CN114563253A - 一种妇科荧光染色液及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种妇科荧光染色液及其制备方法和应用,该妇科荧光染色液包括吖啶橙、氯化钠、EDTA‑Na、磷酸氢二钠、枸橼酸,其中的成份可以和不同的细胞物质进行结合进行染色,从而在激发光的作用下,显示出不同颜色的荧光,染色后成分清晰,不同成分呈现不同颜色易于识别区分。本发明的一种妇科荧光染色液的制备方法,方法简单,可以随时配置使用,也可以配置后储存使用。该妇科荧光染色液的使用方法,主要显示DNA、RNA二种核酸,从而使得发光明显。使用方法简单,滴加妇科荧光染色液后即可以通过荧光显微镜进行观察检测,克服了传统盐水涂片法的缺点,提高了检出率。
Description
技术领域
本发明属于医疗化验用品技术领域,涉及一种妇科荧光染色液及其制备方法和应用。
背景技术
阴道分泌物分析是妇科检查的常规项目,对于女性生殖系统炎症、肿瘤等疾病的诊断,具有重要临床意义,是临床诊断阴道疾病的重要依据。
阴道分泌物检测主要对白细胞、上皮细胞、线索细胞、真菌、细菌、霉菌、滴虫进行观察,判断属于细菌性阴道病、念珠菌性阴道病、滴虫性阴道病还是需氧菌性阴道病。传统的检测方法有湿片显微镜检查和革兰氏染色法。但是这两种方法都具有较大的局限性,湿片显微镜检测法对细菌形态较小的线索细胞常不能准确观测细菌形态,观测真菌芽生孢子效果不佳,滴虫失活或死亡时形态与白细胞几乎一致难以分辨;革兰氏染色法的染色需要多个步骤、花费时间长,操作繁杂,结果判读时背景干扰严重。
阴道分泌物荧光染色是一种新的方法,克服了传统盐水涂片法的诸多缺点,逐渐被实验室广泛使用。其优点主要体现在染色后成分清晰,不同成分呈现不同颜色易于识别区分;由妇产科医生直接取标本涂于玻片上送检,克服了盐水涂片标本运输过程中容易被打翻污染的问题,同时克服了湿片显微镜检查中滴虫在冬季温度低时活动差不宜观察,死亡后很难与膨大的白细胞区别的缺点,能准确区分乳酸杆菌及链球菌和杂菌,大大减少了漏检率,提高了检测结果的准确率;
发明内容
为了克服现有技术的不足,本发明的第一个目的在于提供一种妇科荧光染色液,该妇科荧光染色液可对细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光,能观察到阴道分泌物中的自带病原菌,原虫,真菌及混合感染,提高病原菌检出率;使得检测不受滴虫失活的影响,降低漏诊率。
本发明的第二个目的是为了提供一种上述妇科荧光染色液的制备方法。
本发明的第三个目的是为了提供一种上述妇科荧光染色液的应用。
实现本发明的目的之一可以通过采取如下技术方案达到:
一种妇科荧光染色液,其特征在于,由以下组分组成:吖啶橙、氯化钠、EDTA-Na、pH调节剂、水。
阴道分泌物荧光染色法是采用最经典的极灵敏的荧光染料,可对细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光。荧光燃料与双链DNA的结合方式是嵌入双链之间,而与单链DNA和RNA则由静电吸引堆积在磷酸根上。在蓝光激发下,细胞核发亮绿色荧光,核仁和胞质RNA发橘红色荧光;荧光染料的阳离子也可以结合在蛋白质、多糖和膜上而发光,但细胞固定阻抑了这种结合,从而主要显示DNA、RNA 二种核酸。
进一步的,妇科荧光染色液中吖啶橙的质量分数为0.01-0.2%,优选的,吖啶橙的质量分数为0.06%。
进一步的,所述pH调节剂为磷酸氢二钠和枸橼酸,所述妇科荧光染色液的pH值为3-4.6,优选的,pH值为3.8。
进一步的,EDTA-Na在所述妇科荧光染色液中的浓度为 0.001mol/L,NaCl在所述妇科荧光染色液中的浓度为0.1454mol/L。
实现本发明的目的之二可以通过采取如下技术方案达到:
一种妇科荧光染色液,其特征在于,包括以下步骤:
步骤S1、取吖啶橙溶于水中得到吖啶橙原液;
步骤S2、将吖啶橙原液,用含有氯化钠、EDTA-Na的磷酸氢二钠 -枸橼酸缓冲溶液B稀释至0.01-0.2%,即得到所述妇科荧光染色液。
进一步的,缓冲溶液的制备方法为:取NaCl和EDTA-Na溶于水中得到溶液A,将磷酸氢二钠和枸橼酸分别与溶液A配成磷酸氢二钠缓冲液和枸橼酸缓冲液,将磷酸氢二钠缓冲液和枸橼酸缓冲液混合,调节pH得到缓冲溶液B;
进一步的,磷酸氢二钠缓冲液的浓度为0.2mol/L;枸橼酸缓冲液的浓度为0.1mol/L。
进一步的,步骤S1中,吖啶橙原液的浓度为1mg/ml。
实现本发明的目的之三可以通过采取如下技术方案达到:
一种上述妇科荧光染色液的应用,取所述妇科荧光染色液滴加在载玻片上涂有的标本上,加盖玻片,荧光显微镜下观察;
进一步的,在染色之前需要对标本进行预处理,将所述标本涂在载玻片上,并经80-90℃加热烘干1-3min至标本固定。
经过本发明妇科荧光染色液进行染色的标本,在荧光显微镜下观察,上皮细胞胞浆呈绿色,胞核呈亮黄色;线索细胞为上皮细胞表面覆盖黄色加德纳菌;白细胞核呈亮绿色;细菌长杆菌呈红色;霉菌孢子及菌丝呈红色,滴虫呈红色胞核呈三点状;真菌呈大小不等的圆或椭圆形红色颗粒,因此可以根据形状和发光颜色判断区分病原菌的种类,快速,准确区分BV细菌性阴道病、TV阴道毛滴虫、VVC,避免漏检。
相比现有技术,本发明的有益效果在于:
1、本发明一种妇科荧光染色液,其中的成份可以和不同的细胞物质进行结合从而实现染色,从而在激发光的作用下,显示出不同颜色的荧光,染色后成分清晰,不同成分呈现不同颜色易于识别区分。
2、本发明的一种妇科荧光染色液的制备方法,方法简单,可以随时配置使用,也可以配置后储存使用。
3、该妇科荧光染色液的应用,对标本细胞固定阻抑了荧光燃料和蛋白质、多糖和膜上而发光,使得主要显示DNA、RNA二种核酸。从而使得发光明显。使用方法简单,滴加妇科荧光染色液后即可以通过荧光显微镜进行观察检测,克服了传统盐水涂片法的缺点,提高了检出率。
附图说明
图1为经实施例1的妇科荧光染色液染色后上皮细胞、细菌长杆菌和真菌荧光显微镜图;
图2为经实施例1的妇科荧光染色液染色后线索细胞和白细胞荧光显微镜图;
图3为经实施例1的妇科荧光染色液染色后白细胞荧光显微镜图;
图4为经实施例1的妇科荧光染色液染色后线索细胞、白细胞、真菌荧光显微镜图;
图5为经实施例1的妇科荧光染色液染色后真菌荧光显微镜图。
具体实施方式
下面,结合附图以及具体实施方式,对本发明做进一步描述:
阴道分泌物荧光染色法中染色后能在荧光显微镜下客观清晰观察到不同颜色的发光,能观察到阴道分泌物中的自带病原菌,原虫,真菌及混合感染,提高了病原菌,特别是加德纳菌、其它杂菌及混合感染的检出率。并可以对念珠菌进行分型,对阴道假丝酵母菌感染 (VVC)的用药具有指导意义。操作简单;测定快速,染色速度30秒;准确区分BV细菌性阴道病、TV阴道毛滴虫、VVC;临床符合率高。清晰的提供细菌、真菌、滴虫、线索细胞依据;对混合感染区分比湿片法更准确,判断孢子更有优势;不受滴虫失活的影响,降低漏诊率;比酶法和化学法的临床符合率更高;比革兰氏染色法操作更简单、快速。
实施例1:
本发明提供一种妇科荧光染色液,由以下组分组成,吖啶橙、氯化钠、EDTA-Na、磷酸氢二钠、枸橼酸、水,其中吖啶橙的质量分数为0.06%,EDTA-Na的浓度为0.001mol/L,NaCl的浓度为0.1454mol/L,0.2mol/L的磷酸氢二钠和0.1mol/L的枸橼酸缓冲液调节妇科荧光染色液的pH为3.8。
配置方法包括以下步骤:
1.取8.5g NaCl和0.37g EDTA-Na溶于1L水制成溶液A,用溶液A分别配置:0.2mol/L的磷酸氢二钠和0.1mol/L枸橼酸缓冲液, 0.2mol/L的磷酸氢二钠和0.1mol/L枸橼酸缓冲液混合调pH至3.8 得到溶液B;
2.取1g吖啶橙溶于1L水中得到1mg/ml吖啶橙原液;
3.取步骤2制备的1mg/ml吖啶橙原液,稀释于1L步骤1制备的 pH3.8的溶液B中,使吖啶橙质量分数为0.06%,即得到吖啶橙质量分数为0.06%的pH为3.8的荧光染色应用液。
实施例2:
本发明提供一种妇科荧光染色液,由以下组分组成,吖啶橙、氯化钠、EDTA-Na、磷酸氢二钠、枸橼酸、水,其中吖啶橙的质量分数为0.01%,EDTA-Na的浓度为0.001mol/L,NaCl的浓度为0.1454mol/L, 0.2mol/L的磷酸氢二钠和0.1mol/L的枸橼酸缓冲液调节妇科荧光染色液的pH为3。
配置方法包括以下步骤:
1.取8.5g NaCl和0.37g EDTA-Na溶于1L水制成溶液A,用溶液A分别配置:0.2mol/L的磷酸氢二钠和0.1mol/L枸橼酸缓冲液, 0.2mol/L的磷酸氢二钠和0.1mol/L枸橼酸缓冲液混合调pH至3得到溶液B;
2.取1g吖啶橙溶于1L水中得到1mg/ml吖啶橙原液;
3.取步骤2制备的1mg/ml吖啶橙原液,稀释于1L步骤1制备的 pH3的溶液B中,使吖啶橙质量分数为0.01%,即得到吖啶橙质量分数为0.06%的pH为3的荧光染色应用液。
实施例3:
本发明提供一种妇科荧光染色液,由以下组分组成,吖啶橙、氯化钠、EDTA-Na、磷酸氢二钠、枸橼酸、水,其中吖啶橙的质量分数为0.2%,EDTA-Na的浓度为0.001mol/L,NaCl的浓度为0.1454mol/L, 0.2mol/L的磷酸氢二钠和0.1mol/L的枸橼酸缓冲液调节妇科荧光染色液的pH为4.6。
配置方法包括以下步骤:
1.取8.5g NaCl和0.37g EDTA-Na溶于1L水制成溶液A,用溶液A分别配置:0.2mol/L的磷酸氢二钠和0.1mol/L枸橼酸缓冲液, 0.2mol/L的磷酸氢二钠和0.1mol/L枸橼酸缓冲液混合调pH至4.6 得到溶液B;
2.取1g吖啶橙溶于1L水中得到1mg/ml吖啶橙原液;
3.取步骤2制备的1mg/ml吖啶橙原液,稀释于1L步骤1制备的 pH4.6的溶液B中,使吖啶橙质量分数为0.2%,即得到吖啶橙质量分数为0.2%的pH为4.6的荧光染色应用液。
本发明实施例的妇科荧光染色液验证试验
1.设备:荧光显微镜(Motic公司的BA310 E-LED荧光显微镜);恒温烤片机,使用温度控制在80-90℃;
2.操作方法:
采集阴道分泌物后,使用生理盐水浸润的棉拭子将阴道分泌物均匀涂抹在载玻片上,使用恒温烤片机在80-90℃烘烤1-3分钟烤干,将阴道分泌物固定在载玻片上;取实施例1的妇科荧光染色液15μl 滴加到载玻片上的阴道分泌物上,盖上盖玻片,放置在荧光显微镜下进行观察。结果如图1-图5所示。
在荧光显微镜下观察,如图1所示,上皮细胞胞浆呈绿色,胞核呈亮黄色;细菌长杆菌呈红色;如图2或图4所示,线索细胞为上皮细胞表面覆盖黄色加德纳菌;如图2-4所示,白细胞核呈亮绿色;霉菌孢子及菌丝呈红色,滴虫呈红色胞核呈三点状;如图1和图5所示,真菌呈大小不等的圆或椭圆形红色颗粒,因此可以根据形状和发光颜色判断区分病原菌的种类,快速,准确区分BV细菌性阴道病、TV阴道毛滴虫、VVC,避免漏检。
因此综上所述,通过本发明的妇科荧光染色液,可以和不同的细胞物质进行结合从而实现染色,从而在激发光的作用下,显示出不同颜色的荧光,染色后成分清晰,不同成分呈现不同颜色易于识别区分,根据形状和发光颜色判断区分病原菌的种类,快速,准确区分BV细菌性阴道病、TV阴道毛滴虫、VVC,避免漏检。该妇科荧光染色液对标本细胞固定阻抑了荧光燃料和蛋白质、多糖和膜上而发光,使得主要显示DNA、RNA二种核酸。从而使得发光明显。使用方法简单,滴加妇科荧光染色液后即可以通过荧光显微镜进行观察检测,克服了传统盐水涂片法的缺点,提高了检出率。
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式,不能以此来限定本发明保护的范围,本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种妇科荧光染色液,其特征在于,包括以下成分:吖啶橙、氯化钠、EDTA-Na、pH调节剂、水。
2.根据权利要求1所述的一种妇科荧光染色液,其特征在于,所述妇科荧光染色液中吖啶橙的质量分数为0.01-0.2%。
3.根据权利要求1所述的一种妇科荧光染色液,其特征在于,所述pH调节剂为磷酸氢二钠和枸橼酸,所述妇科荧光染色液的pH值为3-4.6。
4.根据权利要求1所述的一种妇科荧光染色液,其特征在于,所述EDTA-Na在所述妇科荧光染色液中的浓度为0.001mol/L,所述NaCl在所述妇科荧光染色液中的浓度为0.1454mol/L。
5.一种权利要求1-4任一项所述的妇科荧光染色液的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤S1、将吖啶橙溶于水中得到吖啶橙原液;
步骤S2、将吖啶橙原液,用含有氯化钠、EDTA-Na的磷酸氢二钠-枸橼酸缓冲溶液稀释至质量分数为0.01-0.2%,即得到所述妇科荧光染色液。
6.根据权利要求5所述的妇科荧光染色液的制备方法,其特征在于,含有氯化钠、EDTA-Na的磷酸氢二钠-枸橼酸缓冲溶液的制备方法为:取NaCl和EDTA-Na溶于水中得到溶液A,将磷酸氢二钠和枸橼酸分别与溶液A配成磷酸氢二钠缓冲液和枸橼酸缓冲液,将磷酸氢二钠缓冲液和枸橼酸缓冲液混合,调节pH得到有氯化钠、EDTA-Na的磷酸氢二钠-枸橼酸缓冲溶液。
7.根据权利要求6所述的妇科荧光染色液的制备方法,其特征在于,磷酸氢二钠缓冲液的浓度为0.2mol/L;枸橼酸缓冲液的浓度为0.1mol/L。
8.根据权利要求5所述的妇科荧光染色液的制备方法,其特征在于,步骤S1中,吖啶橙原液的浓度为1mg/ml。
9.一种权利要求1-4任一项所述的妇科荧光染色液的应用,其特征在于,取所述妇科荧光染色液滴加在载玻片上涂有的标本上,加盖玻片,荧光显微镜下观察。
10.根据权利要求9所述的妇科荧光染色液的应用,其特征在于,所述标本涂在载玻片上,并经80-90℃加热烘干1-3min至标本固定。
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