CN111624065B - 一种动物专用Diff-Quik染液及制备方法 - Google Patents
一种动物专用Diff-Quik染液及制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111624065B CN111624065B CN202010440169.4A CN202010440169A CN111624065B CN 111624065 B CN111624065 B CN 111624065B CN 202010440169 A CN202010440169 A CN 202010440169A CN 111624065 B CN111624065 B CN 111624065B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- reagent
- parts
- diff
- dye liquor
- azure
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims abstract description 31
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 97
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 48
- DGLRDKLJZLEJCY-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogenphosphate dodecahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O DGLRDKLJZLEJCY-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 33
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 33
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims abstract description 33
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 claims abstract description 30
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 claims abstract description 30
- SEACYXSIPDVVMV-UHFFFAOYSA-L eosin Y Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C([O-])=C(Br)C=C21 SEACYXSIPDVVMV-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 29
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 claims abstract description 23
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 23
- 239000012286 potassium permanganate Substances 0.000 claims abstract description 20
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 claims abstract description 18
- DNDJEIWCTMMZBX-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethyl-7-methyliminophenothiazin-3-amine;hydrochloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(=[N+](C)C)C=C2SC3=CC(NC)=CC=C3N=C21 DNDJEIWCTMMZBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- YOWZJZJLXUQHGF-UHFFFAOYSA-M [7-(dimethylamino)phenothiazin-3-ylidene]-dimethylazanium;dimethyl-[7-(methylamino)phenothiazin-3-ylidene]azanium;dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].C1=CC(=[N+](C)C)C=C2SC3=CC(NC)=CC=C3N=C21.C1=CC(=[N+](C)C)C=C2SC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 YOWZJZJLXUQHGF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 16
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 25
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 25
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 21
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 20
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 13
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 12
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 11
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 10
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 9
- RZSYLLSAWYUBPE-UHFFFAOYSA-L Fast green FCF Chemical compound [Na+].[Na+].C=1C=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C(=CC(O)=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=CC=1N(CC)CC1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 RZSYLLSAWYUBPE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 3
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 claims description 3
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 abstract description 40
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 21
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 8
- 239000013049 sediment Substances 0.000 abstract description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 43
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 21
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 19
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 9
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 5
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 4
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000980 acid dye Substances 0.000 description 3
- 210000003756 cervix mucus Anatomy 0.000 description 3
- 230000002327 eosinophilic effect Effects 0.000 description 3
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 3
- 108010007337 Azurin Proteins 0.000 description 2
- 235000005811 Viola adunca Nutrition 0.000 description 2
- 240000009038 Viola odorata Species 0.000 description 2
- 235000013487 Viola odorata Nutrition 0.000 description 2
- 235000002254 Viola papilionacea Nutrition 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 150000007514 bases Chemical class 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 2
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 2
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SJEYSFABYSGQBG-UHFFFAOYSA-M Patent blue Chemical compound [Na+].C1=CC(N(CC)CC)=CC=C1C(C=1C(=CC(=CC=1)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=C1C=CC(=[N+](CC)CC)C=C1 SJEYSFABYSGQBG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000981 basic dye Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/2813—Producing thin layers of samples on a substrate, e.g. smearing, spinning-on
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/84—Systems specially adapted for particular applications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
- G01N2001/302—Stain compositions
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了一种动物专用Diff‑Quik染液及制备方法。一种Diff‑Quik染液，包括第一试剂、第二试剂和第三试剂，其中，第一试剂含有以下成分：固绿、甲醇；第二试剂含有以下成分：伊红Y、磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠、超纯水；第三试剂含有以下成分：亚甲基蓝、天青II、天青I、伊红Y、磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠、高锰酸钾、超纯水。本发明的一种Diff‑Quik染液适用于动物血液细胞涂片，染色颜色非常清晰、且染色背景无沉渣、色泽明亮，不同细胞染色后区分度高，且适用范围更广泛；本发明的一种Diff‑Quik染液相比于现有的Diff‑Quik染液，在染色时间上更具有优势，一般30s~60s内即可完成染色。且本发明的Diff‑Quik染液制备时间极短，显著提升生产效益。
Description
技术领域
本发明涉及医学生物检测技术领域，
尤其是，本发明涉及一种动物专用Diff-Quik染液及制备方法。
背景技术
Diff-Quik染色是在瑞氏染色（Wright Stain）基础上改良的一种快速染色方法，是细胞学检查中常用的染色方法之一。该染色液采用世界卫生组织（WHO）推荐的快速染色方法而配制，与Wright Stain类似都是利用Wright Stain技术原理改良而来，染色结果与瑞氏染色液也极其相似，但Diff-Quik染色所需的时间极短，一般在90s内即可完成染色。Diff-Quik染色主要用于血细胞涂片、骨髓涂片、阴道分泌物涂片、脱落细胞涂片等。
目前市售的Diff-Quik染液主要是用于人体细胞的检测，虽然也能用于动物血液涂片，但是将其应用于动物血液细胞涂片后，会出现染色颜色不够清晰、染色背景可见少量沉渣、不同细胞区分度不高的缺点。
发明内容
为了克服上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种适用于动物细胞涂片的动物专用Diff-Quik染液及制备方法。
为解决上述问题，本发明采用如下技术方案：
一种Diff-Quik染液，包括第一试剂、第二试剂和第三试剂：
所述第一试剂含有以下成分：固绿、甲醇；
所述第二试剂含有以下成分：伊红Y、磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠、超纯水；
所述第三试剂含有以下成分：亚甲基蓝、天青II、天青I、伊红Y、磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠、高锰酸钾、超纯水。
优选地，所述第一试剂含有以下重量份成分：固绿1 ~2份、甲醇1000份；
所述第二试剂含有以下重量份成分：伊红Y 1~2份、磷酸二氢钾 1~3份、十二水合磷酸氢二钠 2~3份、超纯水1000份；
所述第三试剂含有以下重量份成分：亚甲基蓝 1~2份、天青II 1~2份、天青I 1~2份、伊红Y 0.03~0.04份、磷酸二氢钾 1~2份、十二水合磷酸氢二钠 2~3份、高锰酸钾2~3份、超纯水1000份。
优选地，所述第二试剂还含有第一防腐剂0.05~0.15份。
优选地，所述第三试剂还含有第二防腐剂0.05~0.15份。
优选地，所述第一防腐剂、所述第二防腐剂为硫柳汞钠。
本发明还提供一种动物专用Diff-Quik染液的制备方法，包括以下步骤：
配制含固绿的甲醇溶液；
配制含伊红Y、磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠的第一水溶液；
配制含磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠的第二水溶液，在20~30℃下向所述第二水溶液中加入天青II、天青I、伊红Y、亚甲基蓝，溶解完全后调节混合溶液pH至3.0~3.3，将所述混合溶液升温至85℃以上后加入高锰酸钾，之后按以下过程进行反应：
在90~95℃下等温反应50min以上；
按1℃/min升温至98~100℃，保温5~10min；
按1℃/min降温至60~70℃，保温5~10min后再次升温至98~100℃，保温2h后自然冷却至室温并放置12~24h。
与现有技术相比，本发明的技术效果体现在：
（1）本发明的一种Diff-Quik染液适用于动物细胞涂片，染色颜色非常清晰、且染色背景无沉渣、色泽明亮，不同细胞染色后区分度高；
（2）本发明的一种Diff-Quik染液不仅能对动物的血细胞涂片、骨髓涂片、阴道分泌物涂片、脱落细胞涂片，还能对动物的皮肤细胞、耳道细胞等进行涂片，适用范围更广泛；
（3）本发明的一种Diff-Quik染液相比于现有的Diff-Quik染液，在染色时间上更具有优势，一般30s~60s内即可完成染色；
（4）常规的Diff-Quik染液从制备到上市大概需要一个月的时间，本发明的一种Diff-Quik染液的第三试剂采用高锰酸钾作为氧化剂，配合制备工艺参数的调整控制，可使Diff-Quik染液从制备到上市大概只需3天的时间，显著缩短生产时间，提升效益。
附图说明
图1为本发明实施例3制备的Diff-Quik染液对动物猫的血细胞染色后的镜检结果观察图；
图2为本发明对比例1的染液对动物猫的血细胞染色后的镜检结果观察图。
图1中，a中圆圈圈出的为染色后的粒细胞；b中圆圈圈出的为染色后的单核细胞；c中圆圈圈出的为染色后的淋巴细胞；d中矩形框圈出的为染色后的粒细胞、单核细胞和淋巴细胞；图2中圆圈圈出的为染色后观察到的细胞。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图和实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明实施例提供一种Diff-Quik染液，包括第一试剂、第二试剂和第三试剂，其中，第一试剂含有以下成分：固绿、甲醇；第二试剂含有以下成分：伊红Y、磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠、超纯水；第三试剂含有以下成分：亚甲基蓝、天青II、天青I、伊红Y、磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠、高锰酸钾、超纯水。
本发明实施例的一种Diff-Quik染液在对动物血液细胞进行血液涂片后，先将血液涂片浸入第一试剂中进行固定；之后，再将血液涂片依次浸入第二试剂、第三试剂中，利用第二试剂、第三试剂中的酸性染料结合血细胞中富含碱性化合物的结构如嗜酸性颗粒，使细胞被染成红色；利用第三试剂中的碱性染料结合血细胞中的核酸或嗜碱性颗粒等酸性化合物，使细胞被染成蓝紫色。
因动物皮肤细胞、耳道细胞的特殊性，其不同于人体的皮肤细胞和耳道细胞，例如动物的皮肤上存在大量毛发、耳道内通常会有大量寄生虫，因此，在对取样后的动物皮肤细胞或耳道细胞进行染色时，使用常规市售的Diff-Quik染液染色后会发现染色背景不清晰、不同细胞染色后区分度不高的缺点。本发明的一种Diff-Quik染液适用于动物血液细胞涂片，染色颜色非常清晰、且染色背景无沉渣、色泽明亮，不同细胞染色后区分度高；本发明的一种Diff-Quik染液不仅能对动物的血细胞涂片、骨髓涂片、阴道分泌物涂片、脱落细胞涂片，还能对动物的皮肤细胞、耳道细胞等进行涂片，适用范围更广泛。本发明的一种Diff-Quik染液相比于现有的Diff-Quik染液，在染色时间上更具有优势，一般30s~60s内即可完成染色。
优选地，第一试剂含有以下重量份成分：固绿1 ~2份、甲醇1000份；通常配制以第一试剂中每1000mL甲醇中含有固绿1~2mg为宜。第一试剂在进行血液涂片时起到对血液细胞进行固定的作用，防止血液细胞在后续染色过程中发生变形，便于镜检观察。
优选地，第二试剂含有以下重量份成分：伊红Y 1~2份、磷酸二氢钾 1~3份、十二水合磷酸氢二钠 2~3份、超纯水1000份。染色时，第二试剂中的酸性染料会结合血细胞中富含碱性化合物的结构如嗜酸性颗粒，使细胞被染成红色。
优选地，第三试剂含有以下重量份成分：亚甲基蓝 1~2份、天青II 1~2份、天青I 1~2份、伊红Y 0.03~0.04份、磷酸二氢钾 1~2份、十二水合磷酸氢二钠 2~3份、高锰酸钾2~3份、超纯水1000份。染色时，第三试剂中的酸性染料会结合血细胞中富含碱性化合物的结构如嗜酸性颗粒，使细胞被染成红色；同时第三试剂中的碱性染料会结合血细胞中的核酸或嗜碱性颗粒等酸性化合物，使细胞被染成蓝紫色。
优选地，第二试剂中还含有第一防腐剂0.05~0.15份，第三试剂中还含有第二防腐剂0.05~0.15份。更优选地，第一防腐剂、第二防腐剂为硫柳汞钠。通过在第二试剂、第三试剂中添加防腐剂，可以延长染液的保存时间。
本发明还提供一种动物专用Diff-Quik染液的制备方法，包括以下步骤：
（1）配制含固绿的甲醇溶液；
（2）配制含伊红Y、磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠的第一水溶液；
（3）配制含磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠的第二水溶液，在20~30℃下向第二水溶液中加入天青II、天青I、伊红Y、亚甲基蓝，溶解完全后调节混合溶液pH至3.0~3.3，将混合溶液升温至85℃以上后加入高锰酸钾，之后按以下过程进行反应：
在90~95℃下等温反应50min以上；
按1℃/min升温至98~100℃，保温5~10min；
按1℃/min降温至60~70℃，保温5~10min后再次升温至98~100℃，保温2h后自然冷却至室温并放置12~24h。
常规的Diff-Quik染液从制备到上市大概需要一个月的时间，主要在于第三试剂的制备过程较耗时，本发明对第三试剂的制备过程进行改良，采用高锰酸钾作为氧化剂，配合制备工艺参数的调整控制，可使Diff-Quik染液从制备到上市大概只需3天的时间，显著缩短生产时间，提升效益。
采用本发明的Diff-Quik染液对动物血液细胞进行染色时，可以按照以下步骤操作：
（1）常规方法制备血液涂片或骨髓涂片。
（2）涂片浸入第一试剂染色5~10 s，取出，竖立在滤纸上吸去多余液体。
（3）涂片浸入第二试剂上下提拉5次，取出，竖立在滤纸上吸去多余液体。
（4）涂片浸入第三试剂染色5~10 s，取出。
（5）去离子水冲洗去多余染液。
（6）涂片干燥镜检。
（7）将观察后认为有价值的涂片用二甲苯透明，封片胶封固、保存。
采用本发明的Diff-Quik染液对动物猫、犬的血液细胞进行染色后，镜检结果如表1、表2所示。
表1 对动物猫、犬的血液细胞进行染色后的镜检结果
表2 对动物猫、犬的血液细胞进行染色后的镜检结果
以下结合具体实施例做进一步说明。
实施例1
本发明实施例1提供一种动物专用Diff-Quik染液，包括第一试剂、第二试剂和第三试剂；
第一试剂中含有固绿1 mg、甲醇（HPLC）1000mL；
第二试剂含有以下重量份成分：伊红Y 1.2g、磷酸二氢钾 1.8g、十二水合磷酸氢二钠 2g、超纯水1000mL、防腐剂0.05g；
第三试剂含有以下重量份成分：亚甲基蓝 1.2g、天青II 1g、天青I 1.2g、伊红Y0.03g、磷酸二氢钾 1.8g、十二水合磷酸氢二钠 2g、高锰酸钾 2g、超纯水1000mL、防腐剂0.05g。
第一试剂、第二试剂和第三试剂的制备过程如下：
准确称取1 mg固绿染粉，倒入250 mL烧杯中，量取1000 mL甲醇。加入到上述烧杯中，搅拌2 min即得第一试剂；
量取1000 mL超纯水，称取磷酸二氢钾1.8 g，加入到超纯水中，搅拌使之溶解完全，称取十二水合磷酸氢二钠2 g，加入上述溶液中，使之溶解完全；称取1.2g伊红Y，加入到上述溶液中，搅拌使之溶解完全；称取0.05g防腐剂加入上述染液，搅拌2 min即得第二试剂；
量取900 mL超纯水，称取磷酸二氢钾1.8g，加入到超纯水中，搅拌使之溶解完全，称取十二水合磷酸氢二钠2 g，加入上述溶液中，搅拌使之溶解完全；在20~30℃下，依次称取并加入1g天青II；1.2g天青I；1.2g亚甲基蓝、0.03g伊红Y加入到上述溶液中（边加边搅拌），搅拌10 min使之溶解完全；用0.2 mol/L的稀盐酸调节pH至3.0~3.3；加热混合溶液，当温度升至90℃时加入100mL高锰酸钾溶液，在90℃下等温反应55min；之后按1℃/min升温至98℃，保温5min；之后按1℃/min降温至60℃，保温5min后再次升温至98℃（升温速率5℃/min），保温2h后自然冷却至室温并放置12h。抽滤后称取0.05 g防腐剂加入上述染液，搅拌2min即得第三试剂。
实施例2
本发明实施例2提供一种动物专用Diff-Quik染液，包括第一试剂、第二试剂和第三试剂；
第一试剂中含有固绿2 mg、甲醇（HPLC）1000mL；
第二试剂含有以下重量份成分：伊红Y 1.9g、磷酸二氢钾 2.8g、十二水合磷酸氢二钠 2.8g、超纯水1000mL、防腐剂0.15g；
第三试剂含有以下重量份成分：亚甲基蓝 1.8g、天青II 1.8g、天青I 1.8g、伊红Y0.04g、磷酸二氢钾1.2g、十二水合磷酸氢二钠2.8g、高锰酸钾 2.5g、超纯水1000mL、防腐剂0.15g。
第一试剂、第二试剂的制备过程同实施例1，第三试剂按以下过程制备：
量取900 mL超纯水，称取磷酸二氢钾1.2g，加入到超纯水中，搅拌使之溶解完全，称取十二水合磷酸氢二钠2.8 g，加入上述溶液中，搅拌使之溶解完全；在20~30℃下，依次称取并加入1.8g天青II；1.8g天青I；1.8g亚甲基蓝、0.04g伊红Y加入到上述溶液中（边加边搅拌），搅拌10 min使之溶解完全；用0.2 mol/L的稀盐酸调节pH至3.0~3.3；加热混合溶液，当温度升至95℃时加入100mL高锰酸钾溶液，在95℃下等温反应60min；之后按1℃/min升温至100℃，保温10min；之后按1℃/min降温至70℃，保温5min后再次升温至100℃（升温速率5℃/min），保温2h后自然冷却至室温并放置24h。抽滤后称取0.15 g防腐剂加入上述染液，搅拌2 min即得第三试剂。
实施例3
本发明实施例3提供一种动物专用Diff-Quik染液，包括第一试剂、第二试剂和第三试剂；
第一试剂中含有固绿1.5 mg、甲醇（HPLC）1000mL；
第二试剂含有以下重量份成分：伊红Y 1.3g、磷酸二氢钾 1.9g、十二水合磷酸氢二钠 2.7g、超纯水1000mL、防腐剂0.1g；
第三试剂含有以下重量份成分：亚甲基蓝 1.2g、天青II 1.2g、天青I 1.3g、伊红Y0.035g、磷酸二氢钾1.9g、十二水合磷酸氢二钠2.6g、高锰酸钾 2.8g、超纯水1000mL、防腐剂0.1g。
第一试剂、第二试剂和第三试剂的制备过程同实施例2。
实施例4
本发明实施例4提供一种动物专用Diff-Quik染液，包括第一试剂、第二试剂和第三试剂；
第一试剂中含有固绿1.9 mg、甲醇（HPLC）1000mL；
第二试剂含有以下重量份成分：伊红Y 1.5g、磷酸二氢钾 2.1g、十二水合磷酸氢二钠 2.7g、超纯水1000mL、防腐剂0.1g；
第三试剂含有以下重量份成分：亚甲基蓝 1.5g、天青II 1.5g、天青I 1.5g、伊红Y0.035g、磷酸二氢钾1.9g、十二水合磷酸氢二钠2.7g、高锰酸钾 3g、超纯水1000mL、防腐剂0.1g。
第一试剂、第二试剂的制备过程同实施例1，第三试剂按以下过程制备：
量取900 mL超纯水，称取磷酸二氢钾1.9g，加入到超纯水中，搅拌使之溶解完全，称取十二水合磷酸氢二钠2.7 g，加入上述溶液中，搅拌使之溶解完全；在20~30℃下，依次称取并加入1.5g天青II；1.5g天青I；1.5g亚甲基蓝、0.035g伊红Y加入到上述溶液中（边加边搅拌），搅拌10 min使之溶解完全；用0.2 mol/L的稀盐酸调节pH至3.0~3.3；加热混合溶液，当温度升至92℃时加入100mL高锰酸钾溶液，在92℃下等温反应70min；之后按1℃/min升温至100℃，保温5min；之后按1℃/min降温至65℃，保温5min后再次升温至100℃（升温速率5℃/min），保温2h后自然冷却至室温并放置24h。抽滤后称取0.1 g防腐剂加入上述染液，搅拌2 min即得第三试剂。
采用本发明实施例1~实施例4制备的Diff-Quik染液对动物猫的血细胞进行涂片染色，之后镜检观察，发现本发明实施例1~实施例4制备的Diff-Quik染液都能得到染色颜色非常清晰、染色背景无沉渣、色泽明亮，不同细胞染色后区分度高的镜检结果。其中实施例1的染色操作过程大概50s内完成，实施例2的染色过程大概55s内完成，实施例3的染色过程大概35s内完成，实施例4的染色过程大概48s内完成。采用实施例3制备的Diff-Quik染液得到的镜检结果如图1所示。
对比例1
采用市售的贝索Diff-Quik染色液对同一试样的动物猫的血细胞进行涂片染色，之后镜检观察，镜检结果如图2所示。贝索Diff-Quik染色液的染色操作过程大概70s~90s内完成。
与本发明实施例制备的Diff-Quik染液相比，贝索Diff-Quik染色液的染色颜色不够清晰、染色背景可见少量沉渣、且不同细胞区分度不高。
本发明不局限于上述具体的实施方式，本发明可以有各种更改和变化。凡是依据本发明的技术实质对以上实施方式所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种动物专用Diff-Quik染液，其特征在于，包括第一试剂、第二试剂和第三试剂：
所述Diff-Quik染液的适用范围包括动物血细胞涂片；
所述第一试剂含有以下成分：固绿、甲醇；
所述第二试剂含有以下成分：伊红Y、磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠、超纯水；
所述第三试剂含有以下成分：亚甲基蓝、天青II、天青I、伊红Y、磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠、高锰酸钾、超纯水；
所述第三试剂含有以下重量份成分：亚甲基蓝 1~2份、天青II 1~2份、天青I 1~2份、伊红Y 0.03~0.04份、磷酸二氢钾 1~2份、十二水合磷酸氢二钠 2~3份、高锰酸钾2~3份、超纯水1000份；
所述第三试剂，通过以下步骤制备：
配制含磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠的第二水溶液，在20~30℃下向所述第二水溶液中加入天青II、天青I、伊红Y、亚甲基蓝，溶解完全后调节混合溶液pH至3.0~3.3，将所述混合溶液升温至85℃以上后加入高锰酸钾，之后按以下过程进行反应：
在90~95℃下等温反应50min以上；
按1℃/min升温至98~100℃，保温5~10min；
按1℃/min降温至60~70℃，保温5~10min后再次升温至98~100℃，保温2h后自然冷却至室温并放置12~24h。
2.如权利要求1所述的一种动物专用Diff-Quik染液，其特征在于，
所述第一试剂含有以下重量份成分：固绿1 ~2份、甲醇1000份；
所述第二试剂含有以下重量份成分：伊红Y 1~2份、磷酸二氢钾 1~3份、十二水合磷酸氢二钠 2~3份、超纯水1000份。
3.如权利要求2所述的一种动物专用Diff-Quik染液，其特征在于，所述第二试剂还含有第一防腐剂0.05~0. 15份。
4.如权利要求3所述的一种动物专用Diff-Quik染液，其特征在于，所述第三试剂还含有第二防腐剂0.05~0.15份。
5.如权利要求4所述的一种动物专用Diff-Quik染液，其特征在于，所述第一防腐剂、所述第二防腐剂为硫柳汞钠。
6.一种动物专用Diff-Quik染液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
配制含固绿的甲醇溶液；
配制含伊红Y、磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠的第一水溶液；
配制含磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠的第二水溶液，在20~30℃下向所述第二水溶液中加入天青II、天青I、伊红Y、亚甲基蓝，溶解完全后调节混合溶液pH至3.0~3.3，将所述混合溶液升温至85℃以上后加入高锰酸钾，之后按以下过程进行反应：
在90~95℃下等温反应50min以上；
按1℃/min升温至98~100℃，保温5~10min；
按1℃/min降温至60~70℃，保温5~10min后再次升温至98~100℃，保温2h后自然冷却至室温并放置12~24h。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010440169.4A CN111624065B (zh) | 2020-05-22 | 2020-05-22 | 一种动物专用Diff-Quik染液及制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010440169.4A CN111624065B (zh) | 2020-05-22 | 2020-05-22 | 一种动物专用Diff-Quik染液及制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111624065A CN111624065A (zh) | 2020-09-04 |
| CN111624065B true CN111624065B (zh) | 2023-10-27 |
Family
ID=72270025
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010440169.4A Active CN111624065B (zh) | 2020-05-22 | 2020-05-22 | 一种动物专用Diff-Quik染液及制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111624065B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114441271B (zh) * | 2021-12-27 | 2023-06-27 | 桂林优利特医疗电子有限公司 | 一种新型染色液的配置及染色方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101587039A (zh) * | 2009-07-07 | 2009-11-25 | 中国人民解放军第三军医大学第二附属医院 | 一种血细胞染液 |
| RU2009138702A (ru) * | 2009-10-19 | 2011-04-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кемеровская государственная медицинская академия | Композиции для окраски мазков крови, костного мозга, пунктатов и отпечатков различных органов |
| EP2717034A1 (en) * | 2012-10-08 | 2014-04-09 | Roumen Parapanov | Methods and kits for sperm quality assessment and uses thereof |
| WO2014146051A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Iris International, Inc. | Autofocus systems and methods for particle analysis in blood samples |
| CN107205980A (zh) * | 2014-10-21 | 2017-09-26 | M·布达克 | 具有获自虞美人的新型分子的组织和细胞染色剂制剂 |
| CN109406246A (zh) * | 2018-10-25 | 2019-03-01 | 潍坊市康华生物技术有限公司 | 一种精子形态学快速染色试剂及其染色方法 |
-
2020
- 2020-05-22 CN CN202010440169.4A patent/CN111624065B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101587039A (zh) * | 2009-07-07 | 2009-11-25 | 中国人民解放军第三军医大学第二附属医院 | 一种血细胞染液 |
| RU2009138702A (ru) * | 2009-10-19 | 2011-04-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кемеровская государственная медицинская академия | Композиции для окраски мазков крови, костного мозга, пунктатов и отпечатков различных органов |
| EP2717034A1 (en) * | 2012-10-08 | 2014-04-09 | Roumen Parapanov | Methods and kits for sperm quality assessment and uses thereof |
| WO2014146051A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Iris International, Inc. | Autofocus systems and methods for particle analysis in blood samples |
| CN107205980A (zh) * | 2014-10-21 | 2017-09-26 | M·布达克 | 具有获自虞美人的新型分子的组织和细胞染色剂制剂 |
| CN109406246A (zh) * | 2018-10-25 | 2019-03-01 | 潍坊市康华生物技术有限公司 | 一种精子形态学快速染色试剂及其染色方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111624065A (zh) | 2020-09-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8158381B2 (en) | Methods for integrated tissue processing and staining | |
| CN106644656B (zh) | 苏木素-伊红一步染色法 | |
| CN103940658A (zh) | 一种组织细胞标本石蜡包埋的制作方法 | |
| JPH01199160A (ja) | 組織固定液および動物組織の保存方法 | |
| CN111624065B (zh) | 一种动物专用Diff-Quik染液及制备方法 | |
| MX2014008839A (es) | Anticongelante de yema de huevo de pato para la crioconservacion de semen de burro y el metodo de preparacion del mismo. | |
| CN108680418B (zh) | 一种用于十字花科作物花粉快速染色的染色液及方法 | |
| US9366604B2 (en) | Cytological or histological binding composition and staining methods | |
| CN111165469A (zh) | 一种液基薄层细胞保存液及其制备方法 | |
| CN105432598A (zh) | 一种液基细胞保存液及其制备方法 | |
| CN109406246A (zh) | 一种精子形态学快速染色试剂及其染色方法 | |
| CN102401812A (zh) | 一种室内检测杂交玉米种子纯度的方法 | |
| CN109946140B (zh) | 真菌染色液和真菌染色方法 | |
| CN111494651A (zh) | 一种线虫幼虫活力检测方法及应用 | |
| CN106404638A (zh) | 基于多元技术的贝类血淋巴细胞分类方法 | |
| CN106644644A (zh) | 一种快速、低毒的蚊虫石蜡切片制作方法 | |
| Samour et al. | Normal haematology of the houbara bustard (Chlamydotis undulata macqueenii) | |
| US3440317A (en) | Cell coloring process and composition for cytological examination | |
| Looney et al. | A photoelectric method for the determination of potassium in blood serum | |
| Coetzee et al. | Extraction of carbon 14‐labeled compounds from plant tissue during processing for electron microscopy | |
| US4137299A (en) | Biological staining composition and staining method | |
| CN110907254B (zh) | 一种Wright-Giemsa染色试剂及其制备方法 | |
| CN111811996B (zh) | 白细胞分类试剂盒及其制备方法、染料废液处理方法 | |
| CN113817010B (zh) | 一种水溶性多功能糖基荧光探针及其应用 | |
| RU2138051C1 (ru) | Способ постановки фагоцитарной реакции крови сельскохозяйственных животных |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |