RU2536502C2 - Цитологическая и гистологическая фиксирующая композиция и способ окрашивания - Google Patents
Цитологическая и гистологическая фиксирующая композиция и способ окрашивания Download PDFInfo
- Publication number
- RU2536502C2 RU2536502C2 RU2012106300/05A RU2012106300A RU2536502C2 RU 2536502 C2 RU2536502 C2 RU 2536502C2 RU 2012106300/05 A RU2012106300/05 A RU 2012106300/05A RU 2012106300 A RU2012106300 A RU 2012106300A RU 2536502 C2 RU2536502 C2 RU 2536502C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- solution
- staining
- contacting
- cells
- composition
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 74
- 238000007447 staining method Methods 0.000 title description 13
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 title description 4
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 79
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 61
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 60
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 55
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims abstract description 55
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 44
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 40
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 33
- 229910001868 water Inorganic materials 0.000 claims abstract description 32
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 30
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 30
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 21
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 19
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 18
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 claims abstract description 12
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000001044 red dye Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims abstract description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 42
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 claims description 15
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims description 13
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 13
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical group C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 claims description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 12
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 11
- 238000004040 coloring Methods 0.000 claims description 8
- DNDJEIWCTMMZBX-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethyl-7-methyliminophenothiazin-3-amine;hydrochloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(=[N+](C)C)C=C2SC3=CC(NC)=CC=C3N=C21 DNDJEIWCTMMZBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- AGIJRRREJXSQJR-UHFFFAOYSA-N 2h-thiazine Chemical group N1SC=CC=C1 AGIJRRREJXSQJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000012128 staining reagent Substances 0.000 claims description 5
- 239000006153 eosin methylene blue Substances 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical group [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- IINNWAYUJNWZRM-UHFFFAOYSA-L erythrosin B Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(I)C(=O)C(I)=C2OC2=C(I)C([O-])=C(I)C=C21 IINNWAYUJNWZRM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 229940011411 erythrosine Drugs 0.000 claims description 2
- 235000012732 erythrosine Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004174 erythrosine Substances 0.000 claims description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 229960001760 dimethyl sulfoxide Drugs 0.000 abstract 3
- 229940093476 ethylene glycol Drugs 0.000 abstract 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 17
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 13
- YYRMJZQKEFZXMX-UHFFFAOYSA-L calcium bis(dihydrogenphosphate) Chemical compound [Ca+2].OP(O)([O-])=O.OP(O)([O-])=O YYRMJZQKEFZXMX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 6
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 6
- 229910000150 monocalcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000019691 monocalcium phosphate Nutrition 0.000 description 6
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 5
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 5
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 3
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 3
- -1 thiazine group compound Chemical class 0.000 description 3
- 238000002738 Giemsa staining Methods 0.000 description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 208000035404 Autolysis Diseases 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PPWHTZKZQNXVAE-UHFFFAOYSA-N Tetracaine hydrochloride Chemical compound Cl.CCCCNC1=CC=C(C(=O)OCCN(C)C)C=C1 PPWHTZKZQNXVAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 125000003158 alcohol group Chemical group 0.000 description 1
- 230000005859 cell recognition Effects 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- JEGUKCSWCFPDGT-UHFFFAOYSA-N h2o hydrate Chemical compound O.O JEGUKCSWCFPDGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N picric acid Chemical compound OC1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000028043 self proteolysis Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к композиции для фиксации тканей и/или клеток, и/или клеточных структур на предметных стеклах в целях их окрашивания и их анализа под микроскопом или с помощью системы анализа изображений, к применению данной композиции и вариантам способа ее получения, а также к вариантам способа окрашивания структур с ее использованием. Композиция содержит по меньшей мере следующие соединения (процентные содержания указаны в расчете на полную массу композиции): от 40 до 60% этанола и/или изопропанола, диметилсульфоксид, от 0,1 до 1% этиленгликоля, от 2 до 12% воды и от 0,1 до 0,5% хлорида натрия. Способ получения композиции включает по меньшей мере смешение этанола и/или изопропанола с этиленгликолем, чтобы получить раствор 1, растворение хлорида натрия в воде, чтобы получить раствор 2, добавление раствора 2 в раствор 1 при перемешивании с получением раствора 3, затем добавление диметилсульфоксида и фильтрацию. Также способ может включать стадию приготовления раствора 4, содержащего по меньшей мере диметилсульфоксид, синий краситель и красный краситель, который затем смешивают с раствором 3. Способ окрашивания клеток или клеточных структур, в частности для крови и костного мозга, включает по меньшей мере контактирование окрашиваемого препарата с указанной фиксирующей композицией, причем время контактирования может составлять 5-8 минут. Затем осуществляют контактирование зафиксированного препарата с буферным раствором, рН которого составляет от 6,5 до 7,0. Также возможно использование при окрашивании буферного раствора с рН от 6,8 до 7, 2, причем время контактирования зафиксированного препарата с таким раствором составляет 2-3 минуты. И после осуществляют контактирование препарата с промывным раствором, время контактирования с промывным раствором может составлять 5-20 секунд. Достигаемый при этом технический результат заключается в эффективном удерживания клеток в целях их окрашивания для обеспечения возможности поучения воспроизводимых и стабильных результатов. 9 н. и 4 з.п. ф-лы, 2 пр., 16 ил.
Description
Настоящее изобретение относится к композиции для фиксации тканей, клеток или компонентов клеток на предметных стеклах в целях их окрашивания и анализа.
Изобретение относится также к способу получения этого фиксатора и к его применению в гистологии или цитологии. Особым применением настоящего изобретения является способ окрашивания тканей, клеток или компонентов клеток, в частности для крови и костного мозга, с использованием этого фиксатора.
Для идентификации тканей, клеток или частей клеток используют методы окрашивания клеток, комбинируемые с исследованием под микроскопом или с помощью систем анализа изображений.
Эти методы окрашивания необходимы во многих областях биологии, а также в фундаментальных исследованиях, например в медицинском или ветеринарном анализе для гистологической диагностики или цитодиагностики.
В частности, в гематологии уже очень много лет используют окрашивание, известное под названием МГГ (от Май-Грюнвальд/Гимза). Этот способ окрашивания состоит в:
- фиксации клеток, которые требуется окрасить, на предметном стекле раствором Май-Грюнвальда, состоящим из эозин-метиленового синего, растворенного в метаноле,
- контактировании предметного стекла с буферным раствором,
- затем в контактировании с раствором Гимза, состоящим из синего и азур II-эозина, растворенного в метаноле, с глицерином,
- и, наконец, в промывке предметного стекла и сушке.
В этом случае получают окрашивания, известные всем практикующим врачам, что делает этот метод стандартным и позволяет устанавливать надежное сравнение.
Однако окрашивание по МГГ имеет много недостатков. В частности, в нем используются токсичные и летучие растворители. Кроме того, присутствие глицерина также создает неудобства, так как он затрудняет промывку предметных стекол и может вызвать забивку фильтров при фильтрации.
Кроме того, чтобы получить хорошее окрашивание, важно, чтобы краситель был стабильным и не оставлял отложений красителей после промывки предметного стекла. Однако при использовании МГГ такие отложения могут появляться. Эти отложения мешают работе автоматических устройств окрашивания и систем распознавания клеток и затрудняют распознавание разных клеточных элементов и различение здоровых клеток и больных клеток в случае цитодиагностики.
Чтобы устранить эти недостатки, были попытки заменить МГГ другими способами окрашивания.
Однако большинство способов, разработанных для замены МГГ, не позволяют ни сохранить воспроизводимость, важнейшую для анализа, ни получить сравнимые результаты.
Кроме того, как и способ МГГ, они используют метанол как для получения самих красителей, так и раствора для фиксации клеток. Действительно, метанол имеет особые физические свойства, которые позволяют ему хорошо фиксировать клетки.
Однако метанол является токсичным и летучим продуктом, использование которого желательно ограничить, так как он может оказаться опасным для врача-практика.
Предлагались решения заменить метанол этанолом, но один этанол не дает удовлетворительных результатов, в частности, когда он применяется для фиксации.
Другие решения состоят в использовании в качестве фиксатора клеточных структур пикриновой кислоты, формальдегида, глутаральдегида или же осмиевой кислоты.
Однако хотя полученные результаты могут быть качественными, присутствие токсичных продуктов влечет опасность для людей, вынужденных обращаться с ними.
Кроме того, с созданием систем анализа изображений необходимо использовать окрашивающие автоматы, чтобы всегда обеспечивать идентичное протекание стадий окрашивания. Однако при современных реагентах и продуктах фиксации эти автоматы требуют сложного обслуживания, так как эти реагенты и продукты вызывают быстрое засорение схем и емкостей.
Наконец, известно, что исторически сложилось так, что в разных странах окрашивающие реактивы могут быть разными, даже в одной и той же области биологии. Это отражается в разных цветах и более или менее резкой визуализации того или иного типа клеточного элемента. В гематологии классически различают окрашивания, использующие комбинацию окрашивающих реагентов (как краситель МГГ, применяющийся в странах "европейской культуры"), и окрашивания, в которых применяется единственный окрашивающий реактив (как красители Райта и Лейшмана, использующиеся в странах "англосаксонской или азиатской культуры"). Однако применяющиеся в настоящее время фиксирующие растворы являются специфическими для данного способа окрашивания, и нельзя использовать один и тот же фиксатор для двух разных способов.
Таким образом, существует потребность в продуктах, предназначенных для окрашивания тканей, клеток или компонентов клеток, нетоксичных, стабильных, недорогих, легких в обращении, позволяющих получать воспроизводимые результаты и подходящие для окрашивающих автоматов. В частности, существует потребность в продукте для фиксации тканей, клеток или клеточных элементов на предметных стеклах в целях их исследования под микроскопом, который отвечает этим требованиям и который подходит для разных способов окрашивания.
На эти потребности отвечает настоящее изобретение, предлагая использовать гистологическую или цитологическую фиксирующую композицию, ослабляющую недостатки предшествующего уровня, особенно хорошо подходящую в области гематологии.
С этой целью изобретение направлено на применение композиции, содержащей по меньшей мере:
- спирт,
- диметилсульфоксид,
- этиленгликоль,
- воду и
- хлорид натрия,
для фиксации тканей, клеток или компонентов клеток на предметном стекле в целях их окрашивания и их микроскопического исследования или исследования системой анализа изображений.
Изобретение относится также к используемой гистологической или цитологической фиксирующей композиции или фиксатору.
Предпочтительно такая фиксирующая композиция не содержит токсичных продуктов. Она позволяет эффективно удерживать клетки в целях их окрашивания, чтобы получить воспроизводимые и стабильные результаты, которые можно легко исследовать под микроскопом или системами анализа изображений.
Изобретение относится также к способу получения этой композиции.
Предпочтительно фиксирующая композиция содержит также по меньшей мере один синий краситель и по меньшей мере один красный краситель и может использоваться одновременно для фиксации и окрашивания клеток.
Наконец, изобретение относится также к способу окрашивания клеток или клеточных элементов, подходящему, в частности, для крови и костного мозга, с использованием этой фиксирующей композиции.
