CN110327341A

CN110327341A - Acss2抑制剂在制备预防和/或治疗糖尿病肾病药物中的应用

Info

Publication number: CN110327341A
Application number: CN201910699499.2A
Authority: CN
Inventors: 马坤岭; 鲁荐
Original assignee: Southeast University
Current assignee: Southeast University
Priority date: 2019-07-31
Filing date: 2019-07-31
Publication date: 2019-10-15
Anticipated expiration: 2039-07-31
Also published as: CN110327341B

Abstract

本发明公开了ACSS2抑制剂在制备预防和/或治疗糖尿病肾病药物中的应用，本发明发现ACSS2抑制剂在预防和/或治疗糖尿病肾病方面的显著效果可应用于制备预防和/或治疗糖尿病肾病药物，ACSS2作为DN干预新靶点。本发明利用ACSS2抑制剂，发现抑制ACSS2活性之后，高糖导致的足细胞损伤有所减轻，意味着ACSS2参与了高糖导致的足细胞损伤过程，并发挥了重要的作用。ACSS2抑制剂能够抑制糖尿病肾病重要的炎症因子IL‑6、MCP‑1和TNF‑α和糖尿病肾病转分化和胞外基质相关蛋白Collagen I、α‑SMA的表达，促进足细胞标志蛋白Nephrin的表达，具有显著的预防和/或治疗糖尿病肾病作用。

Description

ACSS2抑制剂在制备预防和/或治疗糖尿病肾病药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药领域，涉及一种ACSS2抑制剂在制备糖尿病肾病干预新靶点的应用，特别涉及ACSS2抑制剂在预防和/或治疗糖尿病肾病药物中的应用。

背景技术

糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)最常见的微血管并发症，也是终末期肾脏病的最主要病因。我国成年人糖尿病患病率为11.6％，总患病人数高达1.14亿，而其中接近一半的患者将发生DN(Xu Y,et al.JAMA 2013；310(9):948-959)。DN起病隐匿，早期诊断主要依赖尿微量白蛋白排泄率等测定指标，发现时大多已发展至DN III期以上，病情持续进展，基本不可逆转。并且，糖尿病肾病一旦进展至终末期，需采用透析、肾移植等治疗，严重危害人类健康的同时造成了巨大的经济负担。

根据临床与病理过程，Mogensen分期法将DN分为5期：Ⅰ期：肾小球肥大，呈高滤过状态，肾小球滤过率升高，无肾脏病理组织学改变。Ⅱ期：间歇性微量白蛋白尿期，尿蛋白排泄率正常或运动后增高，肾脏病理可有肾小球基底膜增厚和系膜扩张；同时，需排除其他因素引起的尿白蛋白排泄一过性增加。Ⅲ期：持续性微量白蛋白尿期，肾小球滤过率正常，病变仍为可逆性。Ⅳ期：显性蛋白尿期，尿常规检查尿蛋白水平从(+)～(++++)，可多达肾病范围的蛋白尿，肾小球滤过率下降，病理有典型的弥漫性肾小球硬化改变。Ⅴ期：肾功能衰竭期，尿蛋白排泄可减少，肾功能异常。临床上DN初期表现为肾小球滤过率减小，后期出现蛋白尿、动脉压升高、体液潴留等，最终导致肾功能衰竭。微量白蛋白尿是糖尿病肾病早期的标志性事件，而肾小球滤过膜受损是DN早期微量白蛋白尿发生的主要原因。肾小球滤过膜主要由肾小球内皮、基底膜、足细胞等三层结构组成，足细胞是构成肾小球滤过膜的主要细胞成分之一。研究表明，足细胞损伤是DN早期微量白蛋白尿发生的关键环节(3)。传统观点认为，DN早期发病机制主要与高血糖诱导的代谢改变和肾小球内高压、高灌注、高滤过等血流动力学异常有关，然而，临床上采取强化降糖、降压，拮抗肾素血管紧张素系统等综合治疗措施后，蛋白尿仍持续进展，仍然会出现肾脏足细胞足突融合、凋亡脱落等细胞学事件，最终导致肾小球硬化。因此，目前临床治疗中急需一种新的安全高效经济的方法治疗延缓DN的发生和发展。

乙酰辅酶A合成酶2(acetyl CoA synthetase 2，ACSS2)是一种代谢酶，主要定位于细胞线粒体内，ACSS2主要的生物功能是催化乙酸(acetate)转化生成乙酰辅酶A(乙酰CoA)。目前在肿瘤领域的研究发现，肿瘤组织局部微环境为相对缺血缺氧状态，肿瘤细胞表现为ACSS2高表达，ACSS2催化产生乙酰CoA的能量代谢途径是肿瘤细胞能量供给的主要来源之一，因此，ACSS2活化促进肿瘤细胞的能量代谢和生存(Sakakibara I,et al.CellMetab.2009 Feb；9(2)::191-202)。新近前沿研究也发现，当小鼠大脑海马神经元细胞内ACSS2活性降低，记忆基因表达过程会减慢，从而阻止形成长期记忆。因此研究者认为有望抑制ACSS2活性阻止形成创伤记忆，从而对抑郁症、焦虑与创伤后精神紧张症的治疗带来新的治疗方案(Philipp Mews,et al.Nature.2017 June 15；546(7658):381–386)。ACSS2抑制剂是化学合成的小分子化合物，也是有效的、特异性的乙酰辅酶A合成酶2(ACSS2)抑制剂。CAS号：508186-14-9，分子式为C₂₀H₁₈N₄O₂S₂，分子量为410.51，化学结构式如下所示。目前尚缺乏ACSS2抑制剂在肾脏疾病体内实验研究。

综上所述，现有技术存在的问题是：现有某些治疗技术中高糖导致的足细胞损伤较为严重；DN患者在临床治疗过程中，降低患者蛋白尿的同时，不能兼具肾脏保护的作用。

发明内容

发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明提供ACSS2抑制剂在制备预防和/或治疗糖尿病肾病药物中的应用。本发明首次发现ACSS2抑制剂在预防和/或治疗糖尿病肾病方面显著效果，因此，ACSS2抑制剂为有效成分，在制备预防和/或治疗糖尿病肾病方面具有重要的社会意义和经济意义。

技术方案：为了实现上述目的，如本发明所述ACSS2抑制剂在制备预防和/或治疗糖尿病肾病药物中的应用，所述ACSS2抑制剂的结构如式1所示：

作为优选，所述ACSS2抑制剂通过促进足细胞标志蛋白Nephrin的mRNA和蛋白表达应用在制备预防和/或治疗糖尿病肾病药物中。

作为优选，所述ACSS2抑制剂通过抑制足细胞的炎症因子MCP-1、TNF-α和IL-6的mRNA表达应用在制备预防和/或治疗糖尿病肾病药物中。

作为优选，所述ACSS2抑制剂通过抑制转分化蛋白α-SMA的mRNA和蛋白表达应用在制备预防和/或治疗糖尿病肾病药物中。

作为优选，所述ACSS2抑制剂通过抑制I型胶原collagen I的mRNA和蛋白表达应用在制备预防和/或治疗糖尿病肾病药物中。

其中，所述ACSS2抑制剂包括ACSS2抑制剂药学上接受的辅料。

进一步地于，所述ACSS2抑制剂在制备的预防和/或治疗糖尿病肾病药物中的质量百分含量为0.01～99.5％。

本发明所述的ACSS2抑制剂在糖尿病肾病干预新靶点中的应用。

本发明所述的预防和/或治疗糖尿病肾病药物组合物，包括ACSS2抑制剂、其药学上可接受的盐或酯或溶剂化合物作为活性成分和药学上可接受的辅料。

本发明的ACSS2抑制剂可以作为糖尿病肾病干预新靶点，本发明ACSS2作为糖尿病肾病干预新靶点的方法，利用ACSS2抑制剂，发现抑制ACSS2的活性之后，高糖导致的足细胞损伤有所减轻，意味着ACSS2参与了高糖导致的足细胞损伤过程，也证实ACSS2抑制剂可减缓高糖造成的足细胞损伤，为寻找新的糖尿病肾病的治疗措施提供新思路。

本发明对所述ACSS2抑制剂的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售ACSS2抑制剂即可(如Selleck公司)。

有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优点：

本发明首次发现ACSS2抑制剂在预防和/或治疗糖尿病肾病方面的显著效果，ACSS2可以作为DN干预新靶点，可应用于制备预防和/或治疗糖尿病肾病药物中，本发明发现抑制ACSS2活性之后，高糖导致的足细胞损伤明显减轻，意味着ACSS2参与了高糖导致的足细胞损伤过程，并发挥了重要的作用。ACSS2抑制剂能够抑制糖尿病肾病重要的炎症因子MCP-1、IL-6、TNF-α和糖尿病肾病相关蛋白Collagen I、α-SMA的表达，促进足细胞标志蛋白Nephrin的表达，具有显著的预防和/或治疗糖尿病肾病的作用。

本发明提供了一种ACSS2抑制剂在糖尿病肾病干预新靶点，使得ACSS2抑制剂应用在制备预防和/或治疗糖尿病肾病药物中，可以有效减少高糖导致的足细胞损伤,具有肾脏保护的作用。而包括本发明的ACSS2抑制剂的药物组合物可以成为新型的预防和/或治疗糖尿病肾病药物。

附图说明

图1为STZ诱导1型糖尿病肾病大鼠模型和db/db 2型糖尿病肾病小鼠模型肾皮质ACSS2免疫组化染色(×400)；

图2为ACSS2抑制剂对高糖刺激下足细胞炎症因子TNF-α、MCP-1和IL-6基因表达的影响(*P<0.05vs.Ctrl组；^#P<0.05vs.HG组)。；

图3为Real-time PCR显示ACSS2抑制剂对高糖刺激下足细胞标志蛋白Nephrin(图3A)、转分化分子α-SMA(图3B)和胞外基质Collagen I(图3C)基因表达的影响(*P<0.05，***P<0.001vs.Ctrl组；^#P<0.05，^##P<0.01vs.HG组)。；

图4为免疫荧光染色显示ACSS2抑制剂对高糖刺激下足细胞标志蛋白nephrin、转分化分子α-SMA蛋白表达的影响。

图5中，其中图5A是Western Blot代表性条带显示ACSS2抑制剂对高糖刺激下足细胞标志蛋白Nephrin、转分化分子α-SMA和胞外基质Collagen I蛋白表达的影响，图5B、5C、5D分别是ACSS2抑制剂对高糖刺激下足细胞Nephrin、α-SMA、和Collagen I的蛋白相对表达量的统计分析结果(*P<0.05，***P<0.001vs.Ctrl组；^#P<0.05，^##P<0.01，^###P<0.001vs.HG组)。

具体实施方式

以下结合附图和实施例对本发明作进一步说明。

本发明中ACSS2抑制剂在制备防治糖尿病药物时，可以添加ACSS2抑制剂药学上接受的辅料，本发明中ACSS2抑制剂在防治糖尿病药物中的质量百分含量为0.01～99.5％。

糖尿病肾病肾组织的主要病理特征表现为肾小管及肾小球基底膜增厚、肾小管肾小球肥大、系膜区细胞外基质进行性聚集和肾小管间质纤维化等。高糖刺激下，足细胞损伤表现为足细胞标志蛋白Nephrin的mRNA表达下调，炎症相关因子MCP-1、TNF-α和IL-6的mRNA表达表达上调，以及转分化蛋白α-SMA、I型胶原(Collagen I)的mRNA表达上调。而本发明ACSS2抑制剂能够促进足细胞标志蛋白Nephrin的mRNA和蛋白表达，抑制足细胞的炎症因子MCP-1、TNF-α和IL-6的mRNA表达、抑制转分化蛋白α-SMA的mRNA和蛋白表达，抑制胞外基质蛋白I型胶原(Collagen I)的mRNA和蛋白表达。可见所述ACSS2抑制剂具有显著的防治糖尿病肾病的作用。

实施例1

防治糖尿病肾病：本实施例采用高糖刺激足细胞模拟糖尿病状态。

一、材料：

ACSS2抑制剂购于shelleck公司；Trizol试剂购于美国Life Technologies公司；5×PrimeScript RT MasterMix购于日本TaKaRa公司；Nanodrop 2000c超量微生物检测仪购于美国Thermo Scientific公司；PCR系统7300购于美国Applied Biosystems公司；引物由南京捷瑞有限公司合成。

二、细胞培养、分组及处理：

小鼠足细胞用含10％BS、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的1640完全培养基，于37℃，5％CO2无菌恒温培养箱中孵育培养。选取生长状态良好且已经分化成熟的足细胞，随机分为正常对照组(等量PBS缓冲液)，高糖(30mmol/l)刺激组，ACSS2抑制剂(10μmol/l)组，高糖(30mmol/l)+ACSS2抑制剂(10μmol/l)组。

三、Real-time PCR

上述处理足细胞24小时后，用Trizol法抽提细胞总RNA，使用5×PimeScript RTmaster mix逆转录PCR获得cDNA，然后以小鼠TNF-α、MCP-1、IL-6、Synaptopin、α-SMA、Collagen I引物(引物序列见表1,SEQ ID NO.1-12)，2×SYBR Green Master为材料，总体系10μl，于反应条件：94℃，5min预变性；94℃，30s变性；60℃，30s退火；72℃，1min延伸，进行30个循环；72℃，10min。经由ΔΔCT计算，表达倍数其中ΔΔCT＝(CT(待测样本目的基因)-CT(待测样本内标基因))-(CT(对照样本目的基因)-CT(对照样本内标基因))，得出足细胞TNF-α、MCP-1、IL-6、Nephrin、α-SMA和Collagen I的mRNA表达变化。

四、Western Blot

1.肾组织和细胞总蛋白质提取

根据大鼠肾皮质组织和细胞的量，加入适量RIPA混合裂解液(RIPA：PMSF：磷酸酶抑制剂＝1000：10：20)。肾组织采用电动超声仪制成组织匀浆，吹打均匀后，于冰上裂解1小时，4℃离心12000g离心15分钟，吸取蛋白质上清，保存于-70℃，避免反复冻融。

2.蛋白浓度测定(凯基蛋白提取试剂盒，BCA法)

2.1绘制标准曲线

孔号	1	2	3	4	5	6	7	8
									蛋白标准液	0	1	2	4	8	12	16	20
去离子水	20	19	18	16	12	8	4	0
									对应蛋白浓度	0	0.5	1	2	4	6	8	10

2.2配制工作液：根据样品数量计算所需工作液总量，按试剂A：试剂B＝50：1比例配制工作液，涡旋充分混匀。

2.3向样本孔中依次加入19μl去离子水，然后加入1μl待测蛋白液，混匀。

2.4向标准孔和样本孔中各加入200μl工作液。充分振荡混匀后，放置于37℃孵育30分钟。

2.5测定吸光度值：酶标仪预热后，玉562nm波长处比色测定各孔吸光度值。根据标准曲线计算蛋白浓度：以蛋白含量为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。根据样本孔的吸光值计算相应的蛋白含量。计算统一各样本蛋白浓度所需的RIPA混合裂解液和上样缓冲液。

3.SDS-PAGE电泳

按照上述计算方式配制好蛋白样本后，煮沸5分钟，冷却至室温后，-20℃保存。将预制胶放入电泳槽中，注入电泳液(达到fill线)，用微量上样器加入30μg蛋白量和适量marker蛋白，120V恒压电泳80分钟。

4.转膜

电泳完成后，取出凝胶，按照凝胶尺寸大小裁剪PVDF膜，将PVDF膜浸泡放入100％甲醇中激活30秒。按照摆放顺序：塑料夹板-海绵-滤纸-凝胶-PVDF膜-滤纸-海绵-塑料夹板，夹紧塑料夹板，按照电极位置正确插入转膜槽中，加入适量转膜液(含5％甲醇)，电压为20V的条件下转膜1小时。

5.封闭

用TBS-T溶液(TBS：吐温比例＝10：1)配制封闭液——5％脱脂奶粉。转膜完成后，将PVDF膜放入封闭液中，水平摇床轻轻晃动，室温封闭1小时。

6.一抗孵育

用TBS-T溶液配制1％脱脂奶粉作为抗体稀释液，按照抗体说明书推荐稀释浓度配制一抗，将封闭好的PVDF膜放入封闭液中，水平摇床轻轻晃动，4℃孵育过夜。

7.二抗孵育

取出PVDF膜，用TBS-T溶液清洗3次，水平摇床晃动洗膜，每次10分钟。按照1：5000稀释比例配制二抗，将PVDF膜放入二抗中，水平摇床轻轻晃动，室温孵育2小时。用TBS-T溶液清洗3次，水平摇床晃动洗膜，每次10分钟。

8.显影

将ECL显影液A:B＝1:1配制，将PVDF膜浸泡其中，轻轻晃动，使PVDF膜充分接触显影液。放入暗匣，显影，保存图片。应用Image J分析软件对条带进行灰度分析，目的蛋白的相对表达量即为以目的蛋白/内参蛋白灰度比值。

五、免疫组化染色步骤

1.石蜡切片脱蜡至水步骤：70℃烤片2小时后，二甲苯浸泡40分钟，100％酒精浸泡2次，每次10分钟；95％酒精浸泡2次，每次5分钟；80％酒精浸泡2次，每次5分钟。自来水浸泡5分钟。

2.抗原修复：将切片放入盛满柠檬酸缓冲液的抗原修复盒中，盖上盒盖，放入微波炉中煮沸后，中火加热15分钟，解冻加热5分钟，取出修复盒，在室温下自然冷却至室温。PBS冲洗切片3次，每次3分钟。

3.除去PBS液，每个组织滴加50μl过氧化物酶阻断剂，室温下孵育10分钟。PBS冲洗3次，每次3分钟。

4.除去PBS液，每个组织滴加50μl正常非免疫动物血清，室温下孵育l0分钟。

5.除去血清，每个组织滴加50μl一抗，将切片水平放置于湿盒中，4℃过夜。阴性对照使用PBS代替一抗。

6.从冰箱中取出湿盒，复温至室温后，PBS冲洗3次，每次3分钟。

7.除去PBS液，每个组织滴加50μl生物素标记的二抗，室温下孵育60分钟。PBS冲洗3次，每次3分钟。

8.配置DAB显色液：按顺序将A、B、C液各一滴加入到850μl ddH2O中，现配现用。

9.除去PBS液，每个组织滴加50μl新鲜配制的DAB溶液，显微镜下观察3～5分钟。

10.自来水冲洗，苏木素复染1分钟，自来水冲洗返蓝。切片放入自来水中。

11.切片经过梯度酒精脱水和二甲苯透明。

12.在二甲苯尚未完全蒸发前滴加中性树胶封固切片，显微镜观察并进行图片分析。

六、细胞荧光染色步骤

1.弃去培养液，PBS冲洗三次，每次5分钟。

2.固定：用4％多聚甲醛常温下固定30分钟，PBS冲洗3次，每次3分钟。

3.穿透：吸干PBS，每张玻片用0.25％TritonX-100穿透10分钟。

4.封闭：滴加5％血清于湿盒内封闭30分钟。

5.一抗：吸干封闭液，加入相应一抗10μl，置于4℃冰箱过夜。

6.清洗：复温45分钟后，用PBS冲洗3次，每次3分钟。

7.二抗：吸干PBS，滴加荧光素标记二抗10μl，37℃避光孵育l小时(后续实验保持避光条件)。

8.PBS冲洗3次，每次3分钟。

9.吸干PBS，滴加DAPI染核3分钟，PBS冲洗3次，每次3分钟。在载玻片上滴加甘油缓冲液封片，荧光显微镜下观察。

结果：

1.如图1所示，免疫组化染色检测显示在两种糖尿病动物模型肾组织ACSS2较正常对照表达水平升高。通过免疫组化染色方法检测STZ诱导1型糖尿病肾病大鼠和db/db 2型糖尿病肾病小鼠肾皮质中ACSS2的蛋白表达水平，结果显示在上述两种动物模型肾皮质中ACSS2蛋白同样出现明显表达上调。

2.如图2所示，ACSS2抑制剂对高糖刺激下足细胞TNF-α、IL-6和MCP-1基因表达的影响。Real-time PCR结果显示，与对照组相比，高糖刺激促进足细胞内TNF-α、IL-6和MCP-1的mRNA表达，高糖+10μmol/L ACSS2抑制剂组足细胞内TNF-α和MCP-1的mRNA表达水平显著降低，说明ACSS2抑制剂具有抑制足细胞炎症因子基因表达的作用。

