CN113960302A - 一种基于高内涵技术的肾毒性检测方法及其应用 - Google Patents
一种基于高内涵技术的肾毒性检测方法及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
一种基于高内涵技术的肾毒性检测方法及其应用，属于生物医药技术领域。为了获得一种可用于检测肾毒性强弱的方法，本发明将高内涵筛选技术与Kim蛋白标记法相结合，通过分析细胞核数目、细胞核面积、细胞膜通透性、线粒体膜电位及肾损伤蛋白KIM‑1水平，获得了能够确定不同因素导致的肾损伤程度的检测方法。该方法具有高通量、高准确度、适用范围广、可用于评价毒性强弱等优势，能够提高检测效率，可应用于预测中药单体药物毒性。
Description
技术领域
本发明涉及一种基于高内涵技术的体外肾毒性药物筛选方法，属于生物医药技术领域。
技术背景
中药是我国传统医学研究的结晶，随着中药在全球范围的广泛使用，其在临床中的不当使用及毒性事件日益增多。其中以中药肾毒性为主的一系列中药安全性问题严重阻碍了中医药全球化进程。肾脏是人体重要的代谢及排泄器官，具有血流量大，耗氧量高，代谢能力高等特点。其在药物的ADME过程中发挥着重要作用，因此肾脏较其他器官更易造成损伤。此外中药是由多种天然化合物组成，其所含成分繁杂，能够通过不同途径对肾脏造成潜在损伤。但由于中药导致肾损伤具有毒性较弱，具有较强的毒性蓄积，因此临床中对中药引起的肾损伤难以及时发现和诊疗。
目前常用肾毒性体外筛选方法为CCK-8法与相关细胞损伤蛋白共同验证，均具有一定专一性，不适于不同因素下的潜在肾损伤药物大批量筛选。此外，采用肾损伤分子Kim的小分子肾毒性的体外基于细胞的测定方法(Sohn等2013 Toxicology letter Vol217pp235)、(HUANG等2015 Pharmacological Research&perspectives Vol3pp e00148)仅适用于小分子肾毒性药物的体外筛选，对于多种中药单体作用的下的多因素肾损伤检测准确度不足，且方法繁杂。肖珠等(肖珠,王志斌,郑虎占,等.利用高内涵分析技术进行药物肾细胞毒性筛选的研究[J].中国药学杂志,2017,52(014):1246-1250.)采用高内涵筛选技术建立了肾毒性药物的高通量筛选技术，但是其检测指标主要为肾细胞膜、细胞核及线粒体损伤，不能综合评价肾毒性强弱和肾损伤程度。因此，亟需一种能够适于不同因素下的潜在肾损伤药物大批量筛选。
发明内容
本发明为解决上述技术问题，提供了一种基于高内涵技术的肾毒性检测方法，其特征在于，所述方法包括以高内涵筛选系统作为技术手段，基于高内涵筛选系统对已经加入待测药物的活细胞进行成像分析，得出待测药物对细胞核、细胞膜及线粒体以及肾损伤蛋白KIM-1表达水平的影响。
进一步地限定，所述活细胞为人肾小管上皮细胞HK-2。
进一步地限定，将待测药物的活细胞KIM-1蛋白表达水平与对照组细胞及阳性对照组细胞的参照值进行对比。
进一步地限定，检测药物对细胞核、细胞膜及线粒体膜电位影响时，分析细胞核数目、细胞核面积、细胞膜通透性及线粒体膜电位。
进一步地限定，将细胞核数目、细胞核面积、细胞膜通透性及线粒体膜电位与对照组细胞和阳性对照组细胞的参照值进行相比。
进一步地限定，所述阳性对照组加入的药物为顺铂。
进一步地限定，待测药物的细胞数目、细胞膜及线粒体膜电位与对照组细胞相比具有显著差异(P<0.05)，趋势与阳性对照组药物抑制，即初步认为待测药物具有潜在肾毒性。
进一步地限定，待测药物的细胞数目和Kim蛋白表达与对照组细胞相比具有显著差异(P<0.05)，趋势与阳性对照组药物抑制，即认为待测药物具有潜在肾毒性；根据阳性对照组和对照组的阳性率作为参考，确定中药单体的肾毒性强弱。
进一步地限定，其特征在于，所述方法采用SynchronyTM Optics平台进行成像。
本发明还提供了上述肾毒性检测方法在中药单体药物筛选中的应用。
本发明的有益效果：
本发明探索出了一种用于检测体内肾毒性的体外检测方法，其可用于预测或者检测肾毒性强弱。该方法将高内涵筛选技术与Kim蛋白标记法相结合，能够确定不同因素导致的肾损伤程度。具有高通量、高准确度、适用范围广、毒性强弱评价等优势，能够提高检测效率。
附图说明：
图1为不同浓度顺铂处理后HK-2细胞活力变化结果图；
图2为不同中药单体处理后HK-2细胞活力变化结果图；
图3为不同浓度顺铂处理对HK-2细胞的影响结果图；其中，A为细胞数目变化；B为细胞膜损伤变化；C为细胞膜通透率变化；D为线粒体膜电位变化；E为细胞核面积变化；
图4为不同浓度顺铂处理后KIM蛋白表达变化结果图；其中，A为细胞数目变化；B为KIM蛋白表达变化；C为KIM蛋白表达阳性率；D为细胞核面积变化；
图5为不同中药单体处理对HK-2细胞影响结果图；其中，A为细胞核面积变化；B为细胞膜损伤变化；C为线粒体膜电位变化；D为细胞膜通透率变化；E为细胞数目变化；
图6为不同中药单体处理后KIM蛋白表达变化结果图；其中，A为细胞数目变化；B为KIM蛋白表达变化；C为KIM蛋白表达阳性率；D为细胞核面积变化；
图7为高内涵筛选获得的不同浓度顺铂处理对HK-2细胞影响结果图；
图8为高内涵筛选获得的不同中药单体处理对HK-2细胞影响结果图；
图9为高内涵筛选获得的不同中药单体处理对HK-2细胞影响结果图。
具体实施方式
以下具体实施方式中所用药材、试剂、材料、仪器如下：
橙黄决明素(赛百草科技有限公司，批号SH20041402)，大黄酚(四川维克奇生物科技有限公司，批号wkq19112903)，槲皮素(四川维克奇生物科技有限公司，批号wkq20061112)，大黄素(一飞生物，批号E054323)，甘草酸(四川维克奇生物科技有限公司，批号wkq20022509)，茯苓酸(赛百草科技有限公司，批号SH20090104)，麦冬皂苷(一飞生物，批号F441728)，大黄素甲醚(四川维克奇生物科技有限公司，批号wkq20040101)顺铂(sigma公司，货号P4394)。DMEM培养基(批号：C11995500BT)、0.25％EDTA胰蛋白酶(批号：25200-056)、PBS缓冲液(批号：C10010500BT)均购于GIBCO公司。细胞核染料Hoechst33342(H1399)、SYTOXTM Green Nucleic Acid Stain(S7020，SGNAS)、MitoTrackerTM Red CMXRos(M7512)购于赛默飞世尔科技(中国)有限公司。澳洲健康胎牛血清(
EQ FetalBovine Serum批号：FS201-02)，青霉素-链霉素溶液(Penicillin-Streptomycin 100×批号：FG101)购于Gibco公司。细胞毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8批号:CK04)，购于北仁化学科技(北京)有限公司。固定液(碧云天P0098)、洗涤液(P0106)、封闭液(P0102)、一抗稀释液(P0103)、二抗稀释液(P0108)、抗猝灭DAPI(P0131)购于碧云天生物。
实验细胞：
人近曲小管上皮细胞(HK-2，Procell CL-0109)由武汉普诺赛生命科技有限公司提供，经过STR检验合格后使用。细胞接种于包被后的培养皿中(猪皮肤胶原蛋白sigma，NO.48722-500G-F)，于37℃，5％CO2条件下进行培养。
分析系统：
高内涵分析仪(Perkin Elmer公司，Harmony 4.9)，高内涵成像系统(PerkinElmer公司，Opera Phenix)，PE VictorX型酶标仪(美国Perkin Elmer公司)，BS223S型精密电子天(德国Sartorious公司)。
顺铂及中药单体配置方法：
精确称取顺铂及八种中药单体(橙黄决明素，大黄酚，槲皮素，大黄素，甘草酸，茯苓酸，麦冬皂苷，大黄素甲醚)按照其溶解特性分别溶解于适量DMSO或DMF中，并使用超声仪和涡旋仪使药物完全溶解后，制备为终浓度分别为100mmol·L-1药物母液，置于-80℃保存。
细胞培养方法：
HK-2细胞是一种人肾皮质近曲小管上皮细胞，培养采用HK-2细胞专用细胞培养基，接种于猪皮肤胶原蛋白包被后的培养皿中，置于37℃恒温5％CO2培养箱中，进行培养。待细胞培养至密度为80％时，按照1:3传代，培养于HK-2专用培养基。细胞控制在2-3d/代，实验选取处在对数生长期细胞进行。
实施例1：高内筛选检测肾细胞毒性
1)按上述细胞培养方法收集处于对数生长期的HK-2细胞并计数，将收集细胞浓度调整为104μL/孔接种于胶原蛋白包被的黑色96孔板中置于培养箱中培养24h。
2)待96孔板中细胞生长密度至80％时，设置空白背景组，空白对照组，阳性对照组(顺铂6.25，10，12.5，20，25，40，50，80，100μmol·L-1)，八种中药单体(橙黄决明素，大黄酚，槲皮素，大黄素，甘草酸，茯苓酸，麦冬皂苷，大黄素甲醚)均配置为50μmol·L-1，同时每个浓度设置三个复孔。将处理后的细胞培养板置于培养箱中培养24h。
3)高内涵相关染料配置：
①细胞核染料Hoechst：DMSO加入Hoechst中，制备为10mg·mL-1母液，分装于200μL离心管中，避光保存于-80℃。使用前用不含血清培养基按照1:2000比例，配置为10mmol·L-1工作溶液，避光放置于4℃保存。
②SGNAS染料：将核酸染料溶解于适量DMSO溶剂中，制备为5mol·L-1母液，分装于200μL离心管中，避光保存于-80℃。使用前用不含血清培养基按照1:5000比例，配置为1μmol·L-1工作溶液，避光放置于4℃保存。
③MitoTrackerTM Red CMXRos染液：取50μg染料加入94.0692μL DMSO，配置为1mmol·L-1母液，分装于200μL离心管中，避光保存于-80℃。使用前用不含血清培养基按照1:1000比例，配置为1μmol·L-1工作溶液，避光放置于4℃保存。
4)药物处理后，弃去上清，每孔中加入各50μL配置完成的三种工作溶液置于培养箱中孵育半小时。
5)孵育完成后弃去培养板中细胞染料，每孔中加入一定量固定液，放置孵育20min。
6)细胞固定后弃去细胞固定液，清洗细胞1-2次，弃皿中上清，加入200μL0.1％TritonX-100溶液，避光室温下孵育30min。
7)处理完成后立即上机进行图像采集与分析
实验采用SynchronyTMOptics平台采集图像，采集模式为每个孔采集两个视野。采集条件如下：
1)第一孔道：采集350nm/461nm波长检测Hoechst33342标记染色。
2)第二孔道：采集491nm/509nm波长检测SGNAS染料染色。
3)第三孔道：采集551nm/576nm波长检测MitoTrackerTM Red CMXRos染色。
采用Harmony分析系统对获得的图片信息导入进行分析。
1)细胞核数目为：采集第一孔道染料荧光数目进行统计分析。
2)细胞核面积为：采集第一孔道染料平均荧光面积进行统计分析。
3)细胞膜通透性为：采集第二孔道染料荧光强度及阳性率进行统计分析。
4)线粒体膜电位为：采集第三孔道中荧光强度进行统计分析。
统计分析：
统计学方法如下：采用GraphPad Prism 8.0.2统计软件进行分析。实验数据以Mean±SD表示，多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用独立样本t检验。以P<0.05表示差异具有统计学意义。
实验结果如图3所示，图3中A显示，随顺铂浓度升高，HK-2细胞数目显著降低(P<0.05)；图3中B显示，随顺铂浓度升高细胞荧光强度逐渐升高，当顺铂浓度为100μmol·L-1时细胞荧光强度最高，非通透性细胞核染料进入细胞升高，表明顺铂浓度为100μmol·L-1时细胞损伤最高；图3中D显示，随顺铂浓度升高细胞荧光强度升高，发生线粒体膜电位超载，导致细胞损伤；图3中E显示，随顺铂浓度升高细胞核面积逐渐降低，细胞核发生固缩核面积降低。
实施例2：高内涵筛选分析肾毒性强弱
1)按上述细胞培养方法收集处于对数生长期的HK-2细胞并计数，将收集细胞浓度调整为104μL/孔接种于胶原蛋白包被的黑色96孔板中置于培养箱中培养24h。
2)待96孔板中细胞生长密度至80％时，设置空白背景组，空白对照组，阳性对照组(顺铂6.25，10，12.5，20，25，40，50，80，100μmol·L-1)，八种中药单体(橙黄决明素，大黄酚，槲皮素，大黄素，甘草酸，茯苓酸，麦冬皂苷，大黄素甲醚)均配置为50μmol·L-1，同时每个浓度设置三个复孔。将处理后的细胞培养板置于培养箱中培养24h。
3)高内涵相关染料配置：
①Kim抗体配置：使用一抗稀释液与Kim抗体按照1:1000配置。
②荧光二抗稀释：使用二抗稀释液按照说明书1:200稀释。
4)细胞固定
①药物处理后，弃去上清，每孔加入100μL PBS清洗两次。
②每孔中加入细胞固定液100μL，室温放置10分钟，弃去。
③每孔中加入免疫荧光洗液100μL，清洗两次每次5分钟。
5)孵育一抗
将预配置的Kim一抗稀释液每孔中加入100μL，置于4℃，孵育8小时。
6)孵育二抗
①回收一抗稀释液后，使用免疫荧光洗涤液清洗3次，每次10分钟。
②将预配置的荧光二抗加入每孔中，锡箔纸包裹避光置于4℃小时。
7)封闭
回收荧光二抗后，使用免疫荧光洗涤液清洗3次，每次10分钟。每孔中加入100μLDAPI封闭液。
8)上机进行图像采集与分析
实验采用SynchronyTM Optics平台采集图像，采集模式为每个孔采集两个视野。采集条件如下：
1)第一孔道：采集350nm/461nm波长检测DAPI标记染色。
2)第二孔道：采集491nm/509nm波长检测Alexa
488染料染色。
采用Harmony分析系统对获得的图片信息导入进行分析。
1)细胞核数目为：采集第一孔道染料荧光数目进行统计分析。
2)细胞核面积为：采集第一孔道染料平均荧光面积进行统计分析。
3)Kim蛋白表达：采集第二孔道染料荧光强度及阳性率进行统计分析。
统计分析：
统计学方法如下：采用GraphPad Prism 8.0.2统计软件进行分析。实验数据以Mean±SD表示，多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用独立样本t检验。以P<0.05表示差异具有统计学意义。
不同浓度顺铂处理后KIM蛋白表达变化结果如图4所示，图4中的B和C表明随顺铂浓度升高，荧光细胞数逐渐升高，同时荧光强度逐渐升高，表明随着顺铂浓度升高，HK-2细胞损伤逐渐升高。
不同中药单体处理对HK-2细胞影响结果如图5所示，图5中的A表明橙黄决明素(P<0.05)、茯苓酸(P<0.05)和大黄素(P<0.01)能够显著降低细胞数目；图5中的B显示，大黄酚(P<0.05)、甘草酸(P<0.05)和大黄素(P<0.01)在50μmol·L-1能够显著升高细胞荧光强度，非通透性细胞核染料进入细胞升高，表明可能破坏细胞膜结构，具有肾细胞毒性；图5中的C显示，八种中药单体处理后肾细胞荧光强度未出现显著升高(P>0.05)，未通过线粒体膜电位超载，导致细胞损伤；图5中的E结果显示，大黄素(P<0.01)处理后，细胞核发生固缩核面积显著降低。
不同中药单体处理后KIM蛋白表达变化结果如图6所示，图6中的D显示大黄素在50μmol*L-1，荧光细胞数显著升高(P<0.01)，同时荧光强度显著升高(P<0.01)，HK-2细胞损伤逐渐升高。
对比例：CCK-8检测肾细胞存活率
1)通过前期预实验摸索最适合的种板细胞数量为每孔5000个细胞，试剂孵育时间为24h后进行正式实验。按照上述细胞培养方法收集对数生长期的HK-2细胞，并计数，按照预实验结果调整细胞悬液浓度，并接种。按照实验方案种板后置于37℃恒温5％CO2培养箱中培养24h。
2)待96孔板中细胞生长密度至80％时，设置空白背景组，空白对照组，阳性对照组(顺铂6.25，10，12.5，20，25，40，50，80，100μmol·L-1)，八种中药单体(橙黄决明素，大黄酚，槲皮素，大黄素，甘草酸，茯苓酸，麦冬皂苷，大黄素甲醚)均配置为50μmol·L-1，同时每个浓度设置三个复孔。将处理后的细胞培养板置于培养箱中培养24h。
3)结束后，弃去板中细胞培养液，同时使用PBS洗去孔中药物残留，在每孔中加入预先配置的CCK-8试剂(加入试剂是要尽量缓慢避免吹走细胞和产生气泡)。
4)根据预实验结果孵育适当时间后，取出培养板，置于酶标仪中450nm下检测各组OD值。根据OD值计算细胞存活率。
计算公式：细胞活力＝[OD450待测-OD450空白对照]/[OD450正常对照-OD450空白对照]×100％
CCK-8检测肾细胞存活率的结果如图1和图2所示，由图1可知，随着顺铂浓度逐渐升高，HK-2细胞活力显著降低。其IC50约为11.77μmol·L-1，50μmol·L-1时细胞活力下降至20％。由图2可知，槲皮素，大黄素，茯苓酸，以及大黄素甲醚在50μmol·L-1时细胞活力均显著减低，其中大黄素在50μmol·L-1时处理24小时后细胞活力降至30％。橙黄决明素，大黄酚，甘草酸，麦冬皂苷在50μmol·L-1时对HK-2细胞活力无显著影响。
本发明采用顺铂作为肾细胞毒性阳性对照药物，对多种中药所含单体成分潜在肾毒性损伤进行验证。此外，采用细胞核标记、细胞线粒体膜电位、细胞内KIM蛋白表达等方法，多角度共同验证药物肾毒性。实验结果表明，与阳性药对照组顺铂相比，槲皮素，大黄素，茯苓酸，以及大黄素甲醚处理后可显著降低HK-2细胞活力，其中橙黄决明素，大黄酚，甘草酸，麦冬皂苷处理后HK-2细胞活力无显著差异；进一步通过高内涵技术检测结果表明，与阳性对照组相比，大黄酚(P<0.05)、甘草酸(P<0.05)和大黄素(P<0.01)能够显著造成细胞膜破裂，同时引发线粒体膜电位超载，降低HK-2细胞核数目；KIM蛋白表达结果表明，阳性药和大黄素能够显著提升KIM-1肾损伤蛋白表达。本发明通过采用高内涵筛选技术探索出高通量肾毒性筛选方法，该方法表明茯苓酸具有潜在肾细胞毒性，大黄素呈现显著肾细胞毒性，在50μmol·L-1时与顺铂12.5μmol·L-1毒性相当。上述结果表明该方法能够高准确度，高通量的对多种中药单体肾毒性作用进行预测，能够作为一种检测体内肾毒性的体外研究方法。本发明通过运用高内涵技术高通量，高准确度的体外预测中药所含单体的肾毒性。
Claims (10)
1.一种基于高内涵技术的肾毒性检测方法，其特征在于，所述方法包括以高内涵筛选系统作为技术手段，基于高内涵筛选系统对已经加入待测药物的活细胞进行成像分析，得出待测药物对细胞核、细胞膜及线粒体以及肾损伤蛋白KIM-1表达水平的影响。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述活细胞为人肾小管上皮细胞HK-2。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，将待测药物的活细胞KIM-1蛋白表达水平与对照组细胞及阳性对照组细胞的参照值进行对比。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，检测药物对细胞核、细胞膜及线粒体膜电位影响时，分析细胞核数目、细胞核面积、细胞膜通透性及线粒体膜电位。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，将细胞核数目、细胞核面积、细胞膜通透性及线粒体膜电位与对照组细胞和阳性对照组细胞的参照值进行相比。
6.根据权利要求3或5所述的方法，其特征在于，所述阳性对照组加入的药物为顺铂。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，待测药物的细胞数目、细胞膜及线粒体膜电位与对照组细胞相比具有显著差异(P<0.05)，趋势与阳性对照组药物抑制，即初步认为待测药物具有潜在肾毒性。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，待测药物的细胞数目和Kim蛋白表达与对照组细胞相比具有显著差异(P<0.05)，趋势与阳性对照组药物抑制，即认为待测药物具有潜在肾毒性；根据阳性对照组和对照组的阳性率作为参考，确定中药单体的肾毒性强弱。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法采用SynchronyTMOptics平台进行成像。
10.权利要求1所述肾毒性检测方法在中药单体药物筛选中的应用。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116912825A (zh) * | 2023-09-14 | 2023-10-20 | 生态环境部华南环境科学研究所(生态环境部生态环境应急研究所) | 利用人工智能和机器学习的高内涵化学品肺毒性筛查方法 |
Citations (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20060003345A1 (en) * | 2004-06-30 | 2006-01-05 | Pfizer Inc | RNA bioassay |
| US20100184110A1 (en) * | 2007-06-06 | 2010-07-22 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Predictive diagnostics for kidney disease |
| WO2013067498A1 (en) * | 2011-11-04 | 2013-05-10 | Tengion, Inc. | Drug screening and potency assays |
| WO2015023836A1 (en) * | 2013-08-16 | 2015-02-19 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Kim-1 as a therapeutic target in conditions associated with kidney fibrosis |
| CN104641237A (zh) * | 2012-07-20 | 2015-05-20 | 新加坡科技研究局 | 预测肾近曲小管细胞毒性的体外试验 |
| CN105803038A (zh) * | 2016-04-14 | 2016-07-27 | 天津中医药大学 | 一种基于细胞表型的多指标量化心脏毒性检测方法及其应用 |
| CN105928913A (zh) * | 2016-04-14 | 2016-09-07 | 天津中医药大学 | 一种基于细胞表型的高内涵多指标肾毒性的检测方法及其应用 |
| CN108864272A (zh) * | 2018-07-03 | 2018-11-23 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种乳腺珠蛋白a抗原表位及其应用 |
| CN109328236A (zh) * | 2016-06-17 | 2019-02-12 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 体外肾毒性筛选测定法 |
| CN110579607A (zh) * | 2018-06-08 | 2019-12-17 | 山东省农业科学院家禽研究所（山东省无特定病原鸡研究中心） | 一种fadv a病毒间接elisa抗体检测试剂盒及其应用 |
| CN111426766A (zh) * | 2020-04-17 | 2020-07-17 | 中国药科大学 | 一种药源性急性肾损伤小鼠模型的构建及评价方法 |
| US20200270340A1 (en) * | 2019-02-22 | 2020-08-27 | Singapore Health Services Pte Ltd. | Treatment of kidney injury |
| CA3147699A1 (en) * | 2019-07-19 | 2021-01-28 | Vifor (International) Ag | Ferroportin-inhibitors for the use in the prevention and treatment of kidney injuries |
-
2021
- 2021-09-29 CN CN202111149577.5A patent/CN113960302B/zh active Active
Patent Citations (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20060003345A1 (en) * | 2004-06-30 | 2006-01-05 | Pfizer Inc | RNA bioassay |
| US20100184110A1 (en) * | 2007-06-06 | 2010-07-22 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Predictive diagnostics for kidney disease |
| WO2013067498A1 (en) * | 2011-11-04 | 2013-05-10 | Tengion, Inc. | Drug screening and potency assays |
| US20140308695A1 (en) * | 2011-11-04 | 2014-10-16 | Tengion, Inc. | Drug screening and potency assays |
| CN104641237A (zh) * | 2012-07-20 | 2015-05-20 | 新加坡科技研究局 | 预测肾近曲小管细胞毒性的体外试验 |
| WO2015023836A1 (en) * | 2013-08-16 | 2015-02-19 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Kim-1 as a therapeutic target in conditions associated with kidney fibrosis |
| CN105803038A (zh) * | 2016-04-14 | 2016-07-27 | 天津中医药大学 | 一种基于细胞表型的多指标量化心脏毒性检测方法及其应用 |
| CN105928913A (zh) * | 2016-04-14 | 2016-09-07 | 天津中医药大学 | 一种基于细胞表型的高内涵多指标肾毒性的检测方法及其应用 |
| CN109328236A (zh) * | 2016-06-17 | 2019-02-12 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 体外肾毒性筛选测定法 |
| CN110579607A (zh) * | 2018-06-08 | 2019-12-17 | 山东省农业科学院家禽研究所（山东省无特定病原鸡研究中心） | 一种fadv a病毒间接elisa抗体检测试剂盒及其应用 |
| CN108864272A (zh) * | 2018-07-03 | 2018-11-23 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种乳腺珠蛋白a抗原表位及其应用 |
| US20200270340A1 (en) * | 2019-02-22 | 2020-08-27 | Singapore Health Services Pte Ltd. | Treatment of kidney injury |
| CA3147699A1 (en) * | 2019-07-19 | 2021-01-28 | Vifor (International) Ag | Ferroportin-inhibitors for the use in the prevention and treatment of kidney injuries |
| CN111426766A (zh) * | 2020-04-17 | 2020-07-17 | 中国药科大学 | 一种药源性急性肾损伤小鼠模型的构建及评价方法 |
Non-Patent Citations (9)
| Title |
|---|
| DANIELA MARIA TANASE 等: "The Predictive Role of the Biomarker Kidney Molecule-1 (KIM-1) in Acute Kidney Injury (AKI) Cisplatin-Induced Nephrotoxicity", INT. J. MOL. SCI., vol. 20, no. 20, 22 October 2019 (2019-10-22), pages 1 - 20 * |
| YANG, CHEN 等: "Asiatic acid protects against cisplatin-induced acute kidney injury via anti-apoptosis and anti-inflammation", BIOMEDICINE & PHARMACOTHERAPY, vol. 107, 3 October 2018 (2018-10-03), pages 1354 - 1362 * |
| 孙骅 等: ""马兜铃酸诱导肾小管上皮细胞损伤中Ngal和Kim-1的变化及其意义"", 《肾脏病与透析肾移植杂志》, vol. 16, no. 4, pages 340 - 344 * |
| 廖明阳;: "我国药物毒理学研究现状与展望", 中国药理学与毒理学杂志, no. 05, 15 October 2015 (2015-10-15), pages 727 - 728 * |
| 池慧钦 等: "肾毒性评价体外替代模型研究进展", 中国公共卫生, vol. 37, no. 06, 30 June 2021 (2021-06-30), pages 1035 - 1040 * |
| 汪春飞;马良;封亮;尹梅融;顾俊菲;贾晓斌;: "基于HK-2细胞的泽泻萜类组分体外肾毒性评价及其诱导细胞凋亡作用的探究", 中国中药杂志, no. 03, pages 490 - 497 * |
| 肖珠 等: ""利用高内涵分析技术进行药物肾细胞毒性筛选的研究"", 《中国药学杂志》, vol. 52, no. 14, pages 1246 - 1250 * |
| 肖珠;王志斌;郑虎占;王立娜;高阳;程源;胡宇驰;: "利用高内涵分析技术进行药物肾细胞毒性筛选的研究", 中国药学杂志, no. 14 * |
| 邱彩霞;杨翠平;靳洪涛;: "药源性肾损伤发生机制研究进展", 中国药物警戒, no. 11, 15 November 2019 (2019-11-15), pages 53 - 59 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116912825A (zh) * | 2023-09-14 | 2023-10-20 | 生态环境部华南环境科学研究所(生态环境部生态环境应急研究所) | 利用人工智能和机器学习的高内涵化学品肺毒性筛查方法 |
| CN116912825B (zh) * | 2023-09-14 | 2023-11-24 | 生态环境部华南环境科学研究所(生态环境部生态环境应急研究所) | 利用人工智能和机器学习的高内涵化学品肺毒性筛查方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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