Предпочтительно способ согласно изобретению позволяет получить воспроизводимые результаты очень хорошего качества. Кроме того, он является экономичным, быстрым, надежным, легким в применении и требует лишь низкого содержания красителей.
Далее изобретение будет описано подробно в сочетании с приложенными фигурами, на которых:
- фиг.1a показывает мазок крови перед окрашиванием по способу МГГ,
- фиг.1b показывает мазок крови после окрашивания по способу МГГ с плохой фиксацией,
- фиг.1c показывает мазок крови после окрашивания по Райту,
- фиг.1d показывает мазок крови после окрашивания по Лейшману,
- фиг.2a показывает мазок крови после фиксации и окрашивания композицией согласно изобретению, в результате применения способа окрашивания по МГГ,
- фиг.2b показывает мазок крови после фиксации и окрашивания композицией согласно изобретению, в результате применения способа окрашивания по Райту/Лейшману,
- фиг.3a показывает мазок крови после быстрого окрашивания согласно способу, содержащему этап предварительной фиксации в течение 1 минуты смесью 70°-ный этанол + 2% этиленгликоля,
- фиг.3b показывает мазок крови после быстрого окрашивания согласно способу, содержащему этап предварительной фиксации в течение 1 минуты смесью 99,9°-ный этанол + 2% этиленгликоля,
- фиг.3c показывает мазок крови после быстрого окрашивания согласно способу, содержащему этап предварительной фиксации в течение 5 минут смесью 99,9°-ный этанол + 2% этиленгликоля,
- фиг.4 показывает мазок крови после быстрого окрашивания согласно способу, содержащему этап предварительной фиксации в течение 5 минут смесью 99,9°-ный этанол + 2% этиленгликоля + диметилсульфоксид,
- фиг.5a показывает мазок крови после быстрого окрашивания согласно способу, содержащему этап предварительной фиксации в течение 5 минут смесью 99,9°-ный этанол + 2% этиленгликоля + диметилсульфоксид + 5 мл воды,
- фиг.5b показывает мазок крови после быстрого окрашивания согласно способу, содержащему этап предварительной фиксации в течение 5 минут смесью 99,9°-ный этанол + 2% этиленгликоля + диметилсульфоксид + 10 мл воды,
- фиг.5c показывает мазок крови после быстрого окрашивания согласно способу, содержащему этап предварительной фиксации в течение 5 минут смесью 99,9°-ный этанол + 2% этиленгликоля + диметилсульфоксид + 20 мл воды,
- фиг.6a показывает мазок крови после быстрого окрашивания согласно способу, содержащему этап предварительной фиксации в течение 5 минут смесью 99,9°-ный этанол + 2% этиленгликоля + диметилсульфоксид + 5 мл воды + 0,1 г хлорида натрия,
- фиг.6b показывает мазок крови после быстрого окрашивания согласно способу, содержащему этап предварительной фиксации в течение 5 минут смесью 99,9°-ный этанол + 2% этиленгликоля + диметилсульфоксид + 5 мл воды + 0,3 г хлорида натрия, и
- фиг.6c показывает мазок крови после быстрого окрашивания согласно способу, содержащему этап предварительной фиксации в течение 5 минут смесью 99,9°-ный этанол + 2% этиленгликоля + диметилсульфоксид + 5 мл воды + 0,2 г хлорида натрия.
Изобретение относится к применению для осуществления фиксации тканей, и/или клеток, и/или клеточных структур на предметном стекле в целях их окрашивания и их микроскопического исследования или исследования с помощью системы анализа изображений, композиции, содержащей по меньшей мере один спирт, диметилсульфоксид, этиленгликоль, воду и хлорид натрия.
Предпочтительно, композицию используют для фиксации клеток и/или клеточных структур крови или костного мозга.
Композиция может также предпочтительно содержать один или несколько красителей и применяться для осуществления одновременной фиксации и окрашивания тканей, и/или клеток, и/или клеточных структур.
Изобретение относится также к особой гистологической или цитологической фиксирующей композиции, называемой также фиксатором.
Под фиксирующей композицией, или фиксатором, в контексте настоящего изобретения понимается реагент, позволяющий остановить процессы аутолиза клеток и тканей, чтобы сохранить их в виде, как можно более близком тому, какой они имели в живом состоянии. Таким образом, такой реагент позволяет не нарушать морфологию и иммобилизовать клетки и ткани в целях получения микроскопических препаратов, которые можно бы было хранить. Он должен также позволять проводить дополнительные обработки, такие как окрашивание, гистохимические или иммунологические реакции, чтобы выявить некоторые структурные, функциональные или генетические аспекты клеток и тканей.
Композиция содержит по меньшей мере один спирт, диметилсульфоксид, этиленгликоль, воду и хлорид натрия.
Спирт может быть выбран из любых нетоксичных спиртов. Предпочтительно спирт является этанолом или изопропанолом.
Можно также использовать смесь спиртов.
Согласно одному особенно подходящему варианту осуществления, спирт является этанолом. Вода может быть деминерализованной водой или деионизованной водой.
Чтобы достичь лучшей эффективности композиции, вода и хлорид натрия должны присутствовать в особых пропорциях. Так, согласно одному особенно подходящему варианту осуществления, хлорид натрия содержится в количестве от 0,1 до 0,5% от полной массы композиции, а вода в количестве от 2 до 12%, предпочтительно от 2,6 до 8,0% от полной массы композиции. Еще более предпочтительно содержание хлорида натрия составляет от 0,2 до 0,3%, а воды от 3 до 6%. Также спирт составляет от 40 до 60% от полной массы композиции и этиленгликоль от 0,1 до 1% от полной массы композиции. Еще более предпочтительно, содержание спирта составляет от 50 до 60%, а этиленгликоля от 0,1 до 0,5%.
Кроме того, особенно интересные результаты получаются, когда содержание ДМСО составляет от 30 до 40% от полной массы композиции.
Сравнивая разные фиг.3a-6c, можно утверждать, что важно присутствие каждого из компонентов: спирта, этиленгликоля, диметилсульфоксида, хлорида натрия и воды. Именно смесь этих особых составляющих дает возможность композиции фиксировать клетки, которые позднее можно легко окрасить и исследовать.
На фиг.3a-6c клетки фиксированы композициями, содержащими все или часть компонентов композиции согласно изобретению, затем они окрашены методом быстрого окрашивания, какой используется в наборе RAL 555 (RAL®): предметное стекло с зафиксированным веществом погружают в первый красный краситель на 5 секунд, затем в синий краситель на 5 секунд и, наконец, предметное стекло промывают и сушат. Полученные результаты лучше, когда в фиксирующей композиции присутствуют спирт, этиленгликоль, диметилсульфоксид, хлорид натрия и вода.
Композиция согласно изобретению может быть получена способом, включающим проведение по меньшей мере следующих стадий:
- смешение спирта и этиленгликоля, чтобы получить раствор 1,
- растворение хлорида натрия в воде, чтобы получить раствор 2,
- добавление раствора 2 в раствор 1 при перемешивании, затем добавление диметилсульфоксида и
- фильтрация.
В одном варианте фиксирующая композиция согласно изобретению содержит также по меньшей мере один синий краситель и по меньшей мере один красный краситель.
Синий краситель может быть выбран из метиленового синего, и/или азура I, и/или синего красителя, относящегося к группе тиазинов.
Красный краситель может быть выбран из эозина и/или эритрозина.
Предпочтительно, синий и красный красители растворяют в диметилсульфоксиде.
Согласно одному особенно подходящему варианту осуществления, композиция по изобретению содержит:
- диметилсульфоксид,
- спирт, например этанол или изопропанол, или смесь спиртов,
- этиленгликоль,
- воду,
- хлорид натрия,
- эозин-метиленовый синий,
- эозин-азур I,
- метиленовый синий,
- азур I метиленового синего и
- соединение группы тиазинов.
В частности, композиция согласно изобретению может содержать:
- около 32% (по объему) ДМСО,
- около 63% (по объему) спирта,
- около 0,1% (по объему) этиленгликоля,
- около 4,9% (по объему) воды,
- около 20% (в расчете на вес сухих веществ) эозин-метиленового синего,
- около 20% (в расчете на вес сухих веществ) азур I-эозина,
- около 8% (в расчете на вес сухих веществ) метиленового синего,
- около 8% (в расчете на вес сухих веществ) азур I метиленового синего,
- около 4% (в расчете на вес сухих веществ) соединения группы тиазинов и
- около 40% (в расчете на вес сухих веществ) хлорида натрия.
Предпочтительно такая композиция позволяет одновременно провести окрашивание и фиксацию тканей, клеток или компонентов клеток.
Она может быть получена способом, включающим проведение по меньшей мере следующих стадий:
- приготовление раствора 4, содержащего по меньшей мере диметилсульфоксид, синий краситель и красный краситель,
- смешение спирта и этиленгликоля, чтобы получить раствор 1,
- растворение хлорида натрия в воде, чтобы получить раствор 2,
- добавление раствора 2 в раствор 1 при перемешивании, чтобы получить раствор 3,
- добавление раствора 3 при перемешивании в раствор 4 и
- фильтрация.
Красители раствора 4 растворяют в ДМСО.
Спирт предпочтительно является этанолом.
Предпочтительно фиксатор согласно изобретению не содержит токсичных продуктов, позволяя одновременно хорошую фиксацию тканей, клеток и клеточных структур. Он особенно хорошо подходит для фиксации мазков крови и костномозгового вещества.
Согласно другому преимуществу, фиксирующая композиция может использоваться разными способами и применяться с разными способами окрашивания, как с теми, в которых используется комбинация окрашивающих реагентов, так и с теми, в которых используется единственный окрашивающий реактив.
Тем не менее, изобретение направлено на особые способы окрашивания, в которых применяется этот фиксатор. Речь идет о способах окрашивания клеток или клеточных структур, в частности для крови и костного мозга.
Эти способы включают по меньшей мере одну стадию, состоящую в контакте окрашиваемого препарата с фиксирующей композицией, являющейся объектом изобретения.
В первом варианте способ окрашивания включает по меньшей мере следующие стадии:
- контактирование окрашиваемого препарата, например, предметного стекла, на которое нанесены мазки крови или костномозгового вещества для анализа, с фиксирующей композицией согласно изобретению, предпочтительно в течение 5-10 минут;
- контактирование зафиксированного препарата с буферным раствором, pH которого составляет от 6,5 до 7, предпочтительно в течение 3-8 минут, чтобы запустить и управлять процессом окрашивания, подготовленным фиксатором по изобретению; на этой стадии может быть выгодным не удалять весь фиксатор при проведении в буферный раствор,
- контактирование, возможно при легком перемешивании, препарата с промывным раствором, предпочтительно в течение 5-20 секунд, функциями которого является остановить окрашивание, удаляя лишние красители, и улучшить окрашивание клеточных структур.
Этот способ соответствует окрашиванию типа "окрашивание по Райту/Лейшману".
Согласно второму варианту, способ окрашивания включает по меньшей мере следующие стадии:
- контактирование окрашиваемого препарата с фиксирующей композицией согласно изобретению, предпочтительно в течение 5-8 минут,
- контактирование связанного препарата с буферным раствором, pH которого составляет от 6,8 до 7,2, предпочтительно от 2 до 3 минут, чтобы запустить и управлять процессом окрашивания, подготовленным фиксатором по изобретению,
- контактирование, возможно при легком перемешивании, препарата с дополнительным окрашивающим реактивом, предпочтительно в течение 1-3 минут, который действует в буферной среде и позволяет улучшить окрашивание для определенных условий применения,
- контактирование препарата с промывным раствором, предпочтительно 5-20 секунд.
Этот способ соответствует окрашиванию по типу "Май-Грюнвальд/Гимза".
Буфер, используемый для осуществления способов по изобретению, может состоять из воды, динатрийфосфата, монокальцийфосфата, противомикробного средства и неионного ПАВа.
Дополнительный окрашивающий реактив может состоять из метиленового синего, азур I-метиленового синего и соединения группы тиазинов, растворенного в ДМСО, и динатрийфосфата и монокальцийфосфата, растворенного в воде.
Что касается промывочной жидкости, она может состоять из динатрийфосфата, монокальцийфосфата, противомикробного средства и изопропанола, растворенных в воде.
После сушки на воздухе предметное стекло готово для прямого наблюдения в микроскоп или для исследования системой анализа изображений.
Предпочтительно с используемыми продуктами, в частности с фиксатором согласно изобретению, можно гарантировать стандартизацию окрашивания и получить воспроизводимость цветов. Это связано с составами продуктов, в частности фиксатора, а также с тем, что это продукты, готовые к применению. Действительно, использование таких продуктов позволяет исключить человеческий фактор при приготовлении растворов, в частности, отменяя стадии разбавления и использования дополнительных продуктов переменного качества, которые ухудшают качество и воспроизводимость окрашивания.
Эта воспроизводимость представляет стабильную базу, на которую могут опираться системы анализа изображений. Эти системы, на которые возложены идентификация и классификация различных клеточных типов, при обнаружении случайных аномалий возможных признаков наличия патологии могут применяться, только если полученные результаты являются воспроизводимыми.
Кроме того, фиксатор и реагенты, используемые согласно изобретению, могут применяться в окрашивающих автоматах, так как их применение ограничивает осаждение, таким образом значительно снижая эксплуатационные расходы на эти автоматы.
Другим преимуществом является то, что изобретение позволяет получить отличный визуальный контраст, позволяющий точную идентификацию разных клеточных типов, причем без отложений красителя, являющихся источниками различных артефактов. Из фиг.2a и 2b установлено, в частности, что полученная контрастность лучше, чем получаемая с продуктами уровня техники (фиг.1a, 1b, 1c и 1d).
Далее изобретение иллюстрируется неограничивающим примером, применимым в гематологии.
Материал
Фиксирующая композиция (продукт 1)
Фиксирующую композицию готовят, как описано ниже.
Для получения 1 л продукта:
- готовят раствор A, растворяя в 280-380 мл ДМСО следующие красители: метиленовый синий - эозин, азур I - эозин, метиленовый синий, азур I метиленового синего, соединение группы тиазинов,
- готовят раствор B, смешивая от 550 до 680 мл этанола с примерно 1 мл этиленгликоля,
- готовят раствор C, растворяя от 1 до 4 г хлорида натрия в 40-60 мл воды,
- готовят раствор D, добавляя раствор C при перемешивании к раствору B,
- добавляют при перемешивании раствор A к раствору D и
- смесь фильтруют.
Буфер (продукт 2)
Буфер готовят, применяя описываемый ниже протокол.
Для получения 1 л продукта в примерно 1 л воды растворяют от 0,189 до 0,530 г динатрийфосфата, от 0,399 до 0,726 г монокальцийфосфата, около 1 г противомикробного агента и около 1 г неионного ПАВа. Затем все это фильтруют.
Дополнительный окрашивающий реактив (продукт 3)
Дополнительный окрашивающий реактив готовят следующим образом.
Для получения 1 л продукта:
- готовят первый раствор, растворяя в 10-15 мл ДМСО следующие красители: метиленовый синий, азур I метиленового синего и соединение группы тиазинов,
- готовят второй раствор, растворяя в 985-990 мл воды от 5 до 8 г динатрийфосфата и от 1,5 до 3 г монокальцийфосфата,
- при перемешивании добавляют первый раствор ко второму раствору, и
- смесь фильтруют.
Промывочная жидкость (продукт 4)
Для получения 1 л промывочной жидкости растворяют в примерно 940 мл воды от 0,3 до 0,5 г динатрийфосфата, от 0,3 до 0,5 г монокальцийфосфата, около 0,1 г противомикробного средства и от 45 до 50 г спирта (предпочтительно изопропанола). Затем все это фильтруют.
Пример способа окрашивания: результаты типа "окрашивание по Май-Грюнвальду/Гимзе"
Для получения результатов, признаваемых специалистами как окрашивание по "Май-Грюнвальду/Гимзе", можно осуществить последовательность следующих этапов:
- контактирование в течение 5-8 минут предметного стекла, на которое нанесен мазок крови или костномозгового вещества для анализа, с продуктом 1,
- контактирование в течение 2-3 минут предметного стекла с продуктом 2,
- контактирование в течение 1-3 минут предметного стекла с продуктом 3 и
- контактирование в течение 5-20 секунд, возможно при легком перемешивании, предметного стекла с продуктом 4.
После сушки на воздухе предметное стекло готово для прямого наблюдения в микроскоп или для исследования системой анализа изображений.
Полученные результаты представлены на фиг.2a.
Пример способа окрашивания: результаты типа "окрашивание по Райту/Лейшману"
Чтобы получить результаты, признаваемые специалистами в данной области как "окрашивание по Райту/Лейшману", можно осуществить последовательность следующих стадий:
- контактирование в течение 5-10 минут предметного стекла, на которое нанесен мазок крови или костномозгового вещества для анализа, с продуктом 1,
- контактирование в течение 3-8 минут предметного стекла с продуктом 2, и
- контактирование в течение 5-20 секунд, возможно при легком помешивании, предметного стекла с продуктом 4.
После сушки на воздухе предметное стекло готово для прямого наблюдения в микроскоп или для исследования системой анализа изображений.
Полученные результаты представлены на фиг.2b.
Само собой разумеется, изобретение не ограничено представленным и описанным выше вариантом осуществления, но, напротив, оно охватывает все варианты.
Claims (13)
1. Композиция для фиксации тканей, и/или клеток, и/или клеточных структур в целях их окрашивания и их анализа под микроскопом или с помощью системы анализа изображений, отличающаяся тем, что она содержит по меньшей мере следующие соединения (процентные содержания указаны в расчете на полную массу композиции):
- от 40 до 60% этанола и/или изопропанола,
- диметилсульфоксида,
- от 0,1 до 1% этиленгликоля,
- от 2 до 12% воды и
- от 0,1 до 0,5% хлорида натрия.
- от 40 до 60% этанола и/или изопропанола,
- диметилсульфоксида,
- от 0,1 до 1% этиленгликоля,
- от 2 до 12% воды и
- от 0,1 до 0,5% хлорида натрия.
2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что диметилсульфоксид составляет от 30 до 40% от полной массы композиции.
3. Композиция по одному из предыдущих пунктов, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит по меньшей мере один синий краситель и по меньшей мере один красный краситель.
4. Композиция по п.3, отличающаяся тем, что синий краситель выбран из метиленового синего, и/или азура I, и/или синего красителя, относящегося к группе тиазинов, и тем, что красный краситель выбран из эозина и/или эритрозина.
5. Применение композиции по одному из пп.3 или 4 для одновременного осуществления фиксации и окрашивания тканей, и/или клеток, и/или клеточных структур.
6. Способ получения композиции по одному из пп.1-4, отличающийся тем, что он включает проведение по меньшей мере следующих стадий:
- смешение этанола и/или изопропанола с этиленгликолем, чтобы получить раствор 1,
- растворение хлорида натрия в воде, чтобы получить раствор 2,
- добавление раствора 2 в раствор 1 при перемешивании, затем добавление диметилсульфоксида, и
- фильтрация.
- смешение этанола и/или изопропанола с этиленгликолем, чтобы получить раствор 1,
- растворение хлорида натрия в воде, чтобы получить раствор 2,
- добавление раствора 2 в раствор 1 при перемешивании, затем добавление диметилсульфоксида, и
- фильтрация.
7. Способ получения композиции по одному из пп.1-4, отличающийся тем, что он включает проведение по меньшей мере следующих стадий:
- приготовление раствора 4, содержащего по меньшей мере диметилсульфоксид, синий краситель и красный краситель,
- смешение этанола и/или изопропанола с этиленгликолем, чтобы получить раствор 1,
- растворение хлорида натрия в воде, чтобы получить раствор 2,
- добавление раствора 2 в раствор 1 при перемешивании, чтобы получить раствор 3,
- добавление раствора 3 при перемешивании в раствор 4, и
- фильтрация.
- приготовление раствора 4, содержащего по меньшей мере диметилсульфоксид, синий краситель и красный краситель,
- смешение этанола и/или изопропанола с этиленгликолем, чтобы получить раствор 1,
- растворение хлорида натрия в воде, чтобы получить раствор 2,
- добавление раствора 2 в раствор 1 при перемешивании, чтобы получить раствор 3,
- добавление раствора 3 при перемешивании в раствор 4, и
- фильтрация.
8. Способ получения по п.7, отличающийся тем, что раствор 4 получен растворением в диметилсульфоксиде следующих красителей:
- эозин-метиленовый синий,
- азур I-эозин,
- метиленовый синий,
- азур I метиленового синего,
- соединение группы тиазинов.
- эозин-метиленовый синий,
- азур I-эозин,
- метиленовый синий,
- азур I метиленового синего,
- соединение группы тиазинов.
9. Способ окрашивания клеток или клеточных структур, в частности для крови и костного мозга, отличающийся тем, что он включает по меньшей мере одну стадию, состоящую в контактировании окрашиваемого препарата с фиксирующей композицией по одному из пп.3 или 4.
10. Способ окрашивания клеток или клеточных структур, в частности для крови и костного мозга, отличающийся тем, что он включает по меньшей мере следующие стадии:
- контактирование окрашиваемого препарата с фиксирующей композицией по одному из пп.3 или 4,
- контактирование зафиксированного препарата с буферным раствором, рН которого составляет от 6,5 до 7,0,
- контактирование препарата с промывным раствором.
- контактирование окрашиваемого препарата с фиксирующей композицией по одному из пп.3 или 4,
- контактирование зафиксированного препарата с буферным раствором, рН которого составляет от 6,5 до 7,0,
- контактирование препарата с промывным раствором.
11. Способ окрашивания клеток или клеточных структур, в частности для крови и костного мозга, отличающийся тем, что он включает по меньшей мере следующие стадии:
- контактирование в течение 5-10 минут окрашиваемого препарата с фиксирующей композицией по одному из пп.3 или 4,
- контактирование в течение 3-8 минут зафиксированного препарата с буферным раствором, рН которого составляет от 6,5 до 7,0,
- контактирование в течение 5-20 секунд препарата с промывным раствором.
- контактирование в течение 5-10 минут окрашиваемого препарата с фиксирующей композицией по одному из пп.3 или 4,
- контактирование в течение 3-8 минут зафиксированного препарата с буферным раствором, рН которого составляет от 6,5 до 7,0,
- контактирование в течение 5-20 секунд препарата с промывным раствором.
12. Способ окрашивания тканей, и/или клеток и/или клеточных элементов, в частности для крови и костного мозга, отличающийся тем, что он включает по меньшей мере следующие стадии:
- контактирование окрашиваемого препарата с фиксирующей композицией по одному из пп.3 или 4,
- контактирование связанного препарата с буферным раствором, рН которого составляет от 6,8 до 7,2,
- контактирование препарата с дополнительным окрашивающим реактивом,
- контактирование препарата с промывным раствором.
- контактирование окрашиваемого препарата с фиксирующей композицией по одному из пп.3 или 4,
- контактирование связанного препарата с буферным раствором, рН которого составляет от 6,8 до 7,2,
- контактирование препарата с дополнительным окрашивающим реактивом,
- контактирование препарата с промывным раствором.
13. Способ окрашивания тканей, и/или клеток, и/или клеточных элементов, в частности для крови и костного мозга, отличающийся тем, что он включает по меньшей мере следующие стадии:
- контактирование в течение 5-8 минут окрашиваемого препарата с фиксирующей композицией по одному из пп.3 или 4,
- контактирование в течение 2-3 минут зафиксированного препарата с буферным раствором, рН которого составляет от 6,8 до 7,2,
- контактирование в течение 1-3 минут препарата с дополнительным окрашивающим реактивом,
- контактирование в течение 5-20 секунд препарата с промывным раствором.
- контактирование в течение 5-8 минут окрашиваемого препарата с фиксирующей композицией по одному из пп.3 или 4,
- контактирование в течение 2-3 минут зафиксированного препарата с буферным раствором, рН которого составляет от 6,8 до 7,2,
- контактирование в течение 1-3 минут препарата с дополнительным окрашивающим реактивом,
- контактирование в течение 5-20 секунд препарата с промывным раствором.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR0955127 | 2009-07-22 | ||
| FR0955127A FR2948456B1 (fr) | 2009-07-22 | 2009-07-22 | Composition de fixation cytologique ou histologique et procedes de coloration |
| PCT/FR2010/051540 WO2011010064A1 (fr) | 2009-07-22 | 2010-07-21 | Composition de fixation cytologique ou histologique et procedes de coloration |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2012106300A RU2012106300A (ru) | 2013-08-27 |
| RU2536502C2 true RU2536502C2 (ru) | 2014-12-27 |
Family
ID=41722889
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012106300/05A RU2536502C2 (ru) | 2009-07-22 | 2010-07-21 | Цитологическая и гистологическая фиксирующая композиция и способ окрашивания |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9366604B2 (ru) |
| EP (1) | EP2457079B1 (ru) |
| JP (1) | JP5704466B2 (ru) |
| BR (1) | BR112012001495B1 (ru) |
| ES (1) | ES2555219T3 (ru) |
| FR (1) | FR2948456B1 (ru) |
| HU (1) | HUE028309T2 (ru) |
| IN (1) | IN2012DN01386A (ru) |
| RU (1) | RU2536502C2 (ru) |
| WO (1) | WO2011010064A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201201238B (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2630983C1 (ru) * | 2016-04-06 | 2017-09-15 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО КубГМУ Минздрава России) | Фиксатор проб для цитологических исследований |
| RU2793545C2 (ru) * | 2018-08-14 | 2023-04-04 | Апакор Лимитед | Фиксирующий раствор и способ получения биологического образца для исследования |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP4086605A1 (en) * | 2011-06-17 | 2022-11-09 | Roche Diagnostics Hematology, Inc. | Solution and method for histoprocessing of biological samples |
| EP3280543A4 (en) | 2015-04-06 | 2018-12-26 | Nanocytomics LLC | Automated specimen deposition systems and associated methods |
| CN112781961A (zh) * | 2019-11-07 | 2021-05-11 | 北京望升伟业科技发展有限公司 | 一种细胞快速染色液及其应用 |
| DE102022129378B3 (de) | 2022-11-07 | 2024-05-08 | Bio-Gram Diagnostics GmbH | Färbereagenz |
| WO2024099595A1 (en) * | 2022-11-07 | 2024-05-16 | Bio-Gram Diagnostics GmbH | Staining reagent |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1992019951A1 (en) * | 1991-05-08 | 1992-11-12 | Streck Laboratories, Inc. | Tissue fixative and method |
| WO1994007532A1 (en) * | 1992-09-10 | 1994-04-14 | Streck Laboratories, Inc. | Method and composition for preserving antigens and process for utilizing cytological material produced by same |
| RU2178565C2 (ru) * | 1996-01-16 | 2002-01-20 | Зила Инк. | Способы и композиции для обнаружения in vivo оральных злокачественных опухолей и предраковых состояний |
| FR2854239A1 (fr) * | 2003-04-23 | 2004-10-29 | Reactifs Ral | Procede de preparation d'un reactif de coloration de cellules et reactif obtenu |
| WO2008043963A1 (fr) * | 2006-10-11 | 2008-04-17 | Reactifs Ral | Procede de coloration de cellules |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE10034647C1 (de) * | 2000-07-14 | 2002-04-04 | 3M Espe Ag | Verfahren zur Durchführung einer Speichelanalyse |
| JP2003061511A (ja) * | 2001-08-30 | 2003-03-04 | Sumitomo Pharmaceut Co Ltd | 炎症性疾患治療剤の新規評価方法 |
| EP1804045B1 (de) * | 2005-12-30 | 2014-03-12 | QIAGEN GmbH | Ein Verfahren und ein Kit zur Behandlung einer biologischen Probe |
| JP2009524826A (ja) * | 2006-01-26 | 2009-07-02 | ザ ユニヴァーシティー オブ テキサス | 撮像のための方法及び装置 |
| EP2027922A1 (de) * | 2007-08-02 | 2009-02-25 | Qiagen GmbH | Verfahren und Vorrichtung für das Fixieren/Stabilisieren einer Probe |
-
2009
- 2009-07-22 FR FR0955127A patent/FR2948456B1/fr active Active
-
2010
- 2010-07-21 EP EP10752066.0A patent/EP2457079B1/fr active Active
- 2010-07-21 IN IN1386DEN2012 patent/IN2012DN01386A/en unknown
- 2010-07-21 BR BR112012001495-1A patent/BR112012001495B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2010-07-21 US US13/384,845 patent/US9366604B2/en active Active
- 2010-07-21 HU HUE10752066A patent/HUE028309T2/en unknown
- 2010-07-21 JP JP2012521086A patent/JP5704466B2/ja active Active
- 2010-07-21 ES ES10752066.0T patent/ES2555219T3/es active Active
- 2010-07-21 WO PCT/FR2010/051540 patent/WO2011010064A1/fr active Application Filing
- 2010-07-21 RU RU2012106300/05A patent/RU2536502C2/ru active
-
2012
- 2012-02-20 ZA ZA2012/01238A patent/ZA201201238B/en unknown
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1992019951A1 (en) * | 1991-05-08 | 1992-11-12 | Streck Laboratories, Inc. | Tissue fixative and method |
| WO1994007532A1 (en) * | 1992-09-10 | 1994-04-14 | Streck Laboratories, Inc. | Method and composition for preserving antigens and process for utilizing cytological material produced by same |
| RU2178565C2 (ru) * | 1996-01-16 | 2002-01-20 | Зила Инк. | Способы и композиции для обнаружения in vivo оральных злокачественных опухолей и предраковых состояний |
| FR2854239A1 (fr) * | 2003-04-23 | 2004-10-29 | Reactifs Ral | Procede de preparation d'un reactif de coloration de cellules et reactif obtenu |
| WO2008043963A1 (fr) * | 2006-10-11 | 2008-04-17 | Reactifs Ral | Procede de coloration de cellules |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2630983C1 (ru) * | 2016-04-06 | 2017-09-15 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО КубГМУ Минздрава России) | Фиксатор проб для цитологических исследований |
| RU2793545C2 (ru) * | 2018-08-14 | 2023-04-04 | Апакор Лимитед | Фиксирующий раствор и способ получения биологического образца для исследования |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HUE028309T2 (en) | 2016-12-28 |
| BR112012001495A2 (pt) | 2020-09-24 |
| BR112012001495B1 (pt) | 2021-07-06 |
| ZA201201238B (en) | 2012-10-31 |
| ES2555219T3 (es) | 2015-12-29 |
| US20120122151A1 (en) | 2012-05-17 |
| RU2012106300A (ru) | 2013-08-27 |
| WO2011010064A1 (fr) | 2011-01-27 |
| FR2948456B1 (fr) | 2011-09-30 |
| JP5704466B2 (ja) | 2015-04-22 |
| FR2948456A1 (fr) | 2011-01-28 |
| EP2457079B1 (fr) | 2015-09-09 |
| US9366604B2 (en) | 2016-06-14 |
| JP2012533745A (ja) | 2012-12-27 |
| EP2457079A1 (fr) | 2012-05-30 |
| IN2012DN01386A (ru) | 2015-06-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2536502C2 (ru) | Цитологическая и гистологическая фиксирующая композиция и способ окрашивания | |
| US8158381B2 (en) | Methods for integrated tissue processing and staining | |
| CA2764335C (en) | Methods and compositions for a microemulsion-based tissue treatment | |
| AU740441B2 (en) | Cytological and histological fixative composition and methods of use | |
| US5318795A (en) | Staining methods for histology and cytology specimens | |
| DK2130023T3 (en) | Stabilized hematoxylin | |
| EP3639080B1 (en) | Process record slide for special staining | |
| WO2012096842A1 (en) | Hematoxylin staining method | |
| RU2619784C2 (ru) | Система и набор для получения цитологических образцов для исследования | |
| CN105143847B (zh) | 细胞染色组合物及其用途 | |
| CN102203604B (zh) | 用于防止组织样品中伪像的方法和组合物 | |
| Kiernan | Nuclear stains | |
| CN114814190A (zh) | 一种组织活检病理切片免疫荧光染色试剂盒及方法 | |
| RU2202776C2 (ru) | Способ окраски гистологических препаратов | |
| GB2372811A (en) | Staining physiological samples | |
| Hasan et al. | A better and copacetic protocol for histopathological slide preparation using H&E stain: A review | |
| Shi et al. | Extended application of antigen retrieval technique in immunohistochemistry and in situ hybridization | |
| Baranyai | Chemistry of staining in histology: Haematoxylin and Eosin | |
| RU2032374C1 (ru) | Способ диагностики балантидиоза свиней | |
| Yu | 30 Histochemistry Bone and Cartilage | |
| RU2550879C1 (ru) | Способ окраски мазков крови для микроскопического определения структурной организации и фаз активности клеток | |
| Bloom et al. | A microspectrophotometric analysis of staining with carmine, orcein and carmine-orcein | |
| CS257473B1 (en) | Method of phlegm illustration in paraffine cuts | |
| JP2016211929A (ja) | 膠原線維染色法の染色剤及び膠原線維染色法 |