CN109269865B - 用于分离摇蚊头壳亚化石的染色剂及其染色方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于分离摇蚊头壳亚化石的染色剂及其染色方法，所述染色剂的原料包括固体苯胺蓝苯酚、乳酸和甘油；其中，每升染色剂中含有1.0～2.0g的固体苯胺蓝/甲基蓝、20～30g的苯酚、20～30g的乳酸和80～90g的甘油。本发明所提供的摇蚊头壳亚化石染色液的染色方法简单，配制方法简单，利于实验员更快的进行挑样这一过程，并能尽可能的降低样品遗漏量。
Description
技术领域
本发明涉及染色剂，具体地指一种用于分离摇蚊头壳亚化石的染色剂及其染色方法。
背景技术
摇蚊幼虫是几乎所有淡水环境中含量较为丰富的底栖动物之一，是湖泊微食物网上极其重要的一环。作为水体柔软底质中最为重要的功能群之一，其对水体环境变化响应极为迅速，因此摇蚊被认为是湖泊环境演化及评估的“生物放映仪”。
沉积物摇蚊头壳亚化石作为当时摇蚊种群组成的直接反映，被广泛应用于过去湖泊环境的定性及定量恢复研究，包括对温度、营养、水体溶氧、水深等的定量重建。此外，摇蚊生活在水体底部，对其栖息的底质环境变化异常敏感，能直接捕捉湖泊富营养化过程中水生植被种群演替及缩减的信号，因而在古湖沼学研究中具有其独特的优势。
在进行实验室分析之前，需对摇蚊头壳亚化石进行提取。通常方法为将处理过筛后的剩余样品转移到体视显微镜下，在25倍下用镊子将摇蚊头壳手动挑出，并用Hydromatrix将挑出的头壳封片。但是现在的挑样方法，因头壳较小，且其颜色与周围植物碎屑等颜色相似，较难挑出，容易遗漏，并需要耗费大量的时间进行这一过程，影响研究进度。
发明内容
本发明针对现有技术存在的缺陷，提供一种用于分离摇蚊头壳亚化石的染色剂及其染色方法，该染色剂便于挑出头壳。
为实现上述目的，本发明提供的一种用于分离摇蚊头壳亚化石的染色剂，所述染色剂的原料包括固体苯胺蓝苯酚、乳酸和甘油；其中，每升染色剂中含有1.0～2.0g的固体苯胺蓝/甲基蓝、20～30g的苯酚、20～30g的乳酸和80～90g的甘油。上述原料的用量根据溶液的用量变换而按比例变化。
进一步地，所述每升染色剂中含有1.5～1.8g的苯胺蓝/甲基蓝、20～25g的苯酚、24～28g的乳酸和83～88g的甘油。
再进一步地，所述每升染色剂中含有1.6g的苯胺蓝、22g的苯酚、25g的乳酸和85g的甘油。
上述原料中苯胺蓝染色剂能与真菌菌丝中细胞壁的特殊组分特异性结合,因此可以用于真菌菌体的染色，在多数真菌的细胞壁中最具特征性的是含有甲壳质,即几丁质，而摇蚊头壳中含有大量几丁质，因此苯胺蓝作为染色剂对摇蚊染色具有很好的效果。
本发明还保护了一种用于分离摇蚊头壳亚化石的染色剂的制备方法，包括以下步骤：
将固体苯胺蓝/甲基蓝、苯酚、乳酸和甘油加入水中，混合均匀，即得到染色剂，其中，每升染色剂中含有1.0～2.0g的固体苯胺蓝/甲基蓝、20～30g的苯酚、20～30g的乳酸和80～90g的甘油。
本发明还保护了一种所述染色剂浸染分离摇蚊头壳亚化石的方法，包括以下步骤：
1)称取待分离的样品，浸泡于KOH溶液中，并将其置于恒温水浴锅中，搅拌反应，收集浸泡反应的样品；
2)将浸泡反应的样品清洗过筛；
3)将过筛的样品加入染色剂中染色，得到染色样品；
4)染色样品再次过筛，以洗去染液；
5)置于体视显微镜下观察，分离得到摇蚊头壳亚化石。
作为优选方案，所述步骤1)中，所述KOH溶液的质量分数为10～20％。
KOH处理的主要作用为抗絮凝，也就是使底泥分散，以便于后期样品挑拣。
作为优选方案，所述步骤2)中，筛的目数为150目～200目。作为优选方案，步骤3)中，染色的时间为2～3h
作为优选方案，所述步骤4)中，筛的目数为150目～200目。
本发明的有益效果在于：
本发明所提供的摇蚊头壳亚化石染色液的染色方法简单，配制方法简单，利于实验员更快的进行挑样这一过程，并能尽可能的降低样品遗漏量。
附图说明
图1为五种染色剂对摇蚊头壳的染色效果比较图；
图中，A为苯胺蓝的染色效果、B为甲基蓝染色剂的染色效果、C为苯胺蓝染色剂、D为酸性品红的染色效果、E为亚甲基蓝的染色效果；
图2为华中科技大学校园内湖泊底泥染色效果对比图；
图中，图2A为几丁质化高的染色头壳、图2B为几丁质化低的染色头壳,图2C为未染色的头壳，
图3为中南财经政法大学校园内湖泊底泥染色效果对比图，
图中，图3A为几丁质化高的染色头壳、图3B为未染色的头壳
图4为武汉纺织大学校园湖泊底泥染色效果对比图，
图中，图4A为几丁质化高的染色头壳、图4B为未染色的头壳。
具体实施方式
为了更好地解释本发明，以下结合具体实施例进一步阐明本发明的主要内容，但本发明的内容不仅仅局限于以下实施例。
实施例1
用于分离摇蚊头壳亚化石的染色剂1的制备方法
将固体苯胺蓝、苯酚、乳酸和甘油加入水中，混合均匀，即得到染色剂1(即为苯胺蓝染色剂)，其中，每升染色剂1中含有1.6g苯胺蓝、22g苯酚、25g乳酸和85g甘油。
实施例2
本实施例与实施例1制备方法基本相同，不同之处在于：
每升染色剂2(即为甲基蓝染色剂)中含有1.6g甲基蓝、22g苯酚、25g乳酸和85g甘油。
实施例3
本实施例与实施例1制备方法基本相同，不同之处在于：
每升染色剂3中含有1.5g苯胺蓝、20g苯酚、24g乳酸和88g甘油。
实施例4
本实施例与实施例1制备方法基本相同，不同之处在于：
每升染色剂4中含有1.0g苯胺蓝、30g苯酚、30g乳酸和80g甘油。
实施例5
本实施例与实施例1制备方法基本相同，不同之处在于：
每升染色剂5中含有2.0g苯胺蓝、20g苯酚、28g乳酸和83g甘油。
实施例6五种不同染色剂摇蚊头壳染色效果的比较
将酸性品红、亚甲基蓝、苯胺蓝和实施例1～2制备的苯胺蓝染色剂和甲基蓝染色剂用以下方法对摇蚊头壳的染色，染色方法如下：
1)称取待分离的样品，浸泡于KOH溶液中，并将其置于恒温水浴锅中，搅拌反应，收集浸泡反应的样品；
2)将浸泡反应的样品清洗过筛；
3)将过筛的样品加入染色剂中染色，得到染色样品；
4)染色样品再次过筛，以洗去染液；
5)置于体视显微镜下观察，分离得到摇蚊头壳亚化石。
如图1所示：经过同样的染色时间2h，苯胺蓝不能对样品染色，苯胺蓝染色剂则能很好染色，酸性品红染色不完全，挑样过程中仍发现有未染色摇蚊头壳；亚甲基蓝只能使样品轻微染上色，染色效果不明显，不能很好的将摇蚊头壳与环境区分开来；甲基蓝染色剂效果与苯胺蓝染色剂效果相近，只是颜色偏紫，染色效果都很好。
实施例7
本实施例所用样品取自华中科技大学校园内湖泊底泥及中南财经政法大学校园内湖泊底泥以及武汉纺织大学校园湖泊底泥。样品编号为华科1、财大1、纺大1。所有样品经过同样的筛洗标准处理，统一编号装瓶。
洗样过程：向每个样品中分别加入10％KOH溶液100ml，将烧杯放入恒温水浴锅中，75℃水浴加热15分钟左右，在水浴加热同时，不断用玻璃棒轻轻搅拌(搅拌时不可碰到杯壁，避免头壳破碎)，直至烧杯中沉积物完全散开。水浴后的样品移至水池旁，依次倒入150～200目筛中，用适量大小的流水冲洗，并轻轻用玻璃棒拨动，直至水澄清。将筛中剩余样品洗入对应烧杯中(需注意每个样品洗入烧杯的水量尽量少)，以便下一步实验。
经过筛洗的预处理之后，可以进行挑样实验，在挑样之前对所取样品进行染色处理，染色剂1(即为苯胺蓝染色剂)滴入样品后，确保能使所取样品能被浸染。经过2～3h，样品被充分染色后，将样品进行过筛冲洗，使多余的染色剂冲洗掉不至于妨碍挑样实验。取上述样品适当剂量装入适当大小的表面皿中，在体视显微镜下进行挑拣，最后将挑拣出的摇蚊头壳贴片保存。
如图2～4所示：实施例1制备的染色剂1对摇蚊亚化石进行染色能很大程度上加快对亚化石的挑拣：染色剂1用于湖泊沉积物样品时效果较为显著，而对于泥炭地等几丁质化程度不高或常见种个体较小的沉积物样品效果不明显，着色较浅，与背景色对比不大，但与未染色样品相比，挑样时仍旧有一定优势。但有所不足的是，染色时间初定为2h～3h，染色时间较长。且经过染色的样品需在清洗掉染色剂后两小时内完成挑样，因为经过较长时间后，在头壳上的染色剂会脱落，失去染色效果。针对洗去染色剂后两小时后染色剂脱落的现象，我们对经染色后褪色的样品再次进行染色，发现样品仍能被染上色。
其它未详细说明的部分均为现有技术。尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。
Claims (9)
1.一种用于分离摇蚊头壳亚化石的染色剂，其特征在于：所述染色剂的原料包括固体苯胺蓝/甲基蓝、苯酚、乳酸和甘油；其中，每升染色剂中含有1.0～2.0g的固体苯胺蓝/甲基蓝、20～30g的苯酚、20～30g的乳酸和80～90g的甘油。
2.根据权利要求1所述用于分离摇蚊头壳亚化石的染色剂，其特征在于：所述每升染色剂中含有1.5～1.8g的苯胺蓝/甲基蓝、20～25g的苯酚、24～28g的乳酸和83～88g的甘油。
3.根据权利要求1所述用于分离摇蚊头壳亚化石的染色剂，其特征在于：所述每升染色剂中含有1.6g的苯胺蓝、22g的苯酚、25g的乳酸和85g的甘油。
4.一种权利要求1所述用于分离摇蚊头壳亚化石的染色剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
将固体苯胺蓝/甲基蓝、苯酚、乳酸和甘油加入水中，混合均匀，即得到染色剂，其中，每升染色剂中含有1.0～2.0g的固体苯胺蓝/甲基蓝、20～30g的苯酚、20～30g的乳酸和80～90g的甘油。
5.一种权利要求1所述染色剂浸染分离摇蚊头壳亚化石的方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)称取待分离的样品，浸泡于KOH溶液中，并将其置于恒温水浴锅中，搅拌反应，收集浸泡反应的样品；
2)将浸泡反应的样品清洗过筛；
3)将过筛的样品加入染色剂中染色，得到染色样品；
4)染色样品再次过筛，以洗去染液；
5)置于体视显微镜下观察，分离得到摇蚊头壳亚化石。
6.根据权利要求5所述染色剂浸染分离摇蚊头壳亚化石的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述KOH溶液的质量分数为10～20％。
7.根据权利要求5所述染色剂浸染分离摇蚊头壳亚化石的方法，其特征在于：所述步骤2)中，筛的目数为150目～200目。
8.根据权利要求5所述染色剂浸染分离摇蚊头壳亚化石的方法，其特征在于：所述步骤3)中，染色的时间为2～3h
9.根据权利要求5所述染色剂浸染分离摇蚊头壳亚化石的方法，其特征在于：所述步骤4)中，筛的目数为150目～200目。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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