JP2013529190A5 - - Google Patents
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Description
「Ｆｃレセプター」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合するレセプターを記載するものである。好適なＦｃＲは天然配列ヒトＦｃＲである。さらに好適なＦｃＲは、ＩｇＧ抗体(ガンマレセプター)と結合するもので、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスのレセプターを含み、これらのレセプターの対立遺伝子変異体、選択的にスプライシングされた形態のものも含まれる。ＦｃγＲＩＩレセプターには、ＦｃγＲＩＩＡ(「活性型レセプター」)及びＦｃγＲＩＩＢ(「阻害型レセプター」)が含まれ、主としてその細胞質ドメインは異なるが、類似のアミノ酸配列を有するものである。活性型レセプターＦｃγＲＩＩＡは、細胞質ドメインにチロシン依存性免疫レセプター活性化モチーフ(immunoreceptor tyrosine-based activation motif ;ＩＴＡＭ)を含んでいる。阻害型レセプターＦｃγＲＩＩＢは、細胞質ドメインにチロシン依存性免疫レセプター阻害性モチーフ(immunoreceptor tyrosine-based inhibition motif ;ＩＴＩＭ)を含んでいる(Daeron, Annu. Rev. immunol. 15:203-234 (1997)を参照)。ＦｃＲｓに関しては、 Ravetch and Kinet, Annu.Rev. Immunol. 9:457-492 (1991); Capel等, Immunomethods 4:25-34 (1994); 及びde Haas等, J.Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995) に概説されている。将来的に同定されるものも含む他のＦｃＲsはここでの「ＦｃＲ」という言葉によって包含される。また、該用語には、母性ＩｇＧの胎児への移送を担い(Guyer等, J. Immunol. 117:587 (1976)及びKim等, J. Immunol.24:2429-2434(1994))、免疫グロブリンのホメオスタシスを調節する新生児性レセプターＦｃＲｎも含まれる。
Claims (47)
- 第一のヘテロ二量体化ドメインを有する第一のヒンジ含有ポリペプチド、及び第二のヘテロ二量体化ドメインを有する第二のヒンジ含有ポリペプチドを含み、第二のヘテロ二量体化ドメインが第一のヘテロ二量体化ドメインと相互作用し、及び第一及び第二のヒンジ含有ポリペプチドが少なくとも一の鎖間ジスルフィド結合により連結されているヘテロ多量体タンパク質を調製する方法であって、該方法が、
（ａ）ヒンジ含有ポリペプチドが発現される条件下で第一のヒンジ含有ポリペプチドをコードする第一の核酸を含む第一の宿主細胞を培養し；
（ｂ）ヒンジ含有ポリペプチドが発現される条件下で第二のヒンジ含有ポリペプチドをコードする核酸を含む第二の宿主細胞を培養し；
（ｃ）ヘテロ多量体タンパク質を形成するために宿主細胞から第一及び第二のヒンジ含有ポリペプチドを放出するために第一及び第二の宿主細胞の細胞膜を破壊し、第一及び第二の宿主細胞が単一の懸濁液中で一緒に組合わされる工程を含む方法。 - 第一のヘテロ二量体化ドメインを有する第一のヒンジ含有ポリペプチド、及び第二のヘテロ二量体化ドメインを有する第二のヒンジ含有ポリペプチドを含み、第二のヘテロ二量体化ドメインが第一のヘテロ二量体化ドメインと相互作用し、第一及び第二のヒンジ含有ポリペプチドが少なくとも一の鎖間ジスルフィド結合により連結されているヘテロ多量体タンパク質を調製する方法であって、該方法は、
（ａ）第一のヘテロ二量体化ドメインを有する精製された第一のヒンジ含有ポリペプチドを提供し；
（ｂ）第二のヘテロ二量体化ドメインを有する精製された第二のヒンジ含有ポリペプチドを提供し；
（ｃ）第一及び第二のヒンジ含有ポリペプチドを組合わせ、
（ｄ）単離されたポリペプチドの多量体化を可能にする条件下で、第一のヒンジ含有ポリペプチドを第二のヒンジ含有ポリペプチドとともにインビトロでリフォールディングする工程を含む方法。 - 第一のヘテロ二量体化ドメインを有する第一のヒンジ含有ポリペプチド、及び第二のヘテロ二量体化ドメインを有する第二のヒンジ含有ポリペプチドを含み、第二のヘテロ二量体化ドメインが第一のヘテロ二量体化ドメインと相互作用し、及び第一及び第二のヒンジ含有ポリペプチドが少なくとも一の鎖間ジスルフィド結合により連結されているヘテロ多量体タンパク質を調製する方法であって、該方法が、
（ａ）ヒンジ含有ポリペプチドが発現される条件下で第一のヒンジ含有ポリペプチドをコードする第一の核酸を含む第一の宿主細胞を培養し；
（ｂ）ヒンジ含有ポリペプチドが発現される条件下で第二のヒンジ含有ポリペプチドをコードする核酸を含む第二の宿主細胞を培養し；
（ｃ）第一及び第二の宿主細胞培養培地が一緒に組合わされた培養培地中でヘテロ多量体タンパク質を形成する工程を含む方法。 - ヘテロ多量体タンパク質を回収する工程を更に含む請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
- 第一のヘテロ二量体化ドメインと第二のヘテロ二量体化ドメインが界面で接触し、及び第二のヘテロ二量体化ドメインのインターフェイシング部分が、第一のヘテロ二量体化ドメインのインターフェイシング部分の空洞（ホール）内に配置可能である突起（ノブ）を含む、請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
- 第一のＦｃポリペプチドと第二のＦｃポリペプチドが界面で接触し、第二のＦｃ融合ポリペプチドの界面が、第一のＦｃポリペプチドの界面にある空洞（ホール）内に配置可能である突起（ノブ）を含み、及び空洞又は突起又はその両方がそれぞれ、第一及び第二のＦｃポリペプチドの界面中に導入されている、請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
- 第一のヘテロ二量体化ドメイン及び第二のヘテロ二量体化ドメインがロイシンジッパー又はコイルドコイルを含む、請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
- 鎖間ジスルフィド結合が、抗体のヒンジ領域に又はヒンジ領域間にある、請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
- ヒンジ含有ポリペプチドが、ＣＨドメイン又はその変異体、又はＦｃ領域又はその変異体を含む、請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
- 第一のヒンジ含有ポリペプチドが抗体の重鎖である、請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
- 第二のヒンジ含有ポリペプチドが抗体の重鎖である、請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
- 第一のヒンジ含有ポリペプチドが、第一の対を形成するために抗体の軽鎖と対合した抗体の重鎖である、請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
- 第二のヒンジ含有ポリペプチドが、第二の対を形成するために抗体の軽鎖と対合した抗体の重鎖である、請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
- ヒンジ含有ポリペプチドが抗体の軽鎖ポリペプチドと対合して標的結合アームを形成する、請求項１２又は１３に記載の方法。
- ヒンジ含有ポリペプチドがヒトＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメインの少なくとも一部分を含む、請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
- ヒンジ含有ポリペプチドと軽鎖の片方もしくは両方の対がヒト化されている、請求項１２又は１３に記載の方法。
- ヒンジ含有ポリペプチドと軽鎖が、別個の発現プラスミド上にコードされている、請求項１２又は１３に記載の方法。
- ヒンジ含有ポリペプチドと軽鎖が、同じ発現プラスミド上にコードされている、請求項１２又は１３に記載の方法。
- 宿主細胞が、原核細胞、大腸菌細胞、真核細胞、哺乳動物細胞、植物細胞からなる群から選択される、請求項１又は３に記載の方法。
- 宿主細胞が、真核細胞又は哺乳動物細胞である、請求項１９に記載の方法。
- 前記哺乳動物細胞がＣＨＯ細胞である、請求項２０に記載の方法。
- 工程（ａ）及び（ｂ）の細胞が、
（ｉ）別個の細胞培養、又は
（ｉｉ）両方の宿主細胞を含む混合培養にある、請求項１又は３に記載の方法。 - 工程（ａ）及び（ｂ）の細胞が両方の宿主細胞を含む混合培養にあり、及び工程（ａ）及び（ｂ）の細胞が、
（ｉ）組合わされ、遠心分離され、細胞膜を破壊する前に緩衝液に再懸濁され、又は
（ｉｉ）遠心分離され、緩衝液に再懸濁され、細胞膜を破壊する前に組合わされる、請求項２２に記載の方法。 - 細胞膜を破壊することが、、細胞膜を透過処理すること、細胞膜の崩壊、細胞溶解、超音波処理、浸透圧ショック、マイクロフルイダイザーの通過、ＥＤＴＡの添加、種々の界面活性剤、溶媒（例えば、トルエン、ジメチルスルホキシド等）、界面活性剤（例えば、トリトン−Ｘ１００、Ｔｗｅｅｎ ２０等）、低張緩衝液、凍結／解凍技術の使用、エレクトロポレーション、及びステンレス鋼のボールホモジナイザーの通過からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
- 回収工程が、少なくとも一つの精製工程を更に含む、請求項４に記載の方法。
- （ａ）プロテインＡを含むカラム上で前記ヘテロ多量体タンパク質を捕獲し、
（ｂ）前記ヘテロ多量体タンパク質を前記カラムから溶出し、及び
（ｃ）前記溶出されたヘテロ多量体タンパク質をカオトロピック剤又は中性界面活性剤を含有する溶液に希釈する工程を更に含む、請求項１から４の何れか一項に記載の方法。 - ヘテロ多量体タンパク質が、抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、ワンアームド抗体、多重特異性一価抗体、二重特異性マキシボディ、モノボディ、イムノアドヘシン、ペプチボディ、二重特異性ペプチボディ、一価ペプチボディ、抗体断片、Ｆｃ融合ポリペプチド、及びアフィボディからなる群から選択される、１から３の何れか一項に記載の方法。
- ヘテロ多量体タンパク質が二重特異性抗体であり、二重特異性抗体が、第一の対を形成するために第一の軽鎖と対合した第一のヒンジ含有ポリペプチド、及び第二の対を形成するために第二の軽鎖と対合した第二のヒンジ含有ポリペプチドを含む、請求項２７に記載の方法。
- ヘテロ多量体タンパク質が抗体であり、前記抗体が、重鎖定常ドメイン及び軽鎖定常ドメインを含む、請求項２７に記載の方法。
- ヘテロ多量体タンパク質が抗体であり、前記抗体が、ヒト化抗体、全長抗体、ヒト抗体、ＩｇＧ抗体、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＡ抗体、ＩｇＧ抗体、治療用抗体、アゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、診断用抗体、遮断抗体、中和抗体、腫瘍抗原に結合することができる抗体、クラスター分化因子に結合することができる抗体、細胞生存調節因子に結合することができる抗体、細胞増殖調節因子に特異的に結合することができる抗体、組織発達又は分化に関連する分子に結合することができる抗体、細胞表面分子に結合することができる抗体、又はリンホカインに結合することができる抗体である、請求項２７に記載の方法。
- 重鎖ポリペプチドと軽鎖ポリペプチドの片方もしくは両方の対がヒト型である、請求項１２、１３、又は２８に記載の方法。
- 抗体が、ヒトＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメインの少なくとも一部分を含む抗体断片である、請求項２７に記載の方法。
- 抗体が、腫瘍抗原に結合することができ、
（ｉ）腫瘍抗原が細胞表面分子ではなく、又は
（ｉｉ）腫瘍抗原がクラスター分化因子ではない
請求項３０に記載の方法。 - 第一の対及び第二の対の軽鎖が異なる可変ドメイン配列を含む、請求項１２、１３、又は２８に記載の方法。
- ヘテロ多量体タンパク質が二重特異性抗体であり、少なくとも４５％のポリペプチドが前記二重特異性抗体を形成する、請求項２７に記載の方法。
- 前記二重特異性抗体が２つの標的分子に特異的に結合することができる、請求項２８に記載の方法。
- 第一のアームが第一の標的分子に特異的に結合し、及び第二のアームが第二の標的分子に特異的に結合する、請求項３６に記載の方法。
- 少なくとも４５％のポリペプチドが、第一のヒンジ含有ポリペプチドと軽鎖の対及び第二のヒンジ含有ポリペプチドと軽鎖の対を含む複合体の状態である、請求項１２、１３又は２８に記載の方法。
- ヘテロ多量体タンパク質を精製する工程の前に、わずか１０％の単離されたポリペプチドが単量体又はホモ二量体として存在する、請求項２５に記載の方法。
- 第一の対及び第二の対の軽鎖が異なる可変ドメイン配列を含む、請求項１２、１３又は２８に記載の方法。
- 第一及び第二の重鎖−軽鎖の対の各々が、お互いにジスルフィド結合した重鎖及び軽鎖を含む、請求項１２、１３又は２８に記載の方法。
- 第一の対及び第二の対の間のｐＩ値の違いが少なくとも０．５である、請求項１２、１３又は２８に記載の方法。
- 請求項１から４２の何れか一項の方法により産生されたヘテロ多量体タンパク質。
- 第一のヘテロ二量体化ドメインを有する第一のヒンジ含有ポリペプチド、及び第二のヘテロ二量体化ドメインを有する第二のヒンジ含有ポリペプチドを含み、第二のヘテロ二量体化ドメインが第一のヘテロ二量体化ドメインと相互作用し、及び第一及び第二のヒンジ含有ポリペプチドが少なくとも一の鎖間ジスルフィド結合により連結されているコンビナトリアルヘテロ多量体タンパク質ライブラリを生成する方法であって、該方法が、
（ａ）第一の宿主細胞と少なくとも２つの更なる宿主細胞を培養し、
ｉ．前記第一の宿主細胞は、第一のヒンジ含有ポリペプチドをコードする第一の核酸を含み；及び
ｉｉ．前記更なる宿主細胞は、第二のヒンジ含有ポリペプチドを含む核酸を含み、
（ｂ）第一及び第二のヒンジ含有ポリペプチドが細胞外環境に放出されるように、第一の宿主細胞及び少なくとも２つの更なる宿主細胞の細胞膜を破壊し、第一の宿主細胞及び少なくとも２つの更なる宿主細胞が単一の懸濁液中で一緒に組合わされ、及び
（ｃ）ヘテロ多量体タンパク質複合体を回収する工程を含む方法。 - 第一のヘテロ二量体化ドメインを有する第一のヒンジ含有ポリペプチド、及び第二のヘテロ二量体化ドメインを有する第二のヒンジ含有ポリペプチドを含み、第二のヘテロ二量体化ドメインが第一のヘテロ二量体化ドメインと相互作用し、及び第一及び第二のヒンジ含有ポリペプチドが少なくとも一の鎖間ジスルフィド結合により連結されているコンビナトリアルヘテロ多量体タンパク質ライブラリを生成する方法であって、該方法が、
（ａ）第一の宿主細胞と少なくとも２つの更なる宿主細胞を培養し、
（ｉ）前記第一の宿主細胞は、第一のヒンジ含有ポリペプチドをコードする第一の核酸を含み；及び
（ｉｉ）前記更なる宿主細胞は、第二のヒンジ含有ポリペプチドを含む核酸を含み、
（ｂ）第一の宿主細胞及び少なくとも２つの更なる宿主細胞が一緒に組合わされた培養培地からヘテロ多量体タンパク質を単離する工程を含む方法。 - 第一のヒンジ含有ポリペプチドが抗体の軽鎖ポリペプチドと対合し、第一の標的結合アームを形成し、第二のヒンジ含有ポリペプチドが抗体の軽鎖ポリペプチドと対合し、第二の標的結合アームを形成する、請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
- 結合アームの各々又は両方が一以上の標的に結合することができる、請求項４６に記載の方法。
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