CN116426142A - 一种苏木素染色液及其制备方法和应用 - Google Patents
一种苏木素染色液及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116426142A CN116426142A CN202310345726.8A CN202310345726A CN116426142A CN 116426142 A CN116426142 A CN 116426142A CN 202310345726 A CN202310345726 A CN 202310345726A CN 116426142 A CN116426142 A CN 116426142A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- hematoxylin
- staining
- shaking
- hematoxylin staining
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 166
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 title claims abstract description 69
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 88
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 41
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 33
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims abstract description 33
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- GPLRAVKSCUXZTP-UHFFFAOYSA-N diglycerol Chemical compound OCC(O)COCC(O)CO GPLRAVKSCUXZTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims abstract description 8
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 claims abstract description 8
- NALMPLUMOWIVJC-UHFFFAOYSA-N n,n,4-trimethylbenzeneamine oxide Chemical compound CC1=CC=C([N+](C)(C)[O-])C=C1 NALMPLUMOWIVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 7
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 239000011697 sodium iodate Substances 0.000 claims abstract description 7
- 229940032753 sodium iodate Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 235000015281 sodium iodate Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H aluminium sulfate (anhydrous) Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims abstract description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 28
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 26
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 19
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 claims description 14
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 12
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 11
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 10
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 10
- XGZVUEUWXADBQD-UHFFFAOYSA-L lithium carbonate Chemical compound [Li+].[Li+].[O-]C([O-])=O XGZVUEUWXADBQD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 9
- 229910052808 lithium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 9
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 8
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 7
- 239000008399 tap water Substances 0.000 claims description 7
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 claims description 7
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 6
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 5
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- -1 aluminum ions Chemical class 0.000 claims description 4
- DZGCGKFAPXFTNM-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydron;chloride Chemical compound Cl.CCO DZGCGKFAPXFTNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000008096 xylene Substances 0.000 claims description 4
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 claims description 3
- 238000005485 electric heating Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 abstract description 2
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 12
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 12
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 10
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 9
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 230000003035 anti-peroxidant effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000010198 maturation time Effects 0.000 description 1
- 229910000474 mercury oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- UKWHYYKOEPRTIC-UHFFFAOYSA-N mercury(ii) oxide Chemical compound [Hg]=O UKWHYYKOEPRTIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000005502 peroxidation Methods 0.000 description 1
- 125000000864 peroxy group Chemical group O(O*)* 0.000 description 1
- 239000012286 potassium permanganate Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 1
- 239000011241 protective layer Substances 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
- C09B65/00—Compositions containing mordants
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
- G01N2001/302—Stain compositions
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了一种苏木素染色液及其制备方法和应用，所述苏木素染色液包括以下质量百分数的原料：苏木素0.4％‑0.6％、柠檬酸0.02％‑0.04％、双甘油25％‑30％、乙酸1.4％‑1.8％、氧化铝0.02％‑0.04％、碘酸钠0.5％‑0.7％、无水乙醇16％‑18％、惰性二氧化硅0.8％‑1.2％、硫酸铝2.8％‑3.5％、蒸馏水44.12％‑53.06％。所述制备方法包括以下步骤：将苏木素、无水乙醇溶解后得到溶液1；双甘油、硫酸铝、一半蒸馏水溶解后得到溶液2；惰性二氧化硅、碘酸钠、另外一半蒸馏水溶解得到溶液3，加入硅油、柠檬酸得到溶液5；将溶液1、溶液2、溶液5混合得到溶液6；将溶液6加入乙酸，即得苏木素染色液。因此，本发明苏木素染色液配制操作简便、经久耐用、染色效果好、结果准确。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及一种苏木素染色液及其制备方法和应用。
背景技术
苏木素染色液应用于生物医学技术领域已有很长历史，是一种组织、细胞染色的最经典方法，目前没有更好的染色剂替代。苏木素染色液的制备采用自然氧化和人工氧化两种方法。
其中，自然氧化法虽操作较为简便，无需加热过程，能够有效避免过度氧化问题，但自然氧化需要很长时间，无法确定氧化成熟时间，故无法满足临床使用需求。目前氧化剂氧化法多采用氧化汞、高锰酸钾、碘酸钠、过氧化氢，能够快速将苏木素氧化成熟，满足临床使用时效性；但是存在诸多不足之处，其一、目前大多都是直接加入氧化剂氧化，由于苏木素原料与氧化剂的纯度各不相同，使得氧化剂的量无法做到精确，但氧化后又无法去除多余氧化剂，在产品储存期间使苏木素其他羟基也被氧化成羰基而散失染色能力；其二、即便氧化剂控制在低于消耗量，但大多产品中防过氧化保护剂不能从分子角度闭合保护，故产品在使用过程或存储中会与氧气接触产生过氧金属膜，该金属膜附着在标本上很难清洗干净，因而影响标本染色质量；其三、在氧化过程中温度、时间很难掌握精准，导致产品质量参差不齐，影响染色效果。
发明内容
本发明的目的在于提供一种苏木素染色液及其制备方法和应用，其能够快速有效的对组织、脱落细胞染色。
在本发明的一个方面，本发明提出了一种苏木素染色液。根据本发明的实施例，苏木素染色液包括以下质量百分数的组分：
另外，根据本发明上述实施例的一种苏木素染色液，还可以具有如下附加的技术特征：
在本发明的一些实施例中，苏木素染色液由以下质量百分数的原料组成：
在本发明的一些实施例中，所述惰性二氧化硅的粒径为7000目-9000目。
在本发明的另一方面，本发明提出了一种苏木素染色液的制备方法。根据本发明的实施例，所述制备方法包括以下步骤：
1)称取苏木素、无水乙醇于容器1中，搅拌充分溶解后得到溶液1；
2)称取双甘油、硫酸铝、一半蒸馏水于容器2中，搅拌充分溶解后进行振摇，得到溶液2，溶液2为吸附金属铝离子双甘油溶液；
3)称取惰性二氧化硅、碘酸钠、另外一半蒸馏水于容器3中，搅拌充分溶解后进行振摇，得到溶液3；
4)称取硅油加入上述溶液3中，搅拌充分溶解后进行振摇，得到溶液4；
5)称取柠檬酸加入上述溶液4中，搅拌充分溶解，得到溶液5，溶液5为负载氧化剂的惰性氧化颗粒溶液；
6)将上述溶液1倒入溶液2中，边倒入边搅拌使其充分混合，然后加热至沸腾后停止加热，将上述溶液5边倒入沸腾溶液边用玻璃棒搅拌，待无气泡产生时继续加热沸腾，溶液颜色变为深紫红色时停止加热，冷却得到溶液6；
7)将溶液6过滤后，称取乙酸加入，搅拌充分混匀后，即得所述苏木素染色液。
另外，根据本发明上述实施例的一种苏木素染色液的制备方法，还可以具有如下附加的技术特征：
在本发明的一些实施例中，搅拌采用玻璃棒进行。
在本发明的一些实施例中，振摇采用恒温摇床，所述步骤2)中，振摇温度为35℃-40℃，振摇时间为1h-1.5h；所述步骤3)中，振摇温度为53℃-60℃，振摇时间为1h-1.5h；所述步骤4)中，振摇温度为53℃-60℃，振摇时间为25min-35min。
在本发明的一些实施例中，所述步骤6)中，加热采用电热炉进行，冷却采用自然冷却或流水冷却。
在本发明的一些实施例中，所述步骤7)中，过滤采用0.8微米滤纸。
在本发明的一些实施例中，所述步骤7)中，将苏木素染色液置于密闭瓶中保存。
在本发明的另一方面，本发明提出了一种组织或脱落细胞的染色方法。根据本发明的实施例，包括以下步骤：
1)将组织的脱蜡切片或脱落细胞涂片进行清洗；
2)然后利用权利要求1或2所述的苏木素染色3-5分钟后，自来水冲洗2-3分钟；
3)用1％盐酸乙醇溶液分化3-5秒；
4)用碳酸锂溶液蓝化30秒，自来水洗1-2分钟，即完成组织或脱落细胞的染色。
另外，根据本发明上述实施例的一种组织或脱落细胞的染色方法，还可以具有如下附加的技术特征：
在本发明的一些实施例中，所述步骤1)中，切片的脱蜡方法为将石蜡切片于二甲苯I、Ⅱ中各脱蜡5-8分钟，清洗方法为经无水乙醇和95％乙醇清洗各1-2分钟，再经80％乙醇清洗1-2分钟，自来水冲洗1-2分钟；
所述步骤3)中，1％盐酸乙醇溶液为99ml75％乙醇与1ml浓盐酸的混合溶液；
所述步骤4)中，碳酸锂溶液为100ml蒸馏水与13.3g碳酸锂的混合溶液。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
(1)本发明通过制备碘酸钠、硅油与惰性二氧化硅形成惰性氧化颗粒，硫酸铝与双甘油形成吸附金属铝离子双甘油，在氧化过程中当苏木素分子上一个羟基被氧化成羰基，羰基迅速与吸附金属铝离子双甘油中铝离子结合，在此过程中双甘油四个羟基与苏木素分子中其他四个羟基以氢键结合形成完全闭合保护层，不会再被氧化剂氧化，而且在反应完成冷却后将惰性氧化颗粒过滤去除，因此既保证在配制过程中苏木素完全被氧化而不会过氧化，又去除了多余氧化剂避免了在存储期间对染色液的破坏。从氧化剂形态和形成双甘油分子保护层双向角度保护了苏木素染色液在制备时和长期储存的稳定性。本发明制备过程不受氧化剂、温度、时间等难以控制的条件影响，延长了储存稳定时间，提高了使用率，降低了成本，且染色效果稳定。
(2)在染色过程中染色液中结合带正电荷碱性苏木素与组织或脱落细胞中带负电荷呈酸性的DNA以离子键或氢键牢牢结合从而被染色；另外，染色液中加入了柠檬酸与乙酸调节染色液的pH，有效避免染色液与蛋白质之间结合产生干扰，组织或脱落细胞染色后在显微镜下镜检观察细胞核呈蓝紫色。
(3)本发明的苏木素染色液能够长期保存。
附图说明
图1为本发明实施例2中制得的苏木素染色液配制当天对宫颈脱落细胞染色的结果图；
图2为本发明实施例2中制得的苏木素染色液配制当天对动物组织切片染色的结果图；
图3为本发明实施例2中制得的苏木素染色液在12个月后对宫颈脱落细胞染色的结果图；
图4为本发明实施例2中制得的苏木素染色液在12个月后对动物组织切片染色的结果图；
图5为本发明实施例2中制得的苏木素染色液在24个月后对宫颈脱落细胞染色的结果图；
图6为本发明实施例2中制得的苏木素染色液在24个月后对动物组织切片染色的结果图。
图7为本发明实施例3中制得的苏木素染色液配制当天对宫颈脱落细胞染色的结果图；
图8为本发明实施例3中制得的苏木素染色液配制当天对动物组织切片染色的结果图；
图9为本发明实施例3中制得的苏木素染色液在12个月后对宫颈脱落细胞染色的结果图；
图10为本发明实施例3中制得的苏木素染色液在12个月后对动物组织切片染色的结果图；
图11为本发明实施例3中制得的苏木素染色液在24个月后对宫颈脱落细胞染色的结果图；
图12为本发明实施例3中制得的苏木素染色液在24个月后对动物组织切片染色的结果图。
图13为本发明实施例4中制得的苏木素染色液配制当天对宫颈脱落细胞染色的结果图；
图14为本发明实施例4中制得的苏木素染色液配制当天对动物组织切片染色的结果图；
图15为本发明实施例4中制得的苏木素染色液在12个月后对宫颈脱落细胞染色的结果图；
图16为本发明实施例4中制得的苏木素染色液在12个月后对动物组织切片染色的结果图；
图17为本发明实施例4中制得的苏木素染色液在24个月后对宫颈脱落细胞染色的结果图；
图18为本发明实施例4中制得的苏木素染色液在24个月后对动物组织切片染色的结果图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种苏木素染色液，由以下质量百分数(％)的原料组成：
实施例2
一种苏木素染色液的制备方法，包括以下步骤：
1)用电子天平准确称取苏木素0.5g、无水乙醇17.5g于500ml三角烧瓶中，用玻璃棒轻轻搅拌充分溶解后盖上塞子，此为溶液1；
2)用电子天平准确称取双甘油28g、硫酸铝3.1g、称取蒸馏水(二分之一)28.82于500ml三角烧瓶中，用玻璃棒搅拌充分溶解，放置于37℃恒温摇床，缓慢振摇1小时取出，即制备了吸附金属铝离子双甘油溶液，此为溶液2；
3)用电子天平准确称取惰性二氧化硅8000目1.0g、碘酸钠0.6g、蒸馏水(二分之一)28.82g于500ml三角烧瓶中，用玻璃棒搅拌充分溶解，放置于56℃恒温摇床，缓慢振摇1小时取出，此为溶液3；
4)用电子天平准确称取硅油0.03g加入上述溶液3中，用玻璃棒搅拌充分溶解，放置于56℃恒温摇床，缓慢振摇30分钟取出，此为溶液4；
5)用电子天平准确称取柠檬酸0.03g加入上述溶液4中，用玻璃棒搅拌充分溶解，即制备了负载氧化剂的惰性氧化颗粒溶液，此为溶液5；
6)将上述溶液1缓慢倒入溶液2中，边倒入边搅拌使其充分混合后，于电热炉上加热至沸腾后，从电热炉取下，将上述溶液5缓慢边倒边用玻璃棒搅拌，待无气泡产生时放置于电热炉继续加热沸腾，待溶液颜色变为深紫红色时从电热炉取下，自然冷却或流水冷却，此为溶液6；
7)将冷却后溶液6用0.8微米滤纸过滤后，用电子天平准确称取乙酸1.6g加入，用玻璃棒搅拌充分混匀后，即得苏木素染色液，置于密闭瓶中保存。
实施例3
一种苏木素染色液，由以下质量百分数(％)的原料组成：
所述实施例3中的一种苏木素染色液的制备方法，其步骤采用实施例2所包括的步骤。
实施例4
一种苏木素染色液，由以下质量百分数(％)的原料组成：
所述实施例4中的一种苏木素染色液的制备方法，其步骤采用实施例2所包括的步骤。
应用例
组织、脱落细胞染色的染色方法，包括以下步骤：
1)石蜡切片于二甲苯I、Ⅱ中各脱蜡7分钟，以保证充分脱蜡；
2)将组织的脱蜡切片或脱落细胞涂片经无水乙醇和95％乙醇各2分钟，再经80％乙醇1分钟，自来水冲洗2分钟；
3)苏木素染色4分钟后，自来水冲洗2分钟；
4)用1％盐酸乙醇溶液分化数秒(1％盐酸乙醇溶液配制：99ml75％乙醇加1ml浓盐酸)；
5)用碳酸锂溶液(碳酸锂溶液配制：100ml蒸馏水中加入13.3克碳酸锂)蓝化30秒，自来水洗1分钟，即完成本发明苏木素染色液染色。
在染色过程中染色液中结合带正电荷碱性苏木素与组织或脱落细胞中带负电荷呈酸性的DNA以离子键或氢键牢牢结合从而被染色；另外，染色液中加入了柠檬酸与乙酸调节染色液的pH，有效避免染色液与蛋白质之间结合产生干扰，组织或脱落细胞染色后在显微镜下镜检观察细胞核呈蓝紫色。
取当天配置的、配置12个月后的、配置24个月后的实施例2、3、4中的苏木素染色液，按照上述方法对动物组织切片和宫颈脱落细胞样本进行染色实验。
如图1、图2、图3、图4、图5和图6所示，实施例2所得苏木素染色液在配制当天、12个月、24个月后观察结果没有差别。
如图7、图8、图9、图10、图11和图12所示，实施例3所得苏木素染色液在配制当天、12个月、24个月后观察结果没有差别。
如图13、图14、图15、图16、图17和图18所示，实施例4所得苏木素染色液在配制当天、12个月、24个月后观察结果没有差别。
说明本发明惰性氧化颗粒能使苏木素氧化与双甘油能够形成分子保护层对氧化苏木素进行封闭式包裹，使氧化苏木素不与外界的氧化性物质(氧化剂、溶解氧)接触，很好的保护了氧化苏木素其余羟基，使本发明制得的苏木素染色液有效成分持久稳定。
以上内容仅仅是对本发明结构所作的举例和说明，所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离本发明的结构或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种苏木素染色液，其特征在于，包括以下质量百分数的组分：
2.根据权利要求1所述的一种苏木素染色液，其特征在于，由以下质量百分数的原料组成：
3.根据权利要求1或2所述的一种苏木素染色液，其特征在于：所述惰性二氧化硅的粒径为7000目-9000目。
4.一种根据权利要求1或2所述的苏木素染色液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)称取苏木素、无水乙醇于容器1中，搅拌充分溶解后得到溶液1；
2)称取双甘油、硫酸铝、一半蒸馏水于容器2中，搅拌充分溶解后进行振摇，得到溶液2，溶液2为吸附金属铝离子双甘油溶液；
3)称取惰性二氧化硅、碘酸钠、另外一半蒸馏水于容器3中，搅拌充分溶解后进行振摇，得到溶液3；
4)称取硅油加入上述溶液3中，搅拌充分溶解后进行振摇，得到溶液4；
5)称取柠檬酸加入上述溶液4中，搅拌充分溶解，得到溶液5，溶液5为负载氧化剂的惰性氧化颗粒溶液；
6)将上述溶液1倒入溶液2中，边倒入边搅拌使其充分混合，然后加热至沸腾后停止加热，将上述溶液5边倒入沸腾溶液边用玻璃棒搅拌，待无气泡产生时继续加热沸腾，溶液颜色变为深紫红色时停止加热，冷却得到溶液6；
7)将溶液6过滤后，称取乙酸加入，搅拌充分混匀后，即得所述苏木素染色液。
5.根据权利要求4所述的一种苏木素染色液的制备方法，其特征在于：搅拌采用玻璃棒进行。
6.根据权利要求4所述的一种苏木素染色液的制备方法，其特征在于：振摇采用恒温摇床，所述步骤2)中，振摇温度为35℃-40℃，振摇时间为1h-1.5h；所述步骤3)中，振摇温度为53℃-60℃，振摇时间为1h-1.5h；所述步骤4)中，振摇温度为53℃-60℃，振摇时间为25min-35min。
7.根据权利要求4所述的一种苏木素染色液的制备方法，其特征在于：所述步骤6)中，加热采用电热炉进行，冷却采用自然冷却或流水冷却。
8.根据权利要求4所述的一种苏木素染色液的制备方法，其特征在于：所述步骤7)中，过滤采用0.8微米滤纸，将苏木素染色液置于密闭瓶中保存。
9.一种组织或脱落细胞的染色方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将组织的脱蜡切片或脱落细胞涂片进行清洗；
2)然后利用权利要求1或2所述的苏木素染色3-5分钟后，自来水冲洗2-3分钟；
3)用1％盐酸乙醇溶液分化3-5秒；
4)用碳酸锂溶液蓝化30秒，自来水洗1-2分钟，即完成组织或脱落细胞的染色。
10.根据权利要求9所述的一种组织或脱落细胞的染色方法，其特征在于：
所述步骤1)中，切片的脱蜡方法为将石蜡切片于二甲苯I、Ⅱ中各脱蜡5-8分钟，清洗方法为经无水乙醇和95％乙醇清洗各1-2分钟，再经80％乙醇清洗1-2分钟，自来水冲洗1-2分钟；
所述步骤3)中，1％盐酸乙醇溶液为99ml75％乙醇与1ml浓盐酸的混合溶液；
所述步骤4)中，碳酸锂溶液为100ml蒸馏水与13.3g碳酸锂的混合溶液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310345726.8A CN116426142A (zh) | 2023-04-03 | 2023-04-03 | 一种苏木素染色液及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310345726.8A CN116426142A (zh) | 2023-04-03 | 2023-04-03 | 一种苏木素染色液及其制备方法和应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116426142A true CN116426142A (zh) | 2023-07-14 |
Family
ID=87093800
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310345726.8A Pending CN116426142A (zh) | 2023-04-03 | 2023-04-03 | 一种苏木素染色液及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116426142A (zh) |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1328259A (zh) * | 2000-06-12 | 2001-12-26 | 韩亚京 | 一种氧化苏木色精液及其制备方法和用途 |
| CN102167914A (zh) * | 2011-01-21 | 2011-08-31 | 哈尔滨格林标本技术开发有限公司 | 无汞型环保苏木素染色液 |
| CN105954085A (zh) * | 2016-05-20 | 2016-09-21 | 北京九州柏林生物科技有限公司 | 无汞苏木素染色液 |
| WO2017108551A1 (en) * | 2015-12-21 | 2017-06-29 | L'oreal | Hair dyeing process using natural dye, oxidizing agent, fatty substances and surfactants, composition and kit comprising the ingredients |
| CN108414328A (zh) * | 2018-04-04 | 2018-08-17 | 南京烁朴生物科技有限公司 | 一种改良型苏木精染色液试剂、制备方法和染色方法 |
| CN108531540A (zh) * | 2017-03-06 | 2018-09-14 | 哈尔滨格林标本技术开发有限公司 | 一种新型无汞环保苏木素染液及其制备方法 |
| CN110735333A (zh) * | 2019-11-13 | 2020-01-31 | 常州大学 | 小分子天然染料的新型染-固色方法 |
| CN113218731A (zh) * | 2021-05-19 | 2021-08-06 | 深圳市贝安特医疗技术有限公司 | 一种苏木素染液及其制备方法 |
| CN114608923A (zh) * | 2022-04-01 | 2022-06-10 | 深圳市心阳医疗健康产业有限公司 | 一种提高染色效率的苏木素染液及其制备方法 |
-
2023
- 2023-04-03 CN CN202310345726.8A patent/CN116426142A/zh active Pending
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1328259A (zh) * | 2000-06-12 | 2001-12-26 | 韩亚京 | 一种氧化苏木色精液及其制备方法和用途 |
| CN102167914A (zh) * | 2011-01-21 | 2011-08-31 | 哈尔滨格林标本技术开发有限公司 | 无汞型环保苏木素染色液 |
| WO2017108551A1 (en) * | 2015-12-21 | 2017-06-29 | L'oreal | Hair dyeing process using natural dye, oxidizing agent, fatty substances and surfactants, composition and kit comprising the ingredients |
| CN105954085A (zh) * | 2016-05-20 | 2016-09-21 | 北京九州柏林生物科技有限公司 | 无汞苏木素染色液 |
| CN108531540A (zh) * | 2017-03-06 | 2018-09-14 | 哈尔滨格林标本技术开发有限公司 | 一种新型无汞环保苏木素染液及其制备方法 |
| CN108414328A (zh) * | 2018-04-04 | 2018-08-17 | 南京烁朴生物科技有限公司 | 一种改良型苏木精染色液试剂、制备方法和染色方法 |
| CN110735333A (zh) * | 2019-11-13 | 2020-01-31 | 常州大学 | 小分子天然染料的新型染-固色方法 |
| CN113218731A (zh) * | 2021-05-19 | 2021-08-06 | 深圳市贝安特医疗技术有限公司 | 一种苏木素染液及其制备方法 |
| CN114608923A (zh) * | 2022-04-01 | 2022-06-10 | 深圳市心阳医疗健康产业有限公司 | 一种提高染色效率的苏木素染液及其制备方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 俞善丁: "肺针吸细胞学的快速染色技术", 国际检验医学杂志, no. 01, 25 January 1984 (1984-01-25), pages 50 * |
| 刘同慎;李冰;: "HE染色程序的使用和维护", 生物学通报, no. 04, 20 April 2013 (2013-04-20), pages 55 - 56 * |
| 黎红;周伟;茹景顺;: "一种再改良的Harris苏木素染液的最新配制法", 海南医学, no. 07, 28 July 2006 (2006-07-28), pages 139 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0133102B1 (fr) | Composition de polissage à base de cérium et son procédé de fabrication | |
| EP3264095B1 (en) | Kit for hematoxylin and eosin staining | |
| EP2731919B1 (en) | Chemically durable porous glass with enhanced alkaline resistance | |
| CN103993319A (zh) | 铝和铝铜合金宏观组织的腐蚀剂及显示方法 | |
| JP4477052B2 (ja) | 金属ナノ粒子無機複合体の製造方法および金属ナノ粒子無機複合体 | |
| CN111925132A (zh) | 一种抗菌玻璃及其制备方法 | |
| CN106770226A (zh) | 一种用于观察植物花药发育结构变化的染色方法 | |
| CN116426142A (zh) | 一种苏木素染色液及其制备方法和应用 | |
| JPH06191877A (ja) | 偏光ガラス | |
| KR20190123237A (ko) | 비침지 방식을 통한 유리의 이온교환 방법 | |
| CN112781963A (zh) | 巴氏染色液及其制备方法与染色方法 | |
| CN109632434B (zh) | 一种低毒低刺激的考马斯亮蓝快速染色液及染色脱色方法 | |
| CN109490049A (zh) | 一种苏木素染色液及配制方法 | |
| US9994714B2 (en) | Silica protected pigments for use in artist media | |
| Warthin et al. | The staining of spirochetes in cover-glass smears by the silver-agar method | |
| CN106769354B (zh) | 用于铝合金金相试样的抛光方法 | |
| US2581523A (en) | Method of staining slides and staining solutions therefor | |
| CN113281132A (zh) | 一种稳定剂及其制备方法、应用 | |
| EP4332064A1 (en) | Lithium niobate solution and method for producing same | |
| Wang et al. | Preparation of nano zinc oxide composite porous membrane and its material regulation | |
| CN106966480A (zh) | 一种提高绿色合成纳米零价铁降解结晶紫染料废水能力的方法其应用 | |
| CN107555784B (zh) | 一种含铯光学玻璃及其制备方法与应用 | |
| CN102424973A (zh) | 一种鎳銅合金金相腐蚀剂 | |
| CN111413289B (zh) | 苏木素染色液氧化程度的监控方法、苏木素染色液的质量控制方法 | |
| CN113790945A (zh) | 一种改良的苏木精染液及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |