CN109406246A - 一种精子形态学快速染色试剂及其染色方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种精子形态学快速染色试剂及其染色方法，包括包括溶液A、溶液B和溶液C；所述溶液A为含有固绿的组织固定液；所述溶液B为含有伊红的防腐液；所述溶液C为含碱性天蓝A、亚甲基蓝的磷酸盐缓冲液。染色方法为：采集新鲜精液在20‑37C°的水浴锅中液化，用上游法优选精子8‑12min，得到新鲜且活力高的精子；制备精子悬液，涂片，并在无菌环境下晾干；将涂片浸入溶液A中，室温反应15秒除去多余的固定液；将涂片浸入溶液B中，室温反应10秒，除去多余的染剂；将涂片浸入溶液C中，室温反应10秒，除去多余的试剂；然后除去多余的染剂；除去水分，待完全干燥，染色完成。本发明很好的解决现有技术中精子染色操作较为复杂且成本较高的缺点。
Description
技术领域
本发明涉及人类精子检测领域，尤其涉及一种精子形态学快速染色试剂及其染色方法。
背景技术
随着不育不孕发病率逐渐上升，对男性不育进行有效的诊断和治疗也显得尤为迫切，调查研究表明育龄夫妇中有10-15％不能生育，其中男性原因占到50％左右。精子是男性生殖的最终执行者，是男性生殖细胞系发育的终端产物，也是父辈遗传信息向后代稳定传递的载体，因此正常的精子是男性生育的基本保证。
精子形态学检测是诊断男性不育中的一项重要指标，并且在辅助生殖方法的选择中起到了重要的作用。
目前，精子染色技术种类繁多，其中有一些，诸如改良巴氏染色方法、Papanicolaou染色方法和Diff-Quik法染色效果极好，然而，多数用于精子染色的技术非常耗时；Diff-Quik法，它原是一种用于白细胞分类检测的常规快速染色法，操作简便快速，但其原料难以购买。为此提出一种精子形态学快速染色试剂及其染色方法。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中精子染色操作较为复杂且成本较高的缺点，而提出的一种精子形态学快速染色试剂。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
设计一种精子形态学快速染色试剂，包括溶液A、溶液B和溶液C；
所述溶液A为含有固绿的组织固定液，且所述溶液A用于染色精子顶体区；
所述溶液B为含有伊红的防腐液，且所述溶液B用于染色精子体部及尾区；
所述溶液C为含碱性天蓝A、亚甲基蓝的磷酸盐缓冲液，且所述溶液C用于染色精子顶体后区。
优选的，所述溶液A中的组织固定液选用甲醇、乙醇和醋酸中的任意一种；所述溶液B中防腐液为叠氮化钠溶液。
优选的，所述溶液A中固绿的浓度为0.001g/L-0.005g/L；所述溶液B中伊红的浓度为1g/L-2g/L；所述溶液C中碱性天蓝A的浓度为0.1g/L-1g/L，亚甲基蓝的浓度为0.1g/L-1g/L。
优选的，所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.0-8.0。
本发明还提供一种精子形态学快速染色试剂的染色方法，包括如下步骤：
步骤一：采集新鲜精液在20-37℃的水浴锅中液化，然后从含有37℃预热的上游液的样本管底部加入，用上游法优选精子8-12min，得到新鲜且活力高的精子；选取新鲜且高活力的精液进行检测，能够减少误差，便于精准检测；
步骤二：制备精子悬液，选取无菌干燥载玻片进行涂片，并在无菌环境下晾干；
步骤三：将步骤二中得到的涂片浸入溶液A中，室温反应15秒后，将载玻片直立于滤纸上以除去多余的固定液；
步骤四：将步骤三中得到的涂片浸入溶液B中，室温反应10秒，将玻片直立于滤纸上以除去多余的染剂；精子及细胞内不同等电点的蛋白质在相同的酸度下带不同的电荷，能选择性的结合相应的染色而着色。溶液B属酸性染料，嗜酸性蛋白质解离的氨基带正电荷，能与带负电荷的酸性染料结合，能染成红色；
步骤五：将步骤四中得到的涂片浸入溶液C中，室温反应10秒，将玻片直立于滤纸上以除去多余的试剂；
精子及细胞内不同等电点的蛋白质在相同的酸度下带不同的电荷，能选择性的结合相应的染色而着色，溶液C属碱性染料，嗜碱性蛋白质解离的羧基带负电荷，能与带正电荷的碱性染料结合，能染成蓝色，嗜中性蛋白质，同时结合相等的酸性和碱性染料而成紫红色；
步骤六：然后用无菌水洗涤10-15次除去多余的染剂；将玻片直立于滤纸以除去水分，待完全干燥，染色完成。
优选的，所述步骤一中精子活力为92％-98％。
优选的，所述步骤二中的精子悬液的制备方法为：将所述步骤一中得到的新鲜且活力高的精子稀释150-300倍，即得。
优选的，所述步骤二中精子悬液涂片的方法采用拉薄技术。
本发明提出的一种精子形态学快速染色试剂及其染色方法，有益效果在于：
1.通过对新鲜精液进行上游法进行精选精子，得到新鲜且活性较高的精液进行涂片染色，制备的涂片检测结果更为准确。
2.本发明提供的精子形态学快速染色试剂配方简单，原料来源丰富且成本较低，适合工业化生产。
3.本发明提供的染色方法操作快捷，染色效果显著，适用于样本即时检测；易于临床的广泛采用。
4.本发明提供的精子形态学快速染色试剂中添加的防腐液，试剂稳定性更好，贮存期长，能够批次生产。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
制备试剂：
磷酸盐缓冲液的制备：配制1000毫升0.2M磷酸二氢钾、1000毫升0.2M磷酸氢二钠，在PH计的监测下将上述二种溶液混合，调整PH7.4的磷酸盐缓冲液1:10稀释后加入0.1％叠氮钠。
溶液A的制备：准确称取固绿0.001g-0.002g，加甲醇至1000ml，充分溶解，过滤后置室温保存。
溶液B的制备：准确称取伊红0.8g-1.22g，加10ml叠氮化钠，加磷酸盐缓冲液至1000ml，充分溶解，过滤后置室温保存。
溶液C的制备：称取碱性美蓝1.625g-2g，亚甲基蓝1.625g-2g，加PB缓冲液至1000ml，充分溶解，过滤后置室温保存。
实施例1
一种精子形态学快速染色试剂，包括溶液A、溶液B和溶液C；
溶液A为含有固绿的组织固定液，且溶液A用于染色精子顶体区，溶液A中的组织固定液选用甲醇；
溶液B为含有伊红的防腐液，且溶液B用于染色精子体部及尾区，溶液B中防腐液为叠氮化钠溶液；
溶液C为含碱性天蓝A、亚甲基蓝的磷酸盐缓冲液，且溶液C用于染色精子顶体后区。
其中，溶液A中固绿的浓度为0.001g/L；溶液B中伊红的浓度为1g/L；溶液C中碱性天蓝A的浓度为0.1g/L，亚甲基蓝的浓度为0.1g/L。
其中，磷酸盐缓冲液的pH值为7.0。
一种精子形态学快速染色试剂的染色方法，包括如下步骤：
步骤一：采集新鲜精液在20℃的水浴锅中液化，然后从含有37℃预热的上游液的样本管底部加入，用上游法优选精子8min，得到新鲜且活力为92％的精子；
步骤二：将步骤一中得到的新鲜且活力高的精子稀释150倍，得到精子悬液，选取无菌干燥载玻片采用拉薄技术进行涂片，即用在一张玻片上滴加5uL精液，用另一张载玻片的边缘拖拉载玻片上的一滴精液，制成涂片，并在无菌环境下晾干；
步骤三：将步骤二中得到的涂片浸入溶液A中，室温反应15秒后，将载玻片直立于滤纸上以除去多余的固定液；
步骤四：将步骤三中得到的涂片浸入溶液B中，室温反应10秒，将玻片直立于滤纸上以除去多余的染剂；
步骤五：将步骤四中得到的涂片浸入溶液C中，室温反应10秒，将玻片直立于滤纸上以除去多余的试剂；
步骤六：然后用无菌水洗涤10次除去多余的染剂；将玻片直立于滤纸以除去水分，待完全干燥，染色完成。
实施例2
一种精子形态学快速染色试剂，包括溶液A、溶液B和溶液C；
溶液A为含有固绿的组织固定液，且溶液A用于染色精子顶体区，溶液A中的组织固定液选用甲醇；
溶液B为含有伊红的防腐液，且溶液B用于染色精子体部及尾区，溶液B中防腐液为叠氮化钠溶液；
溶液C为含碱性天蓝A、亚甲基蓝的磷酸盐缓冲液，且溶液C用于染色精子顶体后区。
其中，溶液A中固绿的浓度为0.005g/L；溶液B中伊红的浓度为2g/L；溶液C中碱性天蓝A的浓度为1g/L，亚甲基蓝的浓度为1g/L。
其中，磷酸盐缓冲液的pH值为8.0。
一种精子形态学快速染色试剂的染色方法，包括如下步骤：
步骤一：采集新鲜精液在37℃的水浴锅中液化，然后从含有37℃预热的上游液的样本管底部加入，用上游法优选精子12min，得到新鲜且活力为98％的精子；
步骤二：将步骤一中得到的新鲜且活力高的精子稀释300倍，得到精子悬液，选取无菌干燥载玻片采用拉薄技术进行涂片，即用在一张玻片上滴加20uL精液，用另一张载玻片的边缘拖拉载玻片上的一滴精液，制成涂片，并在无菌环境下晾干；
步骤三：将步骤二中得到的涂片浸入溶液A中，室温反应15秒后，将载玻片直立于滤纸上以除去多余的固定液；
步骤四：将步骤三中得到的涂片浸入溶液B中，室温反应10秒，将玻片直立于滤纸上以除去多余的染剂；
步骤五：将步骤四中得到的涂片浸入溶液C中，室温反应10秒，将玻片直立于滤纸上以除去多余的试剂；
步骤六：然后用无菌水洗涤15次除去多余的染剂；将玻片直立于滤纸以除去水分，待完全干燥，染色完成。
实施例3
一种精子形态学快速染色试剂，包括溶液A、溶液B和溶液C；
溶液A为含有固绿的组织固定液，且溶液A用于染色精子顶体区，溶液A中的组织固定液选用甲醇；
溶液B为含有伊红的防腐液，且溶液B用于染色精子体部及尾区，溶液B中防腐液为叠氮化钠溶液；
溶液C为含碱性天蓝A、亚甲基蓝的磷酸盐缓冲液，且溶液C用于染色精子顶体后区。
其中，溶液A中固绿的浓度为0.003g/L；溶液B中伊红的浓度为1.5g/L；溶液C中碱性天蓝A的浓度为0.5g/L，亚甲基蓝的浓度为0.6g/L。
其中，磷酸盐缓冲液的pH值为7.5。
一种精子形态学快速染色试剂的染色方法，包括如下步骤：
步骤一：采集新鲜精液在25℃的水浴锅中液化，然后从含有37℃预热的上游液的样本管底部加入，用上游法优选精子10min，得到新鲜且活力为95％的精子；
步骤二：将步骤一中得到的新鲜且活力高的精子稀释200倍，得到精子悬液，选取无菌干燥载玻片采用拉薄技术进行涂片，即用在一张玻片上滴加15uL精液，用另一张载玻片的边缘拖拉载玻片上的一滴精液，制成涂片，并在无菌环境下晾干；
步骤三：将步骤二中得到的涂片浸入溶液A中，室温反应15秒后，将载玻片直立于滤纸上以除去多余的固定液；
步骤四：将步骤三中得到的涂片浸入溶液B中，室温反应10秒，将玻片直立于滤纸上以除去多余的染剂；
步骤五：将步骤四中得到的涂片浸入溶液C中，室温反应10秒，将玻片直立于滤纸上以除去多余的试剂；
步骤六：然后用无菌水洗涤13次除去多余的染剂；将玻片直立于滤纸以除去水分，待完全干燥，染色完成。
以上，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种精子形态学快速染色试剂，其特征在于：包括溶液A、溶液B和溶液C；
所述溶液A为含有固绿的组织固定液，且所述溶液A用于染色精子顶体区；
所述溶液B为含有伊红的防腐液，且所述溶液B用于染色精子体部及尾区；
所述溶液C为含碱性天蓝A、亚甲基蓝的磷酸盐缓冲液，且所述溶液C用于染色精子顶体后区。
2.根据权利要求1所述的一种精子形态学快速染色试剂，其特征在于：所述溶液A中的组织固定液选用甲醇、乙醇和醋酸中的任意一种；所述溶液B中防腐液为叠氮化钠溶液。
3.根据权利要求2所述的一种精子形态学快速染色试剂，其特征在于：所述溶液A中固绿的浓度为0.001g/L-0.005g/L；所述溶液B中伊红的浓度为1g/L-2g/L；所述溶液C中碱性天蓝A的浓度为0.1g/L-1g/L，亚甲基蓝的浓度为0.1g/L-1g/L。
4.根据权利要求3所述的一种精子形态学快速染色试剂，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.0-8.0。
5.一种权利要求1所述精子形态学快速染色试剂的染色方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤一：采集新鲜精液在20-37C°的水浴锅中液化，然后从含有37℃预热的上游液的样本管底部加入，用上游法优选精子8-12min，得到新鲜且活力高的精子；
步骤二：制备精子悬液，选取无菌干燥载玻片进行涂片，并在无菌环境下晾干；
步骤三：将步骤二中得到的涂片浸入溶液A中，室温反应15秒后，将载玻片直立于滤纸上以除去多余的固定液；
步骤四：将步骤三中得到的涂片浸入溶液B中，室温反应10秒，将玻片直立于滤纸上以除去多余的染剂；
步骤五：将步骤四中得到的涂片浸入溶液C中，室温反应10秒，将玻片直立于滤纸上以除去多余的试剂；
步骤六：然后用无菌水洗涤10-15次除去多余的染剂；将玻片直立于滤纸以除去水分，待完全干燥，染色完成。
6.根据权利要求5所述精子形态学快速染色试剂的染色方法，其特征在于：所述步骤一中精子活力为92％-98％。
7.根据权利要求5所述精子形态学快速染色试剂的染色方法，其特征在于：所述步骤二中的精子悬液的制备方法为：将所述步骤一中得到的新鲜且活力高的精子稀释150-300倍，即得。
8.根据权利要求5所述精子形态学快速染色试剂的染色方法，其特征在于：所述步骤二中精子悬液涂片的方法采用拉薄技术。
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111624065A (zh) * | 2020-05-22 | 2020-09-04 | 嘉兴优瑞生物科技有限公司 | 一种动物专用Diff-Quik染液及制备方法 |
| CN112098181A (zh) * | 2020-09-09 | 2020-12-18 | 上海皓信生物科技有限公司 | 一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液及其应用 |
| CN114112570A (zh) * | 2021-11-12 | 2022-03-01 | 吉林市国科医工科技发展有限公司 | 一种基于Diff-Quick染色方法的全自动精子制片机构 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1385700A (zh) * | 2001-05-10 | 2002-12-18 | 华中科技大学同济医学院 | 精子荧光染色计算机检测系统 |
| CN1584545A (zh) * | 2004-06-16 | 2005-02-23 | 深圳华康生物医学工程有限公司 | 精子形态学快速染色试剂及快速染色精子的方法 |
| CN1764469A (zh) * | 2003-03-31 | 2006-04-26 | 西泰克公司 | 巴氏染色方法 |
| CN101319251A (zh) * | 2008-05-28 | 2008-12-10 | 山东省计划生育科学技术研究所 | 一种精子染色质扩散实验检测精子dna碎片的方法 |
| CN103415762A (zh) * | 2011-01-10 | 2013-11-27 | 文塔纳医疗系统公司 | 苏木精染色方法 |
| CN103674662A (zh) * | 2013-11-22 | 2014-03-26 | 大连海洋大学 | 鱼类初期胚胎发育的dapi染色方法 |
| CN104073555A (zh) * | 2014-05-14 | 2014-10-01 | 深圳市博锐德生物科技有限公司 | 精子dna碎片检测试剂盒 |
| CN105699155A (zh) * | 2016-01-29 | 2016-06-22 | 山东省千佛山医院 | 肠黏膜脑源性神经营养因子bdnf标本的染色化学检测方法 |
-
2018
- 2018-10-25 CN CN201811253218.2A patent/CN109406246A/zh active Pending
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1385700A (zh) * | 2001-05-10 | 2002-12-18 | 华中科技大学同济医学院 | 精子荧光染色计算机检测系统 |
| CN1764469A (zh) * | 2003-03-31 | 2006-04-26 | 西泰克公司 | 巴氏染色方法 |
| CN1584545A (zh) * | 2004-06-16 | 2005-02-23 | 深圳华康生物医学工程有限公司 | 精子形态学快速染色试剂及快速染色精子的方法 |
| CN101319251A (zh) * | 2008-05-28 | 2008-12-10 | 山东省计划生育科学技术研究所 | 一种精子染色质扩散实验检测精子dna碎片的方法 |
| CN103415762A (zh) * | 2011-01-10 | 2013-11-27 | 文塔纳医疗系统公司 | 苏木精染色方法 |
| CN103674662A (zh) * | 2013-11-22 | 2014-03-26 | 大连海洋大学 | 鱼类初期胚胎发育的dapi染色方法 |
| CN104073555A (zh) * | 2014-05-14 | 2014-10-01 | 深圳市博锐德生物科技有限公司 | 精子dna碎片检测试剂盒 |
| CN105699155A (zh) * | 2016-01-29 | 2016-06-22 | 山东省千佛山医院 | 肠黏膜脑源性神经营养因子bdnf标本的染色化学检测方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 猪精液液态保存长效稀释液的研制及其冷冻保存的研究: "猪精液液态保存长效稀释液的研制及其冷冻保存的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》 * |
| 白占涛 等: "《细胞生物学实验》", 30 June 2014, 华中科技大学出版社 * |
| 郭孝达 编著: "《早期胃癌的内窥镜诊断》", 31 January 1986 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111624065A (zh) * | 2020-05-22 | 2020-09-04 | 嘉兴优瑞生物科技有限公司 | 一种动物专用Diff-Quik染液及制备方法 |
| CN111624065B (zh) * | 2020-05-22 | 2023-10-27 | 嘉兴优瑞生物科技有限公司 | 一种动物专用Diff-Quik染液及制备方法 |
| CN112098181A (zh) * | 2020-09-09 | 2020-12-18 | 上海皓信生物科技有限公司 | 一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液及其应用 |
| CN114112570A (zh) * | 2021-11-12 | 2022-03-01 | 吉林市国科医工科技发展有限公司 | 一种基于Diff-Quick染色方法的全自动精子制片机构 |
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