CN102167914A

CN102167914A - 无汞型环保苏木素染色液

Info

Publication number: CN102167914A
Application number: CN2011100237352A
Authority: CN
Inventors: 李明; 王德田; 董建强
Original assignee: Harbin Green Specimen Technology Development Co Ltd
Current assignee: Harbin Green Specimen Technology Development Co Ltd
Priority date: 2011-01-21
Filing date: 2011-01-21
Publication date: 2011-08-31

Abstract

本发明提供一种无汞型环保苏木素染色液，其包括如下体积份数的组分：3-10％的苏木色精无水乙醇溶液100-300份，2-6％的硫酸铝水溶液1500-2000份，0.5-2％的高碘酸水溶液60-100份，冰乙酸15-30份。该无汞型环保苏木素染色液采用无毒无害的化学试剂，经组织切片染色实验证明，细胞核染色清晰，染色质、核膜及核仁结构清晰。

Description

无汞型环保苏木素染色液

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂，具体涉及一种无汞型环保苏木素染色液及其配制方法和应用，属于病理学实验技术领域。

背景技术

组织病理学的诞生已有150多年的历史，在所有的医院，只要有手术，均由医院病理科对手术组织样本作出组织病理学诊断。

常规石蜡包埋HE染色制片是当前用以处理组织样本的最基本技术，它是病理诊断方法学的基础，也是许多新方法、新技术优劣的评定参照标准。传统的方法是将组织样本放置处理液的缸中，依次倒入或调入不同处理液，样本依次在每个试剂中按规定浸泡不同时间完成处理切片、染色、封片等，全程需要30多个步骤。整个过程大量使用甲醛、二甲苯、氧化汞、氨水有毒害化学试剂，病理技术人员长期置身于有毒环境，且试剂排放严重污染环境。并且所用的试剂宽容度差，操作复杂，试剂消耗量大，病理制片优质片低(全国统计在40～70％)，影响诊断。同时绝大数医院自行配试剂，缺乏统一标准。因此病理行业组织标本处理液用品的标准化生产、无毒化、社会化供求，是行业发展的必然趋势。

苏木素是一种天然染料，其作为单一的染色是不行的，它染色力弱，必须具备两个条件才能具有强的染色力。一是产生有效成分苏木红，二是加入媒染剂。苏木红的产生需经氧化才能获得，获得苏木红有两种方法，一是天然成熟，苏木素与其它试剂混合好后，暴露于阳光或亮处，在自然光的作用下，慢慢地氧化成熟，但时间较长，一般需四周左右。二是加入化学试剂促进成熟，如加入氧化汞或碘酸钠促使苏木素成熟。

Harris氏苏木素为当前最广泛使用的染液，由于它染色时间短，效果好，很受使用者的欢迎。但是其中用到的氧化汞是公认的有毒有害化学品。并且其配置方法有诸多注意事项，不易于控制。申请号为200810136961.X的专利申请公开了一种生物组织样本常规石蜡制片HE染色无二甲苯全程处理液。然而这种基于传统组织固定的处理液仍旧采用了严重污染环境的毒害试剂甲醛，并且其中采用的苏木素染色液采用自然氧化时间长。

另有一些现有的无汞苏木素染色液使用了碘酸钾或碘酸钠为氧化剂，碘酸盐完成氧化作用后产生的游离金属离子与色元分子结合影响染色液的染色能力，此外金属离子与染色液中的乙酸根结合形成不可溶性盐晶体，后者成为晶核导致苏木素染色液的通病结晶和溶胶化。

因此，研发无汞型苏木素染色剂，替代氧化汞氧化工艺用于病理学实验具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种无汞型环保苏木素染色液，可满足常规病理诊断、免疫组织化学诊断技术、分子生物学诊断技术要求，染色处理的组织效果优于传统技术，以完全替代现有氧化汞氧化工艺应用于相关的病理学实验。本发明所述各试剂的浓度均为质量百分浓度，所用水均为去离子水。

为了达到本发明的目的，采用如下技术方案：

本发明提供一种无汞型环保苏木素染色液，其包括如下体积份数的组分：3-10％的苏木色精无水乙醇溶液100-300份，2-6％的硫酸铝水溶液1500-2000份，0.5-2％的高碘酸水溶液60-100份，冰乙酸15-30份。

在本发明优选的实施方式中，所述无汞型环保苏木素染色液包括如下体积份数的组分：3-10％的苏木色精无水乙醇溶液200份，2-6％的硫酸铝水溶液1775份，0.5-2％的高碘酸水溶液80份，冰乙酸25份。

其中，所述苏木色精无水乙醇溶液的浓度优选为5％。

其中，所述硫酸铝水溶液的浓度优选为4％。

其中，所述高碘酸水溶液的浓度优选为1％。

本发明提供的无汞型环保苏木素染色液的配制，包括如下步骤：

1)按上述比例量取各组分；

2)将所述硫酸铝水溶液加热至摄氏80度；

3)加入所述苏木色精无水乙醇溶液，混匀；

4)再加入所述高碘酸溶液，混匀；

5)将所得溶液移至冷水内降温至室温后，加入所述冰乙酸混匀。

混匀后即可使用，与传统含汞苏木素染色液的使用方法相同。

本发明提供的无汞型环保苏木素染色液采用非汞氧化工艺配制，其中优化了媒染剂硫酸铝的剂量，降低了溶液体系中过高的无效溶质浓度；并且优选了溶液的反应温度和氧化剂的浓度，避免了传统配制方法中色元分子过度氧化造成的产生氧化膜现象；进一步使用高碘酸为氧化剂，避免了金属离子的产生，由于无晶核形成使溶液结晶和溶胶化问题得以解决。经组织切片染色实验证明，细胞核染色清晰，染色质、核膜及核仁结构清晰。

附图说明

图1为采用本发明的无汞型环保苏木素染色液处理的人乳腺癌组织乳腺球蛋白免疫组织化学染色图(LEICA-DM显微摄影200倍)。

图2为采用本发明的无汞型环保苏木素染色液处理的反应性增生淋巴组织染色图(LEICA-DM显微摄影100倍)。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。

实施例1

30克硫酸铝溶于1500ml去离子水，加热至摄氏60度。加入3％苏木色精无水乙醇溶液100ml，混匀后加入0.5％高碘酸水溶液60ml混匀。将溶液移至冷水内降温至室温后加入冰乙酸15ml混匀。

实施例2

120克硫酸铝溶于2000ml去离子水，加热至摄氏100度。加入10％苏木色精无水乙醇溶液300ml，混匀后加入2％高碘酸水溶液100ml混匀。将溶液移至冷水内降温至室温后加入冰乙酸30ml混匀。

实施例3

70克硫酸铝溶于1775ml去离子水，加热至摄氏80度。加入5％苏木色精无水乙醇溶液200ml，混匀后加入1％高碘酸水溶液80ml混匀。将溶液移至冷水内降温至室温后加入冰乙酸25ml混匀。

试验效果

采用本发明提供的无汞型环保苏木素染色液，经组织切片染色实验证明，细胞核染色清晰，染色质、核膜及核仁结构清晰。

采用实施例1-3的无汞型环保苏木素染色液处理的人乳腺癌组织乳腺球蛋白免疫组织化学染色，见图1(LEICA-DM显微摄影200倍)，显示细胞核结构清晰、核膜核仁及染色质显示良好。

采用实施例1-3的无汞型环保苏木素染色液处理的反应性增生淋巴组织，见图2(LEICA-DM显微摄影100倍)，显示病变组织结构清晰细胞核与细胞浆及组织间质层次分明。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，对本发明而言仅仅是说明性的，而非限制性的。本专业技术人员理解，在本发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变，修改，甚至等效，但都将落入本发明的保护范围内。

Claims

1.一种无汞型环保苏木素染色液，其包括如下体积份数的组分：3-10％的苏木色精无水乙醇溶液100-300份，2-6％的硫酸铝水溶液1500-2000份，0.5-2％的高碘酸水溶液60-100份，冰乙酸15-30份。

2.根据权利要求1所述的无汞型环保苏木素染色液，包括如下体积份数的组分：3-10％的苏木色精无水乙醇溶液200份，2-6％的硫酸铝水溶液1775份，0.5-2％的高碘酸水溶液80份，冰乙酸25份。

3.根据权利要求1或2所述的无汞型环保苏木素染色液，其中，所述苏木色精无水乙醇溶液的浓度为5％。

4.根据权利要求1或2所述的无汞型环保苏木素染色液，其中，所述硫酸铝水溶液的浓度为4％。

5.根据权利要求1或2所述的无汞型环保苏木素染色液，其中，所述高碘酸水溶液的浓度为1％。

6.一种制备权利要求1-5所述无汞型环保苏木素染色液的方法，包括如下步骤：

1)按比例量取各组分；

2)将所述硫酸铝水溶液加热至摄氏60-100度；

3)加入所述苏木色精无水乙醇溶液，混匀；

4)再加入所述高碘酸溶液，混匀；

7.根据权利要求6所述的制备方法，其中步骤2)的温度为摄氏80度。

8.权利要求1-5任一项所述的无汞型环保苏木素染色液的应用，是用于病理组织学及动植物标本制作，用于常规病理诊断、免疫组织化学诊断技术、分子生物学诊断技术。