CN105136547B - 一种库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法，通过在库尔勒香梨花期时，采摘库尔勒香梨花丝固定在FAA液体中，更换三次FAA液体，并将装有花丝的固定液保存在4±0.5℃冰箱中，利用浸泡、包埋、修蜡块等技术制备获得样品切片，利用改良的苏木精染液对的切片进行染色，使得切片呈现黑色，并利用蒸馏水对切片进行洗色和利用氯化铝溶液对切片进行分色，从而制作永久切片，在温度为38℃‑42℃的烘箱烘烤永久切片12‑24h，直至永久切片烘干，用高倍显微镜拍照，观测库尔勒香梨花丝的细胞结构。本发明方法能够将库尔勒香梨花丝细胞的表皮细胞、花丝中层细胞和输导组织细胞清楚着色，明显区分，有立体染色效果。

Description

一种库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法

技术领域

本发明涉及生物细胞技术领域，具体涉及一种关于库尔勒香梨花丝细胞立体染色的技术领域。

背景技术

库尔勒香梨是蔷薇科梨亚科梨属新疆梨的一种，是新疆巴州地区和阿克苏地区的主栽果树品种，因香味浓郁、皮薄肉脆、清甜可口、细嫩多汁、营养丰富而闻名于世，已成为新疆重要的出口创汇果品之一。新疆林果办2011年数据显示，新疆库尔勒香梨栽培面积已达5.10万hm²，挂果面积约3.64万hm²，年产量约70万吨，销售以国内市场为主，产值约20亿元。库尔勒香梨有“果中王子”之称，具有保护心脏，减轻疲劳，增强心肌活力，降血压等多重功效，尤其能祛痰止咳，消热解暑，滋阴润肺，深受消费者青睐。库尔勒香梨果皮表面蜡质厚，成熟后微带红晕，肉白酥脆，多汁且果香浓郁，耐贮藏，甜度高，皮薄汁多，果点和锈斑少且小，肉质细脆，无公害或绿色产品逐年增多，是库尔勒香梨国内外市场的竞争优势。

研究发现，近几年香梨种植者为了追求高产，在管理过程中授粉树种搭配不合理，人工授粉时选用花粉种类不当，往往导致库尔勒香梨果实大小不一，果形不规则，粗皮现象严重，果皮着色不均匀，石细胞较多，可食用部分较少，果心微酸等现象发生。库尔勒香梨出现的上述现象和花粉发育状况、花粉质感有很重要的关系，而花丝是花粉发育过程中营养物质、水分、矿质元素以及激素等物质的重要运输通道，所以很有必要对花丝的细胞结构进行研究，为探明花粉发育过程奠定基础，为库尔勒香梨的繁殖生物学研究提供基础方法。

目前，国内科研工作者在研究库尔勒香梨花丝细胞结构中所使用的方法主要采用常见的艾氏苏木精整体染色法，但艾氏苏木精整体染色法配制溶液较为复杂，一般需要敞口后熟2个月以上，染色时间不宜把握，而且对纤维素染色较重，不能很好地观察花丝内部各种细胞的结构。

目前，关于操作简便的库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法，能使库尔勒香梨花丝的表皮细胞、中层细胞和输导组织结构清楚着色，各部分细胞区分明显的研究还未见报道。在中国专利公开号CN1280193A、CN103323313A、CN 103033409 A等这些文献中公开了细胞或某一种细胞的染色方法，但是，本领域熟知不同的植物其细胞结构差异性极大，对于同一植物不同器官的细胞结构也是具有明显的差异，现有报道的现有技术并不适用于库尔勒香梨花丝细胞的染色。因此在研究库尔勒香梨花丝细胞的立体染色方法时需要经过大量的劳动，并且需要付出创造性的劳动才能够获得，提供一种操作方法简单，染色时间易于控制，可适用于大规模机械化处理，同时节约时间和材料的库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法，具有现实的意义和作用。

发明内容

针对目前未见操作简便的库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法，使库尔勒香梨花丝的表皮细胞、中层细胞和输导组织结构清楚着色，各部分细胞区分明显的研究的技术现状，以及现有常见的艾氏苏木精整体染色法配制溶液较为复杂，一般需要敞口后熟2个月以上，染色时间不宜把握，而且对纤维素染色较重，不能很好地观察花丝内部各种细胞结构的缺点和不足，本发明旨在于提供一种库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法，能够将库尔勒香梨花丝细胞的表皮细胞、花丝中层细胞和输导组织细胞清楚着色，明显区分，有立体染色效果，且操作方法简单，染色时间易于控制，可适用于大规模机械化处理，同时节约时间和材料，不需要加盖载玻片即可直接观察，也可以经酒精溶液、二甲苯处理后制作成永久切片，用于研究库尔勒香梨花丝内部结构以及花丝在花粉发育过程中的作用。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

通过在库尔勒香梨花期时，从树体上采摘花丝固定在FAA液体中，更换三次FAA液体，并将装有花丝的固定液保存在4±0.5℃冰箱中，利用浸泡、包埋、修蜡块等技术制备获得样品切片，通过改进的苏木精染液对样品切片进行染色，使得切片呈现黑色，并利用蒸馏水对切片进行洗色和利用氯化铝溶液对切片进行分色，从而制作永久切片，在温度为38℃-42℃的烘箱烘烤永久切片12-24h，直至永久切片烘干，用高倍显微镜拍照，并观测库尔勒香梨花丝的细胞结构。其中，改进的苏木精染液为4%苏木精无水酒精溶液、30%过氧化氢溶液、碘-碘化钾溶液和10%硫酸铝钾溶液按照体积比20:1:15:10进行混合，静置1h制备而成，并且碘-碘化钾溶液制备为将30ml蒸馏水加热，加入1g碘化钾，待碘化钾充分溶解后，再加入1g碘，静置一个星期后获得。通过利用本发明方法对库尔勒香梨花丝细胞进行立体染色，并对其染色效果进行分析，能够将库尔勒香梨花丝细胞的表皮细胞、花丝中层细胞和输导组织细胞清楚着色，明显区分，有立体染色效果，且操作方法简单，染色时间易于控制，可适用于大规模机械化处理，同时节约时间和材料，可见，本发明方法获得了显著的技术效果。

具体地，本发明提供了一种库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法，具体的染色方法步骤如下：

（1）样品固定：在库尔勒香梨花期时，从树体上采摘花丝固定在FAA液体中，第3天更换一次FAA液体，第7天再更换一次FAA液体，第15天再更换一次FAA液体，并将装有花丝的固定液保存在4±0.5℃冰箱中。

所述的FAA液体为：分别配置60%酒精溶液和40%甲醛溶液，并按照体积比为60%酒精溶液:冰乙酸:40%甲醛溶液=90:5:5，将这三种液体混合，即为制备的FAA液体。

（2）切片处理：取出步骤（1）FAA液体中的样品，用50%的乙醇浸洗15min，50%的乙醇浸泡1.5h，70%的乙醇浸泡1.5h，80%的乙醇浸泡1.5h，90%的乙醇浸泡1.5h，更换90%的乙醇，再次浸泡1.5h，无水乙醇浸泡1h，更换无水乙醇，再次浸泡1h，无水乙醇和二甲苯混合溶液浸泡2h，二甲苯浸泡50 min，更换二甲苯溶液，再次浸泡50min，二甲苯和石蜡混合溶液在39℃恒温箱内浸泡12h，在62-63℃恒温箱内石蜡溶液中浸泡，每6 h换一次干净的、过滤过的石蜡溶液，一共更换3-5次，包埋，待纸盒内蜡液凝固后，自来水浸泡8h，晾干，修蜡块，用石蜡切片机将库尔勒香梨花丝切成12-14um厚，放到干净的载玻片上，滴水展片，40℃展片台展片1-2h，至蜡片完全展开，二甲苯脱蜡10min，在二甲苯和无水乙醇的混合溶液浸泡5min，95%体积的乙醇浸泡3min，90%的乙醇浸泡3min，80%的乙醇浸泡3min，70%的乙醇浸泡3min，50%的乙醇浸泡3min，30%的乙醇浸泡3min，蒸馏水浸泡1min。

所述的无水乙醇和二甲苯混合溶液：按照体积比为无水乙醇：二甲苯溶液=1:1的比例混合后的溶液。

所述的二甲苯和石蜡混合溶液混合溶液：按照体积比为二甲苯：石蜡溶液=1:1的比例混合后的溶液。

所述的包埋为：将蜡液中的库尔勒香梨花丝连同蜡液倒到纸盒中。

（3）染色：利用改良的苏木精染液对步骤（2）中处理好的切片进行染色，染色时间为20-30min，颜色呈现黑色。

所述的改进的苏木精染液：将4%苏木精无水酒精溶液、30%过氧化氢溶液、碘-碘化钾溶液和10%硫酸铝钾溶液按照体积比20:1:15:10进行混合，静置1h，即为制备获得改进的苏木精染液；其中碘-碘化钾溶液制备为将30ml蒸馏水加热，加入1g碘化钾，待碘化钾充分溶解后，再加入1g碘，静置一个星期后即可制备所得。

（4）脱色：用干净的蒸馏水浸泡步骤（3）染色后的载玻片，并来回移动蒸馏水中的载玻片，直到洗净载玻片上的染色液。

（5）分色：根据染色程度，用1%氯化铝溶液处理步骤（4）的载玻片30-50 s，至细胞结构清晰，再用双蒸水浸泡切片，洗去多余的1%氯化铝溶液。

（6）制作永久切片：将步骤（5）分色后的载玻片按照下述步骤进行处理，制备永久切片，即步骤（5）分色后的载玻片，90%的乙醇浸泡1min，95%的乙醇浸泡1min，无水乙醇浸泡3min，无水乙醇和二甲苯的混合溶液浸泡10min，二甲苯浸泡5min，更换二甲苯溶液，再次浸泡5min，中性树胶封片，制作成永久切片。

所述的无水乙醇和二甲苯混合溶液：按照体积比无水乙醇：二甲苯溶液为1:1的比例混合后的溶液。

（7）光学显微镜拍照和观测：在温度为38℃-42℃的烘箱烘烤步骤（6）制备的永久切片12-24h，直至永久切片烘干，用高倍显微镜拍照，并观测库尔勒香梨花丝的细胞结构。

通过实施本发明的具体的发明内容，可以达到以下的技术效果。

（1）本发明提供的一种库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法，能将库尔勒香梨花丝的表皮细胞、花丝中层细胞和输导组织细胞清楚着色，区分明显，具有立体染色效果，可用于研究库尔勒香梨花丝内部结构以及花丝在花粉发育过程中的作用，而传统的艾氏苏木精染色方法，对纤维素染色较重，不能很好地观察库尔勒香梨花丝细胞结构。

（2）本发明提供的一种库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法，相对于传统的艾氏苏木精染色方法，具有操作方法简单，染色时间易于控制的特点，可适用于大规模机械化处理，而传统的艾氏苏木精染色方法配制溶液较为复杂，一般需要敞口后熟2个月以上，染色时间不宜把握。

（3）本发明提供的一种库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法，能够节约时间和材料，同时不需要加盖载玻片即可直接观察，也可以经酒精溶液、二甲苯处理后制作成永久切片。

附图说明

图1显示为库尔勒香梨花丝的立体结构图，图中A为表皮细胞，B为输导组织，C为中层细胞。

具体实施方式

下面，举实施例说明本发明，但是，本发明并不限于下述的实施例。

本发明中选用的所有原辅材料、试剂和仪器、设备都为本领域熟知选用的，但不限制本发明的实施，其他本领域熟知的一些试剂和设备都可适用于本发明以下实施方式的实施，尤其利用本领域已熟知常规技术也落入本发明的保护范围。

实施例一：库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法

库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法具体染色步骤如下：

（1）样品固定：在库尔勒香梨花期时，从树体上采摘花丝固定在FAA液体中，第3天更换一次FAA液体，第7天再更换一次FAA液体，第15天再更换一次FAA液体，并将装有花丝的固定液保存在4±0.5℃冰箱中。

所述的FAA液体为：分别配置60%酒精溶液和40%甲醛溶液，并按照体积比为60%酒精溶液:冰乙酸:40%甲醛溶液=90:5:5，将这三种液体混合，即为制备的FAA液体。

（2）切片处理：取出步骤（1）FAA液体中的样品，用50%的乙醇浸洗15min，50%的乙醇浸泡1.5h，70%的乙醇浸泡1.5h，80%的乙醇浸泡1.5h，90%的乙醇浸泡1.5h，更换90%的乙醇，再次浸泡1.5h，无水乙醇浸泡1h，更换无水乙醇，再次浸泡1h，无水乙醇和二甲苯混合溶液浸泡2h，二甲苯浸泡50 min，更换二甲苯溶液，再次浸泡50min，二甲苯和石蜡混合溶液在39℃恒温箱内浸泡12h，在62-63℃恒温箱内石蜡溶液中浸泡，每6 h换一次干净的、过滤过的石蜡溶液，一共更换3-5次，包埋，待纸盒内蜡液凝固后，自来水浸泡8h，晾干，修蜡块，用石蜡切片机将库尔勒香梨花丝切成12-14um厚，放到干净的载玻片上，滴水展片，40℃展片台展片1-2h，至蜡片完全展开，二甲苯脱蜡10min，在二甲苯和无水乙醇的混合溶液浸泡5min，95%体积的乙醇浸泡3min，90%的乙醇浸泡3min，80%的乙醇浸泡3min，70%的乙醇浸泡3min，50%的乙醇浸泡3min，30%的乙醇浸泡3min，蒸馏水浸泡1min。

所述的无水乙醇和二甲苯混合溶液：按照体积比为无水乙醇：二甲苯溶液=1:1的比例混合后的溶液。

所述的二甲苯和石蜡混合溶液混合溶液：按照体积比为二甲苯：石蜡溶液=1:1的比例混合后的溶液。

所述的包埋为：将蜡液中的库尔勒香梨花丝连同蜡液倒到纸盒中。

（3）染色：利用改良的苏木精染液对步骤（2）中处理好的切片进行染色，染色时间为20-30min，颜色呈现黑色。

所述的改进的苏木精染液：将4%苏木精无水酒精溶液、30%过氧化氢溶液、碘-碘化钾溶液和10%硫酸铝钾溶液按照体积比20:1:15:10进行混合，静置1h，即为制备获得改进的苏木精染液；其中碘-碘化钾溶液制备为将30ml蒸馏水加热，加入1g碘化钾，待碘化钾充分溶解后，再加入1g碘，静置一个星期后即可制备所得。

（4）脱色：用干净的蒸馏水浸泡步骤（3）染色后的载玻片，并来回移动蒸馏水中的载玻片，直到洗净载玻片上的染色液。

（5）分色：根据染色程度，用1%氯化铝溶液处理步骤（4）的载玻片30-50 s，至细胞结构清晰，再用双蒸水浸泡切片，洗去多余的1%氯化铝溶液。

（6）制作永久切片：将步骤（5）分色后的载玻片按照下述步骤进行处理，制备永久切片，即步骤（5）分色后的载玻片，90%的乙醇浸泡1min，95%的乙醇浸泡1min，无水乙醇浸泡3min，无水乙醇和二甲苯的混合溶液浸泡10min，二甲苯浸泡5min，更换二甲苯溶液，再次浸泡5min，中性树胶封片，制作成永久切片。

所述的无水乙醇和二甲苯混合溶液：按照体积比无水乙醇：二甲苯溶液为1:1的比例混合后的溶液。

（7）光学显微镜拍照和观测：在温度为38℃-42℃的烘箱烘烤步骤（6）制备的永久切片12-24h，直至永久切片烘干，用高倍显微镜拍照，并观测库尔勒香梨花丝的细胞结构。

关于新发明新创造采用现有公知常识作为现有技术基础的问题。事实上，除了开创性的发明外，任何一项发明创造都是离不开现有技术手段和技术要素为基础，都是采用现有技术手段基础上经过进一步创新的结果。对于溶液的配制、样品的浸泡、切片的染色、载玻片的脱色和分色、光学显微镜的拍照和观测等作为技术要素或者说技术手段，都是现有技术基础，都是现有常见的技术手段，但是对于提供一种库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法，能够用于研究库尔勒香梨花丝细胞结构及花丝营养物质运输通路；如何能够将库尔勒香梨花丝细胞的表皮细胞、花丝中层细胞和输导组织细胞清楚着色，并能够区分明显，具有立体染色效果；如何使得染色时间更易掌握；如何使得库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法能够节约时间和材料等技术问题都需要经过系列不可预见的科学试验反复验证得出。正是由于这些原因，本申请虽然利用了常规技术手段，并在此基础上经过科学实验获得上述提供的库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法，能将库尔勒香梨花丝的表皮细胞、花丝中层细胞和输导组织细胞清楚着色，区分明显，具有立体染色效果，可用于研究库尔勒香梨花丝内部结构以及花丝在花粉发育过程中的作用，而传统的艾氏苏木精染色方法，对纤维素染色较重，不能很好地观察库尔勒香梨花丝细胞结构。相对于传统的艾氏苏木精染色方法，具有操作方法简单，染色时间易于控制的特点，可适用于大规模机械化处理，而传统的艾氏苏木精染色方法配制溶液较为复杂，一般需要敞口后熟2个月以上，染色时间不宜把握，并且使用本发明提供的库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法，能够节约时间和材料，同时不需要加盖载玻片即可直接观察，也可以经酒精溶液、二甲苯处理后制作成永久切片，本申请提供的技术方案相对于现有技术而言具有非显而易见性，获得显著良好的技术效果。

实施例二：库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法

在库尔勒香梨花期时，从树体上采摘花丝固定在FAA液体中，更换三次FAA液体，并将装有花丝的固定液保存在4±0.5℃冰箱中；将FAA液体中的样品进行切片处理，经乙醇、无水乙醇和二甲苯混合溶液、二甲苯、二甲苯和石蜡混合溶液、石蜡溶液、自来水、蒸馏水等溶液的浸泡以及包埋、修蜡块、脱蜡等处理后制备获得样品切片；利用改良的苏木精染液对的切片进行染色，染色时间为20-30min；用干净的蒸馏水浸泡染色后的载玻片，并来回移动蒸馏水中的载玻片，直到洗净载玻片上的染色液；根据染色程度，用1%氯化铝溶液处理，至细胞结构清晰，再用双蒸水浸泡切片，洗去多余的1%氯化铝溶液；并制作永久切片；在温度为38℃-42℃的烘箱烘烤永久切片12-24h，直至永久切片烘干，用高倍显微镜拍照，并观测库尔勒香梨花丝的细胞结构。

通过上述系列实施例提供的库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法，能将库尔勒香梨花丝细胞的表皮细胞、花丝中层细胞和输导组织细胞清楚着色，区分明显，并具有立体染色效果；同时本发明方法还具有节约时间和材料的优点，不需要加盖载玻片即可直接观察库尔勒香梨花丝细胞，也可以经酒精溶液、二甲苯处理后制作成永久切片。而传统艾氏苏木精染色方法配制溶液较为复杂，一般需要敞口后熟2个月以上，染色时间不宜把握，而且对纤维素染色较重，不能很好地观察库尔勒香梨花丝细胞结构。本发明提供的一种库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法具有操作方法简单，染色时间易于控制的特点，库尔勒香梨花丝细胞清楚着色，区分明显，可适用于大规模机械化处理。由此可见，本申请提供的库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法相对于现有技术而言对于库尔勒香梨的产业发展具有重要的作用和意义。

上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所延伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。

Claims (2)

1.一种库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法，其特征在于，具体方法步骤如下：

（1）样品固定：在库尔勒香梨花期时，从树体上采摘花丝固定在FAA液体中，第3天更换一次FAA液体，第7天再更换一次FAA液体，第15天再更换一次FAA液体，并将装有花丝的固定液保存在4±0.5℃冰箱中；

所述的FAA液体为：分别配置60%酒精溶液和40%甲醛溶液，并按照体积比为60%酒精溶液:冰乙酸:40%甲醛溶液=90:5:5，将这三种液体混合，即为制备的FAA液体；

（2）切片处理：取出步骤（1）FAA液体中的样品，用50%的乙醇浸洗15min，50%的乙醇浸泡1.5h，70%的乙醇浸泡1.5h，80%的乙醇浸泡1.5h，90%的乙醇浸泡1.5h，更换90%的乙醇，再次浸泡 1.5h，无水乙醇浸泡 1h，更换无水乙醇，再次浸泡 1h，无水乙醇和二甲苯混合溶液浸泡 2h，二甲苯浸泡 50 min，更换二甲苯溶液，再次浸泡 50min，二甲苯和石蜡混合溶液在39℃恒温箱内浸泡 12h，在 62-63℃恒温箱内石蜡溶液中浸泡，每 6 h 换一次干净的、过滤过的石蜡溶液，一共更换 3-5 次，包埋，待纸盒内蜡液凝固后，自来水浸泡 8h，晾干，修蜡块，用石蜡切片机将库尔勒香梨花丝切成 12-14um 厚，放到干净的载玻片上，滴水展片，40℃展片台展片 1-2h，至蜡片完全展开，二甲苯脱蜡 10min，在二甲苯和无水乙醇的混合溶液浸泡5min，95%体积的乙醇浸泡3min，90%的乙醇浸泡3min，80%的乙醇浸泡3min，70%的乙醇浸泡3min，50%的乙醇浸泡3min，30%的乙醇浸泡3min，蒸馏水浸泡1min；

所述的无水乙醇和二甲苯混合溶液：按照体积比为无水乙醇：二甲苯溶液=1:1的比例混合后的溶液；

所述的二甲苯和石蜡混合溶液：按照体积比为二甲苯：石蜡溶液=1:1的比例混合后的溶液；

所述的包埋为：将蜡液中的库尔勒香梨花丝连同蜡液倒到纸盒中；

（3）染色：利用改良的苏木精染液对步骤（2）中处理好的切片进行染色，染色时间为20-30min，颜色呈现黑色； 改良的苏木精染液制备为 4% 苏木精无水酒精溶液、30% 过氧化氢溶液、碘 - 碘化钾溶液和10% 硫酸铝钾溶液按照体积比 20:1:15:10 进行混合，静置 1h，即为制备的改良的苏木精染液；其中碘-碘化钾溶液制备为将30ml蒸馏水加热，加入1g碘化钾，待碘化钾充分溶解后， 再加入1g碘，静置一个星期后即可制备所得；

（4）脱色：用干净的蒸馏水浸泡步骤（3）染色后的载玻片，并来回移动蒸馏水中的载玻片，直到洗净载玻片上的染色液；

（5）分色：根据染色程度，用1%氯化铝溶液处理步骤（4）的载玻片30-50s，至细胞结构清晰，再用双蒸水浸泡切片，洗去多余的1%氯化铝溶液；

（6）制作永久切片：将步骤（5）分色后的载玻片按照下述步骤进行处理，制备永久切片，即步骤（5）分色后的载玻片，90%的乙醇浸泡1min，95%的乙醇浸泡1min，无水乙醇浸泡3min，无水乙醇和二甲苯的混合溶液浸泡 10min，二甲苯浸泡 5min，更换二甲苯溶液，再次浸泡5min，中性树胶封片，制作成永久切片；

所述的无水乙醇和二甲苯混合溶液：按照体积比无水乙醇：二甲苯溶液为1:1的比例混合后的溶液；

（7）光学显微镜拍照和观测：在温度为38℃-42℃的烘箱烘烤步骤（6）制备的永久切片12-24h，直至永久切片烘干，用高倍显微镜拍照，并观测库尔勒香梨花丝的细胞结构。

2.如权利要求1所述的一种库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法在库尔勒香梨花丝细胞染色中的应用。