CN105548569A - 一种肾癌患者外周血vegf的检测方法 - Google Patents

一种肾癌患者外周血vegf的检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105548569A
CN105548569A CN201610059535.5A CN201610059535A CN105548569A CN 105548569 A CN105548569 A CN 105548569A CN 201610059535 A CN201610059535 A CN 201610059535A CN 105548569 A CN105548569 A CN 105548569A
Authority
CN
China
Prior art keywords
filter
peripheral blood
minutes
patients
vegf
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610059535.5A
Other languages
English (en)
Inventor
李胜
孙萍
王振丹
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
SHANDONG ACADEMY OF MEDICAL SCIENCES
Original Assignee
SHANDONG ACADEMY OF MEDICAL SCIENCES
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by SHANDONG ACADEMY OF MEDICAL SCIENCES filed Critical SHANDONG ACADEMY OF MEDICAL SCIENCES
Priority to CN201610059535.5A priority Critical patent/CN105548569A/zh
Publication of CN105548569A publication Critical patent/CN105548569A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56966—Animal cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开了一种肾癌患者外周血VEGF的检测方法：利用膜过滤装置分离获取晚期肾癌患者外周血中的CTC；运用细胞蜡块技术制作薄层切片，进而检测肾癌患者VEGF基因表达情况。通过该技术方法，不用取材肾癌组织即可检测到肾癌患者VEGF表达情况。该技术属于微创甚至无创，并能够实时检测。

Description

一种肾癌患者外周血VEGF的检测方法
技术领域
本发明涉及一种检测VEGF的新方法，尤其是通过外周血检测肾癌患者VEGF的方法。
背景技术
在肾癌的发生发展中，缺氧诱导信号通路发挥着重要的作用，其信号的改变可以影响下游的VEGF通路，促进肿瘤血管生成，进而引起肿瘤进展。因此VEGF不但可作为预后判断的指标，也成为了肿瘤治疗的新靶点。研究表明,VEGF可作为肾癌分期、分级及预后判断的指标，为肾癌术后靶向药物或细胞因子辅助治疗提供依据，目前，针对VEGF及其相关受体的靶向药物，如索拉非尼、苹果酸舒尼替尼等，已成为晚期肾癌的一线治疗用药。因此，正确检测肾癌患者的VEGF表达情况至关重要。
目前通常使用的VEGF检测方法有两种。一种是免疫组织化学方法，通过检测肾癌组织标本中的VEGF相关蛋白表达情况判定VEGF状态。另外一种方法是蛋白免疫印迹法(Westernblot)，特异性更高，目前临床应用亦越来越多。这两种检测方法均是以肾癌组织为检测对象，尤其适用于肾癌行手术切除治疗的患者。但对于部分缺乏手术指征或存在手术禁忌症的肾癌患者(如晚期肾癌患者)，由于肿瘤组织无法切除，细针穿刺组织又容易造成肿瘤播散，VEGF表达状态的评估变得困难。
发明内容
循环肿瘤细胞(Circulatingtumorcell，CTC)是从实体肿瘤脱落进入外周血液循环的肿瘤细胞，自1989年被发现以来，目前已有多种方法用于外周血循环肿瘤细胞的检测。近期研究表明，其检测对于评估肿瘤患者尤其是晚期肿瘤患者的预后以及选择合适的个体化治疗具有重要的临床意义。因CTC检测具有微创、实时检测等特点，被称为肿瘤的“液态活检”。
为了克服晚期肾癌患者不适宜组织标本取材，进而无法评估患者VEGF表达状态的不足，本发明提供了一种肾癌患者外周血VEGF的检测方法：利用膜过滤装置分离获取晚期肾癌患者外周血中的CTC；运用细胞蜡块技术制作薄层切片，进而检测肾癌患者VEGF基因表达情况。
本发明采用的技术方案如下：
一、利用膜过滤装置分离获取晚期肾癌患者外周血中的CTC：
1、采集晚期肾癌患者外周血：肘正中静脉5ml；
2、外周血样预处理：将采集的外周血样10倍稀释，稀释液成分：1mmol/lEDTA+0.1％BSA,稀释后加多聚甲醛固定外周血样10分钟，固定终浓度为0.25％；
3、利用膜过滤分离肿瘤细胞装置过滤外周血样，分离获得外周血循环肿瘤细胞：将预处理的外周血样加入到膜过滤分离肿瘤细胞装置的血样容器中，使其依靠重力自然过滤；
4、过滤结束后，从膜过滤分离肿瘤细胞装置中取下滤器，将循环肿瘤细胞染色液加入到滤器中，染色2min，PBS缓冲液冲洗干净，取下滤膜，放置在载玻片上，干燥后在显微镜下观察，确定CTC是否存在。
二、运用细胞蜡块技术制作薄层切片：
1、脱色：将带有CTC的滤膜从载玻片上取下，置于脱色液中浸泡4-6小时，脱去CTC染色液，所述脱色液为：95％酒精与100％二甲苯按体积比1:1混匀。
2、包裹：浸泡结束后取出滤膜，用用吸水纸包裹；
3、固定：将包裹物置于10％中性福尔马林中，固定4-6h；
4、浸蜡包埋：固定结束后取出包裹物，脱水后置于石蜡包埋盒中，浸蜡包埋制作细胞石蜡块；
5、薄层切片：用切片机将细胞石蜡块连续切片，制成厚度为4μm的薄层切片。
三、检测肾癌患者VEGF基因表达情况：
1、将CTC蜡块薄层切片在染色缸中按以下步骤进行脱蜡和水化：二甲苯溶液浸泡3次，每次10分钟；无水乙醇溶液浸泡3次，每次5分钟；95％乙醇溶液浸泡5分钟；85％乙醇溶液浸泡5分钟；75％乙醇溶液浸泡5分钟；蒸馏水浸泡2次，每次3分钟；PBS(PH＝7.4)浸泡3次，每次3分钟；
2、采用柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复法对组织抗原进行修复：取pH＝6.0柠檬酸盐缓冲液800-1500ml于压力锅中，大火加热直至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温不锈钢切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，锅盖继续加热至喷汽开始计时，喷汽1-2分钟后，压力锅离开热源，冷却至室温，取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用pH＝7.2-7.4的PBS冲洗两次，每次各3分钟；
3、3％H2O2去离子水孵育5分钟，以阻断内源性过氧化物酶，PBS冲洗3次，每次2分钟；
4、滴加VEGF一抗，室温或37℃孵育1-2小时或4℃过夜，PBS冲洗3次，每次2分钟；
5、滴加通用型IgG抗体，室温或37℃孵育15分钟，PBS冲洗3次，每次2分钟；
6、应用DAB溶液显色：甩去PBS液，每张切片加2滴或100μl新鲜配制的DAB溶液，显微镜下观察3-10分钟；
7、蒸馏水冲洗、复染、脱水、透明封片：蒸馏水冲洗2次，每次3分钟；苏木素复染1分钟；0.1％盐酸酒精分化；0.1％氨水返蓝；100％、95％、90％梯度乙醇脱水干燥；二甲苯透明，中性树脂胶封片；
8、细胞病理学专家阅片，根据细胞着色程度判定VEGF表达情况。
步骤中所述的膜过滤分离肿瘤细胞装置，包括滤器、血样容器、废液缸和铁架台，所述铁架台设有底座、立架和支架，所述血样容器通过支架设置于铁架台上部，血样容器的下方为滤器，滤器通过输液器联通至废液缸，废液缸设置于底座上。
所述滤器包括滤器上口、滤膜、载滤膜平台和滤器下口，滤膜置于载滤膜平台上；滤器上口接血样容器，滤器下口通过输液器接废液缸。
所述滤膜为疏水材料制成，其上均匀布满口径为10微米的滤孔。肿瘤细胞直径一般大于15微米，而血细胞(包括红细胞、白细胞)直径一般小于10微米，因此当含有CTC的外周血经过滤后，血细胞因直径小于滤孔能够被滤过，而CTC因直径大于滤孔被截留在滤膜上。
本发明的有益效果是：通过该技术方法，不用取材肾癌组织即可检测到肾癌患者VEGF表达情况。该技术属于微创甚至无创，并能够实时检测。
附图说明
图1为本发明的膜过滤装置结构示意图；
图2为本发明膜过滤装置的滤器的结构示意剖视图；
图3为本发明膜过滤装置的滤器滤膜的结构示意图；
图4为晚期肾癌患者外周血分离获取的循环肿瘤细胞影像图；
图5为晚期肾癌患者外周血循环肿瘤细胞VEGF免疫组化染色图像。
图中：1铁架台、2血样容器、3滤器、4输液器、5废液缸、6滤器上口、7滤膜、8载滤膜平台、9滤器下口、10滤孔、11底座、12立架、13支架。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。
运用此技术方法分离获取并鉴定8例晚期肾癌患者(同时检测8例正常人样本做阴性对照)外周血循环肿瘤细胞VEGF基因表达情况的实施例。
采集各样本外周血5ml，用45ml稀释液(成分：1mmol/lEDTA+0.1％BSA)稀释外周血，然后加入3ml的4％多聚甲醛固定稀释后的血样10分钟。在固定的间期，组装膜过滤装置：如附图1、图2、图3所示，该过滤装置由滤器3、滤膜7、血样容器2、废液缸5、铁架台1构成。
利用膜过滤装置分离外周血样，富集外周血循环肿瘤细胞：用10mlPBS润湿滤器3，然后将预处理的外周血样加入到膜过滤装置的血样容器2中，使其依靠重力自然过滤，CTC被截留在滤膜7上。过滤结束后，从过滤装置中取下滤器3，打开并移走滤器上口6，将循环肿瘤细胞Diff染色液加入到滤器3中，染色2min。PBS缓冲液将滤器3冲洗干净，用眼科镊子取下滤膜7，细胞面朝上，放置在载玻片上。将滤膜7适当干燥后在显微镜下观察,确定是否存在CTC。
将带有CTC的滤膜7从载玻片上取下，置于脱色液(：95％酒精与100％二甲苯按体积比1:1混匀)中浸泡6小时，脱去CTC染色液。浸泡结束后取出滤膜7，用用吸水纸包裹；将包裹物置于10％中性福尔马林中，固定6h。
固定结束后取出包裹物，脱水后置于石蜡包埋盒中，浸蜡包埋制作细胞石蜡块。用切片机将细胞石蜡块连续切片，制成厚度为4μm的薄层切片。
薄层切片在染色缸中按以下步骤进行脱蜡和水化：二甲苯溶液浸泡3次，每次10分钟；无水乙醇溶液浸泡3次，每次5分钟；95％乙醇溶液浸泡5分钟；85％乙醇溶液浸泡5分钟；75％乙醇溶液浸泡5分钟；蒸馏水浸泡2次，每次3分钟；PBS(PH＝7.4)浸泡3次，每次3分钟。
采用柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复法对组织抗原进行修复：取pH＝6.0柠檬酸盐缓冲液1000ml于压力锅中，大火加热直至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温不锈钢切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，锅盖继续加热至喷汽开始计时，喷汽1分钟后，压力锅离开热源，冷却至室温，取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用pH＝7.2-7.4的PBS冲洗两次，每次各3分钟。
3％H2O2去离子水孵育5分钟，以阻断内源性过氧化物酶，PBS冲洗3次，每次2分钟。滴加VEGF一抗，室温或37℃孵育1-2小时或4℃过夜，PBS冲洗3次，每次2分钟。滴加通用型IgG抗体，室温或37℃孵育15分钟，PBS冲洗3次，每次2分钟。
应用DAB溶液显色：甩去PBS液，每张切片加2滴或100μl新鲜配制的DAB溶液，显微镜下观察7分钟。蒸馏水冲洗、复染、脱水、透明封片：蒸馏水冲洗2次，每次3分钟；苏木素复染1分钟；0.1％盐酸酒精分化；0.1％氨水返蓝；梯度乙醇脱水干燥(乙醇梯度为100％、95％、90％)；二甲苯透明，中性树脂胶封片。细胞病理学专家阅片，根据细胞着色程度判定VEGF表达情况。
实施例检测结果：8例健康志愿者均未查到循环肿瘤细胞；4例晚期肾癌患者检测到循环肿瘤细胞(表1)。本次检测阳性率为50％，所检测的循环肿瘤细胞应用免疫组化证实VEGF的表达并与肾癌大体标本VEGF结果对比，指导晚期肾癌的诊断及靶向治疗疗效判定，为晚期肾癌靶向治疗提供新的思路。
图4所示为晚期肾癌患者外周血分离获取的循环肿瘤细胞影像图，其细胞核较大，细胞核形状不规则；高核质比。
图5所示为晚期肾癌患者外周血循环肿瘤细胞VEGF免疫组化染色图像(根据其染色分布和强度判定阳性程度：根据其染色分布和强度判定阳性程度，细胞着色占细胞小于10％为(-)，着色10％-25％为(+)，着色25％-50％为(++)，着色大于50％为(+++)，见表1)。
表1实施例检测结果

Claims (7)

1.一种肾癌患者外周血VEGF的检测方法，其特征在于，利用膜过滤装置分离获取晚期肾癌患者外周血中的CTC；运用细胞蜡块技术制作薄层切片；进而检测肾癌患者VEGF基因表达情况。
2.根据权利要求1所述的肾癌患者外周血VEGF的检测方法，其特征在于，所述的膜过滤装置包括滤器(3)、血样容器(2)、废液缸(5)和铁架台(1)，所述铁架台(1)设有底座(11)、立架(12)和支架(13)，所述血样容器(2)通过支架(13)设置于铁架台(1)上部，血样容器(2)的下方为滤器(3)，滤器(3)通过输液器(4)联通至废液缸(5)，废液缸(5)设置于底座(11)上。
3.根据权利要求2所述的肾癌患者外周血VEGF的检测方法，其特征在于：所述滤器(3)包括滤器上口(6)、滤膜(7)、载滤膜平台(8)和滤器下口(9)，滤膜(7)置于载滤膜平台8上；滤器上口(6)接血样容器(2)，滤器下口(9)通过输液器(4)接废液缸(5)。
4.根据权利要求3所述的肾癌患者外周血VEGF的检测方法，其特征在于：所述滤膜(7)为疏水材料制成，其上均匀布满口径为10微米的滤孔(10)。
5.根据权利要求1所述的肾癌患者外周血VEGF的检测方法，其特征在于，所述的利用膜过滤装置分离获取晚期肾癌患者外周血中的CTC，步骤如下：
1)采集晚期肾癌患者外周血：肘正中静脉5ml；
2)外周血样预处理：将采集的外周血样10倍稀释，稀释液成分：1mmol/lEDTA+0.1％BSA,稀释后加多聚甲醛固定外周血样10分钟，固定终浓度为0.25％；
3)利用膜过滤分离肿瘤细胞装置过滤外周血样，分离获得外周血循环肿瘤细胞：将预处理的外周血样加入到膜过滤分离肿瘤细胞装置的血样容器(2)中，使其依靠重力自然过滤；
4)过滤结束后，从膜过滤分离肿瘤细胞装置中取下滤器(3)，将循环肿瘤细胞染色液加入到滤器(3)中，染色2min，PBS缓冲液冲洗干净，取下滤膜(7)，放置在载玻片上，干燥后在显微镜下观察，确定CTC是否存在。
6.根据权利要求1所述的肾癌患者外周血VEGF的检测方法，其特征在于，所述的运用细胞蜡块技术制作薄层切片，步骤如下：
1)脱色：将带有CTC的滤膜(7)从载玻片上取下，置于脱色液中浸泡4-6小时，脱去CTC染色液，所述脱色液为：95％酒精与100％二甲苯按体积比1:1混匀。
2)包裹：浸泡结束后取出滤膜(7)，用用吸水纸包裹；
3)固定：将包裹物置于10％中性福尔马林中，固定4-6h；
4)浸蜡包埋：固定结束后取出包裹物，脱水后置于石蜡包埋盒中，浸蜡包埋制作细胞石蜡块；
5)薄层切片：用切片机将细胞石蜡块连续切片，制成厚度为4μm的薄层切片。
7.根据权利要求1所述的肾癌患者外周血VEGF的检测方法，其特征在于，所述的检测肾癌患者VEGF基因表达情况，步骤如下：
1)将CTC蜡块薄层切片在染色缸中按以下步骤进行脱蜡和水化：二甲苯溶液浸泡3次，每次10分钟；无水乙醇溶液浸泡3次，每次5分钟；95％乙醇溶液浸泡5分钟；85％乙醇溶液浸泡5分钟；75％乙醇溶液浸泡5分钟；蒸馏水浸泡2次，每次3分钟；PH＝7.4的PBS浸泡3次，每次3分钟；
2)采用柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复法对组织抗原进行修复：取pH＝6.0柠檬酸盐缓冲液800-1500ml于压力锅中，大火加热直至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温不锈钢切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，锅盖继续加热至喷汽开始计时，喷汽1-2分钟后，压力锅离开热源，冷却至室温，取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用pH＝7.2-7.4的PBS冲洗两次，每次各3分钟；
3)3％H2O2去离子水孵育5分钟，以阻断内源性过氧化物酶，PBS冲洗3次，每次2分钟；
4)滴加VEGF一抗，室温或37℃孵育1-2小时或4℃过夜，PBS冲洗3次，每次2分钟；
5)滴加通用型IgG抗体，室温或37℃孵育15分钟，PBS冲洗3次，每次2分钟；
6)应用DAB溶液显色：甩去PBS液，每张切片加2滴或100μl新鲜配制的DAB溶液，显微镜下观察3-10分钟；
7)蒸馏水冲洗、复染、脱水、透明封片：蒸馏水冲洗2次，每次3分钟；苏木素复染1分钟；0.1％盐酸酒精分化；0.1％氨水返蓝；梯度为100％、95％、90％乙醇脱水干燥；二甲苯透明，中性树脂胶封片；
8)细胞病理学专家阅片，根据细胞着色程度判定VEGF表达情况。
CN201610059535.5A 2016-01-28 2016-01-28 一种肾癌患者外周血vegf的检测方法 Pending CN105548569A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610059535.5A CN105548569A (zh) 2016-01-28 2016-01-28 一种肾癌患者外周血vegf的检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610059535.5A CN105548569A (zh) 2016-01-28 2016-01-28 一种肾癌患者外周血vegf的检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105548569A true CN105548569A (zh) 2016-05-04

Family

ID=55827898

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610059535.5A Pending CN105548569A (zh) 2016-01-28 2016-01-28 一种肾癌患者外周血vegf的检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105548569A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109374892A (zh) * 2018-11-07 2019-02-22 国家纳米科学中心 基于热泳对vegf受体的检测系统及方法
CN111766384A (zh) * 2020-04-21 2020-10-13 山东省肿瘤防治研究院（山东省肿瘤医院） 一种通过外周血循环肿瘤细胞检测食道鳞癌患者pd-l1基因突变的非诊断目的方法
WO2021213322A1 (zh) * 2020-04-21 2021-10-28 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种检测肾癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1表达的免疫荧光试剂盒及检测方法

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109374892A (zh) * 2018-11-07 2019-02-22 国家纳米科学中心 基于热泳对vegf受体的检测系统及方法
CN111766384A (zh) * 2020-04-21 2020-10-13 山东省肿瘤防治研究院（山东省肿瘤医院） 一种通过外周血循环肿瘤细胞检测食道鳞癌患者pd-l1基因突变的非诊断目的方法
WO2021213322A1 (zh) * 2020-04-21 2021-10-28 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种检测肾癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1表达的免疫荧光试剂盒及检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106198984B (zh) 非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞pdl1基因的检测方法
CN105588943B (zh) 一种胃癌患者外周血循环肿瘤细胞Her‑2基因的检测方法
CN105510602A (zh) 一种晚期结直肠癌患者外周血循环肿瘤细胞vegf的检测方法
CN105510600B (zh) 晚期乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞er基因的检测方法
CN105606823B (zh) 晚期乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞pr基因的检测方法
WO2022001824A1 (zh) 一种检测小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1基因突变的试剂盒及检测方法
CN105548569A (zh) 一种肾癌患者外周血vegf的检测方法
CN111521798A (zh) 一种检测肾癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1基因突变的试剂盒及检测方法
CN111562375B (zh) 一种检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1表达的免疫荧光试剂盒及检测方法
CN111521794A (zh) 检测小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞nse基因突变的免疫荧光试剂盒及检测方法
CN111521796A (zh) 一种检测肾癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1表达的免疫荧光试剂盒及检测方法
WO2021233037A1 (zh) 一种检测胆管癌患者外周血循环肿瘤细胞fgfr基因突变的试剂盒及检测方法
CN105572388A (zh) 一种晚期结直肠癌患者外周血循环肿瘤细胞egfr的检测方法
CN105717104B (zh) 一种肝细胞癌患者外周血gpc3检测方法
CN105699657B (zh) 一种肾癌患者外周血Vimentin检测方法
CN104655475A (zh) 石蜡包埋对照物悬液的制备方法及应用
CN116593262A (zh) 基于pdx/pdtx肿瘤活组织生物样本和数据库的分子标志物检测产品及其制备方法
CN111856022A (zh) 一种检测胰腺癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin表达的试剂盒及检测方法
CN111521791A (zh) 一种检测小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞nse基因突变的试剂盒及检测方法
CN111679077A (zh) 肾细胞癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin表达的免疫荧光试剂盒及检测方法
CN105606824B (zh) 晚期乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞Her‑2基因的检测方法
CN110327341A (zh) Acss2抑制剂在制备预防和/或治疗糖尿病肾病药物中的应用
WO2021213261A1 (zh) 一种检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1基因突变的试剂盒及检测方法
CN107607727B (zh) H3K23ac在胶质瘤诊断中的应用
CN116773790B (zh) 一种肿瘤组织her2梯度检测产品的制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20160504