CN104013760A - 生肌玉红胶原海绵药物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了生肌玉红胶原海绵药物,它由如下重量份数的组分制成:当归5~10份,甘草5~10份,白芷5~10份,紫草5~10份,血竭1~4份,诃子5~10份,黄蜀葵花5~10份,载体为胶原。本发明还公开了上述药物生肌玉红胶原海绵药物的制备方法和应用。本发明药物疗效优于传统生肌玉红膏制剂,不含重金属汞,并可植入体内促进修复。用于促进体表难愈性溃疡、糖尿病性溃疡等愈合及填充体内组织缺损。
Description
技术领域
本发明属于中药技术领域,涉及一种生肌玉红胶原海绵药物及其制备方法与应用。
背景技术
慢性体表溃疡常常由糖尿病、压疮、激素应用等原因造成,是临床最常见的难点与热点之一。随人口老龄化的趋势,发病率逐渐升高,大量耗费医疗资源与严重影响患者生活质量。美国约翰霍普金斯大学医学院研究及现代meta分析显示,影响愈合的两大关键因素为创面的感染及血液供应,标准的治疗原则为积极清创与改善微循环;并提出未来局部外治中功能性辅料的研制是其发展方向。我国人口已超13亿,估计老年人口占12%以上,每年患慢性溃疡患者估计超过两千万。
生肌玉红膏可以显著改善下肢慢性创面肉芽微循环,促进肉芽生长,提高肉芽中血管内皮生长因子与羟脯氨酸含量。临床研究亦发现生肌玉红膏创面抑菌疗效不足。生肌玉红膏源自《外科正宗》,其主要成分当归、紫草、血竭、白腊、白芷、轻粉、甘草,具有活血解毒、润肤生肌功效,其中轻粉为含汞制剂,具有一定的毒性,且有致敏性,临床上可以抑制细菌呼吸酶而起到杀菌作用。传统制作方法为油提法:用芝麻油960g同置锅内炸枯,去渣。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是对古方生肌玉红膏进行改进,提供一种具有更强杀菌消炎功能的生肌玉红胶原海绵药物。
本发明还要解决的技术问题是提供上述生肌玉红胶原海绵药物的制备方法。
本发明最后要解决的技术问题是提供上述生肌玉红胶原海绵药物的应用。
为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案如下:
生肌玉红胶原海绵药物,它由如下重量份数的组分制成:当归5~10份,甘草5~10份,白芷5~10份,紫草5~10份,血竭1~4份,诃子5~10份,黄蜀葵花5~10份,载体为胶原。
优选的方案是,生肌玉红胶原海绵药物由如下重量份数的组分制成:当归6份,甘草6份,白芷6份,紫草6份,血竭2.4份,诃子6份,黄蜀葵花6份,载体为胶原。
上述生肌玉红胶原海绵药物,要求,每片50mm×50mm×2mm规格的胶原含血血竭素(C17H14O3)为3.25mg以上,甘草苷(C21H22O9)为5.0mg以上,欧前胡素(C46H14O4)为0.9mg以上。
上述生肌玉红胶原海绵药物的制备方法,该方法包括如下步骤:
(1)取配方量的当归、甘草、诃子和黄蜀葵花,用8倍重量的70v/v%乙醇水溶液浸泡30分钟,回流提取60分钟,固液分离收集滤液,固体部分再用乙醇水溶液浸泡30分钟,回流提取60分钟,固液分离合并滤液,回收乙醇至无醇味得到提取液,备用;
(2)取配方量的白芷和紫草,粉碎成粗粉,过20目筛,以乙醇湿润后(乙醇的使用重量为白芷和紫草重量的0.75~1.6倍),以8倍重量的70v/v%乙醇水溶液作溶剂,浸渍8小时后进行渗漉提取,渗漉速度为0.5mL·(min·kg)-1,收集渗漉液,加入配方量的血竭溶解,再加入步骤(1)得到的提取液,混匀,过滤,滤液加70v/v%乙醇水溶液定容,当当归、甘草、白芷、紫草、血竭、诃子和黄蜀葵花的总配方重量为31g~64g时,定容的总体积为100ml;
(3)将25ml步骤(2)得到的提取液载入胶原(即用每一块胶原吸收25mL液体),冷冻干燥后制成,环氧乙烷消毒后即得生肌玉红胶原海绵药物,其中,所述的胶原,孔径在15~25μm之间,成孔率98%,胶原为长宽50mm×50mm、高度为2mm的长方体。
按照上述制备方法制备得到的生肌玉红胶原海绵药物也在本发明的保护范围之内。
上述生肌玉红胶原海绵药物在制备治疗慢性体表静脉性溃疡、褥疮、缺血性创面、糖尿病足、放射性溃疡或麻风病溃疡药物中的应用也在本发明的保护范围之内。
上述生肌玉红胶原海绵药物在制备创面持续负压封闭引流治疗中的辅料植入药物中的应用。
上述生肌玉红胶原海绵药物的鉴别方法,取生肌玉红胶原样品,其规格为50mm×50mm×2mm,剪碎后加70v/v%乙醇水溶液50ml,超声处理30分钟,滤过,作为备用滤液;
该方法包括如下鉴别项目:
(1)取备用滤液10ml,水浴蒸干,残渣加乙醚20ml,超声处理10分钟,滤过,滤液浓缩至2ml,作为供试品溶液;另取当归对照药材0.6g,加10ml70v/v%乙醇水溶液浸泡30分钟,回流提取1小时,放冷,滤过,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上;以正己烷-乙酸乙酯按体积比4:1为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
(2)取备用滤液10ml,水浴蒸干,残渣加60~90℃石油醚20ml,超声处理20分钟,滤过,滤液浓缩至2ml,作为供试品溶液;另取紫草对照药材0.6g,粉碎,以70v/v%乙醇水溶液10ml作溶剂,浸渍8小时后进行渗漉提取,收集渗漉液,合并,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上;以环己烷-甲苯-乙酸乙酯-甲酸按体积比5:5:0.5:0.1为展开剂,展开,取出,晾干,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的紫色斑点;
(3)取血竭对照药材0.2g,以70v/v%乙醇水溶液10ml溶解,过滤,滤液同项目(1)制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取对照药材溶液和项目(1)下的供试品溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上;以三氯甲烷-甲醇按体积比19:1为展开剂,展开,取出,晾干,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的橙色斑点;
(4)取备用滤液10ml,水浴蒸干,残渣加乙酸乙酯20ml,超声处理20分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取金丝桃苷对照品,加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一聚酰胺薄膜上;以50v/v%冰醋酸水溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以三氯化铝试液,置紫外光灯365nm下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
上述生肌玉红胶原海绵药物的含量测定:照高效液相色谱法测定。
⑴血竭素:
色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液(72:28)为流动相;检测波长为440nm;柱温40℃。理论板数按血竭素峰计算应不低于4000。
对照品溶液的制备:取血竭素高氯酸盐对照品9mg,精密称定,置50ml棕色量瓶中,加3%磷酸甲醇溶液使溶解,并稀释至刻度,摇匀,精密量取1ml,置5ml棕色量瓶中,加甲醇置刻度,即得每1ml含血竭素26μg的对照品溶液(血竭素重量=血竭素高氯酸盐重量/1.377)。
供试品溶液:精密吸取鉴别项下备用滤液2ml,水浴蒸干,残渣用3%磷酸甲醇溶液溶解,置10ml棕色量瓶中,定容,摇匀。用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本品每片胶原(50mm×50mm×2mm)含血竭以血竭素(C17H14O3)计,不得少于3.25mg。
⑵甘草苷:
色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈(A)-0.08%磷酸溶液(B)梯度洗脱(见表1)为流动相;检测波长为275nm。理论板数按甘草苷峰计算应不低于5000。
表1 流动相梯度洗脱表
对照品溶液的制备:精密称取甘草苷对照品适量,加70%甲醇溶解制成每1ml含20μg的对照品溶液,即得。
供试品溶液:精密吸取鉴别项下备用滤液5ml,水浴蒸干,残渣用70%甲醇溶解,置10ml量瓶中,定容,摇匀。用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本品每片胶原(50mm×50mm×2mm)含甘草以甘草苷(C21H22O9)计,不得少于5.0mg。
⑶欧前胡素
色谱条件与系统适应性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(见表2)为流动相;检测波长为300n。理论板数按欧前胡素峰计算应不低于5000。
表2 流动相梯度洗脱表
对照品溶液的制备:精密称取欧前胡素甘草苷对照品适量,加70%甲醇溶解制成每1ml含10μg的对照品溶液,即得。
供试品溶液:同含量测定(2)供试品溶液项下。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本品每片胶原(50mm×50mm×2mm)含白芷以欧前胡素(C46H14O4)计,不得少于0.9mg。
有益效果:本发明在生肌玉红膏原处方中去除有毒性之轻粉,加入黄蜀葵花与诃子,以增加杀菌消炎作用,乙醇提取以增加有效成分与疗效,以冻干技术将药物均匀载入胶原并去除乙醇残留,减少组织刺激并增加组织相容性。经过药理、毒理及动物与临床研究,有效提高疗效并避免了毒副作用。同时将其体内植入,扩大了运用范围。
附图说明
图1~6为本发明的生肌玉红胶原对家兔皮肤急性毒性试验病理学图片。
图1为完整皮肤对照组,未见因药物毒性所致的病理形态学改变。
图2为完整皮肤生肌玉红胶原高剂量组:未见因药物毒性所致的病理形态学改变。
图3为完整皮肤生肌玉红胶原低剂量组:未见因药物毒性所致的病理形态学改变。
图4为破损皮肤对照组:未见因药物毒性所致的病理形态学改变。
图5为破损皮肤生肌玉红胶原高剂量组:未见因药物毒性所致的病理形态学改变。
图6为破损皮肤生肌玉红胶原低剂量组:未见因药物毒性所致的病理形态学改变。
图7~14为本发明的生肌玉红胶原对豚鼠皮肤刺激性试验病理学图片。
图7为完整皮肤对照高剂量组:未见因药物毒性所致的病理形态学改变。
图8为完整皮肤生肌玉红胶原高剂量组:未见因药物毒性所致的病理形态学改变。
图9为完整皮肤对照低剂量组:未见因药物毒性所致的病理形态学改变。
图10为完整皮肤生肌玉红胶原低剂量组:未见因药物毒性所致的病理形态学改变。
图11为破损皮肤对照高剂量组:未见因药物毒性所致的病理形态学改变。
图12为破损皮肤生肌玉红胶原高剂量组:未见因药物毒性所致的病理形态学改变。
图13为破损皮肤对照低剂量组:未见因药物毒性所致的病理形态学改变。
图14为破损皮肤生肌玉红胶原低剂量组:未见因药物毒性所致的病理形态学改变。
具体实施方式
根据下述实施例,可以更好地理解本发明。然而,本领域的技术人员容易理解,实施例所描述的内容仅用于说明本发明,而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1:
生肌玉红胶原海绵药物由如下组分制成:当归6g,甘草6g,白芷6g,紫草6份,血竭2.4g,诃子6g,黄蜀葵花6g,载体为胶原。
具体制备方法包括如下步骤:
(1)取配方量的当归、甘草、诃子和黄蜀葵花,用8倍重量的70v/v%乙醇水溶液浸泡30分钟,回流提取60分钟,固液分离收集滤液,固体部分再用乙醇水溶液浸泡30分钟,回流提取60分钟,固液分离合并滤液,回收乙醇至无醇味得到提取液,备用;
(2)取配方量的白芷和紫草,粉碎成粗粉,过20目筛,以20mL乙醇湿润后,以8倍重量的70v/v%乙醇水溶液作溶剂,浸渍8小时后进行渗漉提取,渗漉速度为0.5mL·(min·kg)-1,收集渗漉液,加入配方量的血竭溶解,再加入步骤(1)得到的提取液,混匀,过滤,滤液加70v/v%乙醇水溶液定容至100ml;
(3)将25ml步骤(2)得到的提取液载入胶原(即用每一块胶原吸收25mL液体),冷冻干燥后制成,环氧乙烷消毒后即得生肌玉红胶原海绵药物,其中,所述的胶原,孔径在15~25μm之间,成孔率98%,胶原为长宽50mm×50mm、高度为2mm的长方体。
实施例2:
生肌玉红胶原海绵药物由如下组分制成:当归5g,甘草5g,白芷5g,紫草5份,血竭1g,诃子5g,黄蜀葵花5g,载体为胶原。
制备方法同实施例1。
实施例3:
生肌玉红胶原海绵药物由如下组分制成:当归10g,甘草10g,白芷10g,紫草10份,血竭4g,诃子10g,黄蜀葵花10g,载体为胶原。
制备方法同实施例1。
实施例4:
1.1.药材提取工艺路线的选择
生肌玉红胶原海绵药物由如下重量份数的组分制成:当归6份,甘草6份,白芷6份,紫草6份,血竭2.4份,诃子6份,黄蜀葵花6份,载体为胶原。
首先进行比较的工艺路线为:(I)按原始工艺,药材用芝麻油炸,去渣取油;(II)药材水提,提取物离心去杂;(III)当归、白芷提取挥发液,药渣与其他药共煎,提取物离心去杂;(IV)药材70v/v%乙醇提。上述提取液进行细胞学研究,以药效学为指标,确定工艺路线的优劣。
1.1.1.样品溶液的制备
(1)生肌玉红提取液I的制备药材用芝麻油炸,去渣取油;
取处方中药材共240g。
加芝麻油960g于炸锅内,加热至油沸,待油温略降后,加入当归、甘草、白芷、诃子、黄蜀葵花五三味,保温炸枯,去渣;将紫草用水湿润,置锅中保温炸至油呈紫红色,去渣,取滤油,加芝麻油定容至960ml,即得。
生肌玉红提取液I,每ml药液相当于生药材4.0g。
(2)生肌玉红提取液II的制备药材水提,提取物离心去杂。
取处方中药材共240g。
加水煎煮提取两次。第一次加水2400ml,浸泡30分钟,加热煎煮1小时,滤过;第二次加水1920ml,煎煮1小时,滤过。合并两次滤液,静置12小时。离心,取上清液继续浓缩至960ml,即得。
生肌玉红提取液II,每ml药液相当于药材量4.0g。
(3)生肌玉红提取液III的制备当归、白芷提取挥发液,药渣与其他药共煎,提取物离心去杂。
取处方中药材共240g。
称取当归、白芷、诃子和黄蜀葵花,加水1000ml,浸泡1小时,水蒸气蒸馏1小时,同时收集挥发液(约60ml),滤过;药液和药渣另存。
称取甘草、紫草和血竭,加入上述药渣。加水煎煮提取两次。第一次加水2400ml,加热煎煮1小时,滤过;第二次加水1920ml,煎煮1小时,滤过。合并两次滤液,加入上述药液,静置12小时。离心,继续浓缩至约900ml,加入挥发液60ml,充分搅匀,定容至960ml,即得。
生肌玉红提取液III,每ml药液相当于生药材4.0g。
(4)生肌玉红提取液IV的制备,全部药材70%乙醇提。
取处方中药材共240g。
按照实施例1的制备方法制备得到生肌玉红提取液IV。
生肌玉红提取液IV,每ml药液相当于生药材4.0g。
1.1.2.试验方法
血管内皮细胞(HUVEC)增殖(MTT)实验:将冻存的HUVEC株解冻复苏后,置于含体积分数10%胎牛血清RPMI1640培养液中,于37℃,体积分数5%CO2孵箱培养,常规传代至第2代,待细胞进入对数生长期后取1×104个/孔用于实验,实验分两步进行:首先测定不同剂量的提取液对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响,然后检测其载入胶原对HUVEC增殖的作用。实验分组:原始工艺组(I)、水提组(II)、挥发水煎组(III)、醇提组(IV)。
试验结果:醇提组(IV)细胞增殖率高于挥发水煎组(III),挥发水煎组(III)高于水提组(II),水提组(II)高于原始工艺组(I),均有统计学差异。
结论:药效试验结果表明,四种工艺路线的样品,(IV)最佳。考虑工艺的方便,制剂成品的外观性状,确定生肌玉红提取液IV的工艺路线为生肌玉红胶原的提取工艺路线。
实施例5:
实施例1制备的肌玉红胶原海绵药物的鉴别方法,取生肌玉红胶原样品,其规格为50mm×50mm×2mm,剪碎后加70v/v%乙醇水溶液50ml,超声处理30分钟,滤过,作为备用滤液;
该方法包括如下鉴别项目:
(1)取备用滤液10ml,水浴蒸干,残渣加乙醚20ml,超声处理10分钟,滤过,滤液浓缩至2ml,作为供试品溶液;另取当归对照药材0.6g,加10ml70v/v%乙醇水溶液浸泡30分钟,回流提取1小时,放冷,滤过,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上;以正己烷-乙酸乙酯按体积比4:1为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
(2)取备用滤液10ml,水浴蒸干,残渣加60~90℃石油醚20ml,超声处理20分钟,滤过,滤液浓缩至2ml,作为供试品溶液;另取紫草对照药材0.6g,粉碎,以70v/v%乙醇水溶液10ml作溶剂,浸渍8小时后进行渗漉提取,收集渗漉液,合并,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上;以环己烷-甲苯-乙酸乙酯-甲酸按体积比5:5:0.5:0.1为展开剂,展开,取出,晾干,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的紫色斑点;
(3)取血竭对照药材0.2g,以70v/v%乙醇水溶液10ml溶解,过滤,滤液同项目(1)制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取对照药材溶液和项目(1)下的供试品溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上;以三氯甲烷-甲醇按体积比19:1为展开剂,展开,取出,晾干,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的橙色斑点;
(4)取备用滤液10ml,水浴蒸干,残渣加乙酸乙酯20ml,超声处理20分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取金丝桃苷对照品,加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一聚酰胺薄膜上;以50v/v%冰醋酸水溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以三氯化铝试液,置紫外光灯365nm下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
实施例6:
实施例1制备的生肌玉红胶原海绵药物的含量测定:照高效液相色谱法测定。
⑴血竭素:
色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液(72:28)为流动相;检测波长为440nm;柱温40℃。理论板数按血竭素峰计算应不低于4000。
对照品溶液的制备:取血竭素高氯酸盐对照品9mg,精密称定,置50ml棕色量瓶中,加3%磷酸甲醇溶液使溶解,并稀释至刻度,摇匀,精密量取1ml,置5ml棕色量瓶中,加甲醇置刻度,即得每1ml含血竭素26μg的对照品溶液(血竭素重量=血竭素高氯酸盐重量/1.377)。
供试品溶液:精密吸取鉴别项下备用滤液2ml,水浴蒸干,残渣用3%磷酸甲醇溶液溶解,置10ml棕色量瓶中,定容,摇匀。用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本品每片胶原(50mm×50mm×2mm)含血竭以血竭素(C17H14O3)计,不得少于3.25mg。
⑵甘草苷:
色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈(A)-0.08%磷酸溶液(B)梯度洗脱(见表1)为流动相;检测波长为275nm。理论板数按甘草苷峰计算应不低于5000。
表1 流动相梯度洗脱表
对照品溶液的制备:精密称取甘草苷对照品适量,加70%甲醇溶解制成每1ml含20μg的对照品溶液,即得。
供试品溶液:精密吸取鉴别项下备用滤液5ml,水浴蒸干,残渣用70%甲醇溶解,置10ml量瓶中,定容,摇匀。用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本品每片胶原(50mm×50mm×2mm)含甘草以甘草苷(C21H22O9)计,不得少于5.0mg。
⑶欧前胡素
色谱条件与系统适应性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(见表2)为流动相;检测波长为300n。理论板数按欧前胡素峰计算应不低于5000。
表2 流动相梯度洗脱表
对照品溶液的制备:精密称取欧前胡素甘草苷对照品适量,加70%甲醇溶解制成每1ml含10μg的对照品溶液,即得。
供试品溶液:同含量测定(2)供试品溶液项下。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本品每片胶原(50mm×50mm×2mm)含白芷以欧前胡素(C46H14O4)计,不得少于0.9mg。
实施例7:生肌玉红胶原急性皮肤毒性实验。
[实验目的]观察生肌玉红胶原对家兔的完整皮肤和破损皮肤能否经皮肤吸收和短期作用产生毒性反应。
1.材料
1.1实验用药物
生肌玉红胶原:按照实施例1的方法由江苏省中医院制剂部提供。
1.2实验用动物
家兔,体重2.1kg-2.7kg,由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供,合格证号:SCXK(苏)2007-0008。
1.3实验用饲料
全价营养颗粒饲料:由江苏省协同医药生物技术有限公司提供
1.4实验条件
室温20±2℃,湿度55-65%,光照适度,通风洁净良好。
2.实验方法
完整皮肤组:
取家兔12只,雌雄各半,体重2.3kg-2.7kg,随机分为以下3组,每组4只。
基质组:等量基质
生肌玉红高剂量组:1.5g/kg
生肌玉红低剂量组:0.5g/kg
试验开始前24h,剃除动物躯干背部约占动物体表面积的10%的被毛,去毛时不要损伤皮肤以免影响皮肤的通透性。24h后,将脱毛区域涂敷生肌玉红胶原药物或基质,然后用一层薄胶片覆盖,无刺激胶布固定,防止动物舔食。家兔分笼饲养,涂药24h小时后,用温水轻轻洗去残留药物,观察去除药物后1h,24h,48h,72h至14d。染毒第1d定时观察实验动物的中毒表现和死亡情况,其后每天进行一次仔细的检查。包括被毛和皮肤、眼睛和粘膜以及呼吸、循环、自主神经和中枢神经系统、肢体运动和行为活动等的改变。观察期内存活动物每周称重,14d后处死家兔,取涂拭药物区域皮肤,经肉眼观察后,用10%甲醛溶液固定,进行病理组织学检查。
破损皮肤组:
取家兔12只,雌雄各半,体重2.1kg-2.5kg,随机分为以下3组,每组4只。
基质组:等量基质
生肌玉红高剂量组:1.5g/kg
生肌玉红低剂量组:0.5g/kg
试验开始前24h,剃除动物躯干背部约占动物体表面积的10%的被毛,去毛时不要损伤皮肤以免影响皮肤的通透性。然后用细砂纸轻轻摩擦至渗血。24h后,将脱毛区域涂敷生肌玉红胶原药物或基质,然后用一层薄胶片覆盖,无刺激胶布固定,防止动物舔食。家兔分笼饲养,涂药24h小时后,用温水轻轻洗去残留药物,观察去除药物后1h,24h,48h,72h至14d。染毒第1d定时观察实验动物的中毒表现和死亡情况,其后每天进行一次仔细的检查。包括被毛和皮肤、眼睛和粘膜以及呼吸、循环、自主神经和中枢神经系统、肢体运动和行为活动等的改变。观察期内存活动物每周称重,14d后处死家兔,取涂拭药物区域皮肤,经肉眼观察后,用10%甲醛溶液固定,进行病理组织学检查。
3.实验结果
3.1生肌玉红胶原对完整皮肤、破损皮肤兔子体重的影响
表3 生肌玉红胶原对完整皮肤兔子体重的影响
△p>0.05,与给药前比较
实验结果:
基质组、生肌玉红高剂量组、生肌玉红低剂量组对完整皮肤的兔子在给药后的第一周和第二周体重无明显变化,与给药前比较无显著性差异(p>0.05)。提示:生肌玉红胶原对完整皮肤兔子体重没有明显影响。
表4 生肌玉红胶原对破损皮肤兔子体重的影响
△p>0.05,与给药前比较
实验结果:
基质组、生肌玉红高剂量组、生肌玉红低剂量组对破损皮肤的兔子在给药后的第一周和第二周体重无明显变化,与给药前比较无显著性差异(p>0.05)。提示:生肌玉红胶原对破损皮肤兔子体重没有明显影响。
3.2肉眼观察动物情况
观察基质组、生肌玉红高剂量组、生肌玉红低剂量组完整皮肤、破损皮肤兔子在去除药物后1h,24h,48h,72h至14d均无中毒表现和死亡,实验动物被毛和皮肤、眼睛和粘膜以及呼吸、循环、自主神经和中枢神经系统、肢体运动和行为活动未见异常。提示:生肌玉红胶原对完整皮肤和破损皮肤均无刺激性和任何不良影响。
3.3病理变化
生肌玉红胶原对家兔皮肤急性毒性试验病理学检查报告
一、材料和方法
(一)送检标本及单位:家兔皮肤标本共24例,由南京中医药大学附属医院江苏省中医院提供。
分组如下:
表5
组别 | 标本例数 |
完整皮肤对照组 | 4 |
完整皮肤生肌玉红胶原低剂量组 | 4 |
完整皮肤生肌玉红胶原高剂量组 | 4 |
破损皮肤对照组 | 4 |
破损皮肤生肌玉红胶原低剂量组 | 4 |
破损皮肤生肌玉红胶原高剂量组 | 4 |
(二)检查方法
将动物处死后,取其背部皮肤,用10%福尔马林固定,石蜡包埋切片,切片厚约4-5μm,HE染色。由专业病理人员在光学显微镜下阅片,根据病变轻重程度不同,依次标记为“-、+、++、+++、++++”表示,其中“-”为无明显改变,“++++”为严重的病理改变。
二、结果
(一)完整皮肤对照组
皮肤结构正常,被覆鳞状上皮完整,无变性、坏死、脱落,角化层无增厚,真皮内无血管扩张充血、炎细胞浸润;附属结构皮脂腺、毛囊等无异常。
(二)完整皮肤生肌玉红胶原低剂量组
皮肤结构正常,被覆鳞状上皮完整,无变性、坏死、脱落,角化层无增厚,真皮内无血管扩张充血、炎细胞浸润;附属结构皮脂腺、毛囊等无异常。
(三)完整皮肤生肌玉红胶原高剂量组
皮肤结构正常,被覆鳞状上皮完整,无变性、坏死、脱落,角化层无增厚,真皮内无血管扩张充血、炎细胞浸润;附属结构皮脂腺、毛囊等无异常。
(四)破损皮肤对照组
皮肤结构清晰,可见散在的愈合灶,被覆鳞状上皮完整,真皮内无血管扩张充血,有少许炎细胞浸润;附属结构皮脂腺、毛囊等无异常。
(五)破损皮肤生肌玉红胶原低剂量组
皮肤结构清晰,可见散在的愈合灶,被覆鳞状上皮完整,真皮内无血管扩张充血,有少许炎细胞浸润;附属结构皮脂腺、毛囊等无异常。
(六)破损皮肤生肌玉红胶原高剂量组
皮肤结构清晰,可见散在的愈合灶,被覆鳞状上皮完整,真皮内无血管扩张充血,有少许炎细胞浸润;附属结构皮脂腺、毛囊等无异常。
三、结论
完整皮肤生肌玉红胶原低、高剂量组与完整皮肤对照组相比,无显著病理学差异;破损皮肤生肌玉红胶原低、高剂量组与破损皮肤对照组相比,无显著病理学差异,未见因药物毒性所致的病理形态学改变。
生肌玉红胶原对家兔皮肤急性毒性试验病理学图片见图1~6。
实施例8:生肌玉红胶原对豚鼠的皮肤致敏性试验
[实验目的]观察豚鼠的皮肤在重复接触生肌玉红胶原后,是否产生变态反应。
1.材料
1.1实验用药物及试剂
生肌玉红胶原:由按照实施例1的方法江苏省中医院制剂部提供。
2,4-二硝基氯苯:上海医药采购供应站,批号:090321
1.2实验用动物
豚鼠,体重230g-280g,由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供,合格证号:SCXK(苏)2007-0008。
1.3实验用饲料
全价营养颗粒饲料:由江苏省协同医药生物技术有限公司提供
1.4实验条件
室温20±2℃,湿度55-65%,光照适度,通风洁净良好。
2.1实验方法
取豚鼠30只,雌雄各半,体重230g-280g,随机分为以下3组,每组10只。
基质组:等量基质
生肌玉红胶原组:0.2ml/只
2,4-二硝基氯苯组:0.2ml/只
试验开始前24h,动物颈背部两侧脱毛,一侧用于致敏涂敷,另一侧用于激发涂敷。豚鼠去毛范围约3cm*3cm。实验组动物背部左侧脱毛处涂敷受试物生肌玉红胶原,阴性对照组涂敷等量基质,阳性对照组涂敷0.1%2,4-二硝基氯苯。每日重复一次,连续三次。在末次给药后第十四天,在豚鼠右侧脱毛区,敞开式涂敷受试物激发,阳性对照组用0.01%2,4-二硝基氯苯激发。6h后,去掉涂敷物,即刻观察皮肤过敏反应情况,之后于24h,48h,72h再次观察皮肤过敏反应情况。
2.2结果评价标准:
2.2.1.皮肤过敏反应评分标准。
表6
2.2.2.致敏率分类
表7
反应平均值=(红斑形成总分+水肿形成总分)/合计动物数
致敏率=皮肤过敏反应阳性(不论程度轻重)的动物数/受试动物总数
3.实验结果
表8 给药后动物体重的变化
Δp﹤0.05与基质组比较
实验结果所示:
生肌玉红胶原组初始体重,7天称重,末次体重与基质组比较无显著性差异(P>0.05),2,4-二硝基氯苯组末次体重比基质组明显降低,与基质组比较具有显著性差异(p﹤0.05)。
表9 生肌玉红胶原致敏反应记分
表10 生肌玉红胶原致敏率
实验结果所示:
生肌玉红胶原对实验动物豚鼠没有过敏性反应。
实施例9:生肌玉红胶原对豚鼠的皮肤刺激试验。
[实验目的]观察豚鼠的完整皮肤和破损皮肤在多次接触生肌玉红胶原后所产生的刺激反应情况。
1.材料
1.1实验用药物
生肌玉红胶原:按照实施例1的方法由江苏省中医院制剂部提供。
1.2实验用动物
豚鼠,体重230g-295g,由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供,合格证号:SCXK(苏)2007-0008。
1.3实验用饲料
全价营养颗粒饲料:由江苏省协同医药生物技术有限公司提供
1.4实验条件
室温20±2℃,湿度55-65%,光照适度,通风洁净良好。
2.实验方法
取豚鼠32只,雌雄各半,体重230g-295g,随机分为以下4组,每组8只。
完整皮肤高剂量组:1g/ml,1ml/只鼠
完整皮肤低剂量组:0.5g/ml,1ml/只鼠
破损皮肤高剂量组:1g/ml,1ml/只鼠
破损皮肤低剂量组:0.5g/ml,1ml/只鼠
给药前24h将豚鼠背脊两侧对称脱毛,左侧为空白对照区,右侧为给药区。后24h完整皮肤组左侧涂以基质1ml,右侧涂以生肌玉红胶原1ml。然后用一层纱布覆盖后固定。破损皮肤组在给药前用细砂纸轻轻摩擦至渗血,以擦伤表皮、不伤真皮、轻度渗血为度,给药方法同完整皮肤组。给药固定6h后取去覆盖物,观察给药部位出现红斑和水肿情况。每日涂抹1次,连续7天。之后于24h,48h,72h再次观察皮肤红斑和水肿反应情况。结果判断标准:
皮肤刺激性反应评分标准
表11
皮肤刺激强度评价
表12
3.实验结果
表13 给药后动物体重的变化
△p>0.05,与给药前比较
实验结果:
完整皮肤生肌玉红高剂量组、生肌玉红低剂量组、破损皮肤生肌玉红高剂量组、生肌玉红低剂量组末次体重与给药前比较无显著性差异(p>0.05)。
表14 生肌玉红高剂量组完整皮肤刺激反应评分结果
表15 生肌玉红高剂量组破损皮肤刺激反应评分结果
表16 生肌玉红低剂量组完整皮肤刺激反应评分结果
表17 生肌玉红低剂量组破损皮肤刺激反应评分结果
实验结果所示:
生肌玉红胶原对实验动物豚鼠的完整皮肤和破损皮肤均无刺激性作用。同时生肌玉红胶原对于破损皮肤还有减少红斑,促进愈合的作用。3.病理变化
表18 生肌玉红胶原对豚鼠皮肤组织病理学检查结果(刺激性实验)
表19 生肌玉红高剂量组完整皮肤刺激反应评分结果
表20 生肌玉红高剂量组破损皮肤刺激反应评分结果
表21 生肌玉红低剂量组完整皮肤刺激反应评分结果
表22 生肌玉红低剂量组破损皮肤刺激反应评分结果
实施例10:生肌玉红胶原对豚鼠皮肤刺激性试验病理学检查报告
一、材料和方法
(一)送检标本及单位:豚鼠皮肤标本共24例,由南京中医药大学附属医院江苏省中医院提供。
分组如下:
表23
组别 | 标本例数 |
完整皮肤对照低剂量组 | 6 |
完整皮肤对照高剂量组 | 6 |
完整皮肤生肌玉红胶原低剂量组 | 6 |
完整皮肤生肌玉红胶原高剂量组 | 6 |
破损皮肤对照低剂量组 | 6 |
破损皮肤对照高剂量组 | 6 |
破损皮肤生肌玉红胶原低剂量组 | 6 |
破损皮肤生肌玉红胶原高剂量组 | 6 |
(二)检查方法
将动物处死后,取其背部皮肤,用10%福尔马林固定,石蜡包埋切片,切片厚约4-5μm,HE染色。由专业病理人员在光学显微镜下阅片,根据病变轻重程度不同,依次标记为“-、+、++、+++、++++”表示,其中“-”为无明显改变,“++++”为严重的病理改变。
二、结果
(一)完整皮肤对照低剂量组
皮肤结构正常,被覆鳞状上皮完整,无变性、坏死、脱落,角化层无增厚,真皮内无血管扩张充血、炎细胞浸润;附属结构皮脂腺、毛囊等无异常。
(二)完整皮肤对照高剂量组
皮肤结构正常,被覆鳞状上皮完整,无变性、坏死、脱落,角化层无增厚,真皮内无血管扩张充血、炎细胞浸润;附属结构皮脂腺、毛囊等无异常。
(三)完整皮肤生肌玉红胶原低剂量组
与对照低剂量组相比,皮肤结构正常,无明显差异。
(四)完整皮肤生肌玉红胶原高剂量组
与对照高剂量组相比,皮肤结构正常,无明显差异。
(五)破损皮肤对照低剂量组
皮肤结构正常,被覆鳞状上皮完整,无变性、坏死、脱落,角化层无增厚,真皮内内少许炎细胞浸润;附属结构皮脂腺、毛囊等无异常。
(六)破损皮肤对照高剂量组
皮肤结构正常,被覆鳞状上皮完整,无变性、坏死、脱落,角化层无增厚,真皮内内少许炎细胞浸润;附属结构皮脂腺、毛囊等无异常。
(七)破损皮肤生肌玉红胶原低剂量组
与对照低剂量组相比,皮肤结构正常,无明显差异。
(八)破损皮肤生肌玉红胶原高剂量组
与对照高剂量组相比,皮肤结构正常,无明显差异。
三、结论
完整皮肤生肌玉红胶原低、高剂量组与完整皮肤对照组相比,无显著病理学差异;破损皮肤生肌玉红胶原低、高剂量组与破损皮肤对照组相比,无显著病理学差异,未见因药物毒性所致的病理形态学改变。生肌玉红胶原对豚鼠皮肤刺激性试验病理学图片见图7~14。
实施例11:生肌玉红胶原对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响
[实验目的]观察生肌玉红胶原对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响。
1.材料
1.1实验用药物及试剂
生肌玉红胶原:按照实施例1的方法由江苏省中医院制剂部提供。
康复新液:四川好医生攀西药业有限责任公司,批号:120812
二甲苯:如皋市华瑞试剂厂,批号:20100120
1.2实验用动物
ICR小鼠,18-22g,由扬州大学实验动物中心提供,合格证号:SCXK(苏)2012-0004
1.3实验用饲料
全价营养颗粒饲料:由江苏省协同医药生物技术有限公司提供
1.4实验条件
室温20±2℃,湿度55-65%,光照适度,通风洁净良好。
1.5实验仪器
FA1004电子分析天平:上海精科天平厂
1.6统计学处理
统计学处理数据用表示,采用t检验,用spss16.0统计软件进行统计分析。
2.实验方法
取健康ICR小鼠50只,体重18-22g,随机分为5组:
(1)空白对照组:等量生理盐水
(2)康复新组:原液,50ul/只鼠
(3)生肌玉红胶原高剂量组:1g/ml,50ul/只鼠
(4)生肌玉红胶原中剂量组:0.5g/ml,50ul/只鼠
(5)生肌玉红胶原低剂量组:0.25g/ml,50ul/只鼠
以上各组涂拭相应药物50ul于小鼠右耳耳壳两面,连续7天,空白对照组涂拭50ul生理盐水。末次给药后30min,分别将二甲苯溶液30ul/只鼠涂抹于小鼠右耳两面进行攻击,致炎1小时后,小鼠拉颈处死,沿耳廓基线剪下小鼠双耳,用直径为8mm的打孔器打下左右耳片,称重。求小鼠左右耳片重量之差,并计算肿胀度。
肿胀度(mg)=右耳片重量-左耳片重量
3.实验结果
表24 生肌玉红胶原对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响
△P<0.05,△△P<0.01,与空白对照组比较
实验结果所示:二甲苯可致小鼠耳廓肿胀明显,经过生肌玉红胶原治疗的小鼠耳廓肿胀度明显改善,生肌玉红胶原高剂量组、中剂量组、低剂量组小鼠耳廓肿胀度与空白对照组相比明显减轻,与空白对照组比较具有显著性差异(P<0.01)。提示:生肌玉红胶原能抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀。
实施例12:生肌玉红胶原对小鼠耳廓微循环的影响
[实验目的]观察生肌玉红胶原对小鼠耳廓微循环的影响,以确定生肌玉红胶原是否具有改善血液循环,活血化瘀的功能。
1.材料
1.1实验用药物及试剂
生肌玉红胶原:按照实施例1的方法由江苏省中医院制剂部提供。
康复新液:四川好医生攀西药业有限责任公司,批号:120812
乌来糖:国药集团化学试剂有限公司,批号:T20110214
1.2实验用动物
ICR小鼠,18-22g,由扬州大学实验动物中心提供,合格证号:SCXK(苏)2012-0004
1.3实验用饲料
全价营养颗粒饲料:由江苏省协同医药生物技术有限公司提供
1.4实验条件
室温20±2℃,湿度55-65%,光照适度,通风洁净良好。
1.5实验仪器
WXT-4微循环图像计算机分析系统:徐州医用光学电子仪器研究所
1.6统计学处理
统计学处理数据用表示,采用t检验,用spss16.0统计软件进行统计分析。
2.实验方法
取健康ICR小鼠50只,体重18-22g,随机分为5组:
(1)空白对照组:等量生理盐水
(2)康复新组:原液,50ul/只耳
(3)生肌玉红胶原高剂量组:1g/ml,50ul/只耳
(4)生肌玉红胶原中剂量组:0.5g/ml,50ul/只耳
(5)生肌玉红胶原低剂量组:0.25g/ml,50ul/只耳
以上各组涂拭相应药物于小鼠两耳耳壳两面各50ul药液,连续7天,空白对照组涂拭等量生理盐水。末次给药45min后,各组小鼠腹腔注射20%乌拉坦溶液0.07ml/10g,麻醉后,用橡皮膏轻轻拉去耳廓毛,将小鼠腹向下固定在观察台上,调节耳托高度,使耳廓平展在耳托上,在耳托上和耳廓表面滴加少许香柏油,调节适当亮度,在透射下,用50-100倍镜观察小鼠耳廓微循环细动脉、细静脉的管径和血流速度,以判断微循环改善情况。
3.实验结果
表25 生肌玉红胶原对小鼠耳廓微循环的影响
△△P<0.01,与空白对照组比较
实验结果所示:生肌玉红胶原高剂量组、中剂量组小鼠耳廓细静脉、细动脉的管径明显增粗,与空白对照组比较具有显著性差异(P<0.01)。生肌玉红胶原高剂量组、中剂量组、低剂量组小鼠耳廓血流速度明显加快,与空白对照组比较具有显著性差异(P<0.01)。提示:生肌玉红胶原具有改善小鼠耳廓血液循环,活血化瘀的功能。
实施例13:生肌玉红胶原对大鼠蹊部埋藏棉球诱发肉芽组织增生的影响
[实验目的]观察生肌玉红胶原对大鼠蹊部埋藏棉球诱发肉芽组织增生的影响,以确定生肌玉红胶原是否具有抗炎的作用。
1.材料
1.1实验用药物及试剂
生肌玉红胶原:按照实施例1的方法由江苏省中医院制剂部提供。
康复新液:四川好医生攀西药业有限责任公司,批号:120812
青霉素:山东鲁抗医药股份有限公司,批号:S101009
链霉素:山东鲁抗医药股份有限公司,批号:100802
1.2实验用动物
SD大鼠,150-165g,由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供,合格证号:SCXK(沪)2008-0016
1.3实验用饲料
全价营养颗粒饲料:由江苏省协同医药生物技术有限公司提供
1.4实验条件
室温20±2℃,湿度55-65%,光照适度,通风洁净良好。
1.5实验仪器
FA1004电子分析天平:上海精科天平厂
1.6统计学处理
统计学处理数据用表示,采用t检验,用spss16.0统计软件进行统计分析。
2.实验方法
取健康SD大鼠50只,体重150-165g,随机分为5组,每组10只:
(1)空白对照组:等量生理盐水
(2)康复新组:原液,50ul/侧
(3)生肌玉红胶原高剂量组:1g/ml,50ul/侧
(4)生肌玉红胶原中剂量组:0.5g/ml,50ul/侧
(5)生肌玉红胶原低剂量组:0.25g/ml,50ul/侧
按0.3ml/100g鼠重腹腔注射3%水合氯醛麻醉,在每只鼠的左右蹊部用碘酒消毒,75%酒精棉球脱碘后,各切1cm长小口,用眼科镊子将20mg的高压灭菌棉球用青霉素和链霉素混合液0.2ml浸泡(每毫升含青霉素800u,链霉素650u),烘干,从切口处植入皮下,随即缝合皮肤。从手术当日开始,按上述剂量给药,连续7天。第7天打开原切口,将棉球连同周围结缔组织一起取出,剔除脂肪组织,放70℃烘箱烘干,称重。将称得的重量减去棉球原重量即得肉芽肿重量。
3.实验结果
表26 生肌玉红胶原对大鼠棉球肉芽肿的影响
△△P<0.01,与空白对照组比较
实验结果所示:生肌玉红胶原高剂量组、中剂量组、低剂量组大鼠蹊部的棉球肉芽组织明显变小,与空白对照组比较具有显著性差异(P<0.01)。提示:生肌玉红胶原具有抗炎的作用。
实施例14:生肌玉红胶原对小鼠腹部皮肤毛细血管通透性的影响
[实验目的]观察生肌玉红胶原对小鼠腹部皮肤毛细血管通透性的影响。
1.材料
1.1实验用药物及试剂
生肌玉红胶原:按照实施例1的方法由江苏省中医院制剂部提供。
康复新液:四川好医生攀西药业有限责任公司,批号:120812
磷酸组胺:上海丽珠东风生物技术有限公司,批号:011005
1.2实验用动物
ICR小鼠,18-22g,由扬州大学实验动物中心提供,合格证号:SCXK(苏)2012-0004
1.3实验用饲料
全价营养颗粒饲料:由江苏省协同医药生物技术有限公司提供
1.4实验条件
室温20±2℃,湿度55-65%,光照适度,通风洁净良好。
1.5统计学处理
统计学处理数据用表示,采用t检验,用spss16.0统计软件进行统计分析。
2.实验方法
取健康ICR小鼠50只,体重18-22g,随机分为5组,每组10只。
(1)空白对照组:等量基质
(2)康复新组:原液,0.1ml/只鼠
(3)生肌玉红胶原高剂量组:1g/ml,0.1ml/只鼠
(4)生肌玉红胶原中剂量组:0.5g/ml,0.1ml/只鼠
(5)生肌玉红胶原低剂量组:0.25g/ml,0.1ml/只鼠
按照上述剂量给予相应药物,连续7天。末次给药30min后,立即于腹部去毛部位皮下注射0.1%磷酸组织胺0.03mL,同时各组小鼠均尾静脉注射0.5%伊文思蓝生理盐水溶液10mL/kg,20min后取带有蓝染皮肤的肌肉块,投入丙酮和NS的混合液(7∶3)3mL中浸泡48h,取浸泡液,用721型分光光度计于600nm波长处比色,测其光密度(OD)值。比较给药组与对照组着色程度的差异。
3.实验结果
表27 生肌玉红胶原对腹部皮肤毛细血管通透性的影响
△△P<0.01,与空白对照组比较
实验结果所示:生肌玉红胶原高剂量组、中剂量组、低剂量组小鼠实验前体重和实验末体重与空白对照组比较没有显著性差异(P>0.05)。生肌玉红胶原高剂量组、中剂量组小鼠蓝染皮肤的浸泡液OD值明显低于空白对照组,与空白对照组比较具有显著性差异(P<0.01)。提示:生肌玉红胶原具有降低因致炎剂导致的小鼠腹部皮肤毛细血管通透性增加的作用,这一作用可能与生肌玉红胶原具有抗炎的功能相关。
实施例15:生肌玉红胶原体外抑菌实验
[实验目的]观察生肌玉红胶原对标准金黄色葡萄球菌(26003)、标准大肠杆菌(44104)、铜绿假单胞菌、临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐氨苄西林舒巴坦铜绿假单胞菌的抑菌作用。
1.材料
1.1实验用药物
生肌玉红胶原:按照实施例1的方法由江苏省中医院制剂部提供。
盐酸林可霉素:由金陵药业股份有限公司南京金陵制药厂提供,批号:091201
氯化钠:南京化学试剂有限公司,批号:09060310494
营养琼脂:上海盛思生化科技有限公司,批号:100312
营养肉汤:上海盛思生化科技有限公司,批号:091123
1.2实验用菌株
标准菌株:金黄色葡萄球菌(26003)、大肠杆菌(44104)、铜绿假单胞菌。由卫生部微生物鉴定所提供。
临床分离菌株:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐氨苄西林舒巴坦铜绿假单胞菌,由江苏省人民医院微生物鉴定室提供。
1.3实验用设备
FA1004电子天平:上海精科天平厂
隔水式电热恒温培养箱:上海跃进医疗器械厂
YXQ-2S-50SⅡ立式压力蒸汽灭菌器:上海博迅实业有限公司医疗设备厂
生物安全柜BSC-1500ⅡA2-X:济南鑫贝亚生物技术有限公司
2.实验方法和结果
2.1增菌培养
取标准大肠杆菌、标准金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐氨苄西林舒巴坦铜绿假单胞菌等菌株少许接种于肉汤培养基中,37℃培养18h,取出用生理盐水稀释至10-6备用。
2.2药物配制
生肌玉红胶原:江苏省中医院制剂室提供的已灭菌的原液(0.5g生药/ml)。
盐酸林可霉素:规格:0.6g/2ml
无菌条件下取林可霉素100ul,NS稀释至1ml,即为30mg/ml林克霉素溶液
2.3实验方法
2.3.1试管法
取18h培养的各菌株营养肉汤培养物,用灭菌后的生理盐水作10-6稀释用于实验。取灭菌试管10支,每管加入1ml营养肉汤培养基,取生肌玉红胶原药液1ml加入第一管内,混匀后取1ml至第二管,依次稀释,第九管吸出1ml弃去,第十管不加药液作为对照。盐酸林可霉素作为阳性对照,取配置好的盐酸林可霉素1ml加入第一管内,混匀后取1ml至第二管,依次稀释,第九管吸出1ml弃去,第十管不加药液作为对照。每管加入菌液0.1ml,至37℃培养箱中培养18h,取出观察MIC。
2.3.2平皿法
取肉汤琼脂培养基溶化后倒入9cm平皿20ml,待其凝固。用无菌注射器(1ml)吸取菌液0.1ml均匀涂布于凝固的肉汤琼脂平皿上。待其干燥数分钟后用无菌钢圈打四个孔,每孔注入药液0.1ml,每块平皿涂布一种实验菌,注入两种不同药液。37℃孵育20小时后用直尺测量抑菌圈直径。
2.4实验结果
2.4.1生肌玉红胶原体外抑菌实验(试管法),见表28。
表28 生肌玉红胶原体外抑菌实验(试管法)(n=2)
实验结果所示:生肌玉红胶原对以上标准大肠杆菌、标准金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐氨苄西林舒巴坦铜绿假单胞菌均有较好的抑菌作用。抑菌MIC为0.25g/ml。
2.4.1生肌玉红胶原体外抑菌实验(平皿法),见表29。
表29 生肌玉红胶原体外抑菌实验(平皿法)(n=2)
实验结果所示:生肌玉红胶原对标准大肠杆菌、标准金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐氨苄西林舒巴坦铜绿假单胞菌具有较强的抑菌作用。抑菌范围为10.5-19.5mm。
表30 药物敏感实验判定标准
实施例16:动物感染性创面实验数据
1实验材料
1.1实验动物雄性SPF级SD大鼠40只,200-220g,由江苏省中医院动物实验中心按“实验动物国家标准”饲养。
1.2实验器材与试剂生肌玉红提取液浓度生药0.384g/ml)、胶原(Dr Suwelack Skin &Health Care公司馈赠,环氧乙烷消毒后备用)、生肌玉红胶原(0.2ml生肌玉红均匀载入胶原,-50℃冻干)、金黄色葡萄球菌(26003)(菌数为6×108个/mL,卫生部微生物鉴定所)、大鼠IL-6酶联免疫检测试剂盒、大鼠TNF-α酶联免疫检测试剂盒、羟脯氨酸试剂盒、大鼠基质金属蛋白酶MMP-1、MMP-2、MMP-9定量检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
2实验方法
2.1慢性创面动物模型于大鼠背部制造一直径2cm皮肤缺损,至皮下深筋膜,埋入塑胶环(内径2cm,外径2.3cm),边缘与创缘结扎固定后于创面内注入菌数6×108个/ml的金黄色葡萄球菌0.2ml。
2.2实验分组将20只大鼠随机分为对照组、胶原组、生肌玉红组、生肌玉红载入胶原组4组,每组10只,组内编号,造模后生肌玉红载入胶原组以生肌玉红载入胶原敷于创面,对照组、生肌玉红组则分别以载入0.2ml生理盐水、0.2ml生肌玉红的同等大小无菌纱布敷于创面,胶原组以同等大小胶原敷于创面。外敷双层无菌纱布并固定,隔日换药。
2.3测定指标
2.3.1创面面积于造模时及造模后第3、7、15天对创面拍照,用Image J软件分析测定创面面积。
2.3.2创面渗液中白细胞总数、IL-6、TNF-α含量于造模时及造模后第3、7、15天收集创面渗液,离心后取上清液40ul,按试剂盒(指示操作步骤测定450nm处OD值,通过标准曲线得出TNF-α与IL-6含量(ng/L)的数值;用取分泌物涮洗上清液20ul,滴入计数盘中,用低倍镜计数四角大方格中的白细胞总数,按照下面公式计算:白细胞/升=四大格白细胞总数/8×105。。
2.3.3创面肉芽组织中羟脯氨酸、MMPs(MMP-1、MMP-2、MMP-9)、TIMP-1含量于造模时及造模后第3、7、15天取创面肉芽组织,取肉芽组织称重后,予以低温(4℃)匀浆,按试剂盒指示操作步骤测定450nm处OD值,通过标准曲线得出MMP-1、MMP-2、MMP-9与TIMP-1含量(ng/L),然后除以重量(g)换算成该标本的数值。
2.4统计学分析所有数据均以(平均数±标准差)表示,采用t检验,使用SPASS18.0软件进行统计分析。P<0.05表示有统计学差异。
结果
1各组大鼠创面面积比较各组大鼠初始创面面积平均约0.80cm2,造模后第3天,对照组、胶原组创面面积较初始时增大,生肌玉红组及生肌玉红载入胶原组则明显减小(P<0.05)。造模后第7天,各组创面面积较初始时均开始减小。造模后第15天,各组创面面积较初始时均显著减小(P<0.01),胶原组、生肌玉红组及生肌玉红载入胶原组创面面积显著小于对照组(P<0.01),其中生肌玉红载入胶原组显著小于胶原组与生肌玉红组(P<0.01)。见表31。
表31 各组大鼠创面面积比较(cm2,n=10)
*与对照组相比,P<0.01;#与生肌玉红组相比,P<0.01
2各组大鼠创面分泌物中白细胞总数的比较各组大鼠造模后第3天创面分泌物中白细胞总数较初始时显著升高(P<0.05),持续至第15天。胶原组创面分泌物白细胞总数低于对照组,高于生肌玉红组及生肌玉红载入胶原组。生肌玉红组与生肌玉红载入胶原组创面分泌物中白细胞总数显著低于对照组与胶原组,两组间无显著差异。见表32。
表32 各组大鼠创面分泌物中白细胞总数的比较(×106/L,x±s;n=10)
*与对照组相比,P<0.01;#与胶原组相比,P<0.05
3各组大鼠创面分泌物中IL-6含量的比较各组大鼠造模后创面分泌物中IL-6含量较初始时持续升高,至第15天时略低于初始水平。造模后第3、7天,生肌玉红组及生肌玉红载入胶原组IL-6含量显著低于控制组。生肌玉红载入胶原组IL-6含量与生肌玉红组无显著差异。见表33。
表33 各组大鼠创面分泌物中IL-6含量的比较(ng/L,n=10)
*与对照组相比,P<0.01
4各组大鼠创面分泌物中TNF-α含量的比较对照组大鼠造模后创面分泌物中TNF-α含量持续升高至第15天。胶原组TNF-α含量从造模后至第7天无明显变化,第15天轻度降低,明显低于对照组水平(P<0.01)。生肌玉红组及生肌玉红载入胶原组创面分泌物中TNF-α含量持续降低,第7天起显著低于造模后及第三天(P<0.01),两组间无明显差异(P>0.05),但较对照组及胶原组,TNF-α水平则显著降低(P<0.01)。见表34。
表34 各组大鼠创面分泌物中TNF-α含量的比较(ng/L,n=10)
*与对照组相比,P<0.01;#与胶原组相比,P<0.05
5各组大鼠创面肉芽组织中羟脯氨酸含量的比较各组大鼠创面肉芽组织中羟脯氨酸含量在造模后第3、7、15天均显著低于造模时(P<0.01)。对照组在造模后羟脯氨酸含量无明显升高,胶原组在造模后第7、15天轻度升高,生肌玉红组及生肌玉红载入胶原组在造模后第7、15天升高明显(P<0.05)且显著高于对照组(P<0.05)。生肌玉红载入胶原组创面肉芽组织中羟脯氨酸含量在造模后第3、7、15天均显著高于生肌玉红组(P<0.05)。见表35。
表35 各组大鼠创面肉芽组织中羟脯氨酸含量的比较(mg/ml,n=10)
*与对照组相比,P<0.05;#与生肌玉红组相比,P<0.05
6各组大鼠创面肉芽组织中MMPs含量的比较对照组大鼠创面肉芽组织中MMP-1、MMP-2、MMP-9含量在造模后第3天均明显升高(P<0.01),在造模后第7天仍处于较高水平。胶原组较对照组仅轻度降低。造模后第3天起,生肌玉红组与生肌玉红载入胶原组MMP-1、MMP-2、MMP-9含量均显著降低,与对照组、胶原组相比均有明显差异(P<0.01),生肌玉红载入胶原组MMP-1、MMP-2、MMP-9含量轻度低于生肌玉红组,无统计学差异。见表36~38。
表36 各组大鼠创面肉芽组织中MMP-1含量的比较(ng/ml,n=10)
*与对照组相比,P<0.01;#与胶原组相比,P<0.01
表37 各组大鼠创面肉芽组织中MMP-2含量的比较(ng/ml,n=10)
*与对照组相比,P<0.01;#与胶原组相比,P<0.01
表38 各组大鼠创面肉芽组织中MMP-9含量的比较(ng/ml,n=10)
*与对照组相比,P<0.01;#与胶原组相比,P<0.01
实施例17:临床试验数据
病例选择
本研究共搜集完整病例60例(2012年10月一2012年12月),病例均来源于江苏省中医院普外科病区。
1.1.1诊断标准
①西医诊断标准:
下肢溃疡1个月以上,未出现解剖与功能上愈合倾向者。
②中医诊断标准
中医诊断标准参照《中医临床诊疗术语》和《中医病证诊断疗效标准》拟定:下肢局部溃疡,大小不等,疮面肉色灰白、淡红或紫暗,表面或附有黄色脓苔,疮口凹陷,边缘形如缸口,脓水清稀,呈灰黑或带绿色,带腥味。溃疡周围可伴有湿疮、静脉曲张、色素沉着。疮口难愈,愈后易溃,反复发作。
1.1.2纳入病例标准
符合上述诊断标准;年龄在18至85岁之间;下肢(膝关节下方)溃疡创面面积不小于2cm2且不大于50cm2者;若合并有糖尿病的患者,要求其空腹血糖必须控制在不大于10mmol/L的状态;签署知情同意书。
1.1.3排除标准
①妊娠或哺乳期妇女;
②长期使用类固醇激素及免疫抑制剂者;
③合并癌性溃疡或结核性溃疡、麻风性溃疡、梅毒性溃疡者;
④正在参加其他药物临床研究者。
1.1.4中止研究标准
出现过敏反应或严重不良事件;研究疗效不好,没有临床研究价值;临床研究重要偏差发生在设计和实现,很难评估疗效。
1.1.5一般资料(见表39)
表39 三组患者性别、年龄、病种及创面面积情况比较(x±s)
三组60例病人,各组对比无显著差异(P>0.05)。
1.1.5病例分组
实验组病人来自江苏省中医院普外科下肢溃疡病人共20例。
对照组病人来自“十一五”国家科技支撑计划中医外治法(生肌玉红膏)为主综合防治慢性下肢溃疡的疗效及效价比的研究(项目编号:2008BAI53B014),其中凡士林纱布组20例,生肌玉红膏纱布组20例。
1.2治疗方法:
生肌玉红膏油纱布由江苏省中医院制药厂生产(苏药制字Z04000396)。成分:白芷25g,紫草10g,甘草60g,当归100g,血竭20g,轻粉20g。制作:先将当归、白芷、紫草、甘草4味药于油内浸泡3天,然后文火熬枯,去渣滓。再入血竭化尽,入白蜡微火化开,待油温后,入研细轻粉搅匀,浸入100层5cm×20cm无菌纱布,冷却后即制成生肌玉红膏油纱布。
试验组:消毒与清洗创面,尽量去除坏死分泌物,以生肌玉红胶原敷料1片覆盖创面,覆盖无菌纱布(16~24层),医用胶布固定。隔日换药。
对照组:①用凡士林纱布[江苏省中医院制药厂,苏卫药准字(1982)第203201号],每次1片。换药同试验组。
②用生肌玉红膏油纱布[江苏省中医院制药厂生产,苏药制字Z04000396],每次1片。换药同试验组。
两组均治疗4周观察疗效。
1.3观察指标和方法
创面面积:揭除敷料,将记录患者姓名与换药时间的刻度尺置于创面边缘,相机镜头与创面平面平行照相,用ImageJ软件测定计算摄片的创面面积,于第1、3、7、11、14次访视时各检测1次。
创面愈合时间:从创面用药起到创面完全上皮化所需时间(天)。如至观察结束创面未愈合,不再继续观察。创面愈合率计算公式:创面愈合率=(原始创面面积-未愈合创面面积)/原始创面面积×100%。
溃疡深度:用下肢慢性创面评分系统进行评分,溃疡深及部分皮层计为2分、皮肤全层计为4份、肌腱计为6份、骨膜计为8分;下肢水肿的性质:无计为0分、非凹陷且有弹性计为1分、凹陷计为2分、伴皮肤纤维增生计为3分、伴皮肤硬化计为4分;下肢水肿的程度:如常计为0分、轻度计为1分、轻度肿胀且皮纹尚存计为2分、肿胀明显且皮纹消失计为3分、极度肿胀且皮肤出现水疱计为4分;创周皮肤温度:如常计为0分、微热计为1分、热计为2分、较热计为3分、灼热计为4分;创周肤色:如常计为0分、暗淡计为1分、微红计为2分、鲜红计为3分、焮红发亮计为4分。
疗效判定标准参照《中医外科学》制定。痊愈:创面完全愈合;显效:创面愈合75%以上;有效:创面愈合25%~75%;无效:创面愈合不足25%。
1.4统计学处理:
采用spss11.0统计软件处理数据。计量资料以均数±标准差表示,指标组间比较采用t检验。
结果:
创面愈合率:
表40
与生肌玉红膏纱布对照组比较有显著差异(P<0.05),与凡士林纱布对照组比较有极显著统计学差异(P<0.001)。
创面溃疡深度:
表41
*与生肌玉红胶原组对比P>0.05无显著差异,#与生肌玉红胶原组对比P<0.01,有显著差异。
下肢水肿的性质:
表42
与对照组对比P>0.05无显著差异。
下肢水肿的程度
表43
*与生肌玉红胶原组对比P<0.05,有显著差异。
创周皮肤温度:
表44
*与生肌玉红胶原组对比P<0.05,有显著差异。
创周肤色:
表45
*与生肌玉红胶原组对比P>0.05,无显著差异。
结论:
本次临床研究发现生肌玉红胶原临床可将慢性下肢溃疡创面愈合率提高至39.45%,较之传统生肌玉红膏26.22%的创面愈合率提高了近15%。在创面溃疡深度方面,生肌玉红胶原较传统生肌玉红膏疗效更佳。使用生肌玉红胶原后病人没有明显的不良反应,创周环境有所好转。生肌玉红胶原可以促使患肢的水肿消退,提高患者的生活质量,总有效率可达到100%。患者局部水肿的消退意味着局部淋巴循环功能的改善,对加快溃疡创面的修复。与传统油纱布换药相比较,本临床研究中对慢性下肢溃疡创面换药护理的操作简单便捷,且胶原可以一定程度上吸收部分创面渗出液,保持创面的相对清洁环境,有利于创面的微循环的改善,从而促进创面的愈合。
Claims (9)
1.生肌玉红胶原海绵药物,其特征在于,它由如下重量份数的组分制成:当归5~10份,甘草5~10份,白芷5~10份,紫草5~10份,血竭1~4份,诃子5~10份,黄蜀葵花5~10份,载体为胶原。
2.根据权利要求1所述的生肌玉红胶原海绵药物,其特征在于,它由如下重量份数的组分制成:当归6份,甘草6份,白芷6份,紫草6份,血竭2.4份,诃子6份,黄蜀葵花6份,载体为胶原。
3.根据权利要求1所述的生肌玉红胶原海绵药物,其特征在于,每片50mm×50mm×2mm规格的胶原含血血竭素为3.25mg以上,甘草苷为5.0mg以上,欧前胡素为0.9mg以上。
4.权利要求1所述的生肌玉红胶原海绵药物的制备方法,其特征在于,该方法包括如下步骤:
(1)取配方量的当归、甘草、诃子和黄蜀葵花,用8倍重量的70v/v%乙醇水溶液浸泡30~60分钟,回流提取60~120分钟,固液分离收集滤液,固体部分再用乙醇水溶液浸泡30~60分钟,回流提取60~120分钟,固液分离合并滤液,回收乙醇至无醇味得到提取液,备用;
(2)取配方量的白芷和紫草,粉碎成粗粉,过20目筛,以乙醇湿润后,以8倍重量的70v/v%乙醇水溶液作溶剂,浸渍8~16小时后进行渗漉提取,渗漉速度为0.5mL·(min·kg)-1,收集渗漉液,加入配方量的血竭溶解,再加入步骤(1)得到的提取液,混匀,过滤,滤液加70v/v%乙醇水溶液定容,当当归、甘草、白芷、紫草、血竭、诃子和黄蜀葵花的总配方重量为31g~64g时,定容的总体积为100ml;
(3)将25ml步骤(2)得到的提取液载入胶原即得生肌玉红胶原海绵药物,冷冻干燥后制成,环氧乙烷消毒后即得生肌玉红胶原海绵药物,其中,所述的胶原,孔径在15~25μm之间,成孔率98%,胶原为长宽50mm×50mm、高度为2mm的长方体。
5.根据权利要求4所述的生肌玉红胶原海绵药物的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,以乙醇湿润,乙醇的使用重量为白芷和紫草重量的1~1.5倍。
6.按照权利要求4所述的制备方法制备得到的生肌玉红胶原海绵药物。
7.权利要求1或6所述的生肌玉红胶原海绵药物在制备治疗慢性体表静脉性溃疡、褥疮、缺血性创面、糖尿病足、放射性溃疡或麻风病溃疡药物中的应用。
8.权利要求1或6所述的生肌玉红胶原海绵药物在制备创面持续负压封闭引流治疗中的辅料植入药物中的应用。
9.权利要求1或6所述的生肌玉红胶原海绵药物的鉴别方法,其特征在于,取生肌玉红胶原样品,其规格为50mm×50mm×2mm,剪碎后加70v/v%乙醇水溶液50ml,超声处理30分钟,滤过,作为备用滤液;
该方法包括如下鉴别项目:
(1)取备用滤液10ml,水浴蒸干,残渣加乙醚20ml,超声处理10分钟,滤过,滤液浓缩至2ml,作为供试品溶液;另取当归对照药材0.6g,加10ml70v/v%乙醇水溶液浸泡30分钟,回流提取1小时,放冷,滤过,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上;以正己烷-乙酸乙酯按体积比4:1为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
(2)取备用滤液10ml,水浴蒸干,残渣加60~90℃石油醚20ml,超声处理20分钟,滤过,滤液浓缩至2ml,作为供试品溶液;另取紫草对照药材0.6g,粉碎,以70v/v%乙醇水溶液10ml作溶剂,浸渍8小时后进行渗漉提取,收集渗漉液,合并,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上;以环己烷-甲苯-乙酸乙酯-甲酸按体积比5:5:0.5:0.1为展开剂,展开,取出,晾干,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的紫色斑点;
(3)取血竭对照药材0.2g,以70v/v%乙醇水溶液10ml溶解,过滤,滤液同项目(1)制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取对照药材溶液和项目(1)下的供试品溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上;以三氯甲烷-甲醇按体积比19:1为展开剂,展开,取出,晾干,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的橙色斑点;
(4)取备用滤液10ml,水浴蒸干,残渣加乙酸乙酯20ml,超声处理20分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取金丝桃苷对照品,加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一聚酰胺薄膜上;以50v/v%冰醋酸水溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以三氯化铝试液,置紫外光灯365nm下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
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Non-Patent Citations (3)
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---|
李琳等: "黄蜀葵花药材黄酮类成分的微乳薄层色谱定性鉴别研究", 《中国新药杂志》 * |
缪雪华等: "生肌玉红胶原海绵促进胶原合成与组织愈合的研究", 《南京中医药大学学报》 * |
陈德轩: "生肌玉红胶原促血管新生的实验研究", 《中国博士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108226342A (zh) * | 2018-01-08 | 2018-06-29 | 佛山市洛克威特科技有限公司 | 一种紫草油的测定方法 |
CN110927323A (zh) * | 2019-12-23 | 2020-03-27 | 江西九华药业有限公司 | 一种中药制剂九华痔疮栓的检测方法 |
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Legal Events
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---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
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