CN108507850A - 一种细胞学dna倍体染色试剂盒及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及到一种细胞学DNA倍体染色试剂盒及应用，具体地涉及一种含有DNA片段封固液、DNA水解液、DNA倍体染色液的染色试剂盒及应用。所述的染色液能够满足细胞学DNA检测样本的固定、水解与核染色，使用方法简便，染色效果稳定均匀，背景干净清晰，数字化扫描仪可以准确识别；染色液常温下有效期一年以上。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种细胞学DNA倍体染色盒及应用。
背景技术
分析细胞的细胞周期和 DNA倍体已经日益广泛地应用于临床，为肿瘤的诊断、疗效评价和预后预测提供了重要的依据，在科研中也越来越多地用于细胞动力学，细胞调亡观察等方面。DNA 倍体分析结合临床病理的形态学诊断，对一些恶性肿瘤进行早期诊断，跟踪随访和早期治疗，提高肿瘤的治愈率和生存率。尤其对细胞抽提物、体液、腺体分泌物、组织的脱落细胞的分析，意义非常重要。DNA 倍体分析技术在膀胱癌、前列腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、皮肤黑色素瘤的早期诊断和预后方面具有重要价值，而随着时间变化的增殖状态测量和分析反映了肿瘤的生长速度和侵袭性。肿瘤细胞有异常的 DNA含量，通过对异常DNA倍体细胞的检测，可以知道样本是否存在突变的细胞与突变细胞数量。
传统的显微目视技术过多的依靠医务人员的经验，眼睛观察检测，容易因为视觉疲劳对异常细胞视而不见，导致漏诊误诊，检测结果的主观性大，难于量化、标准化。计算机图像技术发展，把显微图像数字化，使用自动化扫描仪对样本实现连续图像采集，对图像分析，可快速采集到图像几何学、形态学、光学等上百种参数。检测结果准确性，特异性与敏感性均提高，肿瘤早期诊断中有非常明显的优势。
鉴于以上分析，细胞学DNA倍体染色液的质量与应用非常重要。细胞学常用的是巴氏染色，细胞核使用苏木色精着蓝紫色，但是苏木色精使细胞核内的骨架蛋白也着色，无法精准的计算出DNA倍体的含量；以往采用苏木精染色，虽然可以观察到胞质中嗜碱性颗粒,但结构不清晰，胞核、核仁分界不清；用硫堇替代苏木精染色，细胞核的结构特征显示的更为清晰，并且可以量化精准分析，检测的敏感度与特异性显著提高。
本发明旨在提供一种细胞学DNA倍体染色盒及应用，利于推广与普及。
发明内容
本发明的目的是提供一种细胞学DNA倍体染色盒及应用，满足细胞学DNA检测样本的固定、水解与核染色，使用方法简便，染色效果稳定均匀，背景干净清晰，数字化扫描仪可以准确识别；染色液常温下有效期一年以上。
上述细胞学DNA倍体染色试剂盒及应用，其特征是含有DNA片段封固液、DNA水解液、DNA倍体染色液。
具体来说，DNA片段封固液，细胞经过固定可防止细胞在染色水解过程中产生游离DNA片段，游离出细胞核影响DNA检测，还可以封闭水解前产生的醛基，减少假阳性；DNA水解液，可分解DNA分子中的嘌呤碱基，酸化水解打开嘌呤-脱氧核糖键，使DNA部门区域重排，露出醛基；DNA倍体染色液，与细胞中的醛基结合为一种醌型化合物，使细胞核DNA着蓝色；不易褪色，保存时间长。
上述细胞学DNA倍体染色试剂盒，其特征在于每升DNA片段封固液的组分为：醇200-900ml，甲醛50-300ml，酸10-150ml。其中，醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇中至少一种；酸为盐酸、硫酸、乙酸中至少一种。
上述细胞学DNA倍体染色试剂盒，其特征在于每升DNA水解液的组分为：酸100-850ml，缓冲液100-500ml，余量为纯化水。其中，缓冲液为Tris盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液中至少一种；酸为盐酸、硫酸、乙酸中至少一种。
上述细胞学DNA倍体染色试剂盒，其特征在于每升DNA倍体染色液的组分为：硫堇0.01-10g，酸0.05-10ml，媒染剂0.01-10g，余量为纯化水。其中，酸为盐酸、硫酸、乙酸中至少一种；媒染剂为硫酸铝钾、亚硫酸氢钠、铁明矾中至少一种。
上述细胞学DNA倍体染色试剂盒应用方法步骤如下：
1）细胞学制片完成后，湿固定15-30分钟；
2）流水清洗0.3-1.5分钟，使用所述DNA片段封固液进行细胞固定30-50分钟；
3）流水清洗0.3-1.5分钟，使用所述DNA水解液进行酸化水解20-45分钟；
4）流水清洗0.3-1.5分钟，使用所述DNA倍体染色液进行细胞核着色30-50分钟；
5）流水清洗30.3-1.5分钟，脱水剂脱水1-2分钟，封片；
6）镜下检测判读结果，通过数字扫描仪扫描分析检测细胞形态与细胞核内DNA含量的变化。
附图说明
附图1：经过本发明的染色液染色后，镜检效果异常细胞。
附图2：经过本发明的染色液染色后，镜检效果正常细胞。
附图3：本发明实施例一的镜检效果。
附图4：本发明实施例二的镜检效果。
本发明提供的染色试剂盒含有DNA片段封固液、DNA水解液、DNA倍体染色液，可实现细胞学DNA检测样本的固定、水解与核染色，使用方法简便，染色效果稳定均匀，背景干净清晰，扫描仪识别度高。
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例，但是发明保护的范围不仅仅限于这些实施例，在发明基础上构思的或者等同替代的均在本发明的保护范围内。
实施例一：
本实施例中的染色试剂盒，每升DNA片段封固液的组分为：甲醇750ml，甲醛200ml，乙酸50ml；每升DNA水解液的组分为：盐酸450ml，Tris盐缓冲液100ml，纯化水450ml；每升DNA倍体染色液的组分为：硫堇0.9g，稀硫酸2ml，亚硫酸氢钠粉末4g，纯化水998ml。
本实施例中染色液使用流程如下：
1）细胞学制片完成后，湿固定15分钟；
2）流水清洗30秒，使用所述DNA片段封固液进行细胞固定30分钟；
3）流水清洗30秒，使用所述DNA水解液进行酸化水解45分钟；
4）流水清洗30秒，使用所述DNA倍体染色液进行细胞核着色50分钟；
5）流水清洗30秒，脱水剂脱水1分钟，封片；
6）镜下检测判读结果，通过数字扫描仪扫描分析检测细胞形态与细胞核内DNA含量的变化。
实施效果：细胞核蓝紫色，结构清晰，胞浆透明，背景干净，数字扫描仪识别全部细胞，分析正常，结果准确。
实施例二：
本实施例中的染色试剂盒，每升DNA片段封固液的组分为：甲醇600ml，甲醛300ml，乙酸100ml；每升DNA水解液的组分为：硫酸500ml，磷酸盐缓冲液300ml，纯化水200ml；每升DNA倍体染色液的组分为：硫堇1.5g，盐酸5ml，硫酸铝钾2g，纯化水995ml。
本实施例中染色液使用流程如下：
1）细胞学制片完成后，湿固定20分钟；
2）流水清洗30秒，使用所述DNA片段封固液进行细胞固定40分钟；
3）流水清洗30秒，使用所述DNA水解液进行酸化水解35分钟；
4）流水清洗30秒，使用所述DNA倍体染色液进行细胞核着色45分钟；
5）流水清洗30秒，脱水剂脱水2分钟，封片；
6）镜下检测判读结果，通过数字扫描仪扫描分析检测细胞形态与细胞核内DNA含量的变化。
实施效果：细胞核蓝紫色，结构清晰，胞浆透明，背景干净，数字扫描仪识别全部细胞，分析正常，结果准确。
Claims (8)
1.一种细胞学DNA倍体染色试剂盒及应用，其特征是含有DNA片段封固液、DNA水解液、DNA倍体染色液。
2.根据权利要求1所述的细胞学DNA倍体染色试剂盒，其特征在于含有DNA片段封固液，其组分为醇200-900ml，甲醛50-300ml，酸10-150ml。
3.根据权利要求2所述的DNA片段封固液，其特征在于所述的醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇中至少一种；所述的酸为盐酸、硫酸、乙酸中至少一种。
4.根据权利要求1所述的细胞学DNA倍体染色试剂盒，其特征在于含有DNA水解液，组分为：酸100-850ml，缓冲液100-500ml，余量为纯化水。
5.根据权利要求4所述的DNA水解液，其特征在于所述的缓冲液为Tris盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液中至少一种；所述的酸为盐酸、硫酸、乙酸中至少一种。
6.根据权利要求1所述的细胞学DNA倍体染色试剂盒，其特征在于含有DNA倍体染色液，其每升DNA倍体染色液的组分为：硫堇0.01-10g，酸0.05-10ml，媒染剂0.01-10g，余量为纯化水。
7.根据权利要求6所述的DNA倍体染色液，其特征在于所述的酸为盐酸、硫酸、乙酸中至少一种；所述的媒染剂为硫酸铝钾、亚硫酸氢钠、铁明矾中至少一种。
8.权利要求1所述细胞学DNA倍体染色试剂盒应用方法如下：
1）细胞学制片完成后，湿固定15-30分钟；
2）流水清洗0.3-1.5分钟，使用所述DNA片段封固液进行细胞固定30-50分钟；
3）流水清洗0.3-1.5分钟，使用所述DNA水解液进行酸化水解20-45分钟；
4）流水清洗0.3-1.5分钟，使用所述DNA倍体染色液进行细胞核着色30-50分钟；
5）流水清洗0.3-1.5分钟，脱水剂脱水1-2分钟，封片；
6）镜下检测判读结果，通过数字扫描仪扫描分析检测细胞形态与细胞核内DNA含量的变化。
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|---|---|---|---|---|
| CN109797188A (zh) * | 2019-01-11 | 2019-05-24 | 深圳市双科生物科技有限公司 | 一种细胞检测方法 |
| CN112033783A (zh) * | 2020-08-11 | 2020-12-04 | 长沙迪安医学检验所有限公司 | 一种dna倍体染色液及制备方法和染色方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20180907 |
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| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |