CN105738172A

CN105738172A - 一种蚧虫玻片标本的绿色制作方法

Info

Publication number: CN105738172A
Application number: CN201610072511.3A
Authority: CN
Inventors: 梁帆; 赵菊鹏; 林莉; 赵国栋; 周庆贤; 马骏
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2016-02-02
Filing date: 2016-02-02
Publication date: 2016-07-06

Abstract

本发明公开了一种蚧虫玻片标本的绿色制作方法，属于昆虫玻片标本的制作方法技术领域，旨在解决现有的蚧虫玻片制作方法繁琐，污染环境，危害人体健康的问题。它是由以下步骤制作而成：1)虫体固定；2)脱脂透明；3)脱碱；4)染色液配置；5)脱水固色；6)封片：在载玻片上滴加上加拿大树胶，移入虫体，整姿，然后用盖玻片封片，即制作成为为本发明的绿色蚧虫玻片标本。其制作方法简便，染色效果好，保存期长，适用于蚧虫的玻片标本制作。

Description

一种蚧虫玻片标本的绿色制作方法

技术领域

本发明属于昆虫玻片标本的制作方法技术领域中一种蚧虫玻片标本的制作方法。

背景技术

蚧虫又称介壳虫属于节肢动物门昆虫纲，大多数介壳虫是植物害虫，由于其繁殖力强，对于经济作物和园林植物威胁很严重，常常造成植物落叶、落果、枝条死亡，甚至整株植物枯死；其常固着在植物上危害，虫体微小，往往不被人们注意，无意中进行人为传播，同时其繁殖量大，一旦发现蚧虫危害已较为严重了。随着国际贸易往来的日益频繁，进出境种苗及其水果增多，各种害虫尤其蚧虫传播的机会大大增加，使得介壳虫成为世界各国关注的对象；蚧虫是昆虫中形态特征变化比较复杂的类群之一，通常虫体很小，雌雄异型，在虫体上可观察到的形态结构比较细微，要准确鉴定其种类，只凭雌虫的大小及体外的蜡质分泌物、介壳的颜色、形状等外部特征是远远不够的，必须制作蚧虫玻片，才能在显微镜下观察其形态特征。在公知技术中，现有的蚧虫玻片标本制作方法主要是将活蚧虫先用70％酒精杀死固定后，用NaOH或KOH溶液中煮去表皮色素，清除体内内含物，然后用热水清洗，除去碱性，移入酸性酒精溶液中染色，染色后用从低到高浓度酒精脱水脱色，再放入二甲苯～苯酚溶液中透明，最后整理好姿式，滴上加拿大树胶封片。其制作方法繁琐，这种玻片制作方法由于使用了二甲苯和苯酚这两种有毒有害试剂，能经吸入、食入、经皮吸收，既污染环境，又对人体健康产生危害；且应用酸性品红酒精的染色液染色，由于酒精挥发过快而影响染色效果，也给实际应用带来诸多不便。

发明内容

为了克服现有技术的不足，解决现有的蚧虫玻片制作方法繁琐，污染环境，危害人体健康的问题。本发明之目的是提供一种蚧虫玻片的绿色制作方法，使其制作方法简便，绿色环保，不危害人体健康，且染色效果好，保存期长，使用方便的新式蚧虫玻片标本制作方法。

本发明解决上述问题所采用的技术方案是：

一种蚧虫玻片标本的绿色制作方法，它是由以下步骤制作而成：

1)虫体固定：将疥虫活虫体移入68～98％乙醇溶液中浸泡≥2小时，以杀死和固定虫体；

2)脱脂透明将已经固定的虫体置于体视显微镜下，用解剖刀在虫体头胸背面中央切一口，切口大小约占虫体长度的1/3～1/2，移入加有8～12％氢氧化钠溶液的≤5mL烧杯中，再置于加热板上，加热板温度调定至100℃～140℃，加热8～12分钟，加热时间以虫体的蜡质及内含物能和体壁分离且不影响后期染色时虫体着色为准，再将虫体移入盛有碱液的透明比色皿中，用镊子、解剖针的任一种工具清理虫体，直至彻底清除内含物、虫体变为清洁透明；

3)脱碱：把已透明虫体移入盛有蒸馏水的烧杯中，置于加热板上，温度调定至98℃～120℃，加热浸泡9～12分钟，再将虫体移入盛有蒸馏水的比色皿中清洗数次，直至完全清除虫体的碱液；

4)染色液配置：蒸馏水加入酸性品红制成的饱和溶液，再分别加入酸性品红饱和溶液等量的冰乙酸和甘油中，制成酸性品红染色液；

5)脱水固色：将已染色的虫体移入乙醇溶液中清除虫体多余的浮色，移入冰乙酸中脱水固色50～90分钟，再移入试剂中≥1小时；

6)封片：在载玻片上滴加上加拿大树胶，移入虫体，整姿，然后用盖玻片封片，即制作成为本发明的绿色蚧虫玻片标本。

上述的一种蚧虫玻片标本的绿色制作方法，所述酸性品红制成的饱和溶液是1份酸性品红溶于6～10ml水。

上述的一种蚧虫玻片标本的绿色制作方法，所述脱脂透明的步骤2)中，将装有切口虫体和氢氧化钠溶液的烧杯或是置于水浴容器(包括水浴锅、水浴箱、水浴槽等)、或是烘箱，以及其它适用型加热恒温设备中进行加热，加热温度调定至100℃～140℃，恒温8～12分钟后，再将虫体移入盛有碱液的透明比色皿中。

上述的一种蚧虫玻片标本的绿色制作方法，所述所述试剂为薰衣草油、加拿大树胶、丁香油、乙醇溶液的任一种。

上述的一种蚧虫玻片标本的绿色制作方法，所述乙醇溶液为68％、78％、80％、88％、93％、95％、98％、99.0％中的任一种乙醇溶液。

本发明使用时，将蚧虫按照设计要求的方法，制作成为蚧虫的绿色玻片标本。

由于本发明设计采用了上述技术方案，有效地解决了现有的蚧虫玻片制作方法繁琐，污染环境，危害人体健康的问题。亦经过数次次试验试用结果表明，它具有制作方法简便，绿色环保，不危害人体健康，且染色效果好，保存期长，使用方便等优点，适用于蚧虫的玻片标本制作。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。

实施例1

将采集到的蚧虫用毛笔移入70％乙醇溶液中浸泡2h固定，然后将已经固定的虫体置于体视显微镜下，用解剖刀在虫体头胸背面中央切一口，切口大小约占虫体长度的1/2，用毛笔移入加有10％氢氧化钠溶液的5mL烧杯中，置于加热板上，加热板温度调定至110℃，加热10分钟后，将虫体移入盛有碱液的透明比色器皿中，在体式显微镜下，用镊子、解剖针工具清理虫体，直至彻底清除内含物、虫体变为清洁透明；把已透明虫体用小毛笔移入盛有蒸馏水的小烧杯中，置于加热板上，温度调定至120℃，加热浸泡10分钟，再将虫体移入盛有蒸馏水的比色皿中，在体式显微镜下清洗数次，用解剖针挑入配置好的酸性品红染色液中，染色1h；经已染色的虫体移入88％乙醇溶液中清除虫体多余的浮色，移入冰乙酸中脱水固色1h；移入薰衣草油中1小时；然后将在载玻片上滴加上加拿大树胶，移入虫体，整姿，然后用盖玻片封片；加贴标签，制作完成为蚧虫绿色玻片标本Ⅰ。

实施例2

蚧虫玻片标本的绿色制作方法，它是由以下步骤制作而成：

1).虫体固定：将疥虫活虫体移入88％乙醇溶液中浸泡2小时，以杀死和固定虫体；

2).脱脂透明：将已经固定的虫体置于体视显微镜下，用解剖刀在虫体头胸背面中央切一口，切口大小占虫体长度的1/2，移入加有10％氢氧化钠溶液的5mL烧杯中，再将烧杯置于加热板上，加热温度调定至100℃，恒温加热10分钟，加热时间以虫体的蜡质及内含物能和体壁分离且不影响后期染色时虫体着色为准，将虫体移入盛有碱液的透明比色皿中，用镊子、解剖针的任一种工具清理虫体，直至彻底清除内含物、虫体变为清洁透明；

3).脱碱：把已透明虫体移入盛有蒸馏水的烧杯中，置于加热板上，温度调定至100℃，加热浸泡10分钟，再将虫体移入盛有蒸馏水的比色皿中清洗数次，直至完全清除虫体的碱液；

4).染色液配置：蒸馏水加入酸性品红制成的饱和溶液，再分别加入酸性品红饱和溶液等量的冰乙酸和甘油中，制成酸性品红染色液；

5).脱水固色：将已染色的虫体移入乙醇溶液中清除虫体多余的浮色，移入冰乙酸中脱水固色60分钟，再移入试剂中1小时；

6).封片：在载玻片上滴加上加拿大树胶，移入虫体，整姿，然后用盖玻片封片，即制作成为本发明的绿色蚧虫玻片标本Ⅱ。

本实施例的酸性品红制成的饱和溶液是1份酸性品红溶于7ml水。

本实施例的乙醇溶液为88％的乙醇溶液。

实施例3

蚧虫玻片标本的绿色制作方法，它是由以下步骤制作而成：

1).虫体固定：将疥虫活虫体移入98％乙醇溶液中浸泡2小时，以杀死和固定虫体；

2).脱脂透明：将已经固定的虫体置于体视显微镜下，用解剖刀在虫体头胸背面中央切一口，切口大小约占虫体长度的1/2，移入加有9.8％氢氧化钠溶液的5mL烧杯中，再将烧杯置于水浴锅，水浴锅加热温度调定至110℃，恒温加热10分钟，加热时间以虫体的蜡质及内含物能和体壁分离且不影响后期染色时虫体着色为准，将虫体移入盛有碱液的透明比色皿中，用镊子、解剖针的任一种工具清理虫体，直至彻底清除内含物、虫体变为清洁透明；

3).脱碱：把已透明虫体移入盛有蒸馏水的烧杯中，置于加热板上，温度调定至100℃，加热浸泡9.6分钟，再将虫体移入盛有蒸馏水的比色皿中清洗数次，直至完全清除虫体的碱液；

5).脱水固色：将已染色的虫体移入乙醇溶液中清除虫体多余的浮色，移入冰乙酸中脱水固色66分钟，再移入试剂中1小时；

6).封片：在载玻片上滴加上加拿大树胶，移入虫体，整姿，然后用盖玻片封片，即制作成为本发明的绿色蚧虫玻片标本Ⅲ。

本实施例的酸性品红制成的饱和溶液是1份酸性品红溶于6.8ml水。

本实施例的乙醇溶液为98％的乙醇溶液。

实施例4

将采集到的蚧虫用毛笔移入78％乙醇溶液中浸泡2h固定，然后将已经固定的虫体置于体视显微镜下，用解剖刀在虫体头胸背面中央切一口，切口大小约占虫体长度的1/2，用毛笔移入加有9.8％氢氧化钠溶液的5mL烧杯中，置于加热板上，加热板温度调定至100℃，加热9.5分钟后，将虫体移入盛有碱液的透明比色器皿中，在体式显微镜下，用镊子、解剖针工具清理虫体，直至彻底清除内含物、虫体变为清洁透明；把已透明虫体用小毛笔移入盛有蒸馏水的小烧杯中，置于加热板上，温度调定至110℃，加热浸泡11分钟，再将虫体移入盛有蒸馏水的比色皿中，在体式显微镜下清洗数次，用解剖针挑入配置好的酸性品红染色液中，染色1h；经已染色的虫体移入78％乙醇溶液中清除虫体多余的浮色，移入冰乙酸中脱水固色1h；移入薰衣草油中1小时；然后将在载玻片上滴加上加拿大树胶，移入虫体，整姿，然后用盖玻片封片；加贴标签，制作完成为蚧虫绿色玻片标本Ⅳ。

实施例5

蚧虫玻片标本的绿色制作方法，它在广东省试验是由以下步骤制作而成：

2).脱脂透明：将已经固定的虫体置于体视显微镜下，用解剖刀在虫体头胸背面中央切一口，切口大小约占虫体长度的1/2，移入加有10％氢氧化钠溶液的5mL烧杯中，再将烧杯置于烘箱中，烘箱的加热温度调定至100℃，恒温加热10分钟，加热时间以虫体的蜡质及内含物能和体壁分离且不影响后期染色时虫体着色为准，将虫体移入盛有碱液的透明比色皿中，用镊子、解剖针的任一种工具清理虫体，直至彻底清除内含物、虫体变为清洁透明；

6).封片：在载玻片上滴加适量的加拿大树胶，移入虫体，整姿，然后用盖玻片封片，即制作成为本发明的绿色蚧虫玻片标本Ⅴ。

Claims

1.一种蚧虫玻片标本的绿色制作方法，其特征在于，它是由以下步骤制作而成：

1).虫体固定：将疥虫的活虫体移入68～98％乙醇溶液中浸泡≥2小时，以杀死和固定虫体；

2).脱脂透明：将已经固定的虫体置于体视显微镜下，用解剖刀在虫体头胸背面中央切一口，切口大小占虫体长度的1/3～1/2，移入加有8～12％氢氧化钠溶液的≤5mL烧杯中，再把烧杯置于加热板上，加热板温度调定至100℃～140℃，加热8～12分钟，将虫体移入盛有碱液的透明比色皿中，用镊子、解剖针的任一种工具清理虫体，直至彻底清除内含物、虫体变为清洁透明；

3).脱碱：把已透明虫体移入盛有蒸馏水的烧杯中，置于加热板上，温度调定至98℃～120℃，加热浸泡9～12分钟，再将虫体移入盛有蒸馏水的比色皿中清洗数次，直至完全清除虫体的碱液；

5).脱水固色：将已染色的虫体移入乙醇溶液中清除虫体多余的浮色，移入冰乙酸中脱水固色50～90分钟，再移入试剂中≥1小时；

6).封片：在载玻片上滴加上加拿大树胶，移入虫体，整姿，然后用盖玻片封片，即制作成为本发明的绿色蚧虫玻片标本。

2.根据权利要求1所述的一种蚧虫玻片标本的绿色制作方法，其特征在于，酸性品红制成的饱和溶液是1份酸性品红溶于6～10ml水所制成。

3.根据权利要求1所述的一种蚧虫玻片标本的绿色制作方法，其特征在于，脱脂透明的步骤2)中，将装有切口虫体和氢氧化钠溶液的烧杯或是置于水浴容器、或是烘箱中进行加热，加热温度调定至100℃～140℃，恒温8～12分钟后，再将虫体移入盛有碱液的透明比色皿中。

4.根据权利要求1所述的一种蚧虫玻片标本的绿色制作方法，其特征在于，所述试剂为薰衣草油、加拿大树胶、丁香油、乙醇溶液的任一种。

5.根据权利要求1或4所述的一种蚧虫玻片标本的绿色制作方法，其特征在于，乙醇溶液为68％、78％、80％、88％、93％、95％、98％中的任一种乙醇溶液。