CN102876081B - 苏木素染色液以及含苏木素染色液的巴氏染色试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种苏木素染色液，含苏木素染色液的巴氏染色试剂盒及其染色方法。与传统的苏木素染色液相比，本发明苏木素染色液无需严格控制染色时间也不会发生核过染，因此无需分化即可达到理想的染色效果。本发明苏木素染色液还具有着色能力强，染色时间短，效果稳定，操作简单，有效期长等优点。
Description
技术领域
本发明涉及体外诊断领域，特别涉及一种苏木素染色液、含苏木素染色液的巴氏染色试剂盒及其染色方法。
背景技术
染色是利用染料在组织切片上给与颜色，使染料中的染色剂与组织或细胞内的某种成分发生作用，经过透明后通过光谱吸收和折射，使其各种微细结构能显现不同颜色，这样在显微镜下就可显示出组织或细胞结构的技术。巴氏染色法是液基薄层细胞学制片中最好的最常用的染色方法。该染色法不但具有显示细胞结构清晰，分色明显，透明度好，胞浆颜色鲜艳等特点，而且所染标本不易脱色，可长久保存。
使用苏木素染色液进行核染色是巴氏染色法中比较关键的一步，在使用传统苏木素染色液进行核染色时，一般有两种方法：
一是过染法，首先有意识地进行深染，需要通过盐酸分化过程使核染色趋于合适，染色过程复杂；二是淡染法，在核染色过程中，需要严格掌握染色时间，使核染色适宜而不用盐酸分化。
发明内容
本发明要解决的技术问题为提供一种无需严格控制染色时间也不会过染的苏木素染色液，含苏木素染色液的巴氏染色试剂盒及其染色方法。
具体地，本发明提供了一种苏木素染色液，其组分及重量百分比为：
苏木精0.05%-1%
醇10%-50%
硫酸铝0.5%-5%
氧化剂0.01%-0.1%
弱酸0.5%-10%
其余为水。
上述苏木素染色液中，所述醇为甲醇、乙醇、异丙醇或丙三醇中的任意一种或几种。
优选地，所述醇至少包括丙三醇；丙三醇的加入有利于提高苏木素染色液的稳定性，保证染色效果。
所述氧化剂为氧化汞或碘酸钠。
所述弱酸为乙酸、碳酸、柠檬酸或磷酸中的任意一种。
上述苏木素染色液中，硫酸铝的加入加强了苏木素染色液的着色能力，可缩短苏木素染色液染细胞核的时间。
本发明苏木素染色液通过调整苏木精、醇以及氧化剂的浓度，使得染色液中氧化后的苏木精浓度接近着色后细胞内的苏木精浓度，从而使得细胞核不会发生过染。
本发明的另一个目的在于提供一种巴氏染色试剂盒，包括上述苏木素染色液。
优选地，上述巴氏染色试剂盒还包括EA/OG染色液、返蓝试剂和脱水剂。
所述EA/OG染色液由以下重量百分比的成分组成：
伊红Y 0.02%-2%
亮绿0.01%-1%
磷钨酸0.05%-5%
醇10%-95%
碳酸锂0.01%-1%
其余为水。
上述EA/OG染色液中，所述醇为甲醇、乙醇或异丙醇中的任意一种或几种。
上述EA/OG染色液中，磷钨酸和碳酸锂可组成缓冲对，一方面可中和分色及蓝化时可能留下的酸或碱，保证染色达到理想效果；另一方面，对外来酸碱有一定的缓冲作用，防止外来酸碱对染色效果的影响，提高染色的稳定性。
上述巴氏染色试剂盒中，所述返蓝试剂为磷酸-磷酸盐缓冲液、Bis-Tris缓冲液或Tris-HCl缓冲液中的任意一种或几种，所述缓冲液呈碱性，可以加快细胞核返蓝速度，缩短细胞核返蓝时间，并由于是缓冲液，而避免了传统氨水作为返蓝试剂时容易出现返蓝过度的问题。
上述巴氏染色试剂盒中，所述脱水剂为甲醇、乙醇或异丙醇中的任意一种或几种。
本发明还提供了一种上述巴氏染色试剂盒的快速染色方法，在常温下按以下步骤进行操作：
（1）采用液基细胞自然沉降法制备细胞抹片，待细胞完全沉降后加脱水剂处理；
（2）使用返蓝试剂进行水化；
（3）使用苏木素染色液进行核染色，后用返蓝试剂进行返蓝，并用脱水剂进行脱水处理；
（4）使用EA/OG染色液进行胞浆染色，使用脱水剂进行清洗；
（5）二甲苯透明，封片。
本发明苏木素染色液具有以下优点:
（1）无需严格控制时间也不会发生过染，与传统的过染法相比，省了盐酸分化除去核过染染料的步骤；
（2）含硫酸铝，加强了苏木素染色液的着色能力；
含本发明苏木素染色液的巴氏染色试剂盒除具有以上优点外，还具有以下优势：
（1）采用碱性缓冲液作为返蓝试剂，其返蓝速度快，效果好；
（2）EA/OG染色液中含有鏻钨酸和碳酸锂，对外来酸碱有一定的缓冲作用，防止外来酸碱对染色效果的影响，提高染色稳定性；
（3）采用本发明试剂盒染色的液基薄层细胞制片后，细胞核清晰，细胞浆鲜艳，有利于细胞学医生的观察；
（4）有效期长：在常温避光的条件下有效期长达一年。
附图说明
图1为实施例4所述细胞核染色效果图；
图2为实施例4所述细胞巴氏染色结果图；
图3为实施例5所述细胞核染色效果图；
图4为实施例5所述细胞巴氏染色结果图；
图5为实施例6所述细胞核染色效果图；
图6为实施例6所述细胞巴氏染色结果图；
图7为本发明苏木素染色液不同染色时间的核染色效果图。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。
实施例1本发明巴氏染色试剂盒的组成及制备
（1）本发明苏木素染色液，其配方如下：
| 组分 | 重量份（%） |
| 苏木精 | 0.05 |
| 丙三醇 | 5 |
| 乙醇 | 5 |
| 硫酸铝 | 0.5 |
| 碘酸钠 | 0.01 |
| 乙酸 | 10 |
| 水 | 79.44 |
将上述重量份的各组分均匀混合而得。
（2）一种EA/OG染色液，其配方如下：
| 组分 | 重量份（%） |
| 伊红Y | 0.02 |
| 亮绿 | 0.01 |
| 磷钨酸 | 0.05 |
| 甲醇 | 45 |
| 乙醇 | 45 |
| 碳酸锂 | 0.01 |
| 水 | 9.91 |
将上述重量份的各组分均匀混合而得。
（3）返蓝试剂：pH为7.1，0.05mol/LTris-HCl缓冲液，按常规方法配制而得。
（4）脱水剂：乙醇。
实施例2本发明巴氏染色试剂盒的组成及制备
（1）本发明苏木素染色液，其配方如下：
| 组分 | 重量份（%） |
| 苏木精 | 0.1 |
| 丙三醇 | 10 |
| 乙醇 | 30 |
| 硫酸铝 | 3 |
| 碘酸钠 | 0.05 |
| 乙酸 | 5 |
| 水 | 51.85 |
将上述重量份的各组分均匀混合而得。
（2）一种EA/OG染色液，其配方如下：
| 组分 | 重量份（%） |
| 伊红Y | 1 |
| 亮绿 | 0.5 |
| 磷钨酸 | 2 |
| 甲醇 | 10 |
| 乙醇 | 83 |
| 碳酸锂 | 0.5 |
| 水 | 3 |
将上述重量份的各组分均匀混合而得。
（3）返蓝试剂：pH为8.1，0.05mol/LTris-HCl缓冲液，按常规方法配制而得。
（4）脱水剂：按体积百分比，由20%乙醇和80%的异丙醇组成。
实施例3本发明巴氏染色试剂盒的组成及制备
（1）本发明苏木素染色液，其配方如下：
| 组分 | 重量份（%） |
| 苏木精 | 1 |
| 丙三醇 | 25 |
| 乙醇 | 25 |
| 硫酸铝 | 5 |
| 碘酸钠 | 0.1 |
| 乙酸 | 0.5 |
| 水 | 43.4 |
将上述重量百分比的组分均匀混合而得。
（2）一种EA/OG染色液，其配方如下：
| 组分 | 重量份（%） |
| 伊红Y | 2 |
| 亮绿 | 1 |
| 磷钨酸 | 5 |
| 甲醇 | 45 |
| 乙醇 | 45 |
| 碳酸锂 | 1 |
| 水 | 1 |
将上述重量份的各组分均匀混合而得。
（3）返蓝试剂：pH为8.9，0.05mol/LTris-HCl缓冲液，按常规方法配制而得。
（4）脱水剂：按体积百分比，由50%乙醇和50%的异丙醇组成。
实施例4使用实施例1巴氏染色试剂盒对组织脱落细胞进行染色试验
（1）经常规处理的细胞悬浊液转移至制片仓中，沉降至少3分钟后，倒去制片仓中多余的液体；
（2）固定：向制片仓中加入1ml脱水剂，静置1分钟后，倒去未反应的液体；
（3）水化：向制片仓中加入1ml返蓝试剂，静置1分钟后，倒去未反应的液体，重复此步骤3次；
（4）染核：分别向制片仓中加入0.5ml苏木素染色液润洗，马上倒去，再向制片仓中加入1ml的苏木素染色液，静置2分钟，倒去未反应的染色液；其染色效果图如图1所示；
（5）回蓝：向制片仓中加入1ml的返蓝试剂，静置1分钟，倒去未反应的液体，重复此步骤3次。如制片仓内壁挂有残留的苏木素染色液，应用吸水纸吸去，防止污染。
（6）脱水：向制片仓中加入1ml的脱水剂，静置1分钟，倒去未反应的液体，重复此步骤3次；
（7）染胞浆：向制片仓中加入0.5ml EA/OG染色液润洗，马上倒去，再向制片仓中加入1ml的EA/OG染色液，静置2分钟后，倒去未反应的染色液；
（8）清洗：向制片仓中加入1ml的脱水剂，静置1分钟，倒去未反应的液体，重复此步骤3次；
（9）染色结束后，拆除制片仓，把染色OK的制片依次放到玻片架中，然后马上把制片转移至异丙醇中浸泡5分钟，取出，马上转移至二甲苯中浸泡8分钟；
（10）从二甲苯中取出，用盖玻片封片，显微镜下观察，结果如图2所示。
由图1、图2可见，所染细胞核呈蓝紫色，且轮廓清晰；细胞浆呈粉红色或绿色，颜色鲜艳，便于分辨。
实施例5使用实施例2巴氏染色试剂盒对组织脱落细胞进行染色试验
实验步骤同实施例4，其核染色结果以及全细胞染色结果分别如图3、图4所示。
由图3、图4可见，所染细胞核呈蓝紫色，且轮廓清晰；细胞浆呈粉红色或绿色，颜色鲜艳，便于分辨。
实施例6使用实施例3巴氏染色试剂盒对组织脱落细胞进行染色试验
实验步骤同实施例4，其核染色结果以及全细胞染色结果分别如图5、图6所示。
由图5、图6可见，所染细胞核呈蓝紫色，且轮廓清晰；细胞浆呈粉红色或绿色，颜色鲜艳，便于分辨。
综合实施例4-5，可得如下结论：使用本发明巴氏染色试剂盒所染的细胞制片，不经过盐酸酒精分化步骤，也可得到理想的细胞染色效果。
实施例7本发明苏木素染色液不同染色时间的核染色效果试验
采用实施例2所制备的苏木素染色液以及其它试剂，分别将核染色时间设定为30秒、2分钟、5分钟、10分钟，其余步骤同实施例4。各时间点的核染色效果如图7所示。
由图7可见，随着核染色时间的延长，核着色加深但没有出现染色过深，也没有黏附多余的苏木素颜料。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种苏木素染色液，其组分及重量百分比为：
苏木精0.05%-1%
醇10%-50%
硫酸铝0.5%-5%
氧化剂0.01%-0.1%
弱酸0.5%-10%
其余为水；
所述醇至少包括丙三醇；
所述醇还包括甲醇、乙醇、异丙醇中的任意一种或几种；
所述氧化剂为氧化汞；
所述弱酸为乙酸、碳酸、柠檬酸或磷酸中的任意一种。
2.一种巴氏染色试剂盒，包括权利要求1所述的苏木素染色液。
3.如权利要求2所述的巴氏染色试剂盒，还包括EA/OG染色液、返蓝试剂和脱水剂。
4.如权利要求3所述的巴氏染色试剂盒，其特征在于，所述EA/OG染色液由以下重量百分比的成分组成：
伊红Y0.02%-2%
亮绿0.01%-1%
磷钨酸0.05%-5%
醇10%-95%
碳酸锂0.01%-1%
其余为水。
5.如权利要求3所述的巴氏染色试剂盒，其特征在于，所述返蓝试剂为磷酸-磷酸盐缓冲液、Bis-Tris缓冲液或Tris-HCl缓冲液中的任意一种或几种，所述缓冲液呈碱性。
6.如权利要求3所述的巴氏染色试剂盒，其特征在于，所述脱水剂为甲醇、乙醇或异丙醇中的任意一种或几种。
7.一种使用权利要求3-6任一项所述巴氏染色试剂盒的快速染色方法，其特征是在常温下按以下步骤进行操作：
（1）采用液基细胞自然沉降法制备细胞抹片，待细胞完全沉降后加脱水剂处理；
（2）使用返蓝试剂进行水化；
（3）使用所述苏木素染色液进行核染色，后用返蓝试剂进行返蓝，并用脱水剂进行脱水处理；
（4）使用EA/OG染色液进行胞浆染色，使用脱水剂进行清洗；
（5）二甲苯透明，封片。
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