RU2530612C1 - Способ подготовки нематод для морфологического и гистологического исследования - Google Patents
Способ подготовки нематод для морфологического и гистологического исследования Download PDFInfo
- Publication number
- RU2530612C1 RU2530612C1 RU2013141727/15A RU2013141727A RU2530612C1 RU 2530612 C1 RU2530612 C1 RU 2530612C1 RU 2013141727/15 A RU2013141727/15 A RU 2013141727/15A RU 2013141727 A RU2013141727 A RU 2013141727A RU 2530612 C1 RU2530612 C1 RU 2530612C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mixture
- castor oil
- fixing
- nematodes
- ethanol
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Изобретение относится к ветеринарной медицине и биологии, в частности к гистологической технике, и может быть использовано для изготовления гистологических препаратов нематод (круглых гельминтов) при проведении научных морфологических исследований в ВУЗах и НИИ ветеринарного и биологического профиля. Способ подготовки нематод для морфологического и гистологического исследования включает фиксацию исследуемого материала смесью этилового спирта с 10% нейтральным формалином, его обезвоживание в спиртах, заливку смесью равных частей касторового масла и целлоидина, промывку материала от касторового масла, пропитку парафином посредством термостатирования и дополнительную заливку парафином, при этом согласно изобретению в качестве исследуемого материала используют нематоды, фиксирующая смесь дополнительно содержит хлорид натрия в количестве не более 1 г на 100 мл смеси, при этом используют 70% этиловый спирт и берут его с 10% нейтральным формалином при следующем соотношении: 9:1, при этом фиксацию осуществляют в течение 3-4 часов, обезвоживание проводят пятикратно 96% этиловым спиртом и заливку исследуемого материала смесью касторового масла и целлоидина выдерживают в течение 10-12 часов. Изобретение обеспечивает сокращение времени выполнения способа, а также повышение срока хранения без изменения гистологических структур исследуемого материала и качества окраски ткани исследуемого материала. 2 ил.
Description
Изобретение относится к ветеринарной медицине, и биологии, в частности к гистологической технике, и может быть использовано для изготовления гистологических препаратов нематод (круглых гельминтов) при проведении научных морфологических исследований в ВУЗах и НИИ ветеринарного и биологического профиля.
В настоящее время в нашей стране и за рубежом используется стандартный способ изготовления гистологических препаратов, который не изменился за последние 60 лет (Роскин Г.И. Микроскопическая техника. Изд-во «Наука», М., 1951, 447 с., Семченко В.В., Барашкова С.А., Ноздрин В.П., Артемьев В.Н. Гистологическая техника - 3-е изд. - Омск - Орел, 2006. - 290 с.). Стандартная схема изготовления гистологических препаратов при использовании заливки в парафин обязательно включает следующие операции.
1. Фиксация гистологического материала (кусочков различных органов и тканей). Для фиксации чаще всего используют нейтральный или забуференный раствор формалина.
2. Промывка фиксированного материала в проточной воде.
3. Обезвоживание с помощью батареи спиртов возрастающей концентрации (50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 96% и 100% этанол).
4. Пропитывание в хлороформе (или бензоле, толуоле).
5. Пропитывание в смеси хлороформа (или бензола, толуола) и парафина в термостате при 37 градусах.
6. Пропитывание расплавленным парафином в термостате при 56 градусах и заливка в парафин. Время экспозиции во всех предыдущих операциях зависят от размеров кусочков органов.
Также известен способ подготовки биологического материала для морфологического и гистологического исследования, включающий фиксацию исследуемого материала смесью 70% этилового спирта с 10% нейтральным формалином, его обезвоживание в спиртах, заливку смесью равных частей касторового масла и целлоидина, промывку материала от касторового масла, пропитку парафином посредством термостатирования и дополнительную заливку парафином (Г.А. Меркулов, Курс патологогистологической техники, Изд-во «Медицина», 1969 г., с.60-61 - прототип).
Недостатками известных технических решений являются - длительность процесса изготовления препаратов из-за продолжительного времени фиксации, подбора батареи спиртов возрастающей концентрации для обезвоживания и недостаточный срок хранения без изменения гистологических структур исследуемого материала, а также отсутствие возможности качественного морфологического и гистологического исследования срезов нематод, организм которых состоит из дыхательной, пищеварительной и других систем, состоящих из разного вида тканей, насыщенных жидкостью, что препятствует изготовлению качественных срезов, для исследования которых требуются разные смеси для фиксации и методы обезвоживания.
Техническим результатом является сокращение срока, повышение срока хранения без изменения гистологических структур исследуемого материала и качество окраски ткани исследуемого материала для исследований.
Технический результат достигается тем, что в способе подготовки нематод для морфологического и гистологического исследования, включающем фиксацию исследуемого материала смесью этилового спирта с 10% нейтральным формалином, его обезвоживание в спиртах, заливку смесью равных частей касторового масла и целлоидина, промывку материала от касторового масла, пропитку парафином посредством термостатирования и дополнительную заливку парафином, согласно изобретению в качестве исследуемого материала используют нематоды, фиксирующая смесь дополнительно содержит хлорид натрия в количестве не более 1 г на 100 мл смеси, при этом используют 70% этиловый спирт и берут его с 10% нейтральным формалином при следующем соотношении: 9:1, при этом фиксацию осуществляют в течение 3-4 часов, обезвоживание проводят пятикратно 96% этиловым спиртом и заливку исследуемого материала смесью касторового масла и целлоидина выдерживают в течение 10-12 часов.
Новизна заявляемого способа заключается в том, что использование новой совокупности признаков, а именно: фиксирующая смесь, содержащая хлорид натрия в количестве не более 1 г на 100 мл смеси, 70% этиловый спирт и 10% нейтральный формалин, взятые соответственно при соотношении: 9:1, обезвоживание которое проводят пятикратно 96% этиловым спиртом; осуществление фиксации в течение 3-4 часов и заливка исследуемого материала смесью касторового масла и целлоидина, которую выдерживают в течение 10-12 часов, обеспечивает сокращение срока и повышение качества подготовки нематод для морфологического и гистологического исследования за счет исключения набухания и сморщивания тканей исследуемого материала, а также увеличение срока хранения без изменения гистологических структур исследуемого материала. Причем следует отметить, что, по заключению паразитологов, заявляемый способ применим для исследования всех видов нематод, вызывающих болезни как у растений, так у животных и человека, например Dirofilaria immitis, Dirofilaria repens - вызывают дирофиляриоз, геманхоз у животных и человека; Askaridia suis - вызывает заболевание у свиней - аскаридоз и гетерокидоз. Качественно полученный срез нематод позволяет точно описать новые виды нематод и точнее определить вид или класс, к которому они относятся, а значит, появляется возможность более точно определить метод лечения болезней, вызываемых нематодами.
Предлагаемый способ работоспособный, воспроизводимый и нашел применение в ветеринарной медицине, в частности используется на кафедре анатомии Кубанского агроуниверситета и в лаборатории гистологии Краснодарского ветеринарного НИИ, что отвечает критерию охраноспособности «промышленная применимость».
По данным научно-технической и патентной литературы не обнаружена аналогичная совокупность признаков, позволяющая достигать технический результат, получаемый заявленным способом, что позволяет утверждать о наличии «изобретательского уровня».
Сущность изобретения поясняется иллюстрирующим материалом, где на фото 1 представлен окрашенный срез нематоды, полученный стандартным способом подготовки; на фото 2 представлен окрашенный срез нематоды, полученный заявляемым способом подготовки.
Способ подготовки нематод для морфологического и гистологического исследования осуществляется следующим образом.
Для исследования были отобраны нематоды вида Dirofilaria immitis, в половозрелой стадии, имеющие размер от 8 см до 24 см. Для опыта были отобраны особи размером от 1 до 2 (см).
Для подготовки нематод предварительно их помещают в фиксирующую смесь, состоящую из 70% этилового спирта с 10% нейтральным формалином, взятых в соотношении 9:1 и 1 г хлорида натрия на 100 мл смеси на 3-4 часа. Количество компонентов, входящих в состав смеси, обусловлено следующим: при использовании 70% этанола происходит не такое резкое сжатие белковых молекул, как при использовании 96% этилового спирта. С целью смягчения действия этанола добавляют 10% нейтральный формалин, который способствует физико-химическому процессу сжатия материала, потом набухания и затем вторичного сжатия, для того чтобы обеспечить баланс действия этанола и формалина, их берут в соотношении 9:1, при нарушении этого соотношения, например, если этанола будет больше, то будет большее количество не восстановленных молекул белков, а при меньшем количестве не будет осуществляться достаточное осаждение белков, что касается количества формалина, то при большем его количестве будут происходить необратимые процессы, приводящие к разрушению молекул, при меньшем количестве - будет происходить не полноценный физико-химический процесс. Таким образом, нарушение соотношения между этанолом и формалином приведет к не качественному приготовлению тканей нематод. Добавление в фиксирующую смесь хлорида натрия в количестве 1 г обеспечивает равномерную диффузию этанола с формалином в толщу материала, обеспечивая осмотическое давление, аналогичное прижизненному, сохраняя при этом физико-химические свойства ткани. При количестве меньше или больше 1 грамма нарушается равномерность диффузии, что ухудшает качество ткани. Кроме того, использование такого состава фиксирующей смеси обеспечивает возможность проводить фиксацию в более короткие сроки в течение 3-4 часов, что доказано экспериментально. При фиксации более 3-х часов уже сохраняются ткани и клетки прижизненного строения нематод, содержание и локализация химических веществ. После фиксации проводят промывку нематод от различных осадков фиксирующей смеси и пятикратное обезвоживание исследуемого материала 96% этиловым спиртом. Обезвоживание проводят в пяти чистых высушенных емкостях, заполненных 96% этиловым спиртом. Экспериментально доказано, что нет необходимости использовать батарею спиртов с повышающей концентрацией для обезвоживания нематод, ткани которых насыщены жидкостью, именно пятикратное использование 96% этилового спирта обеспечивает качественное обезвоживание, а при меньшем количестве происходит недостаточное обезвоживание, а при большем - происходит сморщивание. Далее исследуемый материал заливают смесью равных частей касторового масла и целлоидина, выдерживают в течение 10-12 часов. Использование касторового масла обеспечивает долгосрочное хранение без изменения гистологических структур исследуемого материала. Затем осуществляют промывку материала от касторового масла, пропитку парафином посредством термостатирования и дополнительную заливку парафином. После процесса заливки парафином делают срез нематод специальным режущим инструментом, например микротомом.
В условиях научно-исследовательской лаборатории кафедры анатомии Кубанского агроуниверситета проводились опыты по подготовке нематод для гистологических исследований разными способами. В результате научных исследований выяснилось, что срез (фото 2), полученный из нематод, подготовленных предложенным способом, оказался более четким, чем срез (фото 1), полученный из нематод, подготовленных стандартным способом подготовки.
Claims (1)
- Способ подготовки нематод для морфологического и гистологического исследования, включающий фиксацию исследуемого материала смесью 70% этилового спирта с 10% нейтральным формалином, его обезвоживание в спиртах, заливку смесью равных частей касторового масла и целлоидина, промывку материала от касторового масла, пропитку парафином посредством термостатирования и дополнительную заливку парафином, отличающийся тем, что в качестве исследуемого материала используют нематоды, фиксирующая смесь дополнительно содержит хлорид натрия в количестве не более 1 г на 100 мл смеси, а 70% этиловый спирт и 10% нейтральный формалин взяты соответственно при следующем соотношении: 9:1, при этом фиксацию осуществляют в течение 3-4 часов, обезвоживание проводят пятикратно 96% этиловым спиртом и заливку исследуемого материала смесью касторового масла и целлоидина выдерживают в течение 10-12 часов.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013141727/15A RU2530612C1 (ru) | 2013-09-10 | 2013-09-10 | Способ подготовки нематод для морфологического и гистологического исследования |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013141727/15A RU2530612C1 (ru) | 2013-09-10 | 2013-09-10 | Способ подготовки нематод для морфологического и гистологического исследования |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2530612C1 true RU2530612C1 (ru) | 2014-10-10 |
Family
ID=53381725
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013141727/15A RU2530612C1 (ru) | 2013-09-10 | 2013-09-10 | Способ подготовки нематод для морфологического и гистологического исследования |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2530612C1 (ru) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2613175C1 (ru) * | 2015-12-31 | 2017-03-15 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Чувашский государственный университет имени И.Н. Ульянова" | Способ изготовления гистологических препаратов |
RU2645073C1 (ru) * | 2016-09-26 | 2018-02-15 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины | Способ обездвиживания лабораторно культивируемых личинок паразитических нематод подотряда стронгилята |
RU2703280C1 (ru) * | 2018-11-07 | 2019-10-16 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии" (ФБУН "Ростов НИИ микробиологии и паразитологии") | Способ подготовки проб материала для идентификации вида нематод методом MALDI TOFF Biotyper |
RU2768162C1 (ru) * | 2021-06-09 | 2022-03-23 | Мария Владимировна Видманова | Способ подготовки половозрелых особей нематод для идентификации методом maldi tof масс-спектрометрии |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2186360C1 (ru) * | 2000-11-04 | 2002-07-27 | Чернышева Елена Сергеевна | Метод диагностики глистной инвазии по гистологическим препаратам кала или мокроты и способ приготовления этих препаратов |
-
2013
- 2013-09-10 RU RU2013141727/15A patent/RU2530612C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2186360C1 (ru) * | 2000-11-04 | 2002-07-27 | Чернышева Елена Сергеевна | Метод диагностики глистной инвазии по гистологическим препаратам кала или мокроты и способ приготовления этих препаратов |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Г.А. МЕРКУЛОВ, Курс патологогистологической техники, Изд-во медицина, 1969 г. с.60-61 РОСКИН Г.И. Микроскопическая техника. Изд.-во «Наука», М., 1951, с.447 Семченко В.В. и др. Гистологическая техника. 3-е изд. Омск - Орел, 2006, с.290 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2613175C1 (ru) * | 2015-12-31 | 2017-03-15 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Чувашский государственный университет имени И.Н. Ульянова" | Способ изготовления гистологических препаратов |
RU2645073C1 (ru) * | 2016-09-26 | 2018-02-15 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины | Способ обездвиживания лабораторно культивируемых личинок паразитических нематод подотряда стронгилята |
RU2703280C1 (ru) * | 2018-11-07 | 2019-10-16 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии" (ФБУН "Ростов НИИ микробиологии и паразитологии") | Способ подготовки проб материала для идентификации вида нематод методом MALDI TOFF Biotyper |
RU2768162C1 (ru) * | 2021-06-09 | 2022-03-23 | Мария Владимировна Видманова | Способ подготовки половозрелых особей нематод для идентификации методом maldi tof масс-спектрометрии |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102279121B (zh) | 动物组织石蜡切片的绿色环保制作技术 | |
Paiva et al. | Large plant samples: how to process for GMA embedding? | |
Beament | The formation and structure of the chorion of the egg in an hemipteran, Rhodnius prolixus | |
RU2530612C1 (ru) | Способ подготовки нематод для морфологического и гистологического исследования | |
Ghnenis et al. | Toluidine blue staining of resin-embedded sections for evaluation of peripheral nerve morphology | |
CN105973673A (zh) | 一种桉树组织的石蜡切片方法 | |
CN103940648A (zh) | 鱼鳃组织石蜡切片的制备方法 | |
CN107843470B (zh) | 一种皮肤组织切片的制作方法 | |
CN103759994A (zh) | 一种昆虫幼虫石蜡切片方法 | |
CN109470534B (zh) | 一种病理组织透明脱蜡液及其制备方法 | |
EP2823282B1 (de) | Formalinfreie fixierungsmittel für histologische färbungen von gewebeproben | |
CN105928752B (zh) | 一种昆虫成虫石蜡切片染色方法 | |
CA2905652A1 (en) | Composition for processing histological, postmortem, cytological samples | |
Sani et al. | Pharmacognostic studies of the stem bark of Detarium microcarpum | |
Altman | Neuroanatomical techniques: insect nervous system | |
Shepherd et al. | Tissue preparation and immunostaining of mouse sensory nerve fibers innervating skin and limb bones | |
JP3723204B1 (ja) | 難浸透性組織迅速固定液 | |
CN106018019A (zh) | 复合式生物组织样本制备脱水液 | |
CN104865115A (zh) | 使用新鲜冰冻组织检测单克隆抗体类药物组织交叉反应的方法 | |
CN104374618A (zh) | 一种植物染色体压片观察方法 | |
RU2429462C2 (ru) | Способ оптического просветления образцов биологических тканей | |
RU2530613C1 (ru) | Фиксирующая смесь для гистологических исследований нематод | |
RU2593343C1 (ru) | Способ окраски гистологических срезов при диагностике трихинеллеза | |
Deepa et al. | Towards safer non-volatile tissue fixatives: Evaluation of choline-based ionic liquids for fixing ocular tissues | |
CN104663647A (zh) | 一种心脏组织固定剂及其制备方法和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20150911 |