(OtBu)2, y -OP(=O)(OPh)2.
Ácido de fósforo: -OP(OH)2.
Fosfito: -OP(OR)2, en el que R es un sustituyente fosfito, por ejemplo, -H, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente, -H, un grupo alquilo C1-7 o un grupo arilo C5-20. Los ejemplos de grupos fosfito incluyen, de modo no taxativo, -OP(OCH3)2, -OP(OCH2CH3)2, -OP(O-t-Bu)2 y -OP(OPh)2.
Fosforamidita: -OP(OR1)-NR22, donde R1 y R2 son sustituyentes de fosforamidita, por ejemplo, -H, un grupo alquilo C1-7 (opcionalmente sustituido), un grupo heterociclilo C3-20, o un grupo arilo C5-20, preferentemente -H, un grupo alquilo C1-7 o un grupo arilo C5-20. Los ejemplos de grupos fosforamidita incluyen, de modo no taxativo, -OP(OCH2CH3)-N(CH3)2, -OP(OCH2CH3)-N(i-Pr)2, y -OP(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2.
Fosforamidato: -OP(=O)(OR1)-NR22, donde R1 y R2 son sustituyentes de fosforamidato, por ejemplo, -H, un grupo alquilo C1-7 (opcionalmente sustituido), un grupo heterociclilo C3-20, o un grupo arilo C5-20, preferentemente -H, un grupo alquilo C1-7 o un grupo arilo C5-20. Los ejemplos de grupos fosforamidato incluyen, de modo no taxativo, -OP(=O)(OCH2CH3)-N(CH3)2, -OP(=O)(OCH2CH3)-N(i-Pr)2, y -OP(=O)(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2.
Alquileno
Alquileno C3-12: El término "alquileno C3-12", tal como se usa en la presente, hace referencia a un resto bidentado que se obtiene al quitar dos átomos de hidrógeno, ya sea ambos del mismo átomo de carbono, o uno de cada uno de dos átomos de carbono diferentes, de un compuesto de hidrocarburo que tiene de 3 a 12 átomos de carbono (a menos que se especifique lo contrario), los que pueden ser alifáticos o alicíclicos, y los que pueden ser saturados, parcialmente insaturados o totalmente insaturados. Por lo tanto, el término “alquileno” incluye las subclases alquenileno, alquinileno, cicloalquileno, etc., que se discuten más adelante.
Los ejemplos de grupos alquilenos C3-12 lineales saturados incluyen, de modo no taxativo, (CH2)n - donde n es un número entero entre 3 y 12, por ejemplo, -CH2CH2CH2-(propileno), -CH2CH2CH2CH2-(butileno), -CH2CH2CH2CH2CH2-(pentileno) y -CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-(heptileno).
Los ejemplos de grupos alquilenos C3-12 saturados ramificados incluyen, de modo no taxativo, -CH(CH3)CH2-, -CH(CH3)CH2CH2-, -CH(CH3)CH2CH2CH2-, -CH2CH(CH3)CH2-, -CH2CH(CH3)CH2CH2-, -CH(CH2CH3) -, -CH(CH2CH3)CH2-, y -CH2CH(CH2CH3)CH2-.
Los ejemplos de grupos alquileno C3-12 parcialmente no saturados lineales (alquenileno C3-12, y grupos alquinilenos) incluyen, de modo no taxativo, -CH=CH-CH2-, -CH2-CH=CH2-, -CH=CH-CH2-CH2-, -CH=CH-CH2-CH2-CH2-, -CH=CH CH=CH-, -CH=CH-CH=CH-CH2-, -CH=CH-CH=CH-CH2-CH2-, -CH=CH-CH2-CH=CH-, -CH=CH-CH2-CH2-CH=CH-, y -CH2-CEC-CH2-.
Los ejemplos de grupos alquílenos C3-12 parcialmente no saturados ramificados (alquenileno C3.12 y grupos alquinilenos) incluyen, de modo no taxativo, -C(CH3)=CH-, -C(CH3)=CH-CH2, -CH=CH-CH(CH3) - y -CeC-CH(CH3)-.
Los ejemplos de grupos alquileno C3-12 saturados alicíclicos (cicloalquilenos C3-12) incluyen, de modo no taxativo, ciclopentileno (por ejemplo, ciclopent-1,3-ileno), y ciclohexileno (por ejemplo, ciclohex-1,4-ileno).
Los ejemplos de grupos alquileno C3-12 parcialmente no saturados alicíclicos (cicloalquilenos C3-12) incluyen, de modo no taxativo, ciclopentenileno (por ejemplo, 4-ciclopenten-1,3-ileno), ciclohexenileno (por ejemplo, 2-ciclohexen-1,4-ileno; 3-ciclohexen-1,2-ileno; 2,5-ciclohexadien-1,4-ileno).
Unidad de ligando
La unidad de ligando puede ser de cualquier tipo, e incluir una proteína, polipéptido, péptido y un agente no peptídico que se une específicamente a una molécula diana. En algunas modalidades, la unidad de ligando puede ser una proteína, polipéptido o péptido. En algunas modalidades, la unidad de ligando puede ser un polipéptido cíclico. Estas unidades de ligando pueden incluir anticuerpos o un fragmento de un anticuerpo que contiene al menos un sitio de unión a la molécula diana, linfocitos, hormonas, factores de crecimiento o cualquier otra molécula o sustancia de unión a la célula que puede unirse específicamente a una diana.
Las expresiones "se une específicamente" y "unión específica" hace referencia a la unión de un anticuerpo u otra proteína, polipéptido o péptido a una molécula predeterminada (por ejemplo, un antígeno). Normalmente, el anticuerpo u otra molécula se une con una afinidad de al menos alrededor de 1 x 1 O7 M-1, y se une a la molécula predeterminada con una afinidad que es al menos dos veces más alta que su afinidad para la unión a una molécula específica (por ejemplo, la BSA, caseína) distinta a la molécula predeterminada o una molécula estrechamente relacionada.
Los ejemplos de unidades de ligando incluyen aquellos agentes descritos para el uso en WO 2007/085930.
En algunas modalidades, la unidad de ligando es un agente de unión a célula que se une a una diana extracelular en una célula. Dicho agente de unión a célula puede ser una proteína, polipéptido, péptido o un agente no peptídico. En algunas modalidades, el agente de unión a célula puede ser una proteína, polipéptido o péptido. En algunas modalidades, el agente de unión a célula puede ser un polipéptido cíclico. El agente de unión a célula también puede ser un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno de un anticuerpo. Por lo tanto, en una modalidad, la presente invención proporciona un conjugado de anticuerpo-fármaco (ADC).
Agente de Unión a Célula
Un agente de unión a célula puede ser de cualquier tipo, e incluir péptidos y no péptidos. Éstos pueden incluir anticuerpos o un fragmento de un anticuerpo que contiene por lo menos un sitio de unión, linfocinas, hormonas, miméticos de hormonas, vitaminas, factores de crecimiento, moléculas de transporte de nutrientes, o cualquier otra molécula de unión a célula o sustancia.
Péptidos
En una modalidad, el agente de unión a célula es un péptido lineal o cíclico que comprende 4-30, preferiblemente 6­ 20, residuos de aminoácidos contiguos. En esta modalidad, se prefiere que un agente de unión a célula esté enlazado a un compuesto de pirrolobenzodiazepina monómérico o dimérico.
En una modalidad, el agente de unión a célula comprende un péptido que se une a la integrina avp6. El péptido puede ser selectivo para avp6 con respecto a XYS.
En una modalidad, el agente de unión a célula comprende el polipéptido A20FMDV-Cys. El A20FMDV-Cys tiene la secuencia: NAVPNLRGDLQVLAQKVARTC. Alternativamente, se puede utilizar una variante de la secuencia de A20FMDV-Cys en donde uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve o diez residuos de aminoácidos están sustituidos con otro residuo de aminoácido. Adicionalmente, el polipéptido puede tener la secuencia NAVXXXXXXXXXXXXXXXRTC.
Anticuerpos
El término “anticuerpo” en el presente documento se utiliza en el sentido más amplio y cubre específicamente anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales, dímeros, multímeros, anticuerpos multiespecíficos (por ejemplo, anticuerpos biespecíficos), y fragmentos de anticuerpos, mientras que presenten la actividad biológica deseada (Miller et al (2003) Jour. o f Immunology 170:4854-4861). Los anticuerpos pueden ser murinos, humanos, humanizados, quiméricos, o derivados de otras especies. Un anticuerpo es una proteína generada por el sistema inmune que es capaz de reconocer y unirse a un antígeno específico (Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology, 5a Ed., Garland Publishing, Nueva York). Un antígeno diana generalmente tiene numerosos sitios de unión, también denominados epítopes, reconocidos por CDRs en múltiples anticuerpos. Cada anticuerpo que se une específicamente a un epítope diferente tiene una estructura diferente. De esta manera, un antígeno puede tener más de un anticuerpo correspondiente. Un anticuerpo incluye una molécula de inmunoglobulina de longitud completa o una porción inmunológicamente activa de una molécula de inmunoglobulina de longitud completa, es decir, una molécula que contiene un sitio de unión a antígeno que se une inmunoespecíficamente a un antígeno de una diana de interés o parte del mismo, tales dianas incluyendo, pero no se limitan a, célula cancerosa o células que producen anticuerpos autoinmunes asociados a una enfermedad autoinmune. La inmunoglobulina puede ser de cualquier tipo (por ejemplo, IgG, IgE, IgM, IgD e IgA), clase (por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2) o subclase de molécula de inmunoglobulina. Las inmunoglobulinas se pueden derivar de cualquier especie, que incluye origen humano, murino o de conejo.
Los “fragmentos de anticuerpo” comprenden una porción de un anticuerpo de longitud completa, generalmente la región de unión a antígeno o región variable del mismo. Ejemplos de fragmentos de anticuerpo incluyen fragmentos Fab, Fab', F(ab ')2 y scFv; diacuerpos; anticuerpos lineales; fragmentos producidos por una librería de expresión de Fab, anticuerpos antiidiotípicos (anti-Id), CDR (región determinante de la complementariedad) y fragmentos de unión a epítope de cualquiera de los anteriores que se unen inmunoespecíficamente a antígenos de células cancerosas, antígenos virales o antígenos microbianos, moléculas de anticuerpo monocatenarias; y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpo.
El término “anticuerpo monoclonal”, como se utiliza en el presente documento se refiere a un anticuerpo obtenido a partir de una población de anticuerpos sustancialmente homogéneos, es decir, los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos excepto por posibles mutaciones que se producen naturalmente que pueden estar presentes en cantidades menores. Los anticuerpos monoclonales son altamente específicos, estando dirigidos contra un único sitio antigénico. Adicionalmente, a diferencia de las preparaciones de anticuerpos policlonales que incluyen diferentes anticuerpos dirigidos contra diferentes determinantes (epítopes), cada anticuerpo monoclonal está dirigido contra un único determinante en el antígeno. Además de su especificidad, los anticuerpos monoclonales son ventajosos porque se pueden sintetizar sin ser contaminados por otros anticuerpos. El adjetivo “monoclonal” indica el carácter del anticuerpo como que se obtiene a partir de una población de anticuerpos sustancialmente homogénea, y no se debe interpretar como que requiera la producción del anticuerpo mediante cualquier procedimiento particular. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales que serán utilizados de conformidad con la presente invención se pueden preparar mediante el método de hibridoma descrito por primera vez por Kohler et al (1975) Nature 256:495, o se pueden preparar mediante métodos de ADN recombinante (véase el documento US 4816567). Los anticuerpos monoclonales también se pueden aislar de librerías de anticuerpos de fago utilizando las técnicas descritas en Clackson et al (1991) Nature, 352:624-628; Marks et al (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597, o de ratones transgénicos que llevan un sistema de inmunoglobulina completamente humana (Lonberg (2008) Curr. Opinion 20(4):450-459).
Los anticuerpos monoclonales en el presente documento incluyen específicamente anticuerpos “quiméricos” en los cuales una porción de la cadena pesada y/o ligera es idéntica u homóloga a secuencias correspondientes en anticuerpos derivados a partir de una especie particular o que pertenecen a una clase o subclase de anticuerpo particular, mientras que el resto de la(s) cadena(s) es idéntico u homólogo a secuencias correspondientes en anticuerpos derivados a partir de otras especies o que pertenecen a otra clase o subclase de anticuerpos, así como fragmentos de tales anticuerpos, siempre que presenten la actividad biológica deseada (documento US 4816567; y Morrison et al (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU., 81:6851-6855). Los anticuerpos quiméricos incluyen anticuerpos “primatizados” que comprenden secuencias de unión a antígeno de dominio variable derivadas a partir de un primate no humano (por ejemplo, Mono del Viejo Mundo o Simio Superior) y secuencias de la región constante humanas.
Un “anticuerpo intacto” en el presente documento es uno que comprende un dominio VL y VH, así como un dominio constante de cadena ligera (CL) y dominios constantes de cadena pesada, CH1, CH2 y CH3. Los dominios constantes pueden ser dominios constantes de secuencia nativa (por ejemplo, dominios constantes de secuencia nativa humana) o variante de la secuencia de aminoácidos de la misma. El anticuerpo intacto puede tener una o más “funciones efectoras”, las cuales se refieren a aquellas actividades biológicas atribuibles a la región Fc (una región Fc de secuencia nativa o región Fc variante de secuencia de aminoácidos) de un anticuerpo. Ejemplos de funciones efectoras de anticuerpos incluyen unión a C1q; citotoxicidad dependiente del complemento; unión al receptor de Fc; citotoxicidad mediada por célula dependiente de anticuerpo (ADCC); fagocitosis; y regulación por disminución de receptores de la superficie celular tales como receptor de células B y BCR.
Dependiendo de la secuencia de aminoácidos del dominio constante de sus cadenas pesadas, los anticuerpos intactos se pueden asignar a diferentes “clases”. Existen cinco clases principales de anticuerpos intactos: IgA, IgD, IgE, IgG, e IgM, y varias de éstas se pueden dividir adicionalmente en “subclases” (isotipos), por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, e IgA2. Los dominios constantes de cadenas pesadas que corresponden a las diferentes clases de anticuerpos se denominan a, 8, £, y, y M, respectivamente. Las estructuras de subunidad y configuraciones tridimensionales de diferentes clases de inmunoglobulinas son bien conocidas.
Humanización
Las técnicas para reducir la inmunogenicidad in vivo de un anticuerpo no humano o fragmento de anticuerpo incluyen las denominadas “humanización”.
Un “anticuerpo humanizado” se refiere a un polipéptido que comprende por lo menos una porción de una región variable modificada de un anticuerpo humano en donde una porción de la región variable, preferiblemente una porción sustancialmente menor que el dominio variable humano intacto, se ha sustituido con la secuencia correspondiente de una especie no humana y en donde la región variable modificada está enlazada a por lo menos otra parte de otra proteína, preferiblemente la región constante de un anticuerpo humano. La expresión “anticuerpos humanizados” incluye anticuerpos humanos en los cuales uno o más residuos de aminoácidos de la región determinante de la complementariedad (“CDR”) y/o uno o más residuos de aminoácidos de la región estructural (“FW” o “FR”) están sustituidos por residuos de aminoácidos de sitios análogos en roedores u otros anticuerpos no humanos. La expresión “anticuerpo humanizado” también incluye una variante de la secuencia de aminoácidos de inmunoglobulina o fragmento de la misma que comprende una FR que tiene sustancialmente la secuencia de aminoácidos de una inmunoglobulina humana y una c Dr que tiene sustancialmente la secuencia de aminoácidos de una inmunoglobulina no humana.
Las formas “humanizadas” de anticuerpos no humanos (por ejemplo, murinos) son anticuerpos quiméricos que contienen una secuencia mínima derivada de inmunoglobulina no humana. O, visto de otra forma, un anticuerpo humanizado es un anticuerpo humano que también contiene secuencias seleccionadas de anticuerpos no humanos (por ejemplo, murinos) en lugar de las secuencias humanas. Un anticuerpo humanizado puede incluir sustituciones de aminoácidos conservativas o residuos no naturales de las mismas especies o de especies diferentes que no alteran significativamente su unión y/o actividad biológica. Tales anticuerpos son anticuerpos quiméricos que contienen una secuencia mínima derivada de inmunoglobulinas no humanas.
Existe una gama de técnicas de humanización, que incluyen "injerto de CDR", "selección guiada", "desinmunización", "acondicionamiento superficial" (también conocido como "inactivación"), "anticuerpos compuestos", "Optimización de Contenidos de la Cadena Humana" y barajado de regiones estructurales.
Injerto de CDR
En esta técnica, los anticuerpos humanizados son inmunoglobulinas humanas (anticuerpo del receptor) en donde los residuos de una región determinante de la complementariedad (CDR) del anticuerpo del receptor están sustituidos por residuos de una CDR de una especie no humana (anticuerpo del donante) tales como ratón, rata, camello, bovino, cabra o conejo que tiene las propiedades deseadas (de hecho, las CDRs no humanas están 'injertadas' sobre la región estructural humana). En algunos casos, los residuos de la región estructural (FR) de la inmunoglobulina humana están sustituidos por residuos no humanos correspondientes (esto puede ocurrir cuando, por ejemplo, un residuo de FR particular tiene efecto significativo sobre la unión a antígeno).
Adicionalmente, los anticuerpos humanizados pueden comprender residuos que ni se encuentran en el anticuerpo del receptor ni en la CDR importada o secuencias de la región estructural. Estas modificaciones se hacen para refinar y maximizar adicionalmente el rendimiento del anticuerpo. De esta manera, en general, un anticuerpo humanizado comprenderá todos de por lo menos uno, y en un aspecto dos, dominios variables, en los cuales todos o todos los bucles hipervariables corresponden a aquellos de una inmunoglobulina no humana y todas o sustancialmente todas las regiones FR son aquellas de una secuencia de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado también comprenderá opcionalmente por lo menos una porción de una región constante de inmunoglobulina (Fc), o aquella de una inmunoglobulina humana.
Selección guiada
El procedimiento consiste en combinar el dominio Vh o Vl de un anticuerpo no humano dado específico para un epítope particular con una librería de Vh o Vl humana y los dominios V humanos específicos se seleccionan contra el antígeno de interés. Este VH humano seleccionado se combina a continuación con una librería de VL para generar una combinación de VHxVL completamente humana. El método se describe en Nature Biotechnology (N.Y.) 12, (1994) 899-903.
Anticuerpos compuestos
En este método, dos o más segmentos de la secuencia de aminoácidos de un anticuerpo humano se combinan dentro de la molécula de anticuerpo final. Se construyen mediante la combinación de múltiples segmentos de la secuencia de VH y VL humana en combinaciones que limitan o evitan los epítopes de células T humanos en las regiones V de anticuerpos compuestos finales. Si se requiere, los epítopes de células T se limitan o evitan mediante el intercambio de segmentos de las regiones V que contribuyen a o que codifican un epítope de células T con segmentos alternativos que evitan epítopes de células T. Este método se describe en el documento US 2008/0206239 A1.
Desinmunización
Este método implica la eliminación de epítopes de células T humanos (u otra segunda especie) de las regiones V del anticuerpo terapéutico (u otra molécula). La secuencia de las regiones V de anticuerpos terapéuticos se analiza en cuanto a la presencia de motivos de unión al MHC de clase II por, por ejemplo, comparación con bases de datos de motivos de unión al MHC (tales como la base de datos de “motivos” alojada en www.wehi.edu.au). Alternativamente, los motivos de unión al MHC de clase II se pueden identificar utilizando métodos de plegamiento computacional tales como aquellos contemplados por Altuvia et al (J. Mol. Biol. 249 244-250 (1995)); en estos métodos, los péptidos de solapamiento consecutivos de las secuencias de las regiones V se están probando en cuanto sus energías de unión a proteínas del MHC de clase II. Estos datos se pueden combinar a continuación con información sobre otras características de secuencias que se refieren a péptidos satisfactoriamente presentados, tales como anfipaticidad, motivos de Rothbard, y sitios de escisión para catepsina B y otras enzimas de procesamiento.
Una vez que se han identificado epítopes de células T (por ejemplo, humanos) de segundas especies potenciales, se eliminan mediante la alteración de uno o más aminoácidos. Los aminoácidos modificados están normalmente dentro del propio epítope de células T, pero también pueden estar adyacentes al epítope en términos de la estructura primaria o secundaria de la proteína (y, por tanto, pueden no estar adyacentes en la estructura primaria). Lo más típico, la alteración es a modo de sustitución pero, en algunas circunstancias, será más apropiada la adición o deleción de aminoácidos.
Todas las alteraciones se pueden realizar mediante tecnología de ADN recombinante, de manera que la molécula final se pueda preparar mediante la expresión de un huésped recombinante utilizando métodos bien establecidos tales como Mutagénesis Dirigida al Sitio. Sin embargo, también es posible el uso de química de proteínas o cualquier otro medio de alteración molecular.
Acondicionamiento superficial
Este método implica:
(a) determinar la estructura conformacional de la región variable del anticuerpo no humano (por ejemplo, roedor) (o fragmento del mismo) mediante la construcción de un modelo tridimensional de la región variable del anticuerpo no humano;
(b) generar alineamientos de secuencias utilizando distribuciones de relativa accesibilidad a partir de estructuras cristalográficas de rayos X de un número suficiente de cadenas pesadas y ligeras de las regiones variables de anticuerpos no humanos y humanos para dar un conjunto de posiciones de las regiones estructurales de las cadenas pesadas y ligeras en donde las posiciones de alineamiento son idénticas en 98% del número suficiente de cadenas pesadas y ligeras de anticuerpos no humanos;
(c) definir para el anticuerpo no humano que será humanizado un conjunto de residuos de aminoácidos expuestos sobre la superficie de las cadenas pesadas y ligeras utilizando el conjunto de posiciones de la región estructural generadas en la etapa (b);
(d) identificar a partir de las secuencias de aminoácidos de anticuerpo humano un conjunto de residuos de aminoácidos expuestos sobre la superficie de las cadenas pesadas y ligeras que es lo más estrechamente idéntico al conjunto de residuos de aminoácidos expuestos sobre la superficie definidos en la etapa (c), en donde la cadena pesada y ligera del anticuerpo humano están o no están naturalmente apareadas;
(e) sustituir, en la secuencia de aminoácidos del anticuerpo no humano que será humanizado, el conjunto de residuos de aminoácidos expuestos sobre la superficie de las cadenas pesadas y ligeras definido en la etapa (c) con el conjunto de residuos de aminoácidos expuestos sobre la superficie de las cadenas pesadas y ligeras identificado en la etapa (d);
(f) construir un modelo tridimensional de la región variable del anticuerpo no humano resultante de la sustitución especificada en la etapa (e);
(g) identificar, mediante la comparación de los modelos tridimensionales construidos en las etapas (a) y (f), cualquier residuo de aminoácido de los conjuntos identificados en las etapas (c) o (d), que están dentro de 5 Angstroms de cualquier átomo de cualquier residuo de las regiones determinantes de la complementariedad del anticuerpo no humano que será humanizado; y
(h) cambiar cualquier residuo identificado en la etapa (g) del residuo de aminoácido no humano original para definir de ese modo un conjunto humanizante de anticuerpos no humanos de residuos de aminoácidos expuestos sobre la superficie; con la condición de que la etapa (a) no necesita realizarse primero, pero debe realizarse antes de la etapa (g).
Superhumanización
El método compara la secuencia no humana con el repertorio de genes de la línea germinal humana funcional. Se seleccionan aquellos genes humanos que codifican estructuras canónicas idénticas o estrechamente relacionadas con las secuencias no humanas. Se eligen aquellos genes humanos seleccionados con la mayor homología dentro de las CDRs como donantes de FR. Finalmente, las CDRs no humanas se injertan sobre estas FRs humanas. Este método se describe en la patente WO 2005/079479 A2.
Optimización de Contenidos de la Cadena Humana
Este método compara la secuencia no humana (por ejemplo, de ratón) con el repertorio de genes de la línea germinal humana y las diferencias se puntúan como Contenido de la Cadena Humana (HSC) que cuantifica una secuencia en el nivel de epítopes de MHC/células T potenciales. A continuación, la secuencia diana se humaniza maximizando su HSC en lugar de utilizar una medición de identidad global para generar múltiples variantes humanizadas diversas (descritas en Molecular Immunology, 44, (2007) 1986-1998).
Barajado de Regiones Estructurales
Las CDRs del anticuerpo no humano están fusionadas en marco con conjuntos de ADNc que abarcan todas las regiones estructurales de genes de la línea germinal humana de cadenas pesadas y ligeras conocidas. A continuación, los anticuerpos humanizados se seleccionan, por ejemplo, mediante inmunopurificación de la librería de anticuerpos desplegados en fago. Esto se describe en Methods 36, 43-60 (2005).
Ejemplos de agentes de unión a célula incluyen aquellos agentes descritos para su uso en el documento WO 2007/085930.
A continuación se enumeran antígenos asociados a tumor y anticuerpos relacionados para su uso en las modalidades de la presente invención.
ANTÍGENOS ASOCIADOS A TUMOR Y ANTICUERPOS RELACIONADOS
(1) BMPR1B (receptor de la proteína morfogenética ósea tipo IB)
Nucleótido
Acceso de GenBank No. NM_001203
Versión de Genbank No. NM_001203.2 GI:169790809
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de septiembre de 2012 02:06 PM
Polipéptido
Acceso de GenBank No. NP_001194
Versión de Genbank No. NP_001194.1 GI:4502431
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de septiembre de 2012 02:06 PM
Referencias cruzadas
Ten Dijke, P., et al Science 264 (5155): 101-104 (1994), Oncogene 14 (11):1377-1382 (1997); WO2004/063362 (Reivindicación 2); WO2003/042661 (Reivindicación 12); US2003/134790-A1 (Páginas 38-39); WO2002/102235 (Reivindicación 13; Página 296); WO2003/055443 (Página 91-92); WO2002/99122 (Ejemplo 2; Páginas 528-530); WO2003/029421 (Reivindicación 6); WO2003/024392 (Reivindicación 2; Fig. 112); WO2002/98358 (Reivindicación 1; Página 183); WO2002/54940 (Páginas 100-101); WO2002/59377 (Páginas 349-350); WO2002/30268 (Reivindicación 27; Página 376); WO2001/48204 (Ejemplo; Fig. 4); NP_001194 receptor de la proteína morfogenética ósea, tipo 1B/pid=NP_001194.1.; MIM:603248; AY065994
(2) E16 (LAT1, SLC7A5)
Nucleótido
Acceso de GenBank No. NM_003486
Versión de Genbank No. NM_003486.5 GI:71979931
Fecha de actualización del registro de GenBank: 27 de junio de 2012 12:06 PM
Polipéptido
Acceso de GenBank No. NP_003477
Versión de Genbank No. NP_003477.4 GI:71979932
Fecha de actualización del registro de GenBank: 27 de junio de 2012 12:06 PM
Referencias cruzadas
Biochem. Biophys. Res.
Commun. 255 (2), 283-288 (1999), Nature 395 (6699):288-291 (1998), Gaugitsch, H.W., et al (1992) J. Biol. Chem.
267 (16):11267-11273); WO2004/048938 (Ejemplo 2); WO2004/032842 (Ejemplo IV); WO2003/042661 (Reivindicación 12); WO2003/016475 (Reivindicación 1); WO2002/78524 (Ejemplo 2); WO2002/99074 (Reivindicación 19; Páginas 127-129); WO2002/86443 (Reivindicación 27; Páginas 222, 393); WO2003/003906 (Reivindicación 10; Página 293); WO2002/64798 (Reivindicación 33; Páginas 93-95); WO2000/14228 (Reivindicación 5; Páginas 133­ 136); US2003/224454 (Fig. 3); WO2003/025138 (Reivindicación 12; Página 150); NP_003477 familia 7 de transportadores y solutos (transportador de aminoácidos catiónicos, y+system), miembro 5/pid=NP_003477.3 - Homo sapiens; MIM:600182; NM_015923.
(3) STEAP1 (antígeno epitelial de seis transmembrana de la próstata)
Nucleótido
Acceso de GenBank No. NM_012449
Versión de Genbank No. NM_012449.2 GI:22027487
Fecha de actualización del registro de GenBank: 9 de septiembre de 201202:57 PM
Polipéptido
Acceso de GenBank No. NP_036581
Versión de Genbank No. NP_036581.1 GI:9558759
Fecha de actualización del registro de GenBank: 9 de septiembre de 201202:57 PM
Referencias cruzadas
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(4) 0772P (CA125, MUC16)
Nucleótido
Acceso de GenBank No. AF361486
Versión de Genbank No. AF361486.3 GI:34501466
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 07:56 AM
Polipéptido
Acceso de GenBank No. AAK74120
Versión de Genbank No. AAK74120.3 GI:34501467
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 07:56 AM
Referencias cruzadas
J. Biol. Chem. 276 (29):27371-27375 (2001)); WO2004/045553 (Reivindicación 14); WO2002/92836 (Reivindicación 6; Fig. 12); WO2002/83866 (Reivindicación 15; Páginas 116-121); US2003/124140 (Ejemplo 16); GI:34501467; (5) MPF (MPF, MSLN, SMR, factor potenciador de megacariocitos, mesotelina)
Nucleótido
Acceso de GenBank No. NM_005823
Versión de Genbank No. NM_005823.5 GI:293651528
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de septiembre de 201201:47 PM
Polipéptido
Acceso de GenBank No. NP_005814
Versión de Genbank No. NP_005814.2 GI:53988378
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de septiembre de 201201:47 PM
Referencias cruzadas
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(6) Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, familia 34 de transportador y soluto (fosfato de sodio), miembro 2, transportador 3b de fosfato dependiente de sodio tipo II)
Nucleótido
Acceso de GenBank No. NM_006424
Versión de Genbank No. NM_006424.2 GI:110611905
Fecha de actualización del registro de GenBank: 22 de julio de 2012 03:39 PM
Polipéptido
Acceso de GenBank No. NP_006415
Versión de Genbank No. NP_006415.2 GI: 110611906
Fecha de actualización del registro de GenBank: 22 de julio de 2012 03:39 PM
Referencias cruzadas
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(7) Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, semaforina 5b Hlog, dominio sema, siete repeticiones de trombospondina (tipo 1 y similares a tipo 1), dominio transmembrana (TM) y dominio citoplásmico corto, (semaforina) 5B)
Nucleótido
Acceso de GenBank No. AB040878
Versión de Genbank No. AB040878.1 GI:7959148
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de agosto de 2006 05:40 PM
Polipéptido
Acceso de GenBank No. BAA95969
65 Versión de Genbank No. BAA95969.1 GI:7959149
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de agosto de 2006 05:40 PM
Referencias cruzadas
Nagase T., et al (2000) DNA Res. 7 (2):143-150); WO2004/000997 (Reivindicación 1); WO2003/003984 (Reivindicación 1); WO2002/06339 (Reivindicación 1; Página 50); WO2001/88133 (Reivindicación 1; Páginas 41-43, 48-58); WO2003/054152 (Reivindicación 20); WO2003/101400 (Reivindicación 11); Acceso: Q9P283; Genew; HGNC: 10737
(8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, ADNc de RIKEN 2700050C12, ADNc de RIKEN gen 2700050C12) Nucleótido
Acceso de GenBank No. AY358628
Versión de Genbank No. AY358628.1 GI:37182377
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de diciembre de 2009 04:15 AM
Polipéptido
Acceso de GenBank No. AAQ88991
Versión de Genbank No. AAQ88991.1 GI:37182378
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de diciembre de 2009 04:15 AM
Referencias cruzadas
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(9) ETBR (receptor tipo B de endotelina)
Nucleótido
Acceso de GenBank No. AY275463
Versión de Genbank No. AY275463.1 GI:30526094
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 02:26 AM
Polipéptido
Acceso de GenBank No. AAP32295
Versión de Genbank No. AAP32295.1 GI:30526095
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 02:26 AM
Referencias cruzadas
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(10) MSG783 (RNF124, proteína hipotética FLJ20315)
Nucleótido
Acceso de GenBank No. NM_017763
Versión de Genbank No. NM_017763.4 GI:167830482
Fecha de actualización del registro de GenBank: 22 de julio de 2012 12:34 AM
Polipéptido
Acceso de GenBank No. NP_060233
Versión de Genbank No. NP_060233.3 GI:56711322
Fecha de actualización del registro de GenBank: 22 de julio de 2012 12:34 AM
Referencias cruzadas
WO2003/104275 (Reivindicación 1); WO2004/046342 (Ejemplo 2); WO2003/042661 (Reivindicación 12); WO2003/083074 (Reivindicación 14; Página 61); WO2003/018621 (Reivindicación 1); WO2003/024392 (Reivindicación 2; Fig. 93); WO2001/66689 (Ejemplo 6); ID de locus: 54894.
(11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, gen 1 asociado al cáncer de próstata, proteína 1 asociada al cáncer de próstata, antígeno epitelial de seis transmembrana de próstata 2, proteína de próstata de seis transmembrana)
Nucleótido
Acceso de GenBank No. AF455138
Versión de Genbank No. AF455138.1 GI:22655487
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 01:54 AM
Polipéptido
Acceso de GenBank No. AAN04080
Versión de Genbank No. AAN04080.1 GI:22655488
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 01:54 AM
Referencias cruzadas
Lab. Invest. 82(11): 1573-1582 (2002); WO2003/087306; US2003/064397 (Reivindicación 1; Fig. 1); WO2002/72596 (Reivindicación 13; Páginas 54-55); WO2001/72962 (Reivindicación 1; Fig. 4b ); WO2003/104270 (Reivindicación 11); WO2003/104270 (Reivindicación 16); US2004/005598 (Reivindicación 22); WO2003/042661 (Reivindicación 12); US2003/060612 (Reivindicación 12; Fig. 10); WO2002/26822 (Reivindicación 23; Fig. 2); WO2002/16429 (Reivindicación 12; Fig. 10); GI:22655488.
(12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, canal 5 catiónico de potencial de receptor transitorio, subfamilia M, miembro 4)
Nucleótido
Acceso de GenBank No. NM_017636
Versión de Genbank No. NM_017636.3 GI:304766649
Fecha de actualización del registro de GenBank: 29 de junio de 2012 11:27 AM
Polipéptido
Acceso de GenBank No. NP_060106
Versión de Genbank No. NP_060106.2 GI:21314671
Fecha de actualización del registro de GenBank: 29 de junio de 2012 11:27 AM
Referencias cruzadas
Xu, X.Z., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98 (19): 10692-10697 (2001), Cell 109 (3):397-407 (2002), J. Biol. Chem.
278 (33):30813-30820 (2003); US2003/143557 (Reivindicación 4); WO2000/40614 (Reivindicación 14; Páginas 100­ 103); WO2002/10382 (Reivindicación 1; Fig. 9A); WO2003/042661 (Reivindicación 12); WO2002/30268 (Reivindicación 27; Página 391); US2003/219806 (Reivindicación 4); WO2001/62794 (Reivindicación 14; Fig. 1A-D); MIM:606936.
(13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, factor de crecimiento derivado de teratocarcinoma) Nucleótido
Acceso de GenBank No. NM_003212
Versión de Genbank No. NM_003212.3 GI:292494881
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de septiembre de 201202:27 PM
Polipéptido
Acceso de GenBank No. NP_8003203
Versión de Genbank No. NP_8003203.1 GI:4507425
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de septiembre de 2012 02:27 PM
Referencias cruzadas
Ciccodicola, A., et al EMBO J. 8 (7):1987-1991 (1989), Am. J. Hum. Genet. 49 (3):555-565 (1991); US2003/224411 (Reivindicación 1); WO2003/083041 (Ejemplo 1); WO2003/034984 (Reivindicación 12); WO2002/88170 (Reivindicación 2; Páginas 52-53); WO2003/024392 (Reivindicación 2; Fig. 58); WO2002/16413 (Reivindicación 1; PáginaS 94-95, 105); WO2002/22808 (Reivindicación 2; Fig. 1); US5854399 (Ejemplo 2; Col 17-18); US5792616 (Fig. 2); MIM:187395.
(14) CD21 (CR2 (Receptor del complemento 2) o C3DR (C3d/receptor de virus de Epstein Barr) o Hs. 73792) Nucleótido
Acceso de GenBank No. M26004
Versión de Genbank No. M26004.1 GI:181939
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:47 AM
Polipéptido
Acceso de GenBank No. AAA35786
Versión de Genbank No. AAA35786.1 GI:181940
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:47 AM
Referencias cruzadas
Fujisaku, et al (1989) J. Biol. Chem. 264 (4):2118-2125); Weis J.J., et al J. Exp. Med. 167, 1047-1066, 1988; Moore M., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84, 9194-9198, 1987; Barel M., et al Mol. Immunol. 35, 1025-1031, 1998; Weis J.J., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 83, 5639-5643, 1986; Sinha S.K., et al (1993) J. Immunol. 150, 5311-5320; WO2004/045520 (Ejemplo 4); US2004/005538 (Ejemplo 1); WO2003/062401 (Reivindicación 9); WO2004/045520 (Ejemplo 4); WO91/02536 (Fig. 9.1-9.9); WO2004/020595 (Reivindicación 1); Acceso: P20023; Q13866; Q14212; EMBL; M26004; AAA35786.1.
(15) CD79b (CD79B, CD79@, IGb (beta asociada a inmunoglobulina), B29)
Nucleótido
Acceso de GenBank No. NM_000626
Versión de Genbank No. NM_000626.2 GI:90193589
Fecha de actualización del registro de GenBank: 26 de junio de 2012 01:53 PM
Polipéptido
Acceso de GenBank No. NP_000617
Versión de Genbank No. NP_000617.1 GI:11038674
Fecha de actualización del registro de GenBank: 26 de junio de 2012 01:53 PM
Referencias cruzadas
Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (2003) 100 (7):4126-4131, Blood (2002) 100 (9):3068-3076, Muller et al (1992) Eur. J. Immunol. 22 (6):1621-1625); WO2004/016225 (Reivindicación 2, Fig. 140); WO2003/087768, US2004/101874 (Reivindicación 1, Página 102); WO2003/062401 (Reivindicación 9); WO2002/78524 (Ejemplo 2); US2002/150573 (Reivindicación 5, Página 15); US5644033; WO2003/048202 (Reivindicación 1, Páginas 306 y 309); WO 99/58658, US6534482 (Reivindicación 13, Fig. 17A/B); WO2000/55351 (Reivindicación 11, Páginas 1145-1146); MIM:147245 (16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (Dominio SH2 que contiene proteína de anclaje a fosfatasa 1a 5), SPAP1B, SPAP1C)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_030764
Versión de Genbank No. NM_030764.3 GI:227430280
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de junio de 2012 12:30 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_110391
Versión de Genbank No. NP_110391.2 GI:19923629
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de junio de 2012 12:30 AM
Referencias cruzadas
AY358130); Genome Res. 13 (10):2265-2270 (2003), Immunogenetics 54 (2):87-95 (2002), Blood 99 (8):2662-2669 (2002), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98 (17):9772-9777 (2001), Xu, M.J., et a l(2001) Biochem. Biophys. Res. Commun.
280 (3):768-775; WO2004/016225 (Reivindicación 2); WO2003/077836; WO2001/38490 (Reivindicación 5; Fig. 18D-1-18D-2); WO2003/097803 (Reivindicación 12); WO2003/089624 (Reivindicación 25); MIM:606509.
(17) HER2 (ErbB2)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. M11730
Versión de Genbank No. M11730.1 GI: 183986
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:47 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAA75493
Versión de Genbank No. AAA75493.1 GI:306840
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:47 AM
Referencias cruzadas
Coussens L., et al Science (1985) 230(4730):1132-1139); Yamamoto T., et al Nature 319, 230-234, 1986; Semba K., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82, 6497-6501, 1985; Swiercz J.M., et al J. Cell Biol. 165, 869- 880, 2004; Kuhns J.J., et al J. Biol. Chem. 274, 36422-36427, 1999; Cho H.-S., et al Nature 421, 756-760, 2003; Ehsani A., et al (1993) Genomics 15, 426-429; WO2004/048938 (Ejemplo 2); WO2004/027049 (Fig. 1I); WO2004/009622; WO2003/081210; WO2003/089904 (Reivindicación 9); WO2003/016475 (Reivindicación 1); US2003/118592; WO2003/008537 (Reivindicación 1); WO2003/055439 (Reivindicación 29; Fig. 1A-B); WO2003/025228 (Reivindicación 37; Fig. 5C); WO2002/22636 (Ejemplo 13; página 95-107); WO2002/12341 (Reivindicación 68; Fig. 7); WO2002/13847 (Páginas 71-74); WO2002/14503 (Páginas 114-117); WO2001/53463 (Reivindicación 2; Páginas 41-46); WO2001/41787 (Página 15); WO2000/44899 (Reivindicación 52; Fig. 7); WO2000/20579 (Reivindicación 3; Fig. 2); US5869445 (Reivindicación 3; Col 31-38); WO9630514 (Reivindicación 2; Páginas 56-61); EP1439393 (Reivindicación 7); WO2004/043361 (Reivindicación 7); WO2004/022709; WO2001/00244(Ejemplo 3; Fig. 4); Acceso: P04626; EMBL; M11767; AAA35808.1. EMBL; M11761; AAA35808.1
ANTICUERPOS
Abbott: US20110177095
Por ejemplo, un anticuerpo que comprende CDRs que tienen en general por lo menos 80% de identidad de secuencias con CDRs que tienen secuencias de aminoácidos de SEC ID NO: 3 (CDR-H1), SEC ID NO: 4 (CDR-H2), SEC ID NO: 5 (CDR-H3), SEC ID NO: 104 y/o SEC ID NO: 6 (CDR-L1), SEC ID NO: 7 (CDR-L2), y SEC ID NO: 8 (CDR-L3), en donde el anticuerpo anti-HER2 o fragmento de unión anti-HER2 tiene inmunogenicidad reducida en comparación con un anticuerpo que tiene una VH de SEC ID NO: 1 y una VL de SEC ID NO: 2.
Biogen: US20100119511
Por ejemplo, números de acceso de ATCC: PTA-10355, PTA-10356, PTA-10357, PTA-10358
Por ejemplo, una molécula de anticuerpo purificada que se une a HER2 que comprende todas las seis CDRs de un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en BIIB71F10 (SEC ID NOs: 11, 13), BIIB69A09 (SEC ID NOs: 15, 17); BIIB67F10 (SEC ID NOs: 19, 21); BIIB67F11 (SEC ID NOs: 23, 25), BIIB66A12 (SEC ID NOs: 27, 29), BIIB66C01 (SEC ID NOs: 31, 33), BIIB65C10 (SEC ID NOs: 35, 37), BIIB65H09 (SEC ID NOs: 39, 41) y BIIB65B03 (SEC ID NOs: 43, 45), o CDRs que son idénticas o que tienen no más de dos alteraciones de dichas CDRs.
Herceptin (Genentech) -US6.054.297; no. de acceso de ATCC CRL-10463 (Genentech)
Pertuzumab (Genentech)
US20110117097
por ejemplo, véanse SEC ID NOs: 15 y 16, SEC ID NOs: 17 y 18, SEC ID NOs: 23 y 24 y los números de acceso de ATCC HB-12215, HB-12216, CRL 10463, HB-12697.
US20090285837
US20090202546
por ejemplo, números de acceso de ATCC: HB-12215, HB-12216, CRL 10463, HB-12698.
US20060088523
- por ejemplo, números de acceso de ATCC: HB-12215, HB-12216
- por ejemplo, un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos ligeras variables y pesadas variables en SEC ID NOs: 3 y 4, respectivamente.
- por ejemplo, un anticuerpo que comprende una secuencia de aminoácidos de la cadena ligera seleccionada de SEC ID NOs: 15 y 23 y una secuencia de aminoácidos de cadena pesada seleccionada de SEC ID NOs: 16 y 24
US20060018899
- por ejemplo, números de acceso de ATCC: (7C2) HB-12215, (7F3) HB-12216, (4D5) CRL-10463, (2C4) HB-12697.
- por ejemplo, un anticuerpo que comprende la secuencia de aminoácidos en SEC ID NO: 23, o una variante desamidada y/u oxidada del mismo.
US2011/0159014
- por ejemplo, un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena ligera que comprende las regiones hipervariables de SEC ID NO: 1.
- Por ejemplo, un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende las regiones hipervariables de SEC ID No : 2.
US20090187007
Glycotope: anticuerpo TrasGEX http://www.glycotope.com/pipeline
Por ejemplo, véase International Joint Cancer Institute and Changhai Hospital Cancer Cent: HMTI-Fc Ab - Gao J., et al BMB Rep. 31 oct 2009; 42(10):636-41.
Symphogen: US20110217305
Union Stem Cell & Gene Engineering, China - Liu HQ., et al Xi Bao Yu Fen Zi Mian Yi Xue Za Zhi. Mayo 2010; 26(5):456-8.
(18) NCA (CEACAM6)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. M18728
Versión de Genbank No. M18728.1 GI:189084
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:48 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAA59907
Versión de Genbank No. AAA59907.1 GI:189085
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:48 AM
Referencias cruzadas
Barnett T., et al Genomics 3, 59-66, 1988; Tawaragi Y., et al Biochem. Biophys. Res. Commun. 150, 89-96, 1988; Strausberg R.L., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99:16899-16903, 2002; WO2004/063709; EP1439393 (Reivindicación 7); WO2004/044178 (Ejemplo 4); WO2004/031238; WO2003/042661 (Reivindicación 12); WO2002/78524 (Ejemplo 2); WO2002/86443 (Reivindicación 27; Página 427); WO2002/60317 (Reivindicación 2); Acceso: P40199; Q14920; EMBL; M29541; AAA59915.1. EMBL; M18728.
(19) MDP (DPEP1)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. BC017023
Versión de Genbank No. BC017023.1 GI:16877538
Fecha de actualización del registro de GenBank: 6 de marzo de 2012 01:00 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAH17023
Versión de Genbank No. AAH17023.1 GI:16877539
Fecha de actualización del registro de GenBank: 6 de marzo de 2012 01:00 PM
Referencias cruzadas
Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (26):16899-16903 (2002); WO2003/016475 (Reivindicación 1); WO2002/64798 (Reivindicación 33; PáginaS 85-87); JP05003790 (Fig. 6-8); WO99/46284 (Fig. 9); MIM:179780.
(20) IL20R-alfa (IL20Ra, ZCYTOR7)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. AF184971
Versión de Genbank No. AF184971.1 GI:6013324
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de marzo de 2010 10:00 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAF01320
Versión de Genbank No. AAF01320.1 GI:6013325
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de marzo de 2010 10:00 PM
Referencias cruzadas
Clark H.F., et al Genome Res. 13, 2265-2270, 2003; Mungall A.J., et al Nature 425, 805-811, 2003; Blumberg H., et al Cell 104, 9-19, 2001; Dumoutier L., et a lJ. Immunol. 167, 3545-3549,
2001; Parrish-Novak J., et al J. Biol. Chem. 277, 47517-47523, 2002; Pletnev S., et al (2003) Biochemistry 42:12617-12624; Sheikh F., et al (2004) J. Immunol. 172, 2006-2010; EP1394274 (Ejemplo 11); US2004/005320 (Ejemplo 5); WO2003/029262 (Páginas 74-75); WO2003/002717 (Reivindicación 2; Página 63); WO2002/22153 (Páginas 45-47); US2002/042366 (Páginas 20-21); WO2001/46261 (Páginas 57-59); WO2001/46232 (Páginas 63-65); WO98/37193 (Reivindicación 1; Páginas 55-59); Acceso: Q9UHF4; Q6UWA9; Q96SH8; EMBL; AF184971; AAF01320.1.
(21) Brevican (BCAN, BEHAB)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. AF229053
Versión de Genbank No. AF229053.1 GI: 10798902
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 12:58 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAG23135
Versión de Genbank No. AAG23135.1 GI:10798903
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 12:58 AM
Referencias cruzadas
Gary S.C., et al Gene 256, 139-147, 2000; Clark H.F., et al Genome Res. 13, 2265-2270, 2003; Strausberg R.L., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 16899-16903, 2002; US2003/186372 (Reivindicación 11); US2003/186373 (Reivindicación 11); US2003/119131 (Reivindicación 1; Fig. 52); US2003/119122 (Reivindicación 1; Fig. 52); US2003/119126 (Reivindicación 1); US2003/119121 (Reivindicación 1; Fig. 52); US2003/119129 (Reivindicación 1); US2003/119130 (Reivindicación 1); US2003/119128 (Reivindicación 1; Fig. 52); US2003/119125 (Reivindicación 1); WO2003/016475 (Reivindicación 1); WO2002/02634 (Reivindicación 1)
(22) EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_004442
Versión de Genbank No. NM_004442.6 GI:111118979
Fecha de actualización del registro de GenBank: 8 de septiembre de 201204:43 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_004433
Versión de Genbank No. NP_004433.2 GI:21396504
Fecha de actualización del registro de GenBank: 8 de septiembre de 2012 04:43 PM
Referencias cruzadas
Chan, J. y Watt, V.M., Oncogene 6 (6), 1057-1061 (1991) Oncogene 10 (5):897-905 (1995), Annu. Rev. Neurosci.
21:309-345 (1998), Int. Rev. Cytol. 196:177-244 (2000); WO2003042661 (Reivindicación 12); WO200053216 (Reivindicación 1; Página 41); WO2004065576 (Reivindicación 1); WO2004020583 (Reivindicación 9); WO2003004529 (Páginas 128-132); WO200053216 (Reivindicación 1; Página 42); MIM:600997.
(23) ASLG659 (B7h)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. AX092328
Versión de Genbank No. AX092328.1 GI:13444478
Fecha de actualización del registro de GenBank: 26 de enero de 2011 07:37 AM
Referencias cruzadas
US2004/0101899 (Reivindicación 2); WO2003104399 (Reivindicación 11); WO2004000221 (Fig. 3); US2003/165504 (Reivindicación 1); US2003/124140 (Ejemplo 2); US2003/065143 (Fig. 60); WO2002/102235 (Reivindicación 13; Página 299); US2003/091580 (Ejemplo 2); WO2002/10187 (Reivindicación 6; Fig. 10); WO2001/94641 (Reivindicación 12; Fig. 7b); WO2002/02624 (Reivindicación 13; Fig. 1A-1B); US2002/034749 (Reivindicación 54; Páginas 45-46); WO2002/06317 (Ejemplo 2; Páginas 320-321, Reivindicación 34; Páginas 321-322); WO2002/71928 (Páginas 468­ 469); WO2002/02587 (Ejemplo 1; Fig. 1); WO2001/40269 (Ejemplo 3; Páginas 190-192); WO2000/36107 (Ejemplo 2; PáginaS 205-207); WO2004/053079 (Reivindicación 12); WO2003/004989 (Reivindicación 1); WO2002/71928 (Páginas 233-234, 452-453); documento WO 01/16318.
(24) PSCA (Precursor de antígenos citoblásticos de la próstata)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. AJ297436
Versión de Genbank No. AJ297436.1 GI:9367211
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de febrero de 2011 11:25 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. CAB97347
Versión de Genbank No. CAB97347.1 GI:9367212
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de febrero de 2011 11:25 AM
Referencias cruzadas
Reiter R.E., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 1735-1740, 1998; Gu Z., et al Oncogene 19,
1288-1296, 2000; Biochem. Biophys. Res. Commun. (2000) 275(3):783-788; WO2004/022709; EP1394274 (Ejemplo 11); US2004/018553 (Reivindicación 17); WO2003/008537 (Reivindicación 1); WO2002/81646 (Reivindicación 1; Página 164); WO2003/003906 (Reivindicación 10; página 288); WO2001/40309 (Ejemplo 1; Fig. 17); US2001/055751 (Ejemplo 1; Fig. 1b); WO2000/32752 (Reivindicación 18; Fig. 1); WO98/51805 (Reivindicación 17; Página 97); WO98/51824 (Reivindicación 10; Página 94); WO98/40403 (Reivindicación 2; Fig. 1B); Acceso: 043653; EMBL; AF043498; AAC39607.1
(25) GEDA
Nucleótido
Acceso de Genbank No. AY260763
Versión de Genbank No. AY260763.1 GI:30102448
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 02:24 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAP14954
Versión de Genbank No. AAP14954.1 GI:30102449
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 02:24 AM
Referencias cruzadas
Proteína similar al patrón de fusión del lipoma HMGIC AP14954/pid=AAP14954.1 - Homo sapiens (humano); WO2003/054152 (Reivindicación 20); WO2003/000842 (Reivindicación 1); WO2003/023013 (Ejemplo 3, Reivindicación 20); US2003/194704 (Reivindicación 45); GI:30102449.
(26) BAFF-R (receptor del factor activador de células B, receptor 3 de BLyS, BR3)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. AF116456
Versión de Genbank No. AF116456.1 GI:4585274
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de marzo de 201009:44 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAD25356
Versión de Genbank No. AAD25356.1 GI:4585275
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de marzo de 2010 09:44 PM
Referencias cruzadas
Receptor de BAFF/pid=NP_443177.1 - Homo sapiens: Thompson, J.S., et al Science 293 (5537), 2108-2111 (2001); WO2004/058309; WO2004/011611; WO2003/045422 (Ejemplo; PáginaS 32-33); WO2003/014294 (Reivindicación 35; Fig. 6B); WO2003/035846 (Reivindicación 70; Páginas 615-616); WO2002/94852 (Col 136-137); WO2002/38766 (Reivindicación 3; Página 133); WO2002/24909 (Ejemplo 3; Fig. 3); MIM:606269; NP_443177.1; NM_052945_1; AF132600
(27) CD22 (Isoforma del receptor CD22-B de células B, BL-CAM, Lyb-8, Lyb8, SIGLEC-2, FLJ22814) Nucleótido
Acceso de Genbank No. AK026467
Versión de Genbank No. AK026467.1 GI:10439337
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de septiembre de 2006 11:24 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. BAB15489
Versión de Genbank No. BAB15489.1 GI:10439338
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de septiembre de 2006 11:24 PM
Referencias cruzadas
Wilson et al (1991) J. Exp. Med. 173:137-146; WO2003/072036 (Reivindicación 1; Fig. 1); IM: 107266; NP_001762.1; NM_001771_1.
(27a) CD22 (Molécula CD22)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. X52785
Versión de Genbank No. X52785.1 GI:29778
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:09 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. CAA36988
Versión de Genbank No. CAA36988.1 GI:29779
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:09 AM
Referencias cruzadas
Stamenkovic I. et al., Nature 345 (6270), 74-77 (1990)??
Otra información
Símbolo Oficial: CD22
Otros Pseudónimos: SIGLEC-2, SIGLEC2
Otras Designaciones: receptor CD22 de células B; molécula de adhesión a células de linfocitos B; BL-CAM; antígeno CD22; antígeno de superficie de células T Leu-14; lectina 2 similar a Ig de unión a ácido siálico; lectina 2 similar a Ig de unión a ácido siálico
ANTICUERPOS
G5/44 (Inotuzumab): DiJoseph JF., et al Cancer Immunol Immunother. Enero 2005; 54(1):11-24.
Epratuzumab - Goldenberg DM., et al Expert Rev Anticancer Ther. 6(10): 1341-53, 2006.
(28) CD79a (CD79A, CD79alfa), alfa asociada a inmunoglobulina, una proteína específica de células B que interacciona covalentemente con Ig beta (CD79B) y forma un complejo sobre la superficie con moléculas 35 de IgM, traduce una señal que participa en la diferenciación de células B), pl: 4.84, MW: 25028 TM: 2 Cromosoma del Gen [P]: 19q13.2).
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_001783
Versión de Genbank No. NM_001783.3 GI:90193587
Fecha de actualización del registro de GenBank: 26 de junio de 2012 01:48 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_001774
Versión de Genbank No. NP_001774.1 GI:4502685
Fecha de actualización del registro de GenBank: 26 de junio de 2012 01:48 PM
Referencias cruzadas
WO2003/088808, US2003/0228319; WO2003/062401 (Reivindicación 9); US2002/150573 (Reivindicación 4, Páginas 13-14); WO99/58658 (Reivindicación 13, Fig. 16); WO92/07574 (Fig. 1); US5644033; Ha, et al (1992) J. Immunol.
148(5): 1526-1531; Müller et al (1992) Eur. J. Immunol. 22:1621-1625; Hashimoto et al (1994) Immunogenetics 40(4):287-295; Preud'homme et al (1992) Clin. Exp. Immunol. 90(1):141-146; Yu et al (1992) J. Immunol. 148(2) 633­ 637; Sakaguchi et al (1988) EMBO J. 7(11):3457-3464
(29) CXCR5 (Receptor 1 del linfoma de Burkitt, un receptor acoplado a la proteína G que se activa por la quimiocina CXCL13, funciona en la migración de linfocitos y defensa humoral, desempeña una función en la infección por el VIH-2 y quizás desarrollo de SIDA, linfoma, mieloma y leucemia); 372 aa, pl: 8.54 MW: 41959 TM: 7 Cromosoma del Gen [P]: 11q23.3
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_001716
Versión de Genbank No. NM_001716.4 GI:342307092
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 2012 01:49 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_001707
Versión de Genbank No. NP_001707.1 GI:4502415
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 2012 01:49 PM
Referencias cruzadas
WO2004/040000; WO2004/015426; US2003/105292 (Ejemplo 2); US6555339 (Ejemplo 2); WO2002/61087 (Fig. 1); WO2001/57188 (Reivindicación 20, Página 269); WO2001/72830 (páginas 12-13); WO2000/22129 (Ejemplo 1, Páginas 152-153, Ejemplo 2, páginas 254-256); WO99/28468 (Reivindicación 1, Página 38); US5440021 (Ejemplo 2, col 49-52); WO94/28931 (Páginas 56-58); WO92/17497 (Reivindicación 7, Fig. 5); Dobner et al (1992) Eur. J. Immunol.
22:2795-2799; Barella et al (1995) Biochem. J. 309:773-779
(30) HLA-DOB (Subunidad beta de la molécula de MHC de clase II (antígeno Ia) que se une a péptidos y los presenta a linfocitos T CD4+); 273 aa, pl: 6,56, MW: 30820.TM: 1 Cromosoma del Gen [P]: 6p21.3)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_002120
Versión de Genbank No. NM_002120.3 GI: 118402587
Fecha de actualización del registro de GenBank: 8 de septiembre de 201204:46 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_002111
Versión de Genbank No. NP_002111.1 GI:4504403
Fecha de actualización del registro de GenBank: 8 de septiembre de 201204:46 PM
Referencias cruzadas
Tonnelle et al (1985) EMBO J. 4(11):2839-2847; Jonsson et a l(1989) Immunogenetics 29(6):411-413; Beck et a l(1992) J. Mol. Biol. 228:433-441; Strausberg et al (2002) Proc. Nati. Acad. Sci USA 99:16899- 16903; Servenius et al (1987) J. Biol. Chem. 262:8759-8766; Beck et al (1996) J. Mol. Biol. 255:1-13; Naruse et al (2002) Tissue Antigens 59:512-519; WO99/58658 (Reivindicación 13, Fig. 15); US6153408 (Col 35-38); US5976551 (col 168-170); US6011146 (col 145-146); Kasahara et al (1989) Immunogenetics 30(1):66-68; Larhammar et al (1985) J. Biol. Chem. 260(26):14111-14119
(31) P2X5 (Canal 5 de iones regulado por el ligando del receptor purinérgico P2X, un canal de iones regulado por ATP extracelular, puede estar involucrado en la transmisión sinóptica y la neurogénesis, la deficiencia puede contribuir a la patofisiología de la inestabilidad del detrusor idiopático); 422 aa, pl: 7.63, MW: 47206, TM: 1 Cromosoma del Gen [P]: 17p13.3).
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_002561
Versión de Genbank No. NM_002561.3 GI:325197202
Fecha de actualización del registro de GenBank: 27 de junio de 2012 12:41 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_002552
Versión de Genbank No. NP_002552.2 GI:28416933
Fecha de actualización del registro de GenBank: 27 de junio de 2012 12:41 AM
Referencias cruzadas
Le et al (1997) FEBS Lett. 418(1-2):195-199; WO2004/047749; WO2003/072035 (Reivindicación 10); Touchman et al (2000) Genome Res. 10:165-173; WO2002/22660 (Reivindicación 20); WO2003/093444 (Reivindicación 1); WO2003/087768 (Reivindicación 1); WO2003/029277 (Página 82)
(32) CD72 (Antígeno de diferenciación de células B CD72, Lyb-2); 359 aa, pl: 8.66, MW: 40225, TM: 15 Cromosoma del gen [P]: 9p13.3).
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_001782
Versión de Genbank No. NM_001782.2 GI:194018444
Fecha de actualización del registro de GenBank: 26 de junio de 2012 01:43 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_001773
Versión de Genbank No. NP_001773.1 GI:4502683
Fecha de actualización del registro de GenBank: 26 de junio de 2012 01:43 PM
Referencias cruzadas
WO2004042346 (Reivindicación 65); WO2003/026493 (Páginas 51-52, 57-58); WO2000/75655 (páginas 105-106); Von Hoegen et al (1990) J. Immunol. 144(12):4870-4877; Strausberg et al (2002) Proc. Natl. Acad. SciUSA 99:16899-16903.
(33) LY64 (Antígeno 64 de linfocitos (RP105), proteína de membrana tipo I de la familia de repeticiones ricas en leucina (LRR), regula la activación y la apoptosis de células B, la pérdida de función está asociada a la elevada actividad de la enfermedad en pacientes con lupus eritematosos sistémico); 661 aa, pl: 6.20, MW: 74147 TM: 1 Cromosoma del Gen [P]: 5q12).
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_005582
Versión de Genbank No. NM_005582.2 GI:167555126
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de septiembre de 201201:50 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP 005573
Versión de Genbank No. NP_005573.2 GI:167555127
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de septiembre de 201201:50 PM
Referencias cruzadas
US2002/193567; WO97/07198 (Reivindicación 11, páginas 39-42); Miura et al (1996) Genomics 38(3):299-304; Miura et al (1998) Blood 92:2815-2822; WO2003/083047; WO97/44452 (Reivindicación 8, páginas 57-61); WO2000/12130 (páginas 24-26).
(34) FcRHI (Proteína 1 sim ilar al receptor de Fc, un receptor putativo para el dominio Fc de inmunoglobulina que contiene dominios similares a Ig tipo C2 e ITAM, puede tener una función en la diferenciación de células B); 429 aa, pl: 5.28, MW: 46925 TM: 1 Cromosoma del Gen [P]: 1q21-1q22)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_052938
Versión de Genbank No. NM_052938.4 GI:226958543
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de septiembre de 2012 01:43 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_443170
Versión de Genbank No. NP_443170.1 GI:16418419
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de septiembre de 201201:43 PM
Referencias cruzadas
WO2003/077836; WO2001/38490 (Reivindicación 6, Fig. 18E-1-18-E-2); Davis et al (2001) Proc. Natl. Acad. Sci USA 98(17):9772-9777; WO2003/089624 (Reivindicación 8); EP1347046 (Reivindicación 1); WO2003/089624 (Reivindicación 7).
(35) IRTA2 (2 asociado a la translocalización de receptores de la superfamilia de inmunoglobulina, un inmunorreceptor putativo con posibles funciones en el desarrollo y linfomagénesis de células B; la desregulación del gen por translocalización se produce en algunos tumores malignos de células B); 977 aa, pl: 6.88, MW: 106468, TM: 1 Cromosoma del Gen [P]: 1q21)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. AF343662
Versión de Genbank No. AF343662.1 GI:13591709
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 01:16 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAK31325
Versión de Genbank No. AAK31325.1 GI:13591710
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 01:16 AM
Referencias cruzadas
AF343663, AF343664, AF343665, AF369794, AF397453, AK090423, AK090475, AL834187, AY358085; Ratón:AK089756, AY158090, AY506558; NP_112571.1; WO2003/024392 (Reivindicación 2, Fig. 97); Nakayama et al (2000) Biochem. Biophys. Res. Commun. 277(1):124-127; WO2003/077836; WO2001/38490 (reivindicación 3, Fig. 18B-1-18B-2).
(36) TENB2 (TMEFF2, tomorregulina, TPEF, HPP1, TR, proteoglicano de transmembrana putativo, relacionado con la familia de EGF/heregulina de factores de crecimiento y folistatina); 374 aa)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. AF179274
Versión de Genbank No. AF179274.2 GI:12280939
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 201001:05 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAD55776
Versión de Genbank No. AAD55776.2 GI:12280940
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 01:05 AM
Referencias cruzadas
Acceso NCBI: AAD55776, AAF91397, AAG49451, NCBI RefSeq: NP_057276; NCBI Gene: 23671; OMIM: 605734; SwissProt Q9UIK5; AY358907, CAF85723, CQ782436; WO2004/074320; JP2004113151; WO2003/042661; WO2003/009814; EP1295944 (páginas 69-70); WO2002/30268 (página 329); WO2001/90304; US2004/249130; US2004/022727; WO2004/063355; US2004/197325; US2003/232350; US2004/005563; US2003/124579; Horie et al (2000) Genomics 67:146-152; Uchida et al (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 266:593-602; Liang et al (2000) Cáncer Res. 60:4907-12; Glynne-Jones et al (2001) Int J Cáncer. Oct 15; 94(2):178-84.
(37) PSMA - FOLH1 (Folato hidrolasa (antígeno de membrana específico de la próstata) 1)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. M99487
Versión de Genbank No. M99487.1 GI:190663
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:48 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAA60209
Versión de Genbank No. AAA60209.1 GI:190664
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:48 AM
Referencias cruzadas
Israeli R.S. et al Cancer Res. 53 (2), 227-230 (1993)
Otra información
Símbolo Oficial: FOLH1
Otros Pseudónimos: GIG27, FGCP, FOLH, GCP2, GCPII, NAALAD1, NAALAdasa, PSM, PSMA, mGCP
Otras Designaciones: ácido dipeptidasa 1 enlazada a alfa N-acetilado; ácido dipeptidasa I enlazada a alfa N-acetilado; NAALADasa I; proteína del gen 27 inhibidor del crecimiento celular; folilpoli-gamma-glutamato carboxipeptidasa; glutamato carboxilasa II; glutamato carboxipeptidasa 2; glutamato carboxipeptidasa II; glutamato carboxipeptidasa de membrana; variante F del antígeno de membrana específico de la próstata; pteroilpoli-gamma-glutamato carboxipeptidasa
ANTICUERPOS
US 7.666.425:
Anticuerpos producidos por Hibridomas que tienen las siguientes referencias de ATCC: No. de acceso de ATCC HB-12101, No. de acceso de ATCC HB-12109, No. de acceso de ATCC HB-12127 y No. de acceso de ATCC HB-12126.
Proscan: un anticuerpo monoclonal seleccionado del grupo que consiste en 8H12, 3E11, 17G1,29B4, 30C1 y 20F2 (US 7,811,564; Moffett S., et al Hybridoma (Larchmt). Dic 2007; 26(6):363-72).
Cytogen: anticuerpos monoclonales 7E11-C5 (No. de acceso de ATCC HB 10494) y 9H10-A4 (No. de acceso de ATCC HB11430) -U S 5.763.202
GlycoMimetics: NUH2 -N o . de acceso de ATCC HB 9762 (US 7.135.301)
Human Genome Science: HPRAJ70 - No. de acceso de ATCC 97131 (US 6.824.993); secuencia de aminoácidos codificada por el clon de ADNc (HPRAJ70) depositado como el Depósito No. 97131 de la Colección Americana de Cultivos Tipo (“ATCC”).
Medarex: Anticuerpos anti-PSMA que carecen de residuos de fucosilo - US 7.875.278
Los anticuerpos anti-PSMA de ratón incluyen los anticuerpos 3F5.4G6, 3D7.1.1, 4E10-1.14, 3E11, 4D8, 3E6, 3C9, 2C7, 1G3, 3 C4 , 3C6, 4D4, 1G9, 5C8B9, 3G6, 4C8B9, y monoclonales. Los hibridomas que secretan 3F5.4G6, 3D7.1.1, 4E10-1.14, 3E11, 4D8, 3E6, 3C9, 2C7, 1G3, 3C4, 3C6, 4D4, 1G9, 5C8B9, 3G6 o 4C8B9 se han depositado públicamente y se describen en la Patente norteamericana No. 6.159.508. Los hibridomas relevantes se han depositado públicamente y se describen en la Patente norteamericana No. 6.107.090. Además, los anticuerpos anti PSMA humanizados, que incluyen una versión humanizada de J591, se describen con más detalle en la Publicación PCT WO 02/098897.
Otros anticuerpos anti-PSMA humanos de ratón se han descrito en la técnica, tales como mAb 107-1A4 (Wang, S. et al (2001) Int. J. Cancer 92:871-876) y mAb 2C9 (Kato, K. et al (2003) Int. J. Urol. 10:439-444).
Ejemplos de anticuerpos monoclonales anti-PSMA humanos incluyen los anticuerpos 4A3, 7F12, 8C12, 8A11, 16F9, 2A10, 2C6, 2F5 y 1C3, aislados y caracterizados estructuralmente como se ha descrito originalmente en las Publicaciones Pc T WO 01/09192 y WO 03/064606 y en la Solicitud Provisional norteamericana No. de Serie 60/654.125, titulada “Human Monoclonal Antibodies to Prostate Specific Membrane Antigen (PSMA)”, presentada el 18 de febrero de 2005. Las secuencias de aminoácidos de Vh de 4A3, 7F12, 8C12, 8A11, 16F9, 2A10, 2C6, 2F5 y 1C3 se muestran en las SEC ID NOs: 1-9, respectivamente. Las secuencias de aminoácidos de Vl de 4A3, 7F12, 8C12, 8A11, 16F9, 2A10, 2C6, 2F5 y 1C3 se muestran en las SEC ID NOs: 10-18, respectivamente.
Otros anticuerpos anti-PSMA humanos incluyen los anticuerpos divulgados en la Publicación PCT WO 03/034903 y la Solicitud norteamericana No. 2004/0033229.
NW Biotherapeutics: Una línea celular de hibridoma seleccionada del grupo que consiste en 3F5.4G6 que tiene número de acceso de ATCC HB12060, 3D7-1.I. que tiene número de acceso de ATCC HB12309, 4E10-1.14 que tiene número de acceso de ATCC HB12310, 3E11 (ATCC HB12488), 4D8 (ATCC HB12487), 3E6 (ATCC HB12486), 3C9 (ATCC HB12484), 2C7 (ATCC HB12490), 1G3 (ATCC HB12489), 3C4 (ATCC HB12494), 3C6 (ATCC HB12491), 4D4 (ATCC HB12493), 1G9 (ATCC HB12495), 5C8B9 (ATCC HB12492) y 3G6 (ATCC HB12485) - véase US 6.150.508 PSMA Development Company/Progenics/Cytogen - Seattle Genetics: mAb 3,9, producido por el hibridoma depositado bajo el No. de acceso de ATCc PTA-3258 o mAb 10,3, producido por el hibridoma depositado bajo el No. de acceso de ATCC PTA-3347 - US 7.850.971
PSMA Development Company - Composiciones de anticuerpos de PSMA (US 20080286284, Tabla 1)
Esta solicitud es una divisional de la solicitud de patente norteamericana No. de serie 10/395.894, presentada el 21 de marzo de 2003 (US 7.850.971)
Hospital Universitario de Friburgo, Alemania - mAbs 3/A12, 3/E7, y 3/F11 (Wolf P., et al Prostate. 2010 Apr 1;70(5):562-9).
(38) SST (Receptor de Somatostatina; obsérvese que hay 5 subtipos)
(38.1) SSTR2 (Receptor 2 de somatostatina)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_001050
Versión de Genbank No. NMR_001050.2 GI:44890054
Fecha de actualización del registro de GenBank: 19 de agosto de 2012 01:37 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_001041
Versión de Genbank No. NP_001041.1 GI:4557859
Fecha de actualización del registro de GenBank: 19 de agosto de 2012 01:37 PM
Referencias cruzadas
Yamada Y., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89 (1), 251-255 (1992); Susini C., et al Ann Oncol. 2006 Dec;17(12):1733-42
Otra información
Símbolo Oficial: SSTR2
Otras Designaciones: SRIF-1; SS2R; receptor de somatostatina tipo 2
(38.2) SSTR5 (Receptor 5 de somatostatina)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. D16827
Versión de Genbank No. D16827.1 GI:487683
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de agosto de 2006 12:45 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. BAA04107
Versión de Genbank No. BAA04107.1 GI:487684
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de agosto de 2006 12:45 PM
Referencias cruzadas
Yamada, Y., et al B iochem . B iophys . Res. C om m un. 195 (2), 844-852 (1993)
Otra información
Símbolo Oficial: SSTR5
Otros Pseudónimos: SS-5-R
Otras Designaciones: Receptor de somatostatina subtipo 5; receptor de somatostatina tipo 5
(38.3) SSTR1
(38.4) SSTR3
(38.5) SSTR4
AvB6 - Ambas subunidades (39+40)
(39) IT G A V (In te g r in a , a lfa V;
Nucleótido
Acceso de Genbank No. M14648 J02826 M18365
Versión de Genbank No. M14648.1 GI:340306
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:56 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAA36808
Versión de Genbank No. AAA36808.1 GI:340307
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:56 AM
Referencias cruzadas
Suzuki S., et al Proc. Natl. A cad . Sci. U .S .A . 83 (22), 8614-8618 (1986)
Otra información
Símbolo Oficial: ITGAV
Otros Pseudónimos: CD51, MSK8, VNRA, VTNR
Otras Designaciones: antígeno identificado por el anticuerpo monoclonal L230; integrina alfa-V; integrina alfaVbeta3; integrina, alfa V (receptor de vitronectina, polipéptido alfa, antígeno CD51); subunidad alfa del receptor de vitronectina (40) IT G B 6 (In teg rina , b e ta 6)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_000888
Versión de Genbank No. NM_000888.3 GI:9966771
Fecha de actualización del registro de GenBank: 27 de junio de 2012 12:46 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_000879
Versión de Genbank No. NP_000879.2 GI:9625002
Fecha de actualización del registro de GenBank: 27 de junio de 2012 12:46 AM
Referencias cruzadas
Sheppard D.J., et al Biol. Chem. 265 (20), 11502-11507 (1990)
Otra información
Símbolo Oficial: ITGB6
Otras Designaciones: integrina beta-6
ANTICUERPOS
Biogen: US 7,943,742 - Los clones de hibridoma 6.3G9 y 6.8G6 se depositaron en la ATCC, números de acceso de ATCC PTA-3649 y -3645, respectivamente.
Biogen: US7,465,449 - En algunas modalidades, el anticuerpo comprende las mismas secuencias de polipéptidos de cadenas pesadas y ligeras que un anticuerpo producido por el hibridoma 6.1A8, 6.3G9, 6.8G6, 6.2B1, 6.2B10, 6.2A1, 6.2E5, 7.1G10, 7.7G5, o 7.1C5.
Centocor (J&J): US7.550.142; US7.163.681
Por ejemplo, en US 7,550,142 - un anticuerpo que tiene regiones variables de cadena pesada humanas y de cadena ligera humanas que comprenden las secuencias de aminoácidos mostradas en la SEC ID NO: 7 y la SEC ID NO: 8. Seattle Genetics: 15H3 (Ryan MC., et al Cancer Res April 15, 2012; 72 (Suplemento 8): 4630)
(41) CEACAM5 (Molécula 5 de adhesión a células relacionada con el antígeno carcinoembrionario) Nucleótido
Acceso de Genbank No. M17303
Versión de Genbank No. M17303.1 GI:178676
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:47 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAB59513
Versión de Genbank No. AAB59513.1 GI:178677
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:47 AM
Referencias cruzadas
Beauchemin N., et al Mol. Cell. Biol. 7 (9), 3221-3230 (1987)
Otra información
Símbolo Oficial: CEACAM5
Otros Pseudónimos: CD66e, CEA
Otras Designaciones: antígeno 100 de meconio
ANTICUERPOS
AstraZeneca-Medlmmune: US 20100330103; US20080057063;
US20020142359
- por ejemplo, un anticuerpo que tiene regiones determinantes de la complementariedad (CDRs) con las siguientes secuencias: cadena pesada; CDR1 - DNYMH, CDR2 - WIDPENGDTE YAPKFRG, CDR3 - LIYAGYLAMD Y; y cadena ligera CDR1 - SASSSVTYMH, CDR2 - STSNLAS, CDR3 - QQRSTYPLT.
- Hibridoma 806.077 depositado como el depósito no. 96022936 de la Colección Europea de Cultivos celulares (ECACC).
Research Corporation Technologies, Inc.: US5.047.507
Bayer Corporation: US6.013.772
BioAlliance: US7.982.017; US7.674.605
• US 7.674.605
- un anticuerpo que comprende la secuencia de la región variable de cadena pesada de la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 1, y la secuencia de la región variable de cadena ligera de la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 2.
- un anticuerpo que comprende la secuencia de la región variable de cadena pesada de la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 5, y la secuencia de la región variable de cadena ligera de la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 6.
Celltech Therapeutics Limited: US5.877.293
The Dow Chemical Company: US5.472.693; US6.417.337; US6.333.405
US5.472.693 - por ejemplo, ATCC No. CRL-11215
US6.417.337 - por ejemplo, ATCC CRL-12208
US6.333.405 - por ejemplo, ATCC CRL-12208
Immunomedics, Inc: US7.534.431; US7.230.084; US7.300.644; US6.730.300;
US20110189085
- un anticuerpo que tiene las CDRs de la región variable de cadena ligera comprende: CDR1 comprende KASQDVGTSVA (SEC ID NO: 20); CDR2 comprende WTSTRHT (SEC ID NO: 21); y CDR3 comprende QQYSLYRS (SEC ID NO: 22); y las CDRs de la región variable de cadena pesada de dicho anticuerpo anti­ CEA comprenden: CDR1 comprende TYWMS (SEC ID NO: 23); CDR2 comprende EIHPDSSTINYAPSLKD (SEC ID NO: 24); y CDR3 comprende LYFGFPWFAY (SEC ID NO: 25).
US20100221175; US20090092598; US20070202044; US20110064653;
US20090185974; US20080069775.
(42) MET (proto-oncogén met; receptor del factor de crecimiento de hepatocitos)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. M35073
Versión de Genbank No. M35073.1 GI:187553
Fecha de actualización del registro de GenBank: 6 de marzo de 2012 11:12 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAA59589
Versión de Genbank No. AAA59589.1 GI:553531
Fecha de actualización del registro de GenBank: 6 de marzo de 2012 11:12 AM
Referencias cruzadas
Dean M., et al Nature 318 (6044), 385-388 (1985)
Otra información
Símbolo Oficial: MET
Otros Pseudónimos: AUTS9, HGFR, RCCP2, c-Met
Otras Designaciones: receptor de HGF; receptor de HGF/SF; receptor de SF; receptor del factor de crecimiento de hepatocitos; tirosina cinasa del proto-oncogén met; proto-oncogén c-Met; factor de dispersión del receptor; proteína tirosina-cinasa Met
ANTICUERPOS
Abgenix/Pfizer: US20100040629
por ejemplo, el anticuerpo producido por el hibridoma 13.3.2 que tiene el número de acceso de la Colección Americana de Cultivos Tipo (ATCC) PTA-5026; el anticuerpo producido por el hibridoma 9.1.2 que tiene el número de acceso de ATCC PTA-5027; el anticuerpo producido por el hibridoma 8.70.2 que tiene número de acceso de ATCC PTA-5028; o el anticuerpo producido por el hibridoma 6.90.3 que tiene el número de acceso de ATCC PTA-5029.
Amgen/Pfizer: US20050054019
por ejemplo, un anticuerpo que comprende una cadena pesada que tiene las secuencias de aminoácidos expuestas en SEC ID NO: 2 en donde X2 es glutamato y X4 es serina y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en SEC ID NO: 4 en donde X8 es alanina, sin las secuencias señal; un anticuerpo que comprende una cadena pesada que tiene las secuencias de aminoácidos expuestas en SEC ID NO: 6 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en SEC ID NO: 8, sin las secuencias señal; un anticuerpo que comprende una cadena pesada que tiene las secuencias de aminoácidos expuestas en SEC ID NO: y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en SEC ID NO: 12, sin las secuencias señal; o un anticuerpo que comprende una cadena pesada que tiene las secuencias de aminoácidos expuestas en SEC ID NO: 14 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en SEC ID NO: 16, sin las secuencias señal.
Agouron Pharmaceuticals (Ahora Pfizer): US20060035907
Eli Lilly: US20100129369
Genentech: US5,686,292; US20100028337; US20100016241; US20070129301; US20070098707;
US20070092520, US20060270594; US20060134104; US20060035278; US20050233960; US20050037431
US 5.686.292 - por ejemplo, ATCC HB-11894 y ATCC HB-11895
US 20100016241 - por ejemplo, ATCC HB-11894 (hibridoma 1A3.3.13) o HB-11895 (hibridoma 5D5.11.6) Centro Médico de la Defensa Nacional, Taiwán: Lu RM., et al Biomaterials. 2011 Apr;32(12):3265-74.
Novartis: US20090175860
- por ejemplo, un anticuerpo que comprende las secuencias de CDR1, CDR2, y CDR3 de la cadena pesada 4687, en donde las secuencias de CDR1, CDR2, y CDR3 de la cadena pesada 4687 son los residuos 26-35, 50-65, y 98-102, respectivamente, de SEC ID NO: 58; y las secuencias de CDR1, CDR2, y CDR3 de la cadena ligera 5097, en donde las secuencias de CDR1, CDR2, y CDR3 de la cadena ligera 5097 son los residuos 24-39, 55-61, y 94­ 100 de SEC ID NO: 37.
Pharmacia Corporation: US20040166544
Pierre Fabre: US20110239316, US20110097262, US20100115639
Sumsung: US 20110129481 - por ejemplo, un anticuerpo monoclonal producido a partir de una célula de hibridoma que tiene el número de acceso Kc Lr F-BP-00219 o el número de acceso de KCLRF-BP-00223.
Samsung: US 20110104176 - por ejemplo, un anticuerpo producido por una célula de hibridoma que tiene el número de acceso: KCLRF-BP-00220.
Escuela médica de la Universidad de Turín: DN-30 Pacchiana G., et al J Biol Chem. 2010 Nov 12;285(46):36149-57
Van Andel Research Institute: Jiao Y., et al Mol Biotechnol. 2005 Sep;31(1):41-54.
(43) MUC1 (Mucina 1, asociada a la superficie celular)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. J05581
Versión de Genbank No. J05581.1 GI:188869
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:48 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAA59876
Versión de Genbank No. AAA59876.1 GI: 188870
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:48 AM
Referencias cruzadas
Gendler S.J., et al J. Biol. Chem. 265 (25), 15286-15293 (1990)
Otra información
Símbolo Oficial: MUC1
Otros Pseudónimos: RP11-263K19.2, CD227, EMA, H23AG, KL-6, MAM6, MUC-1, MUC-1/SEC, MUC-1/X, MUC1/ZD, PEM, PEMT, PUM
Otras Designaciones: antígeno DF3; antígeno H23; antígeno DF3 asociado a carcinoma de mama; mucina asociada a carcinoma; episialina; krebs von den Lungen-6; mucina 1, transmembrana; mucina-1; mucina urinaria reactiva con cacahuete; mucina epitelial polimórfica; mucina epitelial asociada a tumor; antígeno de la membrana epitelial asociado a tumor; mucina asociada a tumor
ANTICUERPOS
AltaRex- Quest Pharma Tech: US 6.716.966 - por ejemplo, un anticuerpo para Alt-1 producido por el hibridoma ATCC No. PTA-975.
AltaRex- Quest Pharma Tech: US7.147.850
CRT: 5E5 - S0 rensen AL., et al Glycobiology vol. 16 no. 2 p.p. 96-107, 2006; HMFG2 - Burchell J., et al Cáncer Res., 47, 5476-5482 (1987); ver WO2015/159076
Glycotope GT-MAB: GT-MAB 2.5-GEX (Sitio web: http://www.glycotope.com/pipeline/pankomab-gex) Immunogen: US7.202.346
- por ejemplo, anticuerpo MJ-170: línea celular de hibridoma MJ-170 no. de acceso de ATCC PTA-5286; anticuerpo monoclonal MJ-171: línea celular de hibridoma MJ-171 no. de acceso de ATCC PTA-5287; anticuerpo monoclonal MJ-172: línea celular de hibridoma MJ-172 no. de acceso de ATCC PTA-5288; o anticuerpo monoclonal MJ-173: línea celular de hibridoma MJ-173 no. de acceso de ATCC PTA-5302
Immunomedics: US 6,653,104
Ramot Tel Aviv Uni: US7.897.351
Regents Uni. CA: US 7,183,388; US20040005647; US20030077676.
Roche GlycArt: US8.021.856
Centro Nacional Ruso de Investigaciones Oncológicas: Imuteran-Ivanov PK., et al Biotechnol J. 2007 Jul;2(7):863-70
Universidad Técnica de Braunschweig: (IIB6, HT186-B7, HT186-D11, HT186-G2, HT200-3A-C1, HT220-M-D1, HT220-M-G8) -Thie H., et al PLoS One. 2011 Jan 14; 6(1):e15921
(44) CA9 (Anhidrasa carbónica IX)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. X66839
Versión de Genbank No. X66839.1 GI:1000701
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:15 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. CAA47315
Versión de Genbank No. CAA47315.1 GI:1000702
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:15 AM
Referencias cruzadas
Pastorek J., et al Oncogene 9 (10), 2877-2888 (1994)
Otra información
Símbolo Oficial: CA9
Otros Pseudónimos: CAIX, MN
Otras Designaciones: CA-IX; P54/58N; antígeno G250 asociado a RCC; proteína G250 asociada a RCC; carbonato deshidratasa IX; anhidrasa carbónica 9; deshidratasa carbónica; antígeno MN de membrana; pMW1; antígeno G250 asociado a carcinoma de células renales
ANTICUERPOS
Abgenix/Amgen: US20040018198
Affibody: Moléculas de Affibody anti-CAIX
(http://www.affibody.com/en/Product-Portfolio/Pipeline/)
Bayer: US7.462.696
Bayer/Morfosys: mAb 3ee9 - Petrul HM., et al Mol Cáncer Ther. 2012 Feb; 11(2):340-9
Escuela Médica de Harvard: Anticuerpos G10, G36, G37, G39, G45, G57, G106, G119, G6, G27, G40 y G125. Xu C., et al PLoS One. 2010 Mar 10;5(3):e9625
Instituto de Virología, Academia Eslovaca de Ciencias (Bayer) - US5.955.075
- por ejemplo, M75 - No. de acceso de ATCC HB 11128 o MN12 - No. de acceso de ATCC HB 11647 Instituto de Virología, Academia Eslovaca de Ciencias: US7.816.493
- por ejemplo, el anticuerpo monoclonal M75 que es secretado del hibridoma VU-M75, que se depositó en la Colección Americana de Cultivos Tipo bajo No. de ATCC HB 11128; o el anticuerpo monoclonal V/10 secretado del hibridoma V/10-VU, que se depositó en la Autoridad Depositaria Internacional de la Colección Coordinada Belga de Microorganismos (BCCM) en el Laboratorium voor Moleculaire Bioloqie-Plasmidencollectie (LMBP) en la Universeit Gent en Gante, Bélgica, bajo el No. de acceso LMBP 6009CB.
Instituto de Virología, Academia Eslovaca de Ciencias - US20080177046; US20080176310; US20080176258; US20050031623
Novartis: US20090252738
Wilex: US7.691.375 - por ejemplo, el anticuerpo producido por la línea celular de hibridoma DSM ASC 2526. Wilex: US20110123537; Rencarex: Kennett RH., et al Curr Opin Mol Ther. 2003 Feb;5(1):70-5
Xencor: US20090162382
(45) EGFRvIII (Receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), variante de transcrito 3,
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_201283
Versión de Genbank No. NM_201283.1 GI:41327733
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 2012 01:47 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_958440
Versión de Genbank No. NP_958440.1 GI:41327734
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 2012 01:47 PM
Referencias cruzadas
Batra SK., et al Cell Growth D iffer 1995;6:1251-1259.
ANTICUERPOS:
US7.628.986 y US7.736.644 (Amgen)
Por ejemplo, una secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena pesada seleccionada del grupo que consiste en SEC ID NO: 142 y variantes y una secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en: SEC ID NO: 144 y variantes.
US20100111979 (Amgen)
Por ejemplo, un anticuerpo que comprende una secuencia de aminoácidos de cadena pesada que comprende:
CDR1 que consiste en una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las secuencias de aminoácidos para la región CDR1 de anticuerpos 13.1.2 (SEC ID NO: 138), 131 (SEC ID NO: 2), 170 (SEC ID NO: 4), 150 (SEC ID NO: 5), 095 (SEC ID NO: 7), 250 (SEC ID NO: 9), 139 (SEC ID NO: 10), 211 (SEC ID NO: 12), 124 (SEC ID NO: 13), 318 (SEC ID NO: 15), 342 (SEC ID NO: 16), y 333 (SEC ID NO: 17);
CDR2 que consiste en una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las secuencias de aminoácidos para la región CDR2 de anticuerpos 13.1.2 (SEC ID NO: 138), 131 (SEC ID NO: 2), 170 (SEC ID NO: 4), 150 (SEC ID NO: 5), 095 (SEC ID NO: 7), 250 (SEC ID NO: 9), 139 (SEC ID NO: 10), 211 (SEC ID NO: 12), 124 (SEC ID NO: 13), 318 (SEC ID NO: 15), 342 (SEC ID NO: 16), y 333 (SEC ID NO: 17); y
CDR3 que consiste en una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las secuencias de aminoácidos para la región CDR3 de anticuerpos 13.1.2 (SEC ID NO: 138), 131 (SEC ID NO: 2), 170 (SEC ID NO: 4), 150 (SEC ID NO: 5), 095 (SEC ID NO: 7), 250 (SEC ID NO: 9), 139 (SEC ID NO: 10), 211 (SEC ID NO: 12), 124 (SEC ID NO: 13), 318 (SEC ID NO: 15), 342 (SEC ID NO: 16) y 333 (SEC ID NO: 17).
US20090240038 (Amgen)
Por ejemplo, un anticuerpo que tiene por lo menos uno de los polipéptidos de cadena pesada o ligera comprende una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 90% idéntica a la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en: SEC ID NO: 2, Se C ID NO: 19, SEC ID NO: 142, SEC ID NO: 144, y cualquier combinación de las mismas.
US20090175887 (Amgen)
Por ejemplo, un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada seleccionada del grupo que consiste en la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de anticuerpo 13.1.2 (SEC ID NO: 138), 131 (s Ec ID NO: 2), 170 (SEC ID NO: 4), 150 (SEC ID NO: 5), 095 (SEC ID NO: 7), 250 (SEC ID NO: 9), 139 (SEC ID NO: 10), 211 (SEC ID NO: 12), 124 (SEC ID NO: 13), 318 (SEC ID NO: 15), 342 (SEC ID NO: 16). y 333 (SEC ID NO: 17).
US20090156790 (Amgen)
Por ejemplo, un anticuerpo que tiene el polipéptido de cadena pesada y un polipéptido de cadena ligera, en donde por lo menos uno de los polipéptidos de cadena pesada o ligera comprende una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 90% idéntica a la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en: SEC ID NO: 2, Se C ID NO: 19, SEC ID NO: 142, SEC ID NO: 144, y cualquier combinación de las mismas.
US20090155282, US20050059087 y US20050053608 (Amgen)
Por ejemplo, una secuencia de aminoácidos de cadena pesada del anticuerpo seleccionada del grupo que consiste en la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de anticuerpo 13.1.2 (SEC ID NO: 138), 131 (SEC ID NO: 2), 170 (SEC ID NO: 4), 150 (SEC ID NO: 5), 095 (SEC ID NO: 7), 250 (SEC ID NO: 9), 139 (SEC ID NO: 10), 211 (SEC ID NO: 12), 124 (SEC ID NO: 13), 318 (SEC ID NO: 15), 342 (SEC ID NO: 16) y 333 (SEC ID NO: 17).
MR1-1 (US7.129.332; Duke)
Por ejemplo, un anticuerpo de variante que tiene la secuencia de SEC ID NO. 18 con las sustituciones S98P-T99Y en CDR3 VH y F92W en CDR3 VL.
L8A4, H10, Y10 (Wikstrand CJ., et al Cáncer Res. 1995 Jul 15;55(14):3140-8; Duke)
US20090311803 (Universidad de Harvard)
Por ejemplo, SEC ID NO: 9 para la región variable de cadena pesada del anticuerpo, y SEC ID NO: 3 para las secuencias de aminoácidos de la región variable de cadena ligera
US20070274991 (EMD72000, también conocido como matuzumab; Universidad de Harvard)
Por ejemplo, SEC ID NOs: 3 y 9 para la cadena ligera y cadena pesada, respectivamente
US6.129.915 (Schering)
Por ejemplo, Se C ID n Os: 1,2, 3, 4, 5 y 6.
mAb CH12 - Wang H., et al FASEB J. 2012 Jan;26(1):73-80 (Instituto del Cáncer de Shangai).
RAbDMvlll - Gupta P., et al BMC Biotechnol. 2010 Oct 7; 10:72 (Centro Médico de la Universidad de Stanford).
mAb Ua30 - Ohman L., et al Tumour Biol. 2002 Mar-Apr;23(2):61-9 (Universidad de Uppsala).
Han DG., et al Nan Fang Yi Ke Da Xue Bao. 2010 Jan;30(1):25-9 (Universidad de Xi'an Jiaotong).
(46) CD33 (Molécula CD33)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. M_23197
Versión de Genbank No. NM_23197.1 GI: 180097
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:47 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAA51948
Versión de Genbank No. AAA51948.1 GI: 188098
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:47 AM
Referencias cruzadas
Simmons D., et al J. Immunol. 141 (8), 2797-2800 (1988)
Otra información
Símbolo Oficial: CD33
Otros Pseudónimos: SIGLEC-3, SIGLEC3, p67
Otras Designaciones: antígeno CD33 (gp67); gp67; antígeno de superficie CD33 de células mieloides; lectina 3 similar a Ig de unión al ácido siálico; lectina similar a Ig de unión al ácido siálico
ANTICUERPOS
H195 (Lintuzumab) - Raza A., et al Leuk Lymphoma. 2009 Aug;50(8):1336-44; US6,759,045 (Seattle Genetics/Immunomedics)
mAb OKT9: Sutherland, D.R. et al. Proc Natl Acad Sci USA 78(7): 4515-4519 1981, Schneider.C., et al J Biol Chem 257, 8516-8522 (1982)
mAb E6: Hoogenboom, H.R., et al J Immunol 144, 3211-3217 (1990)
US6.590.088 (Human Genome Sciences)
Por ejemplo, Se C ID NOs: 1 y 2 y no. de acceso de ATCC 97521
US7.557.189 (Immunogen)
Por ejemplo, un anticuerpo o fragmento del mismo que comprende una región variable de cadena pesada que comprende tres CDRs que tienen las secuencias de aminoácidos de SEC ID NOs: 1-3 y una región variable de cadena ligera que comprende tres CDRs que tienen las secuencias de aminoácidos de SEC ID NOs: 4-6.
(47) CD19 (Molécula CD19)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_001178098
Versión de Genbank No. NM_001178098.1 GI:296010920
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de septiembre de 2012 12:43 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_001171569
Versión de Genbank No. NP_001171569.1 GI:296010921
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de septiembre de 2012 12:43 AM
Referencias cruzadas
Tedder TF., et al J. Immunol. 143 (2): 712-7 (1989)
Otra información
Símbolo Oficial: CD19
Otros Pseudónimos: B4, CVID3
Otras Designaciones: antígeno CD19 de linfocitos B; antígeno de superficie B4 de linfocitos B; antígeno de superficie Leu-12 de células T; antígeno CD19 de diferenciación
ANTICUERPOS
Immunogen: HuB4 - Al-Katib AM., et al Clin Cáncer Res. 2009 Jun 15;15(12):4038-45.
4G7: Kügler M., et al Protein Eng Des Sel. 2009 Mar;22(3):135-47
Por ejemplo, las secuencias en la Fig. 3 de Knappik, A. et al J Mol Biol 2000 Feb;296(1):57-86
AstraZeneca/Medlmmune: MEDI-551 - Herbst R., et al J Pharmacol Exp Ther. 2010 Oct;335(1):213-22
Glenmark Pharmaceuticals: GBR-401 - Hou S., et al Mol Cancer Ther November 2011 (Congreso Resumen Suplemento) C164
US7.109.304 (Immunomedics)
Por ejemplo, un anticuerpo que comprende la secuencia de hA19Vk (SEC ID NO: 7) y la secuencia de hA19VH (SEC ID NO: 10)
US7.902.338 (Immunomedics)
Por ejemplo, un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo que comprende las secuencias de CDR de la región determinante de la complementariedad de cadena ligera CDR1 de SEC ID NO: 16 (KASQSVDYDGDSYLN); CDR2 de SEC ID NO: 17 (DASNLVS); y CDR3 de SEC ID NO: 18 (QQSTEDPWT) y las secuencias de CDR de cadena pesada CDR1 de SEC ID No : 19 (SYWMN); CDR2 de SEC ID n O: 20 (QIWPGDGDTNYNGKFKG) y CDR3 de SEC ID NO: 21 (RETTTVGRYYYAMDY) y también comprende secuencias de la región estructural (FR) y región constante de anticuerpo humano con uno o más residuos de aminoácidos de la región estructural sustituidos desde las secuencias de la región estructural correspondientes del anticuerpo murino parental, y en donde dichos residuos de FR sustituidos comprenden la sustitución de serina por fenilalanina en el residuo de Kabat 91 de la región variable de cadena pesada.
Medarex: MDX-1342 - Cardarelli PM., et al Cancer Immunol Immunother. 2010 Feb;59(2):257-65.
MorphoSys/Xencor: MOR-208/XmAb-5574 -Zalevsky J., et al Blood. 2009 Apr 16;113(16):3735-43
US7.968.687 (Seattle Genetics)
Un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno que comprende un dominio variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 9 y un dominio variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 24.
4G7 chim - Lang P., et al Blood. 2004 May 15;103(10):3982-5 (Universidad de Tübingen)
Por ejemplo, la Fig. 6 y la SEC ID NO: 80 de US20120082664
Escuela de Medicina de la Universidad de Zhejiang: 2E8 - Zhang J., et al J Drug Target. 2010 Nov;18(9):675-8
(48) IL2RA (Receptor de interleucina 2, alfa); Secuencia de Referencia de NCBI: NM_000417.2);
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_000417
Versión de Genbank No. NM_000417.2 GI:269973860
Fecha de actualización del registro de GenBank: 9 de septiembre de 201204:59 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_000408
Versión de Genbank No. NP_000408.1 GI:4557667
Fecha de actualización del registro de GenBank: 9 de septiembre de 2012 04:59 PM
Referencias cruzadas
Kuziel W.A., et al J. Invest. Dermatol. 94 (SUPL 6), 27S-32S (1990)
Otra información
Símbolo Oficial: IL2RA
Otros Pseudónimos: RP11-536K7.1, CD25, IDDM10, IL2R, TCGFR
Otras Designaciones: subunidad alfa del receptor de FIL-2; IL-2-RA; subunidad alfa de IL-2R; IL2-RA; antígeno TAC; subunidad alfa del receptor de interleucina-2; p55
ANTICUERPOS
US6.383.487 (Novartis/UCL: Baxilisimab [Simulect])
US6.521.230 (Novartis/UCL: Baxilisimab [Simulect])
Por ejemplo, un anticuerpo que tiene un sitio de unión a antígeno comprende por lo menos un dominio que comprende CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos en SEC ID NO: 7, CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos en SEC ID NO: 8, y CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos en SEC ID NO: 9; o dichas CDR1, CDR2 y CDR3 tomadas en secuencia como un todo comprenden una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 90% idéntica a SEC ID NOs: 7, 8 y 9 tomadas en secuencia como un todo.
Daclizumab - Rech AJ., et al Ann N Y Acad Sci. 2009 Sep;1174:99-106 (Roche)
(49) AXL (tirosina cinasa del receptor de AXL)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. M76125
Versión de Genbank No. M76125.1 GI:292869
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:53 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAA61243
Versión de Genbank No. AAA61243.1 GI:29870
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:53 AM
Referencias cruzadas
O'Bryan J.P., et al Mol. Cell. Biol. 11 (10), 5016-5031 (1991); Bergsagel P.L., et al J. Immunol. 148 (2), 590-596(1992) Otra información
Símbolo Oficial: AXL
Otros Pseudónimos: JTK11, UFO
Otras Designaciones: oncogén AXL; secuencia/gen transformante de AXL; oncogén AXL; receptor UFO de proteína tirosina-cinasa
ANTICUERPOS YW327.6S2 - Ye X., et al Oncogene. 2010 Sep 23;29(38):5254-64. (Genentech)
BergenBio:BGB324(http://www.bergenbio.com/BGB324)
(50) CD30 - TNFRSF8 (Superfamilia de receptores del factor de necrosis tumoral, miembro 8)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. M83554
Versión de Genbank No. M83554.1 GI: 180095
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:53 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAA51947
Versión de Genbank No. AAA51947.1 GI: 180096
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:53 AM
Referencias cruzadas
Durkop H., et al Cell 68 (3), 421-427 (1992)
Otra información
Símbolo Oficial: TNFRSF8
Otros Pseudónimos: CD30, D1S166E, Ki-1
Otras Designaciones: receptor de CD30L; antígeno Ki-1; receptor de CD30 de citocina; antígeno CD30 de activación de linfocitos; superfamilia de receptores del factor de necrosis tumoral, miembro 8
(51) BCMA (Antígeno de maduración de células B) - TNFRSF17 (Superfamilia del receptor de factor de necrosis tumoral, miembro 17)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. Z29574
Versión de Genbank No. Z29574.1 GI: 471244
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:40 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. CAA82690
Versión de Genbank No. CAA82690.1 GI:471245
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:40 AM
Referencias cruzadas
Laabi Y. et al Nucleic Acids Res. 22 (7), 1147-1154 (1994)
Otra información
Símbolo Oficial: TNFRSF17
Otros Pseudónimos: BCM, BCMA, CD269
Otras Designaciones: antígeno de maduración de células B; factor de maduración de células B; proteína de maduración de células B; superfamilia del receptor del factor de necrosis tumoral, miembro 17
(52) Ags de CT - CTA (Antígenos testiculares de cáncer)
Referencias cruzadas
Fratta E., et al Mol Oncol. 2011 Apr;5(2):164-82; Lim SH., et al Am J Blood Res. 2012;2(1):29-35.
(53) CD174 (Lewis Y) - FUT3 (fucosiltransferasa 3 (galactósido 3(4)-L-fucosiltransferasa, grupo sanguíneo de Lewis) Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM000149
Versión de Genbank No. NM000149.3 GI:148277008
Fecha de actualización del registro de GenBank: 26 de junio de 2012 04:49 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_000140
Versión de Genbank No. NP_000140.1 GI:4503809
Fecha de actualización del registro de GenBank: 26 de junio de 2012 04:49 PM
Referencias cruzadas
Kukowska-Latallo, J.F., et al Genes Dev. 4 (8), 1288-1303 (1990)
Otra información
Símbolo Oficial: FUT3
Otros Pseudónimos: CD174, FT3B, FucT-III, LE, Les
Otras Designaciones: FT de Lewis; alfa-(1,3/1,4)-fucosiltransferasa; grupo sanguíneo Lewis alfa-4-fucosiltransferasa; fucosiltransferasa III; galactósido 3(4)-L-fucosiltransferasa
(54) CLEC14A (familia 14 del dominio de lectina tipo C, miembro A; Acceso de Genbank No. NM175060) Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM175060
Versión de Genbank No. NM175060.2 GI:371123930
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de abril de 2012 03:34 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_778230
Versión de Genbank No. NP_778230.1 GI:28269707
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de abril de 2012 03:34 PM
Otra información
Símbolo Oficial: CLEC14A
Otros Pseudónimos: UNQ236/PR0269, C14orf27, CEG1, EGFR-5
Otras Designaciones: familia 14 del dominio de lectina tipo C, miembro A; proteína que contiene dominio similar a CIECT y EGF; receptor 5 del factor de crecimiento epidérmico
(55) GRP78 - HSPA5 (proteína 5 de 70 kDa de choque térmico (proteína regulada por glucosa, 78 kDa) Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM005347
Versión de Genbank No. NM005347.4 GI:305855105
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 2012 01:42 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_005338
Versión de Genbank No. NP_005338.1 GI:16507237
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 2012 01:42 PM
Referencias cruzadas
Ting J., et al DNA 7 (4), 275-286 (1988)
Otra información
Símbolo Oficial: HSPA5
Otros Pseudónimos: BIP, GRP78, MIF2
Otras Designaciones: proteína de 78 kDa regulada por glucosa; proteína de unión grp78 al Ca(2+) del lumen del retículo endoplásmico; proteína de unión a la cadena pesada de la inmunoglobulina
(56) CD70 (Molécula CD70) L08096
Nucleótido
Acceso de Genbank No. L08096
Versión de Genbank No. L08096.1 GI:307127
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2012 08:54 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAA36175
Versión de Genbank No. AAA36175.1 GI:307128
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2012 08:54 AM
Referencias cruzadas
Goodwin R.G., et al Cell 73 (3), 447-456 (1993)
Otra información
Símbolo Oficial: CD70
Otros Pseudónimos: CD27L, CD27LG, TNFSF7
Otras designaciones: ligando CD27; CD27-L; antígeno CD70; antígeno Ki-24; antígeno de superficie CD70; superfamilia del factor de necrosis tumoral (ligando), miembro 7; superfamilia del ligando del factor de necrosis tumoral, miembro 7
ANTICUERPOS
MDX-1411 contra CD70 (Medarex)
h1F6 (Oflazoglu, E., et al, Clin Cáncer Res. 2008 Oct 1;14(19):6171-80; Seattle Genetics)
Por ejemplo, véase US20060083736 SEC ID NOs: 1,2, 11 y 12 y la Fig. 1.
(57) Antígenos específicos de células madre. Por ejemplo:
• 5T4 (véase la entrada (63) más adelante)
• CD25 (véase la entrada (48) anteriormente)
• CD32
° Polipéptido
■ Acceso de Genbank No. ABK42161
■ Versión de Genbank No. ABK42161.1 GI:117616286
■ Fecha de actualización del registro de GenBank: 25 de julio 5 de 2007 03:00 PM
• LGR5/GPR49
° Nucleótido
■ Acceso de Genbank No. NM_003667
■ Versión de Genbank No. NM_003667.2 GI:24475886
■ Fecha de actualización del registro de GenBank: 22 de julio de 2012 03:38 PM
° Polipéptido
■ Acceso de Genbank No. NP_003658
■ Versión de Genbank No. NP_003658.1 GI:4504379
■ Fecha de actualización del registro de GenBank: 22 de julio de 2012 03:38 PM
• Prominina/CD133
° Nucleótido
■ Acceso de Genbank No. NM_006017
■ Versión de Genbank No. NM_006017.2 GI:224994187
■ Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 2012 01:47 PM
° Polipéptido
■ Acceso de Genbank No. NP_006008
■ Versión de Genbank No. NP_006008.1 GI:5174387
■ Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 2012 01:47 PM
(58) ASG-5
Referencias cruzadas
(Smith L.M., et al AACR 2010 Annual Meeting (resumen #2590); Gudas J.M., et al AACR 2010 Annual Meeting (resumen #4393)
ANTICUERPOS
Anticuerpo anti-AGS-5: M6.131 (Smith, L.M., et al AACR 2010 Annual Meeting (resumen #2590)
(59) ENPP3 (Ectonucleótido pirofosfatasa/fosfodiesterasa 3)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. AF005632
Versión de Genbank No. AF005632.2 GI:4432589
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de marzo de 2010 09:41 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAC51813
Versión de Genbank No. AAC51813.1 GI:2465540
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de marzo de 2010 09:41 PM
Referencias cruzadas
Jin-Hua P., et al Genomics 45 (2), 412-415 (1997)
Otra información
Símbolo Oficial: ENPP3
Otros Pseudónimos: RP5-988G15.3, B10, CD203c, NPP3, PD-IBETA, PDNP3
Otras Designaciones: E-NPP 3; dJ1005H11.3 (fosfodiesterasa I/nucleótido pirofosfatasa 3); dJ914N13.3 (fosfodiesterasa I/nucleótido pirofosfatasa 3); miembro 3 de la familia de ectonucleótido pirofosfatasa/fosfodiesterasa; gp130RB13-6; fosfodiesterasa I beta; fosfodiesterasa I/nucleótido pirofosfatasa 3; fosfodiesterasa-I beta
(60) PRR4 (4 rica en prolina (lacrimal))
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_007244
Versión de Genbank No. NM_007244.2 GI:154448885
Fecha de actualización del registro de GenBank: 28 de junio de 2012 12:39 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_009175
Versión de Genbank No. NP_009175.2 GI:154448886
Fecha de actualización del registro de GenBank: 28 de junio de 2012 12:39 PM
Referencias cruzadas
Dickinson D.P., et al Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 36 (10), 2020-2031 (1995)
Otra información
Símbolo Oficial: PRR4
Otros Pseudónimos: LPRP, PROL4
Otras Designaciones: proteína rica en prolina lacrimal; proteína 4 rica en prolina asociada a carcinoma nasofaríngeo; polipéptido 4 rico en prolina; proteína 4 rica en prolina
(61) GCC - GUCY2C (guanilato ciclasa 2C (receptor de enterotoxina estable al calor)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_004963
Versión de Genbank No. NM_004963.3 GI:222080082
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de septiembre de 201201:50 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_004954
Versión de Genbank No. NP_004954.2 GI:222080083
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de septiembre de 2012 01:50 PM
Referencias cruzadas
De Sauvage F.J., et al J. Biol. Chem. 266 (27), 17912-17918 (1991); Singh S., et al Biochem. Biophys. Res. Commun.
179 (3), 1455-1463 (1991)
Otra información
Símbolo Oficial: GUCY2C
Otros Pseudónimos: DIAR6, GUC2C, MUCIL, STAR
Otras Designaciones: GC-C; receptor de STA; guanilil ciclasa C; hSTAR; receptor de enterotoxina estable al calor; guanilato ciclasa intestinal
(62) Liv-1 - SLC39A6 (familia 39 de transportadores y solutos (transportador de zinc), miembro 6)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. U41060
Versión de Genbank No. U41060.2 GI:12711792
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de noviembre de 2009 04:35 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAA96258
Versión de Genbank No. AAA96258.2 GI:12711793
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de noviembre de 2009 04:35 PM
Referencias cruzadas
Taylor KM., et al Biochim Biophys Acta. 2003 Apr 1;1611(1-2):16-30
Otra información
Símbolo Oficial: SLC39A6
Otros Pseudónimos: LIV-1
Otras Designaciones: proteína LIV-1, regulada por estrógeno; ZIP-6; proteína LIV-1 regulada por estrógeno; familia 39 de transportadores y solutos (transportador de ion metálico), miembro 6; familia de transportadores y solutos 39 miembro 6; transportador de zinc ZIP6; proteína 6 similar a zrt- e Irt
(63) 5T4, Glicoproteína de trofoblastos, TPBG - TPBG (glicoproteína de trofoblastos)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. AJ012159
Versión de Genbank No. AJ012159.1 GI:3805946
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de febrero de 2011 10:27 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. CAA09930
Versión de Genbank No. CAA09930.1 GI:3805947
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de febrero de 2011 10:27 AM
Referencias cruzadas
King K.W., et al Biochim. Biophys. Acta 1445 (3), 257-270 (1999)
Otra información
• Símbolo Oficial: TPBG
• Otros Pseudónimos: 5T4, 5T4AG, M6P1
• Otras Designaciones: antígeno oncofetal 5T4; glicoproteína de trofoblastos oncofetales 5T4; glicoproteína de oncotrofoblastos 5T4
• Ver WO2015/155345
(64) CD56 - NCMA1 (Molécula 1 de adhesión a células neurales)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_000615
Versión de Genbank No. NM_000615.6 GI:336285433
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de septiembre de 2012 02:32 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_000606
Versión de Genbank No. NP_000606.3 GI:94420689
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de septiembre de 2012 02:32 PM
Referencias cruzadas
Dickson, G., et al, Cell 50 (7), 1119-1130 (1987)
Otra información
Símbolo Oficial: NCAM1
Otros Pseudónimos: CD56, MSK39, NCAM
Otras Designaciones: antígeno reconocido por el anticuerpo monoclonal 5.1H11; molécula de adhesión a células neurales, NCAM
ANTICUERPOS
Immunogen: HuN901 (Smith SV., et al Curr Opin Mol Ther. 2005 Aug;7(4):394-401)
Por ejemplo, véase humanizado de anticuerpo N901 murino. Véase la Fig. 1b y 1e de Roguska, M.A., et al Proc Natl Acad Sci USA Feb 1994;91:969-973.
(65) CanAg (Antígeno asociado a tumor CA242)
Referencias cruzadas
Haglund C., et al Br J Cancer 60:845-851, 1989; Baeckstrom D., et al J Biol Chem 266:21537-21547, 1991 ANTICUERPOS
huC242 (Tolcher AW et al., J Clin Oncol. 2003 Jan 15;21(2):211-22; Immunogen)
Por ejemplo, véase US20080138898A1 SEC ID NO: 1 y 2
(66) FOLR1 (Receptor 1 de Folato)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. J05013
Versión de Genbank No. J05013.1 GI:182417
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:47 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAA35823
Versión de Genbank No. AAA35823.1 GI:182418
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:47 AM
Referencias cruzadas
Elwood P.C., et al J. Biol. Chem. 264 (25), 14893-14901 (1989)
Otra información
Símbolo Oficial: FOLR1
Otros Pseudónimos: FBP, FOLR
Otras Designaciones: FR-alfa; células KB FBP; proteína de unión a folato adulta; proteína de unión a folato; receptor alfa de folato; receptor de folato, adulto; antígeno MOv18 asociado a tumor de ovario
ANTICUERPOS
M9346A - Whiteman KR., et al Cáncer Res April 15, 2012; 72 (Suplemento 8): 4628 (Immunogen)
(67) GPNMB (Glicoproteína (transmembrana) nmb)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. X76534
Versión de Genbank No. X76534.1 GI:666042
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:10 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. CAA54044
Versión de Genbank No. CAA54044.1 GI:666043
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:10 AM
Referencias cruzadas
Weterman M.A., et al Int. J. Cancer60 (1), 73-81 (1995)
Otra información
Símbolo Oficial: GPNMB
Otros Pseudónimos: UNQ1725/PRO9925, HGFIN, NMB
Otras Designaciones: glicoproteína NMB; proteína similar a glicoproteína nmb; osteoactivina; glicoproteína transmembrana HGFIN; glicoproteína transmembrana NMB
ANTICUERPOS
Celldex Therapeutics: CR011 (Tse KF., et al Clin Cancer Res. 2006 Feb 15;12(4):1373-82)
Por ejemplo, véase EP1827492B1 SEC ID NO: 22, 24, 26, 31, 33 y 35
(68) TIM-1 - HAVCR1 (Receptor 1 celular del virus de la hepatitis A)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. AF043724
Versión de Genbank No. AF043724.1 GI:2827453
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de marzo de 2010 06:24 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAC39862
Versión de Genbank No. AAC39862.1 GI:2827454
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de marzo de 2010 06:24 PM
Referencias cruzadas
Feigelstock D., et al J. Virol. 72 (8), 6621-6628 (1998)
Otra información
Símbolo Oficial: HAVCR1
Otros Pseudónimos: HAVCR, HAVCR-1, KIM-1, KIM1, TIM, TIM-1, TIM1, TIMD-1, TIMD1
Otras Designaciones: proteína 1 del dominio de inmunoglobulina y dominio de mucina de células T; proteína 1 de la membrana de células T; molécula 1 de lesión renal
(69) RG-1/Mindina diana de tumor de la próstata - Mindina/RG-1
Referencias cruzadas
Parry R., et al Cáncer Res. 2005 Sep 15;65(18):8397-405
(70) B7-H4 - VTCN1 (Inhibidor 1 de la activación de células T que contienen el dominio del conjunto V)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. BX648021
Versión de Genbank No. BX648021.1 GI:34367180
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 08:40 AM
Referencias cruzadas
Sica GL., et al Immunity. 2003 Jun;18(6):849-61
Otra información
Símbolo Oficial: VTCN1
Otros Pseudónimos: RP11-229A19.4, B7-H4, B7H4, B7S1, B7X, B7h.5, PRO1291, VCTN1
Otras Designaciones: miembro de la familia B7, H4; miembro 1 de la superfamilia B7; molécula coestimulante B7x de células T; molécula coestimulante B7x de células-T; inhibidor 1 de la activación de células T que contienen el dominio del conjunto V; proteína B7-H4 inmunocoestimulante
(71) PTK7 (Proteína tirosina cinasa 7 PTK7)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. AF447176
Versión de Genbank No. AF447176.1 GI:17432420
Fecha de actualización del registro de GenBank: 28 de noviembre de 2008 01:51 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAL39062
Versión de Genbank No. AAL39062.1 GI: 17432421
Fecha de actualización del registro de GenBank: 28 de noviembre de 200801:51 PM
Referencias cruzadas
Park S.K., et al J. Biochem. 119 (2), 235-239 (1996)
Otra información
Símbolo Oficial: PTK7
Otros Pseudónimos: CCK-4, CCK4
Otras Designaciones: cinasa 4 de carcinoma de colon; proteína tirosina-cinasa 7 inactiva; receptor 7 de pseudotirosina cinasa; 7 similar a la proteína tirosina-cinasa
(72) CD37 (Molécula CD37)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_001040031
Versión de Genbank No. NM_001040031.1 GI:91807109
Fecha de actualización del registro de GenBank: 29 de julio de 2012 02:08 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_001035120
Versión de Genbank No. NP_001035120.1 GI:91807110
Fecha de actualización del registro de GenBank: 29 de julio de 2012 02:08 PM
Referencias cruzadas
Schwartz-Albiez R., et al J. Immunol. 140 (3), 905-914 (1988)
Otra información
Símbolo Oficial: CD37
Otros Pseudónimos: GP52-40, TSPAN26
Otras Designaciones: antígeno CD37; antígeno 37 de diferenciación celular; antígeno CD37 de leucocitos; antígeno CD37 de superficie de leucocitos; tetraspanina-26; tspan-26
ANTICUERPOS
Boehringer Ingelheim: mAb 37.1 (Heider KH., et al Blood. 2011 Oct 13;118(15):4159-68)
Trubion: CD37-SMIP (G28-1 scFv-Ig) (Zhao X. et al Blood. 2007;110: 2569-2577)
Por ejemplo, véase US20110171208A1 SEC ID NO: 253
Immunogen: K7153A (Deckert J. et al Cancer Res April 15, 2012; 72 (Suplemento 8): 4625)
(73) CD138 - SDC1 (sindecano 1)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. AJ551176
Versión de Genbank No. AJ551176.1 GI:29243141
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de febrero de 2011 12:09 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. CAD80245
Versión de Genbank No. CAD80245.1 GI:29243142
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de febrero de 2011 12:09 PM
Referencias cruzadas
O'Connell FP., et al Am J Clin Pathol. 2004 Feb;121 (2):254-63
Otra información
Símbolo Oficial: SDC1
Otros Pseudónimos: CD138, SDC, SYND1, sindecano
Otras Designaciones: antígeno CD138; receptor del factor de crecimiento de fibroblastos de proteoglicanos de sulfato de heparano; proteoglicano de sindecano 1; sindecano-1
ANTICUERPOS
Biotest: MAb quimerizado (nBT062) -(Jagannath S., et al Poster ASH #3060, 2010; Solicitud de Patente WIPO WO/2010/128087)
Por ejemplo, véase US20090232810 SEC ID NO: 1 y 2
Immunogen: B-B4 (Tassone P., et al Blood 104_3688-3696)
Por ejemplo, véase US20090175863A1 SEC ID NO: 1 y 2
(74) CD74 (Molécula CD74, complejo mayor de histocompatibilidad, cadena invariante de clase II)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_004355
Versión de Genbank No. NM_004355.1 GI:343403784
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de septiembre de 2012 02:30 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_004346
Versión de Genbank No. NP_004346.1 GI:10835071
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de septiembre de 201202:30 PM
Referencias cruzadas
Kudo, J. et al Nucleic Acids Res. 13 (24), 8827-8841 (1985)
Otra información
Símbolo Oficial: CD74
Otros Pseudónimos: DHLAG, HLADG, II, Ia-GAMMA
Otras Designaciones: antígeno CD74 (polipéptido invariante del complejo mayor de histocompatibilidad, asociado al antígeno de clase II); cadena gamma del antígeno de histocompatibilidad de clase II de HLA; cadena invariante asociada a antígenos de HLA-DR; HLA-DR-gamma; cadena invariante asociada a Ia; cadena gamma de HLA-DR del MHC; cadena gamma de antígenos de clase II; p33
ANTICUERPOS
Immunomedics: hLL1 (Milatuzumab,) - Berkova Z. et al Expert Opin Investig Drugs. 2010 Jan;19(1):141-9) Por ejemplo, véase US20040115193 SEC ID NOs: 19, 20, 21,22, 23 y 24
Genmab: HuMax-CD74 (véase el sitio web)
(75) Claudinas - CLs (Claudinas)
Referencias cruzadas
Offner S., et al Cancer Immunol Immunother. 2005 May; 54(5):431-45, Suzuki H., et al Ann N Y Acad Sci. 2012 Jul;1258:65-70)
En humanos, se han descrito 24 miembros de la familia - véase la referencia bibliográfica.
(76) EGFR (Receptor del factor de crecimiento epidérmico)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_005228
Versión de Genbank No. NM_005228.3 GI:41927737
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 2012 01:47 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_005219
Versión de Genbank No. NP_005219.2 GI:29725609
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 2012 01:47 PM
Referencias cruzadas
Dhomen NS., et al Crit Rev Oncog. 2012;17(1):31-50
Otra información
Símbolo Oficial: EGFR
Otros Pseudónimos: ERBB, ERBB1, HER1, PIG61, mENA
Otras Designaciones: homólogo del oncogén viral de la leucemia eritroblástica aviar (v-erb-b); proteína 40 inhibidora del crecimiento celular; proteína 61 inductora de la proliferación celular; proto-oncogén c-ErbB-1; proteína tirosinacinasa de receptor erbB-1
ANTICUERPOS BMS: Cetuximab (Erbitux) - Broadbridge VT., et al Expert Rev Anticancer Ther. 2012 May;12(5):555-65.
Por ejemplo, véase US6217866 - depósito ATTC No. 9764.
Amgen: Panitumumab (Vectibix) - Argiles G., et al Future Oncol. 2012 Apr;8(4):373-89
Por ejemplo, véase US6235883 SEC ID NOs: 23-38.
Genmab: Zalutumumab - Rivera F., et al Expert Opin Biol Ther. 2009 May;9(5):667-74.
YM Biosciences: Nimotuzumab - Ramakrishnan MS., et al MAbs. 2009 Jan-Feb;1(1):41-8.
Por ejemplo, véase US5891996 SEC ID NOs: 27-34.
(77) Her3 (ErbB3) - ERBB3 (homólogo 3 del oncogén viral de la leucemia eritroblástica v-erb-b2 (aviar)) Nucleótido
Acceso de Genbank No. M34309
Versión de Genbank No. M34309.1 GI:183990
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:47 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAA35979
Versión de Genbank No. AAA35979.1 GI:306841
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:47 PM
Referencias cruzadas
Plowman, G. D., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87 (13), 4905-4909 (1990)
Otra información
Símbolo Oficial: ERBB3
Otros Pseudónimos: ErbB-3, HER3, LCCS2, MDA-BF-1, c-erbB-3, c-erbB3, erbB3-S, p180-ErbB3, p45-sErbB3, p85-sErbB3
Otras Designaciones: proteína c-ErbB-3 similar a proto-oncogén; proteína tirosina-cinasa erbB-3 de receptor; receptor HER3 de la superficie celular tipo tirosina cinasa
ANTICUERPOS
Merimack Pharma: MM-121 (Schoeberl B., et al Cancer Res. 2010 Mar 15;70(6):2485-2494)
Por ejemplo, véase US2011028129 SEC ID NOs: 1,2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8.
(78) RON - MST1R (Receptor 1 estimulante de macrófagos (tirosina cinasa relacionada con c-met)) Nucleótido
Acceso de Genbank No. X70040
Versión de Genbank No. X70040.1 GI:36109
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:17 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. CCA49634
Versión de Genbank No. CCA49634.1 GI:36110
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:17 PM
Referencias cruzadas
Ronsin C., et al Oncogene 8 (5), 1195-1202 (1993)
Otra información
Símbolo Oficial: MST1R
Otros Pseudónimos: CD136, CDw136, PTK8, RON
Otras Designaciones: receptor de MSP; variante de MST1R RON30; variante de MST1R RON62; proteína tirosina cinasa 8 PTK8; variante de RON E2E3; tirosina cinasa relacionada con c-met; receptor de la proteína estimulante de macrófagos; p185-Ron; variante 1 de RON soluble; variante 2 de RON soluble; variante 3 de RON soluble; variante 4 de RON soluble
(79) EPHA2 (Receptor A2 de EPH)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. BC037166
Versión de Genbank No. BC037166.2 GI:33879863
Fecha de actualización del registro de GenBank: 6 de marzo de 201201:59 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAH37166
Versión de Genbank No. AAH37166.1 GI:22713539
Fecha de actualización del registro de GenBank: 6 de marzo de 2012 01:59 PM
Referencias cruzadas
Strausberg R.L., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (26), 16899-16903 (2002)
Otra información
Símbolo Oficial: EPHA2
Otros Pseudónimos: ARCC2, CTPA, CTPP1, ECK
Otras Designaciones: receptor 2 de efrina tipo A; proteína tirosina cinasa de receptor de células epiteliales; variante 1 de EPHA2 soluble; receptor ECK de la proteína tirosina-cinasa
ANTICUERPOS
Medimmune: 1C1 (Lee JW., et al Clin Cáncer Res. 2010 May 1;16(9):2562-2570)
Por ejemplo, véase US20090304721A1 Fig. 7 y 8.
(80) CD20 - MS4A1 (4 dominios que atraviesan la membrana, subfamilia A, miembro 1)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. M27394
Versión de Genbank No. M27394.1 GI:179307
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de noviembre de 2009 11:16 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAA35581
Versión de Genbank No. AAA35581.1 GI:179308
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de noviembre de 2009 11:16 AM
Referencias cruzadas
Tedder T.F., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1), 208-212 (1988)
Otra información
Símbolo Oficial: MS4A1
Otros Pseudónimos: B1, Bp35, CD20, CVID5, LEU-16, MS4A2, S7
Otras Designaciones: antígeno CD20 de linfocitos B; antígeno B1 de la superficie celular de linfocitos B; antígeno CD20; receptor de CD20; antígeno Leu-16 de superficie de leucocitos
ANTICUERPOS
Genentech/Roche: Rituximab - Abdulla NE., et al BioDrugs. 2012 Apr 1;26(2):71-82.
Por ejemplo, véase US5736137, depósito ATCC No. HB-69119.
GSK/Genmab: Ofatumumab - Nightingale G., et al Ann Pharmacother. 2011 Oct;45(10):1248-55.
Por ejemplo, véase US20090169550A1 SEC ID NOs: 2, 4 y 5.
Immunomedics: Veltuzumab - Goldenberg DM., et al Leuk Lymphoma. 2010 May;51(5):747-55.
Por ejemplo, véase US7919273B2 SEC ID NOs: 1,2, 3, 4, 5 y 6.
(81) Tenascina C - TNC (Tenascina C)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_002160
Versión de Genbank No. NM_002160.3 GI:340745336
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de septiembre de 201202:33 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_002151
Versión de Genbank No. NP_002151.2 GI:153946395
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de septiembre de 2012 02:33 PM
Referencias cruzadas
Nies D.E., et al J. Biol. Chem. 266 (5), 2818-2823 (1991); Siri A., et al Nucleic Acids Res. 19 (3), 525-531 (1991) Otra información
Símbolo Oficial: TNC
Otros Pseudónimos: 150-225, GMEM, GP, HXB, JI, TN, TN-C
Otras Designaciones: GP 150-225; citotactina; antígeno de la matriz extracelular asociado a glioma; hexabraquiona (tenascina); antígeno miotendinoso; neuronectina; tenascina; isoforma 14/AD1/16 de tenascina-C ANTICUERPOS
Philogen: G11 (von Lukowicz T., et al J Nucí Med. 2007 Apr;48(4):582-7) y F16 (Pedretti M. et al Lung Cancer. 2009 Apr;64(1):28-33)
Por ejemplo, véase US7968685 SEC ID NOs: 29, 35, 45 y 47.
(82) FAP (Proteína de activación de fibroblastos, alfa)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. U09278
Versión de Genbank No. U09278.1 GI:1888315
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 09:22 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAB49652
Versión de Genbank No. AAB49652.1 GI:1888316
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 09:22 AM
Referencias cruzadas
Scanlan, M.J., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91 (12), 5657-5661 (1994)
Otra información
Símbolo Oficial: FAP
Otros Pseudónimos: DPPIV, FAPA
Otras Designaciones: gelatinasa unida a membrana de melanoma de 170 kDa; serina proteasa de membrana integral; seprasa
(83) DKK-1 (Homólogo de Dickkopf 1 (Xenopus laevis))
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_012242
Versión de Genbank No. NM_012242.2 GI:61676924
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 2012 01:48 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_036374
Versión de Genbank No. NP_036374.1 GI:7110719
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 2012 01:48 PM
Referencias cruzadas
Fedi P. et al J. Biol. Chem. 274 (27), 19465-19472 (1999)
Otra información
Símbolo Oficial: DKK1
Otros Pseudónimos: UNQ492/PRO1008, DKK-1, SK
Otras Designaciones: proteína 1 relacionada con dickkopf; similar a dickkopf 1; proteína 1 similar a dickkopf; proteína 1 relacionada con dickkopf; hDkk-1
ANTICUERPOS
Novartis: BHQ880 (Fulciniti M., et al Blood. 2009 Jul 9;114(2):371-379)
Por ejemplo, véase US20120052070A1 SEC ID NOs: 100 y 108.
(84) CD52 (Molécula CD52)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_001803
Versión de Genbank No. NM_001803.2 GI:68342029
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 2012 01:48 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_001794
Versión de Genbank No. NP_001794.2 GI:68342030
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 2012 01:48 PM
Referencias cruzadas
Xia M.Q., et al Eur. J. Immunol. 21 (7), 1677-1684 (1991)
Otra información
Símbolo Oficial: CD52
Otros Pseudónimos: CDW52
Otras Designaciones: antígeno CAMPATH-1; antígeno CD52 (antígeno CAMPATH-1); antígeno CDW52 (antígeno CAMPATH-1); antígeno 1 de la patología de cambridge; proteína E5 secretora epididimal; he5; proteína 5 específica de epididimis humana
ANTICUERPOS
Alemtuzumab (Campath) - Skoetz N., et al Cochrane Database Syst Rev. 2012 Feb 15;2:CD008078.
Por ejemplo, véase el acceso a DrugBank No. DB00087 (BIOD00109, BTD00109)
(85) CS1 - SLAMF7 (Miembro 7 de la familia de SLAM)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. NM_021181
Versión de Genbank No. NM_021181.3 GI:1993571
Fecha de actualización del registro de GenBank: 29 de junio de 2012 11:24 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. NP_067004
Versión de Genbank No. NP_067004.3 GI:19923572
Fecha de actualización del registro de GenBank: 29 de junio de 2012 11:24 AM
Referencias cruzadas
Boles K.S., et al Immunogenetics 52 (3-4), 302-307 (2001)
Otra información
Símbolo Oficial: SLAMF7
Otros Pseudónimos: UNQ576/PRO1138, 19A, CD319, CRACC, CS1
Otras Designaciones: proteína 19A24; subconjunto 1 de CD2; células citotóxicas activadoras del receptor similar a CD2; células citotóxicas activadoras del receptor similar a CD2; proteína FOAP-12 de la membrana; proteína similar a LY9 novedoso (antígeno 9 de linfocitos); proteína 19A
ANTICUERPOS BMS: elotuzumab/HuLuc63 (Benson DM., et al J Clin Oncol. 2012 Jun 1;30(16):2013-2015)
Por ejemplo, véase US20110206701 SEC ID NOs: 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 y 16.
(86) Endoglina - ENG (Endoglina)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. AF035753
Versión de Genbank No. AF035753.1 GI:3452260
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de marzo de 2010 06:36 PM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAC32802
Versión de Genbank No. AAC32802.1 GI:3452261
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de marzo de 2010 06:36 PM
Referencias cruzadas
Rius C., et al Blood 92 (12), 4677-4690 (1998)
Símbolo Oficial: ENG
Otra información
Otros Pseudónimos: RP11-228B15.2, CD105, END, HHT1, ORW, ORW1
Otras Designaciones: antígeno CD105
(87) Anexina A1-AN XA1 (Anexina A1)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. X05908
Versión de Genbank No. X05908.1 GI:34387
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:02 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. CCA29338
Versión de Genbank No. CCA29338.1 GI:34388
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:02 AM
Referencias cruzadas
Wallner B.P., et al Nature 320 (6057), 77-81 (1986)
Otra información
Símbolo Oficial: ANXA1
Otros Pseudónimos: RP11-71A24.1, ANX1, LPC1
Otras Designaciones: anexina I (lipocortina I); anexina-1; calpactina II; calpactina-2; cromobindina-9; lipocortina I; p35; proteína inhibidora de fosfolipasa A2
(88) V-CAM (CD106) - VCAM1 (Molécula 1 de adhesión a células vasculares)
Nucleótido
Acceso de Genbank No. M60335
Versión de Genbank No. M60335.1 GI:340193
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:56 AM
Polipéptido
Acceso de Genbank No. AAA61269
Versión de Genbank No. AAA61269.1 GI:340194
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:56 AM
Referencias cruzadas
Hession C., et al J. Biol. Chem. 266 (11), 6682-6685 (1991)
Otra información
Símbolo Oficial VCAM1
Otros Pseudónimos: CD106, INCAM-100
Otras Designaciones: antígeno CD106; proteína 1 de adhesión a células vasculares
Secuencias de Anticuerpos
Anti-Integrina ov¡36
RHAB6.2
QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGFAFTDSYMHWVRQAPGQGLEWMGWIDPENGDT
EYAPKFQGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCTRGTPTAVPNLRGDLQVLAQKVA
GPYPFDYWGQGTLVTVSS
RHCB6.2
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFIDSYMHVWRQAPGQRLEWMGWIDPENGDT
EYAPKFQGRVTITTDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGTPTAVPNLRGDLQVLAQKV
AGPYPFDYWGQGTLVTVSS
RHF
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNFIDSYMHWVRQAPGQRLEWMGWIDPENGD
TEYAPKFGGRVTFTTDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCNEGTPTGPYYFDYWGQGTLV
TVSS
RHFB6
--------
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNFIDSYMHWVRQAPGQRLEWMGWIDPENGD
TEYAPKFQGRVTFTTDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCNEGTPTAVPNLRGDLQVLAQK
VAGPYYFDYWGQGTLVTVSS
RHAYIQObP
QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGFAFTDSYMHVWRQAPGQGLEWMGWIDPENGDT
EYAPKFQGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCTRGTPTGPYPFDYWGQGTLVTV
SS
RKF
ENVLTQSPGTLSLSPGERATLSCSASSSVSYMHWFQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGIPDR
FSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCGQRSSYPLTFGGGTKVEIK
RKFL36L5Q
ENVLTQSPGTLSLSPGERATLSCSASSSVSYMHWLQGKPGQAPRLLIYLTSNLASGIPDR
FSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQRSSYPLTFGGGTKVEIK
RKC
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCSASSSVSYMHWFQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGIPDRF
SGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQRSSYPLTFGGGTKVEIK
Anti-CD33
CD33 Hum195 VH
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDYNMHWVRQAPGQGLEWIGYIYPYNGGT
GYNQKFKSKATITADESTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRPAMDYWGQGTLVTVSS
CD33 Hum195 VK
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASESVDNYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGS
GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQSKEVPWTFGQGTKVEIK
Anti-CD19
VH acondicionada superficialmente de CD19 B4
QVQLVQPGAEWKPGASVKLSCKTSGYTFTSNWMHVWKQRPGQGLEWIGEIDPSDSYT
NYNQNFKGKAKLTVDKSTSTAYMEVSSLRSDDTAWYCARGSNPYYYAMDYWGQGTSV
TVSS
VK acondicionada superficialmente de CD19 B4
EIVLTQSPAIMSASPGERVTMTCSASSGVNYMHWYQQKPGTSPRRWIYDTSKLASGVPA
RFSGSGSGTSYSLTISSMEPEDAATYYCHQRGSYTFGGGTKLEIK
Anti-Her2
Cadena de VH de Herceptina
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTR
YADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVT
vss
Cadena de VL de Herceptina
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPS
RFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK
Anti-CD25
VK de Simulect (también conocido como Basiliximab)
QIVSTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSRSYMQWYQQKPGTSPKRWIYDTSKLASGVPA
RFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCHQRSSYTFGGGTKLEIK
VH de Simulect
QLQQSGTVLARPGASVKMSCKASGYSFTRYWMHWIKQRPGQGLEWIGAIYPGNSDTSY
NQKFEGKAKLTAVTSASTAYMELSSLTHEDSAVYYCSRDYGYYFDFWGQGTTLTVSS
Anti-PSMA
VH '1 desinmunizado
EVQLVQSGPEVKKPGATVKISCKTSGYTFTEYTIHWVKQAPGKGLEWIGNINPNNGGTTY
NQKF EDKATLTVD KST DTAYM ELSSLRS E DTAVYYCAAGWN F DYWGQGTL LTVSS
VK '1 desinmunizado
DIQMTQSPSSLSTSVGDRVTLTCKASQDVGTAVDWYQQKPGPSPKLLIYWASTRHTGIPS
RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFADYYCQQYNSYPLTFGPGTKVDIK
VH1 '5 desinmunizado
EVKLVESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFTFSNYWMNWVRQAPGKGLEWVAEIRSQSNN
FATHYAESVKGRVTISRDDSKSIVYLQMNNLRAEDTGVYYCTRRWNNFWGQGTTVTVSS
VH2 '5 desinmunizado
EVKLVESGGGLVQPGGSLKLSCVASGFTFSNYWMNVWRQAPGKGLEWVAEIRSQSNNF
ATHYAESVKGRVTISRDDSKSIVYLQMNNLRAEDTAVYYCTRRWNNFWGQGTTVTVSS
VH3 '5 desinmunizado
EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCVASGFTFSNYWMNWVRQAPGKGLEWVAEIRSQSNNF
ATHYAESVKGRVTISRDDSKSIVYLQMNNLRAEDTAVYYCTRRWNNFWGQGTTVTVSS VH4 '5 desinmunizado EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCVASGFTFSNYWMNWVRQAPGKGLEWVAEIRSQSNNF ATHYAESVKGRFTISRDDSKSIVYLQMNNLRAEDTAVYYCTRRWNNFWGQGTTVTVSS
VK1 '5 desinmunizado
NIVMTQFPSSMSASVGDRVTITCKASENVGTYVSWYQQKPDQSPKMLIYGASNRFTGVP DRFTGSGSATDFTLTISSLQTEDLADYYCGQSYTFPYTFGQGTKLEMK
VK2 '5 desinmunizado
NIVMTQFPSSMSASVGDRVTITCKASENVGTYVSWYQQKPDQSPKMLIYGASNRFTGVP DRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDLADYYCGQSYTFPYTFGQGTKLEIK
VK3 '5 desinmunizado
NIQMTQFPSAMSASVGDRVTITCKASENVGTYVSWYQQKPDQSPKMLIYGASNRFTGVP DRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDLADYYCGGSYTFPYTFGQGTKLEIK
VK4 '5 desinmunizado
NIQMTQFPSAMSASVGDRVTITCKASENVGTYVSWYQQKPDQSPKMLIYGASNRFTGVP DRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDEADYYCGQSYTFPYTFGQGTKLEIK
VK DI '5 desinmunizado
NIVMTQFPKSMSASAGERMTLTCKASENVGTYVSWYQQKPTQSPKMLIYGASNRFTGVP DRFSGSGSGTDFILTISSVQAEDLVDYYCGQSYTFPYTFGGGTKLEMK
VH DI '5 desinmunizado
EVKILEESGGGLVQPGGSMKISCVASGFTFSNYWMNVWRQSPEKGLEVWAEIRSQSNNF ATHYAESVKGRVIISRDDSKSSVYLQMNSLRAEDTAVYYCTRRWNNFWGQGTTVTVSS RHA '5 humanizado
EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSNYWMNVWRQASGKGLEWVGEIRSQSNNF ATHYAESVKGRFTISRDDSKNTAYLQMNSLKTEDTAVYYCTRRWNNFWGQGTTVTVSS
RHB '5 humanizado EVKLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSNYWMNVWRQASGKGLEWVAEIRSQSNNF ATHYAESVKGRVIISRDDSKNTVYLQMNSLRTEDTAVYYCTRRWNNFWGQGTTVTVSS
RHC '5 humanizado EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSNYWMNVWRQASGKGLEWVAEIRSQSNNF ATHYAESVKGRVIISRDDSKNTVYLQMNSLRTEDTAVYYCTRRWNNFWGQGTTVTVSS RHD '5 humanizado
EVKLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSINYWMNWVRQASGKGLEWVGEIRSQSNNF
ATHYAESVKGRVIISRDDSKNTVYLQMNSLRTEDTAVYYCTRRWNNFWGQGTTVTVSS
RHE '5 humanizado
EVKLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSNYWMNWVRQASGKGLEWVAEIRSQSNNF
ATHYAESVKGRFTISRDDSKNTVYLQMNSLRTEDTAVYYCTRRWNNFWGQGTTVTVSS
RHF '5 humanizado
EVKLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSNYWMNWVRQASGKGLEWVAEIRSQSNNF
ATHYAESVKGRVIISRDDSKNTAYLQMNSLRTEDTAVYYCTRRWNNFWGQGTTVTVSS
RHG '5 humanizado
EVKLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSNYWMNWVRQASGKGLEWVAEIRSQSNNF
ATHYAESVKGRVIISRDDSKNTAYLQMNSLRTEDTAVYYCTRRWNNFWGQGTTVTVSS
RKA '5 humanizado
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCKASENVGTYVSWYQQKPGTAPKLLIYGASNRFTGVPS
RFSGSGSATDFTLTIMNLQPEDFATYYCGQSYTFPYTFGQGTKVEIK
RKB '5 humanizado
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCKASENVGTYVSWYQQKPGTAPKLLIYGASNRFTGVPS
RFSGSGSATDFTLTINNLQPEDFATYYCGQSYTFPYTFGGGTKVEIK
RKC '5 humanizado
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCKASENVGTYVSWYQQKPGTAPKMLIYGASNRFTGVPS
RFSGSGSATDFTLTINNLQPEDFATYYCGQSYTFPYTFGQGTKVEIK
RKD '5 humanizado DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCKASENVGTYVSWYQQKPGTAPKMLIYGASNRFTGVPS RFSGSGSATDFTLTINNLQPEDFATYYCGQSYTFPYTFGQGTKVEIK
RKE '5 humanizado NIVMTQSPSSVSASVGDRVTITCKASENVGTYVSWYQQKPGTAPKLLIYGASNRFTGVPD RFTGSGSATDFILTINNLQPEDFATYYCGQSYTFPYTFGQGTKVEIK RKF '5 humanizado
NIVMTQSPSSVSASVGDRVTITCKASENVGTYVSWYGQKPGTAPKMLIYGASNRFTGVPS
RFSGSGSATDFILTINNLQPEDFATYYCGQSYTFPYTFGQGTKVEIK RKG '5 humanizado
NIVMTQSPSSVSASVGDRVTITCKASENVGTYVSWYQQKPGTAPKMLIYGASNRFTGVPD
RFTGSGSATDFTLTINNLQPEDFATYYCGQSYTFPYTFGQGTKVEIK
El anticuerpo parental también puede ser una proteína de fusión que comprende una secuencia de péptidos de unión a albúmina (ABP) (Dennis et al (2002) “Albumin Binding As A General Strategy For Improving The Pharmacokinetics Of Proteins” J Biol Chem. 277:35035-35043; documento WO 01/45746). Los anticuerpos de la invención incluyen proteínas de fusión con secuencias de ABP enseñadas por: (i) Dennis et al (2002) J Biol Chem. 277:35035-35043 en las Tablas III y IV, página 35038; (ii) documento US 2004/0001827 en [0076]; y (iii) documento WO 01/45746 en las páginas 12-13.
En una modalidad, el anticuerpo se ha producido para dirigirse específicamente al antígeno relacionado con el tumor aypa.
El agente de unión a célula se puede marcar, por ejemplo, para ayudar en la detección o la purificación del agente ya sea antes de la incorporación como un conjugado, o como parte del conjugado. La marca puede ser una marca de biotina. En otra modalidad, el agente de unión a célula se puede marcar con un radioisótopo.
Conexión de la unidad de enlazador con la unidad de ligando
La unidad de ligando se conecta con la unidad de enlazador a través de una unidad de disulfuro.
En una modalidad, la conexión entre la unión de ligando y el enlazador de fármaco se forma entre un grupo tiol de un residuo de cisteína de la unión de ligando y un grupo de maleimida de la unidad de enlazador de fármaco.
Los residuos de cisteína de la unidad de ligando pueden estar disponibles para la reacción con el grupo funcional de la unidad de enlazador para formar una conexión. En otras modalidades, por ejemplo, cuando la unidad de ligando es un anticuerpo, los grupos tiol del anticuerpo pueden participar en los enlaces de disulfuro intercatenarios. Estos enlaces intercatenarios pueden convertirse en grupos tiol libres mediante, por ejemplo, el tratamiento del anticuerpo con DTT antes de la reacción con el grupo funcional de la unidad de enlazador.
En algunas modalidades, el residuo de cisteína se introduce en la cadena pesada o ligera de un anticuerpo. Las posiciones para la inserción de cisteína mediante la sustitución en la cadena pesada o ligera del anticuerpo incluyen las descritas en la solicitud estadounidense publicada n.° 2007-0092940 y la publicación de patente internacional W02008070593.
Métodos de tratamiento
Los compuestos de la presente invención pueden usarse en un método de terapia. También se proporciona una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de conjugado de la fórmula II para su uso en un método de tratamiento. La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" es una cantidad suficiente para ser beneficiosa para un paciente. Dicho beneficio puede ser al menos la mejora de al menos un síntoma. La cantidad real que se administra y la tasa y el transcurso de tiempo de la administración dependerán de la naturaleza y la gravedad de lo que se trata. La prescripción del tratamiento, por ejemplo, decisiones relativas a la dosis, es parte de las responsabilidades de los médicos y otros profesionales de la salud.
Un conjugado puede administrarse solo o en combinación con otros tratamientos, ya sea de forma simultánea o secuencial, conforme a la afección a tratar. Ejemplos de tratamientos y terapias incluyen, de modo no taxativo, quimioterapia (la administración de agentes activos que incluyen, por ejemplo, fármacos; cirugía; y radioterapia.
Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la presente invención y para utilizar de acuerdo con la presente invención pueden comprender, además del ingrediente activo, es decir, un conjugado de fórmula I, un excipiente farmacéuticamente aceptable, vehículo, solución amortiguadora, estabilizante u otros materiales conocidos para los expertos en la técnica. Dichos materiales no deben ser tóxicos y no deberían interferir con la eficacia del ingrediente activo. La naturaleza exacta del vehículo u otro material dependerá de la vía de administración, la que puede ser oral o mediante inyección, por ejemplo, cutánea, subcutánea o intravenosa.
Las composiciones farmacéuticas para administración oral se pueden encontrar en forma de comprimido, cápsula, en polvo o líquida. Un comprimido puede comprender un vehículo sólido o un adyuvante. En general, las composiciones farmacéuticas líquidas comprenden un vehículo líquido, petróleo, aceites animales o vegetales, aceite mineral o aceite sintético. Se pueden incluir solución salina fisiológica, dextrosa u otra solución de sacáridos o glicoles, tal como etilenglicol, propilenglicol o polietilenglicol. Una cápsula puede comprender un vehículo sólido, tal como gelatina.
Para la inyección intravenosa, cutánea o subcutánea o la inyección en el sitio de aflicción, el ingrediente activo se encontrará en forma de una solución acuosa parenteralmente aceptable, libre de pirógenos y con pH, isotonicidad y estabilidad adecuados. Los expertos en la técnica serán capaces de preparar soluciones adecuadas usando, por ejemplo, vehículos isotónicos tales como inyección de cloruro de sodio, inyección de Ringer, inyección de Ringer lactato. De ser necesario, pueden incluirse conservantes, estabilizantes, soluciones amortiguadoras, antioxidantes y/u otros aditivos.
Los conjugados pueden usarse para tratar la enfermedad proliferativa y enfermedad autoinmunitaria. La expresión "enfermedad proliferativa" hace referencia a una proliferación celular no deseada o descontrolada de células anormales o excesivas que es indeseable, tal como, crecimiento hiperplásico o neoplásico, ya sea in vitro o in vivo.
Ejemplos de afecciones proliferativas incluyen, de modo no taxativo, la proliferación celular benigna, premaligna y maligna que incluye, de modo no taxativo, neoplasias y tumores (por ejemplo, histiocitoma, glioma, astrocitoma, osteoma), cánceres (por ejemplo, cáncer de pulmón, cáncer pulmonar microcítico, cáncer gastrointestinal, cáncer intestinal, cáncer de colon, carcinoma de mama, carcinoma ovárico, cáncer de próstata, cáncer testicular, cáncer de hígado, cáncer de riñón, cáncer de vejiga, cáncer de páncreas, cáncer cerebral, sarcoma, osteosarcoma, sarcoma de Kaposi, melanoma), leucemias, psoriasis, enfermedades óseas, trastornos fibroproliferativos (por ejemplo, de tejidos conectivos) y ateroesclerosis. Otros cánceres de interés incluyen, de forma no taxativa, hematológico; neoplasias malignas tales como leucemias y linfomas, tales como linfoma no Hodgkin y subtipos tales como DLBCL, zona marginal, zona del manto y folicular, linfoma de Hodgkin, AML y otros cánceres que se originan en linfocitos B o T.
Los ejemplos de enfermedad autoinmunitaria incluyen los siguientes: artritis reumatoide, enfermedades desmielizantes autoinmunitarias (por ejemplo, esclerosis múltiple, encefalomielitis alérgica), artritis soriática, oftalmopatía endócrina, uveorretinitis, lupus eritematoso sistémico, miastenia gravis, enfermedad de Graves, glomerulonefritis, trastorno hepatológico autoinmunitario, enfermedad intestinal inflamatoria (por ejemplo, enfermedad de Crohn), anafilaxis, reacción alérgica, síndrome de Sjogren, diabetes melitus tipo I, cirrosis biliar primaria, granulomatosis de Wegener, fibromialgia, polimiositis, dermatomiositis, falla endócrina múltiple, síndrome de Schmidt, uveitis autoinmunitaria, enfermedad de Addison, adrenalitis, tiroiditis, tiroiditis de Hashimoto, enfermedad de tiroides autoinmunitaria, anemia perniciosa, atrofia gástrica, hepatitis crónica, hepatitis lupoide, aterosclerosis, lupus eritematoso cutáneo subagudo, hipoparatiroidismo, síndrome de Dressler, trombocitopenia autoinmunitaria, púrpura trombocitopénica idiopática, anemia hemolítica, pénfigo vulgar, pénfigo, dermatitis herpetiforme, alopecia areata, penfigoide, escleroderma, esclerosis sistémica progresiva, síndrome de CREST (calcinosis, fenómeno de Raynaud, dismotilidad esofágica, esclerodactilila y telangiectasia), infertilidad autoinmunitaria masculina y femenina, espondilitis anquilosante, colitis ulcerativa, enfermedad mixta del tejido conectivo, poliarteritis nodosa, vasculitis necrotizante sistémica, dermatitis atópica, rinitis atópica, síndrome de Goodpasture, enfermedad de Chagas, sarcoidosis, fiebre reumática, asma, aborto recurrente, síndrome antifosfolípido, pulmón de granjero, eritema multiforme, síndrome poscardiotomía, síndrome de Cushing, hepatitis activa crónica autoinmunitaria, pulmón del cuidador de aves, necrólisis epidérmica tóxica, síndrome de Alport, alveolitis, alveolitis alérgica, alveolitis fibrosante, enfermedad pulmonar intersticial, eritema nodoso, pioderma gangrenoso, reacción de transfusión, arteritis de Takayasu, polimialgia reumática, arteritis temporal, equistosomiasis, arteritis de células gigantes, ascariasis, aspergilosis, síndrome de Sampter, eczema, granulomatosis linfomatoide, enfermedad de Behcet, síndrome de Caplan, enfermedad de Kawasaki, dengue, encefalomielitis, endocarditis, fibrosis endomiocárdica, endoftalmitis, eritema elevatum et diutinu, soriasis, eritroblastosis fetal, faciitis esoinofílica, síndrome de Shulman, síndrome de Felty, filariasis, ciclitis, ciclitis crónica, ciclitis heterocrónica, ciclitis de Fuch, nefropatía IgA, púrpura Henoch-Schonlein, enfermedad de injerto contra huésped, rechazo al trasplante, cardiomiopatía, síndrome de Eaton-Lambert, policondritis recidivante, crioglobulinemia, macroglobulemia de Waldenstrom, síndrome de Evan y falla gonadal autoinmunitaria.
En algunas modalidades, la enfermedad autoinmunitaria es un trastorno de linfocitos B (por ejemplo, lupus eritematoso sistémico, síndrome de Goodpasture, artritis reumatoide y diabetes tipo I), Th1-linfocitos (por ejemplo, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, soriasis, síndrome de Sjogren, tiroiditis de Hashimoto, enfermedad de Graves, cirrosis biliar primaria, granulomatosis de Wegener, tuberculosis o enfermedad de injerto contra huésped) o Th2-linfocitos (por ejemplo, dermatitis atópica, lupus eritematoso sistémico, asma atópico, rinoconjuntivitis, rinitis alérgica, síndrome de Omenn, esclerosis sistémico o enfermedad de injerto contra huésped crónica). Generalmente, los trastornos que implican células dendríticas implican trastornos de Th1 -linfocitos o Th2-linfocitos. En algunas modalidades, el trastorno autoinmunitario es un trastorno inmunológico mediado por linfocitos T.
En algunas modalidades, la cantidad del conjugado administrada varía de alrededor de 0,01 a alrededor de 10 mg/kg por dosis. En algunas modalidades, la cantidad del conjugado administrada varía de alrededor de 0,01 a alrededor de 5 mg/kg por dosis. En algunas modalidades, la cantidad del conjugado administrada varía de alrededor de 0,05 a alrededor de 5 mg/kg por dosis. En algunas modalidades, la cantidad del conjugado administrada varía de alrededor de 0,1 a alrededor de 5 mg/kg por dosis. En algunas modalidades, la cantidad del conjugado administrada varía de alrededor de 0,1 a alrededor de 4 mg/kg por dosis. En algunas modalidades, la cantidad del conjugado administrada varía de alrededor de 0,05 a alrededor de 3 mg/kg por dosis. En algunas modalidades, la cantidad del conjugado administrada varía de alrededor de 0,1 a alrededor de 3 mg/kg por dosis. En algunas modalidades, la cantidad del conjugado administrada varía de alrededor de 0,1 a alrededor de 2 mg/kg por dosis.
Carga de fármaco
La carga de fármaco (p) es el número promedio de fármacos de PBD por agente de unión a célula, por ejemplo, anticuerpo. Si los compuestos de la invención están unidos a cisteínas, la carga de fármaco puede variar de 1 a 8 fármacos (D) por agente de unión a célula, es decir, en donde 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8 porciones de fármaco están covalentemente unidas al agente de unión a célula. Las composiciones de conjugados incluyen colecciones de agentes de unión a célula, por ejemplo, anticuerpos, conjugados con un intervalo de fármacos, de 1 a 8. Si los compuestos de la invención están unidos a lisinas, la carga de fármaco puede variar de 1 a 80 fármacos (D) por agente de unión a célula, aunque se puede preferir un límite superior de 40, 20, 10 u 8. Las composiciones de conjugados incluyen colecciones de agentes de unión a célula, por ejemplo, anticuerpos, conjugados con un intervalo de fármacos, de 1 a 80, 1 a 40, 1 a 20, 1 a 10 o 1 a 8.
El número promedio de fármacos por anticuerpo en preparaciones de ADC de reacciones de conjugación se puede caracterizar mediante medios convencionales tales como UV, HPLC de fase inversa, HIC, espectroscopía de masas, ensayo de ELISA, y electroforesis. También se puede determinar la distribución cuantitativa de ADC en términos de p. Mediante ELISA, se puede determinar el valor promediado de p en una preparación particular de ADC (Hamblett et al (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070; Sanderson et al (2005) Clin. Cancer Res. 11:843-852). Sin embargo, la distribución de valores de p (fármaco) no es discernible mediante la unión anticuerpo-antígeno y la limitación de la detección de ELISA. Además, el ensayo de ELISA para la detección de conjugados de anticuerpo-fármaco no determina si las porciones de fármaco están unidas al anticuerpo, tal como los fragmentos de cadena pesada o cadena ligera, o los residuos de aminoácidos particulares. En algunos casos, se puede lograr la separación, la purificación y la caracterización de ADC homogéneos en donde p es un cierto valor de ADC con otras cargas de fármaco por medios tales como HPLC de fase inversa o electroforesis. Tales técnicas también son aplicables a otros tipos de conjugados.
Para algunos conjugados de anticuerpo-fármaco, p puede estar limitado por el número de sitios de unión en el anticuerpo. Por ejemplo, un anticuerpo puede tener solamente uno o varios grupos tiol de cisteína, o puede tener solamente uno o varios grupos tiol suficientemente reactivos a través de los cuales se puede unir un enlazador. Una carga de fármaco mayor, por ejemplo, p >5, puede producir agregación, insolubilidad, toxicidad, o pérdida de la permeabilidad celular de ciertos conjugados de anticuerpo-fármaco.
Normalmente, menos del máximo teórico de las porciones de fármaco están conjugadas con un anticuerpo durante una reacción de conjugación. Un anticuerpo puede contener, por ejemplo, muchos residuos de lisina que no reaccionan con el enlazador de fármaco. Solamente los grupos lisina más reactivos pueden reaccionar con un reactivo enlazador que es reactivo con amina. Además, solamente los grupos tiol de cisteína más reactivos pueden reaccionar con un reactivo enlazador que es reactivo con tiol. Generalmente, los anticuerpos no contienen muchos, si hay, grupos tiol de cisteína libres y reactivos que se puedan enlazar a una porción de fármaco. La mayoría de los residuos de tiol de cisteína en los anticuerpos de los compuestos existen como puentes de disulfuro y se deben reducir con un agente reductor tal como ditiotreitol (DTT) o TCEP, bajo condiciones reductoras parciales o totales. La carga (relación de fármaco/anticuerpo) de un ADC se puede controlar de diversas maneras diferentes, que incluyen: (i) limitar el exceso molar del enlazador de fármaco con respecto al anticuerpo, (ii) limitar el tiempo de reacción de la conjugación o temperatura, y (iii) condiciones reductoras parciales o reductoras limitantes para la modificación del tiol de cisteína.
Ciertos anticuerpos tienen disulfuros entre cadenas reducibles, es decir, puentes de cisteína. Los anticuerpos se pueden hacer reactivos para la conjugación con reactivos enlazadores mediante tratamiento con un agente reductor tal como DTT (ditiotreitol). Cada puente de cisteína formará de esta manera, teóricamente, dos nucleófilos de tiol reactivos. Se pueden introducir grupos nucleófilos adicionales en anticuerpos a través de la reacción de lisinas con 2-iminotiolano (reactivo de Traut) lo que resulta en la conversión de una amina en un tiol. Los grupos tiol reactivos se pueden introducir en el anticuerpo (o fragmento del mismo) manipulando uno, dos, tres, cuatro o más residuos de cisteína (por ejemplo, preparando anticuerpos mutantes que comprenden uno o más residuos de aminoácidos de cisteína no nativos). El documento US 7521541 enseña a manipular anticuerpos mediante la introducción de aminoácidos de cisteína reactivos.
Los aminoácidos de cisteína se pueden manipular en sitios reactivos en un anticuerpo y que no forman enlaces disulfuro entre cadenas o intermoleculares (Junutula et al., 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932; Dornan et al (2009) Blood 114(13):2721-2729; documentos US 7521541; US 7723485; WO2009/052249). Los tioles de cisteína manipulados pueden reaccionar con reactivos enlazadores o los reactivos de fármaco-enlazador de la presente invención que tienen grupos electrófilos reactivos con tiol tales como maleimida o alfa-haloamidas para formar ADC con anticuerpos manipulados por cisteína y las porciones de fármacos de PBD. De esta manera, la localización de la porción de fármaco se puede diseñar, controlar y conocer. La carga de fármaco se puede controlar, ya que los grupos tiol de cisteína manipulados normalmente reaccionan con reactivos enlazadores reactivos con tiol o reactivos de fármaco-enlazador con alto rendimiento. La manipulación de un anticuerpo IgG para introducir un aminoácido de cisteína mediante sustitución en un único sitio en la cadena pesada o ligera da dos nuevas cisteínas en el anticuerpo simétrico. Una carga de fármaco próxima a 2 se puede lograr con casi homogeneidad del producto de conjugación ADC.
Si más de un grupo nucleófilo o electrófilo del anticuerpo reacciona con un intermediario de fármaco-enlazador, o reactivo enlazador seguido de reactivo de porción de fármaco, entonces el producto resultante es una mezcla de compuestos de ADC con una distribución de porciones de fármaco unidas a un anticuerpo, por ejemplo, 1, 2, 3, etc. Los métodos de cromatografía líquida tales como fase inversa polimérica (PLRP) e interacción hidrófoba (HIC) pueden separar compuestos en la mezcla mediante el valor de carga del fármaco. Las preparaciones de ADC con un único valor de carga de fármaco (p) se pueden aislar, sin embargo, estos ADCs de valor de carga único pueden todavía ser mezclas heterogéneas debido a que las porciones de fármaco se pueden unir, por medio del enlazador, en diferentes sitios en el anticuerpo.
De esta manera, las composiciones de conjugado de anticuerpo-fármaco de la invención incluyen mezclas de compuestos de conjugados de anticuerpo-fármaco en donde el anticuerpo tiene una o más porciones de fármaco de PBD y en donde las porciones de fármaco se pueden unir al anticuerpo en diversos residuos de aminoácidos.
En una modalidad, el número promedio de grupos de pirrolobenzodiazepina diméricos por agente de unión a célula está en el intervalo 1 a 20. En algunas modalidades, el intervalo se selecciona de 1 a 8, 2 a 8, 2 a 6, 2 a 4, y 4 a 8. En algunas modalidades, hay un grupo de pirrolobenzodiazepina dimérico por agente de unión a célula.
Vías de síntesis generales
La síntesis de compuestos de PBD se trata en detalle en las siguientes referencias:
a) WO 00/12508 (páginas 14 a 30);
b) WO 2005/023814 (páginas 3 a 10);
c) WO 2004/043963 (páginas 28 a 29); y
d) WO 2005/085251 (páginas 30 a 39).
Vía de síntesis
Los compuestos de la presente invención de fórmula I:
Figure imgf000069_0001
pueden sintetizarse a partir de un compuesto de Fórmula II:
Figure imgf000069_0002
donde R2, R6, R7, R9, R6’, R7’, R9’, R11b, R12, Y, Y’ y R” se definen para los compuestos de fórmula I, y RLL es un precursor de RL - este método es particularmente aplicable a los compuestos de fórmula I donde RL es de fórmula IIIa. Para estos compuestos, RLL será normalmente una parte de RL, tal como un grupo de fórmula IIIa’:
Figure imgf000070_0001
En dicho caso, la reacción implica agregar el grupo GL El grupo GL usado en la invención es como se define en la presente reivindicación 1.
Los compuestos de Fórmula 2 pueden realizarse mediante la desprotección de los compuestos de Fórmula 3:
Figure imgf000070_0002
donde R2, R6, R7, R9, R6’, R7’, R9’, R11b, R12, Y, Y’ y R” se definen para los compuestos de fórmula I, y RLL-Prot es una versión protegida de RLL y la Prot representan un grupo de protección carboxi/hidroxi.
Los compuestos de fórmula 3 pueden fabricarse mediante cierre de anillo de los compuestos de Fórmula 4:
Figure imgf000070_0003
donde el cierre de anillo se lleva a cabo mediante oxidación, por ejemplo, Swern.
Los compuestos de fórmula 4 pueden prepararse a partir de los compuestos de fórmula 5:
Figure imgf000070_0004
mediante adición en etapas de los dos grupos protectores amino. La adición en etapas puede lograrse mediante protección simple de un grupo amino (por ejemplo, mediante Fmoc), seguido de la instalación de un grupo protector deseado en el otro grupo amino. Luego de esto, puede retirarse el grupo protector simple y luego instalarse otro grupo protector amino deseado.
Los compuestos de fórmula I, donde RL es de fórmula IIIb, divulgados únicamente para información, pueden sintetizarse en una forma similar, aunque el grupo RL completo puede instalarse comenzando desde un compuesto de Fórmula 5, en lugar de con el uso de un precursor protegido.
Los compuestos de Fórmula 5 pueden sintetizarse mediante métodos conocidos, como los descritos en WO 2011/130598.
Síntesis de conjugados de fármacos
Los conjugados pueden prepararse como se describió previamente. Los anticuerpos pueden conjugarse en el compuesto de enlazador de fármaco como se describe en Doronina et ál., Nature Biotechnology, 2003, 21, 778-784). Brevemente, los anticuerpos (4-5 mg/ml) en PBS con borato de sodio 50 mM a pH 7,4 se reducen con clorhidrato de tris(carboxietil)fosfina (TCEP) a 37 °C. La evolución de la reacción, que reduce los disulfuros intercatenarios), se monitorea mediante la reacción con 5,5'-ditiobis(ácido 2-nitrobenzoico) y se le permite continuar hasta que se alcanza el nivel deseado de tioles/mAb. El anticuerpo reducido se enfría luego hasta 0 °C y alquila con 1,5 equivalentes de un fármaco-enlazador de maleimida por tiol de anticuerpo. Luego de 1 hora, la reacción se inactiva mediante la adición de 5 equivalentes de N-acetil cisteína. El fármaco-enlazador inactivado se retira mediante filtración en gel sobre una columna PD-10. Luego, el ADC se filtra de forma estéril a través de un filtro de jeringa de 0,22 pm. La concentración de proteína puede determinarse mediante análisis espectral a 280 nm y 329 nm, respectivamente, con la corrección para la contribución de la absorbancia del fármaco a 280 nm. La cromatografía de exclusión por tamaño puede usarse para determinar la extensión del agregado de anticuerpo y puede usarse RP-HPLC para determinar los niveles del fármaco-enlazador inactivado con NAC restantes.
Preferencias adicionales
Las siguientes preferencias se pueden aplicar a todos los aspectos de la invención tal como se describió anteriormente o se pueden relacionar a un único aspecto. Las preferencias se pueden combinar entre sí en cualquier combinación. En algunas modalidades, se encuentra el grupo NO2. En otras modalidades, el NO2 está ausente.
En algunas modalidades, R6', R7', R9' e Y' se seleccionan de los mismos grupos que R6, R7, R9 e Y, respectivamente. En algunas de estas modalidades, R6', R7', R9' e Y' son los mismos grupos que R6, R7, R9 e Y, respectivamente. En algunas modalidades, R12 es igual que R2.
Enlace dimérico
En algunas modalidades Y e Y' son ambos O.
En algunas modalidades, R'' es un grupo alquilo C3.7 sin ningún sustituyente. En algunas de estas modalidades, R'' es un alquileno C3, C5 o C7 En particular, R'' puede ser un alquileno C3 o C5.
En otras modalidades, R'' es un grupo de la fórmula:
Figure imgf000071_0001
donde r es 1 o 2,
R6 a R9
En algunas modalidades, R9 es H.
En algunas modalidades, R6 se selecciona de H, OH, OR, SH, NH2, nitro y halo, y puede seleccionarse de H o halo. En algunas de estas modalidades, R6 es H.
En algunas modalidades, R7 se selecciona de H, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR' y halo. En algunas de estas modalidades, R7 se selecciona de H, OH y OR, donde R se selecciona de los grupos alquilo C1-7, heterociclilo C3-10 y arilo C5-10 opcionalmente sustituidos. R puede ser, más preferentemente, un grupo alquilo C1-4 que se puede encontrar sustituido o no. Un grupo arilo C5-6 (por ejemplo, fenilo) es un sustituyente de interés. OMe y O C ^P h son sustituyentes particularmente preferidos en las posiciones 7. Dimetilamino (es decir, -NMe2), -(OC2H4)qOMe, en el que q es de 0 a 2, heterociclilos C6 que contienen nitrógeno, los que incluyen morfolino, piperidinilo y N-metil-piperazinilo, son otros sustituyentes de interés particular.
Estas modalidades y preferencias aplican a R9’, R6’ y R7’, respectivamente.
D y D’
En algunas modalidades, D y D’ son D1 y D’1 respectivamente.
En algunas modalidades, D y D’ son D2 y D’2, respectivamente.
R2
Cuando existe un enlace doble presente entre C2’ y C3’, R2 se selecciona de:
(a) un grupo arilo C5-10 opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que comprende: halo, nitro, ciano, éter, alquilo C1-7, heterociclilo C3.7 y bis-oxi-alquileno C1-3;
(b) alquilo C1.5 alifático saturado;
(c) cicloalquilo C3-6 saturado;
( d )
Figure imgf000072_0001
donde cada uno de R11, R12 y R13 se selecciona de forma independiente de H, alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3 y ciclopropilo, donde la cantidad total de átomos de carbono en el grupo R2 es menos de 5;
( e )
Figure imgf000072_0002
donde uno de R15a y R15b es H y el otro se selecciona de: fenilo, el que se encuentra opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de halo, metilo o metoxi, piridilo y tiofenilo, y
(f)
Figure imgf000072_0003
donde R14 se selecciona de: H; alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3, ciclopropilo; fenilo, dicho fenilo se encuentra opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de halo, metilo, metoxi, piridilo y tiofenilo. Cuando R2 es un grupo arilo C5-10, puede ser un grupo arilo C5-7. Un grupo arilo C5-7 puede ser un grupo fenilo o un grupo heteroarilo C5-7, por ejemplo, furanilo, tiofenilo y piridilo. En algunas modalidades, R2 es preferentemente fenilo. En otras modalidades, R2 es preferentemente tiofenilo, por ejemplo, tiofen-2-ilo y tiofen-3-ilo.
Cuando R2 es un grupo arilo C5-10, puede ser un grupo arilo C8-10, por ejemplo, un grupo quiniolinilo o isoquinolinilo. El grupo quinolinilo o isoquinolinilo puede estar unido al núcleo de PBD a través de cualquier posición disponible del anillo. Por ejemplo, el quinolinilo puede ser quinolin-2-ilo, quinolin-3-ilo, quinolin-4ilo, quinolin-5-ilo, quinolin-6-ilo, quinolin-7-ilo y quinolin-8-ilo. De estos, se pueden preferir quinolin-3-ilo y quinolin-6-ilo. El isoquinolinilo puede ser isoquinolin-1-ilo, isoquinolin-3-ilo, isoquinolin-4-ilo, isoquinolin-5-ilo, isoquinolin-6-ilo, isoquinolin-7-ilo y isoquinolin-8-ilo. De estos, se pueden preferir isoquinolin-3-ilo e isoquinolin-6-ilo.
Cuando R2 es un grupo arilo C5-10, puede tener cualquier cantidad de grupos sustituyentes. Preferentemente, tiene de 1 a 3 grupos sustituyentes, con preferencia de 1 y 2, y se prefieren incluso más grupos con un único sustituyente. Los sustituyentes se pueden encontrar en cualquier posición.
En los casos en los que R2 es un grupo arilo C5-7, un sustituyente único se encuentra preferentemente en un átomo de anillo que no se encuentra adyacente al enlace al resto del compuesto, es decir, es preferentemente p o y respecto al enlace al resto del compuesto. Por consiguiente, en el caso en el que el grupo arilo C5-7 es fenilo, el sustituyente se encuentra preferentemente en posiciones meta o para y más preferentemente, en posición para.
En el caso en el que R2 es un grupo arilo C8-10, por ejemplo, quinolinilo o isoquinolinilo, puede presentar cualquier cantidad de sustituyentes en cualquier posición de los anillos de quinolina o isoquinolina. En algunas modalidades, presenta uno, dos o tres sustituyentes, los que se pueden encontrar ya sea en los anillos próximos como distales, o en ambos (si hubiera más de un sustituyente).
Sustituyentes R2, cuando R2 es un grupo arilo C5-10
Si un sustituyente en R2 cuando R2 es un grupo arilo C5-10 es halo, es preferentemente F o Cl, y más preferentemente, Cl.
Si un sustituyente en R2 cuando R2 es un grupo arilo C5-10 es éter, en algunas modalidades puede ser un grupo alcoxi, por ejemplo, un grupo alcoxi C1-7 (por ejemplo, metoxi, etoxi) o en algunas modalidades puede ser un grupo ariloxi C5-7 (por ejemplo, fenoxi, piridiloxi, furaniloxi). El grupo alcoxi se puede encontrar adicionalmente sustituido, por ejemplo, con un grupo amino (por ejemplo, dimetilamino).
Si un sustituyente en R2 cuando R2 es un grupo arilo C5-10 es alquilo C1-7, puede ser preferentemente un grupo alquilo C1-4 (por ejemplo, metilo, etilo, propilo, butilo).
Si un sustituyente en R2 cuando R2 es un grupo arilo C5-10 es heterociclilo C3-7, en algunas modalidades puede ser un grupo heterociclilo C6 que contiene nitrógeno, por ejemplo, morfolino, tiomorfolino, piperidinilo, piperazinilo. Dichos grupos se pueden enlazar al resto del resto de PBD a través del átomo de nitrógeno. Tales grupos se pueden sustituir adicionalmente, por ejemplo, con grupos alquilo C1-4. Si el grupo heterociclilo C6 que contiene nitrógeno es piperazinilo, dicho sustituyente adicional se puede encontrar en el segundo átomo anular de nitrógeno.
Si un sustituyente en R2 cuando R2 es un grupo arilo C5-10 es bis-oxi-alquileno C1-3, preferentemente es bis-oxi-metileno o bis-oxi-etileno.
Si un sustituyente en R2 cuando R2 es un grupo arilo C5-10 es éster, preferentemente es éster metílico o éster etílico.
Los sustituyentes particularmente preferidos cuando R2 es un grupo arilo C5-10 incluyen metoxi, etoxi, flúor, cloro, ciano, bis-oxi-metileno, metil-piperazinilo, morfolino y metil-tiofenilo. Otros sustituyentes particularmente preferidos para R2 son dimetilaminopropiloxi y carboxi.
Los grupos R2 sustituidos particularmente preferidos cuando R2 es un grupo arilo C5-10 incluyen, de modo no taxativo, 4-metoxi-fenilo, 3-metoxifenilo, 4-etoxi-fenilo, 3-etoxi-fenilo, 4-fluoro-fenilo, 4-cloro-fenilo, 3,4-bisoximetilen-fenilo, 4-metiltiofenilo, 4-cianofenilo, 4-fenoxifenilo, quinolin-3-ilo y quinolin-6-ilo, isoquinolin-3-ilo e isoquinolin-6-ilo, 2-tienilo, 2-furanilo, metoxinaftilo y naftilo. Otro grupo R2 sustituido posible es 4-nitrofenilo. Los grupos R2 de interés particular incluyen 4-(4- metilpiperazin-1 -il)fenilo y 3,4-bisoximetilen-fenilo.
Cuando R2 es alquilo alifático C1-5 saturado, puede ser metilo, etilo, propilo, butilo o pentilo. En algunas modalidades, puede ser metilo, etilo o propilo (n-pentilo o isopropilo). En algunas de estas modalidades, puede ser metilo. En otras modalidades, puede ser butilo o pentilo, los que pueden ser lineales o ramificados.
Cuando R2 es cicloalquilo C3-6 saturado, puede ser ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo. En algunas modalidades, puede ser ciclopropilo.
Cuando R2 es
Figure imgf000073_0001
cada uno de R11, R12' y R13 se selecciona de forma independiente de H, alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3 y ciclopropilo, en los que la cantidad total de átomos de carbono en el grupo R2 es menos de 5. En algunas modalidades, la cantidad total de átomos de carbono en el grupo R2 es no más de 4 o no más de 3.
En algunas modalidades, uno de R11, R12' y R13 es H, y los otros dos grupos se seleccionan de H, alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3 y ciclopropilo.
En otras modalidades, dos de R11, R12' y R13 son H, y el otro grupo se selecciona de H, alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3 y ciclopropilo.
En algunas modalidades, los grupos que no son H se seleccionan de metilo y etilo. En algunas de dichas modalidades, los grupos que no son H son metilo.
En algunas modalidades, R11 es H.
En algunas modalidades, R12' es H.
En algunas modalidades, R13 es H.
En algunas modalidades, R11 y R12' son H.
En algunas modalidades, R11 y R13 son H.
En algunas modalidades, R12' y R13 son H.
Un grupo R2 de interés particular es:
Figure imgf000074_0001
Cuando R2 es
Figure imgf000074_0002
uno de R15a y R15b es H y el otro se selecciona de: fenilo, el que se encuentra opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de halo, metilo, metoxi, piridilo y tiofenilo. En algunas modalidades, el grupo que no es H es fenilo opcionalmente sustituido. Si el sustituyente opcional de fenilo es halo, preferentemente es flúor. En algunas modalidades, el grupo fenilo no se encuentra sustituido.
Cuando R2 es
Figure imgf000074_0003
R14 se selecciona de: H; alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3, ciclopropilo; fenilo, dicho fenilo se encuentra opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de halo, metilo, metoxi, piridilo y tiofenilo. Si el sustituyente opcional de fenilo es halo, preferentemente es flúor. En algunas modalidades, el grupo fenilo no se encuentra sustituido. En algunas modalidades, R14 se selecciona de H, metilo, etilo, etenilo y etinilo. En algunas de dichas modalidades, R14 se selecciona de H y metilo.
Cuando existe un enlace simple entre C2 y C3,
R2 es H o
Figure imgf000074_0004
donde R16a y R16b se seleccionan independientemente de H, F, alquilo C1-4 saturado, alquenilo C2-3, cuyos grupos alquilo y alquenilo están opcionalmente sustituidos por un grupo que se selecciona de alquilamido C1-4 y alquiléster C1-4; o, cuando uno de R16a y R16b es H, el otro se selecciona de nitrilo y un alquiléster C1-4;
En algunas modalidades, R2 es H.
En algunas modalidades, R2 es
Figure imgf000075_0001
En algunas modalidades, se prefiere que tanto R16a como R16b sean H.
En otras modalidades, se prefiere que tanto R16a como R16b sean metilo.
En modalidades adicionales, se prefiere que uno de R16a y R16b sea H, y el otro se seleccione de alquilo C1-4 saturado, alquenilo C2-3, cuyos grupos alquilo y alquenilo están opcionalmente sustituidos. En dichas modalidades adicionales, se puede preferir adicionalmente que el grupo que no sea H se seleccione de metilo y etilo.
R12
Cuando existe un enlace doble presente entre C2' y C3', R12 se selecciona de:
(a) un grupo arilo C5-10 opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que comprende: halo, nitro, ciano, éter, alquilo C1-7, heterociclilo C3-7 y bis-oxi-alquileno C1-3;
(b) alquilo C1-5 alifático saturado;
(c) un cicloalquilo C3-6 saturado;
(d)
Figure imgf000075_0002
donde cada uno de R21, R22 y R23 se selecciona de forma independiente de H, alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3 y ciclopropilo, donde la cantidad total de átomos de carbono en el grupo R12 es menos de 5; (e)
Figure imgf000075_0004
Figure imgf000075_0003
de R25a y R25b es H y el otro se selecciona de: fenilo, el que se encuentra opcionalmente sustituido upo seleccionado de halo, metilo o metoxi, piridilo y tiofenilo, y
(f)
Figure imgf000075_0005
donde R24 se selecciona de: H; alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3, ciclopropilo; fenilo, dicho fenilo se encuentra opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de halo, metilo, metoxi, piridilo y tiofenilo. Cuando R12 es un grupo arilo C5-10, puede ser un grupo arilo C5-7. Un grupo arilo C5-7 puede ser un grupo fenilo o un grupo heteroarilo C5-7, por ejemplo, furanilo, tiofenilo y piridilo. En algunas modalidades, R12 es preferentemente fenilo. En otras modalidades, R12 es preferentemente tiofenilo, por ejemplo, tiofen-2-ilo y tiofen-3-ilo.
Cuando R12 es un grupo arilo C5-10, puede ser un grupo arilo C8-10, por ejemplo, un grupo quiniolinilo o isoquinolinilo. El grupo quinolinilo o isoquinolinilo puede estar unido al núcleo de PBD a través de cualquier posición disponible del anillo. Por ejemplo, el quinolinilo puede ser quinolin-2-ilo, quinolin-3-ilo, quinolin-4-ilo, quinolin-5-ilo, quinolin-6-ilo, quinolin-7-ilo y quinolin-8-ilo. De estos, se pueden preferir quinolin-3-ilo y quinolin-6-ilo. El isoquinolinilo puede ser isoquinolin-1-ilo, isoquinolin-3-ilo, isoquinolin-4-ilo, isoquinolin-5-ilo, isoquinolin-6-ilo, isoquinolin-7-ilo y isoquinolin-8-ilo. De estos, se pueden preferir isoquinolin-3-ilo e isoquinolin-6-ilo.
Cuando R12 es un grupo arilo C5-10, puede tener cualquier cantidad de grupos sustituyentes. Preferentemente, tiene de 1 a 3 grupos sustituyentes, con preferencia de 1 y 2, y se prefieren incluso más grupos con un único sustituyente. Los sustituyentes se pueden encontrar en cualquier posición.
En los casos en los que R12 es un grupo arilo C5-7, un sustituyente único se encuentra preferentemente en un átomo de anillo que no se encuentra adyacente al enlace al resto del compuesto, es decir, es preferentemente p o y respecto al enlace al resto del compuesto. Por consiguiente, en el caso en el que el grupo arilo C5-7 es fenilo, el sustituyente se encuentra preferentemente en posiciones meta o para y más preferentemente, en posición para.
En el caso en el que R12 es un grupo arilo C8-10, por ejemplo, quinolinilo o isoquinolinilo, puede presentar cualquier cantidad de sustituyentes en cualquier posición de los anillos de quinolina o isoquinolina. En algunas modalidades, presenta uno, dos o tres sustituyentes, los que se pueden encontrar ya sea en los anillos próximos como distales, o en ambos (si hubiera más de un sustituyente).
Sustituyentes R12, cuando R12 es un grupo arilo C5-10
Si un sustituyente en R12 cuando R12 es un grupo arilo C5-10 es halo, es preferentemente F o Cl, y más preferentemente, Cl.
Si un sustituyente en R12 cuando R12 es un grupo arilo C5-10 es éter, en algunas modalidades puede ser un grupo alcoxi, por ejemplo, un grupo alcoxi C1-7 (por ejemplo, metoxi, etoxi) o en algunas modalidades puede ser un grupo ariloxi C5-7 (por ejemplo, fenoxi, piridiloxi, furaniloxi). El grupo alcoxi se puede encontrar adicionalmente sustituido, por ejemplo, con un grupo amino (por ejemplo, dimetilamino).
Si un sustituyente en R12 cuando R12 es un grupo arilo C5-10 es alquilo C1-7, puede ser preferentemente un grupo alquilo C1-4 (por ejemplo, metilo, etilo, propilo, butilo).
Si un sustituyente en R12 cuando R12 es un grupo arilo C5-10 es heterociclilo C3-7, en algunas modalidades puede ser un grupo heterociclilo C6 que contiene nitrógeno, por ejemplo, morfolino, tiomorfolino, piperidinilo, piperazinilo. Dichos grupos se pueden enlazar al resto del resto de PBD a través del átomo de nitrógeno. Tales grupos se pueden sustituir adicionalmente, por ejemplo, con grupos alquilo C1-4. Si el grupo heterociclilo C6 que contiene nitrógeno es piperazinilo, dicho sustituyente adicional se puede encontrar en el segundo átomo anular de nitrógeno.
Si un sustituyente en R12 cuando R12 es un grupo arilo C5-10 es bis-oxi-alquileno C1-3, preferentemente es bis-oximetileno o bis-oxi-etileno.
Si un sustituyente en R12 cuando R12 es un grupo arilo C5-10 es éster, preferentemente es éster metílico o éster etílico.
Los sustituyentes particularmente preferidos cuando R12 es un grupo arilo C5-10 incluyen metoxi, etoxi, flúor, cloro, ciano, bis-oxi-metileno, metil-piperazinilo, morfolino y metil-tiofenilo. Otros sustituyentes particularmente preferidos para R12 son dimetilaminopropiloxi y carboxi.
Los grupos R12 sustituidos particularmente preferidos cuando R12 es un grupo arilo C5-10 incluyen, de modo no taxativo, 4-metoxi-fenilo, 3-metoxifenilo, 4-etoxi-fenilo, 3-etoxi-fenilo, 4-fluoro-fenilo, 4-cloro-fenilo, 3,4-bisoximetilen-fenilo, 4-metiltiofenilo, 4-cianofenilo, 4-fenoxifenilo, quinolin-3-ilo y quinolin-6-ilo, isoquinolin-3-ilo e isoquinolin-6-ilo, 2-tienilo, 2-furanilo, metoxinaftilo y naftilo. Otro grupo R12 sustituido posible es 4-nitrofenilo. Los grupos R12 de interés particular incluyen 4-(4- metilpiperazin-1-il)fenilo y 3,4-bisoximetilen-fenilo.
Cuando R12 es alquilo alifático C1-5 saturado, puede ser metilo, etilo, propilo, butilo o pentilo. En algunas modalidades, puede ser metilo, etilo o propilo (n-pentilo o isopropilo). En algunas de estas modalidades, puede ser metilo. En otras modalidades, puede ser butilo o pentilo, los que pueden ser lineales o ramificados.
Cuando R12 es cicloalquilo C3-6 saturado, puede ser ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo. En algunas modalidades, puede ser ciclopropilo.
Cuando R12 es
Figure imgf000077_0001
cada uno de R21, R22 y R23 se selecciona de forma independiente de H, alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3 y ciclopropilo, en los que la cantidad total de átomos de carbono en el grupo R12 es menos de 5. En algunas modalidades, la cantidad total de átomos de carbono en el grupo R12 es no más de 4 o no más de 3.
En algunas modalidades, uno de R21, R22 y R23 es H, y los otros dos grupos se seleccionan de H, alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3 y ciclopropilo.
En otras modalidades, dos de R21, R22 y R23 son H, y el otro grupo se selecciona de H, alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3 y ciclopropilo.
En algunas modalidades, los grupos que no son H se seleccionan de metilo y etilo. En algunas de dichas modalidades, los grupos que no son H son metilo.
En algunas modalidades, R21 es H.
En algunas modalidades, R22 es H.
En algunas modalidades, R23 es H.
En algunas modalidades, R21 y R22 son H.
En algunas modalidades, R21 y R23 son H.
En algunas modalidades, R22 y R23 son H.
Un grupo R12 de interés particular es:
Figure imgf000077_0002
Cuando R12 es
Figure imgf000077_0003
uno de R25a y R25b es H y el otro se selecciona de: fenilo, dicho fenilo se encuentra opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de halo, metilo o metoxi, piridilo y tiofenilo. En algunas modalidades, el grupo que no es H es fenilo opcionalmente sustituido. Si el sustituyente opcional de fenilo es halo, preferentemente es flúor. En algunas modalidades, el grupo fenilo no se encuentra sustituido.
Cuando R12 es
Figure imgf000077_0004
R24 se selecciona de: H; alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3, ciclopropilo; fenilo, dicho fenilo se encuentra opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de halo, metilo, metoxi, piridilo y tiofenilo. Si el sustituyente opcional de fenilo es halo, preferentemente es flúor. En algunas modalidades, el grupo fenilo no se encuentra sustituido. En algunas modalidades, R24 se selecciona de H, metilo, etilo, etenilo y etinilo. En algunas de dichas modalidades, R24 se selecciona de H y metilo.
Cuando existe un enlace simple entre C2' y C3',
R12 es H o
Figure imgf000078_0001
donde R26a y R26b se seleccionan independientemente de H, F, alquilo C1-4 saturado, alquenilo C2-3, cuyos grupos alquilo y alquenilo están opcionalmente sustituidos por un grupo que se selecciona de alquilamido C1-4 y alquiléster C1-4; o, cuando uno de R26a y R26b es H, el otro se selecciona de nitrilo y un alquiléster C1-4;
En algunas modalidades, R12 es H.
En algunas modalidades, R12 es
Figure imgf000078_0002
En algunas modalidades, se prefiere que tanto R26a como R26b sean H.
En otras modalidades, se prefiere que tanto R26a como R26b sean metilo.
En modalidades adicionales, se prefiere que uno de R26a y R26b sea H y el otro se seleccione de alquilo C1-4 saturado y alquenilo C2-3, con los grupos alquilo y alquenilo opcionalmente sustituidos. En dichas modalidades adicionales, se puede preferir adicionalmente que el grupo que no sea H se seleccione de metilo y etilo.
R11b
En algunas modalidades, R11b es OH.
En algunas modalidades, R11b ORA, donde RA es alquilo C1-4. En algunas de estas modalidades, RA es metilo.
En algunas modalidades del primer aspecto de la presente invención son de fórmula Ia-1, Ia-2 o Ia-3:
Figure imgf000079_0001
Figure imgf000080_0001
En algunas modalidades de la presente invención de R2 y R12 comprenden no más de 3 átomos de carbono. Por lo tanto en algunas modalidades donde existe un enlace doble entre C2 y C3, R2 puede seleccionarse de: (i) Metilo;
(ii) Etilo;
(iii) Propilo;
(iv) Ciclopropilo;
(v)
Figure imgf000080_0002
(vi)
y
(vi)
Figure imgf000081_0001
Por lo tanto en algunas modalidades donde no existe un enlace doble entre C2 y C3, R2 puede seleccionarse de: (i) H;
(ii)
Figure imgf000081_0004
Por lo tanto en algunas modalidades donde existe un enlace doble entre C2' y C3', R12 puede seleccionarse de: (i) Metilo;
(ii) Etilo;
(iii) Propilo;
(iv) Ciclopropilo;
(v)
Figure imgf000081_0002
(vi)
Figure imgf000081_0003
y
(vi)
Figure imgf000082_0001
Por lo tanto en algunas modalidades donde no existe un enlace doble entre C2' y C3', R12 puede seleccionarse de: (i) H;
(ii)
Figure imgf000082_0002
(iii)
Figure imgf000082_0003
y
(iv)
Figure imgf000082_0004
En algunas de estas modalidades tanto R2 como R12 comprenden no más de 2 átomos de carbono.
Por lo tanto en algunas modalidades donde existe un enlace doble entre C2 y C3, R2 puede seleccionarse de: (i) Metilo;
(ii) Etilo; y
(vi)
Figure imgf000082_0005
Por lo tanto en algunas modalidades donde no existe un enlace doble entre C2 y C3, R2 puede seleccionarse de: (i) H;
(ii)
Figure imgf000082_0006
y
(iii)
Figure imgf000082_0007
Por lo tanto en algunas modalidades donde existe un enlace doble entre C2' y C3', R12 puede seleccionarse de: (i) Metilo;
(ii) Etilo; y
(vi)
Figure imgf000083_0001
Por lo tanto en algunas modalidades donde no existe un enlace doble entre C2' y C3', R12 puede seleccionarse de: (i) H;
(ii)
Figure imgf000083_0002
y
(iii)
Figure imgf000083_0003
En más de estas modalidades tanto R2 como R12 comprenden no más de 1 átomos de carbono.
Por lo tanto en algunas modalidades donde existe un enlace doble entre C2 y C3, R2 puede ser metilo. Por lo tanto en algunas modalidades donde no existe un enlace doble entre C2 y C3, R2 puede seleccionarse de:
(i) H; y
(ii)
Figure imgf000083_0004
Por lo tanto en algunas modalidades donde existe un enlace doble entre C2 y C3, R12 puede ser metilo. Por lo tanto en algunas modalidades donde no existe un enlace doble entre C2' y C3', R12 puede seleccionarse de:
(i) H; y
(ii)
Figure imgf000083_0005
Sin desear limitarse a una teoría en particular, donde el sustituyente en la posición C2 de los dímeros de PBD son pequeños, se cree que el uso de la unidad de terminación de glucurónido en estos enlazadores de fármaco es particularmente ventajoso, ya que aumenta significativamente la hidrofilicidad del enlazador de fármaco, lo que hace que los enlazadores de fármaco se conjuguen más fácilmente en una unidad de ligando.
Estas modalidades y preferencias también aplican al segundo aspecto de la invención.
Enlazador (RL)
En la presente invención, RL es un grupo de fórmula IIIa.
En la presente invención, RL es un grupo de fórmula IIIa'.
GL
GL se selecciona de
Figure imgf000084_0001
donde Ar representa un grupo arileno C5-6, por ejemplo, fenileno.
En algunas modalidades, GL se selecciona de GL1-1 y GL1-2 En algunas de estas modalidades, GL es GL1-1.
GLL se selecciona de:
Figure imgf000085_0002
donde Ar representa un grupo arileno C5-6, por ejemplo, fenileno.
En algunas modalidades, GLL se selecciona de GLL1-1 y GLL1-2. En algunas de estas modalidades, GLL es GLL1-1. X
X es:
Figure imgf000085_0001
donde a = 0 a 5, b = 0 a 16, c = 0 o 1, d = 0 a 5.
a puede ser 0, 1, 2, 3, 4 o 5. En algunas modalidades, a es 0 a 3. En algunas de estas modalidades, a es 0 o 1. En modalidades adicionales, a es 0.
b puede ser 0, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16. En algunas modalidades, b es 0 a 12. En algunas de estas modalidades, b es 0 a 8 y puede ser 0, 2, 4 o 8.
c puede ser 0 o 1.
d puede ser 0, 1, 2, 3, 4 o 5. En algunas modalidades, d es 0 a 3. En algunas de estas modalidades, d es 1 o 2. En modalidades adicionales, d es 2.
En algunas modalidades de X, a es 0, c es 1 y d es 2 y b puede ser de 0 a 8. En algunas de estas modalidades, b es 0, 4 o 8.
QX
En una modalidad, QX es un residuo de aminoácidos. El aminoácido puede ser un aminoácido natural o un aminoácido no natural.
En una modalidad, QX se selecciona de: Phe, Lys, Val, Ala, Cit, Leu, Ile, Arg y Trp, donde Cit es citrulina.
En una modalidad, QX comprende un residuo de dipéptido. Los aminoácidos en el dipéptido puede ser cualquier combinación de aminoácidos naturales y aminoácidos no naturales. En algunas modalidades, el dipéptido comprende aminoácidos naturales. Cuando el enlazador es un enlace lábil de catepsina, el dipéptido es el sitio de acción para la escisión mediada por catepsina. Entonces, el dipéptido es un sitio de reconocimiento para catepsina.
En una modalidad, QX se selecciona de:
CO-Phe-Lys-NH,
CO-Val-Ala-NH,
CO-Val-Lys-NH,
CO-Ala-Lys-NH,
CO-Val-Cit-NH,
CO-Phe-Cit-NH,
CO-Leu-Cit-NH,
CO-Ile-Cit-NH,
CO-Phe-Arg-NH, y
CO-Trp-Cit-NH;
donde Cit es citrulina.
Preferentemente, QX se selecciona de:
CO-Phe-Lys-NH,
CO-Val-Ala-NH,
CO-Val-Lys-NH,
CO-Ala-Lys-NH,
CO-Val-Cit-NH,
Más preferentemente, QX se selecciona de CO-Phe-Lys-NH, CO-Val-Cit-NH y CO-Val-Ala-NH.
Otras combinaciones de dipéptido de interés incluyen:
CO-Gly-Gly-NH,
CO-Pro-Pro-NH, y
CO-Val-Glu-NH.
Es posible utilizar otras combinaciones de dipéptido, que incluyen las descritas por Dubowchik et ál., Bioconjugate Chemistry, 2002, 13,855-869.
En algunas modalidades, QX es un residuo de tripéptido. Los aminoácidos en el tripéptido pueden ser cualquier combinación de aminoácidos naturales y aminoácidos no naturales. En algunas modalidades, el tripéptido comprende aminoácidos naturales. Cuando el enlazador es un enlace lábil de catepsina, el tripéptido es el sitio de acción para la escisión mediada por catepsina. Entonces, el tripéptido es un sitio de reconocimiento para catepsina.
En una modalidad, se protege químicamente la cadena lateral de aminoácidos cuando sea apropiado. El grupo protector de cadena lateral puede ser un grupo como se trata a continuación. Las secuencias de aminoácidos protegidas pueden escindirse mediante enzimas. Por ejemplo, una secuencia de dipéptido que comprende un residuo Lys protegido con cadena lateral Boc se puede escindir mediante catepsina.
Los grupos protectores para las cadenas laterales de aminoácidos son conocidos en la técnica y se describen en el catálogo Novabiochem, y como se describe anteriormente.
En el presente documento se divulga que RL es de fórmula IlIb.
En el presente documento se divulga que RLL es de fórmula IIIb'.
En el presente documento se divulga que RL1 y RL2 se seleccionan independientemente de H y metilo, o junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un grupo ciclopropileno o iciclobutileno.
En el presente documento se divulga que tanto RL1 y RL2 son H.
En el presente documento se divulga que RL1 es H y RL2 es metilo.
En el presente documento se divulga que tanto RL1 y RL2 son metilo.
En el presente documento se divulga que RL1 y RL2 junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un grupo ciclopropileno.
En el presente documento se divulga que RL1 y RL2 junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un grupo ciclobutileno.
En el grupo IIIb, en el presente documento se divulga que e es 0. En el presente documento se divulga que e es 1 y el grupo nitro puede estar en cualquier posición disponible del anillo. En el presente documento se divulga que se encuentra en la posición orto. En el presente documento se divulga que se encuentra en la posición para.
En una modalidad particular, el primer aspecto de la invención comprende un compuesto de fórmula Id:
Figure imgf000087_0001
Antecedentes adicionales
En un estudio de impacto presentado en el Marco de Excelencia de Investigación de 2014 (REF, por sus siglas en inglés) en el Reino Unido por University College London (disponible en http://impact.ref.ac.uk/casestudies2/refservice.svc/GetCaseStudvPDF/35393), se comentó que:
"Se ha desarrollado la siguiente generación de dímeros de PBD, que son más potentes que SG2000, inclusive SG2057 y SG2202. Exhiben una actividad picomolar/subpicomolar contra varias líneas celulares tumorales humanas y demuestran una actividad curativa en los modelos de xenoinjertos tumorales humanos" lo que hace referencia a: Hartley JA, et ál., DNA interstrand cross-linking and in vivo antitumor activity of the extended pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine dimer SG2057. Invest New Drugs. 30 de junio 2012; (3):950-8. http://dx.doi.orq/10.1007/s10637-011-9647-z (en adelante “Hartley et ál (2012)”) y:
"La capacidad para generar dichas moléculas citotóxicas que exhiban una potencia excelente sugiere un papel potencial en estrategias que apuntan al direccionamiento y liberación de agentes ampliamente citotóxicos en un sitio del tumor. Un ejemplo es el componente de "carga útil" de un conjugado de fármaco de anticuerpo (ADC, por sus siglas en inglés). Los dímeros de PBD totalmente sintéticos son idealmente adecuados para el rol de la carga útil en un enfoque de ADC".
El ensayo de Hartley et ál (2012) comenta en su resumen que "SG2057 es, por lo tanto, un agente antitumoral ampliamente activo, con una actividad in vitro más potente y una actividad in vivo superior a SG2000, lo que garantiza un desarrollo adicional".
El SG2057 tiene una estructura:
Figure imgf000088_0001
Los conjugados de fármaco de anticuerpo que utilizan SG2057 como una carga útil fueron descritos primero en WO 2011/130598. Por ejemplo, la reivindicación 54 de la presente solicitud incluye la fórmula:
Figure imgf000088_0002
donde n es de 1 a 24, más preferentemente 4 a 8. Los siguientes enlazadores de fármaco se ejemplifican: n=4, 15c; n=8, 15d; n=24, 15e.
La reivindicación 54 de la presente solicitud también incluye la fórmula:
Figure imgf000089_0001
donde n es de 1 a 24, más preferentemente 4 a 8. Los siguientes enlazadores del fármaco se ejemplifican: n=8, 58; n=24, 61.
WO 2011/130598 también se describen conjugados anticuerpo-fármaco que incluyen estos enlazadores de fármaco, por ejemplo, 110 (antiSteap1-15d), ejemplo 114 (tastuzumab-15d) y ejemplo 115 (tastuzumab-58).
WO 2013/055987 describe los enlazadores del fármaco 14 y 22:
Figure imgf000089_0003
y su uso en los conjugados anticuerpo-fármaco.
Más recientemente, la carga útil:
Figure imgf000089_0002
fue utilizada en los enlazadores de fármaco y conjugados anticuerpo-fármaco. WO 2014/057074 describe:
Figure imgf000090_0001
Los presentes inventores descubrieron sorprendentemente que aunque SG2000 es al menos 10 veces menos citotóxico que SG2057 (CWE Hartley et ál 2012), los conjugados anticuerpo-fármaco particulares parecen mostrar al menos una actividad comparable. Estos conjugados mostraron ser sorprendentemente bien tolerados en estudios de toxicidad en varias especies. Esto produce que los conjugados exhiban índices terapéuticos altos y, por lo tanto, son candidatos clínicos prometedores.
En algunas modalidades de la presente invención, el sustituyente C11 puede encontrarse en la siguiente disposición estereoquímica con respecto a los grupos cercanos:
Figure imgf000090_0002
En otras modalidades, el sustituyente C11 puede encontrarse en la siguiente disposición estereoquímica con respecto a los grupos cercanos:
Figure imgf000090_0003
Los compuestos de particular
Figure imgf000090_0004
Ejemplos
Se llevó a cabo cromatografía ultrarrápida mediante el uso de un Biotage Isolera 1™ usando una elución de gradiente que se inicia de 88 % de hexano/EtOAc o 99,9 % de DCM/MeOH hasta que todos los componentes activos ante UV (detección en 214 y 254 nm) sean eluidos de la columna. El gradiente se mantuvo manualmente cuando se observó la elución sustancial del material activo ante UV. Las fracciones se evaluaron para determinar la pureza mediante el uso de una cromatografía en capa fina (TLC) utilizando gel de sílice Merck Kieselgel 60 F254, con indicador fluorescente sobre placas de aluminio. La visualización de TLC se logró con luz UV o vapor de yodo a menos que se indique lo contrario. Los solventes de extracción y cromatografía se adquirieron y se utilizaron sin purificación adicional de VWR, Reino Unido. Todos los productos químicos finos se adquirieron de Sigma-Aldrich o TCI Europe a menos que se establezca lo contrario. Los reactivos pegilados se obtuvieron de Quanta biodesign US mediante Stratech UK.
Se obtuvieron los espectros de 1H y 13C NMR en un espectrómetro Bruker Avance® 400. Las constantes de acoplamiento se proporcionan en hertz (Hz). Los cambios químicos fueron registrados en partes por millón (ppm) posteriormente al tetrametilsilano. Se describen las multiplicidades de espín como s (singlete), bs (singlete amplio), d (doblete), t (triplete), y m (multiplete).
Las condiciones analíticas de LC/MS (para el monitoreo de la reacción y la determinación de la pureza) fueron de la siguiente manera: Se llevó a cabo una espectrometría de masa en electroespray en modo positivo mediante el uso de un Shimadzu Nexera®/Prominence® LCMS-2020. Las fases móviles utilizadas fueron el solvente A (H2O con 0,1 % de ácido fórmico) y el solvente B (CH3CN con 0,1 % de ácido fórmico). Gradiente para ejecución de rutina de 3 minutos. La composición inicial de B al 5 % se mantuvo durante 25 segundos, luego se aumentó de B al 5 % a B al 100 % durante un período de 1 minuto 35 segundos. La composición se mantuvo durante 50 segundos a B al 100 %, luego se regresó a B al 5 % en 5 segundos y luego se mantuvo ahí durante 5 segundos. La duración total de la ejecución de gradiente fue de 3,0 minutos. Gradiente para una ejecución de 15 minutos: la composición inicial B al 5 % durante 1 minuto, luego aumentó de B al 5 % a B al 100 % durante un período de 9 minutos. La composición se mantuvo durante 2 min a B al 100 %, luego se regresó a B al 5 % en 10 segundos y se mantuvo allí durante 2 minutos 50 segundos. La duración total de la ejecución de gradiente fue de 15,0 minutos. La velocidad de flujo fue de 0,8 ml/minuto (para una ejecución de 3 minutos) y 0,6 ml/minuto (para una ejecución de 15 minutos). La detección fue a 254 nm. Columnas: Waters Acquity UPLC® Be H Shield RP18 1,7 pm 2,1 x 50 mm a 50 °C equipada con Waters Acquity UPLC® BEH Shield RP18 VanGuard Pre-column, 130A, 1,7 pm, 2,1 mm x 5 mm (ejecución de rutina de 3 minutos); y ACE Exe 2 C18-AR, 2 p, 3,0 x 100 mm equipada con Waters Acquity UPLC® b EH Shield RP18 VanGuard Pre-colum, 130A, 1,7 pm, 2,1 mm x 5 mm (ejecución de 15 minutos).
Las condiciones del HPLC preparativas fueron las siguientes: Se llevó a cabo una cromatografía líquida de alto rendimiento ultrarrápida de fase inversa (UFLC, por sus siglas en inglés) en una máquina Shimazdzu Prominence® mediante una columna Phenomenex® Gemini NX 5p C18 (at 50 °C) de dimensiones: 150 x 21,2 mm. Los eluyentes utilizados fueron el solvente A (H2O con 0,1 % de ácido fórmico) y el solvente B (CH3CN con 0,1 % de ácido fórmico). Todos los experimentos de UFLC se llevaron a cabo con condiciones de gradiente: la composición inicial de B al 13 % aumentó a B al 60 % en un período de 15 minutos, luego aumentó a B al 100 % en 2 minutos. La composición se mantuvo durante 1 minuto a B al 100 %, luego regresó a B al 13 % en 0,1 minutos y se mantuvo ahí durante 1,9 minutos. La duración total de la ejecución de gradiente fue 20,0 minutos. La velocidad fue 20,0 ml/minuto y la detección fue a 254 y 280 nm.
Síntesis de intermedios clave
(a) Compuesto 5a
El siguiente compuesto 5a:
Figure imgf000091_0001
se sintetizó como se describe (para el compuesto 10) en Grinda, M., et ál. ChemMedChem 2011 (5), 2137-2141 (D0I:10.1002/cmdc.201100355).
Figure imgf000092_0001
Se obtuvo un derivado de prolina (I1) comercialmente disponible de Omegachem.
(i) 4-metilenopirrolidina-1,2-dicarboxilato de 2-metilo de (S)-l-terc-butilo (I2)
Se agregó carbonato de potasio (19,92 g, 14 mmol, 3,0 eq.) a una solución agitada de ácido carboxílico I1 (10,92 g, 48 mmol, 1,0 eq.) en DMF (270 ml). La suspensión blanca resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, punto en el cual se agregó yodometano (21,48 g, 9,5 ml, 151 mmol, 3,15 eq.). La mezcla de reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 3 días. Se quitó el DMF mediante evaporación rotatoria bajo presión reducida para proporcionar un residuo amarillo que se dividió entre etilacetato y agua. La capa orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con etilacetato. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, salmuera y se secaron sobre sulfato de magnesio. Se retiró el etilacetato mediante evaporación rotatoria bajo presión reducida para proporcionar el producto bruto como un aceite amarillo. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida [85 % de n-hexano/15 % de etilacetato] para proporcionar el producto como un aceite incoloro (10,74 g, 93 %).
(ii) Cloruro de (S)-2-(metoxicarbonil)-4-metilenopirrolidinio (I3)
Se agregó una solución de ácido clorhídrico 4 M en dioxano (63 ml, 254,4 mmol, 4,5 eq.) al fragmento I2 del anillo C protegido por Boc (13,67 g, 56,6 mmol, 1,0 eq.) a temperatura ambiente. Se observó efervescencia, lo que indica que se liberó CO2 y se quitó el grupo Boc. El producto se precipitó como un sólido blanco y se agregó dioxano adicional para facilitar la agitación de la mezcla de reacción se dejó agitar durante una hora y luego se diluyó con dietil éter. El producto precipitado se recolectó mediante filtración al vacío y se lavó con dietil éter adicional. El secado con aire proporcionó el producto deseado como un polvo blanco (9,42 g, 94 %).
(b) ((ProDano-1.3-diilbis(oxi))bis(2-amino-5-metoxi-4.1-fenileno))bis(((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-metilenoDirrolidin-1-il)metanona) ( I11 ) (i)
Figure imgf000092_0002
(i) 1 ’,3 ’-Bis[2-metoxi-4-(metoxicarbonil)fenoxi]propano (I5)
Se agregó azodicarboxilato de diisopropilo (71,3 ml, 73,2 g, 362 mmol) en gotas durante un período de 60 min a una solución con agitación suspendida de metil vanilato I4 (60 g, 329 mmol) y Ph3P (129,4 g, 494 mmol) en THF anhidro (800 ml) a 0-5 °C (hielo/acetona) bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se dejó agitar a 0-5 °C durante 1 h adicional luego de cuyo tiempo se agregó una solución de 1,3-propanodiol (11,4 ml, 120 g, 158 mmol) en THF (12 ml) en gotas durante un período de 20 minutos. La mezcla de reacción se dejó entibiar hasta temperatura ambiente y se agitó durante 5 días. El precipitado blanco resultante I3 se recolectó mediante filtración al vacío, se lavó con THF y se secó en un desecador de vacío hasta lograr un peso constante. Proporcionar = 54,68 (84 % en función de 1,3-propanodiol). Datos analíticos: Pureza satisfactoria mediante LC/MS 3,20 min (ES+) m/z (intensidad relativa) 427 ([M Na]+, 10); 1H NMR (400 MHz, CDh) 887,64 (dd, 2H, J = 1,8, 8,3 Hz), 7,54 (d, 2H, J = 1,8 Hz), 6,93 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 4,30 (t, 4H, J = 6,1 Hz), 3,90 (s, 6H), 3,89 (s, 6H), 2,40 (p, 2H, J = 6,0 Hz).
(ii) 1 ’,3 ’-Bis[2-metoxi-4-(metoxicarbonil)-5-nitrofenoxi]propano (I6)
Se agregó Cu(NO3^3H2O sólido (81,54 g, 337,5 mmol) lentamente a una suspensión con agitación suspendida del bis-éster I5 (54,68 g, 135 mmol) en anhídrido acético (650 ml) a 0-5 °C (hielo/acetona). La mezcla de reacción se dejó agitar durante 1 h a 0-5 °C y luego se dejó entibiar hasta temperatura ambiente. Se observó una exotermia suave (c.
40-50 °C), acompañada por un espesamiento de la mezcla y se observó la evolución de NO2 en esta etapa. Se agregó anhídrido acético adicional (300 ml) y la mezcla de reacción se dejó agitar durante 16 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se vertió en hielo (~1,5 L), se agitó y se dejó regresar a temperatura ambiente. El precipitado amarillo resultante se recolectó mediante filtración al vacío y se secó en un desecador para proporcionar el compuesto de bis-nitro deseado I6 como un sólido amarillo. Rendimiento = 66,7 g (100 %). Datos analíticos: Pureza satisfactoria por LC/MS 3,25 min (ES+) m/z (intensidad relativa) 517 ([M Na]+, 40); 1H NMR (400 MHz, CDCh) 57,49 (s, 2H), 7,06 (s, 2H), 4,32 (t, 4H, J= 6,0 Hz), 3,95 (s, 6H), 3,90 (s, 6H), 2,45-2,40 (m, 2H). Ver ref Thurston 1996.
(iii) 1 ’,3 ’-bis(4-carboxi-2-metoxi-5-nitrofenoxi)propano (I7)
Una suspensión de metil éster I6 (66,7 g, 135 mmol) en THF (700 ml) se trató con NaOH 1 N (700 ml) y la mezcla de reacción se dejó agitar vigorosamente a temperatura ambiente. Luego de 4 días de agitación, la suspensión se volvió una solución de color oscuro que se sometió a evaporación giratoria bajo presión reducida para eliminar el THF. El residuo acuoso resultante se acidificó hasta pH 1 con HCl concentrado y el precipitado incoloro I7 se recolectó y se secó profundamente en un horno de vacío (50 °C). Rendimiento = 54,5 g (87 %). Datos analíticos: Pureza satisfactoria por CL/EM 2,65 min (ES+) m/z (intensidad relativa) 489 ([M Na]+, 30); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 57,62 (s, 2H), 7,30 (s, 2H), 4,29 (t, 4H, J = 6,0 Hz), 3,85 (s, 6H), 2,30-2,26 (m, 2H).
(iv) 1,1’-(4,4’-(propano-1,3-diilbis(oxi))bis(5-metoxi-2-nitrobenzoil))(2S,2’S)-bis(4-metilenopirrolidina-2-carboxilato) de dimetilo (I8)
Se agregó una cantidad catalítica de DMF anhidro (2,4 ml) a una suspensión agitada de cloruro de oxalilo (14,7 g, 9,8 ml, 115,8 mmol, 3 eq.) y un núcleo de dímero I7 (18 g, 38,6 mmol, 1 eq.) en DCM anhidro (500 ml) a temperatura ambiente. Se observó efervescencia vigorosa luego de que se añadió DMF y la mezcla de reacción se dejó agitar por 18 horas en un matraz de fondo redondo que contenía un tubo de secado para cloruro de calcio. La solución resultante transparente se evaporó bajo presión reducida y el sólido se trituró con éter. El producto sólido se recolectó mediante filtración al vacío, se lavó con éter adicional y se secó al vacío a 40 °C durante 1,5 h. Este sólido se agregó luego en partes a una suspensión del anillo C 3 (15,1 g, 84,9 mmol, 2,2 eq.) y TEA (19,5 g, 27 ml, 119,6 mmol, 5 eq.) en DCM seco (375 ml), lo que mantuvo la temperatura entre -40 y -50 °C con la ayuda de un baño de hielo/acetonitrilo. La mezcla de reacción se dejó agitar a -40 °C durante 1 h y luego se dejó entibiar a temperatura ambiente, hasta el punto en el que la CLEM indicó el consumo total del material de partida. La mezcla de reacción se diluyó con DCM adicional y se lavó secuencialmente con ácido clorhídrico acuoso (1 M, 2 x 200 ml), bicarbonato de sodio saturado acuoso (2 x 250 ml), agua (250 ml), salmuera (250 ml), se secaron (MgSO4). Se quitó el DCM mediante evaporación rotatoria bajo presión reducida para proporcionar el producto como una espuma amarilla (25,72 g, 94 %). Datos analíticos: TA 1,59 min; MS (ES+) m/z (intensidad relativa) 713 ([M H]+-, 100).
(v) ((Propano-1,3-diilbis(oxi))bis(5-metoxi-2-nitro-4,1-fenileno))bis(((S)-2-(hidroximetil)-4-metilenpirrolidin-1-il)metanona) (19)
Se agregó borohidruro de litio sólido (3,18 g, 146 mmol, 3 eq.) en una parte a una solución del éster I8 (34,72 g, 48,7 mmol, 1 eq.) en THF seco (350 ml), en una atmósfera de nitrógeno a 0 °C (baño de hielo). La mezcla de reacción se dejó agitar a 0 °C por 30 minutos y luego se dejó entibiar a temperatura ambiente, hasta el punto en que se observó la precipitación de una goma naranja. La mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente por 2 horas adicionales y luego se enfrió en un baño de hielo y se trató con agua para proporcionar una suspensión amarilla. Se agregó cuidadosamente ácido clorhídrico (1 M) hasta que cesó la efervescencia. La mezcla de reacción se extrajo con etilacetato (x 4) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (x 1), salmuera (x 1) y se secó (MgSO4). Se eliminó etilacetato mediante la evaporación giratoria bajo presión reducida para proporcionar una espuma amarilla. Se obtuvo el producto como una espuma amarillo pálido (23,1 g, 72 %) mediante purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [elución de gradiente de DCM/MeOH al 0 % a 5 % en incrementos de 1 %]. Datos analíticos: TA 1,23 min; MS (ES+) m/z (intensidad relativa) 657 ([M H]+-, 100).
(vi) ((Propano-1,3-diilbis(oxi))bis(5-metoxi-2-nitro-4,1-fenileno))bis(((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-metilenopirrolidin-1-il)metanona) (I10)
Una solución del bis-alcohol I9 (10 g, 15,2 mmol, 1 eq.), t-butildimetilsilildoruro (5,97 g, 39,6 mmol, 2,6 eq.) e imidazol (5,38 g, 79 mmol, 5,2 eq.) en DMF seco (80 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se vertió en agua (500 ml) para proporcionar un precipitado amarillo. La mezcla se extrajo con DCM (4 x 100 ml) y los extractos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secó (MgSO4) y se evaporó bajo presión reducida para proporcionar un aceite amarillo viscoso. La purificación mediante cromatografía en columna [biotage isolera, elución de gradiente hexano al 60 %/EtOAc al 100 %, 8 volúmenes de columna 100 g de cartucho snap ultra®] proporciona el producto como una espuma amarilla (11,8 g, 88 %). Datos analíticos: TA 2,20 min; MS (ES+) m/z (intensidad relativa) 885 ([M H]+, 100), 907 ([M Na]+, 50)
(vii) ((Propano-1,3-diilbis(oxi))bis(2-amino-5-metoxi-4,1-fenileno))bis(((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-metilenopirrolidin-1-il)metanona) (I11)
Se activó polvo de cinc (31,9 g, 488 mmol, 40 eq.) mediante agitación/sonificación con HCl 1 M durante 10 min. El cinc se filtró mediante lavado con HCl 1 M, agua (x 3) y MeOH (x 2). El cinc activado se agregó a una solución del compuesto nitro-TBS I10 (10,8 g, 12,2 mmol, 1 eq.) en MeOH (88 ml) y una solución de 5 % de ácido fórmico/MeOH (440 ml). La temperatura aumentó hasta 37 °C y la mezcla de reacción cambió de una solución amarilla a incolora. Una vez que la exotermia disminuyó (20 min), la reacción mostró completarse mediante CLEM. Se filtró la mezcla de reacción a través de un lavado de célite con EtOAc. La parte de EtOAc se lavó con una solución de bicarbonato saturada (x 4) [¡cuidado efervescencia!], agua (x 1), salmuera (x 1), se secó (MgSO4) y se evaporó bajo presión reducida para proporcionar un sólido amarillo. La purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [n-hexanos/EtOAc 50/50 v/v con respecto a EtOAc 100 % en incrementos de 10 %] proporcionó el producto como una espuma amarilla (9,5 g, 86 %). Datos analíticos: TA2,12 min; MS (ES+) m/z (intensidad relativa) 825 ([M H]+, 60), 847 ([M Na]+, 30)
(c) Aloc-Val-Ala-PABOH (I16)
Figure imgf000094_0001
Se agregó cloroformiato de alilo (41 g, 36,2 ml, 0,34 mol, 1,2 eq.) en gotas a una solución agitada de L-valina I12 (33,25 g, 0,28 mol, 1 eq.) y el carbonato de potasio (58,9 g, 0,426 mol, 1,5 eq.) en agua (650 ml) y THF (650 ml). Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 18 h. El THF se evaporó bajo presión reducida y la solución restante se extrajo con dietil éter (o MTBE) (x 2). La parte acuosa se acidificó hasta pH 2 con HCl conc. y se extrajo con el DCM (x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (x 1), se secaron (MgSO4) y se evaporaron bajo presión reducida para proporcionar un aceite incoloro (57,1 g). Esto se utilizó en el siguiente paso sin purificación adicional.
(ii) Aloc-Val-OSu ( I14 )
A una solución agitada del compuesto I13 (57,1 g, 0,28 mol, 1 eq.) y N-hidroxisuccinimida (32,68 g, 0,28 mol, 1 eq.) en THF seco (800 ml) se le agregó diciclohexilcarbodiimida (58,6 g, 0,28 mol, 1 eq.). Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 18 h. Se filtró la mezcla de reacción. El sólido se lavó con THF y el filtrado combinado se concentró bajo presión reducida. El residuo aceite/sólido se redisolvió en DCM y se dejó reposar a 0 °C durante 30 min. La suspensión se filtró mediante lavado con DCM frío. La evaporación del filtrado bajo presión reducida proporcionó el éster de succinimida como un sólido blanco que se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
(iii) Aloc-Val-Ala-OH (I15)
Se agregó una solución de Alloc-Val-OSu I14 (11,67 g, 39,0 mmol, 1 eq.) en THF (50 ml) a una solución de H-Ala-OH (3,66 g, 41,08 mmoL, 1,05 eq.) y NaHCOa (3,61 g, 43,03 mmol, 1,1 eq.) en THF (100 ml) y H2O (100 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 72 h y el THF se evaporó bajo presión reducida. El pH se ajustó hasta 3-4 con ácido cítrico para precipitar una goma blanca. Esto se extrajo con etilacetato (6 x 150 ml) y los extractos combinados se lavaron con H2O (200 ml), salmuera (200 ml), se secó (MgSO4) y se evaporó bajo presión reducida para proporcionar un sólido blanco. La trituración con dietil éter (xs) proporcionó el producto puro como un polvo blanco (7,93 g, 74 %). Datos analíticos: TA 2,17 min; MS (ES+) m/z (intensidad relativa) 295 ([M Na]+, 63), 273 ([M 1]+, 60).
(iv) Aloc-Val-Ala-PABOH (I16)
Se agregó EEDQ (4,.79 g, 19,3 mmol, 1,05 eq.) a una solución de alcohol p-aminobencílico (2,38 g, 19,3 mmol, 1,05 eq.) y Alloc-Val-Ala-OH I15 (5,02 g, 18,4 mmol, 1,0 eq) en THF seco (100 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 72 h. El solvente se evaporó bajo presión reducida para proporcionar un sólido marrón pálido. El sólido se trituró con dietil éter y se filtró mediante lavado con un exceso de dietil éter. Esto proporcionó el producto como un sólido blanco (6,2 g, 89 %). Datos analíticos: TA 2,50 min; MS (ES+) m/z (intensidad relativa) 400,6 ([M Na]+, 50), 378,6 ([M 1]+, 60).
Ejemplo 1
Figure imgf000096_0001
Ċ
Figure imgf000097_0001
(a) (5-(3-(5-amino-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-metilenopirrolidina-1-carbonil)-2-metoxifenoxi)propoxi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-metilenopirrolidina-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamato de (9H-fluoren-9-il)metilo (3)
Se agregó FmocCl (1,97 g, 7,63 mmol) a una mezcla agitada de bis-anilina I11 (6,99 g, 8,48 mmol) y Na2CO3 (2,25 g, 21,2 mmol) en THF (65 ml) y H2O (65 ml). La mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 16 horas donde el análisis mediante LC/MS reveló el producto de Fmoc 3 mono deseado en un tiempo de retención de 2,34 minutos, I % = 40 ES+ m/z 1069 [M+ Na]+., 1047 [M+ H]+, junto con material de partida sin reacción en el tiempo de retención 2,15 minutos, I % = 12 y material de bis-Fmoc en el tiempo de retención 2,50 minutos, I % = 45, ES+ m/z 1291 [M+ Na]+., 1269 [M+ H]+. Las capas se separaron y la fase acuosa extraída con DCM (2 x 20 ml) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con H2O (30 ml), salmuera (50 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para brindar el producto bruto. La purificación mediante Isolera™ (Hexano/EtOAc, SNAP Ultra 50 g, 100 ml por minuto) proporcionó el producto 3 de Fmoc mono puro como una espuma anaranjada (2,67 g, 39 % de rendimiento en función de FmocCl, elución a 50 % hexano/EtOAc), bis-anilina 2 sin reacción (1,78 g, elución a 100 % de EtOAc) y bis-Fmoc (3,28 g, elución a 70 % de hexano/EtOAc).
(b) (5-(3-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carbonil)amino)-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-metilenopirrolidina-1-carbonil)-2-metoxifenoxi)propoxi)-2-((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oxi)metil)-4-metilenopirrolidina-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamato de (9H-fluoren-9-il)metilo (4)
Se agregó trifosgeno (26 mg, 86 jm ol) a una solución agitada del producto de Fmoc mono 3 (250 mg, 0,24 mmol) y TEA (73 |jl, 53 mg, 0,53 mmol) en DCM seco (10 ml) a temperatura ambiente. Luego de agitar durante 10 minutos en argón, el análisis de LC/MS reveló una conversión completa a isocianato (muestreada en MeOH para proporcionar carbamato de metilo, tiempo de retención de 2,39 minutos, ES+ m/z 1127 [M+ Na]+., 1105 [M+ H]+.). La mezcla se trató con TEA adicional (50 jl, 36 mg, 0,36 mmol) seguido de la adición del enlazador I16 (90 mg, 0,24 mmol). Luego de 4 horas con agitación en argón, el LC/MS reveló una conversión satisfactoria a carbamato 4 en el tiempo de retención de 2,34 minutos, ES+ m/z 1472 [M+ Na]+., 1451 [M+ H]+. La mezcla se diluyó con DCM (60 ml) y se lavó NH4Cl saturado acuoso (2 x 20 ml), H2O (20 ml), salmuera (30 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para proporcionar el producto en bruto. La purificación mediante Isolera™ (Hexano/EtOAc, SNAP Ultra 25 g, 75 ml por minuto) proporcionó el carbamato puro 4 (elución en 28 % hexanos/EtOAc) como una espuma amarilla (257 mg, 74 % de rendimiento).
(c) (5-(3-(5-amino-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-metilenopirrolidina-1-carbonil)-2-metoxifenoxi)propoxi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-metilenopirrolidina-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamato de 4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencilo (5)
Se agregó dimetilamina (16,5 ml de una solución 2,0 M en THF, 33,0 mmol) a una solución agitada del compuesto protegido de Fmoc 4 (2,39 g, 1,65 mmol) en THF (46 ml) a temperatura ambiente. Luego de agitar durante 1 hora a temperatura ambiente, el análisis de LC/MS reveló una terminación de la reacción con el producto deseado en el tiempo de retención de 2,17 minutos, ES+ m/z 1250 [M+ Na]+., 1228 [M+ H]+, junto con el subproducto de escisión de Fmoc en el tiempo de retención de 1,92 minutos y su aducto de DMA en el tiempo de retención de 1,10 minutos. La mezcla se evaporó al vacío para proporcionar el producto en bruto que fue purificado posteriormente mediante Isolera™ (Hexano/EtOAc, SNAp Ultra 100 g, 100 ml por minuto) para proporcionar la anilina pura 5 (elución a 100 % de EtOAc) como una espuma anaranjada (1,87 g, 92 % de rendimiento).
(d) (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((5-(3-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carbonil)amino)-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-metilenopirrolidina-1-carbonil)-2-metoxifenoxi)propoxi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-metilenopirrolidina-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamoil)oxi)metil)-2-nitrofenoxi)-3,4,5-tris(((aliloxi)carbonil)oxi)tetrahidro-2H-piran-2-carboxilato de alilo (6)
Se agregó trifosgeno (161 mg, 0,54 mmol) a una solución agitada de anilina 5 (1,85 g, 1,51 mmol) y piridina (269 pl, 263 mg, 3,32 mmol) en DCM seco (20 ml) a temperatura ambiente. Luego de agitar durante 10 minutos en argón, el análisis de LC/MS reveló una conversión completa a isocianato (muestreada en MeOH para proporcionar carbamato de metilo, tiempo de retención de 2,21 minutos, ES+ m/z 1308 [M+ Na]+., 1286 [M+ H]+.). La mezcla se trató con piridina adicional (183 pl, 179 mg, 2,27 mmol) y dilaurato de dibutiestaño (179 pl, 191 mg, 0,30 mmol) seguido de la adición del enlazador 5a (960 mg, 1,51 mmol). Luego de 20 horas con agitación en argón, el LC/MS reveló una conversión satisfactoria a carbamato 6 (tiempo de retención) de 2,25 minutos, ES+ m/z 1915 [M+ Na]+., 1892 [M+ H]+. La mezcla se diluyó con DCM (60 ml) y se lavó NH4O saturado (2 x 20 ml), H2O (20 ml), salmuera (30 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para proporcionar el producto en bruto. La purificación mediante Isolera™ (Hexano/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 ml por minuto) proporcionó el carbamato puro 6 (elución en 42 % hexanos/EtOAc) como una espuma amarilla (2,01 g, 70 % de rendimiento).
(e) (2S, 3S, 4S, 5R, 6S)-6-(4-((((5-(3-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carbonil)amino)-4-((S)-2-(hidroximetil)-4-metilenopirrolidina-1-carbonil)-2-metoxifenoxi)propoxi)-2-((S)-2-(hidroximetil)-4-metilenopirrolidina-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamoil)oxi)metil)-2-nitrofenoxi)-3,4,5-tns(((aliloxi)carbonil)oxi)tetrahidro-2H-piran-2-carboxilato de alilo (7)
Se agregó ácido acético glacial (18 ml) a una solución agitada del compuesto protegido por TBS 6 (2,12 g, 1,12 mmol) en THF (6 ml) y H2O (6 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar durante 18 horas a temperatura ambiente tiempo después del cual el análisis de LC/MS reveló una finalización de la reacción con el producto deseado observado en el tiempo de retención 1,79 minutos ES+ m/z 1663 [M+ H]+., 1686 [M+ Na]+. La mezcla de reacción se agregó en gotas a una solución saturada enfriada (0-5 °C) de NaHCO3 (300 ml). La solución neutra se dejó entibiar hasta temperatura ambiente y se extrajo con EtOAc (3 x 100 ml), las capas orgánicas combinadas se lavaron con H2O (50 ml), salmuera (50 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para brindar el producto bruto. La purificación mediante Isolera™ (DCM/MeOH, s Na P Ultra 100 g, 100 ml por minuto) proporcionó bi-alcohol 7 (elución en 93 % DCM/MeOH) como una espuma amarillenta (1,43 g, 77 % de rendimiento).
(f) (11S,11aS)-8-(3-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carbonil)-11-hidroxi-7-metoxi-2-metileno-5-oxo-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oxi)propoxi)-11-hidroxi-7-metoxi-2-metileno-5-oxo-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-pirrolo[2,1-c][]1,4]benzodiazepina-10(5H)-carboxilato de 4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-((aliloxi)carbonil)-3,4,5-tris(((aliloxi)carbonil)oxi)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)-3-nitrobencilo (8)
Se agregó IBX al 45 % (264 mg, 0,43 mmol) a una solución agitada del bis-OH 7 (300 mg, 0,18 mmol) en DMSO seco (5 ml). La mezcla se calentó hasta 30 °C bajo una atmósfera de argón y el progreso de la reacción se monitoreó mediante LC/MS. Luego de 24 horas de agitación, se agregó IBX (22 mg, 36 pmol) y la mezcla se agitó durante 24 horas adicionales. En este punto el análisis mediante LC/MS reveló de forma predominante un pico único correspondiente a un producto deseado en el tiempo de retención 1,78 minutos, ES+ m/z 1682 [M+ Na]+. La mezcla de reacción se vertió en agua (40 ml), se filtró y el precipitado se recolectó, se lavó con H2O (50 ml) y el filtrado se apartó. El residuo (precipitado) se lavó con DCM (120 ml) y el precipitado no disuelto restante se lavó con NaHCO3 ( 60 ml) saturado acuoso. Los filtrados combinados se transfirieron a un embudo individual y las capas se separaron. La fase acuosa se extrajo con DCM (2 x 20 ml) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO3 (2 x 50 ml) y salmuera (60 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se evaporaron al vacío para proporcionar el producto bruto. La purificación mediante Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 25 g, 75 ml por minuto) proporcionó el producto ciclado 8 (elución en 94,5 % DCM/MeOH) como una espuma blanca (261 mg, 87 % de rendimiento).
(g) Ácido ((2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S,11aS)-8-(3-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carbonil)-11-hidroxi-7-metoxi-2-metileno-5-oxo-2,3,5,10,11,11a-hexahydro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oxi)propoxi)-11-hidroxi-7-metoxi-2-metileno-5-oxo-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepina-10-carbonil)oxi)metil)-2-nitrofenoxi)-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-carboxílico ( 9 )
Se agregó Pd(PPh3)4 (18,2 mg, 15,7 |jmol) a una solución agitada de pirrolidina (72 jmol, 62 mg, 0,87 mmol) y el compuesto Aloc/alilo 8 (261 mg 0,16 mmol) en DCM seco (3 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar bajo una atmósfera de argón donde comenzó a formarse un precipitado. Luego de 30 minutos de agitación a temperatura ambiente el análisis mediante LC/MS reveló una terminación de la reacción con un producto deseado observado en el tiempo de retención 1,13 minutos ES+ m/z 1284 [M+ H]. El solvente se retiró mediante evaporación al vacío y el residuo resultante se trituró con dietil éter seguido de evaporación adicional al vacío para proporcionar la amina en bruto 9 como un sólido que se utilizó en el siguiente paso sin purificación o análisis adicional.
(h) Ácido (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S,11aS)-8-(3-(((11S,11aS)-10-(((4-((2S,5S)-37-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)-5-isopropil-2-metil-4,7,35-trioxo-10,13,16,19,22,25,28,31-octaoxa-3,6,34-triazaheptatriacontanamido)bencil)oxi)carbonil)-11-hidroxi-7-metoxi-2-metileno-5-oxo-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oxi)propoxi)-11-hidroxi-7-metoxi-2-metileno-5-oxo-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepina-10-carbonil)oxi)metil)-2-nitrofenoxi)-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-carboxíico (10)
Se agregó una solución de éster MAL-dPEG®8-TFP (132 mg, 0,18 mmol) en DCM seco (7 ml) a una muestra agitada de la amina 9 (202 mg, 0,16 mmol), piridina (24 jl, 23 mg, 0,3 mmol) y DMF (0,25 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar en argón durante 20 horas y comenzó a oscurecerse en color con el tiempo. El análisis mediante LC/MS reveló la formación de un producto deseado en el tiempo de retención 1,38 minutos , ES+) m/z 1857 [M+ H]+., 1880 [M+ Na]+, junto con una amina sin reacción en el tiempo de retención 1,13 minutos. Se agregó éster de MAL-dPEG®8-TFP adicional (66 mg, 0,09 mmol), pridina (12 jl, 11 mg, 0,15 mmol) y DCM (3 ml) y a mezcla se dejó agitar durante tres días adicionales. En este punto se formó una cantidad satisfactoria de producto deseado luego del análisis mediante LC/MS y el solvente se retiró mediante evaporación al vacío. El producto en bruto se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar la maleimida 10 como un sólido blanco (55 mg, 19 %): LC/MS (ejecución de 15 minutos), tiempo de retención 5,93 minutos, ES+ m/z 1857 [M+ H]+., 1880 [M+ Na]+.; 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 10,0 (br s, 2H), 8,25-8,12 (m, 1H), 7,99 (t, 1H, J = 5,7 Hz), 7,87 (d, 1H, J = 8,9 Hz), 7,73 (br s, 1H), 7,62-7,48 (m, 3H), 7,40 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,22-7,11 (m, 2H), 7,06 (s, 2H), 7,00 (s, 2H), 6,87 (s, 2H), 6,84-6,76 (m, 1H), 6,68-6,52 (m, 2H), 5,45-5,30 (m, 3H), 5,25-5,01 (m, 9H), 4,97-4,82 (m, 2H), 4,42-4,34 (m, 1H), 4,24-4,17 (m, 1H), 4,16-3,92 (m, 8H), 3,87-3,72 (m, 6H), 3,60 (t, 4H, J = 7,2 Hz), 3,54-3,42 (m, 30H), 3,39-3,20 (m, 5H), 3,18-3,12 (m, 2H), 2,95-2,82 (m, 2H), 2,57-2,35 (m, 4H), 2,33 (t, 2H, J = 7,4 Hz), 2,24-2,13 (m, 2H), 2,03-1,90 (m, 1H), 1,30 (d, 1H, J = 7,0 Hz), 0,87 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 0,83 (d, 3H, J = 6,7 Hz).
Ejemplo 2
Figure imgf000100_0001
Ċ
Figure imgf000101_0001
(a) (S)-(2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-il)(4-hidroxi-5-metoxi-2-nitrofenil)metanona (12)
Se agregó LiOAc (2,11 g, 20,7 mmol) a una solución agitada del compuesto de TIPS 11 (12 g, 20,7 mmol) en DMF (67 ml) y H2O (3 ml) a temperatura ambiente. Se observó un cambio de color de amarillo a rojo. Luego de 2 horas de agitación a temperatura ambiente el análisis mediante LC/MS reveló un conversión completa al producto deseado en el tiempo de retención 1,83 minutos, ES+ m/z 445 [M+ Na]+., 423 [M+ H]+. La mezcla se diluyó con H2O (300 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 150 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con ácido cítrico al 10 % p/v (2 x 200 ml), H2O ( 200 ml), salmuera ( 200 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se evaporaron al vacío para proporcionar el producto en bruto 12 como un sólido amarillo (8,74 g, 100 % de rendimiento). Pureza satisfactoria, por lo cual el material se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
(b) ((Pentano-1,5— diilbis(oxi))bis(5-metoxi-2-nitro-4,1-fenileno))bis(((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-il)metanona) (13)
Se agregó 1,5-diiodopentano (1,54 ml, 3,35 g, 10,4 mmol) a una solución agitada de fenol 12 (8,74 g, 20,7 mmol), TBAI (750 mg, 2,05 mmol) y K2CO3 (3,15 g, 22,8 mmol) en DMF seco (60 ml). La mezcla de reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó en una atmósfera de argón durante 16 horas punto en el cual el análisis mediante LC/MS reveló una formación del producto sustancial en el tiempo de retención 2,21 minutos, ES+ m/z 935 [M+ Na]+., 913 [M+ H]+. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y el DMF se retiró mediante evaporación al vacío. El residuo resultante se redisolvió en EtOAc (200 ml) y la fase acuosa se lavó con agua (3 x 40 ml), salmuera (50 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para proporcionar el producto en bruto. La purificación mediante Isolera™ (Hexano/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 ml por minuto) proporcionó el bis-éter 13 (elución en 60 % hexanos/EtOAc) como una espuma amarilla (6,75 g, 71 % de rendimiento).
(c) ((Pentano-1,5-diilbis(oxi))bis(2-amino-5-metoxi-4,1-fenileno))bis(((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-metil-2,3-dihidro- 1H-pirrol- 1-il)metanona) (14)
Se trató polvo de cinc (2,79 g, 42,8 mmol) con HCl (50 ml) 1 N y se agitó durante 10 minutos a temperatura ambiente.
La mezcla se sonificó durante 10 minutos y el cinc activado se recolectó mediante filtración al vacío en un sínter luego se lavó con HCL 1 N (25 ml), H2O (20 ml), MeOH (20 ml) y se secó al vacío en la almohadilla de filtración de sínter. El cinc activado se agregó a una solución agitada vigorosamente del compuesto bis-nitro 13 (974 mg, 1,07 mmol) en MeOH (15 ml) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se trató en gotas con una solución de 5 % v/v de HCO2H en MeOH (20 ml). Se observaron un cambio de color de verde a gris metálico y una exotermia hasta 37 °C. La mezcla de reacción se dejó enfriar hasta temperatura ambiente punto en el cual el análisis mediante LC/MS reveló un conversión completa al producto deseado en el tiempo de retención 2,19 minutos, ES+ m/z 875 [M+ Na]+., 853 [M+ H]+. La mezcla se filtró a través de celite® y la almohadilla se lavó con EtOAc (75 ml). El filtrado se lavó con NaHCO3 (3 x 20 ml) acuoso saturado, salmuera (50 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para proporcionar la bis-anilina en bruto 14 como una espuma anaranjada oscura (840 mg, 92 % de rendimiento). Pureza satisfactoria, por lo cual el material se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
(d) (9H-fluoren-9-il)metil(5-((5-(5-amino-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-carbonil)-2-metoxifenoxi)pentil)oxi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamato (15)
Se agregó FmocCl (1,50 g, 5,93 mmol) a una suspensión agitada de bis-anilina 14 (6,74 g, 7,91 mmol) y Na2CO3 (2,10 g, 19,8 mmol) en THF (40 ml) y H2O (40 ml). La mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 16 horas donde el análisis mediante LC/MS reveló un el producto de Fmoc 15 mono deseado en un tiempo de retención de 2,41 minutos, I % = 32 ES+ m/z 1098 [M+ Na]+., 1076 [M+ H]+, junto con material de partida sin reacción en el tiempo de retención 2,22 minutos, I % = 30 y material de bis-Fmoc en el tiempo de retención 2,60 minutos, I % = 36, ES+ m/z 1321 [M+ Na]+., 1298 [M+ H]+. La mezcla se dividió entre H2O (50 ml) y EtOAc (50 ml), las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con H2O (30 ml), salmuera (40 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para proporcionar el producto en bruto. La purificación mediante Isolera™ (Hexano/EtOAc, s Na P Ultra 100 g, 100 ml por minuto) proporcionó el producto 15 de Fmoc mono puro como una espuma anaranjada (2,43 g, 38 % de rendimiento en función de FmocCl, elución a 58 % hexanos/EtOAc), bis-anilina 14 sin reacción (3,06 g, elución a 40 % de EtOAc) y bis-Fmoc (2,32 g, elución a 74 % de hexano/EtOAc).
(e) (9H-fluoren-9-il)metil(5-((5-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carbonil)amino)-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-carbonil)-2-metoxifenoxi)pentil)oxi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamato ( 16 )
Se agregó trifosgeno (242 mg, 0,81 mmol) a una solución agitada del producto de Fmoc mono 15 (2,43 g, 2,26 mmol) y TEA (692 pl, 502 mg, 4,97 mmol) en DCM seco (30 ml) a temperatura ambiente. Luego de agitar durante 10 minutos en argón, el análisis de LC/MS reveló una conversión completa a isocianato (muestreada en MeOH para proporcionar carbamato de metilo, tiempo de retención de 2,38 minutos, ES+ m/z 1156 [m Na]+., 1133 [M+ H]+.). La mezcla se trató con TEA adicional (472 pl, 342 mg, 3,39 mmol) seguido de la adición del enlazador I16 (852 mg, 2,26 mmol). Luego de 3,5 horas con agitación en argón, el LC/MS reveló una conversión satisfactoria a carbamato 16 en el tiempo de retención de 2,33 minutos, ES+ m/z 1501 [M+ Na]+., 1479 [M+ H]+. La mezcla se diluyó con DCM (50 ml) y se lavó NH4Cl saturado acuoso (2 x 20 ml), salmuera (30 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para proporcionar el producto en bruto. La purificación mediante Isolera™ (Hexano/EtOAc, s Na P Ultra 100 g, 100 ml por minuto) proporcionó el carbamato puro 16 (elución en 46 % hexanos/EtOAc) como una espuma amarilla (2,26 g, 68 % de rendimiento).
(f) (5-((5-(5-amino-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-carbonil)-2-metoxifenoxi)pentil)oxi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamato de 4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencilo ( 17 )
Se agregó dimetilamina (15,0 ml de una solución 2,0 M en THF, 30,6 mmol) a una solución agitada del compuesto protegido de Fmoc 16 (2,26 g, 1,65 mmol) en THF (20 ml) a temperatura ambiente. Luego de agitar durante 1 hora a temperatura ambiente, el análisis de LC/MS reveló una terminación de la reacción con el producto deseado en el tiempo de retención de 2,17 minutos, ES+ m/z 1279 [M+ Na]+., 1257 [M+ H]+, junto con el subproducto de escisión de Fmoc en el tiempo de retención de 1,79 minutos y su aducto de DMA en el tiempo de retención de 0,97 minutos. La mezcla se evaporó al vacío para proporcionar el producto en bruto que fue purificado posteriormente mediante Isolera™ (Hexano/EtOAc, SNAp Ultra 100 g, 100 ml por minuto) para proporcionar la anilina pura 17 (elución a 18 % de Hexano/EtOAc) como una espuma anaranjada (1,94 g, 100% de rendimiento).
(g) Alil(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((5-((5-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carbonil)amino)-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsWl)oxi)metil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-carbonil)-2-metoxifenoxi)pentil)oxi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamoil)oxi)metil)-2-nitrofenoxi)-3,4,5-tris(((aliloxi)carbonil)oxi)tetrahidro-2H-piran-2-carboxilato (18)
Se agregó trifosgeno (165 mg, 0,55 mmol) a una solución agitada de anilina 17 (1,94 g, 1,54 mmol) y piridina (274 pl, 268 mg, 3,39 mmol) en DCM seco (20 ml) a temperatura ambiente. Luego de agitar durante 10 minutos en argón, el análisis de LC/MS reveló una conversión completa a isocianato (muestreada en MeOH para proporcionar carbamato de metilo, tiempo de retención de 2,21 minutos, ES+ m/z 1337 [M+ Na]+., 1315 [M+ H]+.). La mezcla se trató con piridina adicional (187 pl, 183 mg, 2,31 mmol) y dilaurato de dibutiestaño (179 pl, 191 mg, 0,30 mmol) seguido de la adición del enlazador 5a (984 mg, 1,54 mmol). Luego de 18 horas con agitación en argón, el LC/MS reveló una conversión satisfactoria a carbamato 18 en el tiempo de retención de 2,23 minutos, ES+ m/z 1942 [M+ Na]+., 1920 [M+ H]+. La mezcla se diluyó con DCM (30 ml) y se lavó NH4Cl saturado (2 x 20 ml), H2O (20 ml), salmuera (40 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para proporcionar el producto en bruto. La purificación mediante Isolera™ (Hexano/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 ml por minuto) proporcionó el carbamato puro 18 (elución en 43 % hexanos/EtOAc) como una espuma amarilla (2,17 g, 74 % de rendimiento).
(h) Alil(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((5-((5-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carboni)amino)-4-((S)-2-(hidroximetil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirrole-1-carbonil)-2-methoxifenoxi)pentil)oxi)-2-((S)-2-(hidroximetil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirrole-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamoil)oxi)metil)-2-nitrofenoxi)-3,4,5-tris(((aliloxi)carbonil)oxi)tetrahidro-2H-piran-2-carboxilato (19)
Se agregó ácido acético glacial (18 ml) a una solución agitada del compuesto protegido por TBS 18 (2,17 g, 1,13 mmol) en THF (6 ml) y H2O (6 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar durante 18 horas a temperatura ambiente tiempo después del cual el análisis de LC/MS reveló una finalización de la reacción con el producto deseado observado en el tiempo de retención 1,82 minutos ES+ m/z 1691 [M+ H]+., 1714 [M+ Na]+. La mezcla de reacción se agregó en gotas a una solución saturada enfriada (0-5 °C) de NaHCOa (300 ml). La solución neutral se dejó entibiar hasta temperatura ambiente y se extrajo con EtOAc (3 x 100 ml), las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para brindar el producto bruto. La purificación mediante Isolera™ (DCM/MeOH, SnAP Ultra 100 g, 100 ml por minuto) proporcionó bi-alcohol 19 (elución en 96,5 % DCM/MeOH) como una espuma blanca (1,31 g, 69 % de rendimiento).
(i) 4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-((aliloxi)carbonil)-3,4,5-tris(((aliloxi)carbonil)oxi)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)-3-nitrobencil(11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carbonil)-11-hidroxi-7-metoxi-2-metil-5-oxo-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oxi)pentil)oxi)-11-hidroxi-7-metoxi-2-metil-5-oxo-11,11a-dihidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepina-10(5H)-carboxilato (20)
Se agregó 45 % de IBX (269 mg, 0,43 mmol) a un solución agitada del bis-OH 19 (300 mg, 0,18 mmol) en DMSO seco (5 ml). La mezcla se calentó hasta 30 °C bajo una atmósfera de argón y el progreso de la reacción se monitoreó mediante LC/MS. Luego de 24 horas de agitación, se agregó IBX (22 mg, 36 pmol) y la mezcla se agitó durante 24 horas. En este punto el análisis mediante LC-/MS reveló la formación del producto en el tiempo de retención 1,79 minutos, ES+ m/z 1710 [M+ Na]+. La mezcla de reacción se agregó en gotas a una solución de NaHCO3 acuosa saturada (100 ml) y se extrajo con DCM (2 x 75 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO3 saturado acuoso (2 x 20 ml), H2O (30 ml), salmuera (40 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para proporcionar el producto en bruto. La purificación mediante Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 25 g, 75 ml por minuto) proporcionó el producto ciclado 11 (elución en 97,4 % DCM/MeOH) como una espuma blanca (136 mg, 46 % de rendimiento).
(j) Síntesis alternativa de 4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-((aliloxi)carbonil)-3,4,5-tris(((aliloxi)carbonil)oxi)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)-3-nitrobencil(11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carbonil)-11-hidroxi-7-metoxi-2-metil-5-oxo-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oxi)pentil)oxi)-11-hidroxi-7-metoxi-2-metil-5-oxo-11,11a-dihidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepina-10(5H)-carboxilato ( 20 )
Se agregaron TEMPO (6,6 mg, 42 pmol) y DAIB (125 mg, 0,39 mmol) a un solución agitada del bis-OH 19 (300 mg, 0,18 mmol) en DCM seco (15 ml) a temperatura ambiente. La mezcla agitada bajo una atmósfera de argón y el progreso de la reacción se monitoreó mediante LC/MS. Luego de 24 horas de agitación, se agregó TEMPO (6,6 mg, 42 pmol) y DAIB (25 mg, 78 pmol) y la mezcla se agitó durante otras 24 horas. En este punto el análisis mediante LC-/m S reveló la formación del producto en el tiempo de retención 1,79 minutos, ES+ m/z 1710 [M+ Na]+. La mezcla se diluyó con DCM (50 ml) y se lavó con tiosulfato de sodio acuoso saturado (40 ml), NaHCO3 (30 ml) saturado acuoso, salmuera (40 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para proporcionar el producto en bruto. La purificación mediante Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 25 g, 75 ml por minuto) proporcionó el producto ciclado 21 (elución en 96,5 % DCM/MeOH) como una espuma blanca (231 mg, 78 % de rendimiento).
(k) Ácido (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carbonil)-11-hidroxi-7-metoxi-2-metil-5-oxo-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oxi)pentil)oxi)-11-hidroxi-7-metoxi-2-metil-5-oxo-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepina-10-carbonil)oxi)metil)-2-nitrofenoxi)-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-carboxílico (21)
Se agregó Pd(PPh3)4 (15,8 mg, 13,7 pmol) a una solución agitada de pirrolidina (63 pl, 54 mg, 0,75 mmol) y el compuesto Aloc/alilo 20 (231 mg, 0,14 mmol) en DCM seco (4 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar bajo una atmósfera de argón donde comenzó a formarse un precipitado. Luego de 30 minutos de agitación a temperatura ambiente el análisis mediante LC/MS reveló una terminación de la reacción con un producto deseado observado en el tiempo de retención 1,18 minutos ES+ m/z 1312 [M+ H]+. El solvente se retiró mediante evaporación al vacío y el residuo resultante se trituró con dietil éter seguido de evaporación adicional al vacío para proporcionar la amina en bruto 12 como un sólido que se utilizó en el siguiente paso sin purificación o análisis adicional.
(l) Ácido (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(((4-((2S,5S)-37-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)-5-isopropil-2-metil-4,7,35-trioxo-10,13,16,19,22,25,28,31-octaoxa-3,6,34-triazaheptatriacontanamido)bencil)oxi)carbonil)-11-hidroxi-7-metoxi-2-metil-5-oxo-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oxi)pentil)oxi)-11-hidroxi-7-metoxi-2-metil-5-oxo-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepina-10-carbonil)oxi)metil)-2-nitrofenoxi)-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-carboxílico (22)
Se agregó una solución de éster MAL-dPEG®8-TFP (122 mg, 0,16 mmol) en DCM seco (5 ml) a una muestra agitada de la amina 21 (180 mg, 0,16 mmol), piridina (28 pl, 27 mg, 0,34 mmol) y DMF (0,25 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar en argón durante 20 horas y comenzó a oscurecerse en color con el tiempo. El análisis mediante LC/MS reveló la formación de un producto deseado en el tiempo de retención 1,43 minutos , ES- m/z 1884 [M- H]+., junto con una amina sin reacción en el tiempo de retención 1,18 minutos. Se agregó éster de MAL-dPEG®8-TFP adicional (66 mg, 0,09 mmol), pridina (12 pl, 11 mg, 0,15 mmol) y DCM (3 ml) y a mezcla se dejó agitar durante tres días adicionales. En este punto se formó una cantidad satisfactoria de producto deseado luego del análisis mediante LC/MS y el solvente se retiró mediante evaporación al vacío. El producto en bruto se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar la maleimida 22 como un sólido blanco (55 mg, 19 %): LC/MS (ejecución de 15 minutos), tiempo de retención 5,82 minutos, ES+ m/z 1886 [M+ H]+., 1908 [M+ Na]+.; 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) 89,98 (br s, 2H), 8,25-8,15 (m, 1H), 7,99 (t, 1H, J = 5,7 Hz), 7,87 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,69 (br s, 1H), 7,62-7,48 (m, 3H), 7,37 (d, 1H, J = 8,9 Hz), 7,21-7,09 (m, 2H), 7,04 (s, 1H), 7,03 (s, 1H), 6,98 (s, 2H), 6,79 (s, 1H), 6,74 (s, 1H), 6,72-6,65 (m, 2H), 6,62-6,58 (m, 2H), 5,63­ 5,50 (m, 2H), 5,41-5,32 (m, 2H), 5,25-5,05 (m, 4H), 4,93-4,80 (m, 2H), 4,41-4,32 (m, 1H), 4,23-4,16 (m, 1H), 4,00­ 3,90 (m, 4H), 3,87-3,72 (m, 6H), 3,70-3,60 (m, 2H), 3,58 (t, 4H, J = 7,2 Hz), 3,52-3,43 (m, 28H), 3,39-3,20 (m, 5H), 3,18-3,10 (m, 2H), 2,95-2,82 (m, 2H), 2,53-2,34 (m, 4H), 2,31 (t, 2H, J = 7,3 Hz), 1,99-1,90 (m, 1H), 1,82-1,68 (m, 4H), 1,73 (s, 6H), 1,60-1,47 (m, 2H), 1,28 (d, 1H, J = 7,0 Hz), 0,85 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 0,81 (d, 3H, J = 6,8 Hz).
Ejemplo 3
Figure imgf000105_0001
Ċ
Figure imgf000106_0001
El compuesto 23 es el compuesto 46 en WO2014/057074.
(a) (5S,5’S)-(4,4’-(Pentano-1,5-diilbis(oxi))bis(5-metoxi-2-nitrobenzoil))bis(5-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4,5-dihidro-1H-pirrol-1,3-diil)bis(trifluorometanosulfonato) (24)
Se agregó 2,6-lutidina (8,90 ml, 8,22 g, 76,7 mmol) anhidra con una jeringa a una solución agitada de bis-cetona 23 (5,41 g, 5,90 mmol) en DCM seco (200 ml) a -45 °C (hielo seco/acetonitrilo) en una atmósfera de argón. Luego se agregó anhídrido trifluorometanosulfónico anhidro (5,96 ml, 10,0 g, 35,5 mmol), tomado de una ampolla recién abierta, con una jeringa, mientras se mantiene la temperatura a -40 °C o inferior. La mezcla de reacción se dejó agitar a -45 °C durante 1 hora punto en el cual el análisis de LC/MS reveló una conversión al producto en el tiempo de retención 2,23 minutos, ES+ m/z 1203 [M+ Na]+., 1181 [M+ H]+. La mezcla de reacción fría se diluyó inmediatamente con DCM (200 ml) y se lavó con agua (1 x 200 ml), una solución de ácido cítrico al 5 % (2 x 200 ml), NaHCO3 (200 ml) acuoso saturado, salmuera (300 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para proporcionar un producto en bruto. La purificación mediante Isolera™ (Hexano/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 ml por minuto) el bis-enol triflato 3 (elución en 78% hexanos/EtOAc) como una espuma amarilla (5,02 g, 72 % de rendimiento).
(b) ((Pentano-1,5-diilbis(oxi))bis(5-metoxi-2-nitro-4,1-fenileno))bis(((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-(4-metoxifenil)-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-il)metanona) ( 25 )
Se agregó Pd(PPh3)4 (196 mg, 0,17 mmol) a una mezcla agitada del bis-enol triflato 24 (5,02 g, 4,25 mmol), ácido 4-metoxifenilborónico (1,68 g, 11,1 mmol), Na2CO3 (1,44 g, 13,6 mmol), EtOH (20 ml), tolueno (40 ml) y agua (20 ml). La mezcla de reacción se calentó a 30 °C y se agitó en una atmósfera de argón durante 3 horas luego de lo cual se observó una conversión completa al producto deseado mediante LC/MS, tiempo de retención 2,23 minutos, ES+ m/z 1120 [M+ Na]+., 1098 [M+ H]+. La mezcla de reacción se dividió entre EtOAc (200 ml) y H2O (100 ml) y la capa acuosa se extrajo con EtOac (3 x 30 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con H2O (2 x 50 ml), salmuera (50 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se evaporaron al vacío para proporcionar el producto en bruto. La purificación mediante Isolera™ (Hexano/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 ml por minuto) proporcionó un compuesto bis-C2-arilo 25 (elución a 63 % hexano/EtOAc) como una espuma amarillenta (3,11 g, 67 % de rendimiento).
(c) ((Pentano-1,5-diilbis(oxi))bis(2-amino-5-metoxi-4,1-fenileno))bis(((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-(4-metoxifenil)-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-il)metanona) ( 26 )
Se agregó cinc no activado (4,13 g, 63,1 mmol) a una solución agitada de forma vigorosa del compuesto bis-nitro 25 (1,73 g, 1,58 mmol) en EtOH (15 ml) y EtOAc (15 ml) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se trató con agua (1 ml) luego en gotas con una solución de 5 % v/v de HCO2H en MeOH (19 ml). Se observaron un cambio de color de verde a gris metálico y una exotermia de 40 °C. La mezcla de reacción se dejó enfriar hasta temperatura ambiente punto en el cual el análisis mediante LC/MS reveló un conversión completa al producto deseado en el tiempo de retención 2,19 minutos, ES+ m/z 1060 [M+ Na]+., 1038 [M+ H]+. La mezcla se filtró a través de celite® y la almohadilla se lavó con EtOAc (100 ml). El filtrado se lavó con NaHCO3 (3 x 50 ml) acuoso saturado [cuidado: ¡efervescencia!], salmuera (50 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para proporcionar la bis-anilina en bruto 26 como una espuma anaranjada oscura (1,56 g, 95 % de rendimiento). Pureza satisfactoria, por lo cual el material se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
(d) (9H-fluoren-9-il)metil(5-((5-(5-amino-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-(4-metoxifenil)-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-carbonil)-2-metoxifenoxi)pentil)oxi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-(4-metoxifenil)-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamato (27)
Se agregó FmocCl (1,22 g, 4,70 mmol) a una suspensión agitada de bis-anilina 26 (6,50 g, 6,27 mmol) y Na2CO3 (1,66 g, 15,7 mmol) en THF (32 ml) y H2O (32 ml). La mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 3 horas donde el análisis mediante LC/MS reveló un el producto de Fmoc 27 mono deseado en un tiempo de retención de 2,33 minutos, I % = 51 ES+ m/z 1282 [M+ Na]+., 1260 [M+ H]+., junto con material de partida sin reacción en el tiempo de retención 2,19 minutos, I % = 24 y material de bis-Fmoc en el tiempo de retención 2,47 minutos, I% = 24, ES+ m/z 1504 [M+ Na]+., 1482 [M+ H]+. La mezcla se dividió entre H2O (50 ml) y EtOAc (75 ml), las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 25 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con H2O (30 ml), salmuera (40 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se evaporaron al vacío para proporcionar el producto en bruto. La purificación mediante Isolera™ (Hexano/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 ml por minuto) proporcionó el producto 27 de Fmoc mono puro como una espuma anaranjada (3,31 g, 56 % de rendimiento en función de FmocCl, elución a 53 % hexanos/EtOAc), bis-anilina 26 sin reacción (2,09 g, elución a 40 % de EtOAc) y bis-Fmoc (1,39 g, elución a 68 % de hexano/EtOAc).
(e) (9H-fluoren-9-il)metil(5-((5-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carbonil)amino)-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-(4-metoxifenil)-2.3- dihidro-1H-pirrol-1-carbonil)-2-metoxifenoxi)pentil)oxi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-(4-metoxifenil)-2.3- dihidro-1H-pirrol-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamato (28)
Se agregó trifosgeno (281 mg, 0,81 mmol) a una solución agitada del producto de Fmoc mono 27 (3,31 g, 2,63 mmol) y TEA (805 pl, 584 mg, 5,79 mmol) en DCM seco (35 ml) a temperatura ambiente. Luego de agitar durante 10 minutos en argón, el análisis de LC/MS reveló una conversión completa a isocianato (muestreado en MeOH para proporcionar carbamato de metilo, tiempo de retención de 2,35 minutos, ES+ m/z 1340 [m Na]+., 1318 [M+ H]+.). La mezcla se trató con TEA adicional (549 pl, 398 mg, 3,95 mmol) seguido de la adición del enlazador I16 (992 mg, 2,63 mmol). Luego de 20 horas de agitación en argón, el LC/MS reveló una conversión al carbamato 28 deseado en el tiempo de retención 2,33 minutos, I % = 40, ES+ m/z 1685 [M+ Na]+., junto con el material escindido de Fmoc 29 en el tiempo de retención 2,19 minutos, I% = 28, ES+ m/z 1463 [M+ Na]+., 1441 [M+ H]+. La mezcla se diluyó con DCM (40 ml) y se lavó NH4Cl saturado acuoso (2 x 30 ml), salmuera (50 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para proporcionar el producto en bruto. La purificación mediante Isolera™ (Hexano/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 ml por minuto) proporcionó el carbamato puro 28 como una espuma amarilla (1,64 g, 38 % de rendimiento, elución de 40 % hexano/EtOAc) junto con el producto escindido de Fmoc 29 (1,31 g, elución en 20 % Hexano/EtOAc).
(f) (5-((5-(5-amino-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-(4-metoxifenil)-2,3-dihidro-1H-pirrole-1-carbonil)-2-metoxifenoxi)pentil)oxi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilyl)oxi)metil)-4-(4-metoxifenil)-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamato de 4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencilo (29)
Se agregó dimetilamina (9,9 ml de una solución 2,0 M en THF, 19,7 mmol) a una solución agitada del compuesto protegido de Fmoc 28 (1,64 g, 0,99 mmol) en THF (15 ml) a temperatura ambiente. Luego de agitar durante 1,5 hora a temperatura ambiente, el análisis de LC/MS reveló una terminación de la reacción con el producto deseado en el tiempo de retención de 2,19 minutos, ES+ m/z 1463 [M+ Na]+., 1441 [M+ H]+, junto con el subproducto de escisión de Fmoc y su aducto de DMA en el tiempo de retención de 0,97 minutos. La mezcla se evaporó al vacío para proporcionar el producto en bruto que fue purificado posteriormente mediante Isolera™ (Hexano/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 ml por minuto) para proporcionar la anilina pura 29 (elución a 20 % de Hexano/EtOAc) como una espuma anaranjada (1,36 g, 96 % de rendimiento).
(g) Alil(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((5-((5-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carbonil)amino)-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-(4-metoxifenil)-2.3- dihidro-1H-pirrol-1-carbonil)-2-metoxifenoxi)pentil)oxi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-(4-metoxifenil)-2.3- dihidro-1H-pirrol-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamoil)oxi)metil)-2-nitrofenoxi)-3,4,5 trís(((aliloxi)carbonil)oxi)tetrahidro-2H-piran-2-carboxilato (30)
Se agregó trifosgeno (198 mg, 0,67 mmol) a una solución agitada de anilina 29 (2,67 g, 1,85 mmol) y piridina (329 pl, 322 mg, 4,07 mmol) en DCM seco (25 ml) a temperatura ambiente. Luego de agitar durante 10 minutos en argón, el análisis de LC/MS reveló una conversión completa a isocianato (muestreada en MeOH para proporcionar carbamato de metilo, tiempo de retención de 2,22 minutos, ES+ m/z 1521 [M+ Na]+., 1499 [M+ H]+.). La mezcla se trató con piridina adicional (224 pl, 220 mg, 2,78 mmol) y dilaurato de dibutiestaño (219 pl, 234 mg, 0,37 mmol) seguido de la adición del enlazador 5a (1,18 g, 1,85 mmol). Luego de 16 horas de agitación bajo argón, el LC/MS reveló un consumo de isocianato y una disminución en la intensidad de señal para el enlazador 5a, pero no para M2+ para el producto deseado en el tiempo de retención 2,23 minutos. La mezcla se diluyó con DCM (30 ml) y se lavó NH4Cl saturado (2 x 30 ml), salmuera (40 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para proporcionar el producto en bruto. La purificación mediante Isolera™ (Hexano/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 ml por minuto) proporcionó el carbamato puro 30 (elución en 39 % hexanos/EtOAc) como una espuma amarilla (2,40 g, 62 % de rendimiento).
(h) Alil(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((5-((5-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carbonil)amino)-4-((S)-2-(hidroximetil)-4-(4-metoxifenil)-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-carbonil)-2-metoxifenoxi)pentil)oxi)-2-((S)-2-(hidroximetil)-4-(4-metoxifenil)-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamoil)oxi)metil)-2-nitrofenoxi)-3,4,5-tris(((aliloxi)carbonil)oxi)tetrahidro-2H-piran-2-carboxilato (31)
Se agregó ácido acético glacial (21 ml) a una solución agitada del compuesto protegido por TBS 30 (2,40 g, 1,14 mmol) en THF (7 ml) y H2O (7 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar durante 16 horas a temperatura ambiente tiempo después del cual el análisis de LC/MS reveló una finalización de la reacción con el producto deseado observado en el tiempo de retención 1,88 minutos ES+ m/z 1876 [M+ H]+., 1898 [M+ Na]+. La mezcla de reacción se agregó en gotas a una solución saturada enfriada (0-5 °C) de NaHCOa (350 ml). La solución neutra se dejó entibiar hasta temperatura ambiente y se dividió con EtOAc (200 ml). La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml) y las capas orgánicas combinados se lavaron con NaHCO3 (2 x 60 ml), salmuera (70 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se evaporaron al vacío para proporcionar el producto bruto. La purificación mediante Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 100 g, 100 ml por minuto) proporcionó bi-alcohol 31 (elución en 95,6 % DCM/MeOH) como una espuma amarillenta (2,07 g, 97 % de rendimiento).
(i) 4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-((aliloxi)carbonil)-3,4,5-tris(((aliloxi)carbonil)oxi)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)-3-nitrobencil(11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanomido)bencil)oxi)carbonil)-11-hidroxi-7-metoxy-2-(4-metoxifenil)-5-oxo-5,10,11,11atetrahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oxy)pentil)oxi)-11-hidroxi-7-metoxi-2-(4-metoxyfenil)-5-oxo-11,11adihidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepina-10(5H)-carboxilato (32)
Se agregó Cu(NCCHa)4^CFaSO3 (2 mg, 5,3 pmmol) a una solución agitada del bis-OH 31 (100 mg, 53 pmmol) y la solución de TEMPO con oxidación aeróbica de Stahl TEMPO (27 pl de una solución 0,2 M de CH3CN, 5,3 pmmol) en CH3CN (1 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar en una atmósfera de aire (globo) durante 3 horas, punto en el cual el análisis mediante LC/MS no reveló un cambio evidente en el tiempo de retención o ES+. Se agregaron Cu(NCCH3)4^CFaSO3 (2 mg, 5,3 pmmol) adicional y una solución de TEMPO con oxidación aeróbica de Stahl (27 pl de una solución 0,2 M en CH3CN, 5,3 pmmol) y la mezcla de reacción se dejó agitar durante 16 horas adicionales. El análisis de LC/MS nuevamente no reveló ningún cambio en el tiempo de retención, sin embargo, el ES+ mostró una ausencia del material de partida m/z y una fuerte presencia del producto deseado m/z 1894 [M+ Na]+. El solvente se retiró mediante evaporación al vacío y el residuo resultante se purificó mediante Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 10 g, 36 ml por minuto) proporcionó el producto ciclado 32 (elución en 96,2 % DCM/MeOH) como una espuma blanca (91 mg, 92 % de rendimiento).
(j) Ácido (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carbonil)-11-hidroxi-7-metoxi-2-(4-metoxifenil)-5-oxo-5,10,11,11atetrahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oxi)pentil)oxi)-11-hidroxi-7-metoxi-2-(4-metoxifenil)-5-oxo-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepina-10-carbonil)oxi)metil)-2-nitrofenoxi)-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-carboxílico ( 33 )
Se agregó Pd(PPh3)4 (15,0 mg, 12,8 pmol) a una solución agitada de pirrolidina (59 pl, 50 mg, 0,70 mmol) y el compuesto Aloc/alilo 32 (240 mg, 0,13 mmol) en DCM seco (5 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar en una atmósfera de argón, luego de 30 minutos de agitación a temperatura ambiente el análisis mediante LC/MS reveló una terminación de la reacción con un producto deseado observado en el tiempo de retención 1,31 minutos ES+ m/z 1496 [M+ H]+. El solvente se retiró mediante evaporación al vacío y el residuo resultante se trituró con dietil éter, sonificado, seguido por una evaporación adicional al vacío para proporcionar la amina en bruto 33 como un sólido amarillo que se llevó a cabo a través de la siguiente etapa sin una purificación o análisis adicional.
(k) Ácido (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(((4-((2S,5S)-37-(2,5-dioxo-2,5-dihidro- 1H-pirrol-1-il)-5-isopm pil-2-m etil-4J,35-trioxo-W ,13,16,19,222528,31-octaoxa-3,6,34-triazaheptatriacontanamido)bencil)oxi)carbonil)-11-hidroxi-7-metoxi-2-(4-metoxifenil)-5-oxo-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oxi)pentil)oxi)-11-hidroxi-7-metoxi-2-(4-metoxifenil)-5-oxo-5,10,11,11atetrahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepina-10-carbonil)oxi)metil)-2-nitrofenoxi)-3,4,5-tríhidroxitetrahidro-2H-piran-2-carboxílico ( 34 )
Se agregó una solución de éster MAL-dPEG®8-TFP (114 mg, 0,15 mmol) en DCM seco (5 ml) a una muestra agitada de la amina 33 (191 mg, 0,13 mmol) y piridina (26 pl, 25 mg, 0,32 mmol). La mezcla de reacción se dejó agitar en argón durante 20 horas y comenzó a oscurecerse en color con el tiempo. El análisis mediante LC/MS reveló una formación del producto deseado en el tiempo de retención 1,59 minutos (m/z deseado para M2+ no detectado durante el monitoreo de la reacción) junto con una amina sin reacción en el tiempo de retención 1,31 minutos. Se agregó éster de MAL-dPEG®8-TFP adicional (114 mg, 0,15 mmol), pridina (26 pl, 25 mg, 0,32 mmol) y DCM (3 ml) y la mezcla se dejó agitar durante seis días adicionales. En este punto, se formó una cantidad satisfactoria de producto deseado luego del análisis mediante LC/MS y el solvente se retiró mediante evaporación al vacío. El producto en bruto se purificó mediante Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 10 g, 36 ml por minuto, con elución de 82 % DCM/MeOH) seguido por HPLC preparativa para proporcionar la maleimida 34 como un sólido apenas amarillo (46 mg, 13 %). LC/MS (ejecución de 15 minutos), tiempo de retención 6,71 minutos, ES+ m/z 1036 [M2+.+ H], 1058 [M2++ Na], 1046 [M+ Na] 2+; 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) 810,02 (br s, 2H), 8,27-8,16 (m, 1H), 8,01 (t, 1H, J = 5,6 Hz), 7,90 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,72 (br s, 1H), 7,60-7,51 (m, 3H), 7,46-7,38 (m, 5H), 7,23-7,15 (m, 2H), 7,11 (s, 1H), 7,09 (s, 1H), 6,99 (s, 2H), 6,92 (d, 2H, J = 8,9 Hz), 6,91 (d, 2H, J = 8,9 Hz), 6,88-6,77 (m, 6H), 5,70-5,60 (m, 2H), 5,39-5,33 (m, 2H), 5,24-5,09 (m, 4H), 4,96-4,81 (m, 2H), 4,42-4,34 (m, 1H), 4,24-4,17 (m, 1H), 4,04-3,93 (m, 4H), 3,87-3,79 (m, 8H), 3,77 (s, 6H), 3,59 (t, 4H, J = 7,3 Hz), 3,52-3,46 (m, 28H), 3,40-3,26 (m, 7H, oscurecido por H2O), 3,19-3,11 (m, 2H), 2,95-2,82 (m, 2H), 2,53-2,31 (m, 4H), 2,02-1,92 (m, 1H), 1,86-1,73 (m, 4H), 1,62-1,52 (m, 2H), 1,30 (d, 1H, J = 7,0 Hz), 0,87 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 0,83 (d, 3H, J = 6,8 Hz).
Ejemplo 4
Figure imgf000110_0001
Ċ
Figure imgf000111_0001
(a) 4,4’-((1,3-fenilenebis(metilen))bis(oxi))bis(5-metoxi-2-nitrobenzaldehído) (36)
Se agregó 1,3-bis(bromometil)benceno (5,0 g, 19,1 mmol) a una solución agitada del fenol 35 (7,5 g, 38,2 mmol), TBAI (705 mg, 1,91 mmol) y K2CO3 (5,81 g, 42,0 mmol) en DMF seco (60 ml). La mezcla de reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó en una atmósfera de argón durante 2 horas punto en el cual el análisis mediante LC/MS reveló una formación del producto sustancial en el tiempo de retención 1,67 minutos, ES+ m/z 519 [M+ Na]+., 497 [M+ H]+. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y luego se retiró el DMF mediante evaporación al vacío. El residuo resultante se diluyó con agua (300 ml) y el precipitado anaranjado 36 recolectado mediante filtración al vacío, luego se lavó con H2O, dietil éter y se secó en un horno de vacío hasta obtener un peso constante (9,18 g, 97 % de rendimiento).
(b) 4,4’-((1,3-fenilenebis(metileno))bis(oxi))bis(áddo 5-metoxi-2-nitrobenzoico) (37)
Una solución de clorito de sodio (8,44 g, 92,7 mmol, 80 % de grado técnico) y dihidrogenofosfato de sodio monobásico (6,2 g, 51,8 mmol) y agua (140 ml) se agregó a una solución de aldehido 36 (9,18 g, 18,5 mmol) en tetrahidrofurano (100 ml) a temperatura ambiente. Se agregó inmediatamente peróxido de hidrógeno (30 % p/p, 53 ml, 518 mmol) en gotas a la mezcla bifásica agitada de forma vigorosa. Se observaron efervescencia y una exotermia a 30 °C junto con un cambio de color de anaranjado a amarillo pálido y una disolución de la suspensión. La mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo y se acidificó hasta pH 2 con ácido clorhídrico concentrado. La mezcla de reacción se extrajo luego con EtOAc (4 x 150 ml) y la fase orgánica combinada se lavaron con salmuera (2 x 100 ml), se secaron (MgSO4), filtraron y evaporaron al vacío para proporcionar el ácido en bruto 37. El sólido se trituró con dietiléter y se secó en un horno de vacío hasta obtener un peso constante (9,90 g, >100 % de rendimiento). Pureza satisfactoria mediante LC/MS (tiempo de retención 1,56 minutos, ES- m/z 527 [M+ H]+.).
(c) (((1,3-fenilenobis(metileno))bis(oxi))bis(5-metoxi-2-nitro-4,1-fenileno))bis(((S)-2-(hidroximetil)pirrolidin-1-il)metanona) (38)
Se agregó DMF (12 gotas) a una suspensión agitada del ácido bis-nitrobenzoico 37 (9,90 g, 18,7 mmol) y cloruro de oxalilo (4,9 ml, 7,1 g, 56,3 mmol) en d Cm anhidro (130 ml). Luego de la efervescencia inicial, la suspensión de reacción se volvió una solución y la mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 16 horas. La mayoría del solvente se retiró mediante evaporación al vacío y la solución concentrada se trituró con dietil éter. El precipitado amarillo resultante (LC/MS muestreado en MeOH proporcionó éster de metilo en el tiempo de retención 1,69 minutos, ES+ m/z 579 [M+ Na]+.) se recolectó mediante filtración al vacío, se lavó con dietil éter frío y se secó durante 1 hora en un horno al vacío a 40 °C. El cloruro ácido sólido se agregó en partes a una suspensión agitada de (S)-(+)-2-pirrolidinametanol (4,35 g, 4,25 ml, 43,0 mmol) y TEA (13,0 ml, 9,46 g, 93,5 mmol) en DCM (100 pl) a -40 ° C (hielo seco/CHaCN). Luego de 1 hora de agitación, la reacción se completó como se consideró mediante LC/MS con exclusivamente el producto deseado en el tiempo de retención 1,44 minutos, ES+ m/z 717 [M+ Na]+., 695 [M+ H]+. La mezcla se diluyó con DCM (100 ml) y se lavó con HCl 1 N (3 x 50 ml), NaHCO3 (3 x 40 ml) saturado, salmuera (70 ml), se secó (MgSO4), se filtró y el solvente se evaporó al vacío para proporcionar el producto puro 38 como un sólido amarillo (12,7 g, 100 % de rendimiento).
(d) (((1,3-fenilenebis(metileno))bis(oxi))bis(5-metoxi-2-nitro-4,1-fenileno))bis(((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oxi)metil)pirrolidin-1-il)metanona) (39)
Se agregó TBSCI (8,27 g, 54,9 mmol) a una solución agitada de bis-alcohol 38 (12,7 g, 18,3 mmol) e imidazol (7,47 g, 110 mmol) en DCM seco (100 ml). Luego de agitación a temperatura ambiente durante 1,5 horas, el análisis mediante LC/MS reveló un conversión completa al producto deseado en el tiempo de retención 2,11 minutos, ES+ m/z 946 [M+ Na]++., 924 [M+ H]+. La mezcla se diluyó con DCM (100 ml) y se lavó con agua (2 x 75 ml), salmuera (80 ml), se secó (MgSO4), se filtró y el solvente se evaporó al vacío para proporcionar el producto en bruto 39 como un sólido amarillo (16,7 g, 99 % de rendimiento). El material fue suficientemente puro para utilizar en la siguiente etapa sin purificación adicional.
(e) (((1,3-fenilenobis(metileno))bis(oxi))bis(2-amino-5-metoxi-4,1-fenilen))bis(((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oxi)metil)pirrolidin-1-il)metanona) (40)
Se agregó cinc no activado (18,5 g, 282 mmol) a una solución agitada de forma vigorosa del compuesto bis-nitro 39 (6,50 g, 7,10 mmol) en EtOH (65 ml) y EtOAc (65 ml) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se trató con agua (6,5 ml) luego en gotas con una solución de 5 % v/v de HCO2H en EtOH (130 ml). Se observaron un cambio de color de verde a gris metálico y una exotermia de 37 °C. La mezcla de reacción se dejó enfriar hasta temperatura ambiente punto en el cual el análisis mediante LC/MS reveló un conversión completa al producto deseado en el tiempo de retención 2,04 minutos, ES+ m/z 885 [M+ Na]+., 863 [M+ H]+. La mezcla se filtró a través de celite® y la almohadilla se lavó con EtOAc (200 ml). El filtrado se lavó con NaHCO3 (3 x 100 ml) acuoso saturado [cuidado: ¡efervescencia!], salmuera (150 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para proporcionar la bis-anilina en bruto 40 como una espuma anaranjada oscura (5,41 g, 89% de rendimiento). Pureza satisfactoria, por lo cual el material se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
(f) (9H-fluoren-9-il)metil (5-((3-((5-amino-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)pirrolidina-1-carbonil)-2-metoxidenoxi)metil)bencil)oxi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)pirrolidina-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamato (41)
Se agregó FmocCl (1,43 g, 5,50 mmol) a una suspensión agitada de bis-anilina 40 (6,34 g, 7,35 mmol) y Na2CO3 (1,95 g, 18,4 mmol) en THF (32 ml) y H2O (32 ml). La mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 2 horas donde el análisis mediante LC/MS reveló un el producto de Fmoc 41 mono deseado en un tiempo de retención de 2,24 minutos, I% = 41 ES+ m/z 1108 [M+ Na]+., 1086 [M+ H]+., junto con material de partida sin reacción en el tiempo de retención 2,03 minutos, I % = 19 y material de bis-Fmoc en el tiempo de retención 2,39 minutos, I% = 40, ES+ m/z 1330 [M+ Na]+., 1308 [M+ H]+. La mezcla se dividió entre H2O (50 ml) y EtOAc (50 ml), las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con H2O (30 ml), salmuera (50 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para proporcionar el producto en bruto. La purificación mediante Isolera™ (heptano/EtOAc, s Na P Ultra 100 g, 100 ml por minuto) proporcionó el producto 41 de Fmoc mono puro como una espuma anaranjada (2,40 g, 40 % de rendimiento en función de FmocCl, elución a 30 % heptano/EtOAc), bis-anilina 40 sin reacción (1,72 g, elución a 100 % de EtOAc) y bis-Fmoc (1,95 g, elución a 69 % de heptano/EtOAc).
(g) (9H-fluoren-9-il)metil(5-((3-((5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carbonil)amino)-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)pirrolidina-1carbonil)-2-metoxifenoxi)metil)benál)oxi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)pirrolidina-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamato (42)
Se agregó trifosgeno (236 mg, 0,80 mmol) a una solución agitada del producto de Fmoc mono 41 (2,40 g, 2,21 mmol) y TEA (676 pl, 491 mg, 4,86 mmol) en DCM seco (30 ml) a temperatura ambiente. Luego de agitar durante 10 minutos en argón, el análisis de LC/MS reveló una conversión completa a isocianato (muestreada en MeOH para proporcionar carbamato de metilo, tiempo de retención de 2,27 minutos, ES+ m/z 1166 [M+ Na]+., 1144 [M+ H]+.). La mezcla se trató con TEA adicional (461 pl, 335 mg, 3,32 mmol) seguido de la adición del enlazador I16 (835 mg, 2,21 mmol). Luego de 2,5 horas con agitación en argón, el LC/MS reveló una conversión satisfactoria a carbamato 9 en el tiempo de retención de 2,24 minutos, ES+ m/z 1511 [M+ Na]+., 1489 [M+ H]+. La mezcla se diluyó con DCM (50 ml) y se lavó NH4Cl saturado acuoso (2 x 40 ml), salmuera (50 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para proporcionar el producto en bruto. La purificación mediante Isolera™ (heptano/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 ml por minuto) proporcionó el carbamato puro 42 (elución en 38 % heptano/EtOAc) como una espuma amarilla (2,40 g, 73 % de rendimiento).
(h) 4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil (5-((3-((5-amino-4-((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oxi)metil)pirrolidina-1-carbonil)-2-metoxifenoxi)metil)bencil)oxi)-2-((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oxi)metil)pirrolidina-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamato (43)
Se agregó dimetilamina (16,1 ml de una solución 2,0 M en THF, 32,2 mmol) a una solución agitada del compuesto protegido de Fmoc 42 (2,40 g, 1,61 mmol) en THF (20 ml) a temperatura ambiente. Luego de agitar durante 1 hora a temperatura ambiente, el análisis de LC/MS reveló una terminación de la reacción con el producto deseado en el tiempo de retención de 2,07 minutos, ES+ m/z 1289 [M+ Na]+., 1267 [M+ H]+, junto con el subproducto de escisión de Fmoc en el tiempo de retención de 1,74 minutos y su aducto de DMA en el tiempo de retención de 0,95 minutos. La mezcla se evaporó al vacío para proporcionar el producto en bruto que fue purificado posteriormente mediante Isolera™ (heptano/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 ml por minuto) para proporcionar la anilina pura 43 (elución a 100 % de EtOAc) como una espuma blanca (1,77 g, 87 % de rendimiento).
(i) Alil(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((5-((3-((5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aWoxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carbonil)amino)-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)pirrolidina-1-carbonil)-2-metoxifenoxi)metil)bencil)oxi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)pirrolidina-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamoil)oxi)metil)-2-nitrofenoxi)-3,4,5-tris(((aliloxi)carbonil)oxi)tetrahidro-2H-piran-2-carboxilato (44)
Se agregó trifosgeno (150 mg, 0,50 mmol) a una solución agitada de anilina 43 (1,77 g, 1,40 mmol) y piridina (249 pl, 243 mg, 3,08 mmol) en DCM seco (20 ml) a temperatura ambiente. Luego de agitar durante 10 minutos en argón, el análisis de LC/MS reveló una conversión completa a isocianato (muestreada en MeOH para proporcionar carbamato de metilo, tiempo de retención de 2,11 minutos, ES+ m/z 1347 [M+ Na]+., 1325 [M+ H]+.). La mezcla se trató con piridina adicional (170 pl, 166 mg, 2,10 mmol) y dilaurato de dibutiestaño (165 pl, 177 mg, 0,28 mmol) seguido de la adición del enlazador 5a (891 mg, 1,40 mmol). Luego de 24 horas con agitación en argón, el LC/MS reveló una conversión satisfactoria a carbamato 44 en el tiempo de retención de 2,16 minutos, ES+ m/z 1952 [M+ Na]+., 1930 [M+ H]+. La mezcla se diluyó con DCM (40 ml) y se lavó NH4Cl saturado (2 x 35 ml), salmuera (30 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para proporcionar el producto en bruto. La purificación mediante Isolera™ (heptano/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 ml por minuto) proporcionó el carbamato puro 44 (elución en 32 % heptano/EtOAc) como un sólido blanca (2,16 g, 80 % de rendimiento).
(j) Alil(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((5-((3-((5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carbonil)amino)-4-((S)-2-(hidroximetil)pirrolidina-1-carbonil)-2-metoxifenoxi)metil)bencil)oxi)-2-((S)-2-(hidroximetil)pirrolidina-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamoil)oxi)metil)-2-nitrofenoxi)-3,4,5-tris(((aliloxi)carbonil)oxi)tetrahidro-2H-piran-2-carboxilato (45)
Se agregó ácido acético glacial (18 ml) a una solución agitada del compuesto protegido por TBS 44 (2,16 g, 1,12 mmol) en THF (6 ml) y H2O (6 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar durante 5 horas a temperatura ambiente tiempo después del cual el análisis de LC/MS reveló una finalización de la reacción con el producto deseado observado en el tiempo de retención 1,77 minutos ES+ m/z 1702 [M+ H]+., 1724 [M+ Na]+. La mezcla de reacción se agregó en gotas a una solución saturada enfriada (0-5 °C) de NaHCOa (300 ml). La solución neutral se dejó entibiar hasta temperatura ambiente y se extrajo con EtOAc (3 x 50 ml), las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (60 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para brindar el producto bruto. La purificación mediante Isolera™ (DCM/MeOH, SnAP Ultra 100 g, 100 ml por minuto) proporcionó bi-alcohol 45 (elución en 94,8 % DCM/MeOH) como una espuma blanca (1,86 g, 98 % de rendimiento).
(k) 4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-((aliloxi)carbonil)-3,4,5-tris(((aliloxi)carbonil)oxi)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)-3-nitrobencil(11S,11aS)-8-((3-((((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carbonil)-11-hidroxi-7-metoxi-5-oxo-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oxi)metil)bencil)oxi)-11-hidroxi-7-metoxi-5-oxo-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepina-10(5H)-carboxilato (46)
Se agregó 45 % de IBX (263 mg, 0,42 mmol) a un solución agitada del bis-OH 45 (300 mg, 0,18 mmol) en DMSO seco (4 ml). La mezcla se calentó hasta 30 °C bajo una atmósfera de argón y el progreso de la reacción se monitoreó mediante LC/MS. Luego de 24 horas de agitación, se agregó IBX (2 x 22 mg, 2 x 36 |jmol) y la mezcla se agitó durante 28 horas adicionales. En este punto el análisis mediante LC-/MS reveló la formación del producto resuelto en el tiempo de retención 1,72 minutos, ES+ m/z 1698 [M+ H]+.,1720 [M+ Na]+. La mezcla de reacción se agregó en gotas a una solución de NaHCO3 acuosa saturada (100 ml) y se extrajo con DCM (2 x 40 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (40 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se evaporaron al vacío para proporcionar el producto en bruto. La purificación mediante Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 25 g, 75 ml por minuto) proporcionó el producto ciclado 46 (elución en 96,5 % DCM/MeOH) como una espuma blanca (219 mg, 73 % de rendimiento).
(l) Ácido (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S,11aS)-8-((3-((((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carbonil)-11-hidroxi-7-metoxi-5-oxo-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oxi)metil)bencil)oxi)-11-hidroxi-7-metoxi-5-oxo-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepina-10-carbonil)oxi)metil)-2-nitrofenoxi)-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-carboxílico (47)
Se agregó Pd(PPh3)4 (13,0 mg, 11,1 jm ol) a una solución agitada de pirrolidina (51 jl, 43 mg, 0,61 mmol) y el compuesto Aloc/alilo 46 (189 mg, 0,11 mmol) en DCM seco (2 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar en una atmósfera de argón, durante 30 minutos a temperatura ambiente, donde el análisis mediante LC/MS reveló una terminación de la reacción con un producto deseado observado en el tiempo de retención 1,13 minutos ES+ m/z 1322 [M+ H]+. El solvente se retiró mediante evaporación al vacío y el residuo resultante triturado con dietil éter seguido de evaporación adicional al vacío para proporcionar la amina en bruto 47 como un sólido que se utilizó en el siguiente paso sin purificación o análisis adicional.
(m) Ácido (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S,11aS)-8-((3-((((11S,11aS)-10-(((4-((2S,5S)-37-(2,5-dioxo-2,5-dihidro- 1H-pirrol-1-il)-5-isopropil-2-metil-4,7,35-trioxo-10,13,16,19,22,25,28,31-octaoxa-3,6,34-triazaheptatriacontanamido)bencil)oxi)carbonil)-11-hidroxi-7-metoxi-5-oxo-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oxi)metil)bencil)oxi)-11-hidroxi-7-metoxi-5-oxo-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepina-10-carbonil)oxi)metil)-2-nitrofenoxi)-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-carboxílico (48)
Se agregó una solución de éster MAL-dPEG®8-TFP (123 mg, 0,16 mmol) en DCM seco (2 ml) a una muestra agitada de la amina 47 (147 mg, 0,11 mmol) y piridina (22 jl, 22 mg, 0,28 mmol). La mezcla de reacción se dejó agitar en argón durante 20 horas y comenzó a oscurecerse en color con el tiempo. El análisis mediante LC/MS reveló la formación del producto deseado en el tiempo de retención 1,37 minutos, ES+ m/z 1896 [M+ H]+.,1918 [M+ Na]+, junto con una traza de amina sin reacción en el tiempo de retención 1,13 minutos. La descomposición sustancial del producto y el solvente se retiró mediante evaporación al vacío. El producto en bruto se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar la maleimida 48 como un sólido blanco (75 mg, 36 %): LC/MS (ejecución de 15 minutos), y tiempo de retención 5,48 minutos ES+ m/z 1896 [M+ H]+., 1918 [M+ Na]+.; 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) 89,92 (br s, 2H), 8,20­ 8,14 (m, 1H), 8,01 (t, 1H, J = 5,6 Hz), 7,87 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,73 (br s, 1H), 7,62-7,36 (m, 8H), 7,23-7,15 (m, 2H), 7,11 (s, 1H), 7,09 (s, 1H), 7,00 (s, 2H), 6,99 (s, 1H), 6,94 (s, 1H), 6,62-6,51 (m, 2H), 5,53-5,41 (m, 3H), 5,35-5,85 (m, 9H), 4,41-4,32 (m, 1H), 4,23-4,16 (m, 1H), 4,00-3,90 (m, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 3,61-3,58 (m, 4H), 3,52­ 3,45 (m, 28H), 3,42-3,23 (m, 9H), 3,18-3,12 (m, 2H), 2,50-2,35 (m, 2H), 2,34-2,31 (m, 2H), 2,10-1,8 (m, 9H), 1,28 (d, 1H, J = 7,1 Hz), 0,87 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 0,83 (d, 3H, J = 6,8 Hz).
Ejemplo 5
Figure imgf000115_0001
(a) (9H-fluoren-9-il)metil(5-(3-(5-amino-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)pirrolidina-1-carbonil)-2-metoxifenoxi)propoxi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)pirrolidina-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamato (50) Se agregó FmocCl (1,58 g, 6,09 mmol) a una mezcla agitada de bis-anilina 49 (6,50 g, 8,12 mmol) y Na2CO3 (2,15 g, 20,3 mmol) en THF (35 ml) y H2O (35 ml). La mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 2,5 horas donde el análisis mediante LC/MS reveló un el producto de Fmoc 50 mono deseado en un tiempo de retención de 2,19 minutos, I% = 49 ES+ m/z 1046 [M+ Na]+., 1024 [M+ H]+., junto con material de partida sin reacción en el tiempo de retención 1,96 minutos, I% = 19 y material de bis-Fmoc en el tiempo de retención 2,34 minutos, I% = 32, ES+ m/z 1270 [M+ Na]+., 1246 [M+ H]+. La mezcla se dividió entre H2O (50 ml) y EtOAc (50 ml), las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 25 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con H2O (30 ml), salmuera (50 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se evaporaron al vacío para proporcionar el producto en bruto. La purificación mediante Isolera™ (heptano/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 ml por minuto) proporcionó el producto 50 de Fmoc mono puro como una espuma anaranjada (3,61 g, 58 % de rendimiento en función de FmocCl, elución a 61 % heptano/EtOAc), bis-anilina 2 sin reacción (2,04 g, elución a 100 % de EtOAc) y bis-Fmoc (1,71 g, elución a 30 % de heptano/EtOAc).
(b) (5-(3-(5-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)pirrolidina-1-carbonil)-2-metoxifenoxi)propoxi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)pirrolidina-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamato de 4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencilo (51)
Se agregó trifosgeno (377 mg, 1,27 mmol) a una solución agitada del producto de Fmoc mono 50 (3,61 g, 3,53 mmol) y TEA (1,08 ml, 784 mg, 7,70 mmol) en DCM seco (40 ml) a temperatura ambiente. Luego de agitar durante 10 minutos en argón, el análisis de LC/MS reveló una conversión completa a isocianato (muestreada en MeOH para proporcionar carbamato de metilo, tiempo de retención de 2,23 minutos, ES+ m/z 1104 [M+ Na]+., 1082 [M+ H]+.). La mezcla se trató con TEA adicional (737 pl, 535 mg, 5,30 mmol) seguido de la adición del enlazador l16 (1,33 g, 3,53 mmol). Luego de 2,5 horas con agitación en argón, el LC/MS reveló una conversión satisfactoria a carbamato 51 en el tiempo de retención de 2,21 minutos, ES+ m/z 1449 [M+ Na]+., 1427 [M+ H]+. La mezcla se diluyó con DCM (50 ml) y se lavó NH4Cl saturado acuoso (2 x 30 ml), H2O (30 ml), salmuera (50 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para proporcionar el producto en bruto. La purificación mediante Isolera™ (heptano/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 ml por minuto) proporcionó el carbamato puro 51 (elución en 40 % hexanos/EtOAc) como una espuma amarilla (3,34 g, 66 % de rendimiento).
(c) 4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil (5-(3-(5-amino-4-((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oxi)metil)pirrolidina-1-carbonil)-2-metoxifenoxi)propoxi)-2-((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oxi)metil)pirrolidina-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamato (52)
Se agregó dimetilamina (23,4 ml de una solución 2,0 M en THF, 46,8 mmol) a una solución agitada del compuesto protegido de Fmoc 51 (3,34 g, 2,34 mmol) en THF (15 ml) a temperatura ambiente. Luego de agitar en argón durante 1 hora a temperatura ambiente, el análisis de LC/MS reveló una terminación de la reacción con el producto deseado en el tiempo de retención de 2,02 minutos, ES+ m/z 1227 [M+ Na]+., 1205 [M+ H]+, junto con el subproducto de escisión de Fmoc en el tiempo de retención de 1,72 minutos y su aducto de DMA en el tiempo de retención de 0,93 minutos. La mezcla se evaporó al vacío para proporcionar el producto en bruto que fue purificado posteriormente mediante Isolera™ (heptano/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 ml por minuto) para proporcionar la anilina pura 52 (elución a 100 % de EtOAc) como una espuma anaranjada (2,51 g, 89 % de rendimiento).
(d) Alil(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((5-(3-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benxil)oxi)carbonil)amino)-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)pirrolidina-1-carbonil)-2-metoxifenoxi)propoxi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-metilenepirrolidinapirrolidina-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamoil)oxi)metil)-2-nitrofenoxi)-3,4,5-tris(((alioxi)carbonil)oxi)tetrahidro-2H-piran-2-carboxilato (53)
Se agregó trifosgeno (222 mg, 0,75 mmol) a una solución agitada de anilina 52 (2,51 g, 2,08 mmol) y piridina (370 pl, 362 mg, 4,58 mmol) en DCM seco (30 ml) a temperatura ambiente. Luego de agitar durante 10 minutos en argón, el análisis de LC/MS reveló una conversión completa a isocianato (muestreada en MeOH para proporcionar carbamato de metilo, tiempo de retención de 2,06 minutos, ES+ m/z 1285 [M+ Na]+., 1263 [M+ H]+.). La mezcla se trató con piridina adicional (252 pl, 247 mg, 3,12 mmol) y dilaurato de dibutiestaño (247 pl, 263 mg, 0,42 mmol) seguido de la adición del enlazador 5a (1,33 g, 2,08 mmol). Luego de 28 horas con agitación en argón, el LC/MS reveló una conversión satisfactoria a carbamato 53 (tiempo de retención) de 2,12 minutos, ES+ m/z 1890 [M+ Na]+., 1868 [M+ H]+. La mezcla se diluyó con DCM (40 ml) y se lavó con NH4Cl saturado (3 x 30 ml), salmuera (50 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para proporcionar el producto en bruto. La purificación mediante Isolera™ (heptano/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 ml por minuto) proporcionó el carbamato puro 53 (elución en 37 % heptano/EtOAc) como una espuma amarilla (3,12 g, 80 % de rendimiento).
(e) Alil(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((5-(3-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carbonil)amino)-4-((S)-2-(hidroximetil)pirrolidina-1-carbonil)-2-metoxifenoxi)propoxi)-2-((S)-2-(hidroximetil)pirrolidina-1-carbonil)-4-metoxifenil)carbamoil)oxi)metil)-2-nitrofenoxi)-3,4,5-tris(((aliloxi)carbonil)oxi)tetrahidro-2H-piran-2-carboxilato (54)
Se agregó ácido acético glacial (24 ml) a una solución agitada del compuesto protegido por TBS 53 (3,12 g, 1,67 mmol) en THF (8 ml) y H2O (8 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar durante 18 horas a temperatura ambiente tiempo después del cual el análisis de LC/MS reveló una finalización de la reacción con el producto deseado observado en el tiempo de retención 1,72 minutos ES+ m/z 1640 [M+ H]+., 1662 [M+ Na]+. La mezcla de reacción se agregó en gotas a una solución saturada enfriada (0-5 °C) de NaHCÜ3 (450 ml). La solución neutra se dejó entibiar hasta temperatura ambiente y se extrajo con EtOAc (3 x 80 ml), las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (80 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para brindar el producto bruto. La purificación mediante Isolera™ (DCM/MeOH, SnAP Ultra 100 g, 100 ml por minuto) proporcionó bi-alcohol 54 (elución en 96,6 % DCM/MeOH) como una espuma blanca (2,05 g, 75 % de rendimiento).
(f) 4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-((aliloxi)carbonil)-3,4,5-tris(((aliloxi)carbonil)oxi)tetrahidro-2H-piran-2-ill)oxi)-3-nitrobencil(11S,11aS)-8-(3-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bendl)oxi)carbonil)-11-hidroxi-7-metoxi-5-oxo-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oxi)propoxi)-11-hidroxi-7-metoxi-5-oxo-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepina-10(5H)-carboxilato (55)
Se agregó 45 % de IBX (273 mg, 0,44 mmol) a un solución agitada del bis-OH 54 (300 mg, 0,18 mmol) en DMSO seco (4 ml). La mezcla se calentó hasta 30 °C bajo una atmósfera de argón y el progreso de la reacción se monitoreó mediante LC/MS. Luego de 24 horas de agitación, se agregó IBX (26 mg, 42 pmol) y la mezcla se agitó durante 24 horas. En este punto el análisis mediante LC/MS reveló de forma predominante un pico único correspondiente a un producto deseado en el tiempo de retención 1,68 minutos, ES+ m/z 1658 [M+ Na]+. La mezcla de reacción se agregó en gotas a una solución de NaHCO3 acuosa saturada enfriada (100 ml) y se extrajo con DCM (2 x 40 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (40 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se evaporaron al vacío para proporcionar el producto en bruto. La purificación mediante Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 25 g, 75 ml por minuto) proporcionó el producto ciclado 55 (elución en 97 % DCM/MeOH) como una espuma blanca (256 mg, 87 % de rendimiento).
(g) Ácido (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S,11aS)-8-(3-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carbonil)-11-hidroxi-7-metoxi-5-oxo-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oxi)propoxi)-11-hidroxi-7-metoxi-5-oxo-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepina-10-carbonil)oxi)metil)-2-nitrofenoxi)-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-carboxílico (56)
Se agregó Pd(PPh3)4 (18,1 mg, 15,7 pmol) a una solución agitada de pirrolidina (72 pl, 62 mg, 0,86 mmol) y el compuesto Aloc/alilo 55 (256 mg, 0,16 mmol) en DCM seco (2 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar bajo una atmósfera de argón donde un precipitado comenzó a formarse. Luego de 30 minutos de agitación a temperatura ambiente el análisis mediante LC/m S reveló una terminación de la reacción con un producto deseado observado en el tiempo de retención 1,07 minutos ES+ m/z 1260 [M+ H]+. El solvente se retiró mediante evaporación al vacío y el residuo resultante se trituró con dietil éter seguido de evaporación adicional al vacío para proporcionar la amina en bruto 56 como un sólido que se utilizó en el siguiente paso sin purificación o análisis adicional.
(h) Ácido (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S,11aS)-8-(3-(((11S,11aS)-10-(((4-((2S,5S)-37-(2,5-dioxo-2,5-dihidro- 1H-pirrol-1-il)-5-isopropil-2-metil-4,7,35-trioxo-10,13,16,19,22,25,28,31-octaoxa-3,6,34-triazaheptatriacontanamido)bencil)oxi)carbonil)-11-hidroxi-7-metoxi-5-oxo-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oxi)propoxi)-11-hidroxi-7-metoxi-5-oxo-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepina-10-carbonil)oxi)metil)-2-nitrofenoxi)-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-carboxílico (57)
Se agregó una solución de éster MAL-dPEG®8-TFP (140 mg, 0,19 mmol) en DCM seco (2 ml) a una muestra agitada de la amina 56 (198 mg, 0,16 mmol), piridina (32 pl, 31 mg, 0,39 mmol) y DMF (0,25 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar en argón durante 20 horas y comenzó a oscurecerse en color con el tiempo. El análisis mediante LC/MS reveló la formación de un producto deseado en el tiempo de retención 1,31 minutos , ES+) m/z 1834 [M+ H]+., 1857 [M+ Na]+, junto con una amina sin reacción en el tiempo de retención 1,07 minutos. Se agregó éster de MAL-dPEG®8-TFP adicional (70 mg, 0,09 mmol), pridina (16 pl, 16 mg, 0,2 mmol) y DCM (2 ml) y a mezcla se dejó agitar durante 24 horas adicionales. El volumen del solvente se redujo luego en un 50 % mediante evaporación al vacío, en este punto se formó una cantidad satisfactoria de producto deseado luego del análisis mediante LC/MS y el solvente se retiró completamente mediante evaporación al vacío. El producto en bruto se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar la maleimida 56 como un sólido blanco (48 mg, 17 %): LC/Ms (ejecución de 15 minutos), tiempo de retención 5,22 minutos, ES+ m/z 1834 [M+ H]+., 1856 [M+ Na]+.; 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) 69,99(br s, 2H), 8,24­ 8,17 (m, 1H), 8,01 (t, 1H, J = 5,6 Hz), 7,88 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,74 (br s, 1H), 7,64-7,50 (m, 3H), 7,44-7,34 (m, 1H), 7,23-7,13 (m, 2H), 7,06 (s, 2H), 7,00 (s, 2H), 6,86 (s, 1H), 6,79 (s, 1H), 6,59-6,47 (m, 2H), 5,52-5,37 (m, 3H), 5,32­ 5,02 (m, 4H), 4,98-4,84 (m, 2H), 4,44-4,34 (m, 1H), 4,24-4,19 (m, 1H), 4,17-3,96 (m, 5H), 3,92-3,84 (m, 1H), 3,77 (s, 6H), 3,60 (t, 4H, J = 7,3 Hz), 3,54-3,45 (m, 29H), 3,40-3,24 (m, 8H), 3,19-3,12 (m, 2H), 2,57-2,35 (m, 2H), 2,34­ 2,30 (m, 2H), 2,25-2,12 (m, 2H), 2,10-1,78 (m, 9H), 1,30 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 0,87 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 0,83 (d, 3H, J = 6,7 Hz)
Ejemplo 6
Figure imgf000118_0001
Ácido (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S,11aS)-8-(3-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanamido)-3-metilbutanamido)propanamido)bendl)oxi)carbonil)-11-hidroxi-7-metoxi-2-metileno-5-oxo-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oxi)propoxi)-11-hidroxi-7-metoxi-2-metileno-5-oxo-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepina-10-carbonil)oxi)metil)-2-nitrofenoxi)-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-carboxílico (58)
Se agregó una solución de éster de N-hidroxisuccinimida de ácido 6-maleimidohexanoico (51 mg, 0,17 mmol) en DCM seco (2 ml) a una muestra agitada de la amina 9 (141 mg, 0,11 mmol), piridina (22 pl, 21 mg, 0,33 mmol) y DMF (0,25 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar en argón durante 20 horas y comenzó a oscurecerse en color con el tiempo. El análisis mediante LC-MS reveló la formación de un producto deseado en el tiempo de retención 1,42 minutos, ES-m/z 1474 [M-H]'., junto con una amina sin reacción en el tiempo de retención 1,12 minutos. El solvente se retiró mediante evaporación al vacío y el residuo resultante se purificó mediante Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 10 g, 36 ml por minuto, elución a 80 % de DCM/MeOH) para proporcionar 90 mg de 58 enriquecido. La purificación adicional mediante HPLC preparativa proporcionó el maleimido 58 como un sólido blanco (26 mg, 16 %): LC-MS (ejecución de 15 minutos), tiempo de retención 5,85 minutos, ES+ m/z 1477 [M+ H]+., 1499 [M+ Na]+.; 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8 10,0 (br s, 2H), 8,16 (d, 1H, J = 7,0 Hz), 7,80 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,74 (br s, 1H), 7,62-7,50 (m, 3H), 7,39 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,22-7,11 (m, 2H), 7,06 (s, 2H), 7,00 (s, 2H), 6,89 (s, 2H), 6,84-6,78 (m, 1H), 6,68-6,56 (m, 2H), 5,45-5,30 (m, 3H), 5,29-5,01 (m, 9H), 4,98-4,85 (m, 2H), 4,42-4,33 (m, 1H), 4,24-3,92 (m, 9H), 3,77 (s, 6H), 3,44 (t, 2H, J = 9,5 Hz), 3,39-3,30 (m, 2H), 2,93-2,80 (m, 2H), 2,57-2,35 (m, 2H), 2,23-2,06 (m, 4H) 2,03-1,90 (m, 1H), 1,48 (p, 4H, J = 7,3 Hz), 1,30 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,18 (p, 2H, J = 7,6 Hz), 0,86 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 0,83 (d, 3H, J = 6,7 Hz).
Ejemplo 7
Figure imgf000119_0001
Ácido (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanamido)-3-metilbutanamido)propanamido)bendl)oxi)carbonil)-11-hidroxi-7-metoxi-2-metil-5-oxo-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oxi)pentil)oxi)-11-hidroxi-7-metoxi-2-metil-5-oxo-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepina-10-carbonil)oxi)metil)-2-nitrofenoxi)-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-carboxílico (59)
Se agregó una solución de éster de N-hidroxisuccinimida de ácido 6-maleimidohexanoico (42 mg, 0,14 mmol) en DCM seco (2 ml) a una muestra agitada de la amina 21 (118 mg, 0,09 mmol), piridina (18 pl, 18 mg, 0,23 mmol). La mezcla de reacción se dejó agitar en argón durante 24 horas y comenzó a oscurecerse en color con el tiempo. El análisis mediante LC-MS reveló la formación de un producto deseado en el tiempo de retención 1,45 minutos, ES- m/z 1502 [M-H]-., junto con una amina sin reacción en el tiempo de retención 1,15 minutos. El solvente se retiró mediante evaporación al vacío y el residuo resultante se purificó mediante Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 10 g, 36 ml por minuto, elución a 66 % de DCM/MeOH) para proporcionar 76 mg de 59 enriquecido. La purificación adicional mediante HPLC preparativa proporcionó maleimida 59 como un sólido blanco (27 mg, 20 %): LC-MS (ejecución de 15 minutos), tiempo de retención 6,13 minutos, ES+ m/z 1505 [M+ H]+., 1527 [M+ Na]+.; 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) 89,95 (br s, 2H), 8,15 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 7,80 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,87 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,71 (br s, 1H), 7,62-7,48 (m, 3H), 7,39 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,21-7,12 (m, 2H), 7,06 (s, 1H), 7,05 (s, 1H), 6,99 (s, 2H), 6,82 (s, 1H), 6,76 (s, 1H), 6,72­ 6,65 (m, 2H), 6,62 (s, 2H), 5,63-5,50 (m, 2H), 5,48-5,40 (m, 2H), 5,31-5,08 (m, 6H), 4,98-4,82 (m, 3H), 4,43-4,34 (m, 1H), 4,21-4,14 (m, 1H), 4,03-3,86 (m, 4H), 3,79 (s x 2, 6H), 3,72-3,61 (m, 2H), 3,38-3,35 (m, 2H), 2,98-2,85 (m, 2H), 2,59-2,42 (m, 2H), 2,23-2,06 (m, 2H), 2,00-1,88 (m, 1H), 1,82-1,68 (m, 4H), 1,74 (s, 6H), 1,61-1,41 (m, 8H), 1,22­ 1,14 (m, 2H), 1,28 (d, 1H, J = 7,0 Hz), 0,86 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 0,82 (d, 3H, J = 6,8 Hz).
Ejemplo 8 - Conjugación
Conjugado trastuzumab-10 (Conj A)
Se agregó una solución de 50 mM de DL-ditiotreitol (DTT) en una solución salina amortiguada con fosfato (PBS, por sus siglas en inglés) pH 7,4 (equivalente/anticuerpo 80 molar, 16 micromoles, 320 pl) a una solución 12,0 ml de anticuerpo, trastuzumab (30 mg, 20 nanomoles) en un amortiguador de reducción que contiene PBS y ácido etilendiaminatetraacético (EDTA) 1 mM y una concentración final de anticuerpo de 2,5 mg/ml. La mezcla de reducción se dejó reaccionar a temperatura ambiente durante 4-5 horas (o hasta que se observó una reducción total mediante UHPLC) en una agitador orbital con agitación suave (50 rpm). El anticuerpo reducido se intercambió mediante un amortiguador, a través del uso de una centrifugación de filtro giratorio, en un amortiguador de reoxidación que contiene PBS y EDTA 1 mM para retirar todo el exceso de agente de reducción. Se agregó una solución de ácido dehidroascórbico 50 mM (DHAA, equivalente/anticuerpo 20 molar, 4 micromoles, 80 pl) en DMSO y la mezcla de reoxidación se dejó reaccionar durante 16 horas a temperatura ambiente con agitación suave (50 rpm) en una concentración de anticuerpo de 1,5 mg/ml (o se agrega más DHAA y la reacción se deja durante más tiempo hasta que se observa la reoxidación total de los tioles de cisteína para reformar los disulfuros de cisteína intercatenarios mediante UHPLC). Luego, la mezcla de reoxidación se filtra de forma estéril y se diluye en un amortiguador de conjugación que contiene PBS EDTA 1 mM para una concentración final de anticuerpo de 1,0 mg/ml. Se agregó el compuesto 10 como una solución de DMSO (equivalente/anticuerpo 10 molar, 1 micromol, en DMSO 1,5 ml) a 13,5 ml de esta solución de anticuerpo reoxidada (15 mg, 100 nanomoles) durante una concentración de DMSO final al 10 % (v/v). La solución se mezcló durante 1,5 horas a temperatura ambiente, luego la conjugación se inactivó mediante adición de N-acetil cisteína (15 micromoles, 150 pl a 100 mM), luego se purificó mediante filtración por centrifugado con el uso de un filtro de centrifugado Amicon Ultracell 50 kDa MWCO de 15 ml, se llevó a cabo una filtración estéril y se analizó.
El análisis de UHPLC en un sistema Shimadzu Prominence mediante el uso de una columna Phenomenex Aeris 3,6 u XB- C18 150 mm x 2,1 mm con elución con un gradiente de agua y acetonitrilo en una muestra reducida del conj. A 280 nm y 330 nm (específico del Compuesto 10) muestra cadenas ligeras no conjugadas y una mezcla de cadenas pesadas no conjugadas y cadenas pesadas enlazadas a una molécula única del compuesto 10, consistente con una relación fármaco por anticuerpo (d A r , por sus siglas en inglés) de 1,89 moléculas del compuesto 10 por anticuerpo.
El análisis de UHPLC en un sistema Shimadzu Prominence con una columna Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 |jm 4,6 x 150 mm (con una columna de guardia de 4 jm 3,0 x 20 mm) con elución con un amortiguador de SEC filtrado de forma estéril 0,3 ml/minuto que contiene un fosfato de potasio 200 mM pH 6,95, cloruro de potasio 250 mM e isopropanol al 10 % (v/v) en una muestra del Conj A a 280 nm muestra una pureza de monómero de 99 %. El análisis de SEC de UHPLC proporciona una concentración de Conj A final a 1,45 mg/ml en 8,5 ml, la masa obtenida del Conj A es 12,3 mg (rendimiento de 82 %).
Conjugado de tratuzumab-22 (Conj B)
Se agregó una solución de DL-ditiotreitol (DTT) 50 mM en una solución amortiguada por fosfato pH 7,4 (PBS) (equivalente/anticuerpo 80 molar, 42,7 micromoles, 853 j l) a una solución 20,0 ml de anticuerpo trastuzumab (80 mg, 533 nanomoles) en un amortiguador de reducción que contiene PBS y ácido etilenodiaminatetracético (EDTA) 1 mM y una concentración final de anticuerpo de 4,0 mg/ml. La mezcla de reducción se dejó reaccionar a temperatura ambiente durante 4-5 horas (o hasta que se observe una reducción total mediante UHPLC) en un agitador orbital con agitación suave (60 rpm). El anticuerpo reducido se intercambió mediante un amortiguador, a través del uso de una centrifugación de filtro giratorio, en un amortiguador de reoxidación que contiene PBS y EDTA 1 mM para retirar todo el exceso de agente de reducción. Se agregó una solución de ácido dehidroascórbico 50 mM (DHAA, equivalente/anticuerpo 20 molar, 10,7 micromoles, 213 j l) en DMSO y la mezcla de reoxidación se dejó reaccionar durante 16 horas a temperatura ambiente con agitación suave (50 rpm) en una concentración de anticuerpo de 1,5 mg/ml (o se agrega más DHAA y la reacción se deja durante más tiempo hasta que se observa la reoxidación total de los tioles de cisteína para reformar los disulfuros de cisteína intercatenarios mediante UHPLC). Luego, la mezcla de reoxidación se filtra de forma estéril y se diluye en un amortiguador de conjugación que contiene PBS y EDTA 1 mM para una concentración final de anticuerpo de 1,0 mg/ml. Se agregó el compuesto 22 como una solución de DMSO (equivalente/anticuerpo 10 molar, 1,33 micromoles, en DMSO 2,0 ml) a 18,0 ml de esta solución de anticuerpo reoxidada (20 mg, 133 nanomoles) para una concentración de DMSO final al 10 % (v/v). La solución se mezcló durante 1,5 horas a temperatura ambiente, luego la conjugación se inactivó mediante adición de N-acetil cisteína (20 micromoles, 200 j l a 100 mM), luego se purificó mediante filtración giratoria a través del uso de un filtro giratorio MWCO de 50 kDa Amicon Ultracell de 15 ml, se filtró de forma estéril y se analizó.
El análisis de UHPLC en un sistema Shimadzu Prominence mediante el uso de una columna Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18 150 mm x 2,1 mm con elución con un gradiente de agua y acetonitrilo en una muestra reducida del Conj B a 280 nm y 330 nm (específico del Compuesto 22) muestra cadenas ligeras no conjugadas y una mezcla de cadenas pesadas no conjugadas y cadenas pesadas enlazadas a una molécula única del compuesto 22, consistente con una relación fármaco por anticuerpo (DAr , por sus siglas en inglés) de 1,71 moléculas del compuesto 22 por anticuerpo.
El análisis de UHPLC en un sistema Shimadzu Prominence con una columna Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 jm 4,6 x 150 mm (con una columna de guardia de 4 jm 3,0 x 20 mm) con elución con un amortiguador de SEC filtrado de forma estéril 0,3 ml/minuto que contiene un fosfato de potasio 200 mM pH 6,95, cloruro de potasio 250 mM e isopropanol al 10 % (v/v) en una muestra del Conj B a 280 nm muestra una pureza de monómero de 99 %. El análisis de SEC de UHPLC proporciona una concentración del Conj B a 1,39 mg/ml en 10,3 ml, una masa obtenida del Conj B es 14,3 mg (72 % de rendimiento).
Conjugado de tratuzumab-34 (Conj C)
Se agregó una solución de DL-ditiotreitol (DTT) 50 mM en una solución amortiguada por fosfato pH 7,4 (PBS) (equivalente/anticuerpo 80 molar, 42,7 micromoles, 853 j l) a una solución 20,0 ml de anticuerpo trastuzumab (80 mg, 533 nanomoles) en un amortiguador de reducción que contiene PBS y ácido etilenodiaminatetracético (EDTA) 1 mM y una concentración final de anticuerpo de 4,0 mg/ml. La mezcla de reducción se dejó para reaccionar a temperatura ambiente durante 4-5 horas (o hasta que se observa una reducción total mediante UHPLC) en un agitador orbital con agitación suave (60 rpm). El anticuerpo reducido se intercambió mediante un amortiguador, a través del uso de una centrifugación de filtro giratorio, en un amortiguador de reoxidación que contiene PBS y EDTA 1 mM para retirar todo el exceso de agente de reducción. Se agregó una solución de ácido dehidroascórbico 50 mM (DHAA, equivalente/anticuerpo 20 molar, 10,7 micromoles, 213 j l) en DMSO y la mezcla de reoxidación se dejó reaccionar durante 16 horas a temperatura ambiente con agitación suave (50 rpm) en una concentración de anticuerpo de 1,5 mg/ml (o se agrega más DHAA y la reacción se deja durante más tiempo hasta que se observa la reoxidación total de los tioles de cisteína para reformar los disulfuros de cisteína intercatenarios mediante UHPLC). Luego, la mezcla de reoxidación se filtra de forma estéril y se diluye en un amortiguador de conjugación que contiene PBS y EDTA 1 mM para una concentración final de anticuerpo de 1,0 mg/ml. Se agregó el compuesto 34 como una solución de DMSO (equivalente/anticuerpo 10 molar, 1,33 micromoles, en DMSO 2,0 ml) a 18,0 ml de esta solución de anticuerpo reoxidada (20 mg, 133 nanomoles) para una concentración de DMSO final al 10 % (v/v). La solución se mezcló durante 1,5 horas a temperatura ambiente, luego la conjugación se inactivó mediante la adición de N-acetil cisteína (20 micromoles, 200 pl a 100 mM), luego se purificó mediante filtración por centrifugado mediante el uso de un filtro por centrifugado Amicon Ultracell 50 kDa MWCO de 15 ml y purificado adicionalmente en un AKTA™ Start FPLC mediante el uso de una columna GE Healthcare HiLoad™ 26/600 equipada con un Superdex 200 PG con elución con 2,5 ml/min PBS. Las fracciones correspondientes al pico del monómero del Conj C se agruparon, se concentraron mediante el uso de un filtrado por centrifugado Amicon Ultracell 50 KDa MWCO de 15 ml, se filtró de forma estéril y se analizó.
El análisis de UHPLC en un sistema Shimadzu Prominence mediante el uso de una columna Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18 150 mm x 2,1 mm con elución con un gradiente de agua y acetonitrilo en una muestra reducida del conj. C a 280 nm y 330 nm (específico del Compuesto 34) muestra cadenas ligeras no conjugadas y una mezcla de cadenas pesadas no conjugadas y cadenas pesadas enlazadas a una molécula única del compuesto 34, consistente con una relación fármaco por anticuerpo (d A r , por sus siglas en inglés) de 1,66 moléculas del compuesto 34 por anticuerpo.
El análisis de UHPLC en un sistema Shimadzu Prominence con una columna Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 |jm 4,6 x 150 mm (con una columna de guardia de 4 jm 3,0 x 20 mm) con elución con un amortiguador de SEC filtrado de forma estéril 0,3 ml/minuto que contiene un fosfato de potasio 200 mM pH 6,95, cloruro de potasio 250 mM e isopropanol al 10 % (v/v) en una muestra del Conj C a 280 nm muestra una pureza de monómero de 99 %. El análisis de SEC de UHPLC proporciona una concentración de Conj C final a 1,36 mg/ml en 10,4 ml, la masa obtenida del Conj C es 14,1 mg (rendimiento de 71 %).
Conjugado de Tratuzumab-10 (Conj D)
Se agregó una solución de DL-ditiotreitol (DTT) 50 mM en una solución amortiguada por fosfato pH 7,4 (PBS) (equivalente/anticuerpo 150 molar, 40 micromoles, 800 j l) a una solución 16,0 ml de anticuerpo trastuzumab (40 mg, 267 nanomoles) en un amortiguador de reducción que contiene PBS y ácido etilenodiaminatetracético (EDTA) 1 mM y una concentración final de anticuerpo de 2,5 mg/ml. La mezcla de reducción se dejó para reaccionar a temperatura ambiente durante 4 horas (o hasta que se observe una reducción total mediante UHPLC) en un agitador orbital con agitación suave (50 rpm). La solución del anticuerpo reducido se intercambió mediante amortiguador (para retirar todo el exceso de agente de reducción), mediante una centrifugación con un filtro de centrifugado, en un amortiguador de conjugación con PBS y EDTA 1 mM para una concentración de anticuerpo final de 2,5 mg/ml. Se agregó el compuesto 10 como una solución de DMSO (equivalente/anticuerpo 25 molar, 1,67 micromoles, en DMSO 0,4 ml) a 3,6 ml de esta solución de anticuerpo reducida (10 mg, 67 nanomoles) para una concentración de DMSO final al 10 % (v/v). La solución se mezcló durante 1,5 horas a temperatura ambiente, luego de la conjugación se inactivó mediante la adición de N-acetil cisteína (8,33 micromoles, 83,3 pl a 100 mM), luego se purificó en un AKTA™ Start FPLC mediante el uso de una columna GE Healthcare HiLoad™ 26/600 equipada con un Superdex 200 PG con elución con 2,5 ml/min PBS. Las fracciones correspondientes al pico del monómero del Conj D se agruparon, se concentraron mediante el uso de un filtrado por centrifugado Amicon Ultracell 50 KDa MWCO de 15 ml, se filtró de forma estéril y se analizó.
El análisis de UHPLC en un sistema Shimadzu Prominence mediante el uso de una columna Phenomenex Aeris 3,6 u XB- C18 150 mm x 2,1 mm con elución con un gradiente de agua y acetonitrilo en una muestra reducida del conj D a 280 nm y 330 nm (específico del Compuesto 10) muestra una mezcla de cadenas ligeras no conjugadas, cadenas ligeras enlazadas a una molécula simple del Compuesto 10, de cadenas pesadas no conjugadas y cadenas pesadas enlazadas a hasta tres moléculas del compuesto 10, consistente con una relación fármaco por anticuerpo (DAR, por sus siglas en inglés) de 7,47 moléculas del compuesto 10 por anticuerpo.
El análisis de UHPLC en un sistema Shimadzu Prominence con una columna Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 jm 4,6 x 150 mm (con una columna de guardia de 4 jm 3,0 x 20 mm) con elución con un amortiguador de SEC filtrado de forma estéril 0,3 ml/minuto que contiene un fosfato de potasio 200 mM pH 6,95, cloruro de potasio 250 mM e isopropanol al 10 % (v/v) en una muestra del Conj D a 280 nm muestra una pureza de monómero de 99 %. El análisis de SEC de UHPLC proporciona una concentración de Conj D final a 1,90 mg/ml en 4,4 ml, la masa obtenida del Conj A es 8,4 mg (rendimiento de 84 %).
Conjugado tratuzumab-22 (Conj E)
Se agregó una solución de DL-dititreitol (DTT) 50 mM en una solución salina amortiguada por fosfato pH 7,4 (PBS) (equivalente/anticuerpo 150 molar, 40 micromoles, 800 ml) a una solución 16,0 ml de anticuerpo, tratuzumab (40 mg, 267 nanomoles) en un amortiguador de reducción que contiene PBS y ácido etilenodiaminatetracético (EDTA) 1 mM y una concentración final de anticuerpo de 2,5 mg/ml. La mezcla de reducción se dejó reaccionar a temperatura ambiente durante 4 horas (o hasta que se observe una reducción total mediante UHPLC) en una agitadora orbital con agitación suave (50 rpm). La solución de anticuerpo reducido se intercambió (para retirar todo el exceso de agente de reducción), a través del uso de una centrifugación de filtro giratorio, en un amortiguador de conjugación que contiene PBS y EDTA 1 mM para una concentración final de anticuerpo de 2,5 mg/ml. Se agregó el compuesto 22 como una solución de DMSO (equivalente/anticuerpo 25 molar, 1,67 micromoles, en DMSO 0,4 ml) a 3,6 ml de esta solución de anticuerpo reducida (10 mg, 67 nanomoles) para una concentración final de DMSO al 10 % (v/v). La solución se mezcló durante 1,5 horas a temperatura ambiente, luego la conjugación se inactivó mediante la adición de N-acetil cisteína (8,33 micromoles, 83,3 ml a 100), luego se purificó en un AKTATM Start FPLC con una columna GE Healthcare HiLoad™ 26/600 equipada con Superdex 200 PG, con elución con PBS 2,5 ml/min. Las fracciones correspondientes al pico de monómero del Conj E se agruparon, se concentraron mediante el uso de un filtro giratorio Amicon Ultracell 50 kDa MWCO de 15 ml, se llevó a cabo una filtración estéril y se analizó.
El análisis de UHPLC en un sistema Shimadzu Prominence mediante el uso de una columna Phenomenex Aeris 3,6 u XB-C18 150 mm x 2,1 mm con elución con un gradiente de agua y acetonitrilo en una muestra reducida del Conj E a 280 nm y 330 nm (específico del Compuesto 22) muestra una mezcla de cadenas ligeras no conjugadas y cadenas ligeras enlazadas a una molécula única del compuesto 22, cadenas pesadas no conjugadas y cadenas pesadas enlazadas hasta a tres moléculas del Compuesto 22 consistente con una relación fármaco por anticuerpo (DAR, por sus siglas en inglés) de 7,39 moléculas del compuesto 22 por anticuerpo.
El análisis de UHPLC en un sistema Shimadzu Prominence con una columna Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 |jm 4,6 x 150 mm (con una columna de guardia de 4 jm 3,0 x 20 mm) con elución con un amortiguador de SEC filtrado de forma estéril 0,3 ml/minuto que contiene un fosfato de potasio 200 mM pH 6,95, cloruro de potasio 250 mM e isopropanol al 10 % (v/v) en una muestra del Conj E a 280 nm muestra una pureza de monómero de 96 %. El análisis de SEC de UHPLC proporciona una concentración del Conj E a 1,93 mg/ml en 4,6 ml, la masa obtenida del Conj E es 8,9 mg (rendimiento de 89 %).
Conjugado de tratuzumab-34 (Conj F)
Se agregó una solución de DL-ditiotreitol (DTT) 50 mM en una solución salina amortiguada por fosfato pH 7,4 (PBS), (equivalente/anticuerpo 150 molar, 10 micromoles, 200 j l) a una solución de 4,0 ml de anticuerpo (10 mg, 66,7 nanomoles) en un amortiguador de reducción que contiene PBS y ácido etilenodiaminatetracético (EDTA) 1 mM y una concentración final de anticuerpo de 2,5 mg/ml. La mezcla de reducción se dejó para reaccionar a temperatura ambiente durante 4 horas (o hasta que se observa una reducción total mediante UHPLC) en un agitador orbital con agitación suave (50 rpm). La solución del anticuerpo reducido se intercambió mediante amortiguador (para retirar todo el exceso de agente de reducción), mediante una centrifugación con un filtro de centrifugado, en un amortiguador de conjugación con PBS y EDTA 1 mM para una concentración de anticuerpo final de 2,5 mg/ml. Se agregó el compuesto 34 como una solución de DMSO (equivalente/anticuerpo 25 molar, 1,67 micromoles, en DMSO 0,4 ml) a 3,6 ml de esta solución de anticuerpo reducida (10 mg, 67 nanomoles) para una concentración de DMSO final al 10 % (v/v). La solución se mezcló durante 0,75 horas a temperatura ambiente, luego de la conjugación se inactivó mediante la adición de N-acetil cisteína (8,33 micromoles, 83,3 pl a 100 mM), luego se purificó en un AKTA™ Start FPLC mediante el uso de una columna GE Healthcare HiLoad™ 26/600 equipada con un Superdex 200 PG con elución con 2,5 ml/min PBS. Las fracciones correspondientes al pico de Conj F se agruparon, se concentraron mediante un filtro de centrifugado Amicon Ultracell 50 KDa MWCO de 15 ml, se repurificó en un AKTA™ Start FPLC mediante el uso de una columna GE Healthcare HiLoad™ 26/600 equipado con Superdex 200 PG, con elución con PBS 2,5 ml/min. Las fracciones correspondientes al pico del Conj F se agruparon, se concentraron mediante el uso de un filtrado por centrifugado Amicon Ultracell 50 KDa MWCO de 15 ml, se filtró de forma estéril y se analizó.
El análisis de UHPLC en un sistema Shimadzu Prominence mediante el uso de una columna Phenomenex Aeris 3,6 u XB-C18 150 mm x 2,1 mm con elución con un gradiente de agua y acetonitrilo en una muestra reducida del conj. F a 280 nm y 330 nm (específico del Compuesto 34) muestra una mezcla de cadenas ligeras no conjugadas, cadenas ligeras enlazadas a una molécula simple del Compuesto 34, de cadenas pesadas no conjugadas y cadenas pesadas enlazadas a hasta tres moléculas del compuesto 34, consistente con una relación fármaco por anticuerpo (DAR, por sus siglas en inglés) de 7,41 moléculas del compuesto 34 por anticuerpo.
El análisis de UHPLC en un sistema Shimadzu Prominence con una columna Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 jm 4,6 x 150 mm (con una columna de guardia de 4 jm 3,0 x 20 mm) con elución con un amortiguador de SEC filtrado de forma estéril 0,3 ml/minuto que contiene un fosfato de potasio 200 mM pH 6,95, cloruro de potasio 250 mM e isopropanol al 10 % (v/v) en una muestra del Conj F a 280 nm muestra una pureza de monómero de 0 % (dímero-trímero 100 %). El análisis de SEC de UHPLC proporciona una concentración de Conj F final a 1,09 mg/ml en 4,4 ml, la masa obtenida del Conj F es 4,8 mg (rendimiento de 48 %).
Conjugado Tratuzumab-58 (Conj G)
Se agregó una solución de ditiotreitol (DTT) 50 nM en una solución salina amortiguada por fosfato pH 7,4 (PBS), (equivalente/anticuerpo 120 molar, 32 micromoles, 0,64 ml a 50 mM) a una solución 3,7 ml de anticuerpo (40 mg, 0,267 micromoles) en un amortiguador de reducción que contiene PBS y ácido etilenodiaminatetracético (EDTA) 1 mM y una concentración final de anticuerpo de 2,0 mg/ml. La mezcla de reducción se calentó a 25 °C durante 4 horas (o hasta que se observe una reducción total mediante UHPLC) en un agitador orbital con agitación suave (60 rpm). Luego de enfriar hasta temperatura ambiente, el anticuerpo reducido se intercambió mediante el uso de un filtro giratorio MWCO vivaspin 50 kDa, en un amortiguador de reoxidación con PBS pH 7,4 y EDTA 1 mM para eliminar todo el exceso de agente de reducción. Se agregó una solución de ácido dehidroascórbico 50 mM (DHAA, equivalente/anticuerpo 20 molar, 5,3 micromoles, 0,1 ml a 50 mM) en DMSO y la mezcla de reoxidación se dejó reaccionar durante 16 horas a temperatura ambiente con agitación suave (60 rpm) en una concentración de anticuerpo de ~2,0 mg/ml (o hasta que se observó la reoxidación total de los tioles de cisteína para reformar los disulfuros de cisteína intercatenarios mediante UHPLC). La mezcla de reoxidación se centrifugó durante 3 min a 4000 rpm y luego se filtró de forma estéril mediante el uso del filtro de membrana de 0,22 pm. Se agregó el compuesto 58 como una solución de DMSO (equivalente/anticuerpo 11 molar, 1,46 micromoles, en DMSO 0,9 ml) a 9,1 ml de esta solución de anticuerpo reoxidada (20 mg, 0,13 micromoles) para una concentración de DMSO final al 10 % (v/v). La solución se agitó durante 3 horas a 25 °C y luego la conjugación se inactivó con N-acetil cisteína (7,3 micromoles, 0,07 ml a 100 mM).
El exceso de fármaco libre se retiró el filtro giratorio mediante el uso de MWCO vivaspin 50 kDa, en un amortiguador con PBS pH 7,4. La extensión del retiro del fármaco libre se monitoreó mediante UHPLC-RP con el uso de un conjugado puro. Luego del retiro completo del fármaco libre, el Conj G se filtró mediante el uso de un filtro Mustang de 0,22 |jm en una atmósfera estéril y luego se almacenó a 4 °C.
