JPH01199160A - 組織固定液および動物組織の保存方法 - Google Patents
組織固定液および動物組織の保存方法Info
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- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
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- G—PHYSICS
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、生物組織の断片に顕微鏡的詳細を与えるため
の組織固定液（ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｉｘａｔ
ｉｖｅ）に、関する。
の組織固定液（ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｉｘａｔ
ｉｖｅ）に、関する。
従来、そのような一般的に使用される固定液の１つはＢ
−５として知られるものであり、塩化第２水銀、酢酸ナ
トリウムおよびホルムアルデヒドの水溶液である。この
固定液の欠点は、研究室の人達が有毒な水銀やホルムア
ルデヒドにさらされる危険性のあること、ホルムアルデ
ヒドの不快臭、水銀が含まれているために安全に固定液
を処理するのに費用がかさむこと、水銀によって組織が
硬化するためにミクロトーム（検鏡用薄片切断器）の刃
がはなはだしく摩耗すること、および、沃素で処理する
ことによって組織断片から水銀元素を除去する必要のあ
ることである。静置すると第１塩化水銀と金属水銀が沈
澱するので、新鮮な溶液を毎日作らねばならず、かつ、
残った溶液にはその処理問題が生ずる。
−５として知られるものであり、塩化第２水銀、酢酸ナ
トリウムおよびホルムアルデヒドの水溶液である。この
固定液の欠点は、研究室の人達が有毒な水銀やホルムア
ルデヒドにさらされる危険性のあること、ホルムアルデ
ヒドの不快臭、水銀が含まれているために安全に固定液
を処理するのに費用がかさむこと、水銀によって組織が
硬化するためにミクロトーム（検鏡用薄片切断器）の刃
がはなはだしく摩耗すること、および、沃素で処理する
ことによって組織断片から水銀元素を除去する必要のあ
ることである。静置すると第１塩化水銀と金属水銀が沈
澱するので、新鮮な溶液を毎日作らねばならず、かつ、
残った溶液にはその処理問題が生ずる。
水銀が存在することに関連するいろいろの欠点のために
、Ｂ−５固定液をきまりきった固定液として使用するこ
とは不可能であり、顕微鏡的詳細がきわめて意義深く重
要である場合、例えば、悪性リンパ腫として診断される
病気の分類、にのみ使用できる。幸いにして、組織を処
理した後、Ｂ＝５で固定する方法は、沃素を使用するこ
と以外は中性に緩衝されたホルマリンのようなきまりき
った固定液中で固定する方法とほとんど同じである。
、Ｂ−５固定液をきまりきった固定液として使用するこ
とは不可能であり、顕微鏡的詳細がきわめて意義深く重
要である場合、例えば、悪性リンパ腫として診断される
病気の分類、にのみ使用できる。幸いにして、組織を処
理した後、Ｂ＝５で固定する方法は、沃素を使用するこ
と以外は中性に緩衝されたホルマリンのようなきまりき
った固定液中で固定する方法とほとんど同じである。
水銀およびホルムアルデヒドを含まない他のいろいろの
汎、用固定液が提案されているが、これらは、一般に、
特殊の非標準的化学薬品を使用することを必要とし、１
種類以上の汚染問題を生じ、広く使用することができな
い。
汎、用固定液が提案されているが、これらは、一般に、
特殊の非標準的化学薬品を使用することを必要とし、１
種類以上の汚染問題を生じ、広く使用することができな
い。
本発明の固定液は、１種類もしくはそれ以上のアルカノ
ール、ジオールおよびトリオールのうち少なくとも１つ
、および酢酸、ぎ酸などの１種類もしくはそれ以上の酸
から成る標準的な非毒性成分を水溶液として利用する。
ール、ジオールおよびトリオールのうち少なくとも１つ
、および酢酸、ぎ酸などの１種類もしくはそれ以上の酸
から成る標準的な非毒性成分を水溶液として利用する。
少なくとも２つの酸化状態を有する金属イオンの塩を任
意の媒染剤（ｍｏｒｄａｎｔ）として添加してもよい、
浸透力に起因する細胞容積の変化を制御するために塩化
ナトリウムのよな浸透性の強い物質を必要に応じて使用
してもよい。
意の媒染剤（ｍｏｒｄａｎｔ）として添加してもよい、
浸透力に起因する細胞容積の変化を制御するために塩化
ナトリウムのよな浸透性の強い物質を必要に応じて使用
してもよい。
本発明によって、水銀およびホルムアルデヒドを含まず
、実質的に非毒性で比較的安価な通常の成分から成る組
織固定液が供給された。ここに使用されている「＆ｌ織
固定液」という言葉は、動物および植物の組織に対する
生物学的保存、研究室での研究その他の用途のための蛙
などの生物学的標本の保存もしくは固定、および、死体
の保存を含めてそのような組織の他の形の保存もしくは
固定を含むべく使用される。説明のために、顕微鏡的研
究のための組織の保存もしくは固定に関連して用途がの
べられているが、用途はそれに限定されないと理解され
るであろう、固定液は、快い奥と長い在庫可能期間を有
する透明な溶液として製造する０本発明の固定液によっ
て固定された組織は、きまりきった固定液によって処理
された組織と同様に処理してもよく、水銀およびホルム
アルデヒドを含むＢ−５固定液によって得られたもの以
上の顕微鏡的詳細を生じる。
、実質的に非毒性で比較的安価な通常の成分から成る組
織固定液が供給された。ここに使用されている「＆ｌ織
固定液」という言葉は、動物および植物の組織に対する
生物学的保存、研究室での研究その他の用途のための蛙
などの生物学的標本の保存もしくは固定、および、死体
の保存を含めてそのような組織の他の形の保存もしくは
固定を含むべく使用される。説明のために、顕微鏡的研
究のための組織の保存もしくは固定に関連して用途がの
べられているが、用途はそれに限定されないと理解され
るであろう、固定液は、快い奥と長い在庫可能期間を有
する透明な溶液として製造する０本発明の固定液によっ
て固定された組織は、きまりきった固定液によって処理
された組織と同様に処理してもよく、水銀およびホルム
アルデヒドを含むＢ−５固定液によって得られたもの以
上の顕微鏡的詳細を生じる。
通常の組織学研究室に対して適切と考えられる換気で、
固定液に対する曝露を安定限界内に保持するのに十分で
ある。この固定液の非水溶性成分は十分に低い濃度で存
在し、ｐｌが十分に高＜（２より大）、典型的な研究室
条件のもとで使用されると同様の小容積（例えば１日あ
たり５００ｍりの固定液を通常の下水処理系中で安全に
処理することができる。Ｂ−５固定液によって可能とさ
れる数時間よりもずっと長い８週間までもの間、固定液
中に浸漬した＆Ｉｌ織の断片中に満足な顕微鏡的外観が
得られる。
固定液に対する曝露を安定限界内に保持するのに十分で
ある。この固定液の非水溶性成分は十分に低い濃度で存
在し、ｐｌが十分に高＜（２より大）、典型的な研究室
条件のもとで使用されると同様の小容積（例えば１日あ
たり５００ｍりの固定液を通常の下水処理系中で安全に
処理することができる。Ｂ−５固定液によって可能とさ
れる数時間よりもずっと長い８週間までもの間、固定液
中に浸漬した＆Ｉｌ織の断片中に満足な顕微鏡的外観が
得られる。
本発明の固定液は、ヘマトキシリンおよびエオシン着色
、特殊の組織化学的着色もしくは免疫組織化学的着色を
行う前に＆Ｉｌ織固定液として使用される溶液を構成す
る。固定液は、メタノールのような１種類以上のアルカ
ノール、エチレングリコールもしくはグリセリンのよう
な１種類以上のジオールもしくはトリオール、ぎ酸およ
び／もしくは酢酸、他のカルボン酸、ピクリン酸、過塩
素酸などの１種類以上の酸および水といった溶剤（Ｓｏ
ｌｖｅｎｔ）から成る。溶質は、着色の品質を強めるた
めの媒染剤および／もしくは浸透力に起因する細胞容積
の変化を制御し赤血球細胞を保存するための浸透力の強
い薬品から成る。媒染剤および浸透力の強い薬品の例と
しては、それぞれ、塩化亜鉛と塩化ナトリウムがある。
、特殊の組織化学的着色もしくは免疫組織化学的着色を
行う前に＆Ｉｌ織固定液として使用される溶液を構成す
る。固定液は、メタノールのような１種類以上のアルカ
ノール、エチレングリコールもしくはグリセリンのよう
な１種類以上のジオールもしくはトリオール、ぎ酸およ
び／もしくは酢酸、他のカルボン酸、ピクリン酸、過塩
素酸などの１種類以上の酸および水といった溶剤（Ｓｏ
ｌｖｅｎｔ）から成る。溶質は、着色の品質を強めるた
めの媒染剤および／もしくは浸透力に起因する細胞容積
の変化を制御し赤血球細胞を保存するための浸透力の強
い薬品から成る。媒染剤および浸透力の強い薬品の例と
しては、それぞれ、塩化亜鉛と塩化ナトリウムがある。
塩化亜鉛は媒染剤および浸透力の強い薬品の両方に兼用
してもよい。
してもよい。
固定液配合物は、標準的な安価な研究室用化学薬品から
作り、相当の貯蔵可能期間を有している。
作り、相当の貯蔵可能期間を有している。
その取り扱いに際しても通常の研究室では起きないよう
な問題は生じない、固定液はいろいろの組織に対して使
用され、広範囲の＆ｌｌ！ＩＩに対して異なる着色剤を
適用すると、特定の着色を強化し、非特定着色が弱めら
れる。
な問題は生じない、固定液はいろいろの組織に対して使
用され、広範囲の＆ｌｌ！ＩＩに対して異なる着色剤を
適用すると、特定の着色を強化し、非特定着色が弱めら
れる。
本発明の組織固定液は、メタノールもしくはエタノール
のような１種類以上のアルカノールの溶剤成分を溶剤Ｂ
あたりほぼ２００〜８００ｍｊ！の総濃度で含んで構成
される。
のような１種類以上のアルカノールの溶剤成分を溶剤Ｂ
あたりほぼ２００〜８００ｍｊ！の総濃度で含んで構成
される。
他の溶剤成分としては、溶剤１ａあたりほぼ１５０〜７
００ｎｌの総濃度で含まれる１種類以上のジオールおよ
びトリオールがある。このようなジオールおよびトリオ
ールの例としては、エチレングリコール、グリセロール
、プロピレングリコールおよびトリメチレングリコール
がある。
００ｎｌの総濃度で含まれる１種類以上のジオールおよ
びトリオールがある。このようなジオールおよびトリオ
ールの例としては、エチレングリコール、グリセロール
、プロピレングリコールおよびトリメチレングリコール
がある。
さらに、ぎ酸および酢酸などの１種類以上の酸は、溶剤
Ｂあたりほぼ０．０１〜０．５モルの総濃度で使用され
る。溶剤の残りとしては水が添加される。
Ｂあたりほぼ０．０１〜０．５モルの総濃度で使用され
る。溶剤の残りとしては水が添加される。
溶質は、２つ以上の酸化状態を有する金製イオンの塩な
どの媒染剤を溶剤１１あたりＯ〜ほぼ０゜２モルの濃度
で含んで構成される。塩化亜鉛が好ましいが、ストロン
チウム、カルシウム、バリウゝムおよびクロムの塩など
他の塩を利用してもよい。
どの媒染剤を溶剤１１あたりＯ〜ほぼ０゜２モルの濃度
で含んで構成される。塩化亜鉛が好ましいが、ストロン
チウム、カルシウム、バリウゝムおよびクロムの塩など
他の塩を利用してもよい。
ピクリン酸および重クロム酸カリウムのようなアルカリ
金属の重クロム塩を利用してもよい。
金属の重クロム塩を利用してもよい。
＆ｌ１ｒａを固定させる場合、浸透力により組織の容積
変化の生ずることもある。そのような場合には、浸透性
の強い物質として塩化ナトリウムを配合に含ませる。さ
らに、必要に応じて多糖類、蔗糖、グルコースなどのよ
うな＊＊をこの目的のために利用してもよい。
変化の生ずることもある。そのような場合には、浸透性
の強い物質として塩化ナトリウムを配合に含ませる。さ
らに、必要に応じて多糖類、蔗糖、グルコースなどのよ
うな＊＊をこの目的のために利用してもよい。
顕微鏡用の組織を作成するに際しては、アルカノール、
ジオールおよびトリオール、酸および媒染剤成分が個々
に他の成分といっしょに他の配合中に利用されているが
、ここにのべる組み合わせの本出願の配合中には利用さ
れていない０個々の成分は、それらの個々の特性に対し
て受は入れられる。したがって、アルカノール、特にメ
タノールおよびエタノールは、組織固定液として広く認
められている。一般に、これらのアルカノールは水溶液
中に、例えばエタノールでは７０％および９５％という
ような高い濃度で存在する。ジオールおよびトリオール
は組織を脱水する能力があり、顕微鏡的詳細を得る一助
となる。酢酸は別の固定液として認められており、これ
もアルカノールによる組織の収縮を打ち消す。
ジオールおよびトリオール、酸および媒染剤成分が個々
に他の成分といっしょに他の配合中に利用されているが
、ここにのべる組み合わせの本出願の配合中には利用さ
れていない０個々の成分は、それらの個々の特性に対し
て受は入れられる。したがって、アルカノール、特にメ
タノールおよびエタノールは、組織固定液として広く認
められている。一般に、これらのアルカノールは水溶液
中に、例えばエタノールでは７０％および９５％という
ような高い濃度で存在する。ジオールおよびトリオール
は組織を脱水する能力があり、顕微鏡的詳細を得る一助
となる。酢酸は別の固定液として認められており、これ
もアルカノールによる組織の収縮を打ち消す。
ぎ酸は、もともと固定液の脱石灰に使用されてきた。そ
して、本発明においては、固定液中に酢酸のかわりに使
用して満足な結果の得られることがわかっている。水は
組織の存在を最適化するのに必要であり、且つ固定液に
対する塩化亜鉛あるいは他の塩の溶解度を増大させる。
して、本発明においては、固定液中に酢酸のかわりに使
用して満足な結果の得られることがわかっている。水は
組織の存在を最適化するのに必要であり、且つ固定液に
対する塩化亜鉛あるいは他の塩の溶解度を増大させる。
塩化亜鉛もしくは上記のような他の適当な塩類は媒染剤
として利用される。
として利用される。
本発明の組織固定液の典型的な配合の１例を下記に示す
。
。
Ｌ
エタノール 固定液１１あたり４００ｍｌエチ
レングリコール 固定液１ｌあたり３００＋ｎＪ酢酸
固定液１１あたり１０ｍｌ（１１あたり
０．１７モル） 塩化亜鉛 固定液１１あたり５．８ｇ水
残り０例えば固定液ＩＪあたりほぼ２９
０ｍｌ ８週間までもの浸漬は満足な顕微鏡的外観を与えたので
あるが、扁桃、を椎骨−、結腸などいろいろの人間の組
織はきまりきったように１〜８時間固定液中に浸漬した
０組織の色の変化および弾性の変化から迅速に浸透する
ことがわかった。扁桃に対しては２ｆｉ／時の速度であ
ると推定された。
レングリコール 固定液１ｌあたり３００＋ｎＪ酢酸
固定液１１あたり１０ｍｌ（１１あたり
０．１７モル） 塩化亜鉛 固定液１１あたり５．８ｇ水
残り０例えば固定液ＩＪあたりほぼ２９
０ｍｌ ８週間までもの浸漬は満足な顕微鏡的外観を与えたので
あるが、扁桃、を椎骨−、結腸などいろいろの人間の組
織はきまりきったように１〜８時間固定液中に浸漬した
０組織の色の変化および弾性の変化から迅速に浸透する
ことがわかった。扁桃に対しては２ｆｉ／時の速度であ
ると推定された。
固定後、骨髄をエチレンジアミン四酢酸溶液もしくはぎ
酸で脱石灰した。中性に緩衝されたホルマリン中で２時
間軟らかい組織を後固定しても組織断片の顕微鏡的外観
もしくは着色特性は変化しないことがわがうた。固定（
場合によっては後固定）に次いで、段階づけされたエタ
ノール溶液群、次いで、キシレンによって組織が脱水さ
れ、それからパラフィン中に埋め込んだ、パラフィンは
完全に組織中に浸透し、多量の血液、脂肪および子宮頚
部のようなきめの細かいなめらかな筋肉を含有するブロ
ックを含めて、切断特性の良い組織ブロックが得られた
。
酸で脱石灰した。中性に緩衝されたホルマリン中で２時
間軟らかい組織を後固定しても組織断片の顕微鏡的外観
もしくは着色特性は変化しないことがわがうた。固定（
場合によっては後固定）に次いで、段階づけされたエタ
ノール溶液群、次いで、キシレンによって組織が脱水さ
れ、それからパラフィン中に埋め込んだ、パラフィンは
完全に組織中に浸透し、多量の血液、脂肪および子宮頚
部のようなきめの細かいなめらかな筋肉を含有するブロ
ックを含めて、切断特性の良い組織ブロックが得られた
。
この固定液で処理された組織の断片は、次のような一般
的に使用される着色剤のどれを用いても満足な顕微鏡的
外観を示した。一般に、組織はＢ−５固定液のすぐれた
顕微鏡的詳細特性およびＺｅｎｋｅｒの媒染剤含有固定
液、塩化第２水銀、重クロム酸カリウム、酢酸および時
には硫酸ナトリウムの水溶液のような媒染剤含有固定液
の着色性を示した。Ｘ！ＪＦａ鏡的外観鏡開外観評価は
適切なものと考えられている。ホルマリン固定液に比し
て、この固定液は非特定着色が小さく、検出着色をぼん
やりさせるｆ噴量がある。
的に使用される着色剤のどれを用いても満足な顕微鏡的
外観を示した。一般に、組織はＢ−５固定液のすぐれた
顕微鏡的詳細特性およびＺｅｎｋｅｒの媒染剤含有固定
液、塩化第２水銀、重クロム酸カリウム、酢酸および時
には硫酸ナトリウムの水溶液のような媒染剤含有固定液
の着色性を示した。Ｘ！ＪＦａ鏡的外観鏡開外観評価は
適切なものと考えられている。ホルマリン固定液に比し
て、この固定液は非特定着色が小さく、検出着色をぼん
やりさせるｆ噴量がある。
一豊負−
Ｇｉｅｓ曽ａ・・・満足な外観。
ヘマトキシリンとエオシン・・・Ｂ−５で固定された組
織に匹敵する核の詳細。
織に匹敵する核の詳細。
メチルグリーンピロニン・・・ホルマリンで固定された
組織よりも非特定着色が小さい。
組織よりも非特定着色が小さい。
５ｃｈｉｆｆの酸・・・ホルマリンで固定された組織よ
りも非特定着色が小さい。
りも非特定着色が小さい。
レティクリン・・・収縮がほとんどないかまった（ない
ことが認められた。
ことが認められた。
υｌｅｘ ｅｕｒｏｐａｅｕｓ ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ
Ｉ （フコース（ｆｕｃｏｓｓ）に結合）・・・ホ
ルマリンで固定された組織に比して着色が強化。
Ｉ （フコース（ｆｕｃｏｓｓ）に結合）・・・ホ
ルマリンで固定された組織に比して着色が強化。
ｖｏｎ Ｌｅｄｅｒ・・・ホルマリンで固定された組織
よりも非特定着色が小さい。
よりも非特定着色が小さい。
Ｂ−５によって固定された組織に対しては満足に行えな
いナフトールＡｓ−Ｄクロロアセテートエステラーゼに
対するｖｏｎ Ｌｅｄｅｒによる着色は、ここにのべた
固定液によって固定された組織に対してすぐれた結果を
与える。固定液は、上記の如＜ 、５ｃｈｉｆｆの酸、
メチルグリーン ピロニンおよびレティクリンを含めて
他の組織化学的着色剤に対しても受は入れ得る外観を与
える。 Ｌｌｌｅｘ ｅｕｒｏｐａｅｕｓ ａｇｇｌｕ
ｔｌｎｉｎ Ｉを用いてのフコースに対する免疫パーオ
キシダーゼ着色は、この固定液によって固定された組織
においては、中性にＮＩ街されたホルマリンによって固
定された組織に比して強化される。
いナフトールＡｓ−Ｄクロロアセテートエステラーゼに
対するｖｏｎ Ｌｅｄｅｒによる着色は、ここにのべた
固定液によって固定された組織に対してすぐれた結果を
与える。固定液は、上記の如＜ 、５ｃｈｉｆｆの酸、
メチルグリーン ピロニンおよびレティクリンを含めて
他の組織化学的着色剤に対しても受は入れ得る外観を与
える。 Ｌｌｌｅｘ ｅｕｒｏｐａｅｕｓ ａｇｇｌｕ
ｔｌｎｉｎ Ｉを用いてのフコースに対する免疫パーオ
キシダーゼ着色は、この固定液によって固定された組織
においては、中性にＮＩ街されたホルマリンによって固
定された組織に比して強化される。
この固定液で２週間までもの間処理されたｍ織の断片も
、次の免疫化学的着色液を使用すると満足な顕微鏡的外
観を示した。この場合も、顕微鏡的外観に関する評価は
適切なものと考えられる。
、次の免疫化学的着色液を使用すると満足な顕微鏡的外
観を示した。この場合も、顕微鏡的外観に関する評価は
適切なものと考えられる。
コラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ） （第５種）・・・満
足な外観。
足な外観。
−Ｉｎの白血球抗原・・・ホルマリンで固定された組織
に比して着色が強化。
に比して着色が強化。
ｄｅｓｍｉｎ・・・エタノールで固定された組織に匹敵
する着色（ホルマリンで固定された組織には着色が行え
ない）。
する着色（ホルマリンで固定された組織には着色が行え
ない）。
人間の上皮ケラチン（ＡＥＩ／ＡＥ３）・・・満足な外
観。
観。
Ｓ−１００・・・ホルマリンで固定された＆１ｌｒａと
異なって、非特定着色は見られない。
異なって、非特定着色は見られない。
ｖｉｍｅｎｔｉｎ・・・ホルマリンで固定された＆ｌｌ
￥８よりも非特定着色が小さい。
￥８よりも非特定着色が小さい。
この固定液の使用法の１例としては、少なくとも１時間
その中に組織を浸漬してから密閉された機械もしくは密
閉されていない機械の中で通常の処理を行ってもよい、
１例として、＆ｌ１ｌＩｉを中性に緩衝されたホルマリ
ン中に浸漬し、濃度がしだいに増大する一連のエタノー
ル水溶液によって脱水した後、キシレンで脱水し、溶融
パラフィン中に浸漬し、パラフィン中に埋め込み、最後
に、切断してもよい、断片をガラススライド上にのせ、
上記のような通常の着色剤で着色して、Ｒ漱鏡でしらべ
た。しらぺた後は、スライドを通常の方法で保存しても
よい。
その中に組織を浸漬してから密閉された機械もしくは密
閉されていない機械の中で通常の処理を行ってもよい、
１例として、＆ｌ１ｌＩｉを中性に緩衝されたホルマリ
ン中に浸漬し、濃度がしだいに増大する一連のエタノー
ル水溶液によって脱水した後、キシレンで脱水し、溶融
パラフィン中に浸漬し、パラフィン中に埋め込み、最後
に、切断してもよい、断片をガラススライド上にのせ、
上記のような通常の着色剤で着色して、Ｒ漱鏡でしらべ
た。しらぺた後は、スライドを通常の方法で保存しても
よい。
尚、本発明は次の内容を含むものである。
ｉｌｌ 組織固定物としてのｉｍ類以上のアルカノー
ル、脱水剤および顕微鏡的詳細を助成するための薬剤と
しての有機ジオールおよびトリオールのうち少なくとも
１つ、蛋白質を沈澱させ、核の形態学的詳細の一助とな
り、そして、組織中への固定液の浸透速度を増大させる
ための少なくとも１種類の酸、および水から成る溶剤混
合物から成る水銀およびホルムアルデヒド不含組織固定
液。
ル、脱水剤および顕微鏡的詳細を助成するための薬剤と
しての有機ジオールおよびトリオールのうち少なくとも
１つ、蛋白質を沈澱させ、核の形態学的詳細の一助とな
り、そして、組織中への固定液の浸透速度を増大させる
ための少なくとも１種類の酸、および水から成る溶剤混
合物から成る水銀およびホルムアルデヒド不含組織固定
液。
（２）１種類以上の浸透力の強い物質を添加して浸透力
に起因する細胞の容積変化を制御する前記（１）に記載
の組織固定液 （３）１種類以上の媒染剤を添加して着色特性を強化す
る前記（１１に記載の組織固定液。
に起因する細胞の容積変化を制御する前記（１）に記載
の組織固定液 （３）１種類以上の媒染剤を添加して着色特性を強化す
る前記（１１に記載の組織固定液。
（４）１種類以上の媒染剤を添加して着色特性を強化す
る前記（２）に記載の組織固定液。
る前記（２）に記載の組織固定液。
（５） 前記アルカノールがメタノールおよびエタノ
ールのうちの少なくとも１つ、ジオールおよびトリオー
ルがエチレングリコール、グリセロール、プロピレング
リコールおよびトリメチレングリコールのうちの少なく
とも１つ、そして、前記酸がぎ酸、酢酸および過塩素酸
のうちの少なくとも１つである前記（１）に記載の＆ｌ
１ｍ固定液。
ールのうちの少なくとも１つ、ジオールおよびトリオー
ルがエチレングリコール、グリセロール、プロピレング
リコールおよびトリメチレングリコールのうちの少なく
とも１つ、そして、前記酸がぎ酸、酢酸および過塩素酸
のうちの少なくとも１つである前記（１）に記載の＆ｌ
１ｍ固定液。
（６） 前記浸透力の強い物質が、塩、単糖類、二Ｉ
ｌｉ類および水溶性重合体のうちの少なくとも１つであ
る前記（２）に記載の＆Ｉｌ織固定液。
ｌｉ類および水溶性重合体のうちの少なくとも１つであ
る前記（２）に記載の＆Ｉｌ織固定液。
（η 媒染剤が、少なくとも２つの酸化状態を有する金
属イオンの塩、ピクリン酸およびアルカリ金属の重クロ
ム酸塩のうちの少なくとも１つがら成る前記（３）に記
載の組織固定液。
属イオンの塩、ピクリン酸およびアルカリ金属の重クロ
ム酸塩のうちの少なくとも１つがら成る前記（３）に記
載の組織固定液。
（８） 媒染剤が、少なくとも２つの酸化状態を有す
る金属イオンの塩、ピクリン酸およびアルカリ金属の重
クロム酸塩のうちの少なくとも１つがら成る前記（４）
に記載の組織固定液。
る金属イオンの塩、ピクリン酸およびアルカリ金属の重
クロム酸塩のうちの少なくとも１つがら成る前記（４）
に記載の組織固定液。
（９） 塩が、塩化ナトリウムおよび塩化亜鉛のうち
の少なくとも１つであり、単＊ｉがグルコースであり、
二糖類が蔗糖であり、かつ、前記重合体がデキストラン
およびポリビニルピロリドンのうちの１つである前記（
６）に記載の＆Ｉ１ｍ固定液。
の少なくとも１つであり、単＊ｉがグルコースであり、
二糖類が蔗糖であり、かつ、前記重合体がデキストラン
およびポリビニルピロリドンのうちの１つである前記（
６）に記載の＆Ｉ１ｍ固定液。
（１１塩が、塩化亜鉛、塩化ストロンチウム、塩化カル
シウム、塩化バリウムおよび塩化第２クロムのうちの少
なくとも１つである前記（７）に記載の組織固定液。
シウム、塩化バリウムおよび塩化第２クロムのうちの少
なくとも１つである前記（７）に記載の組織固定液。
αυ 塩が、塩化亜鉛、塩化ストロンチウム、塩化カル
シウム、塩化バリウムおよび塩化第２クロムのうちの少
なくとも１つである前記（８）に記載の組織固定液。
シウム、塩化バリウムおよび塩化第２クロムのうちの少
なくとも１つである前記（８）に記載の組織固定液。
亜 アルカノールが固定液ｌｌあたりほぼ２００〜ほぼ
８００ｍｊ！の総合濃度を有し、ジオールおよびトリオ
ールが固定液１１あたりほぼ１５０〜ほぼ７００ｍｊ！
の総合濃度を有し、かつ、酸が固定液１１あたりほぼ０
．０１〜ほぼ０．５モルの総合濃度を有する前記（１１
に記載の組織固定液。
８００ｍｊ！の総合濃度を有し、ジオールおよびトリオ
ールが固定液１１あたりほぼ１５０〜ほぼ７００ｍｊ！
の総合濃度を有し、かつ、酸が固定液１１あたりほぼ０
．０１〜ほぼ０．５モルの総合濃度を有する前記（１１
に記載の組織固定液。
αｓ−ｇｔ、、通力の強い物質が固定液中の溶剤１Ｋｇ
あたりほぼ７００ミリモルまでの総合濃度を有する前記
（２）に記載の組織固定液。
あたりほぼ７００ミリモルまでの総合濃度を有する前記
（２）に記載の組織固定液。
α〜 媒染剤が、固定液ＩＪあたりほぼ０．２モルまで
の総合濃度を有する前記（３）に記載の組織固定液。
の総合濃度を有する前記（３）に記載の組織固定液。
（１５） 媒染剤が、固定液１１あたりほぼ０８２モ
ルまでの総合濃度を有する前記（４）に記載の組織固定
液。
ルまでの総合濃度を有する前記（４）に記載の組織固定
液。
０１ 前記アルカノールがエタノールで固定液１１あ
たりほぼ４００ｍｊ！の濃度を有し、前記ジオールおよ
びトリオールがエチレングリコールで固定液１１あたり
ほぼ３００ｍｌの濃度を有し、前記酸が酢酸で固定液１
Ｎあたりほぼ０．１７モルの濃度を有し、かつ、媒染剤
が塩化亜鉛で固定液１１あたりほぼ５．８ｇの濃度を有
する前記（３）に記載の組織固定液。
たりほぼ４００ｍｊ！の濃度を有し、前記ジオールおよ
びトリオールがエチレングリコールで固定液１１あたり
ほぼ３００ｍｌの濃度を有し、前記酸が酢酸で固定液１
Ｎあたりほぼ０．１７モルの濃度を有し、かつ、媒染剤
が塩化亜鉛で固定液１１あたりほぼ５．８ｇの濃度を有
する前記（３）に記載の組織固定液。
また、当該分野の技術者にとって明らかなようないろい
ろの変更や修正を本発明の範囲内で加えてもよい、その
ような変更や修正は、本発明の範囲内にある。
ろの変更や修正を本発明の範囲内で加えてもよい、その
ような変更や修正は、本発明の範囲内にある。
以上説明したように、本発明によれば、水銀およびホル
ムアルデヒドを含まず、非毒性で比較的安価な通常の成
分から成る組織固定液を得ることができる。
ムアルデヒドを含まず、非毒性で比較的安価な通常の成
分から成る組織固定液を得ることができる。
Claims (16)
- （１）組織固定物としての１種類以上のアルカノール、
脱水剤および顕微鏡的詳細を助成するための薬剤として
の有機ジオールおよびトリオールのうち少なくとも１つ
、蛋白質を沈澱させ、核の形態学的詳細の一助となり、
そして、組織中への固定液の浸透速度を増大させるため
の少なくとも１種類の酸、および水から成る溶剤混合物
から成る水銀およびホルムアルデヒド不含組織固定液。 - （２）１種類以上の浸透力の強い物質を添加して浸透力
に起因する細胞の容積変化を制御する請求項（１）に記
載の組織固定液 - （３）１種類以上の媒染剤を添加して着色特性を強化す
る請求項（１）に記載の組織固定液。 - （４）１種類以上の媒染剤を添加して着色特性を強化す
る請求項（２）に記載の組織固定液。 - （５）前記アルカノールがメタノールおよびエタノール
のうちの少なくとも１つ、ジオールおよびトリオールが
エチレングリコール、グリセロール、プロピレングリコ
ールおよびトリメチレングリコールのうちの少なくとも
１つ、そして、前記酸がぎ酸、酢酸および過塩素酸のう
ちの少なくとも１つである請求項（１）に記載の組織固
定液。 - （６）前記浸透力の強い物質が、塩、単糖類、二糖類お
よび水溶性重合体のうちの少なくとも１つである請求項
（２）に記載の組織固定液。 - （７）媒染剤が、少なくとも２つの酸化状態を有する金
属イオンの塩、ピクリン酸およびアルカリ金属の重クロ
ム酸塩のうちの少なくとも１つから成る請求項（３）に
記載の組織固定液。 - （８）媒染剤が、少なくとも２つの酸化状態を有する金
属イオンの塩、ピクリン酸およびアルカリ金属の重クロ
ム酸塩のうちの少なくとも１つから成る請求項（４）に
記載の組織固定液。 - （９）塩が、塩化ナトリウムおよび塩化亜鉛のうちの少
なくとも１つであり、単糖類がグルコースであり、二糖
類が蔗糖であり、かつ、前記重合体がデキストランおよ
びポリビニルピロリドンのうちの１つである請求項（６
）に記載の組織固定液。 - （１０）塩が、塩化亜鉛、塩化ストロンチウム、塩化カ
ルシウム、塩化バリウムおよび塩化第２クロムのうちの
少なくとも１つである請求項（７）に記載の組織固定液
。 - （１１）塩が、塩化亜鉛、塩化ストロンチウム、塩化カ
ルシウム、塩化バリウムおよび塩化第２クロムのうちの
少なくとも１つである請求項（８）に記載の組織固定液
。 - （１２）アルカノールが固定液１ｌあたりほぼ２００〜
ほぼ８００ｍｌの総合濃度を有し、ジオールおよびトリ
オールが固定液１ｌあたりほぼ１５０〜ほぼ７００ｍｌ
の総合濃度を有し、かつ、酸が固定液１ｌあたりほぼ０
．０１〜ほぼ０．５モルの総合濃度を有する請求項（１
）に記載の組織固定液。 - （１３）浸透力の強い物質が固定液中の溶剤１Ｋｇあた
りほぼ７００ミリモルまでの総合濃度を有する請求項（
２）に記載の組織固定液。 - （１４）媒染剤が、固定液１ｌあたりほぼ０．２モルま
での総合濃度を有する請求項（３）に記載の組織固定液
。 - （１５）媒染剤が、固定液１ｌあたりほぼ０．２モルま
での総合濃度を有する請求項（４）に記載の組織固定液
。 - （１６）前記アルカノールがエタノールで固定液１ｌあ
たりほぼ４００ｍｌの濃度を有し、前記ジオールおよび
トリオールがエチレングリコールで固定液１ｌあたりほ
ぼ３００ｍｌの濃度を有し、前記酸が酢酸で固定液１ｌ
あたりほぼ０．１７モルの濃度を有し、かつ、媒染剤が
塩化亜鉛で固定液１ｌあたりほぼ５．８ｇの濃度を有す
る請求項（３）に記載の組織固定液。
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