CN109490049A - 一种苏木素染色液及配制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种生物医学试剂领域，特别涉及一种苏木素染色液及配制方法。本发明配方用量合理，染色效果理想。本发明提供的苏木素染色液染出的组织切片细胞核着色好、组织结构清晰，经伊红复染后的组织片颜色鲜艳对比强，易观察，染色效果理想。本发明提供的苏木素染色液染色方法，简便易操作，配制过程无需加热，染色过程安全，不会污染组织片。
Description
技术领域
本发明涉及一种生物医学试剂领域，特别涉及用于医学生物细胞及组织的一种苏木素染色液及染色方法的应用试剂。
背景技术
苏木素染色法应用于生物学染色已有100多年历史,是组织化学和免疫组织化学中最常用的染色方法之一,广泛用于组织切片或培养细胞的染色，以及与免疫组织化学、免疫细胞化学、免疫荧光、原位杂交等配合使用。苏木素染色液主要用于显示各种组织正常成分和病变的一般形态结构，进行全面观察。苏木素染色是生物学、组织学、病理学及细胞学等学科必不可少的最基本的染色方法。在病理诊断、教学与科研中广泛应用，具有重要价值。如常用的Hat.ris氏配制法,其配方如下:A液:苏木素1g.无水乙醇10ml,B液:明矾20g。蒸溜水200ml,二液混合后煮沸再加氧化汞0.5g；隔日过滤后加2％～5％冰乙酸。其配制方法为先将苏木素溶于无水乙醇中，备用。把明矾放入蒸馏水，加热溶解，再加入备用的苏木素，煮沸2分钟，先加入少量的氧化汞，防止氧化过程中苏木素外溢，玻棒搅拌，然后，边搅拌边加入氧化汞。加完后，立即移至冰水中，加速其冷却，静置一夜后，过滤。以2％～5％的比例加入冰醋酸。室温不同，氧化的时间也不同，一般需要三个月左右，用前过滤加冰醋酸。每次过滤染液均有一定量的明矾析出,且在加冰乙酸时常发生乳白色絮状物出现。
细胞中的细胞核是由酸性物质组成，它与碱性染料(苏木素)的亲和力较强，因此，细胞或组织切片经苏木素染色液染色后，细胞核被苏木素染成鲜明的蓝紫色。几乎所有的常规切片、冷冻切片、涂片以及免疫组化后的复染均使用这种染液，它有很多优点，但也有不尽人意的地方，如使用期短，染片量多时约一个月就得更换一次；氧化结晶多，每次使用必须过滤，否则有一种发光的结晶物沉淀在切片上，推测这种物质可能是氧化汞在氧化过程中的产物。另外，配制过程较复杂，且氧化汞有一定的毒害性。在配制中存在如下四个问题：一是需火源煮沸，二是使用的氧化剂为氧化汞，易造成环境污染及对人体健康产生不良影响，三是配制过程较复杂不易掌握氧化程度，四是苏木素用量大易产生大量的氧化物漂浮于染液表面，玷污切片，不易洗净。
基于上述缺陷，本领域技术人员研究了大量的改良配方，使各种组织或细胞的一般形态、结构特点和病变的发生、发展及修复过程，在质量较佳的HE染色切片上，基本上都可以观察到。即使是要采取相应特殊染色方法一般也是在观察HE染色切片的基础上提出的。组化和免疫组化通常也要HE染色做对比。因此，如何提高HE染色质量，苏木素染液的配制方法是其关健因素。
发明内容
为弥补现有技术的不足，本发明提供一种简便易操作.易配制且配制过程不用加热，染色效果良好及操作方便快速的苏木素染色液。
本发明采用如下技术方案：一种苏木素染色液包括A液和B液。
每500mlA液(苏木素液)包括以下组成成分：
苏木素(hematoxylin)2-4.5g；
无水乙醇200ml；
碘酸钾0.10～0.36g；
钾明矾或氨明矾或Al2(SO4)3·18H2O 4.7～50g；
柠檬酸2～3ml；
亚硝酸钠1.1～2.2g；
蒸馏水 余量；
每500ml B液包括以下组成成分：
甘油70-80ml；
聚氧乙烯型非离子表面活性剂X-100 0.05～1.7g；
无水乙醇20～30ml；
1％山梨酸钾1～3ml；
蒸馏水 余量。
上述苏木素染色液的配制方法为：
(1)制备A液：将适量苏木素和无水乙醇混合溶解，取1000ml玻璃容器加入蒸馏水适量和明矾，适当搅动，完全溶解后再顺序加入适量的碘酸钾和亚硝酸钠、柠檬酸充分混合，搅匀；冷却过滤，加入柠檬酸，加蒸馏水到500ml；
(2)制备B液:将甘油70-80ml，聚氧乙烯型非离子表面活性剂X-1000.05～1.7g，无水乙醇20～30ml，1％山梨酸钾1～3ml混合，补加蒸馏水到500ml；
(3)待A液制备48小时以后与B液按1:1的体积比混合即完成染液的配制。
考虑到本发明染色液的特点，所述A液、B液可以独立包装，每个配套试剂包装为A液100ml，B液100ml。A液，B液包装全部隔绝空气密封，该包装也可以由若干个小包装组成。有效期为密封状态下1年，开口混合后6个月。
本发明染色液的使用方式为：打开A、B液，混合于A液瓶(200ml容积)中，充分混匀后使用，存放于室温阴凉处。
配制苏木素染液的氧化剂有如下的反应式：
6C16H14O6 + 2KIO3→6C16H12O6+I2+6H2O+2K+
摩尔质量 302.28×6 214×2
质量 1g 0.236g
发明人考虑到苏木素纯度有限，同时染液的存放需半氧化的状态，且过度的氧化会失去效果，因此，调节A液、B液的组成和比例是关键因素。为了增加染液的有效期时间，本发明加入的碘酸钾量为0.10-0.36g。钾明矾或氨明矾的量会影响到染液的沉淀与否。柠檬酸的量能影响到染液的组织着色程度，可直接影响苏木素的着色能力和清晰度，柠檬酸的量加少了，会造成核浆共染，背景不干净；加多了，核着色能力下降，因此，本发明加柠檬酸2～3ml。为了保持染液的稳定状态和染液的均匀及加速渗透，发明人取甘油70-80ml，聚氧乙烯型非离子表面活性剂X-1000.05～1.7g，乙醇20～30ml，1％山梨酸钾1～3ml。
传统苏木素染色液的制备过程中通常加入氧化汞，它会立即反应升温并释放氧气，容易引起爆炸。本发明采用碘酸钾和亚硝酸钠代替了氧化汞可以减缓氧化作用。避免了现有技术中加氧化剂时不易掌握温度而使染液过氧化其表面出现氧化膜污染组织片。加入本发明的染色液，溶液的颜色从紫色将逐渐变成深红色，苏木素的成熟速度减缓并能保持长时间的染色均匀效果，本发明配方的各种试剂用量合理，染色效果理想。
本发明提供的苏木素染色液染出的组织切片细胞核着色好、组织结构清晰，经伊红复染后的组织片颜色鲜艳对比强，易观察，染色效果理想。本发明提供的苏木素染色液染色方法，简便易操作，配制过程无需加热，染色过程安全，不会污染组织片。
附图说明
图1为实施例1细胞染色图；
图2为实施例2细胞染色图。
具体实施方式
下面通过具体实施例详述本发明，但不限制本发明的保护范围。如无特殊说明，本发明所采用的实验方法均为常规方法，所用实验器材、材料、试剂等均可从化学公司购买。
实施例1
A液：将适量苏木精2.5g和纯乙醇200ml混合溶解，取1000ml烧杯加入适量蒸馏水和明矾8.5g，适当搅动，完全溶解后再按一定的顺序加入碘酸钾0.29g、柠檬酸2.2ml。亚硝酸钠1.5g。充分混合，最后，补加蒸馏水到500ml。搅匀。冷却过滤，加入柠檬酸2.2ml。
B液(稳定助染剂)：取甘油72ml，聚氧乙烯型非离子表面活性剂0.94g，乙醇20ml,1％山梨酸钾溶液2ml混合均匀溶解完全后放置。
在A液制备好放置48小时后加入B液，此时溶液呈深紫红色，即是所述配制的一种苏木素染色液。储存条件：本试剂应避光贮存在相对湿度不大于80％，无腐蚀性气体和通风良好的5℃～25℃环境。
用此配方而制备的苏木素染色液，对组织切片进行染色。如图1所示，细胞核为鲜蓝色；经伊红复染后的组织切片颜色鲜艳对比强，易观察。
实施例2
A液：将适量苏木精3.3g和纯乙醇200ml混合溶解,取1000ml烧杯加入适量蒸馏水和明矾15.5g，适当搅动，完全溶解后再接一定的顺序加入碘酸钾0.35g、亚硝酸钠1.9g。充分混合，最后，补加蒸馏水到500ml。搅匀。冷却过滤，加入柠檬酸2.7ml。
B液(稳定助染剂):取甘油80ml，聚氧乙烯型非离子表面活性剂1.9g，乙醇20ml,1％山梨酸钾溶液2.5ml混合均匀溶解完全后放置。
在A液制备好放置48小时后加入B液，此时溶液呈深紫红色，即是所述配制的一种苏木素染色液。储存条件：本试剂应避光贮存在相对湿度不大于80％，无腐蚀性气体和通风良好的5℃～25℃环境。
用此配方而制备的苏木素染色液，在对病理组织切片进行检测时。把组织切片进行染色后。如图2所示，细胞核为鲜紫蓝色；经伊红复染后的组织切片颜色鲜艳对比强，易观察。
以上所述，仅为本发明创造较佳的具体实施方式，但本发明创造的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明创造披露的技术范围内，根据本发明创造的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明创造的保护范围之内。
Claims (2)
1.一种苏木素染色液，其特征在于，包括A液和B液，
每500mlA液包括以下组成成分：
苏木素2-4.5g；
无水乙醇200ml；
碘酸钾0.10～0.36g；
钾明矾或氨明矾或Al2(SO4)3·18H2O 4.7～50g；
柠檬酸2～3ml；
亚硝酸钠1.1～2.2g；
蒸馏水余量；
每500ml B液包括以下组成成分：
甘油70-80ml；
聚氧乙烯型非离子表面活性剂X-100 0.05～1.7g；
无水乙醇20～30ml；
1％山梨酸钾1～3ml；
蒸馏水余量。
2.如权利要求1所述的苏木素染色液的配制方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)制备A液：将适量苏木素和无水乙醇混合溶解，取1000ml玻璃容器加入蒸馏水适量和明矾，适当搅动，完全溶解后再顺序加入适量的碘酸钾和亚硝酸钠、柠檬酸充分混合，搅匀；冷却过滤，加入柠檬酸，补加蒸馏水到500ml；
(2)制备B液：将甘油70-80ml，聚氧乙烯型非离子表面活性剂X-1000.05～1.7g，无水乙醇20～30ml，1％山梨酸钾1～3ml混合，补加蒸馏水到500ml；
(3)待A液制备48小时以后与B液按1:1的体积比混合即完成染液的配制。
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