CN113960302B - 一种基于高内涵技术的肾毒性检测方法及其应用 - Google Patents
一种基于高内涵技术的肾毒性检测方法及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113960302B CN113960302B CN202111149577.5A CN202111149577A CN113960302B CN 113960302 B CN113960302 B CN 113960302B CN 202111149577 A CN202111149577 A CN 202111149577A CN 113960302 B CN113960302 B CN 113960302B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- drug
- cells
- control group
- high content
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 231100000417 nephrotoxicity Toxicity 0.000 title claims abstract description 27
- 206010029155 Nephropathy toxic Diseases 0.000 title claims description 17
- 230000007694 nephrotoxicity Effects 0.000 title claims description 17
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title abstract description 18
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 title abstract description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 63
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 24
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims abstract description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 210000001700 mitochondrial membrane Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 238000002952 image-based readout Methods 0.000 claims abstract description 13
- 206010061481 Renal injury Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 208000037806 kidney injury Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 230000035699 permeability Effects 0.000 claims abstract description 7
- 102100034459 Hepatitis A virus cellular receptor 1 Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 101710185991 Hepatitis A virus cellular receptor 1 homolog Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 66
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 25
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 claims description 25
- 239000013641 positive control Substances 0.000 claims description 15
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 11
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 8
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims description 5
- 210000004926 tubular epithelial cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 abstract description 7
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 abstract description 7
- 230000004907 flux Effects 0.000 abstract description 4
- 238000002372 labelling Methods 0.000 abstract description 2
- PKUBGLYEOAJPEG-UHFFFAOYSA-N physcion Natural products C1=C(C)C=C2C(=O)C3=CC(C)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O PKUBGLYEOAJPEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 19
- 230000008859 change Effects 0.000 description 18
- LQGUBLBATBMXHT-UHFFFAOYSA-N chrysophanol Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C3=CC(C)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O LQGUBLBATBMXHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 18
- VWDXGKUTGQJJHJ-UHFFFAOYSA-N Catenarin Natural products C1=C(O)C=C2C(=O)C3=C(O)C(C)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O VWDXGKUTGQJJHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000010282 Emodin Substances 0.000 description 14
- RBLJKYCRSCQLRP-UHFFFAOYSA-N Emodin-dianthron Natural products O=C1C2=CC(C)=CC(O)=C2C(=O)C2=C1CC(=O)C=C2O RBLJKYCRSCQLRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- YOOXNSPYGCZLAX-UHFFFAOYSA-N Helminthosporin Natural products C1=CC(O)=C2C(=O)C3=CC(C)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O YOOXNSPYGCZLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- NTGIIKCGBNGQAR-UHFFFAOYSA-N Rheoemodin Natural products C1=C(O)C=C2C(=O)C3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O NTGIIKCGBNGQAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- RHMXXJGYXNZAPX-UHFFFAOYSA-N emodin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(=O)C3=CC(C)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O RHMXXJGYXNZAPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- VASFLQKDXBAWEL-UHFFFAOYSA-N emodin Natural products OC1=C(OC2=C(C=CC(=C2C1=O)O)O)C1=CC=C(C=C1)O VASFLQKDXBAWEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- FFWOKTFYGVYKIR-UHFFFAOYSA-N physcion Chemical compound C1=C(C)C=C2C(=O)C3=CC(OC)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O FFWOKTFYGVYKIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 11
- VTAJIXDZFCRWBR-UHFFFAOYSA-N Licoricesaponin B2 Natural products C1C(C2C(C3(CCC4(C)CCC(C)(CC4C3=CC2)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)C2C(C)(C)CC1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O VTAJIXDZFCRWBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- NZPQWZZXRKZCDU-UHFFFAOYSA-N chrysophanol Natural products Cc1cc(O)c2C(=O)c3c(O)cccc3Oc2c1 NZPQWZZXRKZCDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 9
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 9
- LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N glycyrrhetinic acid glycoside Natural products C1CC(C2C(C3(CCC4(C)CCC(C)(CC4C3=CC2=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)C2C(C)(C)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N glycyrrhizic acid Natural products CC1(C)C(CCC2(C)C1CCC3(C)C2C(=O)C=C4C5CC(C)(CCC5(C)CCC34C)C(=O)O)OC6OC(C(O)C(O)C6OC7OC(O)C(O)C(O)C7C(=O)O)C(=O)O UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229960004949 glycyrrhizic acid Drugs 0.000 description 9
- 239000001685 glycyrrhizic acid Substances 0.000 description 9
- 235000019410 glycyrrhizin Nutrition 0.000 description 9
- LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N glycyrrhizinic acid Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]1O[C@@H]1C([C@H]2[C@]([C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@]5(C)CC[C@@](C)(C[C@H]5C4=CC3=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)CC1)(C)C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N 0.000 description 9
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 8
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 8
- UGNZSMZSJYOGNX-UHFFFAOYSA-N Isoviocristine Natural products O=C1C=C(C)C(=O)C2=CC3=CC(OC)=CC(O)=C3C(O)=C21 UGNZSMZSJYOGNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- WLXGUTUUWXVZNM-UHFFFAOYSA-N anthraglycoside A Natural products C1=C(C)C=C2C(=O)C3=CC(OC)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O WLXGUTUUWXVZNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229930190017 ophiopogonin Natural products 0.000 description 7
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 7
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 description 7
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 7
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 6
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- HOMSOWZTBJWNHP-UHFFFAOYSA-N 5-chlorothiadiazole Chemical compound ClC1=CN=NS1 HOMSOWZTBJWNHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 5
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 5
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 description 5
- VDYCLYGKCGVBHN-UHFFFAOYSA-N pachymaic acid Natural products CC12CCC(OC(C)=O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC(=C)C(C)C)C(O)=O)C(O)CC21C VDYCLYGKCGVBHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- SRDNLMOBFKJOSD-UHFFFAOYSA-N pachymic acid Natural products CC12CCC(OC(C)=O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C(O)=O)C(O)CC21C SRDNLMOBFKJOSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 4
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 4
- 108010087230 Sincalide Proteins 0.000 description 4
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 4
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 4
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- -1 lot number E054323) Substances 0.000 description 4
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 4
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 4
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QUQPHWDTPGMPEX-UTWYECKDSA-N aurantiamarin Natural products COc1ccc(cc1O)[C@H]1CC(=O)c2c(O)cc(O[C@@H]3O[C@H](CO[C@@H]4O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]4O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]3O)cc2O1 QUQPHWDTPGMPEX-UTWYECKDSA-N 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 3
- BFBPISPWJZMWJN-UHFFFAOYSA-N methyl 2-[(7-hydroxy-3,7-dimethyloctylidene)amino]benzoate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1N=CCC(C)CCCC(C)(C)O BFBPISPWJZMWJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IKEOZQLIVHGQLJ-UHFFFAOYSA-M mitoTracker Red Chemical compound [Cl-].C1=CC(CCl)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 IKEOZQLIVHGQLJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 2'-(4-ethoxyphenyl)-5-(4-methylpiperazin-1-yl)-2,5'-bibenzimidazole Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1C1=NC2=CC=C(C=3NC4=CC(=CC=C4N=3)N3CCN(C)CC3)C=C2N1 PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OBBJQZSMXOJMCN-UHFFFAOYSA-N Obtusin Natural products COc1cc2C=CC(=O)Oc2c3OCC(Oc13)C(=C)C OBBJQZSMXOJMCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CFLNHFUPWNRWJA-UHFFFAOYSA-N Obtusin Chemical compound O=C1C2=CC(C)=C(O)C(OC)=C2C(=O)C2=C1C=C(OC)C(OC)=C2O CFLNHFUPWNRWJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000208829 Sambucus Species 0.000 description 2
