CN111337332A - 一种巴氏染色液ea50及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种巴氏染色液EA50及其制备方法，每1000ml巴氏染色液EA50中，包括以下组分：亮绿0.15g‑0.4g，水溶性伊红3g‑5g，甲醇200ml‑300ml，冰醋酸10ml‑50ml，磷钨酸2g‑5g，醇溶性伊红0.05g‑0.1g，无水乙醇450ml‑800ml，其余为纯水。本发明提供的一种巴氏染色液EA50通过对传统的EA50染液配制方法的改良，达到了比较理想的染色效果及使用时间，放弃了易对环境造成污染的碳酸锂溶液，延长了EA50染液的保存时间，缩短了EA50的染色时间，有效地降本增效。
Description
技术领域
本发明涉及细胞染色技术领域，尤其涉及一种巴氏染色液EA50及其制备方法。
背景技术
巴氏染色是一种经典的细胞化学染色方法，广泛应用于细胞脱落学、病理学等领域，染色效果显著。但是在实际操作过程中步骤繁琐、试剂配制麻烦且容易过期、干扰因素多等缺点。EA50染液作为巴氏染色主要的染液之一，主要是使细胞浆、肌纤维、胶元纤维等染成蓝绿色、淡蓝或淡绿色、粉红色或桔黄色等不同的颜色，适用于妇科细胞学涂片染色，如筛查宫颈癌和癌前病变，也适用于胸水、腹水、痰液等非妇科细胞样本的染色。
传统的巴氏染液染色不均，染色效果不稳定，镜下团状细胞无法分辨，细胞核结构无法分辨，影响疾病的判断。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供了一种巴氏染色液EA50及其制备方法，改良了传统的EA50染液配制方法，达到了比较理想的染色效果及使用时间。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明的第一方面提供了一种巴氏染色液EA50，每1000ml巴氏染色液EA50中，包括以下组分：亮绿0.15g-0.4g，水溶性伊红3g-5g，甲醇200ml-300ml，冰醋酸10ml-50ml，磷钨酸2g-5g，醇溶性伊红0.05g-0.1g，无水乙醇450ml-800ml，其余为纯水。
本发明的第二方面是提供该巴氏染色液EA50的制备方法，包括如下步骤：
S1制备试剂甲：称取一定量的亮绿溶于纯水中，混合并搅拌直至充分溶解，使亮绿的浓度为0.03g/ml；
S2制备试剂乙：称取一定量的水溶性伊红溶于纯水中，混合并搅拌直至充分溶解，使水溶性伊红的浓度为0.2g/ml；
S3制备试剂丙：称取一定量的醇溶性伊红溶于无水乙醇中，混合并搅拌直至充分溶解，使醇溶性伊红的浓度为0.008g/ml；
S4制备试剂丁：称取一定量的磷钨酸溶于纯水中，混合并搅拌直至充分溶解，使磷钨酸的浓度为1g/ml；
S5制备试剂戊：量取无水乙醇和纯水，混合均匀，配制成95％的乙醇溶液；
S6将试剂甲5-10毫升和试剂乙10-16毫升混合并搅拌10秒钟；
S7加200-240毫升甲醇，搅拌15秒钟；
S8加入500-800毫升试剂戊，搅拌10秒钟；
S9加入2.5-3.8毫升试剂丁搅拌20秒钟；
S10加入10.0-16.0毫升冰醋酸，搅拌20秒钟；
S11加入5.0-10.0毫升试剂丙，搅拌25秒钟。
进一步地，试剂甲的体积为5ml，8ml或10ml。
进一步地，试剂乙的体积为10ml，12ml或16ml。
进一步地，试剂丙的体积为5ml，8ml或10ml。
进一步地，试剂丁的体积为2.5ml，3.0ml或3.8ml。
进一步地，试剂甲与试剂丙体积比为1:1，5:8或8:5。
进一步优选地，试剂甲与试剂丙体积比为1:1。
进一步地，试剂乙与冰醋酸体积比为1:1，10:12或12:10。
进一步优选地，试剂乙与冰醋酸体积比为1:1。
进一步地，甲醇的体积为200ml，220ml或240ml。
进一步地，冰醋酸的体积为10ml，12ml或16ml。
本发明采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
1、试剂中不含有易对环境造成污染的碳酸锂溶液；
2、在配制过程中限定溶解顺序及搅拌时间，增加了试剂与溶剂的溶解度；
3、试剂中增加醇溶性伊红溶液，使染色细胞层次更分明、饱和度更高、颜色更亮丽。
4、保存期长：适用于规模化生产适用(保存期最长可达24个月)。
5、实际染液用量少：每1000毫升染液可染色10000张左右切片。
6、染色效果好：胞质颜色鲜艳亮丽，透明性好，纹理清晰，细胞核结构清晰，更细腻展示细胞内染色质及细胞核结构。
7、染色速度快：常规EA50染色时间一般为3-5分钟。本发明的改良的EA50染色时间为15秒至3分钟，大大缩短了染色时间，为快速病理创造了条件。
综上所述，本发明提供的一种巴氏染色液EA50通过对传统的EA50染液配制方法的改良，达到了比较理想的染色效果及使用时间，放弃了易对环境造成污染的碳酸锂溶液，延长了EA50染液的保存时间，缩短了EA50的染色时间，有效地降本增效。
附图说明
图1为本发明实施例2中的巴氏染色液EA50进行细胞染色的效果图；
图2为本发明实施例2中的巴氏染色液EA50进行细胞染色的效果图；
图3为本发明实施例3中的巴氏染色液EA50进行细胞染色的效果图；
图4为本发明实施例4中的巴氏染色液EA50进行细胞染色的效果图；
图5为本发明对比例中的巴氏染色液EA50进行细胞染色的效果图。
具体实施方式
本发明提供了一种巴氏染色液EA50，每1000ml巴氏染色液EA50中，包括以下组分：亮绿0.15g-0.4g，水溶性伊红3g-5g，甲醇200ml-300ml，冰醋酸10ml-50ml，磷钨酸2g-5g，醇溶性伊红0.05g-0.1g，无水乙醇450ml-800ml，其余为纯水。
上述巴氏染色液EA50的制备方法，包括如下步骤：
S1制备试剂甲：称取一定量的亮绿溶于纯水中，混合并搅拌直至充分溶解，使亮绿的浓度为0.03g/ml；
S2制备试剂乙：称取一定量的水溶性伊红溶于纯水中，混合并搅拌直至充分溶解，使水溶性伊红的浓度为0.2g/ml；
S3制备试剂丙：称取一定量的醇溶性伊红溶于无水乙醇中，混合并搅拌直至充分溶解，使醇溶性伊红的浓度为0.008g/ml；
S4制备试剂丁：称取一定量的磷钨酸溶于纯水中，混合并搅拌直至充分溶解，使磷钨酸的浓度为1g/ml；
S5制备试剂戊：量取无水乙醇和纯水，混合均匀，配制成95％的乙醇溶液；
S6将试剂甲5-10毫升和试剂乙10-16毫升混合并搅拌10秒钟；
S7加200-240毫升甲醇，搅拌15秒钟；
S8加入500-800毫升试剂戊，搅拌10秒钟；
S9加入2.5-3.8毫升试剂丁搅拌20秒钟；
S10加入10.0-16.0毫升冰醋酸，搅拌20秒钟；
S11加入5.0-10.0毫升试剂丙，搅拌25秒钟。
在本发明一优选的实施例中，试剂甲的体积为5ml，8ml或10ml。
在本发明一优选的实施例中，试剂乙的体积为10ml，12ml或16ml。
在本发明一优选的实施例中，试剂丙的体积为5ml，8ml或10ml。
在本发明一优选的实施例中，试剂丁的体积为2.5ml，3.0ml或3.8ml。
在本发明一优选的实施例中，试剂甲与试剂丙体积比为1:1，5:8或8:5。进一步地，试剂甲与试剂丙体积比为1:1。
在本发明一优选的实施例中，试剂乙与冰醋酸体积比为1:1，10:12或12:10。进一步地，试剂乙与冰醋酸体积比为1:1。
在本发明一优选的实施例中，甲醇的体积为200ml，220ml或240ml。
在本发明一优选的实施例中，冰醋酸的体积为10ml，12ml或16ml。
下面通过具体实施例对本发明进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本发明，但是下述实施例并不限制本发明范围。
实施例1
本实施例提供一种巴氏染色液EA50，其制备方法包括如下步骤：
S1制备试剂甲：亮绿(淡黄)0.3克、纯水10毫升；混合并搅拌直至充分溶解；
S2制备试剂乙：水溶性伊红3.2克、纯水16毫升；混合并搅拌直至充分溶解；
S3制备试剂丙：醇溶性伊红0.08克、无水乙醇10毫升；混合并搅拌直至充分溶解；
S4制备试剂丁：磷钨酸3.8克、纯水3.8毫升；混合并搅拌直至充分溶解；
S5制备试剂戊：量取无水乙醇和纯水，混合均匀，配制成95％的乙醇溶液750ml；
S6将试剂甲10.0毫升和试剂乙10.0毫升混合搅拌10秒钟；
S7加240毫升甲醇，搅拌15秒钟；
S8加入716.2毫升试剂戊，搅拌10秒钟；
S9加入3.8毫升试剂丁搅拌20秒钟；
S10加入10.0毫升冰醋酸，搅拌20秒钟；
S11加入10.0毫升试剂丙，搅拌25秒钟。
实施例2
本实施例提供一种巴氏染色液EA50，其制备方法包括如下步骤：
S1制备试剂甲：亮绿(淡黄)0.3克、纯水10毫升；混合并搅拌直至充分溶解；
S2制备试剂乙：水溶性伊红3.2克、纯水16毫升；混合并搅拌直至充分溶解；
S3制备试剂丙：醇溶性伊红0.08克、无水乙醇10毫升；混合并搅拌直至充分溶解；
S4制备试剂丁：磷钨酸3.8克、纯水3.8毫升；混合并搅拌直至充分溶解；
S5制备试剂戊：量取无水乙醇和纯水，混合均匀，配制成95％的乙醇溶液750ml；
S6将试剂甲10.0毫升和试剂乙16.0毫升混合搅拌10秒钟；
S7加240毫升甲醇，搅拌15秒钟；
S8加入704.2毫升试剂戊，搅拌10秒钟；
S9加入3.8毫升试剂丁搅拌20秒钟；
S10加入16毫升冰醋酸，搅拌20秒钟；
S11加入10毫升试剂丙，搅拌25秒钟。
实施例3
本实施例提供一种巴氏染色液EA50，其制备方法包括如下步骤：
S1制备试剂甲：亮绿(淡黄)0.3克、纯水10毫升；混合并搅拌直至充分溶解；
S2制备试剂乙：水溶性伊红3.2克、纯水16毫升；混合并搅拌直至充分溶解；
S3制备试剂丙：醇溶性伊红0.08克、无水乙醇10毫升；混合并搅拌直至充分溶解；
S4制备试剂丁：磷钨酸3.8克、纯水3.8毫升；混合并搅拌直至充分溶解；
S5制备试剂戊：量取无水乙醇和纯水，混合均匀，配制成95％的乙醇溶液750ml；
S6将试剂甲5毫升和试剂乙10毫升混合搅拌10秒钟；
S7加240毫升甲醇，搅拌15秒钟；
S8加入721.2毫升试剂戊，搅拌10秒钟；
S9加入3.8毫升试剂丁搅拌20秒钟；
S10加入12毫升冰醋酸，搅拌20秒钟；
S11加入8毫升试剂丙，搅拌25秒钟。
实施例4
本实施例提供一种巴氏染色液EA50，其制备方法包括如下步骤：
S1制备试剂甲：亮绿(淡黄)0.3克、纯水10毫升；混合并搅拌直至充分溶解；
S2制备试剂乙：水溶性伊红3.2克、纯水16毫升；混合并搅拌直至充分溶解；
S3制备试剂丙：醇溶性伊红0.08克、无水乙醇10毫升；混合并搅拌直至充分溶解；
S4制备试剂丁：磷钨酸3.8克、纯水3.8毫升；混合并搅拌直至充分溶解；
S5制备试剂戊：量取无水乙醇和纯水，混合均匀，配制成95％的乙醇溶液750ml；
S6将试剂甲8毫升和试剂乙12毫升混合搅拌10秒钟；
S7加240毫升甲醇，搅拌15秒钟；
S8加入721.2毫升试剂戊，搅拌10秒钟；
S9加入3.8毫升试剂丁搅拌20秒钟；
S10加入10毫升冰醋酸，搅拌20秒钟；
S11加入5毫升试剂丙，搅拌25秒钟。
对比例
本对比例提供一种巴氏染色液EA50，其制备方法包括如下步骤：
S1制备试剂甲：亮绿(淡黄)0.3克、纯水10毫升；混合并搅拌直至充分溶解；
S2制备试剂乙：水溶性伊红0.40克、纯水20毫升；混合并搅拌直至充分溶解；
S3制备试剂丙：无水乙醇950毫升、纯水50毫升；混合均匀；
S4制备试剂丁：碳酸锂0.15克、纯水10毫升；混合均匀；
S5将试剂甲10毫升和试剂乙20毫升混合搅拌10秒钟；
S6加250毫升甲醇，搅拌15秒钟；
S7加入700毫升试剂丙混合溶液，搅拌5秒钟
S8加入1克磷钨酸搅拌20秒钟
S9加入10毫升冰醋酸，搅拌15秒钟；
S10加入5毫升试剂丙，搅拌20秒钟；
S11加入10毫升碳酸锂饱和溶液，搅拌25秒钟。
验证试验
将实施例1-4提供的巴氏染色液EA50进行细胞染色，具体的染色步骤如下：
步骤一，样品加保存液震荡(3min)，1150r/min离心3min，弃去上层液后，再次1950r/min离心10min，弃去液体；
步骤二，加1ml缓冲液后用吸管移取转移至反应仓沉降5min；
步骤三，沉降之后，用冲洗液冲洗2遍，再用缓冲液浸泡3s；
步骤三，苏木素染色5min，清水冲洗干净，1％盐酸酒精浸泡1min，清水返蓝20min；
步骤四，EA50染色2min，冲洗液冲洗2遍；
步骤五，封片。
结果如图1-5所示，对比例中细胞质染色偏深，细胞质纹理不够清晰，团状细胞难以分辨；实施例中细胞质染色明显优于对比例，细胞质染色适中，纹理清晰，边界清楚。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。
Claims (9)
1.一种巴氏染色液EA50，其特征在于，每1000ml巴氏染色液EA50中，包括以下组分：亮绿0.15g-0.4g，水溶性伊红3g-5g，甲醇200ml-300ml，冰醋酸10ml-50ml，磷钨酸2g-5g，醇溶性伊红0.05g-0.1g，无水乙醇450ml-800ml，其余为纯水。
2.一种如权利要求1所述的巴氏染色液EA50的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1制备试剂甲：称取一定量的亮绿溶于纯水中，混合并搅拌直至充分溶解，使亮绿的浓度为0.03g/ml；
S2制备试剂乙：称取一定量的水溶性伊红溶于纯水中，混合并搅拌直至充分溶解，使水溶性伊红的浓度为0.2g/ml；
S3制备试剂丙：称取一定量的醇溶性伊红溶于无水乙醇中，混合并搅拌直至充分溶解，使醇溶性伊红的浓度为0.008g/ml；
S4制备试剂丁：称取一定量的磷钨酸溶于纯水中，混合并搅拌直至充分溶解，使磷钨酸的浓度为1g/ml；
S5制备试剂戊：量取无水乙醇和纯水，混合均匀，配制成95％的乙醇溶液；
S6将试剂甲5-10毫升和试剂乙10-16毫升混合并搅拌10秒钟；
S7加200-240毫升甲醇，搅拌15秒钟；
S8加入500-800毫升试剂戊，搅拌10秒钟；
S9加入2.5-3.8毫升试剂丁搅拌20秒钟；
S10加入10.0-16.0毫升冰醋酸，搅拌20秒钟；
S11加入5.0-10.0毫升试剂丙，搅拌25秒钟。
3.根据权利要求2所述的巴氏染色液EA50的制备方法，其特征在于，所述试剂甲的体积为5ml，8ml或10ml。
4.根据权利要求2所述的巴氏染色液EA50的制备方法，其特征在于，所述试剂乙的体积为10ml，12ml或16ml。
5.根据权利要求2所述的巴氏染色液EA50的制备方法，其特征在于，所述试剂丙的体积为5ml，8ml或10ml。
6.根据权利要求2所述的巴氏染色液EA50的制备方法，其特征在于，所述试剂丁的体积为2.5ml，3.0ml或3.8ml。
7.根据权利要求2所述的巴氏染色液EA50的制备方法，其特征在于，所述试剂甲与试剂丙体积比为1:1，5:8或8:5。
8.根据权利要求2所述的巴氏染色液EA50的制备方法，其特征在于，试剂乙与冰醋酸体积比为1:1，10:12或12:10。
9.根据权利要求2所述的巴氏染色液EA50的制备方法，其特征在于，所述甲醇的体积为200ml，220ml或240ml；所述冰醋酸的体积为10ml，12ml或16ml。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114441272A (zh) * | 2022-01-27 | 2022-05-06 | 北京艾迪康医学检验实验室有限公司 | 一种脱落细胞染色液及其制备方法 |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101560543A (zh) * | 2008-04-18 | 2009-10-21 | 麦克奥迪实业集团有限公司 | 细胞染色试剂及其配制方法和在细胞染色中的应用 |
| CN101560544A (zh) * | 2008-04-18 | 2009-10-21 | 麦克奥迪实业集团有限公司 | 一种细胞综合检测方法 |
| CN105651580A (zh) * | 2015-12-28 | 2016-06-08 | 北京雷根生物技术有限公司 | 一种苏木素伊红混合染色液 |
| CN105755099A (zh) * | 2016-03-28 | 2016-07-13 | 天津智达康华生物科技有限公司 | 一种巴氏染色液及其制备方法 |
| CN107205980A (zh) * | 2014-10-21 | 2017-09-26 | M·布达克 | 具有获自虞美人的新型分子的组织和细胞染色剂制剂 |
| CN108195653A (zh) * | 2017-09-16 | 2018-06-22 | 南京福怡科技发展股份有限公司 | 一种复染染色试剂盒及制备和应用 |
| CN108276803A (zh) * | 2018-04-10 | 2018-07-13 | 南京福怡科技发展股份有限公司 | 一种苏木素-伊红快速染色液及应用方法 |
| CN109387417A (zh) * | 2017-08-11 | 2019-02-26 | 武汉宏强医疗器械有限公司 | 一种用于病理组织染色机的h-e染色液 |
| CN109425525A (zh) * | 2017-08-24 | 2019-03-05 | 武汉宏强医疗器械有限公司 | 一种用于液基细胞学实验的h-e染色液 |
-
2020
- 2020-03-17 CN CN202010187805.7A patent/CN111337332A/zh active Pending
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101560543A (zh) * | 2008-04-18 | 2009-10-21 | 麦克奥迪实业集团有限公司 | 细胞染色试剂及其配制方法和在细胞染色中的应用 |
| CN101560544A (zh) * | 2008-04-18 | 2009-10-21 | 麦克奥迪实业集团有限公司 | 一种细胞综合检测方法 |
| CN107205980A (zh) * | 2014-10-21 | 2017-09-26 | M·布达克 | 具有获自虞美人的新型分子的组织和细胞染色剂制剂 |
| CN105651580A (zh) * | 2015-12-28 | 2016-06-08 | 北京雷根生物技术有限公司 | 一种苏木素伊红混合染色液 |
| CN105755099A (zh) * | 2016-03-28 | 2016-07-13 | 天津智达康华生物科技有限公司 | 一种巴氏染色液及其制备方法 |
| CN109387417A (zh) * | 2017-08-11 | 2019-02-26 | 武汉宏强医疗器械有限公司 | 一种用于病理组织染色机的h-e染色液 |
| CN109425525A (zh) * | 2017-08-24 | 2019-03-05 | 武汉宏强医疗器械有限公司 | 一种用于液基细胞学实验的h-e染色液 |
| CN108195653A (zh) * | 2017-09-16 | 2018-06-22 | 南京福怡科技发展股份有限公司 | 一种复染染色试剂盒及制备和应用 |
| CN108276803A (zh) * | 2018-04-10 | 2018-07-13 | 南京福怡科技发展股份有限公司 | 一种苏木素-伊红快速染色液及应用方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 吴春平 等: "《临床疾病病理诊断学》", 31 March 2019, 吉林科学技术出版社 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114441272A (zh) * | 2022-01-27 | 2022-05-06 | 北京艾迪康医学检验实验室有限公司 | 一种脱落细胞染色液及其制备方法 |
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