CN112781963B - 巴氏染色液及其制备方法与染色方法 - Google Patents
巴氏染色液及其制备方法与染色方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112781963B CN112781963B CN202011606343.4A CN202011606343A CN112781963B CN 112781963 B CN112781963 B CN 112781963B CN 202011606343 A CN202011606343 A CN 202011606343A CN 112781963 B CN112781963 B CN 112781963B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- staining
- staining solution
- solution
- percent
- papanicolaou
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 title claims abstract description 109
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 238000007447 staining method Methods 0.000 title abstract description 8
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims abstract description 56
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 claims abstract description 30
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 22
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 67
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 28
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 22
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 21
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 claims description 18
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000012303 cytoplasmic staining Methods 0.000 claims description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000012758 nuclear staining Methods 0.000 claims description 12
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H aluminium sulfate (anhydrous) Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims description 11
- NALMPLUMOWIVJC-UHFFFAOYSA-N n,n,4-trimethylbenzeneamine oxide Chemical compound CC1=CC=C([N+](C)(C)[O-])C=C1 NALMPLUMOWIVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229940032753 sodium iodate Drugs 0.000 claims description 10
- 235000015281 sodium iodate Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000011697 sodium iodate Substances 0.000 claims description 10
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 claims description 8
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 claims description 7
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- XGZVUEUWXADBQD-UHFFFAOYSA-L lithium carbonate Chemical compound [Li+].[Li+].[O-]C([O-])=O XGZVUEUWXADBQD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 229910052808 lithium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- IYDGMDWEHDFVQI-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;trioxotungsten Chemical compound O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.OP(O)(O)=O IYDGMDWEHDFVQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- MPVDXIMFBOLMNW-ISLYRVAYSA-N 7-hydroxy-8-[(E)-phenyldiazenyl]naphthalene-1,3-disulfonic acid Chemical compound OC1=CC=C2C=C(S(O)(=O)=O)C=C(S(O)(=O)=O)C2=C1\N=N\C1=CC=CC=C1 MPVDXIMFBOLMNW-ISLYRVAYSA-N 0.000 claims description 5
- SEACYXSIPDVVMV-UHFFFAOYSA-L eosin Y Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C([O-])=C(Br)C=C21 SEACYXSIPDVVMV-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 5
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 22
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 24
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 19
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 16
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 8
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 4
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 4
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 3
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 3
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 3
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 2
- 229960001506 brilliant green Drugs 0.000 description 2
- HXCILVUBKWANLN-UHFFFAOYSA-N brilliant green cation Chemical compound C1=CC(N(CC)CC)=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)=C1C=CC(=[N+](CC)CC)C=C1 HXCILVUBKWANLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 210000004085 squamous epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- -1 and after oxidation Chemical compound 0.000 description 1
- 239000000981 basic dye Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 210000004766 cell nucleus structure Anatomy 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- GTRGJJDVSJFNTE-UHFFFAOYSA-N chembl2009633 Chemical compound OC1=CC=C2C=C(S(O)(=O)=O)C=CC2=C1N=NC1=CC=CC=C1 GTRGJJDVSJFNTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 229910000474 mercury oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- UKWHYYKOEPRTIC-UHFFFAOYSA-N mercury(ii) oxide Chemical compound [Hg]=O UKWHYYKOEPRTIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 1
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
- G01N1/31—Apparatus therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了一种巴氏染色液及其制备方法与染色方法，涉及细胞染色技术领域。本发明公开的巴氏染色液包括细胞核染色液和细胞浆染色液。该巴氏染色液配制方便，染色步骤简洁，效果稳定，细胞对比度清晰，使用寿命长。
Description
技术领域
本发明涉及细胞染色技术领域，具体而言，涉及一种巴氏染色液及其制备方法与染色方法。
背景技术
巴氏染色法是目前国际上推荐的一种应用于细胞病理学的染色方法，该染色法对细胞进行多色性染色，能显示出鳞状上皮细胞不同的分化成熟状态，染色后可反映出鳞状上皮细胞的分化成熟情况，细胞质透亮鲜丽，细胞核结构清晰，细胞核/质染色对比清晰，利于异常细胞、癌细胞及癌前病变细胞的发现与诊断，特别是在宫颈癌前筛查过程中发挥着重要作用。
巴氏染色液由细胞核染色液和细胞质染色液组成。细胞核染色液的主要成分为苏木精，细胞核内染色质的主要成分DNA呈酸性带负电，很容易与呈碱性带正电的苏木精结合而染色；细胞质染色液的主要成分为伊红、亮绿和橘黄，能够使胞浆内的蛋白质着色。细胞浆的染色与pH值有密切关系，当pH调到蛋白质等电点4.7-5.0时，胞浆对外不显电性，此时酸或碱性染料不易染色。当pH调到6.7-6.8时，大于蛋白质的等电点pH值，表现酸性电离，而带负电荷的阴离子，可被带正电荷的染料染色，此时胞核也被染色，核和胞浆难以区分。因此必须把pH调至胞浆等电点以下，在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷(阳离子)，就可被带负电荷(阴离子)的染料染色。
传统的巴氏染色液配置过程繁琐，且染色流程时间较长，特别是橘黄往往不能着色；此外传统的巴氏染色液的使用寿命不长，容易收到外界环境的影响，染色结果不够稳定，影响医生病理阅片的准确性，从而影响临床诊断。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种巴氏染色液及其制备方法与染色方法。该巴氏染色液是一种高清恒染的巴氏染色液，其配制方便，染色步骤简洁，效果稳定，细胞对比度清晰，使用寿命长。
本发明是这样实现的：
一方面，本发明提供一种巴氏染色液，其包括细胞核染色液和细胞浆染色液；
所述细胞核染色液包括按质量百分比计的如下组分：
苏木精0.1％-1％、第一醇10％-20％、硫酸铝2％-8％、碘酸钠0.02％-0.1％以及冰乙酸0.1％-5％，余量为水；
所述细胞浆染色液包括按质量百分比计的如下组分：曙红Y 0.1％-1％、亮绿0.01％-0.1％、橙黄G 0.1％-1％、磷钨酸0.05％-0.5％、第二醇70％-95％以及碳酸锂0.01％-0.1％，余量为水。
上述细胞核染色液对于硫酸铝的浓度做了严格的控制，确保了苏木素的上色速度与染色效果，又使染色液在全自动制片机上应用时无结晶体析出，不引起管道堵塞，同时不会造成原料的浪费，降低了染液的成本。
上述细胞浆染色液中，磷钨酸和碳酸锂是pH稳定剂，对外源性的酸碱有缓冲作用，提高染色的稳定性。胞浆染色液为复合染色液，跟传统的染色液相比，染色步骤更为简洁，染色层次分明，能准确显示上皮细胞的分化状态。
本发明提供的巴氏染色液通过上述改进，并结合对其他组分的用量控制，使得采用细胞核染色液和细胞浆染色液对细胞染色时，染色步骤简洁，效果稳定，细胞对比度清晰，使用寿命长。
可选的，在一些实施方案中，所述第一醇选自甲醇、乙醇、异丙醇和丙三醇中的任意一种或几种的组合；
所述第二醇选自甲醇、乙醇和异丙醇中的任意一种或几种的组合。
可选的，在一些实施方案中，所述第一醇至少包括丙三醇，优选为乙醇和丙三醇的组合；所述第二醇为乙醇和异丙醇的组合。
丙三醇的加入能够提高细胞核染色液的稳定性，延长染色液的使用寿命。
可选的，在一些实施方案中，在所述细胞核染色液中，硫酸铝的含量为2％-5％或5％-8％。
可选的，在一些实施方案中，所述巴氏染色液还包括助染液；所述助染液包括按质量百分比计的如下组分：柠檬酸3.4％-3.5％和磷酸氢二钠0.4％-0.45％，余量为水。
另一方面，本发明提供如上任一项所述的巴氏染色液的制备方法，其包括：
细胞核染色液制备步骤：将由苏木精溶于第一醇得到的第一溶液与由硫酸铝溶于水的第二溶液混合，再加入碘酸钠氧化，氧化结束后再加入冰乙酸混合；
细胞浆染色液制备步骤：将由曙红Y、亮绿和橙黄G溶于第二醇得到的溶液A与由磷钨酸和碳酸锂溶于水的得到溶液B混合。
可选的，在一些实施方案中，在细胞核染色液制备步骤中，进行氧化的时间为30-60min。
可选的，在一些实施方案中，进行氧化的时间为30-45min或45-60min。
在制备细胞核染色液的过程中，碘酸钠的氧化时间控制在30-60min以内，可以避免苏木精的氧化不足及氧化过度，确保细胞核的着色效果。并通过氧化时间的控制确保在使用过程中不产生氧化膜和结晶体，染色后无需分化，适合全自动制片染色机的配套使用。
可选的，在一些实施方案中，当第一醇为乙醇和丙三醇的组合时，细胞核染色液制备步骤包括：所述第一溶液由苏木精溶于乙醇得到，氧化后，再依次加入丙三醇和冰乙酸。
再一方面，本发明提供一种细胞的染色方法，其包括：采用如上任一项所述的巴氏染色液对细胞进行染色。
可选的，在一些实施方案中，对细胞进行染色的方法包括如下步骤：
先使用所述细胞核染色液，后使用所述细胞浆染色液染色。
可选的，在一些实施方案中，在使用所述细胞核染色液之前，使用前述的助染液冲洗细胞样本。
可选的，在一些实施方案中，所述细胞样本为细胞玻片样本。
在细胞核染色液前加入助染液的清洗步骤，能有效稳定染色结果，延长染色液的使用寿命。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为采用实施例1提供的巴氏染色的染色效果镜检图片。
图2为采用实施例2提供的巴氏染色的染色效果镜检图片。
图3为采用实施例3提供的巴氏染色的染色效果镜检图片。
图4为采用实施例4提供的巴氏染色的染色效果镜检图片。
图5为采用实施例5提供的巴氏染色的染色效果镜检图片。
图6为采用实施例6提供的巴氏染色的染色效果镜检图片。
图7为采用对比例1提供的巴氏染色的染色效果镜检图片。
图8为采用对比例2提供的巴氏染色的染色效果镜检图片。
图9为采用对比例3提供的巴氏染色的染色效果镜检图片。
图10为采用对比例4提供的巴氏染色的染色效果镜检图片。
图11为采用对比例5提供的巴氏染色的染色效果镜检图片。
图12为采用对比例6提供的巴氏染色的染色效果镜检图片。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供的巴氏染色液，包括细胞核染色液和细胞浆染色液。细胞核染色液的配方如下：
细胞核染色液的制备方法如下(例如配制1L)：
称取4g苏木精溶于50mL无水乙醇；称取50g硫酸铝溶于835.5mL纯净水，然后将两者混合后加入0.5g碘酸钠氧化45min；最后加入50mL丙三醇和10mL冰乙酸，混匀后过滤即可使用。
细胞浆染色液的配方如下：
细胞浆染色液的制备方法如下(例如配制1L)：
分别称取5g曙红Y、0.5g亮绿和5g橙黄G一起溶于800mL乙醇和100mL异丙醇的混合液，称取1g磷钨酸和0.5g碳酸锂一起溶于88mL纯净水，然后将两混合液混合均匀后过滤即可使用。
实施例2
本实施例提供的巴氏染色液与实施例1基本相同，不同的是，细胞核染色液的配方如下：
细胞核染色液的制备方法参照实施例1。
实施例3
本实施例提供的巴氏染色液与实施例1基本相同，不同的是，细胞核染色液的配方如下：
细胞核染色液的制备方法参照实施例1。
实施例4
本实施例提供的巴氏染色液与实施例1基本相同，不同的是：细胞核染色液的制备过程中，碘酸钠的氧化时间为30min。
实施例5
本实施例提供的巴氏染色液与实施例1基本相同，不同的是：细胞核染色液的制备过程中，碘酸钠的氧化时间为60min。
实施例6
本实施例提供的巴氏染色液与实施例1基本相同，不同的是，细胞核染色液的配方如下：
细胞核染色液的制备方法参照实施例1。
实施例7
本实施例提供的巴氏染色液与实施例1基本相同，巴氏染色液还包括助染液，其配方如下：
助染液的制备方法如下：将柠檬酸和磷酸氢二钠溶于纯净水中，待完全溶解后过滤即可使用。
实施例8
本实施例提供采用实施例1-6任一项提供的巴氏染色液进行染色的方法，其包括如下步骤：
1、取细胞保存液保存的细胞样本进行制片；
2、将制好的片子浸入95％乙醇固定10min；
3、固定后用自来水冲洗1min；
4、将玻片浸入细胞核染色液染色2-5min；
5、取出玻片用自来水冲洗5-10min；
6、玻片浸入95％乙醇脱水1-2min；
7、玻片浸入无水乙醇脱水1-2min；
8、将玻片浸入细胞浆染色液染色3-5min；
9、玻片浸入95％乙醇脱水1-2min；
10、玻片浸入无水乙醇脱水1-2min；
11、将玻片浸入二甲苯透明5min；
12、滴加中性树胶封片，镜检。
实施例9
本实施例提供采用实施例7提供的巴氏染色液进行染色的方法，其与实施例7提供的染色方法基本相同，不同的是，在步骤3中，用助染液代替自来水冲洗。
对比例1
本对比例提供的巴氏染色液与实施例1基本相同，不同的是，细胞核染色液的配方如下：
该细胞核染色液的制备方法参照实施例1。
对比例2
本对比例提供的巴氏染色液与实施例1基本相同，不同的是，细胞核染色液的配方如下：
该细胞核染色液的制备方法参照实施例1。
对比例3
本对比例提供的巴氏染色液与实施例1基本相同，不同的是，碘酸钠的氧化时间为5min。
对比例4
本对比例提供的巴氏染色液与实施例1基本相同，不同的是，碘酸钠的氧化时间为120min。
对比例5
本对比例提供的巴氏染色液与实施例1基本相同，不同的是，细胞浆染色液的配方如下：
该细胞浆染色液的制备方法参考实施例1。
对比例6
本对比例提供的巴氏染色液与实施例1基本相同，不同的是，细胞浆染色液的配方如下：
该细胞浆染色液的制备方法参考实施例1。
实验例
使用实施例1-6和对比例1-6的巴氏染色进行染色，按照实施例7的方法进行，对宫颈脱落细胞样本进行染色，比较染色效果，并放置18个月考察各实施例和对比例的染色液的稳定性，结果如表1，图1-图12所示。
表1
实验例2
使用实施例1提供的巴氏染色液和实施例7提供的巴氏染色液，分别采用实施例8和9的方法进行染色，考察巴氏染色液的使用寿命。结果如表2所示。
表2
| 方法 | 可染片数 |
| 实施例8 | 1500张 |
| 实施例9 | 2500张 |
综上结果可以看出，本发明实施例中的细胞核染色液加入了丙三醇，是一种保护剂，控制着苏木精的氧化程度，使其成为一种进行性染料，通过比较实施例1和6得出，丙三醇能有效延长染液的使用寿命。
本发明实施例中的细胞核染色液中的硫酸铝做了严格的溶液饱和度实验，通过比较实施例1-3和对比例1-2得出，本发明实施例中的硫酸铝浓度既确保了苏木素的上色速度与染色效果，又使试剂在全自动制片机上应用时无结晶体析出，不引起管道堵塞，同时不会造成原料的浪费，降低了染液的成本。
本发明实施例中的细胞核染色液使用的氧化剂跟传统的氧化方法(如氧化汞等)相比更为温和，且无毒环保；通过比较实施例1，4，5和对比例3，4得出，配制过程中严格控制氧化时间，保证在使用过程中不产生氧化膜和结晶体，染色后无需分化，适合全自动制片染色机的配套使用。
本发明实施例中的细胞浆染色液为复合染液，通过比较实施例1和对比例5得出，实施例1中的胞浆染色效果层次分明，能准确显示上皮细胞的分化状态，对于医生判断角化细胞有显著的帮助；而对比例5中的胞浆颜色层次略少，其浆仅为红蓝两色，颜色层次不够丰富。
