CN102507284A - 一种组织脱蜡液 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种组织脱蜡液，所述脱蜡液包括植物油。本发明的脱蜡液既可用于常规实验室组织石蜡切片的手动脱蜡，也可用于自动化染色仪上组织石蜡切片的在线脱蜡。在脱蜡过程中能完全取代二甲苯，取得了良好的染色效果，与二甲苯脱蜡效果无差异。并且我们采用的脱蜡液主要成分是天然植物油，对人体健康和环境无危害。

Description

一种组织脱蜡液

技术领域

本发明属于病理学领域，具体地，本发明涉及一种免疫组织化学、免疫细胞化学和原位杂交过程中石蜡包埋组织或细胞的脱蜡液。

技术背景

目前，绝大多数病理组织切片的制作仍采用传统的石蜡切片制作技术。病理制片过程中，组织的透明、切片染色前的脱蜡和染色后的透明三个环节，普遍采用二甲苯作为透明、脱蜡剂。虽然二甲苯具有良好的脱蜡和透明效果，但它是具有强烈刺激性气味的有毒物质，可经呼吸道和皮肤吸收进入体内。二甲苯对眼及上呼吸道有刺激作用，高浓度时对中枢神经系统有麻醉作用。短期内吸入较高浓度二甲苯可出现眼及上呼吸道明显的刺激症状、眼结膜及咽部充血、头晕、恶心、呕吐、胸闷、四肢无力、意识模糊、步态蹒跚。重者可有躁动、抽搐或昏迷，有的有癔病样发作。长期接触有神经衰弱综合征，女工有月经异常，工人常发生皮肤干燥、皲裂、皮炎等症状。而且在组织处理过程中，二甲苯易使组织收缩、硬化变脆、对切片质量有一定影响。

以IHC为基础的病理诊断的快速发展极大的推动了自动化染色仪的普及，自动化染色仪的发展代表外科病理学诊断的另一重要进展和创新。自动化控制和标准化所有关键性步骤，包括试剂应用、冲洗、最佳滴度、蒸发控制、温度和湿度，通过减少人为和技术造成的误差，提高了染色的精确性、一致性、重现性和可靠性。自动化染色仪不仅使全方位控制染色成为可能，而且使IHC可被以前没有专门进行手动IHC的操作员采用。但由于二甲苯会腐蚀仪器的部件，所以绝大多数自动化染色仪不能在线脱蜡或选择其它二甲苯替代物脱蜡。

因此，为了保护相关实验员的身体健康，并提高自动化染色仪的自动化程度，寻找一种无毒、无刺激性气味、无腐蚀性的脱蜡液尤为重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种无毒、无刺激性气味、无腐蚀性的组织脱蜡液。

本发明的脱蜡液包括植物油。

所述的植物油为大豆油、玉米油、葵花籽油、棉籽油、芝麻油、山茶油、棕榈油中的一种或多种的混合物。

所述植物油在脱蜡液中的质量比例为50%~100%。

更优选地，所述植物油在脱蜡液中的质量比例为90%~100%。

更优选地，所述脱蜡液为植物油。

本发明的脱蜡液既可用于常规实验室组织石蜡切片的手动脱蜡，也可用于自动化染色仪上组织石蜡切片的在线脱蜡。

本发明的脱蜡液用于实验室手动脱蜡的步骤为：将组织切片置于第一缸脱蜡液中，室温浸泡3-10分钟，取出切片后放入第二缸脱蜡液中以相同条件重复上一步操作，再取出切片放入第三缸脱蜡液中以相同条件重复上一步操作；自来水冲洗后先后将切片分别放入100%、100%、95%、85%的酒精中浸泡0.5-3min分钟，然后用水冲洗即可完成。

本发明的脱蜡液用于自动化染色仪上脱蜡的步骤为：将脱蜡液滴在切片上使其完全覆盖组织或细胞，20~75℃处理3-10分钟，去除切片表面的脱蜡液，滴加新的脱蜡液重复以上步骤两次，自来水冲洗后，用50%以上相同浓度的酒精冲洗3次，每次0.5-3分钟，最后用水冲洗即可完成。

我们通过反复试验，找到一种新的组织/细胞脱蜡液和脱蜡方法，在脱蜡过程中能完全取代二甲苯，取得了良好的染色效果，与二甲苯脱蜡效果无差异。并且我们采用的脱蜡液主要成分是天然植物油，对人体健康和环境无危害。

附图说明

图1为植物油脱蜡后HE染色结果。

图2为植物油-CCl₄脱蜡后HE染色结果。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行详细说明，以下实施例是为了进一步说明本发明，但不应视为限制本发明。

实施例1：

研究对象为甲醛固定-石蜡包埋的子宫平滑肌瘤、乳癌、扁桃体组织（××医院病理科）。脱蜡步骤为：分别将脱蜡液滴在切片上使其完全覆盖组织，室温处理3-10分钟，沥去切片表面的脱蜡液，滴加新的脱蜡液重复以上步骤两次，自来水冲洗后先后将切片放入100%、100%、95%、85%的酒精中浸泡0.5-3min分钟，最后用水冲洗即可完成。

同时设置二甲苯脱蜡对照组，其脱蜡步骤为：将组织石蜡切片置于第一缸二甲苯中，室温浸泡3-10分钟，取出切片后放入第二缸二甲苯中以相同条件重复上一步操作，再取出切片放入第三缸二甲苯中以相同条件重复上一步操作；自来水冲洗后先后将切片放入100%、100%、95%、85%的酒精中浸泡0.5-3min分钟，然后用水冲洗即可完成。

脱蜡完成后进行HE染色，其步骤为：

1）将组织切片浸泡于苏木素染液中1~2min。

2）PBS缓冲液中15~40s。

3）自来水冲洗后浸泡于伊红染液中15~25s。

4）85%酒精中3~15s。

5）95%酒精中3~15s。

6）100%酒精中3~15s。

7）100%酒精中3~15s。

8）二甲苯中1~2min。

9）中性树胶封固。

10）镜检。

实验结果显示，对于以上所有组织的HE染色，分别由大豆油、玉米油、葵花籽油、棉籽油、芝麻油、山茶油、棕榈油组成的脱蜡液或由上述植物油与四氯化碳以一定比例混合组成的脱蜡液处理后的HE染色结果与二甲苯脱蜡后HE染色结果无差异（图1、图2）。

试剂配置：

A：0.5~1% 的伊红酒精溶液： 

称取伊红Y 0.5~1 g，加少量蒸馏水溶解后，再滴加冰醋酸直至浆糊状。以滤纸过滤，将滤渣在烘箱中烤干后，用95%酒精100mL溶解。 

B：苏木素染液配方：(配制3000 mL，可按比列减少) 

苏木精 6 g 

　　无水乙醇 100 ml 

　　硫酸铝钾 150 g 

　　蒸馏水 2000 ml 

　　碘酸钠 1.2 g 

　　冰醋酸 120 ml 

　　甘油 900 ml 

配制方法：将苏木素溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水，溶解后将甘油倾入一起混合，最后加入冰醋酸和碘酸钠。

实施例2：

研究对象为甲醛固定-石蜡包埋的食道鳞癌、淋巴瘤、乳腺癌、胃癌、乳腺浸润性导管癌、神经鞘瘤、肝癌、扁桃体组织（××医院病理科）。检测的目标抗原有： ki-67、CD43、C-erbB-2、p53、PR、S-100、CK8、ER、CD45RO、CD20。

脱蜡步骤为：分别将脱蜡液滴在切片上使其完全覆盖组织，室温处理3-10分钟，沥去切片表面的脱蜡液，滴加新的脱蜡液重复以上步骤两次，自来水冲洗后，用75%的酒精冲洗3次，每次0.5-3分钟，最后用水冲洗即可完成。

同时设置二甲苯脱蜡对照组，其脱蜡步骤为：将组织石蜡切片置于第一缸二甲苯中，室温浸泡3-10分钟，取出切片后放入第二缸二甲苯中以相同条件重复上一步操作，再取出切片放入第三缸二甲苯中以相同条件重复上一步操作；自来水冲洗后先后将切片放入100%、100%、95%、85%的酒精中浸泡0.5-3min分钟，最后用水冲洗即可完成。

脱蜡完成后采用柠檬酸高温高压抗原修复，其步骤为：取适量已稀释成工作液的柠檬酸抗原修复液（800-1500mL，pH6.0）于压力锅中，将压力锅放置在电磁炉上，大功率加热至沸腾；将功率调至中等（800-1000W），将切片置于耐高温染色架上，放入压力锅中，盖上锅盖继续加热；当压力阀开始均匀喷气是计时1.5-2分钟，移开压力锅，室温冷却10分钟后用自来水在压力锅外壁冲淋加速冷却，当冷却至室温后取出玻片，自来水冲洗，在组织3mm左右处用免疫组化油笔画圈，PBS冲洗2×3分钟。加入过氧化物酶阻断剂，室温孵育10分钟，PBS冲洗3×3分钟。加入一抗，室温孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟。加入二抗，室温孵育15分钟，PBS冲洗3×3分钟。加入DAB显色液，室温孵育5分钟，自来水冲洗终止显色，苏木素复染，PBS返蓝。经梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封片后显微镜检。

结果显示，所有的切片经显微镜观察无蜡点存在，脱蜡彻底，与二甲苯对比，脱蜡效果、染色强度及背景强度均无差异（表1、表2、表3）。表明，本发明的脱蜡液可完全取代二甲苯，成为一种新的石蜡组织切片脱蜡剂。

表1 各种植物油脱蜡效果

备注：阳性对照为二甲苯脱蜡，阴性对照为不脱蜡。-：无染色或<10%细胞呈现微弱染色；+：>10%细胞呈现弱染色；++：>10%细胞呈现中等强度染色；+++：>10%细胞呈现高强度染色。±：介于-和+之间的染色强度。

表2 植物油混合物脱蜡效果

备注：表中只列出了部分植物油混合的比例。

表3植物油-CCl₄混合物脱蜡效果

备注：50%和90%植物油中其它成分为四氯化碳，且只列出的部分植物油与四氯化碳脱蜡后的染色结果。

本专利中所述的各种试剂，除特别指出外，均可从商业途径上获得。

Claims (5)

1.一种组织脱蜡液，其特征在于：所述脱蜡液包括植物油。

2.根据权利要求1所述的组织脱蜡液，其特征在于：所述的植物油为大豆油、玉米油、葵花籽油、棉籽油、芝麻油、山茶油、棕榈油中的一种或多种的混合物。

3.根据权利要求1所述的组织脱蜡液，其特征在于：所述植物油在脱蜡液中的质量比例为50%-100%。

4.根据权利要求1所述的组织脱蜡液，其特征在于：所述植物油在脱蜡液中的质量比例为90%-100%。

5.根据权利要求1所述的组织脱蜡液，其特征在于：所述脱蜡液为植物油。

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