CN104004382A - 一种考马斯亮蓝染色液和染色方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种考马斯亮蓝染色液及染色方法，所述染色液是包含体积百分含量为0.1-10％的酸、体积百分含量为1-15％的乙醇、质量体积浓度为10-50g/L的可溶性淀粉、质量体积浓度为20-1000mg/L的考马斯亮蓝的水溶液，所述染色液中不含有对人体有害的试剂、绿色环保；使用本发明的染色液进行染色的方法由于可溶性淀粉的加入，不仅可以降低凝胶的染色背景，还可对蛋白质条带进行特异性染色，有效提高了染色的灵敏度，因此本发明的染色方法可在20分钟内完成蛋白质条带的整个染色过程，省略了传统染色程序中的凝胶固定、敏化和脱色等步骤，大大简化了操作步骤、节省了染色时间，具有周期短、灵敏度高、背景干扰小的优点。

Description

一种考马斯亮蓝染色液和染色方法

技术领域

本发明涉及一种考马斯亮蓝染色液及利用所述染色液进行染色的方法，属于生物技术领域。

技术背景

上个世纪60年代，出现了以考马斯亮蓝染色液对电泳后的蛋白质条带进行染色以观察蛋白成分及蛋白分离状况的报道。在以后的几十年中，考马斯亮蓝染色法已经成为在蛋白质科学研究中对蛋白质凝胶电泳中的蛋白条带进行观察的标准方法之一，这种染色方法几乎在所有的蛋白质研究手册中都有描述。在经典的使用考马斯亮蓝对蛋白质凝胶进行染色的方法中，考马斯亮蓝通常溶解在含有乙酸、甲醇等具有刺激性气味或毒害作用的溶剂中，染色程序一般包括凝胶固定、敏化、染色和脱色等步骤，耗时1-2天，由此可见，蛋白质凝胶的染色过程不仅步骤繁多、周期冗长，还会使用到一些对人体有害的试剂。

鉴于以上缺点，近年来针对蛋白质凝胶电泳的染色不断有新的方法出现，例如，Neuhoff等人(V.Neuhoff et al.,Electrophoresis1988,255-262.)介绍了一种通过使用较高浓度的硫酸铵对十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)中的凝胶进行考马斯亮蓝染色的改进方法，该方法对传统的考马斯亮蓝染色液的配方进行了改进，缩短了染色时间，降低了染色背景，但其缺点是仍然需要染色前的固定步骤，且所配制的染色液稳定性较差，需要现配现用。

在Neuhoff等人的考马斯亮蓝染色液配方的基础上，Kang等人进行了改良(Kang et al.,Bull.Korean Chem.Soc.2002,Vol.23,No.11,1151-1152.和美国专利US2005/0164399A1)，用硫酸铝代替Neuhoff配方中的硫酸铵，用乙醇替代甲醇，同时用磷酸替代传统配方中的乙酸，以此方法配制的考马斯亮蓝染色液对SDS-PAGE进行染色时，可以得到更为干净的背景，且染色时间缩短了10％以上，但仍需要2小时左右。这种方法的优点在于避免使用乙酸、甲醇等具有刺激性气味或潜在毒性的试剂，但完成染色所需的步骤及时间都有待于进一步改进。

又如Dong Wei-Hua等人(PLoS ONE2011,Vol.6(8),e22394)公开了一种通过微波加热加速考马斯亮蓝染色的方法，在这种方法中不仅染色液的配方有所改变，在操作方法上也进行了一些改进，通过使用微波加热使得染色所需的时间大大缩短，整个染色过程仅需要20-30分钟即可完成。然而这种方法较Kang等人的方法存在的缺点是SDS-PAGE凝胶的背景着色较深，需要后续进行几次脱色才可进行进一步的观察。

此外，在实施SDS-PAGE实验时，凝胶和电泳液中的十二烷基磺酸钠(SDS)被认为是影响蛋白染色灵敏度和造成凝胶染色背景产生的主要原因之一，这也是凝胶染色过程中需要在染色前进行洗涤的原因之一。中国专利CN101473228A中公开了一种能够避免SDS对考马斯亮蓝染色产生不利影响的方法，该方法通过在染色液中加入多种糊精的混合物，在其百分比浓度达到0.1％时可以消除SDS的影响。该方法主要应用于使用考马斯亮蓝测定蛋白浓度的实验(Bradford法)，还可用于SDS-PAGE的染色，而染色所需的时间为1小时45分钟。

因此，现有技术中使用考马斯亮蓝染色液对蛋白质凝胶中的蛋白条带进行染色时，在染色时间、灵敏度和易用性等方面都仍还存在着较大的改进空间，最理想的染色方法是既可以在短时间内完成，又能保证染色的灵敏度，同时还能避免使用一些对人体有害或者有刺激性气味的试剂。

发明内容

本发明解决的是现有技术中在对蛋白质凝胶中的蛋白条带进行染色时，使用的考马斯亮蓝染色液中含有对人体有害的试剂，且染色步骤繁多、周期冗长的问题，进而提供一种改良的考马斯亮蓝染色液及染色方法，所述染色液不含有对人体有害的试剂、绿色环保，使用所述染色液进行染色的方法可在20分钟内完成整个染色过程，且染色后不需要进行脱色处理，具有周期短、灵敏度高、背景干扰小的优点。

本发明解决上述技术问题的技术方案为：

一种考马斯亮蓝染色液，包含以下组分：

酸，在所述染色液中的体积百分含量为0.1-10％；

乙醇，在所述染色液中的体积百分含量为1-15％；

考马斯亮蓝，在所述染色液中的质量体积浓度为20-1000mg/L；

可溶性淀粉，在所述染色液中的质量体积浓度为10-50g/L；

余量为水。

所述可溶性淀粉在所述染色液中的质量体积浓度为10-20g/L。

所述酸在所述染色液中的体积百分含量为0.5％-8％；所述乙醇在所述染色液中的体积百分含量为5％-10％；所述考马斯亮蓝在所述染色液中的质量体积浓度为50-500mg/L。

所述酸为磷酸、硫酸或盐酸中的一种或者多种。

所述可溶性淀粉由以下步骤制备而成：

(1)向淀粉中加入质量浓度为3％-6％的盐酸制成溶液，将所述溶液搅成薄糊状，在室温至45℃条件下浸渍24小时至7天，其中所述淀粉为红薯淀粉、玉米淀粉、土豆淀粉、小米淀粉中的任意一种或两种，所述淀粉与盐酸的质量比为1:10-1:5；

(2)浸渍完毕后，排掉上层清液，将下层的沉积物水洗数次直至水洗液中不含氯离子为止；

(3)对沉积物进行脱水干燥，即制备得到可溶性淀粉。

所述淀粉为小米淀粉。

所述考马斯亮蓝为考马斯亮蓝G250或R250。

利用所述的考马斯亮蓝染色液进行染色的方法，包括如下步骤：

(1)将完成蛋白质凝胶电泳的凝胶置于去离子水中，加热所述去离子水至沸腾；

(2)将水煮后的蛋白质凝胶浸没在考马斯亮蓝染色液中，在95-105℃下加热所述染色液1-5分钟，待所述染色液冷却至室温后缓慢振荡所述染色液15～20分钟。

所述步骤(1)和步骤(2)中的加热方式为微波加热。

所述凝胶为变性聚丙烯酰胺凝胶、天然蛋白聚丙烯酰胺凝胶中的一种。

本发明所述的利用考马斯亮蓝染色液进行染色的方法，在步骤(1)中将凝胶置于去离子水中，加热所述去离子水至沸腾的目的在于溶解凝胶中的SDS，降低其对蛋白条带染色的影响；在步骤(2)中将水煮后的凝胶浸没在考马斯亮蓝染色液中，在95-105℃下加热所述染色液1-5分钟，这是因为通过高温加速蛋白条带的着色，可以使凝胶染色在较短的时间内完成。

与现有技术中的考马斯亮蓝染色液及染色方法相比，本发明所述的考马斯亮蓝染色液的优点在于：

(1)本发明所述的考马斯亮蓝染色液，由于可溶性淀粉的加入，可以显著降低背景凝胶的染色程度，能够有效缓解SDS对染色的不利影响，使得电泳凝胶在染色后不需要脱色处理即可直接进行观察，本发明中的所述考马斯亮蓝染色液，可对蛋白质条带进行特异性染色，有效提高了染色的灵敏度。并且本发明的染色方法可在20分钟内完成蛋白质条带的整个染色过程，省略了传统染色程序中的凝胶固定、敏化等步骤，大大简化了操作步骤、节省了染色时间，具有周期短、灵敏度高、背景干扰小的优点。

除此之外，本发明所述的考马斯亮蓝染色液中不含有对人体有害的试剂，还具有绿色环保的优点。

(2)本发明所述的考马斯亮蓝染色液，优选由小米淀粉经3％-6％的盐酸浸渍后，再经过水洗、干燥制备而成，原因在于由小米淀粉制备而成的可溶性淀粉能够有效提高染色的灵敏度并将染色时间缩短至15分钟，具有非常优异的技术效果。

附图说明

图1所示是经本发明所述考马斯亮蓝染色液染色后的SDS-PAGE凝胶的黑白图片；

图2所示是经对比例1中染色液染色后的SDS-PAGE凝胶的黑白图片，其中A是未经脱色处理时的凝胶图片，B是经脱色处理后的凝胶图片；

图3所示是经对比例2中第一组染色液染色后的SDS-PAGE凝胶的黑白图片，其中A是未经脱色处理时的凝胶图片，B是经脱色处理后的凝胶图片；

图4所示是经对比例2中第二组染色液染色后的SDS-PAGE凝胶的黑白图片，其中A是未经脱色处理时的凝胶图片，B是经脱色处理后的凝胶图片。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明提供的考马斯亮蓝染色液及染色方法进行详细说明，其中1重量份为1mg，1体积份为1ml。

实施例1

本实施例中所述的考马斯亮蓝染色液是包含体积百分含量为5％的磷酸、体积百分含量为8％的乙醇、质量体积浓度为10g/L的可溶性淀粉、质量体积浓度为100mg/L的考马斯亮蓝G250，余量为水。其具体配制步骤如下：取50重量份的考马斯亮蓝G250溶于200体积份的去离子水中，缓慢加入25体积份的磷酸，搅拌均匀后加入40体积份的乙醇，再次搅拌均匀后加入高压灭菌后的含5000重量份可溶性淀粉的水溶液100体积份，搅拌均匀后用去离子水定容至500体积份。

其中，本实施例所述可溶性淀粉的制备方法为：(1)向小米淀粉中加入质量浓度为3％的盐酸制成溶液，将所述溶液搅成薄糊状，在45℃条件下浸渍24小时，其中所述小米淀粉与盐酸的质量比为1:5；(2)浸渍完毕后，排掉上层清液，将下层的沉积物水洗数次直至水洗液中不含氯离子为止；(3)在50℃条件下对沉积物进行脱水干燥，即制备得到本实施例中使用的可溶性淀粉。

利用本实施例所述考马斯亮蓝染色液进行染色的方法，包括如下步骤：

(1)将经电泳处理后的SDS-PAGE凝胶置于约100体积份的去离子水中，加热所述去离子水至沸腾；

(2)将水煮后的SDS-PAGE凝胶浸没在实施例1所述的考马斯亮蓝染色液中，加热所述染色液2分钟，然后待所述染色液冷却至室温后缓慢振荡所述染色液13分钟。

实施例2

本实施例中所述的考马斯亮蓝染色液是包含体积百分含量为8％的硫酸、体积百分含量为10％的乙醇、质量体积浓度为20g/L的可溶性淀粉、质量体积浓度为50mg/L的考马斯亮蓝R250的水溶液。其具体配制步骤如下：取25重量份的考马斯亮蓝R250溶于200体积份的去离子水中，缓慢加入40体积份的硫酸，搅拌均匀后加入50体积份的乙醇，再次搅拌均匀后加入高压灭菌后的含10000重量份可溶性淀粉的水溶液100体积份，搅拌均匀后用去离子水定容至500体积份。

其中所述可溶性淀粉的制备方法为：(1)向小米淀粉中加入质量浓度为6％的盐酸制成溶液，将所述溶液搅成薄糊状，在45℃条件下浸渍24小时，其中所述小米淀粉与盐酸的质量比为1:10；(2)浸渍完毕后，排掉上层清液，将下层的沉积物水洗数次直至水洗液中不含氯离子为止；(3)对沉积物在50℃条件下进行脱水干燥，即制备得到本实施例中的可溶性淀粉。本实施例中所述考马斯亮蓝染色液的具体配制步骤同实施例1。

利用本实施例中所述的利用考马斯亮蓝染色液进行染色的方法，包括如下步骤：

(1)将经电泳处理后的SDS-PAGE凝胶置于去离子水中，加热所述去离子水至沸腾；

(2)将经电泳处理后的SDS-PAGE凝胶浸没在实施例2所述的考马斯亮蓝染色液中，在95℃下加热所述染色液3分钟，待所述染色液冷却至室温后缓慢振荡所述染色液15分钟。

实施例3

本实施例中所述的考马斯亮蓝染色液是包含体积百分含量为0.5％的硫酸、体积百分含量为5％的乙醇、质量体积浓度为50g/L的可溶性淀粉、质量体积浓度为500mg/L的考马斯亮蓝R250的水溶液。其具体配制步骤如下：取250重量份的考马斯亮蓝R250溶于200体积份的去离子水中，缓慢加入2.5体积份的硫酸，搅拌均匀后加入25体积份的乙醇，再次搅拌均匀后加入高压灭菌后的含25000重量份可溶性淀粉的水溶液100体积份，搅拌均匀后用去离子水定容至500体积份。

其中所述可溶性淀粉的制备方法为：(1)向玉米淀粉中加入质量浓度为3％的盐酸制成溶液，将所述溶液搅成薄糊状，在室温条件下浸渍7天，其中所述玉米淀粉与盐酸的质量比为1:5；(2)浸渍完毕后，排掉上层清液，将下层的沉积物水洗数次直至水洗液中不含氯离子为止；(3)将沉积物在60℃条件下进行脱水干燥，即制备得到本实施例中的可溶性淀粉。本实施例中所述考马斯亮蓝染色液的具体配制步骤同实施例1。

利用本实施例中所述的利用考马斯亮蓝染色液进行染色的方法，包括如下步骤：

(1)将经电泳处理后的SDS-PAGE凝胶置于去离子水中，加热所述去离子水至沸腾；

(2)将水煮后的SDS-PAGE凝胶浸没在实施例3所述的考马斯亮蓝染色液中，在105℃下加热所述染色液2分钟，待所述染色液冷却至室温后缓慢振荡所述染色液23分钟。

实施例4

本实施例中所述的考马斯亮蓝染色液是包含体积百分含量为8％的磷酸、体积百分含量为8％的乙醇、质量体积浓度为15g/L的可溶性淀粉、质量体积浓度为200mg/L的考马斯亮蓝G250的水溶液。其具体配制步骤如下：取100重量份的考马斯亮蓝G250溶于200体积份的去离子水中，缓慢加入40体积份的磷酸，搅拌均匀后加入40体积份的乙醇，再次搅拌均匀后加入高压灭菌后的含7500重量份可溶性淀粉的水溶液100体积份，搅拌均匀后用去离子水定容至500体积份。

其中所述可溶性淀粉的制备方法为：(1)向玉米淀粉中加入质量浓度为6％的盐酸制成溶液，将所述溶液搅成薄糊状，在45℃条件下浸渍24小时，其中所述玉米淀粉与盐酸的质量比为1:10；(2)浸渍完毕后，排掉上层清液，将下层的沉积物水洗数次直至水洗液中不含氯离子为止；(3)将沉积物在60℃条件下进行脱水干燥，即制备得到本实施例中的可溶性淀粉。本实施例中所述考马斯亮蓝染色液的具体配制步骤同实施例1。

利用本实施例中所述的利用考马斯亮蓝染色液进行染色的方法，包括如下步骤：

(1)将经电泳处理后的SDS-PAGE凝胶置于约100体积份的去离子水中，在家用微波炉中于700W功率条件下微波加热2分钟至所述去离子水至沸腾；

(2)将水煮后的SDS-PAGE凝胶浸没在实施例1所述的考马斯亮蓝染色液中，将所述染色液置于家用微波炉中于700W功率条件下微波加热2分钟，待所述染色液冷却至室温后缓慢振荡所述染色液18分钟。

实施例5

本实施例中所述的考马斯亮蓝染色液是包含体积百分含量为5％的磷酸、体积百分含量为8％的乙醇、质量体积浓度为2.5％的可溶性淀粉、质量体积浓度为0.01％的考马斯亮蓝G250的水溶液。其中所述可溶性淀粉的制备方法为：(1)向红薯淀粉中加入质量浓度为6％的盐酸制成溶液，将所述溶液搅成薄糊状，在45℃条件下浸渍24小时，其中所述红薯淀粉与盐酸的质量比为1:10；(2)浸渍完毕后，排掉上层清液，将下层的沉积物水洗数次直至水洗液中不含氯离子为止；(3)将沉积物在60℃条件下进行脱水干燥，即制备得到本实施例中的可溶性淀粉。本实施例中所述考马斯亮蓝染色液的具体配制步骤同实施例1。

利用本实施例中所述的利用考马斯亮蓝染色液进行染色的方法，包括如下步骤：

(1)将经电泳处理后的SDS-PAGE凝胶置于约100体积份的去离子水中，在家用微波炉中于500W功率条件下微波加热2分钟至所述去离子水至沸腾；

(2)将水煮后的SDS-PAGE凝胶浸没在实施例1所述的考马斯亮蓝染色液中，将所述染色液置于家用微波炉中，于700W功率条件下微波加热2分钟，待所述染色液冷却至室温后缓慢振荡所述染色液20分钟。

实施例6

本实施例中所述的考马斯亮蓝染色液是包含体积百分含量为5％的磷酸、体积百分含量为8％的乙醇、质量体积浓度为1.5％的可溶性淀粉、质量体积浓度为0.01％的考马斯亮蓝G250的水溶液。本实施例中使用的所述可溶性淀粉购自国药集团化学试剂有限公司，产品的目录号为10021318。本实施例中所述考马斯亮蓝染色液的具体配制步骤同实施例1。

利用本实施例中所述的利用考马斯亮蓝染色液进行染色的方法，包括如下步骤：

(1)将经电泳处理后的SDS-PAGE凝胶置于约100体积份的去离子水中，在家用微波炉中于700W功率条件下微波加热2分钟至所述去离子水至沸腾；

(2)将水煮后的SDS-PAGE凝胶浸没在实施例1所述的考马斯亮蓝染色液中，将所述染色液置于家用微波炉中，于500W功率条件下微波加热2分钟，待所述染色液冷却至室温后缓慢振荡所述染色液18分钟。

实施例7

本实施例中所述的考马斯亮蓝染色液是包含体积百分含量为5％的磷酸、体积百分含量为8％的乙醇、质量体积浓度为2％的可溶性淀粉、质量体积浓度为0.01％的考马斯亮蓝G250的水溶液。本实施例中使用的所述可溶性淀粉购自国药集团化学试剂有限公司，产品的目录号为10021318。本实施例中所述考马斯亮蓝染色液的具体配制步骤同实施例1。

利用本实施例中所述的利用考马斯亮蓝染色液进行染色的方法，包括如下步骤：

(1)将经电泳处理后的SDS-PAGE凝胶置于约100体积份的去离子水中，在家用微波炉中于700W功率条件下微波加热2分钟至所述去离子水至沸腾；

(2)将水煮后的SDS-PAGE凝胶浸没在实施例1所述的考马斯亮蓝染色液中，将所述染色液置于家用微波炉中，于500W功率条件下微波加热2分钟，待所述染色液冷却至室温后缓慢振荡所述染色液15分钟。

实验例

实施例1-7中所述染色液对蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳条带的染色效果实验

(1)蛋白质样品的制备：取2mg牛血清白蛋白(BSA)溶于1ml磷酸缓冲液(PBS)中，加入1ml2XSDS-PAGE上样缓冲液，沸水中煮沸15分钟，得到BSA样品，其中BSA的终浓度为1mg/ml；

(2)实施例1-7中蛋白质电泳凝胶的制备：

(2-1)先配制12％分离胶：分别取30％丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺(29:1)储液4ml、分离胶缓冲液(1.5M三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液(Tris-HCl)，pH8.8)2.5ml、水3.3ml、10％SDS100ul、10％过硫酸铵100ul和四甲基乙二胺(TEMED)40ul，混合均匀后配制分离胶(总体积10ml)；

(2-2)再配制浓缩胶：分别取30％丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺(29:1)储液1ml、浓缩胶缓冲液(1.0M Tris-HCl，pH6.8)0.75ml、水4.1ml、10％SDS60ul、10％过硫酸铵60ul和TEMED6ul，混合均匀后配制浓缩胶(总体积6ml)，从而得到SDS-PAGE凝胶；

(3)蛋白质凝胶电泳：在不同泳道中分别加入250ng、150ng、100ng、50ng、25ng、15ng、5ng及1ng由本实验例步骤(1)中制备好的BSA样品，设置两组SDS-PAGE凝胶进行平行实验，在恒压120v的条件下进行电泳；

(4)蛋白质条带的染色：按照实施例1-7所述的方法进行蛋白质条带的染色；其中，实施例1中的染色效果如图1所示，图中泳道M为蛋白Marker，泳道1-8为BSA，其上样量依次分别为:250ng,150ng,100ng,50ng,25ng,15ng,5ng,1ng。从图1可以看出，以实施例1所述的方法进行染色所得到的SDS-PAGE凝胶上出现清晰可见的蛋白条带。

实施例1-7中所述染色方法对SDS-PAGE的染色效果如下表所示：

由上述结果可见，本申请所述的马斯亮蓝染色液中可溶性淀粉的加入，明显有利于蛋白质电泳条带的特异性染色，不仅可以降低凝胶的染色背景，还可提高染色的灵敏度，并缩短染色时间。

对比例

为了进一步证明本申请所述染色液的技术效果，本发明设置了如下对比例。

对比例1

本对比例中所述的考马斯亮蓝染色液是包含体积百分含量为5％的磷酸、体积百分含量为8％的乙醇、质量体积浓度为0.01％的考马斯亮蓝G250的水溶液。其具体配制步骤如下：

取50重量份的考马斯亮蓝G250溶于200体积份的去离子水中，缓慢加入25体积份的磷酸，搅拌均匀后加入40体积份的乙醇，再次搅拌均匀后用去离子水定容至500体积份。

本实验例中蛋白质样品的制备、蛋白质电泳凝胶的制备、蛋白质凝胶电泳同实验例，利用本对比例中所述的利用考马斯亮蓝染色液进行染色的方法，包括如下步骤：

(1)将经电泳处理后的SDS-PAGE凝胶置于约100体积份的去离子水中，微波加热所述去离子水至沸腾；

(2)将水煮后的SDS-PAGE凝胶浸没在对比例1所述的考马斯亮蓝染色液中，微波加热所述染色液2分钟，待所述染色液冷却至室温后缓慢振荡所述染色液15分钟，染色效果如图2(A)所示。图2中泳道1-8为BSA，其上样量依次分别为:250ng,150ng,100ng,50ng,25ng,15ng,5ng,1ng。

从图2(A)可以看出，以对比例1所述的方法进行染色所得到的SDS-PAGE凝胶上显示出均匀的深蓝色背景，250ng蛋白条带隐约可见，对该SDS-PAGE凝胶进行脱色处理，即将该SDS-PAGE凝胶转移到另一个含有50ml的去离子水的容器中，微波炉高火加热2分钟，倒掉去离子水，再次加入50ml去离子水，微波炉高火加热2分钟，室温摇动10分钟，经脱色后的SDS-PAGE凝胶上可见清晰的50ng蛋白条带(如图2(B)所示)，说明其染色的灵敏度为50ng。

对比例2

本对比例中所述的考马斯亮蓝染色液包括以下两组:

第一组：包含体积百分含量为5％的磷酸、体积百分含量为8％的乙醇、质量体积浓度为0.5％的可溶性淀粉、质量体积浓度为0.01％的考马斯亮蓝G250，余量为水。

第二组：包含体积百分含量为5％的磷酸、体积百分含量为8％的乙醇、质量体积浓度为5.5％的可溶性淀粉、质量体积浓度为0.01％的考马斯亮蓝G250，余量为水。

本实验例中蛋白质样品的制备、蛋白质电泳凝胶的制备、蛋白质凝胶电泳同实验例，利用本对比例中所述的利用考马斯亮蓝染色液进行染色的方法，包括如下步骤：

(1)将经电泳处理后的SDS-PAGE凝胶置于约100体积份的去离子水中，微波加热所述去离子水至沸腾；

(2)将水煮后的SDS-PAGE凝胶分别浸没在本对比例2所述的两种考马斯亮蓝染色液中，微波加热所述染色液2分钟，待所述染色液冷却至室温后缓慢振荡所述染色液15分钟。其中本对比例第一组染色液的染色效果如图3(A)所示；第二组染色液的染色效果如图4(A)所示；

从图3(A)和图4(A)中可以看出，以对比例2所述的两组染色液进行染色所得到的SDS-PAGE凝胶上显示出均匀的深蓝色背景，含5.5％淀粉的染色液中250ng和150ng蛋白条带隐约可见。对经上述两组染色液染色后的SDS-PAGE凝胶进行脱色处理，经脱色后的SDS-PAGE凝胶如图3(B)和图4(B)所示，在凝胶上可见清晰的50ng蛋白条带，说明其染色的灵敏度为50ng；而含0.5淀粉的染色液中，脱色处理后的凝胶中100ng条带清晰可见，说明其灵敏度为100ng。

由对比例的结果可以看出，本申请所述的马斯亮蓝染色液相比于对比例1和对比例2，可明显降低凝胶的染色背景，还可提高染色的灵敏度。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种考马斯亮蓝染色液，其特征在于，包含以下组分：

酸，在所述染色液中的体积百分含量为0.1-10％；

乙醇，在所述染色液中的体积百分含量为1-15％；

考马斯亮蓝，在所述染色液中的质量体积浓度为20-1000mg/L；

可溶性淀粉，在所述染色液中的质量体积浓度为10-50g/L；

余量为水。

2.根据权利要求1所述的考马斯亮蓝染色液，其特征在于，所述可溶性淀粉在所述染色液中的质量体积浓度为10-20g/L。

3.根据权利要求2所述的考马斯亮蓝染色液，其特征在于，所述酸在所述染色液中的体积百分含量为0.5％-8％；所述乙醇在所述染色液中的体积百分含量为5％-10％；所述考马斯亮蓝在所述染色液中的质量体积浓度为50-500mg/L。

4.根据权利要求1或2或3任一所述的考马斯亮蓝染色液，其特征在于，所述酸为磷酸、硫酸或盐酸中的一种或者多种。

5.根据权利要求1-4任一所述的考马斯亮蓝染色液，其特征在于，所述可溶性淀粉由以下步骤制备而成：

(1)向淀粉中加入质量浓度为3％-6％的盐酸制成溶液，将所述溶液搅成薄糊状，在室温至45℃条件下浸渍24小时至7天，其中所述淀粉为红薯淀粉、玉米淀粉、土豆淀粉、小米淀粉中的任意一种或两种，所述淀粉与盐酸的质量比为1:10-1:5；

(2)浸渍完毕后，排掉上层清液，将下层的沉积物水洗数次直至水洗液中不含氯离子为止；

(3)对沉积物进行脱水干燥，即制备得到可溶性淀粉。

6.根据权利要求5所述的考马斯亮蓝染色液，其特征在于，所述淀粉为小米淀粉。

7.根据权利要求1-5任一所述的考马斯亮蓝染色液，其特征在于，所述考马斯亮蓝为考马斯亮蓝G250或R250。

8.一种利用权利要求1-6任一所述的考马斯亮蓝染色液进行染色的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将完成蛋白质凝胶电泳的凝胶置于去离子水中，加热所述去离子水至沸腾；

(2)将水煮后的蛋白质凝胶浸没在考马斯亮蓝染色液中，在95-105℃下加热所述染色液1-5分钟，待所述染色液冷却至室温后缓慢振荡所述染色液15～20分钟。

9.根据权利要求7所述的利用考马斯亮蓝染色液进行染色的方法，其特征在于，所述步骤(1)和步骤(2)中的加热方式为微波加热。

10.根据权利要求7或8任一所述的利用考马斯亮蓝染色液进行染色方法，其特征在于，所述凝胶为变性聚丙烯酰胺凝胶、天然蛋白聚丙烯酰胺凝胶中的一种。