CN102614287A - 治疗急性软组织损伤的喷膜剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

治疗急性软组织损伤的喷膜剂及其制备方法，涉及一种含有中药材制成的外用制剂，具体是涉及一种治疗急性软组织损伤的喷膜剂。本发明1000ml的喷膜剂是由以下原料组成：大黄20~60g、侧柏叶20~60g、关黄柏10~30g、泽兰10~30g和薄荷10~30g的乙醇提取所得的中药材提取物，冰片2~6g，薄荷脑0.4~1.2g，三氯叔丁醇2~6g，聚乙烯吡咯烷酮30~60g，羟丙基甲基纤维素1~8g，其余是体积浓度为30-40%的乙醇水溶液。本发明喷膜剂在使用时直接喷于患处能在8分钟内成膜。具有很好的抗炎、镇痛、祛瘀、改善急性软组织损伤及改善微循环、抗菌作用，在治疗急性软组织损伤如扭伤、挫伤等局部损伤，红肿热痛、创面感染等方面作用明显。

Description

治疗急性软组织损伤的喷膜剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种含有中药材制成的外用制剂，具体是涉及一种治疗急性软组织损伤的喷膜剂。 

  

背景技术

双柏散为广州中医药大学广泛应用于外科、骨伤科的外治验方，由大黄、侧柏叶、黄柏、泽兰、薄荷5味药材组成，具有清热解毒、活血化瘀、消肿止痛之功效。四十多年临床实践表明对软组织损伤、骨折及疮疡肿毒等有显著疗效，此外，还用于急性阑尾炎、盆腔炎、胸膜炎等。双柏散早在1964年收载于中医学院试用教材《中医伤科学讲义》中，推广应用于全国。后在历次修订(1980、1986)的高等医药院校教材《中医外科学》、《中医伤科学》中均有收载。新近出版的普通高等教育中医药类规划教材《中医外科学》、《中医骨伤学》、《中医筋伤学》中也予以收载。 

双柏散常用有散剂和凡士林油膏两种剂型，二者均存在不少缺点，“粗、大、黑”，制作粗糙，浪费药材，透气性差，易弄脏衣服或滑脱，甚至少数病人出现皮肤过敏反应等；在中国专利CN1276763C公开了《一种治疗褥疮、急性软组织损伤的复方中药组合物》，它是由大黄、侧柏叶、黄柏、泽兰、薄荷5味中药材制备，但其工艺繁琐，药材利用率低，每1000ml的擦剂需大黄286g、侧柏叶286g、黄柏143g、泽兰143g、薄荷143g，成品擦在皮肤上不能成膜，因此流失大，用药量也大。 

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述剂型的不足，简化工艺，提高药材利用率，使成品喷在皮肤上能成膜，减小流失性，制备出一种治疗急性软组织损伤的喷膜剂；本发明的另一个目的在于提供制备该治疗急性软组织损伤的喷膜剂的方法。 

为实施本发明的目的，本发明所提供的一种治疗急性软组织损伤的喷膜剂，1000ml的喷膜剂由以下原料组成： 

取中药材大黄20~60 g、侧柏叶20~60 g、关黄柏10~30 g、泽兰10~30 g和薄荷10~30 g，用体积浓度为75%的乙醇提取所得的中药材提取物

冰片                2~6 g

薄荷脑              0.4~1.2 g

三氯叔丁醇          2~6 g

聚乙烯吡咯烷酮      30~60 g

羟丙基甲基纤维素    1~8 g

其余是体积浓度为30-40%的乙醇水溶液。

本发明优选1000ml的喷膜剂是由以下原料制成： 

取中药材大黄40g、侧柏叶40g、关黄柏20g、泽兰20g和薄荷20g，用体积浓度为75%的乙醇提取所得的中药材提取物

冰片               5g

薄荷脑             1g

三氯叔丁醇         5g

聚乙烯吡咯烷酮     50g

羟丙基甲基纤维素   4g

其余是体积浓度为30~40%的乙醇水溶液。

本发明所提供的治疗急性软组织损伤喷膜剂的制备方法，是采用如下技术方案： 

制备1000ml的喷膜剂：取中药材大黄20~60 g、侧柏叶20~60 g、关黄柏10~30 g、泽兰10~30 g和薄荷10~30 g加药材总重量的8倍量的体积浓度为75%乙醇溶液加热回流提取1小时，滤过，滤渣加药材重量的5倍量的体积浓度为75%乙醇溶液加热回流提取1小时，滤过；滤渣再加药材重量的5倍量的体积浓度为75%乙醇加热回流提取1小时，滤过，合并三次滤液，滤液浓缩至50℃热测相对密度0.92±0.01，为中药材的提取物，加入聚乙烯吡咯烷酮30~60g、羟丙基甲基纤维素1~8g，搅匀，静置，倾取上清液，备用；冰片2~6g、薄荷脑0.4~1.2g和三氯叔丁醇2~6g用20ml的95%乙醇溶解，加入上清液中，搅匀，最后用95%乙醇定容至1000ml，即得。

本发明喷膜剂在使用时直接喷于患处能在8分钟内成膜。并具有很好的抗炎、镇痛、祛瘀、改善急性软组织损伤及改善微循环、抗菌作用，在治疗急性软组织损伤如扭伤、挫伤等局部损伤，红肿热痛、创面感染等方面作用明显，其药效作用显著：能显著抑制二甲苯致小鼠耳肿胀，能抑制小鼠腹腔毛细血管通透性增高，能显著抑制甲醛致大鼠足趾肿胀，有显著的镇痛、祛瘀作用， 对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、绿脓假单胞菌有明显的抑制作用，有改善局部微循环的作用。 

下面实验例用于进一步说明本发明喷膜剂的进步 

实验例1

1、              受试药物

（1）本发明所提供的治疗急性软组织损伤喷膜剂（简称双柏喷膜剂）的制备 

原材料：大黄40g、侧柏叶40g、关黄柏20g、泽兰20g、薄荷20g、冰片5g、薄荷脑1g、三氯叔丁醇5g、聚乙烯吡咯烷酮50g、羟丙基甲基纤维素4g。

取大黄、侧柏叶、关黄柏、泽兰、薄荷加8倍量75%乙醇加热回流提取1小时，滤过；滤渣加5倍量的75%乙醇提取1小时，滤过；滤渣再加5倍量的75%乙醇提取1小时，滤过；合并三次滤液，浓缩至50℃热测相对密度为0.920，加入聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素，混合均匀，静置，倾取上清液，备用； 

冰片、薄荷脑和三氯叔丁醇用20ml的95%乙醇溶解，加入上清液中，搅匀，最后用95%乙醇调整体积使成1000ml，制得双柏喷膜剂，生药浓度为0.14 g·mL^-1。

（2）按CN1276763C所公开的复方中药组合物（专利简称双柏擦剂）的制备 

取大黄饮片286g，加8倍量水浸泡30min，煎煮1小时，滤过；再加5倍量水煎煮二次，每次1小时，滤过；合并三次煎液，浓缩至药材:药液为1:1，备用。取关黄柏143g、侧柏叶286g、泽兰143g、薄荷143g，加8倍量水浸泡30min，煎煮1小时，滤过；再加5倍量水煎煮1小时，滤过；合并两次煎液，浓缩至药材:药液为1:1，备用。合并上述浓缩液，加乙醇适量使含醇量80%，静置24小时，滤过，回收乙醇，浓缩至约900mL，放冷，滤过，制得双柏水提醇沉浓缩液生药浓度为1.11 g·mL^-1。

取适量双柏水提醇沉浓缩液，将10%甘油，3%聚乙烯吡咯烷酮慢慢溶解完全，并用乙醇适量溶解0.1%薄荷脑，0.5%冰片，0.5%三氯叔丁醇，全部加入双柏全方的水提醇沉液中，搅匀，用乙醇定容至1000mL，制得双柏擦剂生药浓度为0.88g·mL^-1。 

（2）阳性对照药：麝香祛痛搽剂，以《中国药典》2005年版一部作为执行标准，批准文号国药准字Z42021326，李时珍医药集团有限公司生产。 

（3）实验动物 

SPF级KM小鼠，18g～22g；SPF级SD大鼠，180g～220g。

2、              实验方法： 

二甲苯所致小鼠耳廓肿胀试验

取KM雄性小鼠，体重18g～22g，60只，随机分为六组。分别为模型组、基质组、麝香祛痛搽剂组、双柏擦剂组、双柏喷膜剂高剂量组、双柏喷膜剂低剂量组。麝香祛痛搽剂组以麝香祛痛搽剂0.01mL·10g^-1外涂于小鼠背部，其他各给药组以0.05mL·10g^-1外涂于小鼠背部，模型组给予等量蒸馏水，连续3天。

由于按固定方法制备药物，不便于稀释等操作，药物组按制剂最大浓度的药量外涂，以涂药次数不同判别高低剂量组。给药剂量以g生药·kg体重^-1计算。双柏喷膜剂高剂量组按3次/天给药，双柏喷膜剂低剂量组按2次/天给药；麝香祛痛搽剂组、双柏擦剂组、基质组及模型组按2次/天外涂给药。 

于末次给药后40min吸取20μL二甲苯外涂于小鼠右耳，20min后处死小鼠，齐耳缘将小鼠的左右耳剪下，用8mm打孔器在左右耳的一致部位打左右耳圆片，在电子分析天平称重，以mg为单位求耳重差值^[57]。作t检验处理，进行组间差异的比较，结果见表1 

4、实验结果    表1  对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响( 

,n = 10)

组    别	剂量/g生药·kg体重-1	耳肿胀度/mg
			模型组	—	7.43±1.44 ##
基质组	0.05 mL·10g-1	6.43±2.56
			麝香祛痛搽剂组	0.01 mL·10g-1	4.71±2.42 **
双柏擦剂组	8.8	4.63±1.80 **
			双柏喷膜剂高剂量组	2.1	4.39±1.80 **
双柏喷膜剂低剂量组	1.4	4.58±1.90 **

注：与模型组比较，* P<0.05 ，** P<0.01 ；

    与双柏擦剂组比较，# P<0.05，## P<0.01。  下同

结论：与模型组比较，麝香祛痛搽剂组、双柏擦剂组、双柏喷膜剂高剂量组、双柏喷膜剂低剂量组,均能显著抑制二甲苯致炎小鼠的耳肿胀度（P<0.01），提示双柏喷膜剂有较好的抗炎作用。与双柏擦剂组比较，双柏喷膜剂高低剂量组均无显著性差异（P>0.05），提示双柏喷膜剂抗炎作用强度与双柏擦剂相当，但从给药剂量来看，双柏喷膜剂抗炎作用强度比双柏炎痛喷雾剂强。

实验例2   对小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响采用腹腔染料渗出法 

实验材料同实验例1

取KM小鼠，体重18g～22g，60只，雌雄各半，随机分成六组。分别为模型组、基质组、麝香祛痛搽剂组、双柏擦剂组、双柏喷膜剂高剂量组、双柏喷膜剂低剂量组。麝香祛痛搽剂组以麝香祛痛搽剂0.01 mL·10g^-1外涂于小鼠腹部，其他各给药组以0.05 mL·10g^-1外涂于小鼠腹部，模型组给予等量蒸馏水，连续3天。

末次给药40min后各鼠尾静脉注射0.5%伊文思蓝生理盐水溶液0.1mL·10g^-1体重，立即腹腔注射0.6%醋酸生理盐水溶液0.2mL/只，30min后放血处死小鼠，剖开腹腔，用5mL生理盐水冲洗数次，收集洗液，离心，取上清液用分光亮度计在590nm处测OD值^[65]，采用t检验分析法，比较组间差异，结果见表2 

表2 双柏喷膜剂对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响(

，n = 10)

组    别	剂量/g生药·kg体重-1	OD值
			模型组	—	0.96±0.26 #
基质组	0.05 mL·10g-1	1.04±0.74
			麝香祛痛搽剂组	0.01 mL·10g-1	0.65±0.16 **
双柏擦剂组	8.8	0.73±0.41 *
			双柏喷膜剂高剂量组	2.1	0.59±0.24 **
双柏喷膜剂低剂量组	1.4	0.52±0.16 **

结论：与模型组比较，麝香祛痛搽剂组、双柏喷膜剂高剂量组、双柏喷膜剂低剂量组，均能显著抑制醋酸所致小鼠毛细血管通透性增高（P<0.01），提示双柏喷膜剂有很好的抗炎作用，而双柏擦剂组具较显著抑制醋酸所致小鼠毛细血管通透性增高（P<0.05），提示双柏喷膜剂有较好的抗炎作用；与双柏擦剂组比较，双柏喷膜剂高低剂量组均无显著性差异（P>0.05），提示双柏喷膜剂抗炎作用强度与双柏擦剂相当，但从给药剂量来看，双柏喷膜剂抗炎作用强度比双柏擦剂强。

实验例3  甲醛致大鼠足趾肿胀试验 

取SD雄性大鼠，体重180g～220g，50只，随机分为五组。分别为模型组、麝香祛痛搽剂组、双柏擦剂组、双柏喷膜剂高剂量组、双柏喷膜剂低剂量组。麝香祛痛搽剂组以麝香祛痛搽剂0.07 mL·100g^-1外涂于大鼠背部，其他各给药组以0.35 mL·100g^-1外涂于大鼠背部，其中模型组外涂等量蒸馏水，连续7天。

用改良容积法测量各组大鼠右后足正常体积，于末次给药后40min在右后足趾皮下注入3％甲醛0.1mL^[66、67]，测定致炎后1、2、3、4、5、6h右后足体积，计算肿胀度。作t检验处理，进行组间差异的比较，结果见表3。 

表3对大鼠足趾肿胀的影响(

±S,n=10) 

结论：在大鼠足趾注射3%甲醛后的1h～6h，大鼠的足肿胀度有逐渐减小的趋势。与模型组比较，麝香祛痛搽剂组、双柏擦剂组、双柏喷膜剂高剂量组、双柏喷膜剂低剂量组均能较显著抑制3%甲醛所致大鼠足趾肿胀（P<0.05），提示双柏喷膜剂有较好的抗炎作用。与双柏擦剂组比较，双柏喷膜剂高低剂量组均无显著性差异（P>0.05），提示双柏喷膜剂抗炎作用强度与双柏炎痛喷雾剂相当，但从给药剂量来看，双柏喷膜剂抗炎作用强度比双柏擦剂强。

  

实验例4：热板法致小鼠疼痛试验  

取KM雌性小鼠，体重18g～22g，60只，背部剪毛。将小鼠放于55℃±0.5℃温热板上，立即计时，以舔后足作为疼痛反应指标，预测小鼠痛阈值。以5s<痛阈值<30s视为合格小鼠。此时的小鼠痛阈值作为给药前痛阈值。将痛阈合格小鼠随机分为模型组、基质组、麝香祛痛搽剂组、双柏擦剂组、双柏喷膜剂高剂量组、双柏喷膜剂低剂量组。麝香祛痛搽剂组以麝香祛痛搽剂0.01mL·10g^-1外涂于小鼠背部，其他各给药组以0.05 mL·10g^-1外涂于小鼠背部，模型组给予等量蒸馏水，连续3天。

于末次给药后60min ，将小鼠置于55℃±0.5℃温热板上，立即计时，以小鼠舔后足作为疼痛反应指标，药后90min及药后120min各组再测定痛阈值1次，计算痛阈提高百分率^[58]，作统计学t检验处理。结果见表4。 

痛阈提高百分率=（给药后痛阈值﹣给药前痛阈值）/给药前痛阈值*100%。 

表4对热板法致小鼠疼痛的影响(

±S,n=10) 

结论：模型组及基质组的给药前后痛阈值差异不大，而各给药组，给药后90min及120min的痛阈提高率普遍高于给药后60min的痛阈提高率。给药后60min，与模型组比较，双柏喷膜剂高剂量组能显著减轻热板所致的疼痛（P<0.01）麝香祛痛搽剂组、双柏喷膜剂低剂量组均较显著减轻热板所致的疼痛（P<0.05）。与双柏擦剂组比较，模型组、基质组均有显著差异（P<0.01），双柏喷膜剂高低剂量组均无显著性差异（P>0.05），提示双柏喷膜剂镇痛作用强度与双柏擦剂组相当，但从给药剂量来看，双柏喷膜剂镇痛作用强度比双柏擦剂组强。

给药后90min，与模型组比较，麝香祛痛搽剂组、双柏喷膜剂高剂量组、双柏擦剂组均能显著减轻热板所致的疼痛（P<0.01），双柏喷膜剂低剂量组较显著减轻热板所致的疼痛（P<0.05）；与双柏擦剂组比较，模型组、基质组均有显著差异（P<0.01），双柏喷膜剂高低剂量组均无显著性差异（P>0.05），提示双柏喷膜剂镇痛作用强度与双柏擦剂组相当，但从给药剂量来看，双柏喷膜剂镇痛作用强度比双柏擦剂组剂强。 

给药后120min，与模型组比较，麝香祛痛搽剂组、双柏喷膜剂低剂量组均能显著减轻热板所致的疼痛（P<0.01），双柏喷膜剂高剂量组、双柏擦剂组均较显著减轻热板所致的疼痛（P<0.05）。与双柏擦剂比较，模型组、基质组均有较显著差异（P<0.05），双柏喷膜剂高低剂量组均无显著性差异（P>0.05），提示双柏喷膜剂镇痛作用强度与双柏擦剂相当，但从给药剂量来看，双柏喷膜剂镇痛作用强度比双柏擦剂强。 

实验例5：醋酸致小鼠扭体反应试验 

取KM小鼠，体重18g～22g，雌雄各半，60只，随机分为六组，即为模型组、基质组、麝香祛痛搽剂组、双柏擦剂组、双柏喷膜剂高剂量组、双柏喷膜剂低剂量组。麝香祛痛搽剂组以麝香祛痛搽剂0.01 mL·10g^-1外涂于小鼠腹部，其他各给药组以0.05 mL·10g^-1外涂于小鼠腹部，模型组给予等量蒸馏水，连续3天。 

末次给药40min后，各鼠均腹腔注射0.6%醋酸0.2mL/只^[68、69]，观察各组小鼠出现扭体反应的时间及15min内出现扭体反应的次数，实验数据采用t检验分析法，比较组间差异，结果见表5。 

表5  对醋酸致小鼠扭体反应的影响(,n = 10) 

组    别	剂量/g生药·kg体重-1	15min内扭体数
			模型组	—	22.40±9.29 ##
基质组	0.05 mL·10g-1	21.60±8.53 ##
			麝香祛痛搽剂组	0.01 mL·10g-1	8.40±7.92 **
双柏擦剂	8.8	8.40±6.88 **
			双柏喷膜剂高剂量组	2.1	4.50±5.15 **
双柏喷膜剂低剂量组	1.4	9.70±8.47 **

结论：与模型组比较，麝香祛痛搽剂组、双柏炎痛喷雾剂组、双柏喷膜剂高剂量组、双柏喷膜剂低剂量组，均能显著延长醋酸致痛小鼠的潜伏期，减少15min内扭体次数（P<0.01），提示各实验组均有较好的镇痛作用。与双柏炎痛喷雾剂组比较，双柏喷膜剂高低剂量组15min内扭体次数无差异（P＞0.05）,提示双柏喷膜剂镇痛作用强度相当于双柏炎痛喷雾剂，但从给药剂量来看，双柏喷膜剂镇痛作用强度比双柏炎痛喷雾剂强。

实验例6：活血消散实验 

（1）自身血肿模型：实验前先造成自身血肿模型, 即用毛细玻璃管于小鼠眼底静脉丛定量采血0.5mL，加入含青霉素10万单位的0.1mol·L^-1氯化钙溶液0.1mL混匀，立即注人小鼠颈背部皮下，造成血肿模型。 

（2）分组及给药：KM小鼠18～22g，雌雄各半，60只，随机分为六组。分别为模型组、基质组、麝香祛痛搽剂组、双柏擦剂组、双柏喷膜剂高剂量组、双柏喷膜剂低剂量组。麝香祛痛搽剂组以麝香祛痛搽剂0.01 mL·10g^-1外涂于小鼠背部，其他各给药组以0.05 mL·10g^-1外涂于小鼠背部，模型组给予等量蒸馏水，连续6天。 

                                           

（3）瘀血称重：第7天将小鼠尾静脉空气注射处死，立刻剪开小鼠颈背部皮，将小鼠颈背处皮下的残留血肿块分离出来，于电子分析天平称重。作统计学t检验处理，比较不同组别的残留血肿块重量。结果见表6

表6  对小鼠血肿消散的影响(

,n = 10)

组    别	剂量/g生药·kg体重-1	瘀血重/mg
			模型组	—	20.46±12.49
基质组	0.05 mL·10g-1	18.12±5.26
			麝香祛痛搽剂组	0.01 mL·10g-1	7.56±5.38 **
双柏擦剂组	8.8	4.58±3.98 **
			双柏喷膜剂高剂量组	2.1	6.07±4.52 **
双柏喷膜剂低剂量组	1.4	7.05±5.15 **

结论：与模型组比较，麝香祛痛搽剂组、双柏擦剂组、双柏喷膜剂高剂量组、双柏喷膜剂低剂量组，均能显著消散血肿（P<0.01），提示各实验组均有较好的祛瘀作用。与双柏擦剂组比较，双柏喷膜剂高、低剂量组血肿消散无差异（P＞0.05）,提示双柏喷膜剂祛瘀作用强度相当于双柏擦剂，但从给药剂量来看，双柏喷膜剂祛瘀作用强度比双柏擦剂强。

  

实验例7：抑菌试验

1、              受试物

（1）本发明中药材醇提物   

 称量大黄饮片28g，侧柏叶饮片28g，关黄柏14g，泽兰14g，薄荷14g，加入8倍量75%乙醇，浸泡30min，冷凝回流提取1小时，滤过；再加入5倍量75%乙醇，冷凝回流两次，每次1小时，滤过；合并三次醇提液。将醇提液浓缩至一定程度，转移至蒸发皿，在80℃水浴锅蒸干水分，置鼓风干燥器中烘干，得双柏全方醇提物的干膏。

（2）本发明中药材采用CN1376763C公开方法的水提物    

取大黄饮片28g，加入8倍量水，浸泡30min，煎煮1小时，滤过；再加5倍量水煎煮两次，每次1小时，滤过；合并三次煎液，浓缩至药材:药液为1:1，备用。取关黄柏14g、侧柏叶28g、泽兰14g、薄荷14g，加8倍量水浸泡30min，煎煮1小时，滤过；再加5倍量水煎煮1小时，滤过；合并两次煎液，浓缩至药材:药液为1:1，备用。合并上述浓缩液，加乙醇适量使含醇量80%，静置24小时，滤过，回收乙醇，置冷，滤过，制得双柏散全方水提液。将水提液浓缩至一定程度，转移至蒸发皿，在80℃水浴锅蒸干水分，置鼓风干燥器中烘干，得双柏全方水提物的干膏。

分别精密称量相当于1g生药量的醇提物干膏及水提物干膏。参照微生物研究室实验方法，按体积比以吐温80:灭菌蒸馏水=1:9作为溶媒，适当加热并搅拌令充分溶解。按其能溶解的最大浓度作为抑菌药液浓度配制的依据。结果见表13。 

表13 药物配制相应抑菌药液的参考数据 

药物	生药量/g	膏重/g	g膏/g生药	药物浓度/g生药·mL抑菌药液-1
					双柏醇提物	30.00	9.53	0.32	0.25
双柏水提物	90.00	15.67	0.17	1.00

2、实验方法：

（1）体外抑菌试验（K-B纸片扩散法）

将金黄色葡萄球菌16～18小时液体培养物用无菌棉签分别均匀涂布于普通平板表面，稍干，以无菌镊子夹取吸有8μL样品药液的药敏纸片，平铺于上述已接种细菌的平板表面，其中空白对照组以含有一定量吐温80的药敏试纸平铺，置37℃培养，次日观察抑菌环大小。纸片中的抗菌药物溶解于培养基内，并向四周扩散，抑制细菌生长从而出现抑菌环。实验结果见表14

表14  纸片法中各药物对金黄色葡萄球菌的抑菌效果

药物	药物浓度/g生药·mL抑菌药液-1	抑菌圈（mm）
			空白对照物	-	0．00
双柏醇提物	0.25	6.50
			双柏水提物	1.00	8.00

    结论：醇提物有抑菌作用，水提物抑菌作用不太明显。

（2）最小抑菌浓度法 

双柏醇提物、双柏水提物均用营养肉汤从1:2.5浓度开始稀释，连续8个浓度梯度。采用二倍稀释法分别为1:2.5、1:5、1:10、1:20、1:40、1:80、1:160、1:320。每管总量1mL，流通蒸汽灭菌。对链球菌的试验尚需在灭菌药液中添加1%葡萄糖，对白色念珠菌的试验应用沙氏培养液稀释药液。空白对照为不含药物的培养基，只加入一定量的吐温80。每排药液的各个浓度管及空白对照管分别加入1：2000的试验菌液（8小时培养物）0.1mL，37℃培养24小时观察结果。以浊度为指标肉眼观测各管有无菌生长。判定最小抑菌浓度（MIC），MIC是指完全抑制试验菌种生长所含的最小药物浓度。结果见表15。

  

表15  最小抑菌浓度（MIC）

注：空白对照组各菌生长正常。

结论：双柏醇提物对金黄色葡萄球菌的MIC为3.13 mg·mL^-1，双柏水提物对金黄色葡萄球菌MIC为6.25 mg·mL^-1，为双柏醇提物的2倍；双柏醇提物对金黄色葡萄球菌的MIC为3.13 mg·mL^-1，双柏水提物对金黄色葡萄球菌MIC为12.50 mg·mL^-1，为双柏醇提物的4倍；双柏醇提物对乙型溶血性链球菌的MIC为6.25 mg·mL^-1，双柏水提物对金黄色葡萄球菌MIC为50 mg·mL^-1，为双柏醇提物的8倍；双柏水提物对绿脓假单胞菌MIC为100 mg·mL^-1，在本实验浓度范围内双柏醇提对绿脓假单胞菌无抗菌作用；双柏醇提物及双柏水提物在本实验浓度范围内对白色念珠菌均无抗菌作用。 

实验例8、双柏擦剂与双柏喷膜剂的比较： 

1、对双柏擦剂与双柏喷膜剂药材用量及提取工艺进行比较（结果见下表）。

双柏擦剂与双柏喷膜剂药材用量及提取工艺的比较 

从上表可以看出，双柏喷膜剂的提取工艺较双柏擦剂简单；制备1000ml制剂，双柏擦剂药材用量为1001g，而双柏喷膜剂药材用量为140g，仅为双柏擦剂的1/7，大大节约了药材。

2、用高效液相色谱法对双柏擦剂与双柏喷膜剂中的各成分含量进行测定，并计算两者的转移率，进行比较（结果见下表）。 

双柏擦剂与双柏喷膜剂中成分含量与转移率的比较 

注：转移率=制剂中指标成分的含量/药材中指标成分的含量

   从上表可以看出，双柏擦剂与双柏喷膜剂各成分含量差别不大，但是双柏喷膜剂各成分的转移率却远远高于双柏擦剂，大大提高了药材的利用率。

3、双柏擦剂与双柏喷膜剂成膜性能的比较 

将双柏喷膜剂喷涂适量在25.4×76.2mm载玻片上，常温下使其自然挥干，然后将载玻片置显微镜下观察，物镜选择4×，目镜选择10×，调整光圈和焦距，采用明美成像拍照软件Mshot MD20对两者的表面形态结构进行拍照后进行比较见下表。

双柏擦剂与双柏喷膜剂成膜性能的比较 

剂型	成膜时间（min）	融合性	形态
				双柏擦剂	不成膜	辅料与药液中的成分不融合交联	边缘不平整，且有扩散，没有形成膜结构，大量深棕色物质杂乱地分散其中
双柏喷膜剂	5	辅料与药液中的成分充分融合交联	形成一层边缘平整，质地均匀致密的膜，一些黑色细小颗粒亦和融合产物一起均匀的分散其中

本发明的优点在于：①将双柏散开发成双柏喷膜剂优化了制备工艺、节约中药材资源、提高药材利用率，且能在保证疗效和用药安全的同时给临床应用带来方便。②本发明喷膜剂在使用时直接喷于患处能在8分钟内成膜（较佳配方在3分钟内成膜），这样不仅有利于药物中的有效成分在患处的保留，而且药物能够通过缓慢释放并通过透皮吸收进入机体缓和而持续的发挥疗效。另外，由于该剂型能结成膜状覆盖在患处，同时形成微小而致密的小孔，因而能使伤口在保持一定的透气性的同时，又能防止细菌等进入患处引发炎症和二次感染。由于PVP等成膜材料具有良好的生理惰性，对皮肤和眼睛无刺激性、无过敏性，不仅能够起到缓释药物、持续发挥疗效的作用，同时也能缓解或消除药物对皮肤的刺激性。

下面通过实施例进一步阐述本发明的技术方案 

具体实施方式：

实施例1  

称取以下原料：大黄40g，侧柏叶40g，关黄柏20g，泽兰20g，薄荷20g，冰片5g，薄荷脑1g；辅料：三氯叔丁醇5g，聚乙烯吡咯烷酮50g，羟丙基甲基纤维素4g，

取大黄、侧柏叶、关黄柏、泽兰、薄荷加8倍量75%乙醇加热回流提取1小时，滤过；滤渣加5倍量75%乙醇溶液加热回流提取1小时，滤过；滤渣再加5倍量75%乙醇溶液加热回流提取1小时，滤过；合并三次滤液，80℃浓缩至相对密度为0.920（50℃热测），加入聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素，混合均匀，静置，倾取上清液，备用；冰片、薄荷脑和三氯叔丁醇用20ml的95%乙醇溶解，加入上清液中，搅匀，最后用95%乙醇调整体积使成1000ml，分装，每瓶50ml。 

用法及用量：每日喷4-5次，或用纱布湿敷，每日两次。 

  

实施例2

称取以下原料：大黄20g，侧柏叶20g，关黄柏10g，泽兰10g，薄荷10g，冰片2g，薄荷脑0.4g；辅料：三氯叔丁醇2g，聚乙烯吡咯烷酮30g，羟丙基甲基纤维素1g，

取大黄、侧柏叶、关黄柏、泽兰、薄荷加8倍量75%乙醇加热回流提取1小时，滤过；滤渣加5倍量75%乙醇溶液加热回流提取1小时，滤过；滤渣再加5倍量75%乙醇溶液加热回流提取1小时，滤过；合并三次滤液，80℃浓缩至相对密度为0.920（50℃热测），加入聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素，混合均匀，静置，倾取上清液，备用；冰片、薄荷脑和三氯叔丁醇用20ml的95%乙醇溶解，加入上清液中，搅匀，最后用95%乙醇调整体积使成1000ml，分装，每瓶50ml。 

用法及用量：每日喷4-5次，或用纱布湿敷，每日两次。 

  

实施例3

称取以下原料：大黄60g，侧柏叶60g，关黄柏30g，泽兰30g，薄荷30g，冰片6g，薄荷脑1.2g；辅料：三氯叔丁醇6g，聚乙烯吡咯烷酮60g，羟丙基甲基纤维素8g，

取大黄、侧柏叶、关黄柏、泽兰、薄荷加8倍量75%乙醇加热回流提取1小时，滤过；滤渣加5倍量75%乙醇溶液加热回流提取1小时，滤过；滤渣再加5倍量75%乙醇溶液加热回流提取1小时，滤过；合并三次滤液，80℃浓缩至相对密度为0.920（50℃热测），加入聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素，混合均匀，静置，倾取上清液，备用；冰片、薄荷脑和三氯叔丁醇用20ml的95%乙醇溶解，加入上清液中，搅匀，最后用95%乙醇调整体积使成1000ml，分装，每瓶50ml。 

用法及用量：每日喷4-5次，或用纱布湿敷，每日两次。 

Claims (3)

1.一种治疗急性软组织损伤的喷膜剂，其特征在于1000ml的喷膜剂是由以下原料组成：

取中药材大黄20~60 g、侧柏叶20~60 g、关黄柏10~30 g、泽兰10~30 g和薄荷10~30 g，用体积浓度为75%的乙醇提取所得的中药材提取物

冰片                2~6 g

薄荷脑              0.4~1.2 g

三氯叔丁醇          2~6 g

聚乙烯吡咯烷酮      30~60 g

羟丙基甲基纤维素    1~8 g

其余是体积浓度为30-40%的乙醇水溶液。

2.根据权利要求1所说的治疗急性软组织损伤的喷膜剂，其特征在于1000ml的喷膜剂是由以下原料制成：

取中药材大黄40g、侧柏叶40g、关黄柏20g、泽兰20g和薄荷20g，用体积浓度为75%的乙醇提取所得的中药材提取物

冰片               5g

薄荷脑             1g

三氯叔丁醇         5g

聚乙烯吡咯烷酮     50g

羟丙基甲基纤维素   4g

其余是体积浓度为30~40%的乙醇水溶液。

3.一种如权利要求1所说的治疗急性软组织损伤喷膜剂的制备方法，其特征在于：制备1000ml的喷膜剂：取中药材大黄20~60 g、侧柏叶20~60 g、关黄柏10~30 g、泽兰10~30 g和薄荷10~30 g加药材总重量的8倍量的体积浓度为75%乙醇溶液加热回流提取1小时，滤过，滤渣加药材重量的5倍量的体积浓度为75%乙醇溶液加热回流提取1小时，滤过；滤渣再加药材重量的5倍量的体积浓度为75%乙醇加热回流提取1小时，滤过，合并三次滤液，滤液浓缩至50℃热测相对密度0.92±0.01，为中药材的提取物，加入聚乙烯吡咯烷酮30~60g、羟丙基甲基纤维素1~8g，搅匀，静置，倾取上清液，备用；冰片2~6g、薄荷脑0.4~1.2g和三氯叔丁醇2~6g用20ml的95%乙醇溶解，加入上清液中，搅匀，最后用95%乙醇定容至1000ml，即得。