CN109781492A - 一种着色持久的组织固定液 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种病理检验的组织固定液，具体涉及一种着色持久的组织固定液。所述组织固定液主要由纯化水、甲醛液、冰乙酸、曙红Y（水溶性）和磷酸盐组成；所述固定液的甲醛含量为3.8‑4.2%，PH值为6.6‑7.4。本发明有益效果为：组织固定液为中性甲醛固定液，使组织固定和染色一体化，穿透力强，可保持组织固有物质，缓冲盐使PH值变化少，保证固定液性能稳定，使固定均匀，着色稳定持久，提高切片制备的质量；固定染色后的组织结构保存完好，着色明显，细胞核清晰，便于观察小标本识别和大体标本中细小组织的辨认，避免假阴性现象，提高检验结果判断的准确性，适用范围广；操作简单，缩短切片制备流程，成功率高，易于推广。
Description
技术领域
本发明涉及一种病理检验的组织固定液，具体涉及一种着色持久的组织固定液。
背景技术
凡是需要制作病理检验标本的各种组织，无论是小标本乃至电镜还是大体标本，都必须首先固定。一张优秀的组织学切片是建立在适当而完全的固定基础之上的，良好的固定可迅速阻止组织死后变化，防止自溶和腐败，保持离体组织原有的形态和结构，使组织成分对染色液有不同的亲和力，经过染色处理后，组织微结构在显微镜下可易于识别和观察，便于做出病理诊断。目前，常规多采用先对组织固定后再用染色液着色的处理方式，一定程度上能够让组织固定着色，但是经过脱水、透明、浸蜡和包埋等切片操作及切片储存时间的延长，部分细小组织上的染色液颜色变浅甚至褪色，造成细小组织辨认困难，且染色的时长和程度如何，对操作人员具有较高的经验要求，易造成病理检验和诊断的偏差。
专利号CN201510380746.4 公开了一种使组织着色组织固定液配方及其使用方法，主要成分有品红、福尔马林、冰醋酸、酒精等，固定组织的同时可对其进行染色，适用于2mm以内微小标本病理制片。这种固定液固定标本时间短，固定效果好，组织标本着色更稳定等特点，标本更易于发现和识别。但是这种固定液所选染色剂为品红，溶于乙醇，微溶于水，其溶剂主要为乙醇，脱水性强，使用过程中稍有不慎易引起组织收缩、变硬，影响切片质量，因而固定时间不易过长，短时间对2mm以内微小标本病理制片效果较好，但其着色持久性未提及，对于需要较长时间固定着色的大体标本的制作，其着色效果未得到证实。
发明内容
本发明为了克服现有技术的不足，提供了一种着色稳定持久的组织固定液，在对组织固定时即可染色，着色均匀且稳定持久，不仅便于小标本的识别检验，且易于大体标本中细小组织的辨认和观察。
一种着色持久的组织固定液，其特征在于，以重量份计由以下原料组成：
纯化水：900-1000份；
甲醛液：100-120份；
冰乙酸：0.02-0.10份；
曙红Y：0.2-1.0份；
磷酸盐：5-15份；
磷酸盐调节组织固定液的PH值至6.6-7.4；
其中，所述甲醛液为甲醛的含水溶液，甲醛液浓度为36-45%，甲醛主要通过与组织细胞中蛋白质之间形成交联，使蛋白质凝固变性，从而将组织细胞固定。甲醛穿透力强，固定均匀，对组织有适度收缩硬化作用，可使组织形态结构保存良好，且使组织易于着色，适用于多种组织的固定。本发明的曙红Y选用水溶性，为酸性染料，可将细胞质和细胞外间质等嗜酸性物质染成红色，性能稳定，对组织染色后着色稳定持久，便于细小组织的识别和观察，密封状态可长效保存。
优选地，所述的组织固定液的甲醛含量为3.8-4.2%。高浓度的甲醛对组织渗透性强，固定均匀，经酒精脱水时有较大的收缩，能保存脂肪，但是不能沉淀核蛋白及白蛋白，长期用其固定的组织使组织变为酸性，不利于染色，特别是细胞核的着色，分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露，可能造成假阴性的染色结果。本发明的固定液中的甲醛由于已被稀释，含量较低，对组织穿透性好，组织收缩小，对大多数抗原物质保存较好，特别是对脂肪和各种酶的固定效果较好，固定的时间可长达24h，在通风良好的环境中使用，刺激性气味小，安全系数提高。
优选地，所述磷酸盐由磷酸氢二钠和磷酸二氢钠组成。通过磷酸盐缓冲液调节固定液的PH值，减少PH值的变化，保持固定液性能稳定，避免组织过度收缩变形。
优选地，所述固定液中PH值为6.8-7.2。通过磷酸盐缓冲液的调节固定液的PH呈中性，性能稳定，对组织细胞形态结构、组织抗原性和核酸分子具有良好固定作用，且使固定更均匀，着色更加稳定持久。
本发明的组织固定液的制备方法，其特征在于，
（1）将所述原料按所述重量份比例称量；
（2）将所述步骤（1）称量的冰乙酸置于容器中，加入所述步骤（1）称量的纯化水，摇匀，得到乙酸水溶液；
（3）将所述步骤（1）称量的磷酸二氢钠和磷酸氢二钠分别加入所述步骤（2）的乙酸水溶液中，调节溶液PH值至6.6-7.4，摇匀，得到磷酸盐缓冲溶液；
（4）将所述步骤（1）称量的甲醛液加入所述步骤（3）的磷酸盐缓冲溶液中，摇匀，得到缓冲甲醛溶液；
（5）按所述步骤（1）称量的曙红（水溶性）加入到所述步骤（4）的缓冲甲醛溶液中，摇匀，即得。
其中，乙酸具有很强的穿透性能，在染色体结构的研究中的主要用途是阻止染色体收缩，使染色体结构免于破坏，有利于保持组织原有结构，这可能是因为它的离子较小的缘故，经乙酸固定的物质，还能抵消醇溶剂的硬化作用。本发明所制备的固定液外观为橙色至橘红色。
本发明的组织固定液在标本制作中的应用，其特征在于，标本包括小标本和大体标本，使用时将所述的标本完全浸于所述组织固定液中，所述的组织固定液用量为所述标本体积的5-10倍。
优选地，所述大体标本固定时长为2-12h。
优选地，所述小标本固定时长为0.5-3h。
本发明的有益效果。
1.本发明的组织固定液为中性甲醛固定液，使组织固定和染色一体化，穿透力强，对组织收缩少,可保持组织固有物质，磷酸盐缓冲液调节可减少PH值变化，保证固定液性能稳定，使固定液固定均匀，着色稳定持久，提高切片制备的质量。
2.本发明的固定液固定染色后组织结构保存完好，着色明显，细胞核清晰，便于观察小标本识别和大体标本中细小组织的辨认，避免假阴性现象，提高检验结果判断的准确性，适用范围广。
3.操作简单，缩短切片制备流程，成功率高，易于推广。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的具体实施方式做详细说明。
在以下实施例中，各组分采用下述原料组成。
表1 本发明的固定液的原料组成
小标本固定效果测试。
在新鲜的小肠粘膜，面积为2mm×2mm，完全浸泡于本发明固定液中，固定液量为组织体积的5倍，固定染色2h，按病理检验规定进行常规切片处理后在显微镜下观察。
大体标本固定效果测试：取新鲜的猪肝组织，面积为1cm×1cm，厚度为0.4cm；将组织泡浸于固定液中，固定液量为组织体积的8倍，固定染色10h，按病理检验进行常规切片处理后在显微镜下观察。
稳定性测试：组织固定液在37℃环境放置10天后，按固定效果测试方法再次测定固定液对小标本和大体标本的固定效果，检验固定液的稳定性。
表2 实施例的性能指标检验结果
由表2实施例的性能指标检验结果可得出：常温下，经实施例中1-3的组织固定液固定染色后的标本，经切片处理后在显微镜下观察，组织具有弹性且质感较硬，结构保存完好，细胞核清晰，无收缩现象，着色明显，小标本易于识别观察，大体标本中的细小组织可辨认，避免了假阴性现象，提高检验结果判断的准确性。对于大体标本固定10个小时后效果依旧良好，表明本发明的组织固定液固定均匀，着色持久。而对组织固定液的稳定性测试结果可以得出，本发明的组织固定液性能稳定，功能可长效保持。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
Claims (8)
1.一种着色持久的组织固定液，其特征在于，以重量份计由以下原料组成：
纯化水：900-1000份；
甲醛液：100-120份；
冰乙酸：0.02-0.10份；
曙红Y：0.2-1.0份；
磷酸盐：5-15份；
磷酸盐调节组织固定液的PH值至6.6-7.4；
其中，所述甲醛液为甲醛的含水溶液，甲醛液浓度为36-45%。
2.如权利要求1所述的组织固定液，其特征在于，所述组织固定液的甲醛含量为3.8-4.2%。
3.如权利要求1所述的组织固定液，其特征在于，所述磷酸盐由磷酸氢二钠和磷酸二氢钠组成。
4.如权利要求3所述的组织固定液，其特征在于，所述组织固定液PH值为6.8-7.2。
5.如权利要求1至4任一所述的组织固定液的制备方法，其特征在于，
（1）将所述原料按所述重量份比例称量；
（2）将所述步骤（1）称量的冰乙酸置于容器中，加入所述步骤（1）称量的纯化水，摇匀，得到乙酸水溶液；
（3）将所述步骤（1）称量的磷酸二氢钠和磷酸氢二钠分别加入所述步骤（2）的乙酸水溶液中，调节溶液PH值至6.6-7.4，摇匀，得到磷酸盐缓冲溶液；
（4）将所述步骤（1）称量的甲醛液加入所述步骤（3）的磷酸盐缓冲溶液中，摇匀，得到缓冲甲醛溶液；
（5）按所述步骤（1）称量的曙红（水溶性）加入到所述步骤（4）的缓冲甲醛溶液中，摇匀，即得。
6.如权利要求1-4任一所述的组织固定液在标本制作中的应用，其特征在于，标本包括小标本和大体标本，使用时将所述的标本完全浸于所述组织固定液中，所述的组织固定液用量为所述标本体积的5-10倍。
7.如权利要求6所述的组织固定液在标本制作中的应用，其特征在于，所述大体标本固定时长为2-12h。
8.如权利要求6所述的组织固定液在标本制作中的应用，其特征在于，所述小标本固定时长为0.5-3h。
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| CN201811618168.3A CN109781492A (zh) | 2018-12-28 | 2018-12-28 | 一种着色持久的组织固定液 |
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| CN (1) | CN109781492A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111670896A (zh) * | 2020-04-28 | 2020-09-18 | 浙江大学医学院附属妇产科医院 | 一种中性缓冲组织固定液 |
| CN114279801A (zh) * | 2021-12-24 | 2022-04-05 | 哈尔滨东尧科技有限公司 | 一种可用于多种新鲜组织固定的无甲醛固定液及固定方法 |
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2018
- 2018-12-28 CN CN201811618168.3A patent/CN109781492A/zh active Pending
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| CN111670896A (zh) * | 2020-04-28 | 2020-09-18 | 浙江大学医学院附属妇产科医院 | 一种中性缓冲组织固定液 |
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| CN114279801B (zh) * | 2021-12-24 | 2024-03-29 | 哈尔滨东尧科技有限公司 | 一种可用于多种新鲜组织固定的无甲醛固定液及固定方法 |
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