CN105651580A - 一种苏木素伊红混合染色液 - Google Patents
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Abstract
本发明“一种苏木素伊红混合染色液”，其特征是所述的苏木素伊红混合染色液中包括如下组分：苏木素、氧化剂、媒染剂、伊、醇、弱酸、防腐剂、水，是把苏木素和伊红混合在一起，只需对细胞、组织等样本染色一次，既能使苏木素上色亦可使伊红上色的新型染色液。本发明还提供了所述的苏木素伊红混合染色液的制备方法及其染色方法，解决了传统苏木素伊红染色操作复杂、耗时长、假性蓝色、层次不清、保存时间短的问题。
Description
技术领域：
本发明属于生物医药领域，具体涉及一种苏木素伊红混合后进行一步法染色的样本处理类试剂及其制备、染色方法。
背景技术：
苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin，又称曙红)联合染色简称HE染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用极其广泛。在病理诊断、教学和科研工作中，常用HE染色对正常组织和病变组织进行形态结构观察。对于确定或鉴别病变组织、细胞中出现的某些异常物质与特殊成分，而需要采用的特殊染色方法、酶组织化学方法、免疫组织化学方法等也均是在观察HE染色组织切片的基础上进行的。在HE染色的组织切片中，细胞核呈蓝色，细胞浆呈红色，二者形成鲜明的对比，易于观察分析。
苏木精是从原产中南美的洋苏木中提取出来的浅黄褐色的结晶，是一种碱性染色剂，它在被氧化后生成苏木素，同媒染剂(常用的是三价的铝或盐铁)一起使用，能够使细胞核染色。苏木素的分子式为C6H14O6，具体结构式如下：
传统的经典苏木素伊红染色液有Harris苏木素染色液、Mayer苏木素染色液、Core苏木素染色液Carazzi苏木素染色液、改良Lillie-Mayer苏木素染色液等，大多需要经过苏木素染色、盐酸乙醇分化、返蓝、水洗、伊红染色等系列步骤，其操作复杂、耗时长，另外存在染料沉淀和假性蓝色染色的问题。
伊红(eosin)又称曙红，属于人工合成的酸性染料，伊红最适宜与苏木素配合染色以显示正常或病理组织的形态结构，分为水溶性伊红Y和醇溶性伊红Y以及伊红B等，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
水溶性伊红的结构式为：
醇溶性伊红的结构式为：
伊红染色液在水中可解离为带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷结合，从而使细胞质染成深浅不一的红色，目前国内采用的伊红染色液主要为水溶性伊红的水溶液和醇溶性伊红的95％乙醇溶液。上述伊红染色液均加有乙酸作为促染剂以加强染色强度，而乙酸会弱化染色色彩层次感，同时在后续的处理过程中需要清洗酸性物质，否则易造成切片易褪色。
目前常规HE染色液，苏木素染色易产生染料沉淀、假性蓝色染色，而伊红染色易出现色彩层次不清、需要清洗酸性物质。非常重要的是，科研工作者往往要求染色效果好即可，不太在意操作复杂和耗时长的问题，但是对于大量染色操作的临床检验人员来说，操作复杂和耗时长的问题就急需要解决了。
发明内容：
为了解决传统苏木素伊红染色操作复杂、耗时长、假性蓝色、层次不清问题，本发明“一种苏木素伊红混合染色液”旨在提供一种苏木素和伊红混合在一起，只需对细胞、组织等样本染色一次，既能使苏木素上色亦可使伊红上色的新型染色液。本发明提供了所述苏木素伊红混合染色液的制备方法和染色方法，所述的可用于染色样本的类型有石蜡切片、冰冻切片、血液涂片、培养细胞以及体液涂片(如宫颈粘液涂片、脑脊液涂片等)等。
一种苏木素伊红混合染色液，其特征是所述的每1000ml苏木素伊红混合染色液中包括如下组分：苏木素3-10g；氧化剂0.2-23g；媒染剂5-100g；伊红1-10g；醇50-500ml；弱酸3-60g；防腐剂0.1-5g；其余为水。
进一步地，所述的苏木素与所述氧化剂的质量比小于2.5。
进一步地，所述的醇占所述苏木素伊红混合染色液的体积比例小于0.5。
一种苏木素伊红混合染色液，所述的氧化剂为氧化汞、碘酸钠、碘酸钾、高碘酸钠、高碘酸钾、高锰酸钾、过氧化氢、次氯酸钠、次氯酸钙的一种或多种的混合物。进一步地，每1000ml所述苏木素伊红复合染色液中，所述的氧化汞优选0.4-4g，最优选2.3g；所述的碘酸钠优选0.1-2g，最优选0.25g；所述的碘酸钠优选0.1-2g，最优选0.26g；所述的高碘酸钠优选0.1-0.5g，最优选0.24g；所述的高碘酸钾优选0.1-0.5g，最优选0.25g；所述的高锰酸钾优选0.2-2g，最优选0.95g；所述的过氧化氢优选4-22g，最优选11g；所述的次氯酸钠优选3-20g，最优选9.5g；所述次氯酸钙优选3-20g，最优选10g。
一种苏木素伊红混合染色液，所述的氧化汞与所述的苏木素的质量比应小于0.51；所述的碘酸钠与所述的苏木素的质量比应小于0.21；所述的高碘酸钠与所述的苏木素的质量比应小于0.05；所述的高碘酸钾应与所述的苏木素的质量比应小于0.05；所述的高锰酸钾与所述的苏木素的质量比应小于0.19；所述的过氧化氢与所述的苏木素的质量比应小于2.25；所述的次氯酸钠与所述的苏木素的质量比应小于2；所述的次氯酸钙与所述的苏木素的质量比应小于2。
一种苏木素伊红混合染色液，所述的媒染剂为硫酸铝钾、硫酸铝铵、硝酸铝、氯化铝、硫酸铝的一种或多种的混合物。进一步地，每1000ml所述的苏木素伊红复合染色液中，所述的硫酸铝钾优选26.5g，所述的硫酸铝铵29.6g，所述的硝酸铝优选24.4g，所述的氯化铝优选14.9g；所述的硫酸铝优选18.6g。
一种苏木素伊红混合染色液，所述的伊红为水溶性伊红Y、醇溶性伊红Y、焰红B的一种或多种的混合物。优选水溶性伊红Y1-10g、醇溶性伊红Y1-10g、焰红B0.2-2g三种联合使用。
一种苏木素伊红混合染色液，所述的醇为乙醇、甲醇、乙二醇、丙三醇、异丙醇中的一种或多种的混合物。优选乙醇、丙三醇两种联合使用。
一种苏木素伊红混合染色液，所述的弱酸为冰乙酸、柠檬酸、水杨酸的一种或多种的混合物。进一步地，每1000ml苏木素伊红混合染色液中，所述的冰乙酸优选5.6-33.3g，最优选10.6g；所述的柠檬酸优选0.54-3.2g，最优选1g；所述的水杨酸优选0.16-1g，最优选0.32g。
一种苏木素伊红混合染色液，所述的防腐剂为叠氮钠、甲醛、氯仿的的一种或多种的混合物。进一步地，每1000ml苏木素伊红混合染色液中，所述的叠氮钠优选0.1-2g，最优选0.2g；所述的甲醛优选0.5-5g，最优选1g；所述的氯仿优选0.5-5g，最优选1g。
一种苏木素伊红混合染色液，所述的水为蒸馏水或去离子水中的一种。
优选的用于石蜡切片染色的苏木素伊红混合染色液，每1000ml包括如下组分：苏木素5g，醇溶性伊红1.0g，无水乙醇250ml，硫酸铝钾50g，丙三醇150ml，碘酸钠0.4g，水溶性伊红5g，焰红0.5g，冰乙酸18ml，甲醛0.1g，其余为去离子水，共计1000ml。
优选的用于冰冻切片染色的苏木素伊红混合染色液，每1000ml包括如下组分：苏木素3.5g，醇溶性伊红1.0g，无水乙醇250ml，硫酸铝钾30g，丙三醇150ml，碘酸钠0.3g，水溶性伊红3g，焰红0.4g，冰乙酸14ml，甲醛0.1g，其余为去离子水，共计1000ml。
优选的用于细胞染色的苏木素伊红混合染色液，每1000ml包括如下组分：苏木素2.6g，醇溶性伊红1.7g，无水乙醇250ml，硫酸铝钾25g，丙三醇150ml，碘酸钠0.22g，水溶性伊红0.5g，焰红0.2g，冰乙酸10ml，甲醛0.1g，其余为去离子水，共计1000ml。
本发明“一种苏木素伊红混合染色液”的制备方法，包括如下步骤：
配制醇溶试剂：按选定的体积分数取醇并按选定的比例加入苏木素、醇溶伊红，充分溶解，即获得醇溶试剂，备用。
配制媒染试剂：按选定的体积分数取水并按选定的比例加入媒染剂，充分溶解，即获得媒染试剂，备用。
配制混合染色液：取适量的上述配制好的醇溶试剂和配制媒染试剂，充分混匀后，按选定的体积分数取氧化剂加入前述混合液中，取适量的水溶性伊红、焰红B、弱酸、防腐剂加入，补去离子水至1000ml，充分混匀，过滤，即得苏木素伊红混合染色液。
需要说明的是，在所述的苏木素伊红混合染色液的制备过程中，选用多种所述的氧化剂时，各所述的氧化剂应分批加入所述的混合液中。
本发明“一种苏木素伊红混合染色液”的染色方法，包括如下步骤(仅供参考)：
1)切片预处理：取待染色石蜡切片按常规方式脱蜡、水化；取待染色冰冻切片固定、水化；取待染色血液涂片或培养细胞固定、水化。
2)苏木素伊红混合染色：取处理好的石蜡切片，置于所述的苏木素伊红混合染色液中染色2-8min；取处理好的冰冻切片，置于所述的苏木素伊红混合染色液中染色1-5min；取处理好的血液涂片或培养细胞，取苏木素伊红混合染色液滴染0.5-2min；取出上述三种样本水洗、分化、水洗、返蓝，再水洗。
3)切片脱水、透明、封片：将上述染色得到的染色后的切片采用常规方式脱水，透明处理，封片；将上述细胞染色的细胞直接进行封片。
进一步地，所述的苏木素伊红混合染色液的染色方法以石蜡切片为例，所述的石蜡切片预处理步骤为：取石蜡切片置于二甲苯或其他脱蜡剂中脱蜡2-3次，每次5-10min；将上述石蜡切片依次置于无水乙醇中2-3次，每次3-5min，体积分数为90-95％的乙醇中1-2次，每次1-3min，体积分数为60-80％的乙醇中1-3min，再用蒸馏水水洗1-5min。优选步骤为：取石蜡切片置于二甲苯或其他脱蜡剂中脱蜡3次，每次5min；将上述石蜡切片依次置于无水乙醇中2次，每次3min，体积分数为95％的乙醇中2次，每次3min，体积分数为70％的乙醇中3min，再用蒸馏水水洗5min。
所述的苏木素伊红混合染色步骤为：取上述步骤预处理好的切片置于所述的苏木素伊红混合染色液中染色2-8min，取出后水洗1-20min，用0.05-1％盐酸乙醇分化1-60s，水洗1-5min，用0.1-1％氨水或饱和碳酸锂水溶液返蓝20-60s，水洗1-5min。优选步骤为：取上述步骤预处理好的切片置于所述的苏木素伊红混合染色液中染色4min，取出后水洗5min，用0.2％盐酸乙醇分化30s，水洗5min，用1.36％碳酸锂水溶液返蓝30s，水洗5min。
所述的脱水、透明、封片步骤为：取上述步骤染色好的切片分别用体积分数为60-80％的乙醇脱水10-30s，体积分数为95％的乙醇脱水2-3次，每次1-5min，无水乙醇脱色2-3次，每次1-5min，再置于二甲苯或其他透明剂中透明2-3次，每次2-5min，封片。优选步骤为：取上述步骤染色好的切片分别用体积分数为80％的乙醇脱水30s，体积分数为95％的乙醇脱水2次，每次3min，无水乙醇脱水2次，每次3min，再置于二甲苯或其他透明剂中透明2次，每次5min，封片。
需要说明的是，上述其他脱蜡剂是指二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯中的一种或多种的混合物。上述其他透明剂是指二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯中的一种或多种的混合物。
进一步地，需要说明的是，采用所述的苏木素伊红混合染色液进行染色时，本领域技术人员可以根据染色情况及染色要求对染色、分化、返蓝时间进行适当调整。可用于染色样本的类型有石蜡切片、冰冻切片、血液涂片、培养细胞以及体液涂片(如宫颈粘液涂片、脑脊液涂片等)等。
对于本领域的技术人员来说，可以根据本发明的技术方案和构思，上述组成的用量和配比可根据具体需要进行调整，从而制备出不同特点的苏木素伊红混合染色液。
本发明“一种苏木素伊红混合染色液”可按照上述步骤对石蜡切片进行染色，但并不限于石蜡切片，本领域技术人员也可采用常规手段对冰冻切片、血液涂片、培养细胞等进行染色操作。
本发明“一种苏木素伊红混合染色液”与现有技术染色液相比具有以下优点：
1、本发明的苏木素伊红混合染色液把传统的苏木素染色和伊红染色步骤合二为一，简化了操作步骤，大大缩短了染色时间，使苏木素伊红同时上色。
2、本发明的苏木素伊红混合染色液伊红采用醇溶性伊红、水溶性伊红、焰红三种不同深浅的染料混合组成，可以使染色层次分明，色彩鲜艳，具有较为理想的着色强度，可保证较强的染色强度。
3、本发明的苏木素伊红混合染色液主要包括苏木素、氧化剂、媒染剂、伊红、醇、弱酸、防腐剂、水等，其中防腐剂可防止伊红易长真菌和出现沉淀等问题，使保存时间延长。
4、本发明的苏木素伊红混合染色液是苏木素与伊红共同使用，所述的苏木素对细胞核内的染色质与胞质内的核糖体染色，染色均匀，假性蓝色染色较少；所述的伊红对细胞质和细胞外基质染色，层次丰富、着色清晰、层次分明、易于读片。
附图说明：
图1为本发明苏木素伊红混合染色液的石蜡切片染色示意图。
图2为本发明苏木素伊红混合染色液的冰冻切片染色示意图。
图3为本发明苏木素伊红混合染色液的细胞涂片染色示意图。
具体实施方式：
以下具体实施方式进一步阐明本发明“一种苏木素伊红混合染色液”的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、条件、步骤及应用所做的修改或替换，均属于本发明的范围。
实施例一
本发明“一种苏木素伊红混合染色液”，用于石蜡切片染色优选的每1000ml染色液组分为：苏木素5g，醇溶性伊红1.0g，无水乙醇250ml，硫酸铝钾50g，丙三醇150ml，碘酸钠0.4g，水溶性伊红5g，焰红0.5g，冰乙酸10.6ml，甲醛0.1g，其余为去离子水，共计1000ml。
用于石蜡切片的苏木素伊红混合染色液制备方法：
配制醇溶试剂：按选定的体积分数取醇(250ml)并按选定的比例加入苏木素(5g)、醇溶伊红(1.0g)、丙三醇(150ml)，充分溶解，即获得醇溶试剂，备用。
配制媒染试剂：按选定的体积分数取水(600ml)并按选定的比例加入硫酸铝钾(50g)，充分溶解，即获得媒染试剂，备用。
配制混合染色液：取适量的上述配制好的醇溶试剂和配制媒染试剂，充分混匀后，按选定的体积分数取碘酸钠(0.4g)加入前述混合液中，取适量的水溶性伊红(5g)、焰红B(0.4g)、冰乙酸(18ml)、甲醛(0.1g)加入，补去离子水至1000ml，充分混匀，过滤，即得用于石蜡切片的苏木素伊红混合染色液。
取经上述步骤制得的用于石蜡切片的苏木素伊红混合染色液，对石蜡切片进行染色操作：
1)切片预处理：取石蜡切片置于二甲苯或其他脱蜡剂中脱蜡3次，每次5min；将上述石蜡切片依次置于无水乙醇中2次，每次3min，体积分数为95％的乙醇中2次，每次3min，体积分数为70％的乙醇中3min，再用蒸馏水水洗5min。
2)苏木素伊红混合染色：取上述步骤预处理好的切片置于所述的苏木素伊红混合染色液中染色5min，取出后水洗5min，用0.2％盐酸乙醇分化30s，水洗5min，用1.36％碳酸锂水溶液返蓝30s，水洗5min。
3)切片脱水、透明、封片：取上述步骤染色好的切片分别用体积分数为80％的乙醇脱水30s，体积分数为95％的乙醇脱水2次，每次3min，无水乙醇脱水2次，每次3min，再置于二甲苯或其他透明剂中透明2次，每次5min，封片。
4)光学显微镜下观察、拍照。结果见附图1。
实施例二
本发明“一种苏木素伊红混合染色液”，用于冰冻切片染色优选的每1000ml染色液组分为：苏木素3.5g，醇溶性伊红1.0g，无水乙醇250ml，硫酸铝钾30g，丙三醇150ml，碘酸钠0.3g，水溶性伊红3g，焰红0.4g，冰乙酸9.6ml，甲醛0.1g，其余为去离子水，共计1000ml。
用于冰冻切片的苏木素伊红混合染色液制备方法：
配制醇溶试剂：按选定的体积分数取醇(250ml)并按选定的比例加入苏木素(3.5g)、醇溶伊红(1.0g)、丙三醇(150ml)，充分溶解，即获得醇溶试剂，备用。
配制媒染试剂：按选定的体积分数取水(600ml)并按选定的比例加入硫酸铝钾(30g)，充分溶解，即获得媒染试剂，备用。
配制混合染色液：取适量的上述配制好的醇溶试剂和配制媒染试剂，充分混匀后，按选定的体积分数取碘酸钠(0.3g)加入前述混合液中，取适量的水溶性伊红(3g)、焰红B(0.5g)、冰乙酸(9.6ml)、甲醛(0.1g)加入，补去离子水至1000ml，充分混匀，过滤，即得用于冰冻切片的苏木素伊红混合染色液。
取经上述步骤制得的用于冰冻切片的苏木素伊红混合染色液，对冰冻切片进行染色操作：
1)切片预处理：取冰冻切片置于乙醚-乙醇固定液(1∶1)5-15s，用蒸馏水水洗10-20s。
2)苏木素伊红混合染色：取上述步骤预处理好的切片置于所述的苏木素伊红混合染色液中染色2min，取出后水洗10-20s，用0.2％盐酸乙醇分化20s，水洗10-20s，用1.36％碳酸锂水溶液返蓝20s，水洗10-20s。
3)切片脱水、透明、封片：取上述步骤染色好的切片分别用体积分数为80％的乙醇脱水2-5s，体积分数为95％的乙醇脱水2-5s，无水乙醇脱水2-5s，再置于二甲苯或其他透明剂中透明3次，每次2-5s，封片。
4)光学显微镜下观察、拍照。结果见附图2。
实施例三
本发明“一种苏木素伊红混合染色液”，用于细胞染色优选的每1000ml染色液组分为：苏木素2.6g，醇溶性伊红1.7g，无水乙醇250ml，硫酸铝钾25g，丙三醇150ml，碘酸钠0.22g，水溶性伊红0.5g，焰红0.2g，冰乙酸10ml，甲醛0.1g，其余为去离子水，共计1000ml。
用于细胞染色的苏木素伊红混合染色液制备方法：
配制醇溶试剂：按选定的体积分数取醇(250ml)并按选定的比例加入苏木素(2.6g)、醇溶伊红(1.7g)、丙三醇(150ml)，充分溶解，即获得醇溶试剂，备用。
配制媒染试剂：按选定的体积分数取水(600ml)并按选定的比例加入硫酸铝钾(25g)，充分溶解，即获得媒染试剂，备用。
配制混合染色液：取适量的上述配制好的醇溶试剂和配制媒染试剂，充分混匀后，按选定的体积分数取碘酸钠(0.3g)加入前述混合液中，取适量的水溶性伊红(0.5g)、焰红B(0.2g)、冰乙酸(10ml)、甲醛(0.1g)加入，补去离子水至1000ml，充分混匀，过滤，即得用于细胞的苏木素伊红混合染色液。
取经上述步骤制得的用于细胞的苏木素伊红混合染色液，对细胞染色进行染色操作：
1)切片预处理：取细胞涂片置于95％乙醇固定20-60s，用蒸馏水水洗10s。
2)苏木素伊红混合染色：取上述步骤预处理好的细胞，用苏木素伊红混合染色液滴染0.5-2min，取出后水洗10-20s，用0.2％盐酸乙醇分化10s，水洗10s，用1.36％碳酸锂水溶液返蓝10s，水洗10s，封片。
3)光学显微镜下观察、拍照。结果见附图3。
对于本领域的技术人员来说，可以根据本发明的技术方案和构思，上述石蜡切片、冰冻切片、细胞涂片、培养细胞染色的配制和染色步骤和时间可根据具体需要进行调整，而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍应属于本发明创造的保护范围内。
Claims (10)
1.一种苏木素伊红混合染色液，其特征在于，所述的每1000ml苏木素伊红混合染色液中包括如下组分：苏木素3-10g，氧化剂0.2-23g，媒染剂5-100g，伊红1-10g，醇50-500ml，弱酸3-60g，防腐剂0.1-5g，其余为水。
2.根据权利要求1所述的一种苏木素伊红混合染色液，其特征在于，所述的苏木素伊红混合染色液把苏木素和伊红混合在一起，只需对细胞、组织等样本染色一次，既能使苏木素上色亦可使伊红上色的新型染色液。
3.根据权利要求1所述的一种苏木素伊红混合染色液，其特征在于，所述的苏木素与所述氧化剂的质量比小于2.5，所述的醇占所述苏木素伊红混合染色液的体积比例小于0.5。
4.根据权利要求1-3所述的一种苏木素伊红混合染色液，其特征在于，所述的氧化剂为氧化汞、碘酸钠、碘酸钾、高碘酸钠、高碘酸钾、高锰酸钾、过氧化氢、次氯酸钠、次氯酸钙的一种或多种的混合物，所述的媒染剂为硫酸铝钾、硫酸铝铵、硝酸铝、氯化铝、硫酸铝的一种或多种的混合物，所述的伊红为水溶性伊红Y、醇溶性伊红Y、焰红B的一种或多种的混合物，弱酸为冰乙酸、柠檬酸、水杨酸的一种或多种的混合物，所述的防腐剂为叠氮钠、甲醛、氯仿的的一种或多种的混合物，所述的水为蒸馏水或去离子水中的一种。
5.根据权利要求1-4所述的一种苏木素伊红混合染色液，其特征在于，优选的用于石蜡切片染色的苏木素伊红混合染色液，每1000ml包括如下组分：苏木素5g，醇溶性伊红1.0g，无水乙醇250ml，硫酸铝钾50g，丙三醇150ml，碘酸钠0.4g，水溶性伊红5g，焰红0.5g，冰乙酸10.6ml，甲醛0.1g，其余为去离子水；优选的用于冰冻切片染色的苏木素伊红混合染色液，每1000ml包括如下组分：苏木素3.5g，醇溶性伊红1.0g，无水乙醇250ml，硫酸铝钾30g，丙三醇150ml，碘酸钠0.3g，水溶性伊红3g，焰红0.4g，冰乙酸9.6ml，甲醛0.1g，其余为去离子水；优选的用于细胞染色的苏木素伊红混合染色液，每1000ml包括如下组分：苏木素2.6g，醇溶性伊红1.7g，无水乙醇250ml，硫酸铝钾25g，丙三醇150ml，碘酸钠0.22g，水溶性伊红0.5g，焰红0.2g，冰乙酸10ml，甲醛0.1g，其余为去离子水。
6.根据权利要求1-5所述的一种苏木素伊红混合染色液，其特征在于，按选定的体积分数取醇并按选定的比例加入苏木素、醇溶伊红，充分溶解，即获得醇溶试剂；按选定的体积分数取水并按选定的比例加入媒染剂，充分溶解，即获得媒染试剂；取适量的上述配制好的醇溶试剂和配制媒染试剂，充分混匀后，按选定的体积分数取氧化剂加入前述混合液中，取适量的水溶性伊红、焰红B、弱酸、防腐剂加入，补去离子水至1000ml，充分混匀，过滤，即得苏木素伊红混合染色液。
7.根据权利要求1-2所述的一种苏木素伊红混合染色液，其特征在于，苏木素伊红混合染色液的染色方法，包括如下步骤：切片预处理；苏木素伊红混合染色；脱水、透明、封片或固定、封片，可以根据染色情况及染色要求对染色、分化、返蓝、脱水、透明、固定时间进行适当调整。
8.根据权利要求1-2所述的一种苏木素伊红混合染色液，其特征在于，所述的苏木素伊红混合染色液把苏木素和伊红混合在一起的策略用于动物、植物、细菌、真菌、培养细胞等样本的染色，可用于染色样本的类型有石蜡切片、冰冻切片、血液涂片、培养细胞以及细胞涂片(如宫颈粘液涂片、脑脊液涂片等)等。
9.根据权利要求1-2所述的一种苏木素伊红混合染色液，其特征在于，所述的苏木素伊红混合染色液把苏木素和伊红混合在一起的策略应用于普通显微镜分析、电镜分析、计算机软件程序编写以及仪器的开发和利用，提高各种生物学样本及病理学样本处理方法的染色效果和染色效率。
10.根据权利要求1-2所述的一种苏木素伊红混合染色液，其特征在于，所述的苏木素伊红混合染色液把苏木素和伊红混合在一起的策略应用于临床检测试剂、科研试剂以及其他生命科学试剂及试剂盒。
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