本发明实施例中的细胞浆染色液较其它染色液(HE)由于没有过多伊红对核的遮盖，其结构更为清晰，染色质点等细微结构更加明显，利于细胞病理形态的判读。
本发明实施例中的细胞浆染色液中使用了pH稳定剂，对外源性的酸碱能起到很好的缓冲作用，通过对比实施例1和对比例6得出，pH稳定剂能稳定细胞的染色效果，同时提高染液的使用寿命。
本发明实施例中在染色过程中使用了一种助染液，提供了与细胞核染色液相似的pH环境，通过对比实施例8的方法和实施例9的方法得出，该助染液的使用能有效减少了外界环境对染色液的影响，稳定细胞内环境，缩短细胞核染色液的染色时间，稳定染色效果，延长染液的使用寿命。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种巴氏染色液，其特征在于，其包括细胞核染色液和细胞浆染色液；
所述细胞核染色液包括按质量百分比计的如下组分：
苏木精0.1％-1％、第一醇10％-20％、硫酸铝2％-8％、碘酸钠0.02％-0.1％以及冰乙酸0.1％-5％，余量为水；所述第一醇至少包括丙三醇；
所述细胞浆染色液包括按质量百分比计的如下组分：曙红Y0.1％-1％、亮绿0.01％-0.1％、橙黄G 0.1％-1％、磷钨酸0.05％-0.5％、第二醇70％-95％以及碳酸锂0.01％-0.1％，余量为水；所述第二醇为乙醇和异丙醇的组合；
所述巴氏染色液还包括助染液；所述助染液包括按质量百分比计的如下组分：柠檬酸3.4％-3.5％和磷酸氢二钠0.4％-0.45％，余量为水。
2.根据权利要求1所述的巴氏染色液，其特征在于，所述第一醇选自甲醇、乙醇、异丙醇和丙三醇中的任意一种或几种的组合；
所述第二醇选自甲醇、乙醇和异丙醇中的任意一种或几种的组合。
3.根据权利要求2所述的巴氏染色液，其特征在于，所述第一醇为乙醇和丙三醇的组合；所述第二醇为乙醇和异丙醇的组合。
4.根据权利要求1所述的巴氏染色液，其特征在于，在所述细胞核染色液中，硫酸铝的含量为2％-5％或5％-8％。
5.如权利要求1-4任一项所述的巴氏染色液的制备方法，其特征在于，其包括：
细胞核染色液制备步骤：将由苏木精溶于第一醇得到的第一溶液与由硫酸铝溶于水的第二溶液混合，再加入碘酸钠氧化，氧化结束后再加入冰乙酸混合；所述氧化的时间为30-60min；
细胞浆染色液制备步骤：将由曙红Y、亮绿和橙黄G溶于第二醇得到的溶液A与由磷钨酸和碳酸锂溶于水的得到溶液B混合。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，进行氧化的时间为30-45min或45-60min。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，当第一醇为乙醇和丙三醇的组合时，细胞核染色液制备步骤包括：所述第一溶液由苏木精溶于乙醇得到，氧化后，依次加入丙三醇和冰乙酸。
8.一种细胞的染色方法，其特征在于，其包括：采用如权利要求1-4任一项所述的巴氏染色液对细胞进行染色。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011606343.4A CN112781963B (zh) | 2020-12-30 | 2020-12-30 | 巴氏染色液及其制备方法与染色方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011606343.4A CN112781963B (zh) | 2020-12-30 | 2020-12-30 | 巴氏染色液及其制备方法与染色方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112781963A CN112781963A (zh) | 2021-05-11 |
| CN112781963B true CN112781963B (zh) | 2024-04-30 |
Family
ID=75753389
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202011606343.4A Active CN112781963B (zh) | 2020-12-30 | 2020-12-30 | 巴氏染色液及其制备方法与染色方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112781963B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113945440A (zh) * | 2021-10-14 | 2022-01-18 | 山东高创医疗器械国家研究院有限公司 | 一种巴氏染色试剂盒及其制备方法和染色方法 |
| CN114441272A (zh) * | 2022-01-27 | 2022-05-06 | 北京艾迪康医学检验实验室有限公司 | 一种脱落细胞染色液及其制备方法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0445434A2 (en) * | 1990-03-07 | 1991-09-11 | Cytyc Corporation | Thionin stain technique |
| GB0103605D0 (en) * | 2001-02-14 | 2001-03-28 | Cairns Hector | Stain |
| CN102286603A (zh) * | 2011-04-25 | 2011-12-21 | 安徽省巢湖市弘慈医疗器械有限公司 | 巴氏染色液及其快速染色方法 |
