CN104374618A - 一种植物染色体压片观察方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种压片法观察植物染色体技术。该方法包括对分裂旺盛试材的前处理、染色体固定、细胞酸解、碱中合、染色、压片观察等步骤。供试材料取分裂旺盛部位1-2cm置于处理液中黑暗条件下进行前处理，固定液固定好前处理过的样品后，采用高浓度的盐酸酸解细胞壁，原生质体弱碱中合掉多余的盐酸，染色、压片，最后在显微镜下观察染色体分裂情况。

Description

一种植物染色体压片观察方法

技术领域

本发明涉及一种染色体观察方法，特别是涉及来源于植物试材的采用压片技术进行染色体观察的方法。

背景技术

植物分生细胞的有丝分裂，每天都有分裂高峰，此时把试材固定，经过染色和压片，再置放在显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。染色体压片法，是观察植物染色体最常用的方法，也是研究染色体组型、染色体分带、染色体畸变和姊妹染色单体交换的基础。结合现代生物技术FISH可以清晰确定目的基因在染色体的位置及分布情况，是进一步深入研究的基础。现有的压片方法，染色的原生质体中染色体与其它细胞器颜色差异不显著，观察效果不理想。为了克服该问题，本发明提供一种植物染色体压片法观察的新方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种植物染色体压片观察方法。

为了实现上述目的，本发明的技术方案为：提供的观察植物染色体技术，来自于压片显微镜观察技术，是如下技术：试材上取样品，样品前处理，固定，酸解，碱中合，染色，压片，镜检等主要过程。

供试材料取分裂旺盛部位1-2 cm置于处理液中黑暗条件下进行前处理，固定液固定好前处理过的样品后，采用高浓度的盐酸酸解细胞壁，原生质体弱碱中合掉多余的盐酸，染色、压片，最后在显微镜下观察染色体分裂情况。

   通过镜检观察细胞核中染色体数目、形态及特性。

  对试材进行前期处理，使染色体凝缩，彼此分离，便宜观察。

   采用高浓度盐酸酸解的方法，解离细胞壁，获得植物细胞原生质体。

取供试材料分裂旺盛部位1-2 cm置于处理液中黑暗条件下进行前处理。

     染色原生质体，使染色体与其它细胞器颜色差异显著。

    为达到良好的染色效果，酸解细胞壁后，采用弱碱与清水冲洗原生质体的方法，结合改良的染色剂配制技术，使染色效果良好，便于镜检。

具体实施方式

以下实施例中所述的方法，如无特别说明，均为常规方法。

一种植物染色体压片的制作方法，包括如下步骤：

步骤1：前处理。

于上午8-11点，取供试材料的根、茎尖（茎尖剥去大叶），浸于饱和的对二氯苯溶液中5-6小时（或用8-羟基喹啉、风油精、秋水仙素等，但时间长短不一，视条件和材料而定），茎尖最好置于黑暗条件下。

步骤2：固定。

卡诺固定液固定2-24小时（卡诺固定液为 95%酒精与冰醋酸酸按体积比3：1混合而成）。若长期保存，可换70%酒精，于冰箱冷藏层保存，也可直接进行压片。

步骤3：酸解。

    取出卡诺或酒精中的材料，滤纸吸干，（茎尖剥至最小使茎尖露出），置于5N盐酸中解离3-5分钟，或在1N盐酸中60℃水浴3-5分钟（时间不定，可视材料大小、性质而定，以材料充分变软为宜）。

步骤4：碱中合。

取出解离好的材料放入1N NaCo₃水溶液中，中合5-10分钟，蒸馏水或清水冲洗3-5次或浸泡2-3分钟。

步骤5：染色。

取出材料滤纸洗干，取1mm根尖或剥取尽可能小的茎尖于载玻片上，滴两滴改良的卡宝品红染色液染色7-8分钟，时间可视材料染色难易适当调整。

步骤6：压片。

盖盖玻片，用镊子压材料部分，使材料分散，吸干周围染液，以滤纸包载玻片，以套胶头滴管胶头的铅笔敲击材料，力度以载玻片不碎，材料细胞分散为宜。

实施例7：镜检。

 显微镜下观察，好的片子可用封片剂封片以长期保存。

 

上述改良卡宝品红染色液可由如下方法制得：

  ◆原液配制：

A原液：称3g碱性品红溶于100ml 70%酒精中

B原液：取10ml  A  原液加入 90ml  5% 的石炭酸水溶液

C原液：取B原液 55ml 加冰醋酸和福尔马林（37%的甲醛）各6ml

※ A、C原液可长期保存，B原液两周内使用有效

◆染色液配制：取C原液10-20ml，加45%醋酸80-90ml和山梨醇1.8g，配成10—20%浓度的石炭酸品红溶液，配后两周着色力达最强，即可使用。

Claims (2)

1.一种植物染色体压片的制作方法，包括如下步骤：

步骤1 前处理

取供试材料的根、茎尖，浸于药剂中处理，所述药剂为饱和的对二氯苯、8-羟基喹啉、风油精、秋水仙素溶液中的一种，茎尖置于黑暗条件下；

步骤2 固定

将前处理后的材料用卡诺固定液固定2-24小时，所述卡诺固定液为 95%酒精与冰醋酸酸按体积比3：1混合而成；若长期保存，可换70%酒精，于冰箱冷藏层保存，也可直接进行压片；

步骤3 酸解

    取出卡诺或酒精中的材料，滤纸吸干，置于5N盐酸中解离3-5分钟，或在1N盐酸中60℃水浴3-5分钟；

步骤4：碱中合

取出步骤3中解离好的材料放入1N NaCo₃水溶液中，中合5-10分钟，蒸馏水或清水冲洗3-5次或浸泡2-3分钟；

步骤5：染色

取出材料滤纸洗干，取1mm根尖或剥取尽可能小的茎尖于载玻片上，滴两滴改良的卡宝品红染色液染色7-8分钟；

步骤6：压片

盖盖玻片，用镊子压材料部分，使材料分散，吸干周围染液，以滤纸包载玻片，以套胶头滴管胶头的铅笔敲击材料，力度以载玻片不碎，材料细胞分散为宜；

步骤7：镜检

 显微镜下观察，好的片子可用封片剂封片以长期保存。

2.一种卡宝品红染色液的配制方法，其特征在于包括如下步骤：

      原液配制：

A原液：称3g碱性品红溶于100ml 70%酒精中；

B原液：取10ml  A  原液加入 90ml  5% 的石炭酸水溶液；

C原液：取B原液 55ml 加冰醋酸和福尔马林（37%的甲醛）各6ml

      染色液配制：取C原液10-20ml，加45%醋酸80-90ml和山梨醇1.8g，配成10—20%浓度的石炭酸品红溶液。