RU2630983C1 - Фиксатор проб для цитологических исследований - Google Patents
Фиксатор проб для цитологических исследований Download PDFInfo
- Publication number
- RU2630983C1 RU2630983C1 RU2016113230A RU2016113230A RU2630983C1 RU 2630983 C1 RU2630983 C1 RU 2630983C1 RU 2016113230 A RU2016113230 A RU 2016113230A RU 2016113230 A RU2016113230 A RU 2016113230A RU 2630983 C1 RU2630983 C1 RU 2630983C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- blood
- fixative
- cytological examination
- methanol
- dimethyl sulfoxide
- Prior art date
Links
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 title claims abstract description 8
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 31
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 30
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 13
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 13
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000006153 eosin methylene blue Substances 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 150000003333 secondary alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 238000011120 smear test Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
- G01N2001/305—Fixative compositions
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
- G01N2001/305—Fixative compositions
- G01N2001/307—Fixative compositions non-toxic, no Hg, no formaldehyde
Abstract
Изобретение относится к области медицины, а именно к цитологии, и может быть использовано при гистологических, онкологических, гематологических, патологоанатомических исследованиях. Фиксатор проб для цитологических исследований состоит из смеси, об.%: ХЧ изопропиловый спирт - 88, ЧДА диметилсульфоксид - 2, ЧДА глицерин - 10. Изобретение позволяет уменьшить время фиксации, расширить спектр исследований на фиксированных материалах, повысить безопасность при работе с реагентами и доступность компонентов входящих в состав фиксирующей жидкости, а также обеспечит высокую сохранность клеток. 2 ил., 1 табл.
Description
Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к цитологии, и может быть использовано при гистологических, онкологических, гематологических, патологоанатомических исследованиях.
В исследовательских и клинических медицинских лабораториях большинство цитологических и иммуноцитохимических исследований требует проведения фиксации биоматериала, для чего применяют фиксаторы, благодаря их использованию становится возможным изучение тонкого строения клеток и длительное хранение изучаемого материала.
Морфология любой клетки крови или костного мозга для цитологических и иммуноцитохимических исследований микропрепаратов зависит, прежде всего, от качества фиксации препарата. Для фиксации мазков крови, костного мозга, цитологических препаратов используют метанол, абсолютный этанол, жидкость Никифорова (смесь равных частей спирта и эфира), метаноловый раствор эозина-метиленового синего по Май-Грюнвальду, метаноловый раствор эозина-метиленового синего типа Лейшмана, фиксатор-краситель Райта (Справочник по клиническим лабораторным методам исследования / Под ред. Е.А. Кост, - 2-е изд. - М.: Медицина, 1975. - 393 с.; Тодоров Й. Клинические лабораторные исследования в педиатрии. Изд. Медицина, София, 1963. - 874 с., Bancroft's Theory and Practice of Histological Techniques: Expert Consult: Online and Print, 2002. - 768 с.). Каждый из перечисленных фиксаторов имеет определенные недостатки: высокую специфичность фиксации, значительную токсичность, пожароопасность, высокую стоимость и низкую доступность. Ближайшим аналогом предлагаемого фиксатора является метанол.
Основными недостатками метанола являются: высокая токсичность, пожароопасность, оборот метанола строго контролируется государством, для его приобретения требуется лицензия, значительные расходы на его хранение, что повышает затраты и снижает потребительскую привлекательность метанола (Типовая отраслевая инструкция о порядке получения, перевозки, хранения, отпуска и применения метанола ИБТВ 2-001-82. Стр. 2-5).
Задачи: создание фиксирующей жидкости (фиксатора), не имеющей в своем составе метанола, этанола и других веществ, оборот которых контролируется государством, не являющейся высокотоксичной, недорогой, не требующей больших затрат на хранение и использование, при этом не уступающей в фиксирующих способностях метанолу.
Фиксатор проб для цитологических исследований, состоящий из смеси, об. %:
ХЧ изопропиловый спирт - 88
ЧДА диметилсульфоксид - 2
ЧДА глицерин – 10.
Техническим результатом изобретения является уменьшение времени фиксации, за счет того, что в состав фиксатора включен диметилсульфоксид - он облегчает поступление изопропанола в клетку и увеличивает скорость фиксации; расширение спектра исследований на фиксированных материалах, уменьшение затрат на покупку реагентов, повышение безопасности при работе с реагентами, повышение доступности компонентов входящих в состав фиксирующей жидкости, высокая сохранность клеток, т.к. у изопропанола имеется большое преимущество - он в сравнении с метанолом и этанолом, в меньшей степени повреждает антигены клетки. Данный эффект потенцируется глицерином, что позволяет расширить спектр проводимых иммуноцитохимических реакций при использовании предлагаемого фиксатора.
Основными компонентами фиксатора являются: изопропиловый спирт, диметилсульфоксид, глицерин.
Изопропиловый спирт обладает свойствами вторичных спиртов жирного ряда. Химическая формула (рациональная) изопропилового спирта: CH3СН(ОН)СН3. Это бесцветная жидкость с характерным спиртовым запахом, более резким по сравнению с этанолом (по этому признаку их можно отличить), t - плавления - 89,5°C, t - кипения +82,4°C, плотность 0,7851 г/см3 (при 20°C), t - вспышки 11,7°C.
Диметилсульфоксид (ДМСО) - вязкая бесцветная жидкость с характерным запахом. Химическая формула (рациональная) диметилсульфоксида: (CH3)2SО. ДМСО является важным биполярным апротонным растворителем. Благодаря своей сильной растворяющей и проникающей способности ДМСО часто используют как растворитель в химических и медико-биологических исследованиях.
Глицерин - бесцветная, вязкая, очень гигроскопичная жидкость. Химическая формула (рациональная) глицерина: CH3CH5(OH)3. Химические свойства глицерина типичны для многоатомных спиртов. Для приготовления фиксирующей жидкости необходимо развести реагенты: изопропанол, диметилсульфоксид и глицерин. Так как основным фиксирующим свойством обладает изопропанол, то его концентрация в растворе преобладает над другими реагентами и равна 88%. Концентрация диметилсульфоксида равна 2%, а глицерина составляет 10%. В необходимом количестве вначале смешивают изопропанол и диметилсульфоксид, последним добавляют глицерин. Жидкость хранят при комнатной температуре продолжительное время без существенной потери ее свойств.
Для фиксации клеток крови в качестве доказательства использовали кровь белых лабораторных крыс. Взятие крови проводили из кончика хвоста животного. После нанесения крови на предметные стекла создавали мазок крови. Проводили фиксацию подсушенных на воздухе мазков клеток в охлажденном до +4°C растворе фиксатора в течение 30 секунд, проводили отмывку от фиксатора в охлажденном до +4°C 0,9% растворе натрия хлорида в течение 1 минуты, далее 5 секунд в 0,9% растворе натрия хлорида при комнатной температуре и окунали в дистиллированную воду. Готовые мазки могут храниться довольно продолжительное время, от 1 до 3 лет, в зависимости от условий хранения.
После фиксации клеток, для подтверждения качества фиксации проводили окраску мазков крови методом Романовского-Гимзе. Полученные микропрепараты фотографировали с помощью окулярной камеры «Levenhuk 230» (США) на микроскопе Микромед-6 (Россия). Фотографии представлены ниже (см. Приложение).
Способ исследования мазков апробирован на 100 крысах в течение 3 лет. При этом задачи, поставленные в данном изобретении, решены с достоверностью p<0.05. На зафиксированных мазках предлагаемым фиксатором после окраски показано нормальное строение клеток крови крыс. Обнаруживались эритроциты и различные лейкоциты.
Апробация фиксатора проведена на мазках крови, полученных от 10 здоровых добровольцев в течение 1 года. При этом задачи, поставленные в данном изобретении, решены с достоверностью p<0.05.
Для приготовления 100 мл фиксатора взяли 88 мл ХЧ изопропилового спирта, 2 мл ЧДА диметилсульфоксида, 10 мл ЧДА глицерина. Разместили в емкость с притертой пробкой и путем взбалтывания получили готовую смесь - фиксатор для цитологических исследований.
У крысы, белой самки, массой 205 грамм, из кончика хвоста была взята капля крови. Далее шлифованным стеклом наносили небольшое количество крови на предметное стекло и получали, размазывая кровь по стеклу, мазок крови. Подсушивали мазок. Потом окунали в раствор фиксатора, охлажденного до +4°C на 30 секунд, затем проводили отмывку от фиксатора в охлажденном до +4°C 0,9% растворе натрия хлорида в течение 1 минуты, погружали на 5 секунд в 0,9% раствор натрия хлорида при комнатной температуре и споласкивали в дистиллированной воде.
Готовые мазки после подсыхания окрашивали методом Романовского-Гимзе и перед отправкой в архив заключали готовые препараты в полистирол.
Результат приведен на фиг. 1 и фиг. 2 (приложение) - мазки крови при увеличении в 100 раз. При микроскопическом исследовании мазка крови наблюдали эритроциты (1) и различные лейкоциты (2).
Claims (4)
- Фиксатор проб для цитологических исследований, состоящий из смеси, об. %:
- ХЧ изопропиловый спирт - 88
- ЧДА диметилсульфоксид - 2
- ЧДА глицерин - 10.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016113230A RU2630983C1 (ru) | 2016-04-06 | 2016-04-06 | Фиксатор проб для цитологических исследований |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016113230A RU2630983C1 (ru) | 2016-04-06 | 2016-04-06 | Фиксатор проб для цитологических исследований |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2630983C1 true RU2630983C1 (ru) | 2017-09-15 |
Family
ID=59894048
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016113230A RU2630983C1 (ru) | 2016-04-06 | 2016-04-06 | Фиксатор проб для цитологических исследований |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2630983C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2793545C2 (ru) * | 2018-08-14 | 2023-04-04 | Апакор Лимитед | Фиксирующий раствор и способ получения биологического образца для исследования |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5260048A (en) * | 1991-05-08 | 1993-11-09 | Streck Laboratories, Inc. | Tissue fixative solution and method |
| US20100173295A1 (en) * | 2007-02-27 | 2010-07-08 | Qiagen Gmbh | Fixation of a biological material |
| US20130137094A1 (en) * | 2010-01-25 | 2013-05-30 | George Mason Intellectual Properties, Inc. | One-Step Cell and Tissue Preservative for Morphologic and Molecular Analysis |
| RU2536502C2 (ru) * | 2009-07-22 | 2014-12-27 | Р.А.Л. Диагностик | Цитологическая и гистологическая фиксирующая композиция и способ окрашивания |
-
2016
- 2016-04-06 RU RU2016113230A patent/RU2630983C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5260048A (en) * | 1991-05-08 | 1993-11-09 | Streck Laboratories, Inc. | Tissue fixative solution and method |
| US20100173295A1 (en) * | 2007-02-27 | 2010-07-08 | Qiagen Gmbh | Fixation of a biological material |
| RU2536502C2 (ru) * | 2009-07-22 | 2014-12-27 | Р.А.Л. Диагностик | Цитологическая и гистологическая фиксирующая композиция и способ окрашивания |
| US20130137094A1 (en) * | 2010-01-25 | 2013-05-30 | George Mason Intellectual Properties, Inc. | One-Step Cell and Tissue Preservative for Morphologic and Molecular Analysis |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2793545C2 (ru) * | 2018-08-14 | 2023-04-04 | Апакор Лимитед | Фиксирующий раствор и способ получения биологического образца для исследования |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Klinger et al. | A universal stain for the sex chromatin body | |
| Culling | Handbook of histopathological and histochemical techniques: including museum techniques | |
| Paiva et al. | Large plant samples: how to process for GMA embedding? | |
| US10267714B2 (en) | Composition for preparing biomaterial with excellent light-transmitting property, and use thereof | |
| US8158381B2 (en) | Methods for integrated tissue processing and staining | |
| Chiarini-Garcia et al. | Glycol methacrylate embedding for improved morphological, morphometrical, and immunohistochemical investigations under light microscopy: testes as a model | |
| US20080090269A1 (en) | Compositions and methods for preparing specimens for microscopic analysis | |
| US10139320B2 (en) | Composition for processing histological, postmortem, cytological samples | |
| Bensley | Pinacyanol erythrosinate as a stain for mast cells | |
| CN102791124B (zh) | 用于生物细胞的固定溶液 | |
| RU2630983C1 (ru) | Фиксатор проб для цитологических исследований | |
| RU2536502C2 (ru) | Цитологическая и гистологическая фиксирующая композиция и способ окрашивания | |
| Unhale et al. | Stabilization of tissue specimens for pathological examination and biomedical research | |
| Karnam et al. | Rapid tissue processing technique: A novel method using methyl salicylate | |
| Carrara et al. | Histological examination of the diabetic kidney | |
| CN109781492A (zh) | 一种着色持久的组织固定液 | |
| Bracegirdle | The history of staining | |
| Eid et al. | Preparation of non-human primate brain tissue for pre-embedding immunohistochemistry and electron microscopy | |
| RU2202776C2 (ru) | Способ окраски гистологических препаратов | |
| US11730164B2 (en) | Tissue preservation | |
| PT106082A (pt) | Composição fixadora para citologia, método de fixação de células e suas aplicações | |
| EP3434102B1 (en) | Method for long-term preservation of anatomical material | |
| Sadler et al. | Snap-frozen brain tissue sections stored with desiccant at ambient laboratory conditions without chemical fixation are resistant to degradation for a minimum of 6 months | |
| Samuel | Potential alternative to formaldehyde fixatives-A study | |
| Liu et al. | Immunofluorescence Staining on Cryosections with High Autofluorescence in African Killifish |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180407 |