CN109668771B - 一种液基脱落细胞染色液及其染色方法 - Google Patents
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- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
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Abstract
本发明公开液基脱落细胞染色液，由细胞浆染色液R1和染色液R2组成，所述细胞浆染色液R1由A1溶液、A2溶液和A3溶液混合而成，A1溶液为0.5~1.5g碱性染料溶解于10~20mL无水乙醇得到的混合液；A2溶液为0.1~0.5g灿烂甲酚蓝与80~100mL水配制的混合液；A3溶液为1~3g碘盐与10~15mL水配制得盐溶液；染色液R2为双氧水与生理盐水的混合液，其中双氧水的浓度为3~5%，双氧水与生理盐水的混合体积比为1：3~5。通过科学配比，能有效显示细胞核结构清晰，分色明显，胞浆受色鲜艳，还可将不同细胞以不同颜色区分开来，如操作简单快捷，大大节省了细胞染色时间，提高检测效率。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，更具体地，涉及一种液基脱落细胞染色液及其染色方法。
背景技术
液基薄层细胞检测常规巴氏涂片由于血液、粘液、炎症等因素影响，常使样本模糊，存在检测误差。在临床实验中，液基测试白带或子宫颈细胞样本中的有形成分的数量，可以明显提高妇儿科阴道炎症疾病（细菌性阴道炎、霉菌性阴道炎、滴虫性阴道炎和非特异性阴道炎）类别的辅助诊断或阴道手术后炎症的预防、癌变细胞的检测率，并相应减少需要重复做巴氏测试的次数，从而降低了患者因被重做测试而引起的不必要的担心。常规巴氏涂片误差的减少势必将妇儿科阴道炎症疾病类别的辅助诊断或阴道手术后炎症的预防或前期癌变的检测工作提高到一个新的阶段，并使那些妇儿科阴道炎症疾病类别的辅助诊断、早期癌变患者得到及早的、更有效的治疗。
胞浆染色在巴氏细胞染色液方法中亦称为OG—EA染色，它包括橘黄G（OG）和EA两部分染色。由于橘黄G是一种小分子染料，能够很快地作用于胞浆，一般染色时间不宜过长，通常1~2min。对于白带、宫颈、阴道上皮中非正常角化细胞和角化型鳞癌细胞的胞浆中都可以出现鲜艳的橘黄色。封固制片对于避免空气干燥的影响，一般使用24mm×50mm或24mm×60mm的盖玻片，用二甲苯调配的中性树胶进行封固。
传统的脱落细胞染色液配制复杂，染色手续繁杂，时间较长且难以掌握。一般都需要将脱落细胞转移至玻片上，经酒精等固定后才能进行染色，且在这个操作过程中容易造成细胞丢失或细胞形态改变，影响诊断结果，因而检验技术人员普遍感到操作难度大。
发明内容
本发明针对上述不足，提供一种液基脱落细胞染色液，该染色液针对液基脱落细胞的性质，将细胞浆染色液R1和染色液R2组合，通过科学配比，能有效显示细胞核结构清晰，分色明显，胞浆受色鲜艳，还可将不同细胞以不同颜色区分开来，如将上皮细胞胞浆染成桃红色，胞核染成深红色，炎性细胞染成棕红色，真菌孢子及菌丝着浅棕色或不着色，滴虫不着色；操作简单快捷，大大节省了细胞染色时间，提高检测效率。
本发明的目的通过以下技术予以实现：
提供一种液基脱落细胞染色液，由细胞浆染色液R1和染色液R2组成，所述细胞浆染色液R1由A1溶液、A2溶液和A3溶液混合而成，所述A1溶液为0.5~1.5g碱性染料溶解于10~20mL无水乙醇得到的混合液；所述A2溶液为0.1~0.5g灿烂甲酚蓝与80~100mL水配制的混合液；所述A3溶液为1~3g碘盐与10~15mL水配制得盐溶液；
所述染色液R2为双氧水与生理盐水的混合液，其中双氧水的浓度为3~5%，所述双氧水与生理盐水的混合体积比为1：3~5。
本发明的液基脱落细胞染色液的原料选择依据为：由于细胞核的主要成分是脱氧核糖核酸，其pH1.6~2.0，当pH大于2.0时DNA带负电，能与带正电的染料阳离子结合。阳离子的灿烂甲酚蓝是染核的染料，与DNA结合。碱性染料具有很强的渗透性，且其亲合力大，能快速透过细胞膜将细胞染成红色。
细胞浆染色液R1由A1溶液、A2溶液和A3溶液混合而成，此三种溶液的作用是针对不同的细胞，可以使其着不同的颜色，如果只使用一种或两种，其染色效果不能达到预期。
进一步地，所述碱性染料为美兰、甲基紫、草酸铵结晶紫、醋酸洋红、碱性复红、碱性品红的任意一种。本发明的碱性染料优选为碱性品红。
进一步地，所述碘盐为碘化钠和碘化钾的至少一种。
本发明的另一目的在于公开上述液基脱落细胞染色液的染色方法，包括以下步骤：
S1. 脱落细胞悬液的制备：加入适量生理盐水至获取的脱落细胞中，制成细胞悬液；
S2.染色：取制备的脱落细胞生理盐水悬液1mL，加入30~40uL细胞浆染色液R1，混匀；5~10S后，滴加R2液30~40uL，混匀；静止10~15S后，染色完成；
S3. 检测：将染色后的细胞悬液均匀涂覆在涂片上，进行检测。
进一步地，步骤S1所述脱落细胞悬液是将脱落细胞加入0.5~1.5mL生理盐水，得到浓度为0.05~0.15g/mL的细胞悬浊液。
本发明的液基脱落细胞染色液配制简单、染色过程时间短，易于技术人员准确操作。
本明的目的还在于公开上述液基脱落细胞染色液的应用，用于体外诊断观察染色后的上皮细胞、胞浆、炎性细发胞和真菌孢子及菌丝至少一种。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明的液基脱落细胞染色液可将炎性细胞与小圆上皮细胞、底层上皮细胞、小个的癌细胞和菌丝等比较难区分的细胞染成不同颜色，大大增加了辨识度，减少了诊断医生的工作难度。
与传统脱落细胞染色最大的区别是染色在液相下完成，不需要干燥固定。
本发明液基脱落细胞染色液制备方法简单、成本低。
本发明染色方法简单可靠，可以从传统的90min缩减为15~20s，工作效率大大提高。具有巨大的经济效益，易于推广。
附图说明
图1为实施例1所述液基脱落细胞染色液和染色方法操作的上皮细胞和白细胞染色效果图。
图2为实施例1所述液基脱落细胞染色液和染色方法操作的滴虫和白细胞染色效果图。
图3为实施例1所述液基脱落细胞染色液按和染色方法操作的菌丝染色效果图。
图4为实施例1所述液基脱落细胞染色液按和染色方法操作的上皮细胞和孢子染色效果图。
图5为实施例1所述液基脱落细胞染色液按和染色方法操作的上线索细胞染色效果图。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。除非特别说明，本实施例所用的原料和设备均为本技术领域常规市购的原料和设备。
本实施例的液基脱落细胞染色液，由细胞浆染色液R1和染色液R2组成，细胞浆染色液R1由A1溶液、A2溶液和A3溶液混合而成，其中，A1溶液为0.5~1.5g碱性染料溶解于10~20mL无水乙醇得到的混合液；A2溶液为0.1~0.5g灿烂甲酚蓝与80~100mL水配制的混合液；A3溶液为1~3g碘盐与10~15mL水配制得盐溶液；染色液R2为双氧水与生理盐水的混合液，其中双氧水的浓度为3~5%，双氧水与生理盐水的混合体积比为1：3~5。
碱性染料为美兰、甲基紫、草酸铵结晶紫、醋酸洋红、碱性复红、碱性品红的任意一种。碘盐为碘化钠和碘化钾的至少一种。
其具体实施方法如下。
实施例1
本实施例的液基脱落细胞染色液，由细胞浆染色液R1和染色液R2组成，细胞浆染色液R1由A1溶液、A2溶液和A3溶液混合而成，A1溶液为0.5g碱性品红溶解于10mL无水乙醇得到的混合液；A2溶液为0.1g灿烂甲酚蓝与100mL水配制的混合液；A3溶液为3g碘化钾与10mL水配制得盐溶液；
染色液R2为双氧水与生理盐水的混合液，其中双氧水的浓度为3%，双氧水与生理盐水的混合体积比为1：3。
本液基脱落细胞染色液的染色方法，包括以下步骤：
S1. 脱落细胞悬液的制备：加入适量生理盐水至获取的脱落细胞中，制成细胞悬液；具体为脱落细胞悬液是将脱落细胞加入0.5mL生理盐水，得到浓度为0.05g/mL的细胞悬浊液。
S2. 染色：取制备的脱落细胞生理盐水悬液1mL，加入40uL细胞浆染色液R1，混匀；5S后，滴加R2液40uL，混匀；静止10S后，染色完成；
S3. 检测：将染色后的细胞悬液均匀涂覆在涂片上，进行检测。
实施例2
本实施例的液基脱落细胞染色液，由细胞浆染色液R1和染色液R2组成，细胞浆染色液R1由A1溶液、A2溶液和A3溶液混合而成，A1溶液为1.5g碱性复红溶解于20mL无水乙醇得到的混合液；A2溶液为0.3g灿烂甲酚蓝与80mL水配制的混合液；A3溶液为1g碘化钾与15mL水配制得盐溶液；
染色液R2为双氧水与生理盐水的混合液，其中双氧水的浓度为5%，双氧水与生理盐水的混合体积比为1：4。
本液基脱落细胞染色液的染色方法，包括以下步骤：
S1. 脱落细胞悬液的制备：加入适量生理盐水至获取的脱落细胞中，制成细胞悬液；具体为脱落细胞悬液是将脱落细胞加入1.0mL生理盐水，得到浓度为0.08g/mL的细胞悬浊液。
S2. 染色：取制备的脱落细胞生理盐水悬液1mL，加入30uL细胞浆染色液R1，混匀；10S后，滴加R2液30uL，混匀；静止15S后，染色完成；
S3. 检测：将染色后的细胞悬液均匀涂覆在涂片上，进行检测。
实施例3
本实施例的液基脱落细胞染色液，由细胞浆染色液R1和染色液R2组成，细胞浆染色液R1由A1溶液、A2溶液和A3溶液混合而成，A1溶液为1.2g碱性复红溶解于15mL无水乙醇得到的混合液；A2溶液为0.5g灿烂甲酚蓝与90mL水配制的混合液；A3溶液为2g碘化钠与12mL水配制得盐溶液；
染色液R2为双氧水与生理盐水的混合液，其中双氧水的浓度为4%，双氧水与生理盐水的混合体积比为1：5。
本液基脱落细胞染色液的染色方法，包括以下步骤：
S1. 脱落细胞悬液的制备：加入适量生理盐水至获取的脱落细胞中，制成细胞悬液；具体为脱落细胞悬液是将脱落细胞加入1.5mL生理盐水，得到浓度为0.15g/mL的细胞悬浊液。
S2. 染色：取制备的脱落细胞生理盐水悬液1mL，加入30uL细胞浆染色液R1，混匀；10S后，滴加R2液30uL，混匀；静止15S后，染色完成；
S3. 检测：将染色后的细胞悬液均匀涂覆在涂片上，进行检测。
对实施例1~实施例3的液基脱落细胞染色液按和染色方法操作进行脱落细胞染色，图1~图5为实施例1染色后的细胞，经实验证明能将脱落细胞中的多种细胞成分，很好的用颜色区分开来。
Claims (4)
1.一种液基脱落细胞染色液，其特征在于，由细胞浆染色液R1和染色液R2组成，所述细胞浆染色液R1由A1溶液、A2溶液和A3溶液混合而成，所述A1溶液为0.5～1.5g碱性染料溶解于10～20mL无水乙醇得到的混合液；所述A2溶液为0.1～0.5g灿烂甲酚蓝与80～100mL水配制的混合液；所述A3溶液为1～3g碘盐与10～15mL水配制得盐溶液；
所述染色液R2为双氧水与生理盐水的混合液，其中双氧水的浓度为3～5％，所述双氧水与生理盐水的混合体积比为1：3～5；
所述碱性染料为美兰、甲基紫、草酸铵结晶紫、醋酸洋红、碱性复红、碱性品红的任意一种；
所述碘盐为碘化钠和碘化钾的至少一种。
2.根据权利要求1所述液基脱落细胞染色液的染色方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.脱落细胞悬液的制备：加入适量生理盐水至获取的脱落细胞中，制成细胞悬液；
S2.染色：取制备的脱落细胞生理盐水悬液1mL，加入30～40uL细胞浆染色液R1，混匀；5～10S后，滴加R2液30～40uL，混匀；静止10～15S后，染色完成；
S3.检测：将染色后的细胞悬液均匀涂覆在涂片上，进行检测。
3.根据权利要求2所述液基脱落细胞染色液的染色方法，其特征在于，步骤S1所述脱落细胞悬液是将脱落细胞加入0.5～1.5mL生理盐水，得到浓度为0.05～0.15g/mL的细胞悬浊液。
4.一种如权利要求1所述液基脱落细胞染色液的应用，其特征在于，用于体外诊断观察染色后的上皮细胞、胞浆、炎性细胞和真菌包子及菌丝至少一种。
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