CN110068491A - 一种高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液及其使用方法 - Google Patents
一种高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液及其使用方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110068491A CN110068491A CN201910296978.XA CN201910296978A CN110068491A CN 110068491 A CN110068491 A CN 110068491A CN 201910296978 A CN201910296978 A CN 201910296978A CN 110068491 A CN110068491 A CN 110068491A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- dyeing
- coomassie brilliant
- brilliant blue
- blue staining
- staining liquid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 title claims abstract description 46
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 title claims abstract description 28
- 238000010186 staining Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 claims abstract description 69
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 48
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 15
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims abstract description 15
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims abstract description 11
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims abstract description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 3
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 17
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 11
- 239000012128 staining reagent Substances 0.000 abstract description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 abstract description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 11
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 10
- 229960004756 ethanol Drugs 0.000 description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical group OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 8
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 8
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 7
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical group OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 3
- 238000004042 decolorization Methods 0.000 description 3
- 208000002109 Argyria Diseases 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000009514 concussion Effects 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229960000935 dehydrated alcohol Drugs 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
Abstract
本发明公开了一种高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液及其使用方法，属于SDS‑PAGE的蛋白质染色试剂技术领域。该染色液由质量体积浓度为0.03％‑0.05％的CBB R250、体积百分含量为2％‑6％的醋酸、质量体积浓度为8％‑15％的硫酸铵、以及体积百分含量为12％‑16％的乙醇组成。本发明提供的马斯亮蓝染色液，在传统的染色液的基础上进行了优化，得到更加清晰的背景，极大地提高了检测灵敏度，染色灵敏度达到纳克水平。本发明提供考马斯亮蓝染色液的使用方法，染色结束后无需洗脱，只需用去离子水洗破坏胶体状态即完成脱色，大大缩短了检测时间，可用于SDS‑PAGE的快速蛋白质染色，提高工作效率。
Description
技术领域
本发明涉及SDS-PAGE的蛋白质染色试剂技术领域，尤其涉及一种高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液及其使用方法。
背景技术
蛋白质条带染色是SDS-PAGE中不可缺少的关键技术环节，目前，蛋白质电泳后染色的方法主要有考马斯亮蓝染色，银染，荧光染色等。银染灵敏度高，但常与质谱不兼容，荧光染色灵敏度高且兼容质谱，但需要配备特殊的检测仪器，一般不作为常规方法使用。
CBB(考马斯亮蓝)染色成本相对较低，重现性好，且不需要昂贵的设备，也最受欢迎。CBB包括CBB R250和CBB G250两类，以前者最为常用也极为经典。然而，CBB R250的主要问题为染色灵敏度不高，对低丰度蛋白质的显现较差，不少研究为降低其染色背景和提高其检测灵敏度而进行了努力，国内外有很多关于CBB染色方法的报告，但大多需要几个小时或是几天才能完成染色和脱色过程，且很少报道染色灵敏度在纳克水平。
发明内容
本发明针对上述技术问题，提供一种高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液及其使用方法。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液，该染色液由质量体积浓度为0.03％-0.05％的CBB R250、体积百分含量为2％-6％的醋酸、质量体积浓度为8％-15％的硫酸铵、以及体积百分含量为12％-16％的乙醇组成。
优选地，上述的高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液，所述的CBB R-250的质量体积浓度为0.03％，所述的醋酸的体积百分含量4％，所述的硫酸铵的质量体积浓度为10％，所述的乙醇的体积百分含量为14％
本发明还提供了上述高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液的使用方法，具体为：在SDS-PAGE电泳结束后，将SDS-PAGE凝胶用去离子水洗涤，然后将凝胶置于所述考马斯亮蓝染色液中进行染色，染色结束后，用去离子水清洗凝胶。
优选地，染色前凝胶置于去离子水中洗涤的时间为10min-15min。
优选地，将凝胶置于所述考马斯亮蓝染色液中进行染色的时间为10min-60min。
优选地，染色结束后用去离子水清洗凝胶的时间为1min-5min。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明提供的高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液，在传统的考马斯亮蓝染色液的基础上进行了优化，通过向染色液中添加硫酸铵，并优化染色液配方，得到一种胶体状态的染料，染色液的离子强度和pH决定了染料胶体性质，硫酸铵和乙酸分别为染色液提供了合适的离子强度和pH，在染色过程中，胶体状态的染料被排阻在胶外，很难对凝胶进行染色，防止了背景的生成，从而能得到更加清晰的背景，染色液中少量的自由染料可以穿透凝胶基质，对凝胶中的蛋白质进行染色，极大地提高了考马斯亮蓝染色的检测灵敏度，染色灵敏度达到纳克水平。基于此，本发明提供的上述高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液的使用方法，由于背景较低，染色结束后无需洗脱，只需用去离子水短时洗涤即完成脱色，清洗凝胶时间仅为1min-5min，大大缩短了检测时间，可用于SDS-PAGE的快速蛋白质染色，提高工作效率。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1本发明实施例1制备的染色剂染色结果示意图，左图为染色10min效果图，右图为染色1h效果图；
图2为本发明实施例2制备的染色剂染色结果示意图，左图为染色10min效果图，右图为染色1h效果图；
图3为本发明实施例3制备的染色剂染色结果示意图，左图为染色10min效果图，右图为染色1h效果图；
图4为对比例1传统染色试剂染色结果示意图；
图5为对比例2用磷酸替代本发明染色剂中的醋酸染色结果示意图，左图为染色10min效果图，右图为染色1h效果图；
图6为对比例3用甲醇替代本发明染色剂中的乙醇染色结果示意图，左图为染色10min效果图，右图为染色1h效果图
图7为对比例4去除本发明染色剂中的醋酸染色结果示意图，左图为染色10min效果图，右图为染色1h效果图；
图8为对比例5去除本发明染色剂中的乙醇染色结果示意图，左图为染色10min效果图，右图为染色1h效果图。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面将结合实施例对本发明作进一步的详细介绍。实施例中所用材料来源：CBB R250(VWR)，实验中用到的硫酸铵、无水乙醇、醋酸均购自国药集团化学试剂有限公司。
实施例1
本发明提供的高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液，成分为：0.03％CBB R250(w/v)，14％乙醇(v/v)，10％硫酸铵(w/v)，4％醋酸(v/v)。
蛋白样品准备：蛋白样品为BSA(Albumin from bovine serum)，用去离子水溶解样品，并稀释成不同的浓度，BSA的上样量分别为1000ng，500ng，250ng，125ng，62.5ng，31.3ng，15.6ng，7.8ng，3.9ng，1.9ng，1ng，0.5ng。
染色过程：电泳结束后，取出凝胶，先用足量的去离子水洗涤2-3次，每次5min，将凝胶置于适量配制好的染色液中，分别在脱色摇床上震荡染色10min和1h，染色结束后，用去离子水震荡洗涤凝胶1-5min，取出凝胶扫描观察染色效果。
染色结果如图1所示，采用本发明所述染色剂染色10min，最低检测限即可达到7.8ng，染色1h后，最低检测限达到3.9ng，且背景清晰。
实施例2
本发明提供的高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液，成分为：0.03％CBBR250(w/v)，12％乙醇(v/v)，8％硫酸铵(w/v)，2％醋酸(v/v)。
蛋白样品准备同实施例1。
染色过程同实施例1。
染色结果如图1所示，采用本发明所述染色剂染色10min，最低检测限即可达到15.6ng，染色1h后，最低检测限达到7.8ng，且背景清晰。
实施例3
本发明提供的高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液，成分为：0.05％CBBR250(w/v)，16％乙醇(v/v)，15％硫酸铵(w/v)，6％醋酸(v/v)。
蛋白样品准备同实施例1。
染色过程同实施例1。
染色结果如图3所示，采用本发明所述染色剂染色10min，最低检测限即可达到7.8ng，染色1h后，最低检测限达到3.9ng，且背景清晰。
对比例1
本实施例中采用传统染色试剂染色，所用考马斯亮蓝染色液的组分是0.25％CBBR250(w/v)，45％甲醇(v/v)，10％醋酸(v/v)，脱色液的组分是45％乙醇(v/v)，10％醋酸(v/v)。
蛋白样品制备同实例1。
利用本例中染色液进行染色的方法：电泳结束后，取出凝胶，先用足量的去离子水洗涤3次，每次5min，将凝胶置于适量配制好的染色液中，在脱色摇床上震荡染色10min，染色结束后，用配制好的脱色液震荡洗涤凝胶15min，再用去离子水震荡清洗2min，取出凝胶扫描观察染色效果。
染色结果如图4和表1所示。
对比例2
实例中所用染色剂成分：0.03％CBB R250(w/v)，14％乙醇(v/v)，10％硫酸铵(w/v)，4％磷酸(v/v)。
蛋白样品制备同实例1。
染色过程同实例1。
染色结果如图5和表1所示。
对比例3
实例中所用染色剂成分：0.03％CBB R250(w/v)，14％甲醇(v/v)，10％硫酸铵(w/v)，4％醋酸(v/v)。
蛋白样品制备同实例1。
染色过程同实例1。
染色结果如图6和表1所示。
对比例4
实例中所用染色剂成分：0.03％CBB R250(w/v)，14％乙醇(v/v)，10％硫酸铵(w/v)。
蛋白样品制备同实例1。
染色过程同实例1.
染色结果如图7和表1所示。
对比例5
实例中所用染色剂成分：0.03％CBB R250(w/v)，10％硫酸铵(w/v)，4％醋酸(v/v)。
蛋白样品制备同实例1。
染色过程同实例1。
染色结果如图8和表1所示。
表1实施例和对比例染色结果
由上述染色结果可见，使用本发明中所述的染色液和染色方法较传统染色方法可明显提高染色灵敏度，缩短染色时间，并能得到清晰背景。且所述染色液中缺少某一组分或用其他组分替代或改变组分配比均会降低染色效果。
以上只通过说明的方式描述了本发明的某些示范性实施例，毋庸置疑，对于本领域的普通技术人员，在不偏离本发明的精神和范围的情况下，可以用各种不同的方式对所描述的实施例进行修正。因此，上述描述在本质上是说明性的，不应理解为对本发明权利要求保护范围的限制。
Claims (6)
1.一种高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液，其特征在于，该染色液由质量体积浓度为0.03％-0.05％的CBB R250、体积百分含量为2％-6％的醋酸、质量体积浓度为8％-15％的硫酸铵、以及体积百分含量为12％-16％的乙醇组成。
2.根据权利要求1所述的高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液，其特征在于，所述的CBBR-250的质量体积浓度为0.03％，所述的醋酸的体积百分含量4％，所述的硫酸铵的质量体积浓度为10％，所述的乙醇的体积百分含量为14％。
3.根据权利要求1或2所述的高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液的使用方法，其特征在于，具体为：在SDS-PAGE电泳结束后，将SDS-PAGE凝胶用去离子水洗涤，然后将凝胶置于所述考马斯亮蓝染色液中进行染色，染色结束后，用去离子水清洗凝胶。
4.根据权利要求3所述的高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液的使用方法，其特征在于，染色前凝胶置于去离子水中洗涤的时间为10min-15min。
5.根据权利要求4所述的高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液的使用方法，其特征在于，将凝胶置于所述考马斯亮蓝染色液中进行染色的时间为10min-60min。
6.根据权利要求5所述的高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液的使用方法，其特征在于，染色结束后用去离子水清洗凝胶的时间为1min-5min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910296978.XA CN110068491A (zh) | 2019-04-15 | 2019-04-15 | 一种高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液及其使用方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910296978.XA CN110068491A (zh) | 2019-04-15 | 2019-04-15 | 一种高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液及其使用方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110068491A true CN110068491A (zh) | 2019-07-30 |
Family
ID=67367618
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910296978.XA Pending CN110068491A (zh) | 2019-04-15 | 2019-04-15 | 一种高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液及其使用方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110068491A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111562158A (zh) * | 2020-04-27 | 2020-08-21 | 武汉菲恩生物科技有限公司 | 一种快速蛋白染色液 |
| CN112697562A (zh) * | 2021-01-21 | 2021-04-23 | 上海雅酶生物医药科技有限公司 | 免脱色聚丙烯酰胺凝胶蛋白快速染色液及制备和使用方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110287009A1 (en) * | 2010-04-23 | 2011-11-24 | Genentech, Inc. | Production of Heteromultimeric Proteins |
| CN102604425A (zh) * | 2012-02-28 | 2012-07-25 | 盛司潼 | 考马斯亮蓝染色液及其染色方法和在蛋白检测中的应用 |
| CN102607920A (zh) * | 2012-03-15 | 2012-07-25 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一种sds-page考马斯亮蓝r250快速染色液及染色方法和应用 |
-
2019
- 2019-04-15 CN CN201910296978.XA patent/CN110068491A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110287009A1 (en) * | 2010-04-23 | 2011-11-24 | Genentech, Inc. | Production of Heteromultimeric Proteins |
| CN102604425A (zh) * | 2012-02-28 | 2012-07-25 | 盛司潼 | 考马斯亮蓝染色液及其染色方法和在蛋白检测中的应用 |
| CN102607920A (zh) * | 2012-03-15 | 2012-07-25 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一种sds-page考马斯亮蓝r250快速染色液及染色方法和应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 吴远双等: "一种考马斯亮蓝G-250快速染色法在SDS-PAGE中的应用", 《光谱实验室》 * |
| 李关荣等: "《生物化学实验教程》", 30 November 2011, 中国农业大学出版社 * |
| 韩奕奕等: "凝胶电泳法(SDS-PAGE)测定乳与乳制品中β-乳球蛋白的含量", 《乳业科学与技术》 * |
| 饶维桥等: "改良的蛋白质电泳考马斯亮蓝染色方法研究", 《生物技术通报》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111562158A (zh) * | 2020-04-27 | 2020-08-21 | 武汉菲恩生物科技有限公司 | 一种快速蛋白染色液 |
| CN112697562A (zh) * | 2021-01-21 | 2021-04-23 | 上海雅酶生物医药科技有限公司 | 免脱色聚丙烯酰胺凝胶蛋白快速染色液及制备和使用方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110068491A (zh) | 一种高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液及其使用方法 | |
| CN102604425B (zh) | 考马斯亮蓝染色液及其染色方法和在蛋白检测中的应用 | |
| JPH0658926A (ja) | チオニンを用いた細胞物質染色法 | |
| CN1158646A (zh) | 用还原染料对合成材料进行染色的方法 | |
| KR101010135B1 (ko) | 감즙천연염료의 제조방법 및 감즙천연염료 그리고 감즙천연염료를 이용한 염색방법 | |
| CN107941712A (zh) | 一种基于液晶生物传感器检测天蚕素b的方法 | |
| Periolatto et al. | Enzyme‐aided wool dyeing with a neutral protease at reduced temperatures | |
| CN104004382A (zh) | 一种考马斯亮蓝染色液和染色方法 | |
| US6555382B2 (en) | Solution for fast visualization of protein | |
| CN108535077A (zh) | 一种巴氏染色液及应用方法 | |
| CN106894248A (zh) | 一种利用美拉德反应提高羊毛阳离子染料染色性能的方法 | |
| CN106940376A (zh) | 蛋白质检测 | |
| CN106323723A (zh) | 双蓝染色法 | |
| Sathawane et al. | Nuances of the Papanicolaou stain | |
| CN107167613B (zh) | 用于等离子体金芯片的蛋白点样缓冲液 | |
| JP3104959B2 (ja) | 獣皮、動物性の、糸および織物の藍色染方法 | |
| JPS63264719A (ja) | ソフトコンタクトレンズの染色方法 | |
| CN104266893A (zh) | 考马斯亮蓝染色法及相关固定液和染色剂 | |
| CN116046503B (zh) | 一种能够增强特异性染色效果并降低染色背景的抗原修复液及其应用 | |
| CN112649488B (zh) | 一种低背景银染聚丙烯酰胺凝胶中蛋白质的方法 | |
| DE2203831A1 (de) | Faerbeverfahren | |
| CN101587039A (zh) | 一种血细胞染液 | |
| KR900001353B1 (ko) | 섬유의 염색법 | |
| CN110772432B (zh) | 一种长效金纳米簇荧光染发剂及染发方法 | |
| Popham | Mordanting plant tissues |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20190730 |