El análisis de UHPLC en un sistema Shimadzu Prominence mediante el uso de una columna Phenomenex Aeris 3,6 u XB- C18 150 x 2,1 mm con elución con un gradiente de agua y acetonitrilo en una muestra reducida del conjugado a 214 nm y 330 nm (específico del Compuesto 58) muestra cadenas ligeras no conjugadas y una mezcla de cadenas pesadas no conjugadas y cadenas pesadas enlazadas a una molécula única del compuesto 58, consistente con una relación fármaco por anticuerpo (d A r , por sus siglas en inglés) de 1,83 moléculas del compuesto 58 por anticuerpo.
El análisis de UHPLC en un sistema Shimadzu Prominence con una columna Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 pm 4,6 x 150 mm (con una columna de guardia de 4 pm 3,0 x 20 mm) con elución con un amortiguador de SEC filtrado de forma estéril 0,3 ml/minuto que contiene un fosfato de potasio 200 mM pH 6,95, cloruro de potasio 250 mM e isopropanol al 10 % (v/v) en una muestra de Conj G a 280 nm muestra una pureza de monómero de más de 99 %. El análisis de SEC de UHPLC proporciona una concentración de Conj G final a 1,34 mg/ml en 8,9 ml, la masa obtenida del Conj G es 11,9 mg (rendimiento de 60 %).
Conjugado de tratuzumab-59 (Conj H)
El anticuerpo (30 mg) se cargó en el soporte sólido y se redujo, se reoxidó, se conjugó en el Compuesto 59, se purificó, se liberó de la resina y se formuló en histidina 25 mM, sacarosa 200 mM, Tween-20 al 0,02 %, pH 6,0 de acuerdo con el método descrito en US20140037961A1.
El análisis de UHPLC en un sistema Shimadzu Prominence mediante el uso de una columna Phenomenex Aeris 3,6 u XB-C18 150 x 2,1 mm con elución con un gradiente de agua y acetonitrilo en una muestra reducida del conjugado a 214 nm y 330 nm (específico del Compuesto 59) muestra cadenas ligeras no conjugadas y una mezcla de cadenas pesadas no conjugadas y cadenas pesadas enlazadas a una única molécula del Compuesto 59, de forma consistente con una relación fármaco por antícuerpo (DAR) de 1,9 moléculas del compuesto 59 por anticuerpo.
El análisis de UHPLC en un sistema Shimadzu Prominence con una columna Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 pm 4,6 x 150 mm (con una columna de guardia de 4 pm 3,0 x 20 mm) con elución con un amortiguador de SEC filtrado de forma estéril 0,3 ml/minuto que contiene un fosfato de potasio 200 mM pH 6,95, cloruro de potasio 250 mM e isopropanol al 10 % (v/v) en una muestra de Conj H a 280 nm muestra una pureza de monómero de más de 97 %. El análisis de SEC de UHPLC proporciona una concentración de Conj H final a 1,49 mg/ml en 7,5 ml, la masa obtenida del Conj H es 11,2 mg (rendimiento de 37 %).
Conjugado de tratuzumab-48 (Conj I)
Se agregó una solución de ditiotreitol (DTT) 50 mM en una solución salina amortiguada por fosfato pH 7,4 (PBS), (equivalente/anticuerpo 80 molar, 21,4 micromoles, 0,43 ml a 50 mM) a una solución 3,7 ml de anticuerpo (40 mg, 0,267 micromoles) en un amortiguador de reducción que contiene PBS y ácido etilenodiaminatetracético (EDTA) 1 mM y una concentración final de anticuerpo de 2,0 mg/ml. La mezcla de reducción se calentó a 25 °C durante 4 horas (o hasta que se observa una reducción total mediante UHPLC) en un agitador orbital con agitación suave (60 rpm). Luego de enfriar hasta temperatura ambiente, el anticuerpo reducido se intercambió mediante un amortiguador, a través del uso de un filtro giratorio con un vivaspin MWCO 50 KDa, en un amortiguador de reoxidación que contiene PBS pH 7,4 y EDTA 1 mM para retirar todo el exceso de agente de reducción. Se agregó una solución de ácido dehidroascórbico (DHAA, equivalente/anticuerpo 20 molar, 5,3 micromoles, 0,1 ml a 50 mM) 50 mM en DMSO y la mezcla de reoxidación se permitió reaccionar durante 16 horas a temperatura ambiente con agitación suave (60 rpm) en una concentración de anticuerpo de ~2,0 mg/ml (o hasta que se observó la reoxidación total de los tioles de cisteína para reformar los disulfuros de cisteína intercatenarios mediante UHPLC). Luego, la mezcla de reoxidación se centrifugó durante 3 min a 4000 rpm y luego se filtró mediante el uso de un filtro de membrana de 0,22 pm. Se agregó el Compuesto 48 como una solución de DMSO (equivalente/anticuerpo 11 molar, 1,46 micromoles, en DMSO 1,7 ml) a 16,8 ml de esta solución de anticuerpo reoxidada (20 mg, 0,13 micromoles) para una concentración final de DMSO al 10 % (v/v). La solución se agitó durante 3 horas a 25 °C y luego la conjugación se inactivó con N-acetil cisteína (7,3 micromoles, 0,07 ml a 100 mM).
El exceso de fármaco libre se retiró con el filtro giratorio mediante el uso de MWCO vivaspin 50 kDa en PBS con amortiguador pH 7,4. La extensión del retiro del fármaco libre se monitoreó mediante UHPLC-RP con el uso de un conjugado puro. Luego de una eliminación completa del fármaco libre, el ADC se filtró mediante el uso de 0,22 pm, filtro Mustang en una atmósfera estéril y luego se almacenó a 4 °C.
El análisis de UHPLC en un sistema Shimadzu Prominence mediante el uso de una columna Phenomenex Aeris 3,6 u XB-C18 150 x 2,1 mm con elución con un gradiente de agua y acetonitrilo en una muestra reducida del conjugado a 214 nm y 330 nm (específico del Compuesto 48) muestra cadenas ligeras no conjugadas y una mezcla de cadenas pesadas no conjugadas y cadenas pesadas enlazadas a una molécula única del compuesto 48, de forma consistente con una relación fármaco por anticuerpo (DAR, por sus siglas en inglés) de 1,86 moléculas del compuesto 48 por anticuerpo.
El análisis de UHPLC en un sistema Shimadzu Prominence con una columna Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 |jm 4,6 x 150 mm (con una columna de guardia de 4 jm 3,0 x 20 mm) con elución con un amortiguador de SEC filtrado de forma estéril 0,3 ml/minuto que contiene fosfato de potasio 200 mM pH 6,95, cloruro de potasio 250 mM e isopropanol al 10 % (v/v) en una muestra de Conj I a 280 nm muestra una pureza de monómero de más de 99 %. El análisis de SEC de UHPLC proporciona una concentración de Conj I final a 1,7 mg/ml en 7,3 ml, la masa obtenida del Conj I es 12,4 mg (rendimiento de 62 %).
Conjugado de Tratuzumab-57 (Conj J)
Se agregó una solución de ditiotreitol (DTT) en una solución salina amortiguada por fosfato pH 7,4 (PBS), (equivalente/anticuerpo 80 molar, 21,4 micromoles, 0,43 ml a 50 mM) a una solución 3,7 ml de anticuerpo (40 mg, 0,267 micromoles) en un amortiguador de reducción que contiene PBS y ácido etilenodiaminatetracético (EDTA) 1 mM y una concentración final de anticuerpo de 2,0 mg/ml. La mezcla de reducción se calentó a 25 °C durante 4 horas (o hasta que se observe una reducción total mediante UHPLC) en una agitador orbital con agitación suave (60 rpm). Luego de enfriar hasta temperatura ambiente, el anticuerpo reducido se intercambió mediante un amortiguador, a través del uso de un MWCO 50 kDa vivaspin, en un amortiguador de reoxidación que contiene PBS pH 7,4 y EDTA 1 mM para retirar todo el exceso de agente de reducción. Se agregó una solución de ácido dehidroascórbico 50 mM (DHAA, equivalente/anticuerpo 20 molar, 5,3 micromoles, 0,1 ml a 50 mM) en DMSO y la mezcla de reoxidación se dejó reaccionar durante 16 horas a temperatura ambiente con agitación suave (60 rpm) en una concentración de anticuerpo de ~2,0 mg/ml (o hasta que se observó la reoxidación total de los tioles de cisteína para reformar los disulfuros de cisteína intercatenarios mediante UHPLC). La mezcla de reoxidación se centrifugó durante 3 min a 4000 rpm y luego se filtró de forma estéril mediante el uso del filtro de membrana de 0,22 jm . Se agregó el compuesto 57 como una solución de DMSO (equivalente/anticuerpo 11 molar, 1,46 micromoles, en DMSO 1,7 ml) a 16,8 ml de esta solución de anticuerpo reoxidada (20 mg, 0,13 micromoles) para una concentración de DMSO final al 10 % (v/v). La solución se agitó durante 3 horas a 25 °C y luego la conjugación se inactivó con N-acetil cisteína (7,3 micromoles, 0,07 ml a 100 mM).
El exceso de fármaco libre se retiró mediante el filtro de centrifugado mediante MWCO vivaspin 50 kDa en PBS con amortiguador pH 7,4. La extensión del retiro del fármaco libre se monitoreó mediante UHPLC-RP con el uso de un conjugado puro. Luego de una eliminación completa del fármaco libre, el ADC se filtró mediante el uso de 0,22 pm, filtro Mustang en una atmósfera estéril y luego se almacenó a 4 °C.
El análisis de UHPLC en un sistema Shimadzu Prominence mediante el uso de una columna Phenomenex Aeris 3,6 u XB- C18 150 x 2,1 mm con elución con un gradiente de agua y acetonitrilo en una muestra reducida del conjugado a 214 nm y 330 nm (específico del Compuesto 57) muestra cadenas ligeras no conjugadas y una mezcla de cadenas pesadas no conjugadas y cadenas pesadas enlazadas a una molécula única del compuesto 57, consistente con una relación fármaco por anticuerpo (d A r , por sus siglas en inglés) de 1,87 moléculas del compuesto 57 por anticuerpo.
El análisis de UHPLC en un sistema Shimadzu Prominence con una columna Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 jm 4,6 x 150 mm (con una columna de guardia de 4 jm 3,0 x 20 mm) con elución con un amortiguador de SEC filtrado de forma estéril 0,3 ml/minuto que contiene un fosfato de potasio 200 mM pH 6,95, cloruro de potasio 250 mM e isopropanol al 10 % (v/v) en una muestra del Conj J a 280 nm muestra una pureza de monómero mayor a 100 %. El análisis de SEC de UHPLC proporciona una concentración del Conj J a 0,86 mg/ml en 10,3 ml, masa obtenida del Conj J es 8,9 mg (rendimiento de 45 %).
Ejemplo 9
Evaluación in vitro del Conjugado 10
Se colocaron en placas células DU145 (2000/pocillo, ensayo de 72 horas) y MDA-MB-361 (5000/pocillo, ensayo de 144 horas) en medio de cultivo en placas de 96 pocillos tratadas con cultivo de tejido en un volumen de 80 j l por pocillos y se deja adherir durante la noche. Para diluciones de carga útil, primero se preparó una concentración de 60 X de cada dosis a ser evaluada mediante la dilución de los artículos de evaluación en DMSO. Las diluciones 60 X de la carga útil se diluyeron luego adicionalmente hasta un concentración de 5x en un medio de cultivo celular solo o un medio de cultivo celular con enzima p-glucuronidasa 5x (Sigma Cat n.° G0799-25KU). 20 j l de medio de cultivo celular con un artículo de prueba /- enzima se agregaron a las células en pocillos triplicados, y la curva de dosis final varió de 6,4 nM a 61 pM en series de dilución en serie 1:4 en etapas. El DMSO solo se diluyó en un medio de cultivo se utilizó como los controles. Las células tratadas se cultivaron a 37 °C/5 % de CO2 durante 72 a 144 horas (dependiendo de las cinéticas de crecimiento establecidas de cada línea celular particular). En el final del ensayo, se utilizó el ensayo de viabilidad de luminiscencia CellTiter-Glo® (CTG) (Promega) para determinar la citotoxicidad relativa. Se agregaron 100 j l de reactivo CTG a cada pocillo y las placas se incubaron durante 10 minutos a temperatura ambiente con agitación suave, se leyó la absorbancia de cada muestra a 560 nM mediante el uso de un luminómetro EnVision (Perkin Elmer). Se calculó el porcentaje de viabilidad celular mediante la fórmula a continuación:
(luminiscencia promedio de muestras tratadas/luminiscencia promedio de muestras de control) x 100.
Los valores IC50 se determinaron mediante el uso de un análisis de regresión no lineal logístico con un software GraphPad.
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Evaluación in vitro del Conj A
Se utilizó un método similar como se describe anteriormente con células MDA-MB-361 (HER2 altas, 5000 células/pocillo, ensayo de 144 horas) y MCF-7 (HER2 bajas, 1500 células/pocillo, ensayo de 144 horas). La densidad de colocación de células en placas y la duración del ensayo se determinaron en función de las cinéticas de crecimiento de cada línea celular en particular. Una concentración de 5x de cada dosis de ADC a ser evaluada se preparó mediante la dilución de los artículos de evaluación en medio de cultivo. Se agregaron veinte j l de ADC a las células en pocillos triplicados con una curva de dosis final que varió de 3 jg/m l a 11 pg/ml en una serie de dilución serial 1:4. Las células tratadas se cultivaron a 37 °C / 5 % de CO2 durante 144 horas y se utilizó el ensayo de viabilidad luminiscente CellTiter-Glo® (CTG) (Promega) para determinar la citotoxicidad relativa como se describe anteriormente.
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Evaluación del Conj B y el Conj C en células con inactivación de ARNip de p-glucuronidasa
Las células SKOV3 con sobreexpresión de HER2 se sometieron a transfección inversa para inactivar los niveles de expresión de GUSB. En primer lugar, una solución madre de 4x de RNAiMAX (concentración final de 0,125 pl/pocillo, Life Technologies) y una solución madre de 4x de oligos ARNip (ARNip sin direccionamiento/negativo, ARNip de GAPDH y GUSB, concentración final de ARNip de 100 nM/pocillo, Life Technologies) se prepararon en medio OptiMEM. Se incluyó solamente una mezcla de RNAiMAX/OptiMEM como el control de lípido. La solución de RNAiMAX de 4x y las soluciones de ARNip de 4x se llevaron a 2x mediante la mezcla en una relación uno a uno, y la mezcla RNAiMAX/ARNip se dejó incubar a temperatura ambiente durante 20 minutos. Luego de la incubación, 40 j l de las mezclas de RNAiMAX/ARNip y el control de lípido se agregaron por pocillo en placas de 96 pocillos tratadas con cultivo de tejido y 40 j l de la solución celular se agregaron en la mezcla lípido/ARNip, con una densidad de colocación en placas final de 2000 células/pocillo. Las placas se cultivaron a 37 °C/5 % de CO2 durante 72 horas, punto en el cual 20 j l de una concentración de 5x de cada dosis del Conj B/Conj C se agregaron en las células en pocillos duplicados con una curva de dosis final que varía de 10 jg/m l a 0,15 ng/ml en una serie de dilución serial 1:4. Las células tratadas con ADC se cultivaron a 37 °C / 5 % de CO2 durante 72 horas adicionales y se utilizó el ensayo de viabilidad luminiscente CellTiter-Glo® (CTG) (Promega) para determinar la citotoxicidad relativa como se describe anteriormente. La eficacia de la inactivación del ARNip se determinó mediante niveles de expresión de ARN y medición de la actividad de enzimas p-glucuronidasa.
Los resultados se muestran en LA Figura 1 (Conj B) y la Figura 2 (Conj C), donde se utilizan los siguientes símbolos.
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Ejemplo 10 - Evaluación in vitro
El medio a partir de un cultivo celular subconfluente (80-90 % de confluencia) en un matraz T75 se aspiró y el matraz se enjuagó con PBS (alrededor de 20 ml) y se vació. Se agregó tripsina-EDTA (5 ml), el matraz regresó a la incubadora con gas a 37 °C durante hasta alrededor de 5 minutos, luego se golpeó fuertemente para desprender y disociar las células del plástico. La suspensión celular se transfirió a un tubo de centrifugación con tapa de rosca de 50 ml estéril, se diluyó con el medio de crecimiento a un volumen final de 15 ml, luego se somete a centrifugación (400 g, durante 5 min). Se aspiró el sobrenadante y el sedimento se resuspendió en un medio de cultivo 10 ml. Puede ser necesario el pipeteado reiterado para producir suspensiones celulares monodispersas. La concentración y viabilidad celular se miden a partir de células teñidas con azul tripano, y se cuentan con un contador celular automático LUNA-N™ Las células se diluyeron hasta 2x105/ml, se dispensaron (50 pl/pocillo) en placas de fondo plano de 96 pocillos y se incubaron durante la noche antes del uso.
Una solución madre (1 ml) del conjugado de anticuerpo fármaco (20 pg/ml) se llevó a cabo mediante la dilución del ADC esterilizado por filtro en el medio de cultivo celular. Un conjunto de diluciones de 8 x 10 veces de ADC madre se llevó a cabo en una placa de 24 pocillos mediante transferencia en serie de 100 pl en 900 pl de medio de cultivo celular.
La dilución de ADC se dispensó (50 pl/pocillo) en 4 pocillos replicados de la placa de 96 pocillos, que contienen una suspensión celular 50 pl sembrada el día anterior. Los pocillos de control recibieron medio de cultivo celular 50 pl. La placa de 96 pocillos que contienen células y los ADC se incubaron en 37 °C en una incubadora con gas CO2 durante el tiempo de exposición.
Al final del período de incubación, al se midió la viabilidad celular mediante un ensayo MTS. El MTS (Promega) se dispensó (20 pl por pocillo) en cada pocillo y se incubó durante 4 horas a 37 °C en la incubadora con gas CO2. Se midió la absorbancia del pocilio a 490 nm. Se calculó el porcentaje de supervivencia celular a partir de la absorbancia promedio en los 4 pocillos tratados con ADC en comparación con la absorbancia promedio en 4 pocillos no tratados de control (100 %). Se determinó IC50 a partir de los datos de respuesta a la dosis mediante el uso de GraphPad Prism a través de un algoritmo de ajuste de curva no lineal: sigmoide, 4PL X es log(concentración).
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Ejemplo 11 - Evaluación de xenoinjertos
Ratones xenoinjertados NCI-N87
Los ratones hembra con inmunodeficiencia combinada grave (Fox Chase SCID®, C.B-17/lcr-Prkdcscid, Charles River) tuvieron diez semanas de edad con un intervalo de peso corporal (PC) de 16,5 a 21,1 gramos en el Día 1 del estudio. Los animales fueron alimentados como se deseó con agua (ósmosis inversa, 1 ppm Cl) y Lab Diet® NIH 31 modificada e irradiada que consiste en proteína en bruto al 18,0 %, grasa en bruto al 5,0 % y fibra en bruto al 5,0 %. Los ratones se alojaron en un lecho para animales de laboratorio de Enricho'cobs ™ irradiado en microaisladores estático en un ciclo ligero de 12 horas a 20-22 °C (68-72 °F) y 40-60 % de humedad. CR Discovery Services cumple específicamente con las recomendaciones de la Guía para el Cuidado y el Uso de Animales de Laboratorio con respecto a restricción, cuidados, procedimientos quirúrgicos, alimentación y regulación del fluido y cuidados veterinarios. El programa de cuidado y uso animal en CR Discovery Services se acredita por la Asociación Internacional para la Evaluación y Acreditación del Cuidado de Animales de Laboratorio (AAALAC, por sus siglas en inglés), que asegura el cumplimiento con estándares aceptados para el cuidado y uso de los animales de laboratorio.
Cultivo de células tumorales
Se cultivaron células NCI-N87 de linfoma de carcinoma gástrico en medio RPMI-1640 complementado con suero bovino fetal al 10 %, glutamina 2 mM, penicilina 100 unidades/ml, sulfato de estreptomicina 100 pg/ml y gentamicina 25 pg/ml. Las células se cultivaron en frascos de cultivo de tejido en una incubadora humidificada a 37 °C en una atmósfera de CO2 al 5 % y aire al 95 %.
Implante in vivo y crecimiento tumoral
Las células NCI-N87 utilizadas para el implante se recolectaron durante el crecimiento de fase log y se resuspendieron en una solución salina amortiguada por fosfato (PBS) que contiene Matrigel™ al 50 % (BD Biosciences). En el día del implante tumoral, cada ratón de prueba se inyectó de forma subcutánea en el flanco derecho con 1 x 107 células (0,1 ml de suspensión celular) y el crecimiento tumoral se monitoreó a medida que el tamaño promedio alcanzó el intervalo diana de 100 a 150 mm3. Catorce días después, designado como el día 1 del estudio, los ratones se clasifican de acuerdo con el tamaño tumoral calculado en grupos, cada uno consiste en diez animales con volúmenes tumorales individuales que varían de 108 a 144 mm3y volúmenes tumorales promedio grupales de 115 mm3.
Los tumores se midieron en dos dimensiones mediante el uso de calibres y el volumen se calculó mediante el uso de la fórmula:
w 3 1’ i
Volumen tumoral (mm3) = £
donde w = ancho y l = longitud, en mm, del tumor. El peso tumoral puede estimarse asumiendo que 1 mg es equivalente a 1 mm3 de volumen tumoral.
Tratamiento
El tratamiento comienza el día 1 en grupos de 10 ratones (n = 10) con tumores subcutáneos establecidos NCI-N87 (108-144 mm3). Se administró trastuzumab-10 de forma intravenosa una vez en el día 1 (qd x 1). Un grupo tratado con un vehículo funcionó como el grupo de control para el análisis de eficacia. Los tumores se midieron dos veces por semana hasta que el estudio finalizó en el día 79. Cada ratón se sometió a eutanasia cuando su tumor alcanzó un volumen de referencia de 800 mm3 o en el día final, lo que haya sucedido primero. El tiempo hasta la referencia (TTE, por sus siglas en inglés) se calculó para cada ratón.
El resultado del tratamiento se determinó a partir del porcentaje de demora del crecimiento tumoral (% TGD, por sus siglas en inglés), definido como el aumento del porcentaje de la mediana de TTE para los ratones tratados con respecto a los de control, con diferencias entre grupos considerados estadísticamente diferentes en P < 0,05 mediante el uso de un análisis de supervivencia logrank. Los ratones se monitorearon para determinar respuestas a la regresión total (RT) y regresión parcial (RP).
La tolerabilidad al tratamiento fue evaluada mediante mediciones de peso corporal y una observación frecuente para determinar indicios de efectos secundarios relacionados con el tratamiento. La tolerabilidad al tratamiento fue evaluada mediante mediciones de peso corporal y una observación frecuente para determinar indicios de efectos secundarios relacionados con el tratamiento. Todos los regímenes fueron tolerados de forma satisfactoria. La mediana del TTE para los controles tratados con vehículo un fue de 50,7 días, lo que establece un TGD posible máximo de 28,3 días (56 %) para el estudio de 79 días.
Se definió la dosis eficaz mínima como la dosificación mínima exigida para producir la estasis tumoral durante veintiocho días luego de la administración del artículo de evaluación. En función de la inspección visual de las gráficas de volumen tumoral media y mediana y el cambio de porcentaje del volumen tumoral del día 1, el trastuzumab-10 (Conj A) a 1,0 mg/kg pareció ser la dosificación que logró una respuesta consistente con la dosis eficaz mínima.
Dos de los animales del grupo de 0,3 mg/kg fueron sobrevivientes del final del estudio con un MTV de 708 mm3. Ocho de los animales del grupo de 1,0 mg/kg fueron sobrevivientes del final del estudio con un MTV de 650 mm3.
Los resultados se ilustran en la Figura 3.
Ratones xenoinjertados JIMT-1
Ratones
Los ratones hembra con inmunodeficiencia combinada grave (Fox Chase SCID®, CB17/lcr-Prkdcscid/IcrIcoCrl, Charles River) tuvieron diez semanas de edad con un intervalo de peso corporal (PC) de 15,1 a 22,2 g en el Día 1 del estudio.
Cultivo de células tumorales
Se cultivaron células de carcinoma de mama humano JIMT-1 en DMEM con suero bovino fetal al 10 %, 100 unidades/m de penicilina G de sodio, 100 pg/ml de sulfato de estreptomicina, 25 pg/ml de gentamicina y 2 mM de glutamina. Los cultivos celulares se mantuvieron en frascos de cultivo de tejido en una incubadora humidificada a 37 °C en una atmósfera de CO2 al 5 % y aire al 95 %.
Implante in vivo y crecimiento tumoral
Las células JIMT-1 utilizadas para el implante se recolectaron durante el crecimiento exponencial y se resuspendieron en Matrigel™ al 50 % (BD Biosciences); solución salina amortiguada por fosfato al 50 % en una concentración de 5 x 107 células/ml. En el día del implante tumoral, cada ratón de prueba se inyectó de forma subcutánea en el flanco derecho con células 1 x 107 (suspensión celular 0,2 ml) y el crecimiento tumoral se monitoreó a medida que el tamaño promedio alcanzó el intervalo diana de 100 a 150 mm3. Los tumores se midieron en dos dimensiones mediante el uso de calibres y el volumen se calculó mediante el uso de la fórmula:
WS íf í
Volumen tumoral (mm3) = Z
donde w = ancho y l = longitud, en mm, del tumor. El peso tumoral puede estimarse con la asunción que 1 mg es equivalente a 1 mm3 de volumen tumoral.
Tratamiento
El tratamiento comienza el día 1 en grupos de 10 ratones (n = 10) con tumores subcutáneos establecidos JIMT-1 con intervalo de volumen (88-196 mm3) y un grupo de volumen tumoral medio de 120 a 122 mm3. Se administró trastuzumab-10 (Conj A) de forma intravenosa una vez en el día 1 (qd x 1). Un grupo tratado con un vehículo funcionó como el grupo de control para el análisis de eficacia. Los tumores se midieron dos veces por semana hasta que el estudio finalizó en el día 59. Cada ratón se sometió a eutanasia cuando su tumor alcanzó un volumen de referencia de 1000 mm3 o en el día final, lo que haya sucedido primero. El tiempo hasta la referencia (TTE, por sus siglas en inglés) se calculó para cada ratón.
El resultado del tratamiento se determinó a partir del porcentaje de demora del crecimiento tumoral (% TGD, por sus siglas en inglés), definido como el aumento del porcentaje de la mediana de TTE para los ratones tratados con respecto a los de control, con diferencias entre grupos considerados estadísticamente diferentes en P < 0,05 mediante el uso de un análisis de supervivencia logrank. Los ratones se monitorearon para determinar respuestas a la regresión total (RT) y regresión parcial (RP).
La tolerabilidad al tratamiento fue evaluada mediante mediciones de peso corporal y una observación frecuente para los signos de los efectos secundarios relacionados con el tratamiento. Todos los regímenes fueron tolerados de forma satisfactoria. El TTE de mediana para los controles tratados con vehículo fue de 48,4 días, lo que establece un TGD máximo posible de 10,6 días (22 %) durante el estudio de 59 días. Todos los regímenes de ADC evaluados produjeron un beneficio de supervivencia en comparación con los controles tratados con vehículo (P<0,01).
Se definió la dosis eficaz mínima como la dosificación mínima exigida para producir la estasis tumoral durante veintiocho días luego de la administración del artículo de evaluación. En función de la inspección visual de las gráficas de volumen tumoral media y mediana y el cambio de porcentaje del volumen tumoral del día 1, el trastuzumab-10 (Conj A) a 1,0 mg/kg pareció ser la dosificación que logró una respuesta consistente con la dosis eficaz mínima.
Se observó un efecto dependiente de la dosis donde el volumen tumoral medio del grupo de 0,3 mg/kg aumentó lentamente a lo largo del día 34 luego evolucionó posteriormente, mientras que el grupo de 1,0 mg/kg mostró un volumen tumoral medio estático a lo largo del día 38 que evolucionó posteriormente. El TTE medio para el grupo de 0,3 mg/kg fue de 56,9 días correspondientes a un TGD significativo de 8,5 días (18 %) con respecto al control (P < 0,05). El grupo de 0,3 mg/kg no tuvo respuestas de regresión objetivas. Cinco de los animales del grupo de 0,3 mg/kg fueron sobrevivientes del final del estudio con un MTV de 486 mm3.
La mediana del TTE para el grupo de 1,0 mg/kg fue de 59,0 días máximo correspondiente a un TGD significativo de 10,6 días (22 %) con respecto al control (P < 0,001). El grupo de 1,0 mg/kg no tuvo respuestas de regresión objetivas. Nueve de los animales del grupo de 1,0 mg/kg fueron sobrevivientes del “final del estudio” con un MTV de 446 mm3. Los grupos de 0,3 y 1,0 mg/kg fueron significativamente diferentes entre sí (P < 0,05).
Los resultados se ilustran en la Figura 4.
Ejemplo 12 - Estudios de toxicidad/índice terapéutico
Estudio en ratas:
Se utilizó un estudio de toxicidad de dosis única para determinar la dosis máxima tolerada (MTD, por sus siglas en inglés) y el perfil de seguridad de Trastuzumab-10 (Conj A). Se dosificaron ratas Sprague Dawley macho (ENVIGO) una vez mediante inyección en bolo intravenosa lenta a través de la vena de la cola con el control de vehículo (Histidina 25 mM, sacarosa 200 mM pH 6,0) o material de prueba (Conj A). Los parámetros evaluados durante el estudio incluyeron mortalidad, examinaciones físicas, observaciones en jaulas, pesos corporales, cambios en el peso corporal, patología clínica (química clínica, hematología y coagulación) y hallazgo de macropatologías. Todos los animales en los grupos 1-6 se sacrificaron en el día de estudio (DE) 29, salvo un animal del grupo 6 que fue sacrificado en el día de estudio (DE) 25.
Figure imgf000130_0001
La tolerabilidad se determinó en función de las referencias de toxicidad, que incluyen disminución de reticulocitos absolutos, glóbulos blancos y componentes celulares, así como también lesiones macroscópicas y microscópicas en los pulmones. El hallazgo mayor en niveles de dosis de > 4 mg/kg fueron observaciones histopatológicas de las lesiones pulmonares. En la dosis de 4 mg/kg, los hallazgos fueron leves y se consideraron reversibles. A medida que la dosis aumentaba, las lesiones pulmonares tuvieron un aumento de la gravedad y no se consideraron reversibles. En función de este hallazgo, la dosis máxima tolerada (MTD) en la rata luego de una dosis única del Conj A fue determinada en 6 mg/kg.
Índice terapéutico
El índice terapéutico puede calcularse dividiendo la dosis única máxima tolerada (MTD) de ADC no diana en ratas, mediante la dosis única mínima eficaz (MED) de un ADC diana. El MED es la dosis necesaria única para lograr la estasis tumoral en un modelo in vivo en 28 días (para un xenoinjerto NCI-N87).
Por lo tanto, los conjugados del compuesto 10, el índice terapéutico es el MTD de 6 mg/kg dividido entre el MED que es 1,0 mg/kg (ver anteriormente), lo que proporciona un índice terapéutico 6.

Claims (88)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de fórmula I:
Figure imgf000131_0001
y sales y solvatos del mismo, en donde:
los corchetes indican que el grupo NO2 es opcional;
D representa el grupo D1 o el grupo D2:
Figure imgf000131_0002
la línea punteada indica la presencia opcional de un enlace doble entre C2 y C3,
cuando existe un enlace doble entre C2 y C3, R2 se selecciona del grupo que consiste en:
(ia) grupo arilo C5-10, opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que comprende: halo, nitro, ciano, éter, carboxi, éster, alquilo C1-7, heterociclilo C3-7 y bis-oxi-alquileno C1-3; (ib) alquilo C1-5 alifático saturado;
(ic) cicloalquilo C3-6 saturado;
(id)
Figure imgf000131_0003
en donde cada uno de R11, R12' y R13 se selecciona de forma independiente de H, alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3 y ciclopropilo, donde la cantidad total de átomos de carbono en el grupo R2 es no mayor de 5;
(ie)
Figure imgf000132_0001
en donde uno de R15a y R15b es H y el otro se selecciona de: fenilo, estando el fenilo opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de halo, metilo, metoxi, piridilo y tiofenilo, y
(if)
Figure imgf000132_0002
donde R14 se selecciona de: H; alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3, ciclopropilo; fenilo, estando el fenilo opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de halo, metilo, metoxi, piridilo y tiofenilo,
cuando existe un enlace simple entre C2 y C3,
R2 se selecciona de H, OH, F, diF y
Figure imgf000132_0003
donde R16a y R16b se seleccionan independientemente de H, F, alquilo C1-4 saturado, alquenilo C2-3, estando los grupos alquilo y alquenilo opcionalmente sustituidos por un grupo que se selecciona de alquilamido C1-4 y alquiléster C1-4; o, cuando uno de R16a y R16b es H, el otro se selecciona de nitrilo y un alquiléster C1-4;
D' representa el grupo D'1 o el grupo D'2:
Figure imgf000132_0004
en donde la línea punteada indica la presencia opcional de un enlace doble entre C2' y C3',
cuando existe un enlace doble entre C2' y C3', R12 se selecciona del grupo que consiste en:
(iia) grupo arilo C5-10, opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que comprende: halo, nitro, ciano, éter, carboxi, éster, alquilo C1-7, heterociclilo C3-7 y bis-oxi-alquileno C1-3; (iib) alquilo C1-5 alifático saturado;
(iic) cicloalquilo C3-6 saturado;
(iid)
Figure imgf000132_0005
donde cada uno de R21, R22 y R23 se selecciona de forma independiente de H, alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3 y ciclopropilo, donde la cantidad total de átomos de carbono en el grupo R12 es no mayor de 5;
(iie)
Figure imgf000133_0001
en donde uno de R25a y R25b es H y el otro se selecciona de: fenilo, estando el fenilo opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de halo, metilo, metoxi, piridilo y tiofenilo, y
(iif)
Figure imgf000133_0002
donde R24 se selecciona de: H; alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3, ciclopropilo; fenilo, estando el fenilo opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de halo, metilo, metoxi, piridilo y tiofenilo,
cuando existe un enlace simple entre C2' y C3',
R12 se selecciona de H, OH, F, diF y
Figure imgf000133_0003
donde R26a y R26b se seleccionan independientemente de H, F, alquilo C1-4 saturado, alquenilo C2-3, estando los grupos alquilo y alquenilo opcionalmente sustituidos por un grupo que se selecciona de alquilamido C1-4 y alquiléster C1-4; o, cuando uno de R26a y R26b es H, el otro se selecciona de nitrilo y un alquiléster C1-4;
R6 y R9 se seleccionan independientemente de H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', nitro, Me3Sn y halo; donde R y R' se seleccionan de forma independiente de los grupos alquilo C1-12, heterociclilo C3-20 y arilo C5-20 opcionalmente sustituidos;
R7 se selecciona de H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', nitro, Me3Sn y halo;
R" es un grupo alquileno C3-12 cuya cadena puede estar interrumpida por uno o más heteroátomos, por ejemplo, O, S, NRN2 (donde RN2 es H o alquilo C1-4) y/o anillos aromáticos, por ejemplo, benceno o piridina;
Y e Y' se seleccionan de O, S o NH;
R6', R7', R9' se seleccionan de los mismos grupos que R6, R7y R9, respectivamente;
R11b se selecciona de OH, ORA, donde RA es alquilo C1-4; y
RL es un enlazador para la conexión a un agente de unión celular, que se selecciona de:
Figure imgf000133_0004
en donde
Q es:
Figure imgf000133_0005
donde QX es tal que Q es un residuo de aminoácido, un residuo de dipéptido o un residuo de tripéptido;
X es:
donde a = 0 a 5, b = 0 a 16, c = 0 o 1, d = 0 a 5;
GL se selecciona de:
Figure imgf000134_0001
donde Ar representa un grupo arileno C5-6.
2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde: a) tanto Y como Y' son O y/o
b) R'' es alquileno C3-7 o un grupo de fórmula:
Figure imgf000135_0001
donde r es 1 o 2 y/o
c) R9 es H y /o
d) R6 es H y/o
e) R7 se selecciona de H, OH y OR o un grupo alquiloxi C1-4.
3. Un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, en donde:
a) D es D1, existe un enlace doble entre C2 y C3, y R2 es un grupo arilo C5-7, en donde R2 opcionalmente tiene uno o tres grupos sustituyentes seleccionados de metoxi, etoxi, flúor, cloro, ciano, bis-oxi-metileno, metil-piperazinilo, morfolino y metiltiofenilo o
b) D es D1, existe un enlace doble entre C2 y C3, y R2 es un grupo arilo C8-10, en donde R2 opcionalmente tiene de uno a tres grupos sustituyentes seleccionados de metoxi, etoxi, flúor, cloro, ciano, 6/s-oxi-metileno, metilpirerazinilo, morfolino y metil-tiofenilo o
c) D es D1, existe un enlace doble entre C2 y C3, y R2 es metilo, etilo o propilo o
d) existe un doble enlace entre C2 y C3 y R2 es ciclopropilo o
e) en donde D es D1, existe un enlace doble entre C2 y C3 y R2 es un grupo de fórmula:
Figure imgf000135_0002
en donde:
i) la cantidad total de los átomos de carbono en el grupo R2 no es mayor de 4 y/o
ii) uno de R11, R12' y R13 es H, estando los otros grupos seleccionados de H, alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3 y ciclopropilo o
iii) dos de R11, R12' y R13 son H, estando el otro grupo seleccionado de H, alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3 y ciclopropilo o
f) D es D1, existe un doble enlace entre C2 y C3 y R2 es: el grupo:
Figure imgf000135_0003
o
g) D es D1, existe un doble enlace entre C2 y C3 y R2 es un grupo de fórmula:
Figure imgf000135_0004
en donde R14 se selecciona de H, metilo, etilo, etenilo y etinilo.
4. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en donde
a) D es D1, existe un enlace simple entre C2 y C3, y R2 es H o
b) D es D1, existe un enlace simple entre C2 y C3, y R2 es
Figure imgf000136_0001
y R16a y R16b son ambos H.
c) D es D1, existe un enlace simple entre C2 y C3 y R2 es
Figure imgf000136_0002
y R16a y R16b son ambos metilo o
d) D es D1, existe un enlace simple entre C2 y C3, R2 es
Figure imgf000136_0003
uno de R16a y R16b es H, y el otro se selecciona de alquilo C1-4 saturado, alquenilo C2-3, estando los grupos alquilo y alquenilo opcionalmente sustituidos.
5. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde:
a) D' es D'1, existe un enlace doble entre C2' y C3' y R12 es un grupo arilo C5-7, en donde R12 tiene de uno a tres grupos sustituyentes seleccionados de metoxi, etoxi, flúor, cloro, ciano, bis-oxi-metileno, metil-piperazinilo, morfolino y metiltiofenilo o
b) D' es D'1, existe un enlace doble entre C2' y C3' y R12 es un grupo arilo C8-10, en donde R12 opcionalmente tiene de uno a tres grupos sustituyentes seleccionados de metoxi, etoxi, flúor, cloro, ciano, bis-oxi-metileno, metilpiperazinilo, morfolino y metiltiofenilo o
c) D' es D'1, existe un enlace doble entre C2' y C3' y R12 es metilo, etilo o propilo o
d) D' es D'1, existe un enlace doble entre C2' y C3' y R12 es ciclopropilo o
e) D' es D'1, existe un doble enlace entre C2' y C3' y R12 es un grupo de fórmula:
Figure imgf000136_0004
en donde:
i) la cantidad total de los átomos de carbono en el grupo R12 es no mayor de 3;
ii) uno de R21, R22y R23es H, estando los otros dos grupos seleccionados de H, alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3 y ciclopropilo o.
iii) dos de R21, R22 y R23 son H, estando el otro grupo seleccionado de H, alquilo C1-3 saturado, alquenilo C2-3, alquinilo C2-3 y ciclopropilo o
f) D' es D'1, existe un doble enlace entre C2' y C3' y R12 es el grupo:
Figure imgf000136_0005
o
g) D' es D'1, existe un doble enlace entre C2' y C3' y R12 es un grupo de fórmula:
Figure imgf000136_0006
en donde R24 se selecciona entre H, metilo, etilo, etenilo y etinilo.
6. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde
a) D' es D'1, existe un enlace simple entre C2' y C3' y R12 es H o
b) D' es D'1, existe un enlace simple entre C2' y C3', R12 es
Figure imgf000137_0001
y R26a y R26b son ambos H o
c) D' es D'1, existe un enlace simple entre C2' y C3' y R12 es
* v. 26a
R'
Y 26
R26b
y R26a y R26b son ambos metilo o
d) D' es D'1, existe un enlace simple entre C2' y C3', R12 es
26
* -s. a
R
Yi , o2 í6íb
uno de R26a y R26b es H y el otro se selecciona de alquilo C1-4 saturado, alquenilo C2-3, estando los grupos alquilo y alquenilo opcionalmente sustituidos.
7. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde
a) R6' se selecciona de los mismos grupos que R6, R7' se selecciona de los mismos grupos que R7, R9' se selecciona de los mismos grupos que R9 e Y' se selecciona de los mismos grupos que Y y/o.
b) R6' es el mismo grupo que R6, R7' es el mismo grupo que R7, R9' es el mismo grupo que R9 e Y' es el mismo grupo que Y y/o
c) R12 es el mismo grupo que R2.
8. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que es de fórmulas Ia-1, Ia-2 o Ia-3:
Figure imgf000138_0001
donde R2a y R12a donde son iguales y se seleccionan de:
(a)
Figure imgf000138_0002
(b)
Figure imgf000138_0003
(c)
Figure imgf000138_0004
(d)
Figure imgf000138_0005
(e)
Figure imgf000138_0006
(f)
Figure imgf000139_0001
(g)
Figure imgf000139_0002
y
(h)
Figure imgf000139_0003
R1a se selecciona de metilo y bencilo;
RL y R11b son como se definió en la reivindicación 1;
9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o la 2, donde tanto R2 como R12 comprenden no más de 3 átomos de carbono.
10. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, donde R11b es OH o ORA, donde RA es alquilo C1-4., donde opcionalmente RA es metilo.
11. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde QX es:
a) un residuo de aminoácido seleccionado de Phe, Lys, Val, Ala, Cit, Leu, Ile, Arg y Trp o.
b) un residuo de dipéptido seleccionado de:
CO-Phe-Lys-NH,
CO-Val-Ala-NH,
CO-Val-Lys-NH,
CO-Ala-Lys-NH,
CO-Val-Cit-NH,
CO-Phe-Cit-NH,
CO-Leu-Cit-NH,
CO-Ile-Cit-NH,
CO-Phe-Arg-NH, y
CO-Trp-Cit-NH; o
c) un residuo tripéptido.
12. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en donde
a) a es de 0 a 3 y/o
b) b es de 0 a 12 y/o
c) d es de 0 a 3.
13. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en donde a es 0, c es 1 y d es 2, y b es de 0 a 8.
14. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, donde el compuesto es de fórmula Id:
Figure imgf000140_0001
L-(Dl)p (I)
en donde L es una unidad de ligando, DL es una unidad de enlazador del fármaco de fórmula I':
Figure imgf000140_0002
en donde D, R2, R6, R7, R9, R11b, Y, R”, Y', D', R6', R7', R9' y R12, que incluye la presencia o ausencia de enlaces dobles entre C2 y C3 y C2' y C3' respectivamente, son como se definen en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10;
en donde p es un número entero de 1 a 20;
RLL es un enlazador para la conexión a un agente de unión celular, que es:
Figure imgf000140_0003
donde Q y X son como se definen en cualquiera de las reivindicaciones 1 y 11 a 13 y GLL se selecciona de:
Figure imgf000141_0001
continuación
Figure imgf000142_0002
donde Ar representa un grupo arileno C5-6.
16. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 o un conjugado de acuerdo con la reivindicación 15, en donde
a) Ar es un grupo fenileno y/o
b) GLL se selecciona de GLL1-1 y GLL1-2
17. Un conjugado de acuerdo con la reivindicación 15, en donde DL es de fórmula (Id'):
Figure imgf000142_0001
18. Un conjugado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 15 a 17, en donde la unidad de ligando es un anticuerpo o un fragmento activo del mismo.
19. El conjugado de conformidad con la reivindicación 18, en donde el anticuerpo o el fragmento de anticuerpo es un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo para un antígeno asociado a tumor en donde opcionalmente el anticuerpo o el fragmento de anticuerpo es un anticuerpo que se une a uno o más antígenos asociados a tumor o receptores de la superficie celular seleccionados de (1)-(88):
(1) BMPR1B;
(2) E16;
(3) STEAP1;
(4) 0772P;
(5) MPF;
(6) Napi3b;
(7 ) Sema 5b;
(8) PSCA hlg;
(9) ETBR;
(10) MSG783;
(11) STEAP2;
(12) TrpM4;
(13) CRIPTO;
(14) CD21;
(15) CD79b;
(16) FcRH2;
(17) HER2;
(18) NCA;
(19) MDP;
(20) IL20R-alfa;
(21) Brevican;
(22) EphB2R;
(23) ASLG659;
(24) PSCA;
(25) GEDA;
(26) BAFF-R;
(27) CD22;
(28) CD79a;
(29) CXCR5;
(30) HLA-DOB;
(31) P2X5;
(32) CD72;
(33) LY64;
(34) FcRHI;
(35) IRTA2;
(36) TENB2;
(37) PSMA - FOLH1;
(38) SST;
(38.1) SSTR2;
(38.2) SSTR5;
(38.3) SSTR1;
(38.4) SSTR3;
(38.5) SSTR4;
(39) ITGAV;
(40) ITGB6;
(41) CEACAM5;
(42) MET;
(43) MUC1;
(44) CA9;
(45) EGFRvIII;
(46) CD33;
(47) CD 19;
(48) IL2RA;
(49) AXL;
(50) CD30 - TNFRSF8;
(51) BCMA - TNFRSF17;
(52) CT Ags - CTA;
(53) CD174 (Lewis Y) - FUT3;
(54) CLEC14A;
(55) GRP78 - HSPA5;
(56) CD70;
(57) antígenos específicos de células madre;
(58) ASG-5;
(59) ENPP3;
(60) PRR4;
(61) GCC-GUCY2C;
(62) Liv-1 - SLC39A6;
(63) 5T4;
(64) CD56- NCMA1;
(65) CanAg;
(66) FOLR1;
(67) GPNMB;
(68) TIM-1 -HAVCR1;
(69) RG-1/Mindina diana de tumor de próstata - Mindina/RG-1;
(70) B7-H4 - VTCN1;
(71) PTK7;
(72) CD37;
(73) CD138 -SDC1;
(74) CD74;
(75) Claudinas - CLs;
(76) EGFR;
(77) Her3;
(78) RON - MST1 R;
(79) EPHA2;
(80) CD20 - MS4A1;
(81) Tenascina C - TNC;
(82) FAP;
(83) DKK-1;
(84) CD52;
(85) CS1 - SLAMF7;
(86) Endoglina- ENG;
(87) Anexina A1 - ANXA1;
(88) V-CAM (CD106) -VCAM1.
20. El conjugado de las reivindicaciones 18 a 19, en donde el anticuerpo o el fragmento de anticuerpo es un anticuerpo modificado con cisteína.
21. El conjugado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 15 a 20 donde p es un número entero de 1 a 8.
22. Una composición que comprende una mezcla de conjugados de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 15 a 21, en donde el promedio p en la mezcla de compuestos de conjugados es de aproximadamente 1 a aproximadamente 8.
23. El conjugado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 15 a 21, para usarse en terapia.
24. Una composición farmacéutica que comprende el conjugado de cualquiera de las reivindicaciones 15 a 21, un diluyente, un vehículo o un excipiente farmacéuticamente aceptables.
25. El conjugado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 15 a 21 o la composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 103, para usarse en el tratamiento de una enfermedad proliferativa en un sujeto, en donde opcionalmente la enfermedad tratada es cáncer.
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