- RNXZPKOEJUFJON-UHFFFAOYSA-N aurantio-obtusin Chemical compound CC1=C(O)C(OC)=C2C(=O)C3=C(O)C(OC)=C(O)C=C3C(=O)C2=C1 RNXZPKOEJUFJON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 238000007596 consolidation process Methods 0.000 description 2
- 235000008995 european elder Nutrition 0.000 description 2
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000010832 independent-sample T-test Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000003589 nefrotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000381 nephrotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 239000008434 yi-zhi Substances 0.000 description 2
- 230000035502 ADME Effects 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000980 acid dye Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 210000002390 cell membrane structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000003640 drug residue Substances 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000000231 kidney cortex Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 230000036284 oxygen consumption Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5014—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing toxicity
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
一种基于高内涵技术的肾毒性检测方法及其应用,属于生物医药技术领域。为了获得一种可用于检测肾毒性强弱的方法,本发明将高内涵筛选技术与Kim蛋白标记法相结合,通过分析细胞核数目、细胞核面积、细胞膜通透性、线粒体膜电位及肾损伤蛋白KIM‑1水平,获得了能够确定不同因素导致的肾损伤程度的检测方法。该方法具有高通量、高准确度、适用范围广、可用于评价毒性强弱等优势,能够提高检测效率,可应用于预测中药单体药物毒性。
Description
技术领域
本发明涉及一种基于高内涵技术的体外肾毒性药物筛选方法,属于生物医药技术领域。
技术背景
中药是我国传统医学研究的结晶,随着中药在全球范围的广泛使用,其在临床中的不当使用及毒性事件日益增多。其中以中药肾毒性为主的一系列中药安全性问题严重阻碍了中医药全球化进程。肾脏是人体重要的代谢及排泄器官,具有血流量大,耗氧量高,代谢能力高等特点。其在药物的ADME过程中发挥着重要作用,因此肾脏较其他器官更易造成损伤。此外中药是由多种天然化合物组成,其所含成分繁杂,能够通过不同途径对肾脏造成潜在损伤。但由于中药导致肾损伤具有毒性较弱,具有较强的毒性蓄积,因此临床中对中药引起的肾损伤难以及时发现和诊疗。
目前常用肾毒性体外筛选方法为CCK-8法与相关细胞损伤蛋白共同验证,均具有一定专一性,不适于不同因素下的潜在肾损伤药物大批量筛选。此外,采用肾损伤分子Kim的小分子肾毒性的体外基于细胞的测定方法(Sohn等2013 Toxicology letter Vol217pp235)、(HUANG等2015 Pharmacological Research&perspectives Vol3pp e00148)仅适用于小分子肾毒性药物的体外筛选,对于多种中药单体作用的下的多因素肾损伤检测准确度不足,且方法繁杂。肖珠等(肖珠,王志斌,郑虎占,等.利用高内涵分析技术进行药物肾细胞毒性筛选的研究[J].中国药学杂志,2017,52(014):1246-1250.)采用高内涵筛选技术建立了肾毒性药物的高通量筛选技术,但是其检测指标主要为肾细胞膜、细胞核及线粒体损伤,不能综合评价肾毒性强弱和肾损伤程度。因此,亟需一种能够适于不同因素下的潜在肾损伤药物大批量筛选。
发明内容
本发明为解决上述技术问题,提供了一种基于高内涵技术的肾毒性检测方法,其特征在于,所述方法包括以高内涵筛选系统作为技术手段,基于高内涵筛选系统对已经加入待测药物的活细胞进行成像分析,得出待测药物对细胞核、细胞膜及线粒体以及肾损伤蛋白KIM-1表达水平的影响。
进一步地限定,所述活细胞为人肾小管上皮细胞HK-2。
进一步地限定,将待测药物的活细胞KIM-1蛋白表达水平与对照组细胞及阳性对照组细胞的参照值进行对比。
进一步地限定,检测药物对细胞核、细胞膜及线粒体膜电位影响时,分析细胞核数目、细胞核面积、细胞膜通透性及线粒体膜电位。
进一步地限定,将细胞核数目、细胞核面积、细胞膜通透性及线粒体膜电位与对照组细胞和阳性对照组细胞的参照值进行相比。
进一步地限定,所述阳性对照组加入的药物为顺铂。
进一步地限定,待测药物的细胞数目、细胞膜及线粒体膜电位与对照组细胞相比具有显著差异(P<0.05),趋势与阳性对照组药物抑制,即初步认为待测药物具有潜在肾毒性。
进一步地限定,待测药物的细胞数目和Kim蛋白表达与对照组细胞相比具有显著差异(P<0.05),趋势与阳性对照组药物抑制,即认为待测药物具有潜在肾毒性;根据阳性对照组和对照组的阳性率作为参考,确定中药单体的肾毒性强弱。
进一步地限定,其特征在于,所述方法采用SynchronyTM Optics平台进行成像。
本发明还提供了上述肾毒性检测方法在中药单体药物筛选中的应用。
本发明的有益效果:
本发明探索出了一种用于检测体内肾毒性的体外检测方法,其可用于预测或者检测肾毒性强弱。该方法将高内涵筛选技术与Kim蛋白标记法相结合,能够确定不同因素导致的肾损伤程度。具有高通量、高准确度、适用范围广、毒性强弱评价等优势,能够提高检测效率。
附图说明:
图1为不同浓度顺铂处理后HK-2细胞活力变化结果图;
图2为不同中药单体处理后HK-2细胞活力变化结果图;
图3为不同浓度顺铂处理对HK-2细胞的影响结果图;其中,A为细胞数目变化;B为细胞膜损伤变化;C为细胞膜通透率变化;D为线粒体膜电位变化;E为细胞核面积变化;
图4为不同浓度顺铂处理后KIM蛋白表达变化结果图;其中,A为细胞数目变化;B为KIM蛋白表达变化;C为KIM蛋白表达阳性率;D为细胞核面积变化;
图5为不同中药单体处理对HK-2细胞影响结果图;其中,A为细胞核面积变化;B为细胞膜损伤变化;C为线粒体膜电位变化;D为细胞膜通透率变化;E为细胞数目变化;
图6为不同中药单体处理后KIM蛋白表达变化结果图;其中,A为细胞数目变化;B为KIM蛋白表达变化;C为KIM蛋白表达阳性率;D为细胞核面积变化;
图7为高内涵筛选获得的不同浓度顺铂处理对HK-2细胞影响结果图;
图8为高内涵筛选获得的不同中药单体处理对HK-2细胞影响结果图;
图9为高内涵筛选获得的不同中药单体处理对HK-2细胞影响结果图。
具体实施方式
以下具体实施方式中所用药材、试剂、材料、仪器如下:
橙黄决明素(赛百草科技有限公司,批号SH20041402),大黄酚(四川维克奇生物科技有限公司,批号wkq19112903),槲皮素(四川维克奇生物科技有限公司,批号wkq20061112),大黄素(一飞生物,批号E054323),甘草酸(四川维克奇生物科技有限公司,批号wkq20022509),茯苓酸(赛百草科技有限公司,批号SH20090104),麦冬皂苷(一飞生物,批号F441728),大黄素甲醚(四川维克奇生物科技有限公司,批号wkq20040101)顺铂(sigma公司,货号P4394)。DMEM培养基(批号:C11995500BT)、0.25%EDTA胰蛋白酶(批号:25200-056)、PBS缓冲液(批号:C10010500BT)均购于GIBCO公司。细胞核染料Hoechst33342(H1399)、SYTOXTM Green Nucleic Acid Stain(S7020,SGNAS)、MitoTrackerTM Red CMXRos(M7512)购于赛默飞世尔科技(中国)有限公司。澳洲健康胎牛血清(EQ FetalBovine Serum批号:FS201-02),青霉素-链霉素溶液(Penicillin-Streptomycin 100×批号:FG101)购于Gibco公司。细胞毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8批号:CK04),购于北仁化学科技(北京)有限公司。固定液(碧云天P0098)、洗涤液(P0106)、封闭液(P0102)、一抗稀释液(P0103)、二抗稀释液(P0108)、抗猝灭DAPI(P0131)购于碧云天生物。
实验细胞:
人近曲小管上皮细胞(HK-2,Procell CL-0109)由武汉普诺赛生命科技有限公司提供,经过STR检验合格后使用。细胞接种于包被后的培养皿中(猪皮肤胶原蛋白sigma,NO.48722-500G-F),于37℃,5%CO2条件下进行培养。
分析系统:
高内涵分析仪(Perkin Elmer公司,Harmony 4.9),高内涵成像系统(PerkinElmer公司,Opera Phenix),PE VictorX型酶标仪(美国Perkin Elmer公司),BS223S型精密电子天(德国Sartorious公司)。
顺铂及中药单体配置方法:
精确称取顺铂及八种中药单体(橙黄决明素,大黄酚,槲皮素,大黄素,甘草酸,茯苓酸,麦冬皂苷,大黄素甲醚)按照其溶解特性分别溶解于适量DMSO或DMF中,并使用超声仪和涡旋仪使药物完全溶解后,制备为终浓度分别为100mmol·L-1药物母液,置于-80℃保存。
细胞培养方法:
HK-2细胞是一种人肾皮质近曲小管上皮细胞,培养采用HK-2细胞专用细胞培养基,接种于猪皮肤胶原蛋白包被后的培养皿中,置于37℃恒温5%CO2培养箱中,进行培养。待细胞培养至密度为80%时,按照1:3传代,培养于HK-2专用培养基。细胞控制在2-3d/代,实验选取处在对数生长期细胞进行。
实施例1:高内筛选检测肾细胞毒性
1)按上述细胞培养方法收集处于对数生长期的HK-2细胞并计数,将收集细胞浓度调整为104μL/孔接种于胶原蛋白包被的黑色96孔板中置于培养箱中培养24h。
2)待96孔板中细胞生长密度至80%时,设置空白背景组,空白对照组,阳性对照组(顺铂6.25,10,12.5,20,25,40,50,80,100μmol·L-1),八种中药单体(橙黄决明素,大黄酚,槲皮素,大黄素,甘草酸,茯苓酸,麦冬皂苷,大黄素甲醚)均配置为50μmol·L-1,同时每个浓度设置三个复孔。将处理后的细胞培养板置于培养箱中培养24h。
3)高内涵相关染料配置:
①细胞核染料Hoechst:DMSO加入Hoechst中,制备为10mg·mL-1母液,分装于200μL离心管中,避光保存于-80℃。使用前用不含血清培养基按照1:2000比例,配置为10mmol·L-1工作溶液,避光放置于4℃保存。
②SGNAS染料:将核酸染料溶解于适量DMSO溶剂中,制备为5mol·L-1母液,分装于200μL离心管中,避光保存于-80℃。使用前用不含血清培养基按照1:5000比例,配置为1μmol·L-1工作溶液,避光放置于4℃保存。
③MitoTrackerTM Red CMXRos染液:取50μg染料加入94.0692μL DMSO,配置为1mmol·L-1母液,分装于200μL离心管中,避光保存于-80℃。使用前用不含血清培养基按照1:1000比例,配置为1μmol·L-1工作溶液,避光放置于4℃保存。
4)药物处理后,弃去上清,每孔中加入各50μL配置完成的三种工作溶液置于培养箱中孵育半小时。
5)孵育完成后弃去培养板中细胞染料,每孔中加入一定量固定液,放置孵育20min。
6)细胞固定后弃去细胞固定液,清洗细胞1-2次,弃皿中上清,加入200μL0.1%TritonX-100溶液,避光室温下孵育30min。
7)处理完成后立即上机进行图像采集与分析
实验采用SynchronyTMOptics平台采集图像,采集模式为每个孔采集两个视野。采集条件如下:
1)第一孔道:采集350nm/461nm波长检测Hoechst33342标记染色。
2)第二孔道:采集491nm/509nm波长检测SGNAS染料染色。
3)第三孔道:采集551nm/576nm波长检测MitoTrackerTM Red CMXRos染色。
采用Harmony分析系统对获得的图片信息导入进行分析。
1)细胞核数目为:采集第一孔道染料荧光数目进行统计分析。
2)细胞核面积为:采集第一孔道染料平均荧光面积进行统计分析。
3)细胞膜通透性为:采集第二孔道染料荧光强度及阳性率进行统计分析。
4)线粒体膜电位为:采集第三孔道中荧光强度进行统计分析。
统计分析:
统计学方法如下:采用GraphPad Prism 8.0.2统计软件进行分析。实验数据以Mean±SD表示,多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用独立样本t检验。以P<0.05表示差异具有统计学意义。
实验结果如图3所示,图3中A显示,随顺铂浓度升高,HK-2细胞数目显著降低(P<0.05);图3中B显示,随顺铂浓度升高细胞荧光强度逐渐升高,当顺铂浓度为100μmol·L-1时细胞荧光强度最高,非通透性细胞核染料进入细胞升高,表明顺铂浓度为100μmol·L-1时细胞损伤最高;图3中D显示,随顺铂浓度升高细胞荧光强度升高,发生线粒体膜电位超载,导致细胞损伤;图3中E显示,随顺铂浓度升高细胞核面积逐渐降低,细胞核发生固缩核面积降低。
实施例2:高内涵筛选分析肾毒性强弱
1)按上述细胞培养方法收集处于对数生长期的HK-2细胞并计数,将收集细胞浓度调整为104μL/孔接种于胶原蛋白包被的黑色96孔板中置于培养箱中培养24h。
2)待96孔板中细胞生长密度至80%时,设置空白背景组,空白对照组,阳性对照组(顺铂6.25,10,12.5,20,25,40,50,80,100μmol·L-1),八种中药单体(橙黄决明素,大黄酚,槲皮素,大黄素,甘草酸,茯苓酸,麦冬皂苷,大黄素甲醚)均配置为50μmol·L-1,同时每个浓度设置三个复孔。将处理后的细胞培养板置于培养箱中培养24h。
3)高内涵相关染料配置:
①Kim抗体配置:使用一抗稀释液与Kim抗体按照1:1000配置。
②荧光二抗稀释:使用二抗稀释液按照说明书1:200稀释。
4)细胞固定
①药物处理后,弃去上清,每孔加入100μL PBS清洗两次。
②每孔中加入细胞固定液100μL,室温放置10分钟,弃去。
③每孔中加入免疫荧光洗液100μL,清洗两次每次5分钟。
5)孵育一抗
将预配置的Kim一抗稀释液每孔中加入100μL,置于4℃,孵育8小时。
6)孵育二抗
①回收一抗稀释液后,使用免疫荧光洗涤液清洗3次,每次10分钟。
②将预配置的荧光二抗加入每孔中,锡箔纸包裹避光置于4℃小时。
7)封闭
回收荧光二抗后,使用免疫荧光洗涤液清洗3次,每次10分钟。每孔中加入100μLDAPI封闭液。
8)上机进行图像采集与分析
实验采用SynchronyTM Optics平台采集图像,采集模式为每个孔采集两个视野。采集条件如下:
1)第一孔道:采集350nm/461nm波长检测DAPI标记染色。
2)第二孔道:采集491nm/509nm波长检测Alexa488染料染色。
采用Harmony分析系统对获得的图片信息导入进行分析。
1)细胞核数目为:采集第一孔道染料荧光数目进行统计分析。
2)细胞核面积为:采集第一孔道染料平均荧光面积进行统计分析。
3)Kim蛋白表达:采集第二孔道染料荧光强度及阳性率进行统计分析。
统计分析:
统计学方法如下:采用GraphPad Prism 8.0.2统计软件进行分析。实验数据以Mean±SD表示,多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用独立样本t检验。以P<0.05表示差异具有统计学意义。
不同浓度顺铂处理后KIM蛋白表达变化结果如图4所示,图4中的B和C表明随顺铂浓度升高,荧光细胞数逐渐升高,同时荧光强度逐渐升高,表明随着顺铂浓度升高,HK-2细胞损伤逐渐升高。
不同中药单体处理对HK-2细胞影响结果如图5所示,图5中的A表明橙黄决明素(P<0.05)、茯苓酸(P<0.05)和大黄素(P<0.01)能够显著降低细胞数目;图5中的B显示,大黄酚(P<0.05)、甘草酸(P<0.05)和大黄素(P<0.01)在50μmol·L-1能够显著升高细胞荧光强度,非通透性细胞核染料进入细胞升高,表明可能破坏细胞膜结构,具有肾细胞毒性;图5中的C显示,八种中药单体处理后肾细胞荧光强度未出现显著升高(P>0.05),未通过线粒体膜电位超载,导致细胞损伤;图5中的E结果显示,大黄素(P<0.01)处理后,细胞核发生固缩核面积显著降低。
不同中药单体处理后KIM蛋白表达变化结果如图6所示,图6中的D显示大黄素在50μmol*L-1,荧光细胞数显著升高(P<0.01),同时荧光强度显著升高(P<0.01),HK-2细胞损伤逐渐升高。
对比例:CCK-8检测肾细胞存活率
1)通过前期预实验摸索最适合的种板细胞数量为每孔5000个细胞,试剂孵育时间为24h后进行正式实验。按照上述细胞培养方法收集对数生长期的HK-2细胞,并计数,按照预实验结果调整细胞悬液浓度,并接种。按照实验方案种板后置于37℃恒温5%CO2培养箱中培养24h。
2)待96孔板中细胞生长密度至80%时,设置空白背景组,空白对照组,阳性对照组(顺铂6.25,10,12.5,20,25,40,50,80,100μmol·L-1),八种中药单体(橙黄决明素,大黄酚,槲皮素,大黄素,甘草酸,茯苓酸,麦冬皂苷,大黄素甲醚)均配置为50μmol·L-1,同时每个浓度设置三个复孔。将处理后的细胞培养板置于培养箱中培养24h。
3)结束后,弃去板中细胞培养液,同时使用PBS洗去孔中药物残留,在每孔中加入预先配置的CCK-8试剂(加入试剂是要尽量缓慢避免吹走细胞和产生气泡)。
4)根据预实验结果孵育适当时间后,取出培养板,置于酶标仪中450nm下检测各组OD值。根据OD值计算细胞存活率。
计算公式:细胞活力=[OD450待测-OD450空白对照]/[OD450正常对照-OD450空白对照]×100%
CCK-8检测肾细胞存活率的结果如图1和图2所示,由图1可知,随着顺铂浓度逐渐升高,HK-2细胞活力显著降低。其IC50约为11.77μmol·L-1,50μmol·L-1时细胞活力下降至20%。由图2可知,槲皮素,大黄素,茯苓酸,以及大黄素甲醚在50μmol·L-1时细胞活力均显著减低,其中大黄素在50μmol·L-1时处理24小时后细胞活力降至30%。橙黄决明素,大黄酚,甘草酸,麦冬皂苷在50μmol·L-1时对HK-2细胞活力无显著影响。
本发明采用顺铂作为肾细胞毒性阳性对照药物,对多种中药所含单体成分潜在肾毒性损伤进行验证。此外,采用细胞核标记、细胞线粒体膜电位、细胞内KIM蛋白表达等方法,多角度共同验证药物肾毒性。实验结果表明,与阳性药对照组顺铂相比,槲皮素,大黄素,茯苓酸,以及大黄素甲醚处理后可显著降低HK-2细胞活力,其中橙黄决明素,大黄酚,甘草酸,麦冬皂苷处理后HK-2细胞活力无显著差异;进一步通过高内涵技术检测结果表明,与阳性对照组相比,大黄酚(P<0.05)、甘草酸(P<0.05)和大黄素(P<0.01)能够显著造成细胞膜破裂,同时引发线粒体膜电位超载,降低HK-2细胞核数目;KIM蛋白表达结果表明,阳性药和大黄素能够显著提升KIM-1肾损伤蛋白表达。本发明通过采用高内涵筛选技术探索出高通量肾毒性筛选方法,该方法表明茯苓酸具有潜在肾细胞毒性,大黄素呈现显著肾细胞毒性,在50μmol·L-1时与顺铂12.5μmol·L-1毒性相当。上述结果表明该方法能够高准确度,高通量的对多种中药单体肾毒性作用进行预测,能够作为一种检测体内肾毒性的体外研究方法。本发明通过运用高内涵技术高通量,高准确度的体外预测中药所含单体的肾毒性。
Claims (4)
1.一种基于高内涵技术的肾毒性检测方法,其特征在于,所述方法包括以高内涵筛选系统作为技术手段,基于高内涵筛选系统对已经加入待测药物的活细胞进行成像分析,得出待测药物对细胞核、细胞膜及线粒体以及肾损伤蛋白KIM-1表达水平的影响,具体为利用高内涵筛选系统检测待测药物的活细胞细胞核数目、细胞核面积、细胞膜通透性、线粒体膜电位以及KIM-1蛋白表达水平;待测药物的细胞数目、细胞膜及线粒体膜电位与对照组细胞相比具有显著差异(P<0.05),趋势与阳性对照组药物一致,即初步认为待测药物具有潜在肾毒性;待测药物的细胞数目和Kim蛋白表达与对照组细胞相比具有显著差异(P<0.05),趋势与阳性对照组药物一致,即认为待测药物具有潜在肾毒性;根据阳性对照组和对照组的阳性率作为参考,确定中药单体的肾毒性强弱;所述阳性对照组加入的药物为顺铂。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述活细胞为人肾小管上皮细胞HK-2。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法采用Synchrony™ Optics平台进行成像。
4.权利要求1所述肾毒性检测方法在中药单体药物筛选中的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202111149577.5A CN113960302B (zh) | 2021-09-29 | 2021-09-29 | 一种基于高内涵技术的肾毒性检测方法及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202111149577.5A CN113960302B (zh) | 2021-09-29 | 2021-09-29 | 一种基于高内涵技术的肾毒性检测方法及其应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN113960302A CN113960302A (zh) | 2022-01-21 |
CN113960302B true CN113960302B (zh) | 2024-04-23 |
Family
ID=79462987
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202111149577.5A Active CN113960302B (zh) | 2021-09-29 | 2021-09-29 | 一种基于高内涵技术的肾毒性检测方法及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN113960302B (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN116912825B (zh) * | 2023-09-14 | 2023-11-24 | 生态环境部华南环境科学研究所(生态环境部生态环境应急研究所) | 利用人工智能和机器学习的高内涵化学品肺毒性筛查方法 |
Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013067498A1 (en) * | 2011-11-04 | 2013-05-10 | Tengion, Inc. | Drug screening and potency assays |
WO2015023836A1 (en) * | 2013-08-16 | 2015-02-19 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Kim-1 as a therapeutic target in conditions associated with kidney fibrosis |
CN104641237A (zh) * | 2012-07-20 | 2015-05-20 | 新加坡科技研究局 | 预测肾近曲小管细胞毒性的体外试验 |
CN105803038A (zh) * | 2016-04-14 | 2016-07-27 | 天津中医药大学 | 一种基于细胞表型的多指标量化心脏毒性检测方法及其应用 |
CN105928913A (zh) * | 2016-04-14 | 2016-09-07 | 天津中医药大学 | 一种基于细胞表型的高内涵多指标肾毒性的检测方法及其应用 |
CN108864272A (zh) * | 2018-07-03 | 2018-11-23 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种乳腺珠蛋白a抗原表位及其应用 |
CN109328236A (zh) * | 2016-06-17 | 2019-02-12 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 体外肾毒性筛选测定法 |
CN110579607A (zh) * | 2018-06-08 | 2019-12-17 | 山东省农业科学院家禽研究所(山东省无特定病原鸡研究中心) | 一种fadv a病毒间接elisa抗体检测试剂盒及其应用 |
CN111426766A (zh) * | 2020-04-17 | 2020-07-17 | 中国药科大学 | 一种药源性急性肾损伤小鼠模型的构建及评价方法 |
CA3147699A1 (en) * | 2019-07-19 | 2021-01-28 | Vifor (International) Ag | Ferroportin-inhibitors for the use in the prevention and treatment of kidney injuries |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060003345A1 (en) * | 2004-06-30 | 2006-01-05 | Pfizer Inc | RNA bioassay |
US20100184110A1 (en) * | 2007-06-06 | 2010-07-22 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Predictive diagnostics for kidney disease |
GB201902419D0 (en) * | 2019-02-22 | 2019-04-10 | Singapore Health Serv Pte Ltd | Treatment of kidney injury |
-
2021
- 2021-09-29 CN CN202111149577.5A patent/CN113960302B/zh active Active
Patent Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013067498A1 (en) * | 2011-11-04 | 2013-05-10 | Tengion, Inc. | Drug screening and potency assays |
CN104641237A (zh) * | 2012-07-20 | 2015-05-20 | 新加坡科技研究局 | 预测肾近曲小管细胞毒性的体外试验 |
WO2015023836A1 (en) * | 2013-08-16 | 2015-02-19 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Kim-1 as a therapeutic target in conditions associated with kidney fibrosis |
CN105803038A (zh) * | 2016-04-14 | 2016-07-27 | 天津中医药大学 | 一种基于细胞表型的多指标量化心脏毒性检测方法及其应用 |
CN105928913A (zh) * | 2016-04-14 | 2016-09-07 | 天津中医药大学 | 一种基于细胞表型的高内涵多指标肾毒性的检测方法及其应用 |
CN109328236A (zh) * | 2016-06-17 | 2019-02-12 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 体外肾毒性筛选测定法 |
CN110579607A (zh) * | 2018-06-08 | 2019-12-17 | 山东省农业科学院家禽研究所(山东省无特定病原鸡研究中心) | 一种fadv a病毒间接elisa抗体检测试剂盒及其应用 |
CN108864272A (zh) * | 2018-07-03 | 2018-11-23 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种乳腺珠蛋白a抗原表位及其应用 |
CA3147699A1 (en) * | 2019-07-19 | 2021-01-28 | Vifor (International) Ag | Ferroportin-inhibitors for the use in the prevention and treatment of kidney injuries |
CN111426766A (zh) * | 2020-04-17 | 2020-07-17 | 中国药科大学 | 一种药源性急性肾损伤小鼠模型的构建及评价方法 |
Non-Patent Citations (8)
Title |
---|
"利用高内涵分析技术进行药物肾细胞毒性筛选的研究";肖珠 等;《中国药学杂志》;第52卷(第14期);1246-1250 * |
"马兜铃酸诱导肾小管上皮细胞损伤中Ngal和Kim-1的变化及其意义";孙骅 等;《肾脏病与透析肾移植杂志》;第16卷(第4期);340-344 * |
Asiatic acid protects against cisplatin-induced acute kidney injury via anti-apoptosis and anti-inflammation;Yang, Chen 等;BIOMEDICINE & PHARMACOTHERAPY;20181003;第107卷;1354-1362 * |
The Predictive Role of the Biomarker Kidney Molecule-1 (KIM-1) in Acute Kidney Injury (AKI) Cisplatin-Induced Nephrotoxicity;Daniela Maria Tanase 等;Int. J. Mol. Sci.;20191022;第20卷(第20期);1-20 * |
基于HK-2细胞的泽泻萜类组分体外肾毒性评价及其诱导细胞凋亡作用的探究;汪春飞;马良;封亮;尹梅融;顾俊菲;贾晓斌;;中国中药杂志(第03期);490-497 * |
我国药物毒理学研究现状与展望;廖明阳;;中国药理学与毒理学杂志;20151015(05);727-728 * |
肾毒性评价体外替代模型研究进展;池慧钦 等;中国公共卫生;20210630;第37卷(第06期);1035-1040 * |
药源性肾损伤发生机制研究进展;邱彩霞;杨翠平;靳洪涛;;中国药物警戒;20191115(11);53-59 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN113960302A (zh) | 2022-01-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Peel et al. | Introducing an automated high content confocal imaging approach for Organs-on-Chips | |
CN110608991B (zh) | 基于质谱流式检测技术的细胞周期检测试剂盒及检测方法 | |
CN113960302B (zh) | 一种基于高内涵技术的肾毒性检测方法及其应用 | |
CN103293250B (zh) | 糖尿病肾病诊断试剂盒及其应用 | |
WO2023174447A1 (zh) | 间充质干细胞创面修复优势功能亚群及其鉴定和应用 | |
Nikulin et al. | Application of impedance spectroscopy for the control of the integrity of in vitro models of barrier tissues | |
CN112213172A (zh) | 一种稳定的阴道分泌物有形成分染色液及其制备方法 | |
WO2018137515A1 (zh) | 一种针对尿路上皮癌的尿脱落肿瘤细胞的免疫荧光染色技术 | |
CN114958953A (zh) | 一种化妆品原料体外3d全皮皮肤模型抗衰老功效的筛选方法 | |
CN111474358B (zh) | 一种3d立体免疫荧光染色试剂盒及其应用 | |
CN109443876A (zh) | 肝纤维化标志物质控品及其制备方法 | |
CN101644706A (zh) | 半定量精子浓度快速自检试剂盒及其制备和使用方法 | |
CN100451612C (zh) | 精子浓度快速诊断试剂盒及其制备和使用方法 | |
CN117031027A (zh) | 一种壳多糖酶3样蛋白1测定试剂盒及其制备方法 | |
CN104569417A (zh) | 一种用于早期诊断急性肾损伤的抗体芯片试剂盒 | |
CN200996937Y (zh) | 精子浓度快速诊断试剂盒 | |
CN108627565A (zh) | 铋、铜混合镀膜试条及其制备方法与应用 | |
CN116296702B (zh) | 基于质谱流式检测技术的可定制检测通道的死活染料及其制备方法和应用 | |
CN109596817A (zh) | 一种lbp的质谱试剂盒lbp含量检测系统及方法 | |
CN112063681B (zh) | 一种化学品发育毒性预测方法、预测模型及其构建方法与应用 | |
CN114480254A (zh) | HepaRG和HepG2构建的体外肝毒性替代模型及其构建方法与应用 | |
CN103389289A (zh) | 一种分析马兜铃酸肾病生物标记物的激光共聚焦显微镜法 | |
CN116908158A (zh) | 一种药物线粒体毒性检测方法及其应用 | |
CN112904028B (zh) | 一种血清淀粉样蛋白a质控品及其制备方法 | |
CN102004114B (zh) | 一种神经细胞传递信息功能的定性和定量评估方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |