CN109238810A - 淡水纤毛虫干银染色样品的快速制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种淡水纤毛虫干银染色样品的快速制备方法，属于生物技术领域。本发明方法包括：(1)挑取、收集纤毛虫，清洗虫体表面；(2)将清洗所得干净虫液粘附到经多聚赖氨酸处理过的干净载玻片表面，将虫液分成若干小滴后吹干；(3)向虫体表面滴加硝酸银溶液，静置后清洗残留；(4)利用卤素冷光源照射显影；(5)冲洗浮渣，晾干；(6)向虫体表面滴加中性树胶，加盖玻片后封片。本发明方法能够高效、优质地制备淡水纤毛虫干银染色样品，同时大大简化了制片步骤，且本发明无需使用显影液，节约了原料成本。另外本发明样品在硝酸银染色后置于卤素冷光源下照射显影，不受天气因素影响，更易于控制。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及一种原生动物银染样品的制备方法，更具体地说，本发明涉及一种淡水纤毛虫干银染色样品的快速制备方法。
背景技术
纤毛虫(Ciliata)是单细胞原生动物中种类最多、结构最复杂、最高等的一个门类。因其生命周期中至少某一阶段存在纤毛，且以纤毛作为运动和摄食器官，故名纤毛虫。纤毛虫虽然个体十分微小，通常要借助显微镜才能观察到，但它们在生物界和自然环境中具有极为重要的作用，同时也与我们人类的生活密切相关。纤毛虫中一些营自由生活的类群作为浮游和底栖生态系统中微食物网的重要组成部分，在物质循环和能量传递过程中起着重要的枢纽作用；纤毛虫中一些营共生生活的类群在高等动物对食物的消化利用过程中起着至关重要的作用，如反刍动物的瘤胃纤毛虫可帮助宿主消化纤维素；纤毛虫中也有一些营寄生生活的类群，是人类及其他脊椎动物的重要病原体，如结肠小袋纤毛虫可引起人类及其他很多哺乳动物的肠道溃疡和痢疾，多子小瓜虫、斜管虫等可造成水产养殖鱼类严重的鳃损伤，并引起大量死亡。另一方面，纤毛虫由于其独特的结合生殖方式和双核态以及高度特化的细胞器结构，在细胞生物学和遗传学领域具有十分重要的研究价值。因此，纤毛虫的研究越来越受到人们的重视和关注。
在纤毛虫乃至所有的生物学研究当中，分类学是最基本也是最关键的。只有在对物种进行准确鉴定的基础上，才能更深入和更有效地开展后续研究工作。纤毛虫的银线系统(silverline system)是指由纤毛虫表膜的毛基体及附属纤维形成的线状或网格状结构，因其可被硝酸银等染色剂着色，故称银线系统；该结构在纤毛虫的分类学和细胞发生学研究中是极为重要的特征。
干银法是用来显示纤毛虫银线系统的良好方法。Klein在上世纪20年代首先应用干银法来显示某些淡水和土壤生种类的银线结构。这种方法的缺点是受制于天时，需要日光照射显影。Fernandez-Galiano于1976年对Klein的方法进行了改进，应用蛋清作为媒染剂，滴加硝酸银后改在日光灯下显影，并用显影剂增强显影。该方法使制片质量有所提高，但对蛋清配制和保存时间及蛋清涂布的厚薄等要求苛刻、不易掌握，常造成制片失败。宋微波于1995年对干银法进行了再次改进，在制片初始引入蛋白水做媒染剂以防止海洋种类水洗时的虫体溃破现象，使该方法成为可广泛应用于海、淡水种类的制片方法。然而，如果只针对淡水纤毛虫而言，干银染色法仍有不少可改进和优化的地方，以达到更快速、优质制片之目的。
基于上述理由，特提出本申请。
参考文献：
Klein B.1926.Ergebnisse mit einer Silbermethode bei Ciliaten.Archiv fü Protistenkunde,56:243-279.
Fernandez-Galiano D.1976.Silver impregnation of ciliated protozoa:procedure yielding good results with the pyridinated silver carbonatemethod.Transactions of the American Microscopical Society,95:557-60.
宋微波，王梅.1995.应用于纤毛虫银线系染色的干银法新改良.动物学杂志30:38-39.
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种淡水纤毛虫干银染色样品的快速制备方法。本发明方法能够高效、优质地制备淡水纤毛虫干银染色样品，同时大大简化了制片步骤，另外，本发明无需使用显影液，节约了原料成本。
为了实现本发明的上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种淡水纤毛虫干银染色样品的快速制备方法，包括以下步骤：
步骤一，挑取、收集纤毛虫，然后用蒸馏水清洗所述纤毛虫虫体表面，洗净后得到干净虫液；
步骤二，将步骤一得到的虫液滴加到经多聚赖氨酸处理过的干净载玻片上表面，然后除去多余液体，再将虫液分成若干小液滴，并根据需要调整虫体体位，避免两虫贴合，最后将虫体快速吹干；
步骤三，向步骤二吹干后的虫体表面滴加1～2滴硝酸银溶液，完全覆盖虫体后静置3～5min，然后用蒸馏水将载玻片表面残留的硝酸银溶液冲洗干净；
步骤四，将步骤三洗净后的粘附有虫体的载玻片浸泡在盛有蒸馏水的透明玻璃皿中，调整虫体距离光源2～10cm，利用卤素冷光源照射显影；
步骤五，在虫体变色过程中，随时镜检，直至虫体的银线结构显现清晰，终止显影，然后用蒸馏水冲洗浮渣，晾干；
步骤六，向步骤五晾干后的虫体表面滴加中性树胶，加盖玻片后封片，得到本发明所述的淡水纤毛虫干银染色样品。
进一步地，上述技术方案步骤一，所述纤毛虫为车轮虫、斜管虫、肠肾虫、多子小瓜虫、结肠小袋纤毛虫等中的任一种。
进一步地，上述技术方案步骤一，所述蒸馏水滴洗次数优选为1～3次，每次滴洗时间优选为3～6min。
进一步地，上述技术方案步骤三，所述硝酸银溶液的质量浓度为1～2wt％，所述硝酸银溶液的浓度根据不同纤毛虫种类选用适合浓度。
进一步地，上述技术方案步骤四，所述卤素冷光源优选为XD-302型卤素冷光源，所述冷光源的最大功率为400W。
进一步地，上述技术方案步骤四，所述显影时间为2～5min。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
(1)本发明利用蒸馏水清洗虫体，可使染色后的虫体和背景更干净；利用经过多聚赖氨酸处理载玻片有助于粘附虫体并调整体位以得到全方位、高质量的制片。
(2)本发明将硝酸银染色后的样品置于卤素冷光源下照射显影，可见虫体逐渐由白色变为金黄色；相较于传统方法中的日光照射显影，避免了天气因素的影响，相较于现有技术中采用的日光灯和紫外灯照射显影方法，本发明方法整个过程更易于控制且可随时镜检直至银线结构清晰显现。
(3)本发明无需使用显影液，省略了以显影液增强显影的步骤，更加方便快捷、且降低了原料成本；
(4)本发明显影后的虫体呈金黄色，相比传统方法的深棕黑色更加美观；另外，本发明样品直接在空气中干燥、封片，大大缩短了制片周期。
附图说明
图1是本发明实施例1制得的车轮虫干银染色样品在显微镜下的形态图(标尺bar＝5μm)；
图2是本发明实施例2制得的斜管虫干银染色样品在显微镜下的形态图(标尺bar＝5μm)；
图3是本发明实施例3制得的肠肾虫干银染色样品在显微镜下的形态图(标尺bar＝20μm)。
具体实施方式
下面结合实施案例和附图对本发明作进一步详细说明。本实施案例在以本发明技术为前提下进行实施，现给出详细的实施方式和具体的操作过程来说明本发明具有创造性，但本发明的保护范围不限于以下的实施案例。
根据本申请包含的信息，对于本领域技术人员来说可以轻而易举地对本发明的精确描述进行各种改变，而不会偏离所附权利要求的精神和范围。应该理解，本发明的范围不局限于所限定的过程、性质或组分，因为这些实施方案以及其他的描述仅仅是为了示意性说明本发明的特定方面。实际上，本领域或相关领域的技术人员明显能够对本发明实施方式作出的各种改变都涵盖在所附权利要求的范围内。
为了更好地理解本发明而不是限制本发明的范围，在本申请中所用的表示用量、百分比的所有数字、以及其他数值，在所有情况下都应理解为以词语“大约”所修饰。因此，除非特别说明，否则在说明书和所附权利要求书中所列出的数字参数都是近似值，其可能会根据试图获得的理想性质的不同而加以改变。各个数字参数至少应被看作是根据所报告的有效数字和通过常规的四舍五入方法而获得的。
实施例1
本实施例以车轮虫为例，介绍一种淡水纤毛虫干银染色样品的快速制备方法，包括以下步骤：
步骤一，用微吸管挑取、收集车轮虫并置于蒸馏水滴中，静置5min；而后转移至新的蒸馏水滴中，连续清洗2次，每次5min；
步骤二，吸取虫液滴于多聚赖氨酸处理过的干净载玻片上，尽量吸除多余液体，用眉毛笔(用树胶将眉毛粘在针灸银针上制成)将虫液分成若干小液滴，并根据需要调整虫体体位，注意避免两虫贴合，然后用洗耳球将虫体快速吹干；
步骤三，加1滴质量浓度为2wt％硝酸银溶液覆盖虫体5min，然后用蒸馏水将残留的硝酸银溶液冲洗干净；
步骤四，将上述带有虫体的载玻片浸泡在盛有蒸馏水的玻璃皿中，下衬白纸；将虫体平置于距离光源5cm处，在卤素冷光源(XD-302型400W卤素冷光源)的最强档光下照射显影，可见虫体逐渐由白色变为金黄色；
步骤五，在虫体变色过程中，随时镜检，待得到满意的显影效果(即显微镜观察到虫体的银线结构显现清晰)后终止显影并用蒸馏水冲洗浮渣，晾干；
步骤六，在晾干的虫体表面滴加中性树胶，加盖玻片封片，得到车轮虫干银染色样品。
本实施例制成的车轮虫干银染色样品用显微镜观察的形态如图1所示，从图1可以看出，虫体的附着盘结构得到了非常逼真的展示。利用蒸馏水清洗虫体，可使染色后的虫体和背景更干净；利用经过多聚赖氨酸处理载玻片非常有助于粘附虫体并调整体位得到全方位、高质量的制片。另外，步骤中省去了以显影液增强显影的步骤，但虫体的形态效果并没有受到任何影响；虫体呈金黄色，相比以往方法的深棕黑色更加美观。
实施例2
本实施例以斜管虫为例，介绍一种淡水纤毛虫干银染色样品的快速制备方法，包括以下步骤：
步骤一，用微吸管挑取、收集斜管虫并置于蒸馏水滴中，静置5min；而后转移至新的蒸馏水滴中，连续清洗2次，每次5min；
步骤二，吸取虫液滴于多聚赖氨酸处理过的干净载玻片上，尽量吸除多余液体，用眉毛笔(用树胶将眉毛粘在针灸银针上制成)将虫液分成若干小液滴，并根据需要调整虫体体位，注意避免两虫贴合，然后用洗耳球将虫体快速吹干；
步骤三，加1滴质量浓度为2wt％的硝酸银溶液覆盖虫体2min，然后用蒸馏水将残留的硝酸银溶液冲洗干净；
步骤四，将上述带有虫体的载玻片浸泡在盛有蒸馏水的玻璃皿中，下衬白纸；将虫体平置于距离光源5cm处，在卤素冷光源(XD-302型400W卤素冷光源)的最强档光下照射显影，可见虫体逐渐由白色变为金黄色；
步骤五，在虫体变色过程中，随时镜检，待得到满意的显影效果(即显微镜观察到虫体的银线结构显现清晰)后终止显影并用蒸馏水冲洗浮渣，晾干；
步骤六，在晾干的虫体表面滴加中性树胶，加盖玻片封片，得到斜管虫干银染色样品。
本实施例制成的斜管虫干银染色样品用显微镜观察的形态如图2所示，从图2可以看出虫体的银线系统得到了非常逼真的展示。利用蒸馏水清洗虫体，可使染色后的虫体和背景更干净；利用经过多聚赖氨酸处理载玻片非常有助于粘附虫体并调整体位得到全方位、高质量的制片。另外，步骤中省去了以显影液增强显影的步骤，但虫体的形态效果并没有受到任何影响；虫体呈金黄色，相比以往方法的深棕黑色更加美观。
实施例3
本实施例以肠肾虫为例，介绍一种淡水纤毛虫干银染色样品的快速制备方法，包括以下步骤：
步骤一，用微吸管挑取、收集肠肾虫并置于蒸馏水滴中，静置5min；而后转移至新的蒸馏水滴中，连续清洗2次，每次5min；
步骤二，吸取虫液滴于多聚赖氨酸处理过的干净载玻片上，尽量吸除多余液体，用眉毛笔(用树胶将眉毛粘在针灸银针上制成)将虫液分成若干小液滴，并根据需要调整虫体体位，注意避免两虫贴合，然后用洗耳球将虫体快速吹干；
步骤三，加1滴质量浓度为1wt％的硝酸银溶液覆盖虫体2min，然后用蒸馏水将残留的硝酸银溶液冲洗干净；
步骤四，将上述带有虫体的载玻片浸泡在盛有蒸馏水的玻璃皿中，下衬白纸；将虫体平置于距离光源5cm处，在卤素冷光源(XD-302型400W卤素冷光源)的最强档光下照射显影，可见虫体逐渐由白色变为金黄色；
步骤五，在虫体变色过程中，随时镜检，待得到满意的显影效果(即显微镜观察到虫体的银线结构显现清晰)后终止显影并用蒸馏水冲洗浮渣，晾干；
步骤六，在晾干的虫体表面滴加中性树胶，加盖玻片封片，得到肠肾虫干银染色样品。
本实施例制成的肠肾虫干银染色样品用显微镜观察的形态如图3所示，从图3可以看出虫体的银线系统得到了非常逼真的展示。利用蒸馏水清洗虫体，可使染色后的虫体和背景更干净；利用经过多聚赖氨酸处理载玻片非常有助于粘附虫体并调整体位得到全方位、高质量的制片。另外，步骤中省去了以显影液增强显影的步骤，但虫体的形态效果并没有受到任何影响；虫体呈金黄色，相比以往方法的深棕黑色更加美观。
实施例4
本实施例以车轮虫为例，介绍一种淡水纤毛虫干银染色样品的快速制备方法，包括以下步骤：
步骤一，用微吸管挑取、收集车轮虫并置于蒸馏水滴中，静置3min；而后转移至新的蒸馏水滴中，连续清洗3次，每次4min；
步骤二，吸取虫液滴于多聚赖氨酸处理过的干净载玻片上，尽量吸除多余液体，用眉毛笔(用树胶将眉毛粘在针灸银针上制成)将虫液分成若干小液滴，并根据需要调整虫体体位，注意避免两虫贴合，然后用洗耳球将虫体快速吹干；
步骤三，将2滴质量浓度为2wt％硝酸银溶液覆盖虫体3min，然后用蒸馏水将残留的硝酸银溶液冲洗干净；
步骤四，将上述带有虫体的载玻片浸泡在盛有蒸馏水的玻璃皿中，下衬白纸；将虫体平置于距离光源3cm处，在卤素冷光源(XD-302型400W卤素冷光源)的250W档光下照射显影，可见虫体逐渐由白色变为金黄色；
步骤五，在虫体变色过程中，随时镜检，待得到满意的显影效果(即显微镜观察到虫体的银线结构显现清晰)后终止显影并用蒸馏水冲洗浮渣，晾干；
步骤六，在晾干的虫体表面滴加中性树胶，加盖玻片封片，得到车轮虫干银染色样品。
本实施例得到的车轮虫干银染色样品在显微镜下的照片与实施例1制成的车轮虫干银染色样品的形态基本相同。
Claims (6)
1.一种淡水纤毛虫干银染色样品的快速制备方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
步骤一，挑取、收集纤毛虫，然后用蒸馏水清洗所述纤毛虫虫体表面，洗净后得到干净虫液；
步骤二，将步骤一得到的虫液滴加到经多聚赖氨酸处理过的干净载玻片上表面，然后除去多余液体，再将虫液分成若干小液滴，并根据需要调整虫体体位，避免两虫贴合，最后将虫体快速吹干；
步骤三，向步骤二吹干后的虫体表面滴加1～2滴硝酸银溶液，完全覆盖虫体后静置3～5min，然后用蒸馏水将载玻片表面残留的硝酸银溶液冲洗干净；
步骤四，将步骤三洗净后的粘附有虫体的载玻片浸泡在盛有蒸馏水的透明玻璃皿中，调整虫体距离光源2～10cm，利用卤素冷光源照射显影；
步骤五，在虫体变色过程中，随时镜检，直至虫体的银线结构显现清晰，终止显影，然后用蒸馏水冲洗浮渣，晾干；
步骤六，向步骤五晾干后的虫体表面滴加中性树胶，加盖玻片后封片，得到本发明所述的淡水纤毛虫干银染色样品。
2.根据权利要求1所述的淡水纤毛虫干银染色样品的快速制备方法，其特征在于：步骤一中所述纤毛虫为车轮虫、斜管虫、肠肾虫、多子小瓜虫、结肠小袋纤毛虫中的任一种。
3.根据权利要求1所述的淡水纤毛虫干银染色样品的快速制备方法，其特征在于：步骤一中所述蒸馏水滴洗次数为1～3次，每次滴洗时间为3～6min。
4.根据权利要求1所述的淡水纤毛虫干银染色样品的快速制备方法，其特征在于：所述硝酸银溶液的质量浓度为1～2wt％。
5.根据权利要求1所述的淡水纤毛虫干银染色样品的快速制备方法，其特征在于：步骤四中所述卤素冷光源为XD-302型卤素冷光源，所述冷光源的最大功率为400W。
6.根据权利要求1所述的淡水纤毛虫干银染色样品的快速制备方法，其特征在于：步骤四中所述显影时间为2～5min。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110441117A (zh) * | 2019-08-05 | 2019-11-12 | 安徽省农业科学院水产研究所 | 一种淡水纤毛虫的定量蛋白银染色法 |
| CN110754436A (zh) * | 2019-10-31 | 2020-02-07 | 青岛农业大学 | 一种刺激隐核虫幼虫的收集方法 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1137569A (zh) * | 1995-06-05 | 1996-12-11 | 沈阳铁路局吉林中心医院 | 一种细菌鞭毛镀银法染色试剂及其染色方法 |
| EP1082611A1 (en) * | 1998-06-02 | 2001-03-14 | Ventana Medical Systems, Inc. | Method for staining biological specimens by combining unstable reagents on a microscope slide |
| JP3212558B2 (ja) * | 1998-10-02 | 2001-09-25 | ポーラ化成工業株式会社 | メラニンの染色法 |
| US20080026366A1 (en) * | 2006-06-07 | 2008-01-31 | Newcomer Supply, Inc. | Biological fixative and method of using the biological fixative |
| CN103781844A (zh) * | 2011-09-06 | 2014-05-07 | 学校法人久留米大学 | 电子显微镜用包埋树脂组合物及使用该组合物的利用电子显微镜观察试样的观察方法 |
| CN103808550A (zh) * | 2014-02-19 | 2014-05-21 | 上海海洋大学 | 一种便于形态学观察的粘孢子虫染色封存方法 |
| CN104568556A (zh) * | 2015-01-28 | 2015-04-29 | 成都市农林科学院 | 一种纤毛虫的染色方法 |
| CN104677713A (zh) * | 2014-12-24 | 2015-06-03 | 青岛农业大学 | 一种改良的Grocott六胺银染色方法及其应用 |
-
2018
- 2018-11-23 CN CN201811407474.2A patent/CN109238810B/zh active Active
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1137569A (zh) * | 1995-06-05 | 1996-12-11 | 沈阳铁路局吉林中心医院 | 一种细菌鞭毛镀银法染色试剂及其染色方法 |
| EP1082611A1 (en) * | 1998-06-02 | 2001-03-14 | Ventana Medical Systems, Inc. | Method for staining biological specimens by combining unstable reagents on a microscope slide |
| JP3212558B2 (ja) * | 1998-10-02 | 2001-09-25 | ポーラ化成工業株式会社 | メラニンの染色法 |
| US20080026366A1 (en) * | 2006-06-07 | 2008-01-31 | Newcomer Supply, Inc. | Biological fixative and method of using the biological fixative |
| CN103781844A (zh) * | 2011-09-06 | 2014-05-07 | 学校法人久留米大学 | 电子显微镜用包埋树脂组合物及使用该组合物的利用电子显微镜观察试样的观察方法 |
| CN103808550A (zh) * | 2014-02-19 | 2014-05-21 | 上海海洋大学 | 一种便于形态学观察的粘孢子虫染色封存方法 |
| CN104677713A (zh) * | 2014-12-24 | 2015-06-03 | 青岛农业大学 | 一种改良的Grocott六胺银染色方法及其应用 |
| CN104568556A (zh) * | 2015-01-28 | 2015-04-29 | 成都市农林科学院 | 一种纤毛虫的染色方法 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| WILHELM FOISSNER: "Basic light and scanning electron microscopic methods for taxonomic studies of ciliated protozoa", 《EUROPEAN JOURNAL OF PROTISTOLOGY》 * |
| 史新柏: "银浸法(Silver—impregnation methods)在纤毛虫研究中的应用", 《哈尔滨师范学院学报（自然科学版）》 * |
| 吴燕峰: "《实用医学细胞培养技术》", 31 January 2010, 中山大学出版社 * |
| 宋微波: "应用于纤毛虫银线系染色的干银法新改良", 《动物学杂志》 * |
| 宋微波: "纤毛虫原生动物形态学研究的常用方法", 《海洋科学》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110441117A (zh) * | 2019-08-05 | 2019-11-12 | 安徽省农业科学院水产研究所 | 一种淡水纤毛虫的定量蛋白银染色法 |
| CN110754436A (zh) * | 2019-10-31 | 2020-02-07 | 青岛农业大学 | 一种刺激隐核虫幼虫的收集方法 |
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