3.如图3A所示，ACSS2抑制剂对高糖刺激下足细胞标志蛋白Nephrin、基因表达的影响。Real-time PCR结果显示，与对照组相比，高糖刺激显著抑制足细胞内Nephrin的mRNA表达。高糖+10μmol/L ACSS2抑制剂组足细胞内足细胞标志蛋白Nephrin的mRNA表达水平显著上升。说明ACSS2抑制剂具有改善足细胞标志分子mRNA表达的作用。如图3B-C所示，ACSS2抑制剂对高糖刺激下足细胞α-SMA、Collagen I的mRNA表达的影响。Real-time PCR结果显示，对照组相比，高糖刺激显著促进足细胞内α-SMA、Collagen I的mRNA表达。10μmol/LACSS2抑制剂可抑制高糖诱导的α-SMA、Collagen I的mRNA表达。同样说明ACSS2抑制剂具有抑制糖尿病肾病中足细胞转分化蛋白和胞外基质蛋白基因表达的作用。

4.如图4所示，ACSS2抑制剂对高糖刺激下足细胞标志蛋白Nephrin基因表达的影响。免疫荧光染色结果显示，与对照组相比，高糖刺激抑制足细胞内Nephrin的蛋白表达，促进转分化分子α-SMA的蛋白表达。高糖+10μmol/L ACSS2抑制剂组足细胞内足细胞标志蛋白Nephrin的表达增加，转分化分子α-SMA的表达降低。说明ACSS2抑制剂具有抑制糖尿病肾病中足细胞转分化过程。

5.如Western Blot结果图5A所示为各代表性Western Blot条带。与对照组相比，高糖刺激抑制足细胞标志蛋白Nephrin的蛋白表达(图5B)，促进转分化分子α-SMA(图5C)、胞外基质蛋白collagen I的蛋白表达(图5D)。高糖+10μmol/LACSS2抑制剂组足细胞内足细胞标志蛋白Nephrin的表达增加(图5B)，转分化分子α-SMA(图5C)、胞外基质蛋白collagenI(图5D)的蛋白表达降低。再次说明ACSS2抑制剂具有抑制糖尿病肾病中足细胞转分化和纤维化过程。

6.由上述实施例可知，本发明提供的ACSS2抑制剂具有显著的防治糖尿病肾病的作用，可以用于制备防治糖尿病肾病的药物。

序列表

<110> 东南大学

<120> ACSS2抑制剂在制备预防和/或治疗糖尿病肾病药物中的应用

<160> 12

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

tgcttctttc ccattcttcg 20

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

gcccgtgatc cagtaatagc 20

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

gcctcctgac cattgctaa 19

<210> 4

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

tttccatcca gtcctaccg 19

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

gatggattcc cgttcgagta 20

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

tgctgtaggt gaagcgactg 20

<210> 7

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

cagcaaacag gaatacgacg aa 22

<210> 8

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

aaccacgagt aacaaatcaa agc 23

<210> 9

<211> 0

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

<210> 10

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

gtgctgaccc caagaaggaa t 21

<210> 11

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

ctcctccact tggtggtttg t 21

<210> 12

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

ggtgcctatg tctcagcctc t 21

Claims

1.ACSS2抑制剂在制备预防和/或治疗糖尿病肾病药物中的应用，所述ACSS2抑制剂的结构如式1所示：

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述ACSS2抑制剂通过促进足细胞标志蛋白Nephrin的mRNA和蛋白表达在制备预防和/或治疗糖尿病肾病药物中的应用。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述ACSS2抑制剂通过抑制足细胞的炎症因子MCP-1、TNF-α和IL-6的mRNA表达在制备预防和/或治疗糖尿病肾病药物中的应用。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述ACSS2抑制剂通过抑制转分化蛋白α-SMA的mRNA和蛋白表达在制备预防和/或治疗糖尿病肾病药物中的应用。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述ACSS2抑制剂通过抑制I型胶原collagen I的mRNA和蛋白表达在制备预防和/或治疗糖尿病肾病药物中的应用。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述ACSS2抑制剂包括ACSS2抑制剂药学上接受的辅料。

7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述ACSS2抑制剂在制备的预防和/或治疗糖尿病肾病药物中的质量百分含量优选为0.01～99..5％。

8.一种ACSS2抑制剂在糖尿病肾病干预新靶点中的应用。

9.一种预防和/或治疗糖尿病肾病药物组合物，其特征在于，，包括ACSS2抑制剂、其药学上可接受的盐或酯或溶剂化合物作为活性成分和药学上可接受的辅料。