CN101587039A - 一种血细胞染液 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及染料领域，公开了一种血细胞染液，包括A液和B液，A液的组成为伊红1－3g/L，磷酸二氢钾10－15g/L，磷酸氢二钠8－12g/L，石碳酸10－20ml/L；B液的组成为亚甲蓝1－3g/L，磷酸二氢钾12－13g/L，磷酸氢二钠9－13g/L，天青1－4g/L，高锰酸钾2－4g/L。本发明所述血细胞染液染色效果与瑞氏染液相当，即配即用，同时缩短了染色时间，且可重复使用，节省资源，具有广泛的临床应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及染料领域，具体涉及一种血细胞染液。
背景技术
在疾病的诊断过程中，经常需要观察细胞内部结构，识别各种细胞及其异常变化，常需要对血涂片进行染色，细胞的染色过程既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用，各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。目前常用瑞氏染料进行瑞氏染色。
用瑞氏染料液染色后，在同一血涂片上，可以看到各种不同的颜色，例如血红蛋白，嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结果，染粉红色；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色。
瑞氏染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成的复合染料。亚甲蓝为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构，通常为氯盐，即氯化美蓝。伊红通常为钠盐，伊红和美蓝混合后，产生一种难溶性胶体伊红美蓝中性沉淀。
瑞氏染料对氢离子浓度是十分敏感的，据观察pH值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解，由于细胞中各种蛋白质均为两性电解质，所带电荷随溶液pH而定。对一蛋白质而言，如环境pH＜pI(蛋白质的等电点)，则该蛋白质带正电荷，即在酸性环境中正电荷增多.易与酸性伊红结合，染色偏红；相反，则易与美蓝结合，染色偏蓝。故缓冲液须保持一定的pH使染色稳定，要求pH一般在6.4-6.8，偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使pH恒定。
瑞氏染料配制的过程是先称干燥的瑞氏染料经多次研磨至细粉末，加甲醇研磨呈一面镜光亮，静置后，将上层液体倒入清洁储存瓶内，摇匀，密封瓶口，存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般需储存3个月以上。
瑞氏染料是临床细胞学分析中最基本和常用的染料，在临床实验室细胞学尤其是骨髓细胞学的研究中起到举足轻重的作用，因其着色效果佳，操作方便等特点，在临床实验室广泛应用，且用量很大。
瑞氏染料的配制需经过多次研磨、稀释和冲洗等多种工序，而且要用到大量甲醇，甲醇有毒，服入10毫升能使双目失明，30毫升则能致死。当废旧染液排出后，必将严重污染环境，造成社会危害。
发明内容
本发明针对现有的瑞氏染料需提前配制且用量大、消耗快的缺陷，提供一种即配即用、且可重复使用的血细胞染液。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
一种血细胞染液，包括：
A液：伊红1-3g/L，磷酸二氢钾10-15g/L，磷酸氢二钠8-12g/L，石碳酸10-20ml/L；
B液：亚甲蓝1-3g/L，磷酸二氢钾12-13g/L，磷酸氢二钠9-13g/L，天青1-4g/L，高锰酸钾2-4g/L。
作为优选，本发明所述血细胞染液的A液组成为：伊红2g/L，磷酸二氢钾12-13g/L，磷酸氢二钠10g/L，石碳酸20ml/L；
B液：亚甲蓝1.6g/L，磷酸二氢钾12-13g/L，磷酸氢二钠10g/L，天青2g/L，高锰酸钾2.4g/L。
更优选的，本发明所述血细胞染液的组成为：
A液：伊红2g/L，磷酸二氢钾13g/L，磷酸氢二钠10g/L，石碳酸20ml/L；
B液：亚甲蓝1.6g/L，磷酸二氢钾13g/L，磷酸氢二钠10g/L，天青1g/L，高锰酸钾2.4g/L。
本发明所述血细胞染液的使用方法如下：
(1)取干燥血涂片浸入A液中静置10-20秒钟，水洗、吸干；
(2)将步骤(1)的血涂片浸入所述B液中，静置2-3分钟，水洗、吸干备镜检。
本发明所述血细胞染液染色原理与瑞氏染液相同，但加强了天青的作用。其对单核细胞、红细胞和血小板、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞的染色结果分别如图1、图3、图5、图7所示，其对各种类型的血细胞的染色特点如下：
红细胞染色后呈淡灰蓝色，中央有相当于细胞直径1/3-2/5的淡染区；
血小板为圆形或不规则形，呈淡紫红色，内含细小的嗜天青颗粒；
白细胞核着深紫色，程度适中，细胞核结构和色泽清晰艳丽，对核结构的识别较佳，对胞浆着色偏酸，色泽偏红，对细胞浆内颗粒特别是嗜天青颗粒及嗜中性颗粒着色较差。
以上特点与瑞氏染液对血细胞染色特点一致，且效果相当。
本发明所述染料与现有的瑞氏染料相比，具有以下优点：
1、配制步骤简单，即配即用；
2、本发明所述染料的A液和B液均可重复使用，节省资源；
3、无需用到有害物质甲醇，减少污染；
4、染色效果与瑞氏染液相当，染色时间大大缩短，仅需2-3分钟，可很好地满足临床对于血液检验报告及时性的需要。
附图说明
图1箭头示用本发明所述血细胞染液染色的单核细胞；
图2箭头示瑞氏染料染色的单核细胞；
图3箭头示用本发明所述血细胞染液染色的红细胞和血小板；
图4箭头示瑞氏染料染色的红细胞和血小板；
图5箭头示用本发明所述血细胞染液染色的淋巴细胞；
图6箭头示用瑞氏染料染色的淋巴细胞；
图7箭头示用本发明所述血细胞染液染色的嗜酸性粒细胞；
图8箭头示用瑞氏染料染色的嗜酸性粒细胞。
具体实施方式
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1：本发明所述血细胞染液的配制
准确称取伊红0.5g，磷酸二氢钾5g，磷酸氢二钠4g，石碳酸5ml，加水至500ml，即配置为A液。
准确称取亚甲蓝0.5g，磷酸二氢钾6g，磷酸氢二钠4.5g，天青0.5g，高锰酸钾1.0g，加水至500ml，即配制为B液。
实施例2：本发明所述血细胞染液的配制
准确称取伊红1.5g，磷酸二氢钾7.5g，磷酸氢二钠6g，石碳酸10ml，加水至500ml，即配置为A液。
准确称取亚甲蓝1.5g，磷酸二氢钾6.5g，磷酸氢二钠6.5g，天青2g，高锰酸钾2.0g，加水至500ml，即配制为B液。
实施例3：本发明所述染液的染色方法
(1)取自然干燥的待检血涂片，浸入实施例1或实施例2制备的A液中静置10秒钟，水洗、吸干；此步骤中用过的A液可重复使用。
(2)把步骤(1)的血涂片浸入实施例1或实施例2制备的B液中，静置2分钟，水洗、吸干，此步骤中用过的B液可重复使用。
(3)血涂片镜检。
实施例4：本发明所述血细胞染液的配制
准确称取伊红1g，磷酸二氢钾6.5g，磷酸氢二钠5g，石碳酸10ml，加水至500ml，即配置为A液。
准确称取亚甲蓝0.8g，磷酸二氢钾6.5g，磷酸氢二钠5g，天青0.5g，高锰酸钾1.2g，加水至500ml，即配制为B液。
实施例5：本发明所述染液与瑞氏染液的染色效果比较
取同一批制作的血涂片，分别用实施例1、实施例2或实施例4制备的血细胞染液和市售瑞氏染料进行染色。
瑞氏染色法步骤如下：
(1)取自然干燥的血涂片，滴加瑞氏染液染1分钟，固定标本；
(2)加等量PH6.4的磷酸盐缓冲液轻轻晃动玻片，混匀静置15分钟；
(3)水洗、吸干、镜检。
本发明所述染液的染色方法参照实施例3。
本发明所述血细胞染液的对单核细胞、红细胞和血小板、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞的染色结果分别如图1、图3、图5、图7所示，瑞氏染料对单核细胞、红细胞和血小板、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞的染色结果分别如图2、图4、图6、图8所示。
可见本发明所述血细胞染液与瑞氏染液对各种类型的血细胞染色效果大致相当：
红细胞染色后呈淡灰蓝色，中央有相当于细胞直径1/3-2/5的淡染区；
血小板为圆形或不规则形，呈淡紫红色，内含细小的嗜天青颗粒；
白细胞核着深紫色，程度适中，细胞核结构和色泽清晰艳丽，对核结构的识别较佳，对胞浆着色偏酸，色泽偏红，对细胞浆内颗粒特别是嗜天青颗粒及嗜中性颗粒着色较差。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (4)
1、一种血细胞染液，包括：
A液：伊红1-3g/L，磷酸二氢钾10-15g/L，磷酸氢二钠8-12g/L，石碳酸10-20ml/L；
B液：亚甲蓝1-3g/L，磷酸二氢钾12-13g/L，磷酸氢二钠9-13g/L，天青1-4g/L，高锰酸钾2-4g/L。
2、根据权利要求1所述的血细胞染液，其特征在于，
A液：伊红2g/L，磷酸二氢钾12-13g/L，磷酸氢二钠10g/L，石碳酸20ml/L；
B液：亚甲蓝1.6g/L，磷酸二氢钾12-13g/L，磷酸氢二钠10g/L，天青2g/L，高锰酸钾2.4g/L。
3、根据权利要求1所述的血细胞染液，其特征在于，
A液：伊红2g/L，磷酸二氢钾13g/L，磷酸氢二钠10g/L，石碳酸20ml/L；
B液：亚甲蓝1.6g/L，磷酸二氢钾13g/L，磷酸氢二钠10g/L，天青1g/L，高锰酸钾2.4g/L。
4、一种血细胞染色方法，包含以下步骤：
(1)取干燥血涂片浸入权利要求1所述A液中静置10-30秒钟，水洗、吸干；
(2)将血涂片浸入权利要求1所述B液中，静置2-3分钟，水洗、吸干备镜检。
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| CN111624065A (zh) * | 2020-05-22 | 2020-09-04 | 嘉兴优瑞生物科技有限公司 | 一种动物专用Diff-Quik染液及制备方法 |
| CN112098181A (zh) * | 2020-09-09 | 2020-12-18 | 上海皓信生物科技有限公司 | 一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液及其应用 |
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