CN112924432A - 一种血液真菌感染检测试剂盒及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及临床血液显微检测技术领域,本发明提供一种血液真菌感染检测试剂盒,包括检测染液,所述检测染液以水做溶剂,包括以下浓度的组成成分:荧光钙0.005~0.01mmol/L、伊文斯蓝0.0025~0.005mmol/L、氢氧化钾1.78~10.7mmol/L、甘油抗荧光衰变剂10.87~16.3mmol/L、双磷脂酰甘油0.033mmol/L以及抗坏血酸0.057mmol/L。本发明所述的一种血液真菌感染检测试剂盒及其应用中使用的检测染液具有成本较低、配置简单快捷、易储存的优点,能够快速、高灵敏度地检测出血液中真菌感染,具有更高的阳性检测率,解决了现有技术的局限性,而且对血液真菌感染患者诊断具有重要的临床价值。

Description

一种血液真菌感染检测试剂盒及其应用
技术领域
本发明涉及临床血液显微检测技术领域,尤其涉及一种血液真菌感染检测试剂盒及其应用。
背景技术
随着免疫受损人群不断扩大,广谱抗生素的大量应用,侵入性技术的开展,血液真菌感染的发病率持续增加,严重威胁患者的生命安全。其中,高危人群的系统性真菌感染,病程进展迅速,延误诊断会贻误治疗机会,大大增加患者死亡率。因此,早期快速检测血液真菌感染对临床医生正确诊断与及时制定治疗策略具有极为重要的价值。
目前,传统体外培养法是血液真菌感染的常规检测方法。但传统方法耗时长、灵敏度低,仅有20-30%病例能通过血液真菌学培养得到诊断。因此,传统体外培养对外周血真菌感染的早期诊断存在一定的局限性,严重贻误疑似血液真菌感染患者病情的诊断。常规的白光镜检存在漏判、误判等缺陷,高度依赖于检测人员的经验,而常规的体外培养法存在耗时较长,对于培养环境及培养方式又有较高要求,易被污染,不利于血液感染患者的病情诊断以及治疗方案的制定,亟需研发快速、高灵敏度的血液真菌诊断技术。
为此,设计一种血液真菌感染检测试剂盒及其应用,解决以上问题。
发明内容
本发明为克服以上不足,发明针对现有技术不足,研发出一种荧光染色液,血液样本通过本试剂染色后,通过荧光显微镜进行观察即可得出检查结论。本发明产品操作简单,只需一步操作即可完成染色;等待时间较短,染色后即可进行观察;相较于传统的镜检法,敏感性和阳性率更高;相较于HE染色法,结果更清晰,准确,同时能更好的观察真菌在血液内的形态,孢子,出芽或是菌丝发出。临床使用更加快捷,可极大提高诊断效率。
本发明提供一种血液真菌感染检测试剂盒,包括检测染液;
所述检测染液以水做溶剂,包括以下浓度的组成成分:荧光钙0.005~0.01mmol/L、伊文斯蓝0.0025~0.005mmol/L、氢氧化钾1.78~10.7mmol/L、甘油抗荧光衰变剂10.87~16.3mmol/L、双磷脂酰甘油0.033mmol/L以及抗坏血酸0.057mmol/L。
进一步,为了便于长时间保持荧光信号稳定性,优选的,甘油抗荧光衰变剂的浓度为16.3mmol/L。
进一步,为了避免样本中杂质影响检测结果,优选的,氢氧化钾的浓度为10.7mmol/L。
本发明所述的一种血液真菌感染检测试剂盒的使用方法,包括以下步骤:
1)使用移液器取5μl血液待检样本打至载玻片中,另使用移液器将2μl所述检测染液加入其中,混匀后覆盖好盖玻片,制成样本涂片;
2)将样本涂片置于380~410nm激发光的荧光显微镜下观察;
3)结果判定:观察荧光显微镜下视野内是否存在圆形周围亮中央透亮的圆形孢子或长条状带有分节的菌丝,存在证明该血液样本阳性,不存在则证明该血液样本阴性。
进一步,为了保证检测结果的准确性及稳定性,优选的,每次检测的所述样本涂片不少于3张。
本发明的有益效果是:
本发明所述的一种血液真菌感染检测试剂盒及其应用中使用的检测染液具有成本较低、配置简单快捷、易储存的优点,能够快速、高灵敏度地检测出血液中真菌感染,具有更高的阳性检测率,解决了现有技术的局限性,而且对血液真菌感染患者诊断具有重要的临床价值。
具体实施方式
实施例1
一种血液真菌感染检测试剂盒的所述检测染液以水做溶剂,包括以下浓度的组成成分:荧光钙0.005mmol/L、伊文斯蓝0.0025mmol/L、氢氧化钾1.78mmol/L、甘油抗荧光衰变剂10.87mmol/L、双磷脂酰甘油0.033mmol/L以及抗坏血酸0.057mmol/L;
通过本发明提供的所述试剂盒利用本发明提供的所述方法,使用移液器取5μl健康血液样本打至载玻片中,另使用移液器将2μl上述检测染液加入其中,混匀后覆盖好盖玻片,制成3张样本涂片,分别置于380~410nm激发光的荧光显微镜下观察,3张样本涂片均未观察到圆形周围亮中央透亮的圆形孢子或长条状带有分节的菌丝,证明该健康血液样本阴性。
实施例2
一种血液真菌感染检测试剂盒的所述检测染液以水做溶剂,包括以下浓度的组成成分:荧光钙0.01mmol/L、伊文斯蓝0.005mmol/L、氢氧化钾10.7mmol/L、甘油抗荧光衰变剂16.3mmol/L、双磷脂酰甘油0.033mmol/L以及抗坏血酸0.057mmol/L;
通过本发明提供的所述试剂盒利用本发明提供的所述方法,使用移液器取5μl健康血液样本打至载玻片中,另使用移液器将2μl上述检测染液加入其中,混匀后覆盖好盖玻片,制成3张样本涂片,分别置于380~410nm激发光的荧光显微镜下观察,3张样本涂片均未观察到圆形周围亮中央透亮的圆形孢子或长条状带有分节的菌丝,证明该健康血液样本阴性。
实施例3
一种血液真菌感染检测试剂盒的所述检测染液以水做溶剂,包括以下浓度的组成成分:荧光钙0.005mmol/L、伊文斯蓝0.0025mmol/L、氢氧化钾1.78mmol/L、甘油抗荧光衰变剂10.87mmol/L、双磷脂酰甘油0.033mmol/L以及抗坏血酸0.057mmol/L;
将医学真菌实验室真菌保种库白色念珠菌、热带念珠菌复苏,每500μl血液中加入100个孢子,然后,通过本发明提供的所述试剂盒利用本发明提供的所述方法,使用移液器取5μl模拟感染血液样本打至载玻片中,另使用移液器将2μl上述检测染液加入其中,混匀后覆盖好盖玻片,制成3张样本涂片,分别置于380~410nm激发光的荧光显微镜下观察,3张样本涂片均观察到亮蓝白色孢子,证明该模拟感染血液样本阳性。
实施例4
一种血液真菌感染检测试剂盒的所述检测染液以水做溶剂,包括以下浓度的组成成分:荧光钙0.01mmol/L、伊文斯蓝0.005mmol/L、氢氧化钾10.7mmol/L、甘油抗荧光衰变剂16.3mmol/L、双磷脂酰甘油0.033mmol/L以及抗坏血酸0.057mmol/L;
将医学真菌实验室真菌保种库白色念珠菌、热带念珠菌复苏,每500μl血液中加入100个孢子,然后,通过本发明提供的所述试剂盒利用本发明提供的所述方法,使用移液器取5μl模拟感染血液样本打至载玻片中,另使用移液器将2μl上述检测染液加入其中,混匀后覆盖好盖玻片,制成3张样本涂片,分别置于380~410nm激发光的荧光显微镜下观察,3张样本涂片均观察到亮蓝白色孢子,证明该模拟感染血液样本阳性。
实施例5
一种血液真菌感染检测试剂盒的所述检测染液以水做溶剂,包括以下浓度的组成成分:荧光钙0.005mmol/L、伊文斯蓝0.0025mmol/L、氢氧化钾1.78mmol/L、甘油抗荧光衰变剂10.87mmol/L、双磷脂酰甘油0.033mmol/L以及抗坏血酸0.057mmol/L;
将医学真菌实验室真菌保种库黄曲霉复苏,洗脱部分孢子,计数100个孢子加入500μl血液中,然后,通过本发明提供的所述试剂盒利用本发明提供的所述方法,使用移液器取5μl模拟感染血液样本打至载玻片中,另使用移液器将2μl检测染液加入其中,混匀后覆盖好盖玻片,制成3张样本涂片,分别置于380~410nm激发光的荧光显微镜下观察,3张样本涂片均观察到亮蓝白色孢子,证明该模拟感染血液样本阳性。
实施例6
一种血液真菌感染检测试剂盒的所述检测染液以水做溶剂,包括以下浓度的组成成分:荧光钙0.01mmol/L、伊文斯蓝0.005mmol/L、氢氧化钾10.7mmol/L、甘油抗荧光衰变剂16.3mmol/L、双磷脂酰甘油0.033mmol/L以及抗坏血酸0.057mmol/L;
将医学真菌实验室真菌保种库黄曲霉复苏,洗脱部分孢子,计数100个孢子加入500μl血液中,然后,通过本发明提供的所述试剂盒利用本发明提供的所述方法,使用移液器取5μl模拟感染血液样本打至载玻片中,另使用移液器将2μl检测染液加入其中,混匀后覆盖好盖玻片,制成3张样本涂片,分别置于380~410nm激发光的荧光显微镜下观察,3张样本涂片均观察到亮蓝白色孢子,证明该模拟感染血液样本阳性。
工作原理
钙荧光白可以与真菌细胞壁上的几丁质结合,在380~410nm的激发光下可与埃文斯蓝同体系激发出被观察到淡蓝色荧光;氢氧化钾可以溶解杂质,增加孢子与染料,使钙荧光白更好的与孢子结合,双磷脂酰甘油及抗坏血酸在染料中主要起抗荧光衰减的作用,使荧光信号较长时间地保持清晰。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种血液真菌感染检测试剂盒,包括检测染液,其特征在于,所述检测染液以水为溶剂,包括以下浓度的组成成分:荧光钙0.005~0.01mmol/L、伊文斯蓝0.0025~0.005mmol/L、氢氧化钾1.78~10.7mmol/L、甘油抗荧光衰变剂10.87~16.3mmol/L、双磷脂酰甘油0.033mmol/L以及抗坏血酸0.057mmol/L。
2.根据权利要求1所述的一种血液真菌感染检测试剂盒,其特征在于,甘油抗荧光衰变剂的浓度为16.3mmol/L。
3.根据权利要求2所述的一种血液真菌感染检测试剂盒,其特征在于,氢氧化钾的浓度为10.7mmol/L。
4.权利要求1~3任一项所述检测试剂盒在检测血液真菌感染中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,包括以下步骤:
1)使用移液器取5μl血液待检样本打至载玻片中,另使用移液器将2μl所述检测染液加入其中,混匀后覆盖好盖玻片,制成样本涂片;
2)将样本涂片置于380~410nm激发光的荧光显微镜下观察;
3)结果判定:观察荧光显微镜下视野内是否存在圆形周围亮中央透亮的圆形孢子或长条状带有分节的菌丝,存在证明该血液样本阳性,不存在则证明该血液样本阴性。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,每次检测的所述样本涂片不少于3张。
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CN102526736A (zh) * 2006-08-17 2012-07-04 芝加哥大学 炎性疾病的治疗
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Non-Patent Citations (1)

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杨通等: "荧光染色剂calcoflour white在活检组织中真菌染色的应用", 《分子诊断与治疗杂志》 *

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