CN108168984A - 一种蛋白质page凝胶电泳快速染色试剂盒及染色方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种蛋白质PAGE凝胶电泳快速染色试剂盒及其染色方法，属于蛋白质分析检测技术领域，试剂盒包括HSC染料一系列试剂、HSC染料二系列试剂和水；所述的HSC染料一系列试剂包括无水乙醇和磷酸；所述的HSC染料二系列试剂包括考马斯亮蓝G‑250、硫酸铵、磷酸、甲醇、硫酸铝，通过HSC染料一固定后再使用HSC染料二染色。本发明提供的试剂盒和方法具有实验时间短、检测灵敏度较高和质谱兼容性好等的优点。
Description
技术领域
本发明属于蛋白质分析检测技术领域，尤其涉及一种蛋白质PAGE凝胶电泳快速染色试剂盒，还涉及一种蛋白质PAGE凝胶电泳快速染色方法。
背景技术
电泳是一种分离蛋白质和其他物质如核酸、嘌呤、嘧啶、一些有机化合物甚至无机离子的主要方法或技术，用于电泳分离蛋白质的常规检测和定量的普遍染色方法是考马斯亮蓝R250染色。
传统的考染是用考马斯亮蓝R250、甲醇、醋酸、水溶液对胶进行染色。考马斯亮蓝R250染色可以检测到30～100ng的蛋白质,灵敏度比银染和荧光染色低很多，而且操作简便，所需配置的试剂少，没有毒性，染色过程简单，染色后的对比度好，与后续的蛋白质鉴定方法兼容。但缺点是染色时间较长，需要至少一个小时的染色，一般要过夜处理，再脱色三次，总耗时需要数十小时。
发明内容
基于现有技术存在上述问题，本发明提供一种蛋白质PAGE凝胶电泳快速染色试剂盒及其染色方法，试剂盒包括HSC染料一系列试剂、HSC染料二系列试剂和水；所述的HSC染料一系列试剂包括无水乙醇和磷酸；所述的HSC染料二系列试剂包括考马斯亮蓝G-250、硫酸铵、磷酸、甲醇、硫酸铝，通过HSC染料一固定后再使用HSC染料二染色。本发明提供的试剂盒和方法具有实验时间短、检测灵敏度较高和质谱兼容性好等的优点。
本发明通过以下技术方案达到目的：
一种蛋白质PAGE凝胶电泳快速染色试剂盒，其包括HSC染料一系列试剂、HSC染料二系列试剂和水；所述的HSC染料一系列试剂包括无水乙醇和磷酸；所述的HSC染料二系列试剂包括考马斯亮蓝G-250、硫酸铵、磷酸、甲醇、硫酸铝。
其中，所述的水是超纯水。
一种使用上述试剂盒的快速染色方法，其包括以下步骤：
步骤S10制作HSC染料一，按体积比20-30:2-6分别量取无水乙醇和磷酸混合均匀，使用去离子水定容至无水乙醇终浓度为40-60％，保存于棕色瓶中备用；
步骤S20制作HSC染料二，按质量比，硫酸铝：硫酸铵＝0.5-1.5：1-4称取硫酸铝和硫酸铵，混合；按1-2g/ml的用量分别量取磷酸和超纯水并加入到酸铝和硫酸铵混合物中，加热搅拌1.5h至完全溶解；再按4-8mg/ml加入考马斯亮蓝G-250和按体积比，混合物：超纯水＝0.5-1.5:1-4加入超纯水，常温搅拌30min；搅拌结束后按体积比，混合物：甲醇＝2-4：0.5-2加入甲醇，密封搅拌10min，加入超纯水按体积比3-5:4-6对混合物定容并保存于棕色瓶中备用；
步骤S30显色反应：从电泳池取出凝胶，浸入超纯水中，轻摇清洗，将水倒干，再将凝胶浸入步骤S10制成的HSC染料一中，轻摇20-40min，倒出HSC染料一，再将凝胶浸入步骤S20制成的HSC染料二中，快速摇动20-40min，观察染色情况。
优选地，一种使用上述试剂盒的快速染色方法，其包括以下详细步骤：
步骤S10制作HSC染料一，按体积比25:4分别量取无水乙醇和磷酸混合均匀，使用去离子水定容至无水乙醇终浓度为50％，保存于棕色瓶中备用；
步骤S20制作HSC染料二，按质量比，硫酸铝：硫酸铵＝1：2称取硫酸铝和硫酸铵，混合；按1.5g/ml的用量分别量取磷酸和超纯水并加入到酸铝和硫酸铵混合物中，加热搅拌1.5h至完全溶解；再按6mg/ml加入考马斯亮蓝G-250和按体积比，混合物：超纯水＝1:2加入超纯水，常温搅拌30min；搅拌结束后按体积比，混合物：甲醇＝3：1加入甲醇，密封搅拌10min，加入超纯水按体积比4:5对混合物定容并保存于棕色瓶中备用；
步骤S30显色反应：从电泳池取出凝胶，浸入超纯水中，轻摇清洗，将水倒干，再将凝胶浸入步骤S10制成的HSC染料一中，轻摇30min，倒出HSC染料一，再将凝胶浸入步骤S20制成的HSC染料二中，快速摇动30min，观察染色情况。
其中，所述的步骤S20中的加热搅拌的搅拌速度为350-450r/min，加热温度为30-50℃。
其中，所述的步骤S20中的常温搅拌的搅拌速度为550-650r/min。
其中，所述的步骤S20中密封搅拌是采用parafilm膜密封。
本发明具有的有益效果是：实验操作简单，所涉及到的仪器设备较为常见，一般生物实验室均可开展且实验设备以摇床为主，一般实验人员均能掌握；实验时间短，一般1小时内即可完成蛋白显色，且背景浅，对比度高；脱色用水即可，也可不用脱色，节约时间；检测灵敏度较高，最低可检测10至5ng的蛋白质；显色深浅跟蛋白上样量线性关系好，可以用凝胶扫描图像的蛋白含量分析；质谱兼容，可用于后期的胶内酶切，回收肽段用于肽谱检测，且回收率高；无刺激性气味，传统的考染染色和脱色液体含有大量乙酸，有强烈的刺激气味，试剂盒使用的配方，无刺激气味，质量稳定，室温保存数月不会影响染色效果。
附图说明
图1，实施例中经过染色后的蛋白质PAGE凝胶的图片。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作仅进一步的描述。
实施例一：蛋白质PAGE凝胶电泳快速染色试剂盒。
一种蛋白质PAGE凝胶电泳快速染色试剂盒，其包括HSC染料一系列试剂、HSC染料二系列试剂和水；所述的HSC染料一系列试剂包括无水乙醇和磷酸；所述的HSC染料二系列试剂包括考马斯亮蓝G-250、硫酸铵、磷酸、甲醇、硫酸铝。
实施例二：一种使用上述试剂盒的快速染色方法
一种使用上述试剂盒的快速染色方法，其包括以下详细步骤：
步骤S10制作HSC染料一，分别量取500mL无水乙醇和80mL磷酸混合均匀，使用去离子水定容至1000ml，保存于棕色瓶中备用；
步骤S20制作HSC染料二，称取50g硫酸铝，100g硫酸铵，放入1000ml烧杯中，混合，再倒入100mL磷酸和100ml超纯水到烧杯中，在烧杯中放入#2搅拌子，移至加热搅拌仪上，使用温度为40℃和速度为400r/min的条件搅拌1.5小时，直至完全溶解。完全溶解后，向烧杯中加入1.2g考马斯亮蓝G-250和400ml超纯水，600r/min常温搅拌30min；搅拌结束后加入200ml甲醇，采用parafilm膜封口密封搅拌10min，将溶液倒入1000mL容量瓶，补水定容，保存于棕色瓶中，备用；
步骤S30显色反应：从电泳池取出凝胶，浸入超纯水中，轻摇清洗，将水倒干，再将凝胶浸入步骤S10制成的HSC染料一中，轻摇30min，倒出HSC染料一，再将凝胶浸入步骤S20制成的HSC染料二中，快速摇动30min，观察染色情况。
染色后的凝胶如图1所示，显示清晰且深浅跟蛋白上样量线性关系好，可以用凝胶扫描图像的蛋白含量分析。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (7)
1.一种蛋白质PAGE凝胶电泳快速染色试剂盒，其特征在于，其包括HSC染料一系列试剂、HSC染料二系列试剂和水；所述的HSC染料一系列试剂包括无水乙醇和磷酸；所述的HSC染料二系列试剂包括考马斯亮蓝G-250、硫酸铵、磷酸、甲醇、硫酸铝。
2.根据权利要求1所述的一种蛋白质PAGE凝胶电泳快速染色试剂盒，其特征在于，所述的水是超纯水。
3.一种使用权利要求1-2任一所述试剂盒的快速染色方法，其特征在于，其包括以下步骤：
步骤S10制作HSC染料一，按体积比20-30:2-6分别量取无水乙醇和磷酸混合均匀，使用去离子水定容至无水乙醇终浓度为40-60％，保存于棕色瓶中备用；
步骤S20制作HSC染料二，按质量比，硫酸铝：硫酸铵＝0.5-1.5：1-4称取硫酸铝和硫酸铵，混合；按1-2g/ml的用量分别量取磷酸和超纯水并加入到酸铝和硫酸铵混合物中，加热搅拌1.5h至完全溶解；再按4-8mg/ml加入考马斯亮蓝G-250和按体积比，混合物：超纯水＝0.5-1.5:1-4加入超纯水，常温搅拌30min；搅拌结束后按体积比，混合物：甲醇＝2-4：0.5-2加入甲醇，密封搅拌10min，加入超纯水按体积比3-5:4-6对混合物定容并保存于棕色瓶中备用；
步骤S30显色反应：从电泳池取出凝胶，浸入超纯水中，轻摇清洗，将水倒干，再将凝胶浸入步骤S10制成的HSC染料一中，轻摇20-40min，倒出HSC染料一，再将凝胶浸入步骤S20制成的HSC染料二中，快速摇动20-40min，观察染色情况。
4.根据权利要求3所述的快速染色方法，其特征在于，其包括以下步骤：
步骤S10制作HSC染料一，按体积比25:4分别量取无水乙醇和磷酸混合均匀，使用去离子水定容至无水乙醇终浓度为50％，保存于棕色瓶中备用；
步骤S20制作HSC染料二，按质量比，硫酸铝：硫酸铵＝1：2称取硫酸铝和硫酸铵，混合；按1.5g/ml的用量分别量取磷酸和超纯水并加入到酸铝和硫酸铵混合物中，加热搅拌1.5h至完全溶解；再按6mg/ml加入考马斯亮蓝G-250和按体积比，混合物：超纯水＝1:2加入超纯水，常温搅拌30min；搅拌结束后按体积比，混合物：甲醇＝3：1加入甲醇，密封搅拌10min，加入超纯水按体积比4:5对混合物定容并保存于棕色瓶中备用；
步骤S30显色反应：从电泳池取出凝胶，浸入超纯水中，轻摇清洗，将水倒干，再将凝胶浸入步骤S10制成的HSC染料一中，轻摇30min，倒出HSC染料一，再将凝胶浸入步骤S20制成的HSC染料二中，快速摇动30min，观察染色情况。
5.根据权利要求3或4所述的快速染色方法，其特征在于，所述的步骤S20中的加热搅拌的搅拌速度为350-450r/min，加热温度为30-50℃。
6.根据权利要求3或4所述的快速染色方法，其特征在于，所述的步骤S20中的常温搅拌的搅拌速度为550-650r/min。
7.根据权利要求3或4所述的快速染色方法，其特征在于，所述的步骤S20中密封搅拌是采用parafilm膜密封。
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