| CN102876081A (zh) * | 2012-09-24 | 2013-01-16 | 广州鸿琪光学仪器科技有限公司 | 苏木素染色液以及含苏木素染色液的巴氏染色试剂盒 |
| CN103033409A (zh) * | 2011-10-09 | 2013-04-10 | 安徽新标志科技有限公司 | 改进的组织细胞染色方法及其应用 |
| CN105755099A (zh) * | 2016-03-28 | 2016-07-13 | 天津智达康华生物科技有限公司 | 一种巴氏染色液及其制备方法 |
| CN108535077A (zh) * | 2018-04-10 | 2018-09-14 | 南京福怡科技发展股份有限公司 | 一种巴氏染色液及应用方法 |
-
2020
- 2020-12-30 CN CN202011606343.4A patent/CN112781963B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0445434A2 (en) * | 1990-03-07 | 1991-09-11 | Cytyc Corporation | Thionin stain technique |
| GB0103605D0 (en) * | 2001-02-14 | 2001-03-28 | Cairns Hector | Stain |
| CN102286603A (zh) * | 2011-04-25 | 2011-12-21 | 安徽省巢湖市弘慈医疗器械有限公司 | 巴氏染色液及其快速染色方法 |
| CN103033409A (zh) * | 2011-10-09 | 2013-04-10 | 安徽新标志科技有限公司 | 改进的组织细胞染色方法及其应用 |
| CN102876081A (zh) * | 2012-09-24 | 2013-01-16 | 广州鸿琪光学仪器科技有限公司 | 苏木素染色液以及含苏木素染色液的巴氏染色试剂盒 |
| CN105755099A (zh) * | 2016-03-28 | 2016-07-13 | 天津智达康华生物科技有限公司 | 一种巴氏染色液及其制备方法 |
| CN108535077A (zh) * | 2018-04-10 | 2018-09-14 | 南京福怡科技发展股份有限公司 | 一种巴氏染色液及应用方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN112781963A (zh) | 2021-05-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112781963B (zh) | 巴氏染色液及其制备方法与染色方法 | |
| CN105651580A (zh) | 一种苏木素伊红混合染色液 | |
| CN102876081B (zh) | 苏木素染色液以及含苏木素染色液的巴氏染色试剂盒 | |
| CN106644656A (zh) | 苏木素‑伊红一步染色法 | |
| CN108276803A (zh) | 一种苏木素-伊红快速染色液及应用方法 | |
| US4981803A (en) | Reagent for reticulocyte counting by flow cytometry | |
| CN113218731A (zh) | 一种苏木素染液及其制备方法 | |
| CN112798385B (zh) | 一种环保苏木素染色液、巴氏染色液及其制备方法与应用 | |
| CN109612807A (zh) | 一种尿液有形成分染色液 | |
| CN103884562B (zh) | 氯化醋酸as-d萘酚酯酶（as-dnce）染色液 | |
| CN110361244B (zh) | 用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液与染色方法 | |
| CN108535077A (zh) | 一种巴氏染色液及应用方法 | |
| CN101897328B (zh) | 一种原虫样本的染色方法 | |
| CN110907257A (zh) | 一种苏木素染液及其制备方法、应用方法 | |
| CN114608923A (zh) | 一种提高染色效率的苏木素染液及其制备方法 | |
| CN108760445A (zh) | 一种染色槽染色方法 | |
| CN108168984B (zh) | 一种蛋白质page凝胶电泳快速染色试剂盒及染色方法 | |
| CN109668771B (zh) | 一种液基脱落细胞染色液及其染色方法 | |
| CN111337332A (zh) | 一种巴氏染色液ea50及其制备方法 | |
| CN110823664A (zh) | 一种苏木素染色液及其制备方法 | |
| US20160153871A1 (en) | Cytoplasmic Stain Composition | |
| Clayton Jr et al. | New stain for fetal erythrocytes in peripheral blood smears | |
| KR20210090849A (ko) | 조직 염색용 조성물 및 이를 이용한 조직 염색 방법 | |
| CN110926909A (zh) | 巴氏染色试剂盒及其染色方法 | |
| CN110006724A (zh) | 采用巴氏和革兰氏染色方法检测滴虫用试剂 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |