CN112781961A - 一种细胞快速染色液及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种快速染色液及其应用方法，属于生物技术领域，具体涉及动物或人体细胞的快速染色方法。本发明提供的染色液操作简便，染色均匀，染色后细胞结构清晰，细胞着色鲜艳，易于显微镜下观察判断。
Description
技术领域
本发明涉及一种细胞染色液，具体涉及一种细胞的快速染色液及其配制方法。
背景技术
在对疾病进行诊断的过程中，经常需要使用显微镜对取自人体的细胞形态进行观察，来识别细胞的类型和判断细胞的变化，而为了便于显微镜观察，常需要先将细胞涂布在玻片上并进行适当的染色，使细胞的不同结构呈现不同的颜色。目前临床病理工作中对于取自人体的细胞主要是采用传统的苏木素-伊红(HE)、姬姆萨(Giemsa)、巴氏(Papanicolaou)、瑞氏(Wright)等染色技术进行细胞染色。染色就是利用染料分子中的“发色团”与细胞内的某种成分发生亲和作用，从而产生不同的颜色。目前已知的亲和作用有物理作用(如溶解性、吸附性等)、化学反应(如酸碱性)、促染剂作用、分化剂作用等，有一些亲和作用仍不清楚。
HE染色是临床病理工作中最经常和最广泛使用的一种常规染色方法。其中苏木素的染色原理是使其氧化后产生苏木红(酸性染料)，苏木红和铝形成一种带正电荷的蓝色色精(碱性)，带正电荷的蓝色色精可以通过极性吸附与带负电荷的脱氧核糖核酸根发生亲和作用，再通过分化和蓝化处理使细胞核呈现蓝色。其中伊红的染色原理是负电荷并呈酸性的有色成分主要通过渗透作用与细胞浆结合而呈现粉红色。因此传统的HE染色存在以下问题：1.需要分化和蓝化处理，导致染色过程繁琐、染色时间较长；2.胞浆着色较淡，甚至出现核浆共染现象，容易导致细胞结构不清，染色不鲜明，影响判读；3.对红细胞没有作用，含血量比较大的细胞样本会造成其他细胞被红细胞覆盖而造成判读困难。
瑞氏染色的原理既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用，嗜酸性颗粒为碱性蛋白，可与酸性染料伊红结合，染成粉红色，细胞核蛋白为酸性，可与碱性染料美蓝和天青结合，染成紫蓝色；中性颗粒呈等电荷状态，可与伊红和美蓝都结合，染成淡紫色。瑞氏染色的染色时间可在10分钟左右完成，同时也比较简便，但是存在以下问题：1.瑞氏染液中同时存在酸性和碱性两种不同性质的染料，两种染料会发生中和作用从而影响最终的染色效果；2.瑞氏染色的配制需要使用甲醇溶解染粉并不断研磨，导致甲醇长时间挥发，容易对操作人员的健康造成威胁。
发明内容
本发明为克服上述现有技术所存在的不足，提供一种改良的快速细胞染色液及其应用方法。该染色液配制简便，染色步骤简捷，着色清晰鲜明，易于判读。
本发明提供了一种快速细胞染色液，包括染色液A和染色液B液。
本发明染色液A液，包括曙红Y、乙醇、亚甲蓝、冰醋酸和山梨醇。每升染色液A液包括：曙红Y 0.5～5g，亚甲蓝0.2～2g，冰醋酸80～800ml，山梨醇 1～10g，余量为乙醇。更优选每升染色液A液包括：曙红Y 1～3g，亚甲蓝0.5～1g，冰醋酸100～500ml，山梨醇2～8g，余量为乙醇。冰醋酸优选为20-50％的冰醋酸，更优选为45％的冰醋酸。乙醇优选为70％及70％以上的乙醇，更优选为95％乙醇。
本发明染色液B液，包括天青I、亚甲蓝、Na2HPO4·12H2O+KH2PO4、冰醋酸、山梨醇和水。每升染色液B液包括：天青I 0.5～5g，亚甲蓝0.8～8g， Na2HPO4·12H2O 5～50g+KH2PO46～70g，冰醋酸80～800ml，山梨醇1～10g，余量为水。更优选每升染色液B液包括：天青I 1～3g，亚甲蓝2～5g， Na2HPO4·12H2O 10～30g+KH2PO4 10～50g，冰醋酸100～500ml，山梨醇2～8g，余量为水。冰醋酸优选为20-50％的冰醋酸，更优选为45％的冰醋酸。水优选为纯化水。
本发明还提供了一种快速细胞染色方法。本发明的快速细胞染色方法，细胞样本先用本发明的染色液A液进行染色，然后再用本发明的染色液B液进行染色。
细胞样本可以是细胞涂片、细胞切片等形式。细胞涂片可通过各种方法，取得生物体体表或体内的少量细胞，均匀地涂布在一张洁净的玻片上，自然风干，得到一张该生物体的细胞涂片。
细胞样本使用本发明细胞染色液A液和B液的方式，可以是任何使细胞样本能够与染色液接触、浸泡、浸润、涂布等方式。
本发明的快速细胞染色方法，优选经染色液A液染色的细胞样本晾干或风干后，再使用染色液B液进行染色。经染色液B液染色的细胞样本晾干或风干后，可进行镜检。
本发明的快速细胞染色方法，优选细胞样本用染色液A液染色0.1-3分钟，用染色液B液染色0.1-3分钟。进一步优选细胞样本用染色液A液染色0.2-2分钟，用染色液B液染色0.2-2分钟。更优选细胞样本用染色液A液染色0.3-1.5 分钟，用染色液B液染色0.3-1.5分钟。
本发明快速细胞染色方法的一个实施方案中采用了如下步骤。
(1)通过各种方法，取得生物体体表或体内的少量细胞，均匀地涂布在一张洁净的玻片上，自然风干，得到一张该生物体的细胞涂片；
(2)使用A液均匀滴加在涂片上，静置30秒；
(3)弃去A液，将B液均匀滴加在涂片上，静置60秒；
(4)弃去B液，缓慢水流冲洗，风干后镜检。
本发明公开的细胞快速染色液使用乙醇溶解曙红Y，大大减少了甲醇对操作人员的暴露；将瑞氏染色中的两种不同性质的染料分别对细胞进行染色，避免染料内部的化学反应，提高染色效果；使用冰醋酸作为促染剂，使用山梨醇作为助渗剂，可显著加快染料的渗透和结合，提高染色效率。
本发明公开的细胞快速染色液的应用方法共约需时间为3分钟，较传统HE 染色方法显著缩短，也比瑞氏染色方法要快。此细胞快速染色液将两种染液分别对细胞染色，有利于对整个染色结果的质量控制，有利于染色的标准化推广。
附图说明
附图1和附图2为用本发明实施例1的细胞染色液和方法对胃粘膜上皮细胞染色的镜检镜检图片。
具体实施方式
下面用实施例对本发明涉及的细胞快速染色液及应用方法做进一步说明。
实施例1：
细胞快速染色液，A液其组分为：曙红Y0.5g，亚甲蓝0.2g，山梨醇1g， 95％乙醇100ml，45％冰醋酸80ml。B液其组分为：天青I 0.5g，亚甲蓝0.8g， Na2HPO4.12H2O 5.0g，KH2PO4 6.25g，山梨醇1g，45％冰醋酸80ml，纯化水500ml。
按照上述组份和用量，分别配制A液和B液。
染色步骤：
(1)将取得生物体体表或体内的细胞均匀地涂布在一张洁净的玻片上，自然风干，得到一张该生物体的细胞涂片；
(2)使用A液均匀滴加在涂片上，静置30秒；
(3)弃去A液，将B液均匀滴加在涂片上，静置60秒；
(4)弃去B液，缓慢水流冲洗，风干后镜检
实施结果：整个染色过程3分钟完成。完成后在显微镜下观察染色的效果：细胞区域背景干净无杂质，细胞着色鲜艳，核浆区分明显，染色均匀，易于判读。
附图1和附图2是采用实施例1快速染色液及染色方法对胃粘膜上皮细胞染色的镜检图片，可见细胞着色鲜艳，核浆区分明显，染色均匀，易于判读。
实施例2：
细胞快速染色液，A液其组分为：曙红Y 1g，亚甲蓝0.5g，山梨醇2g， 45％冰醋酸100ml，95％乙醇加至1000ml。B液其组分为：天青I 1g，亚甲蓝 2g，Na2HPO4.12H2O 10g，KH2PO4 10g，山梨醇1g，45％冰醋酸100ml，纯化水加至1000ml。
按照上述组份和用量，分别配制制得A液和B液。
实施例3：
细胞快速染色液，A液其组分为：曙红Y 3g，亚甲蓝1g，山梨醇8g，30％冰醋酸500ml，95％乙醇加至1000ml。B液其组分为：天青I 3g，亚甲蓝5g， Na2HPO4.12H2O 30g，KH2PO4 50g，山梨醇8g，40％冰醋酸500ml，纯化水加至 1000ml。
按照上述组份和用量，分别配制制得A液和B液。
实施例4：
细胞快速染色液，A液其组分为：曙红Y 2g，亚甲蓝0.8g，山梨醇5g， 50％冰醋酸300ml，90％乙醇加至1000ml。B液其组分为：天青I 2g，亚甲蓝3g，Na2HPO4.12H2O 20g，KH2PO430g，山梨醇5g，20％冰醋酸300ml，纯化水加至1000ml。
按照上述组份和用量，分别配制制得A液和B液。
实施例4：
细胞快速染色液，A液其组分为：曙红Y 3g，亚甲蓝0.8g，山梨醇5g， 35％冰醋酸300ml，95％乙醇加至1000ml。B液其组分为：天青I 2g，亚甲蓝 3g，Na2HPO4.12H2O 20g，KH2PO4 30g，山梨醇5g，30％冰醋酸300ml，纯化水加至1000ml。
按照上述组份和用量，分别配制制得A液和B液。
实施例5：
细胞快速染色液，A液其组分为：曙红Y 0.5g，亚甲蓝2g，山梨醇5g，45％冰醋酸200ml，85％乙醇加至1000ml。B液其组分为：天青I 0.5g，亚甲蓝 8g，Na2HPO4.12H2O 5g，KH2PO4 10g，山梨醇5g，45％冰醋酸200ml，纯化水加至1000ml。
按照上述组份和用量，分别配制制得A液和B液。
实施例6：
细胞快速染色液，A液其组分为：曙红Y 5g，亚甲蓝0.2g，山梨醇10g， 20％冰醋酸600ml，80％乙醇加至1000ml。B液其组分为：天青I 1.5g，亚甲蓝 8g，Na2HPO4.12H2O 30g，KH2PO4 50g，山梨醇1g，20％冰醋酸400ml，纯化水加至1000ml。
按照上述组份和用量，分别配制制得A液和B液。
Claims (5)
1.一种细胞快速染色液，其特征在于：包括染色液A液和染色液B液，其中A液包括曙红Y、乙醇、亚甲蓝、冰醋酸和山梨醇，其中B液包括天青I、亚甲蓝、Na2HPO4·12H2O+KH2PO4、冰醋酸、山梨醇和水。
2.根据权利要求1所述的染色液，其特征在于，每升染色液A液包括：曙红Y 0.5～5g，亚甲蓝0.2～2g，冰醋酸80～800ml，山梨醇1～10g，余量为乙醇。
3.根据权利要求1所述的染色液，其特征在于，每升染色液B液包括：天青I 0.5～5g，亚甲蓝0.8～8g，Na2HPO4·12H2O 5～50g+KH2PO4 6～70g，冰醋酸80～800ml，山梨醇1～10g，余量为水。
4.一种快速细胞染色方法，其特征在于使用根据权利要求1中的A液和B液先后对细胞样本染色。
5.根据权利要求4所述的细胞染色方法，其特征为包括如下步骤：
(1)通过各种方法，取得生物体体表或体内的少量细胞，均匀地涂布在一张洁净的玻片上，自然风干，得到一张该生物体的细胞涂片；
(2)使用A液均匀滴加在涂片上，静置30秒；
(3)弃去A液，将B液均匀滴加在涂片上，静置60秒；
(4)弃去B液，缓慢水流冲洗，风干，显微镜下观察。
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2019
- 2019-11-07 CN CN201911065182.XA patent/CN112781961A/zh active Pending
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