CN107490511B - 一种苏木素染色液和he染色方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种苏木素染色液，所述苏木素染色液包括以下组分：苏木精、无水乙醇、硫酸铝钾、蒸馏水、碘酸钠和冰醋酸；所述苏木精、无水乙醇、硫酸铝钾、蒸馏水、碘酸钠和冰醋酸的重量体积比为苏木精：无水乙醇：硫酸铝钾：蒸馏水：碘酸钠：冰醋酸＝5g：450‑550mL：36‑44g：1350‑1650ml：0.45‑0.55g：18‑22ml。本发明还提供了一种HE染色方法，其优点是：1、减少人体损害；2、减少对环境的污染和对水体的污染；3、同量的苏木素染液，在染色质量保证的情况下可染的组织切片量增加1倍，利用率大大增加；4、在染色质量保证的前提下，染色时间节约5倍，效率大大增加；5、HE染色的着色效果更清晰，鲜明。
Description
技术领域
本发明涉及一种苏木素染色液和HE染色方法。
背景技术
苏木精伊红染色方法，简称HE染色，是组织学、胚胎学、病理学中使用最为广泛的技术方法。HE染色是将组织切片或细胞涂片等分别浸入苏木素染色液和伊红染色液中，经过适当的时间和处理，使组织、细胞及其他成分染上不同深浅的颜色，产生不同的折射率，从而便于光学显微镜下进行观察和研究。
苏木精是一种天然染料，是由中南美洲等地产的一种称“洋苏木树”的树芯中抽提出来，苏木精本身无染色能力，只有经过氧化而成为苏木红才具有染色能力，才成为一种染料。
现有的HE染色液配制使用中，遇到季节更替，或是较冷的环境中，染色时间会延长，降低工作效率，着色效果差，细胞核的上色不鲜明；
常规HE染色过程，使用二甲苯进行脱蜡处理，和使用二甲苯进行透明封固，对人体伤害很大。
发明内容
为了克服现有技术中的不足，本发明的目的在于提供一种就算是遇到季节更替或者较冷的环境，染色时间也不会延长，并且HE染色着色效果更清晰，鲜明的苏木素染色液配制方法和HE染色方法。
为实现上述目的，所采取的技术方案：一种苏木素染色液，所述苏木素染色液包括以下组分：苏木精、无水乙醇、硫酸铝钾、蒸馏水、碘酸钠和冰醋酸；所述苏木精、无水乙醇、硫酸铝钾、蒸馏水、碘酸钠和冰醋酸的重量体积比为苏木精：无水乙醇：硫酸铝钾：蒸馏水：碘酸钠：冰醋酸＝5g：450-550mL：36-44g：1350-1650ml：0.45-0.55g：18-22ml。
优选地，所述苏木素染色液包括以下组分：苏木精、无水乙醇、硫酸铝钾、蒸馏水、碘酸钠和冰醋酸；所述苏木精、无水乙醇、硫酸铝钾、蒸馏水、碘酸钠和冰醋酸的重量体积比为苏木精：无水乙醇：硫酸铝钾：蒸馏水：碘酸钠：冰醋酸＝5g：500mL：40g：1500ml：0.5g：20ml。
优选地，所述制备方法包括以下步骤：
将苏木精溶于无水乙醇得到甲液；将硫酸铝钾溶于蒸馏水，加热溶解得到乙液；待乙液恢复至室温后，将甲液和乙液混合后搅拌均匀，加入碘酸钠，然后加入冰醋酸，得到苏木素染色液。
本发明提供了一种染色试剂盒，所述染色试剂盒包括上述所述的苏木素染色液。
优选地，所述染色试剂盒为HE染色试剂盒或者巴氏染色试剂盒。
本发明提供了一种采用上述所述的染色试剂盒的染色方法，所述染色方法是采用上述所述的苏木素染色液进行染色。
本发明提供了一种HE染色试剂盒，所述HE染色试剂盒包括伊红染色液和上述所述的苏木素染色液。
优选地，所述HE染色试剂盒还包括TO透明剂和石炭酸TO。更优选地，所述石炭酸TO中石碳酸与TO以1:4的体积比例混合，用于透明，可使片子更通透；石碳酸有良好的吸水性，在透明过程中吸掉冲洗带入的水分，可有效消除水膜，使得玻片通透。
本发明提供了一种HE染色方法，所述HE染色方法是采用上述所述的HE染色试剂盒进行染色。
本发明提供了一种采用上述所述的HE染色试剂盒的HE染色方法，所述HE染色方法包括以下步骤：
(1)脱蜡
将组织切片在TO透明剂中脱蜡三次，每次脱蜡的温度为30-50℃，每次脱蜡的时间均为3min；
(2)组织入水
将脱完蜡之后的切片采用高浓度到低浓度的梯度酒精依次进行组织进水过程，然后水洗；
(3)染色
水洗之后，将切片在苏木素染色液中染色，染色温度为30-40℃，染色时间为1～3min，然后水洗，进行分化返蓝，水洗，然后采用伊红染色液着色；
(4)组织脱水
伊红染色液着色后，采用低浓度到高浓度的梯度酒精依次进行组织脱水；
(5)组织透明
组织酒精脱水完成后，将切片在石炭酸TO中进行透明；
(6)封固
将透明后的切片封固。
优选地，所述步骤(2)中高浓度到低浓度的梯度酒精是体积浓度为100％到体积浓度为75％的梯度酒精；
所述步骤(4)中低浓度到高浓度的梯度酒精是体积浓度为75％到体积浓度为100％的梯度酒精。
本发明研究和开发出一种HE染色方法及苏木素染液配方和配置方法，其优点是：1、减少人体损害；2、减少对环境的污染和对水体的污染；3、同量的苏木素染液，在染色质量保证的情况下可染的组织切片量增加1倍，利用率大大增加；4、在染色质量保证的前提下，染色时间节约5倍，效率大大增加；5、HE染色的着色效果更清晰，鲜明。
与现有技术相比，本发明所述苏木素染色液配方具有以下优势：
1)使用半量碘酸钠(相对于现有已知苏木素染色液)作为氧化剂，避免更多的过氧化物形成，染色液无氧化膜行成，染色切片干净无异染；2)未添加甘油，染色过程中不会形成“油包水”，从而增加了染液的染色能力，提升细胞核着色的清晰度；3)、本发明使用半量碘酸钠，使60％左右的苏木素氧化，苏木素可以在自然条件下被缓慢氧化，本发明染色过程中，在30～40℃环境中加速氧化；因此，本发明苏木素染色液成逐渐氧化状态，在一定的使用范围内，染色能力逐渐提升。
HE染色方法：
HE的染色方法已经很成熟了，一般包括以下步骤：脱蜡，组织入水，苏木素染色，分化，返蓝，伊红，组织脱水，组织透明；我们的方法在于脱蜡，苏木素染色，组织透明中的变化。
与现有技术相比，本发明HE染色方法具有以下优势：
(1)用TO透明剂(一种危害较二甲苯小的环保生物制剂)代替二甲苯进行脱蜡，减少对人体的损害；
(2)TO透明剂可进行加热，脱蜡的质量和速度高过使用二甲苯；
(3)增加了苏木素染液的使用率；
(4)提升了整个染色过程的效率。
附图说明
图1为使用常规苏木素染色液进行HE染色的切片图片；
图2为使用本方法所述苏木素染色液和常规HE染片方法进行HE染色的切片图片；
图3为使用本发明的苏木素染色液及本发明HE染色方法得到的切片图片。
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
将HE染色现有常规方法和本发明所述HE染色方法进行对比，结果如表1所示，从表1可以看出，整个染色过程的效率更高，用时比现有技术常规方法短。
表1常规方法和本方法染色过程对比
本发明使用石炭酸TO透明，使HE片子透明度更好。
本发明所述苏木素染色液和本发明HE染色方法共同实践并与现有技术进行了相应的比对，结果如表2所示，从表2结果可以看出，相同条件下，本发明所述苏木素染色液使用时间更长，本发明所述苏木素染色液可染组织总张数更多。
表2现有技术HE染色方法和本发明所述HE染色方法的效果对比
将现有常规苏木素和本发明苏木素染色液，现有常规HE染色方法和本发明所述HE染色方法进行对比，以宫颈组织切片作为染色对象，对比结果如图1-3所示。
附图1：使用常规苏木素和常规HE染片方法进行HE染色，效果不理想，HE染片有异染，且染色不清晰；
附图2：使用本发明苏木素染色液和常规HE染片方法进行HE染色，染片细胞核染色质更加清晰，细胞着色更加鲜艳。
附图3：使用本发明的苏木素染色液及本发明HE染色方法，得到染色清晰，鲜明的切片，染片质量相当。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (10)
1.一种苏木素染色液，其特征在于，所述苏木素染色液包括以下组分：苏木精、无水乙醇、硫酸铝钾、蒸馏水、碘酸钠和冰醋酸；所述苏木精、无水乙醇、硫酸铝钾、蒸馏水、碘酸钠和冰醋酸的重量体积比为苏木精：无水乙醇：硫酸铝钾：蒸馏水：碘酸钠：冰醋酸＝5g：450-550mL：36-44g：1350-1650ml：0.45-0.55g：18-22ml；每500ml所述苏木素染色液的可染组织总张数为7800张。
2.根据权利要求1所述的苏木素染色液，其特征在于，所述苏木精、无水乙醇、硫酸铝钾、蒸馏水、碘酸钠和冰醋酸的重量体积比为苏木精：无水乙醇：硫酸铝钾：蒸馏水：碘酸钠：冰醋酸＝5g：500mL：40g：1500ml：0.5g：20ml。
3.如权利要求1或2所述的苏木素染色液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
将苏木精溶于无水乙醇得到甲液；将硫酸铝钾溶于蒸馏水，加热溶解得到乙液；待乙液恢复至室温后，将甲液和乙液混合后搅拌均匀，加入碘酸钠，然后加入冰醋酸，得到苏木素染色液。
4.一种染色试剂盒，其特征在于，所述染色试剂盒包括如权利要求1或2所述的苏木素染色液。
5.一种采用如权利要求4所述的染色试剂盒的染色方法，其特征在于，所述染色方法是采用如权利要求1或2所述的苏木素染色液进行染色。
6.一种HE染色试剂盒，其特征在于，所述HE染色试剂盒包括伊红染色液和如权利要求1或2所述的苏木素染色液。
7.根据权利要求6所述的HE染色试剂盒，其特征在于，所述HE染色试剂盒还包括TO透明剂和石炭酸TO。
8.一种HE染色方法，其特征在于，所述HE染色方法是采用如权利要求6所述的HE染色试剂盒进行染色。
9.一种采用如权利要求6所述的HE染色试剂盒的HE染色方法，其特征在于，所述HE染色方法包括以下步骤：
(1)脱蜡
将组织切片在TO透明剂中脱蜡三次，每次脱蜡的温度为30-50℃，每次脱蜡的时间均为3min；
(2)组织入水
将脱完蜡之后的切片采用高浓度到低浓度的梯度酒精依次进行组织进水过程，然后水洗；
(3)染色
水洗之后，将切片在苏木素染色液中染色，染色温度为30-40℃，染色时间为1～3min，然后水洗，进行分化返蓝，水洗，然后采用伊红染色液着色；
(4)组织脱水
伊红染色液着色后，采用低浓度到高浓度的梯度酒精依次进行组织脱水；
(5)组织透明
组织酒精脱水完成后，将切片在石炭酸TO中进行透明；
(6)封固
将透明后的切片封固。
10.根据权利要求9所述的HE染色方法，其特征在于，所述步骤(2)中高浓度到低浓度的梯度酒精是体积浓度为100％到体积浓度为75％的梯度酒精；
所述步骤(4)中低浓度到高浓度的梯度酒精是体积浓度为75％到体积浓度为100％的梯度酒精。
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