CN102286603B - 巴氏染色液及其快速染色方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种巴氏染色液及其快速染色方法，巴氏染色液是由细胞核染色液和细胞浆染色液构成；巴氏染色液的快速染色方法，是在22℃的室温环境下操作。本发明巴氏染色液制备方法简单、成本低。利用本发明巴氏染色液的染色方法简单可靠，可以从传统的90分钟缩减为7分钟，工作效率大大提高。
Description
技术领域
本发明涉及巴氏染色液及其染色方法，属于体外诊断试剂及试剂的使用方法
背景技术
巴氏(Papanicolaou)染色法是病理切片和脱落细胞染色中最好的最常用的染色方法，该染色法不但具有显示细胞核结构清晰，分色明显，透明度好，胞浆受色鲜艳等特点，而且所染标本不易脱色，可长久保存。
细胞核的主要成分是脱氧核糖核酸，其等电点为pH 1.6-2.0，当pH大于2.0时DNA带负电，能与带正电的染料阳离子结合。苏木素是染核的染料，氧化后成为氧化苏木素即苏木素红或苏木精，它的等离子点是PH 6.5，当染液的酸碱度调节到PH 2.2-2.9时，苏木精能析出阳离子，与带负电的DNA结合。因为苏木精阳离子电荷不强，与DNA结合不牢，所以染色不深。当加入钾矾等媒剂后，即结合成带强正电的大分子带色体——苏木精矾，后者具有强大亲和力，与DNA结合牢固，染成较深紫色，不易为醇、水洗脱。细胞浆中的蛋白质等电点约为PH 6.0，在不同的酸碱度中能与不同的染料结合。但在PH小于4时便不能再与染料的阳离子结合；PH大于8时便不再与染料的阴离子结合。伊红、亮绿、桔黄、俾士麦棕的发色部分都是阴离子，只能与蛋白质的阳离子结合，因此染色环境不能太酸太碱。较年轻的细胞如底层鳞状上皮细胞浆中核蛋白体较多，易与亮绿结合而染绿色。成熟的细胞浆中含核蛋白体较少(如成熟红细胞、表层角化鳞状上皮细胞)易与伊红结合而染红色。很衰老的细胞(如完全角化细胞)则可与桔黄结合而呈桔黄色。
传统的巴氏染色液配制复杂，染色手续繁杂，时间较长且难以掌握。因而检验技术人员普遍感到操作难度大。
发明内容
本发明是为避免上述现有技术所存在的不足之处，提供一种巴氏染色液及其染色方法。以使巴氏染色液配制简单、染色过程时间短，易于技术人员准确操作。
本发明巴氏染色液的特点是由细胞核染色液和细胞浆染色液构成；
所述细胞核染色液的配制方法为：
将0.3g苏木素色精单独溶解于30ml无水乙醇中得苏木素酒精液；将硫酸铝铵6g置于1000ml大烧杯中加蒸馏水700ml，加热至70-80℃，搅拌使其完全溶解，然后加温至90℃，关断热源即加入苏木素酒精液，边加边搅拌，加完之后继续加热至沸即离开热源；再向其中加入0.5g黄色氧化汞粉末，边加边搅拌，继续加热使溶液呈深紫色，立即置于10-30℃的水中进行水浴冷却；冷却到10-30℃后置于塑料桶中，加入体积浓度为1％冰乙酸2ml，经滤纸滤去残渣即得细胞核染色液；
所述细胞浆染色液的配制方法：
取0.1g橙黄G6溶于100ml、95％酒精得橙黄G6酒精液为备用料；
取0.1g亮绿溶于100ml、95％酒精得亮绿酒精液为备用料；
取0.05g俾仕麦棕溶于100ml、95％酒精得俾仕麦棕酒精液为备用料；
取0.1g伊红溶于100ml、95％酒精得伊红酒精液为备用料；
取磷钨酸0.5g为备用料；
所有备用料充分混匀溶解后即为细胞浆染色液。
本发明巴氏染色液的快速染色方法的特点是在22℃的室温环境下按如下步骤进行操作：
a、固定：将未干的宫颈分泌物涂片置95％酒精中，15-30分钟时取出得固定涂片；
b、染核：将步骤a所得固定涂片置于细胞核染色液中染色2分钟，取出后用蒸馏水冲净得染核涂片，立即进行下一步骤的染浆；
c、染浆：将染核涂片置于细胞浆染色液中，2分钟取出，在95％酒精液中洗涤至无细胞浆染色液附着即得染浆涂片，所述染浆涂片即可用于进行镜检；若需要长期保存则继续进行后续步骤d的封片；
d、封片：将步骤c所得染浆涂片置于无水酒精中洗涤后，再置于AR级二甲苯洗涤透明涂片；用阿拉伯树胶封固透明涂片，所述被封固的透明涂片在10-30℃避光条件下保存。
染色结果：上皮细胞：核染蓝紫色、核仁红色；胞浆依分化高低，分别染成橙黄、粉红、绿色、淡蓝色。
与已有技术相比，本发明有益效果体现在：
1、本发明巴氏染色液制备方法简单、成本低。
2、本发明染色方法简单可靠，可以从传统的90分钟缩减为7分钟，工作效率大大提高。
附图说明
图1为传统的巴氏染色方法的染色效果图；
图2为经本发明巴氏染色液按本发明方法操作的染色效果图；
经实验表明：本发明与传统方法所获得的染色效果相一致。
具体实施方式
本实施例巴氏染色液是由细胞核染色液和细胞浆染色液构成；
细胞核染色液的配制：
将0.3g苏木素色精单独溶解于30ml无水乙醇中得苏木素酒精液；将硫酸铝铵6g置于1000ml大烧杯中加蒸馏水700ml，加热至70-80℃，搅拌使其完全溶解，然后加温至90℃，关断热源即加入苏木素酒精液，边加边搅拌，加完之后继续加热至沸即离开热源；再向其中加入0.5g黄色氧化汞粉末，边加边搅拌，继续加热使溶液经目测呈深紫色，立即置于10-30℃的水中进行水浴冷却；冷却到10-30℃后置于塑料桶中，加入体积百分比为1％冰乙酸2ml，经滤纸滤去残渣即得细胞核染色液，避光保存；冰乙酸的加入能稳定苏木素染色团抗拒氧化，使不过染，也减少沉淀形成；
细胞浆染色液的配制：
取0.1g橙黄G6溶于100ml、体积百分比为95％的酒精得橙黄G6酒精液为备用料；
取0.1g亮绿溶于100ml、体积百分比为95％的酒精得亮绿酒精液为备用料；
取0.05g俾仕麦棕溶于100ml、体积百分比为95％的酒精得俾仕麦棕酒精液为备用料；
取0.1g伊红溶于100ml、体积百分比为95％的酒精得伊红酒精液为备用料；
取磷钨酸0.5g为备用料；
所有备用料充分混匀溶解后即为细胞浆染色液。
利用以上过程制备的巴氏染色液的快速染色方法是在22℃的室温环境下按如下步骤进行操作：
a、固定：将未干的宫颈分泌物涂片置体积百分比为95％的酒精中，15-30分钟时取出得固定涂片；
b、染核：将步骤a所得固定涂片置于细胞核染色液中染色2分钟，取出后用蒸馏水冲净得染核涂片，立即进行下一步骤的染浆；
c、染浆：将染核涂片置于细胞浆染色液中，2分钟取出，先后在两缸体积百分比为95％的酒精液中洗涤至无细胞浆染色液附着即得染浆涂片，染浆涂片即可用于进行镜检；若需要长期保存则继续进行后续步骤d的封片；
d、封片：将步骤c所得染浆涂片置于无水酒精中洗涤后，再先后置于两缸AR级二甲苯洗涤透明涂片；用阿拉伯树胶封固透明涂片，被封固的透明涂片在10-30℃避光条件下保存。
本实施例中各原料来源：
橙黄G6，型号为：Q/GHXC 6118-2004；生产厂家：上海展云化工有限公司；电话：021-56772368；网址：www.shzychem.com；
亮绿，型号为：Q/CYDZ 2516-2005；生产厂家：国药集团化学试剂有限公司；地址：上海市宁波路52号；
俾仕麦棕，符合：企标；生产厂家：上海展云化工有限公司；电话：021-56772368；网址：www.shzychem.com；
伊红，符合：企标；生产厂家：上海展云化工有限公司；电话：021-56772368，网址：www.shzychem.com；
阿拉伯树胶，生产厂家：泰安利达胶业有限公司；地址：山东省泰安市热电厂南，电话：0538-8297288。
Claims (2)
1.巴氏染色液，其特征是由细胞核染色液和细胞浆染色液构成；
所述细胞核染色液的配制方法为：
将0.3g苏木素色精单独溶解于30ml无水乙醇中得苏木素酒精液；将硫酸铝铵6g置于1000ml大烧杯中加蒸馏水700ml，加热至70-80℃，搅拌使其完全溶解，然后加温至90℃，关断热源即加入苏木素酒精液，边加边搅拌，加完之后继续加热至沸即离开热源；再向其中加入0.5g黄色氧化汞粉末，边加边搅拌，继续加热使溶液呈深紫色，立即置于10-30℃的水中进行水浴冷却；冷却到10-30℃后置于塑料桶中，加入体积浓度为1%冰乙酸2ml，经滤纸滤去残渣即得细胞核染色液；
所述细胞浆染色液的配制方法：
取0.1g橙黄G6溶于100ml、95%酒精得橙黄G6酒精液为备用料；
取0.1g亮绿溶于100ml、95%酒精得亮绿酒精液为备用料；
取0.05g俾仕麦棕溶于100ml、95%酒精得俾仕麦棕酒精液为备用料；
取0.1g伊红溶于100ml、95%酒精得伊红酒精液为备用料；
取磷钨酸0.5g为备用料；
所有备用料充分混匀溶解后即为细胞浆染色液。
2.一种使用权利要求1所述巴氏染色液的快速染色方法，其特征是在22℃的室温环境下按如下步骤进行操作：
a、固定：将未干的宫颈分泌物涂片置95%酒精中，15－30分钟时取出得固定涂片；
b、染核：将步骤a所得固定涂片置于细胞核染色液中染色2分钟，取出后用蒸馏水冲净得染核涂片，立即进行下一步骤的染浆；
c、染浆：将染核涂片置于细胞浆染色液中，2分钟取出，在95%酒精液中洗涤至无细胞浆染色液附着即得染浆涂片，所述染浆涂片即可用于进行镜检；若需要长期保存则继续进行后续步骤d的封片；
d、封片：将步骤c所得染浆涂片置于无水酒精中洗涤后，再置于AR级二甲苯洗涤透明涂片；用阿拉伯树胶封固透明涂片，所述被封固的透明涂片在10-30℃避光条件下保存。
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| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20130612 |