DE19928820A1 - Fixiermittel für Zellen und Gewebe von Lebewesen - Google Patents
Fixiermittel für Zellen und Gewebe von LebewesenInfo
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Abstract
Die Erfindung betrifft ein Fixiermittel für Zellen und Gewebe von Lebewesen, die zytologisch bzw. histologisch untersucht werden sollen. Das sind insbesondere Zellausstriche/Gewebeproben in der Zytodiagnostik bzw. Pathologie. Aufgabe der Erfindung ist es, eine Fixierflüssigkeit zu entwickeln, die die aufgeführten Nachteile des Standes der Technik mindert, die Behandlungszeit verkürzt, die Darstellung des Zellkernes verbessert und kostengünstig herzustellen ist. Eine weitere Aufgabe ist die Anwendbarkeit im Sprayverfahren und im Tauchverfahren. DOLLAR A Erfindungsgemäß wird die Aufgabe dadurch gelöst, daß die Mischung 20 bis 77 Volumenprozente einer Anteilmischung Alkohole (Äthylalkohol, Methylalkohol, Propylalkohol, Isopropylalkohol), 20 bis 77 Volumenprozente Aceton, 0 bis 10 Volumenprozente Aqua dest, 1,2 bis 2,5 Volumenprozente Polyethylenglycol (MG 200-6000), 1 bis 4 Volumenprozente Eisessig (96% Essigsäure) und/oder 1 bis 4 Volumenprozente Kaliumacetatlösung (gesättigt) enthält und einen pH-Wert von 2 bis 6,5 besitzt.
Description
Die Erfindung betrifft ein Fixiermittel für Zellen und Gewebe
von Lebewesen, die zytologisch bzw. histologisch untersucht
werden sollen. Das sind insbesondere Zellausstriche/Gewebe
proben in der Zytodiagnostik bzw. Pathologie.
Lebende Zellen und Gewebe werden nach dem Absterben zunächst
autolytisch-fermentativ, danach bakteriell zersetzt. Für die
Untersuchung ihrer Strukturen ist deshalb eine Behandlung
nötig, die diese Zersetzung unterbindet. Diese Fixierung soll
lebende Strukturen weitgehend lebensähnlich erhalten, damit
sie real beurteilt werden können. Je nach Untersuchungsziel
muß das am besten geeignete Fixierungsmittel gefunden werden.
Die Fixierung bietet aber auch den Vorteil, Präparate als
Dokumente aufbewahren zu können. Deshalb sind viele morpholo
gische Untersuchungen nur auf der Basis von fixiertem und
gefärbtem Material möglich. Die Fixierung ist das erste Glied
der Fehlermöglichkeiten in der Zytologie (Zellenlehre) und
Histologie (Gewebelehre). Deshalb hat sie für die danach
folgenden Prozesse eine ausschlaggebende Bedeutung. Um Mängel
und Schwächen auszugleichen, werden heute meistens Fixie
rungsgemische verwendet. Diese Kriterien gelten besonders
auch für Ausstrichpräparate, wie sie in der Zytodiagnostik
obligatorisch sind und besonders im Rahmen der Krebsfrüher
kennung der Frauen von den gynäkologischen Praxen einge
schickt werden. Nur einwandfrei fixierte Ausstriche können im
Labor richtig gefärbt und von Zytologen und Pathologen ein
deutig befundet werden.
Bis heute wird ca. 96%iger vergällter Alkohol von Gynäkologen
zur Fixierung verwendet. Dieser Alkohol ist zwar einfach in
der Handhabung, hat aber alleine verwendet etliche Nachteile
(z. B. abrupter Wasserentzug, Schrumpfung und Härtung, Dena
turierung, Fällung der Eiweiße ohne chemische Bindung, mögli
che Lösung von Nukleoproteinen und Lipiden, Ausfällen von
Glykogen). Niedrigprozentige Alkohole (Verwässerung) zerset
zen die Zellen und Gewebe (Mazeration).
Zur Fixierung ist auch die Verwendung von Formalin bekannt.
Dieses bewirkt aber keinen nennenswerten Kontrast und ist
auch gesundheitsschädlich.
Es wurden deshalb schon verschiedene Gemische vorgeschlagen.
Die US PS 3546334 beschreibt eine Fixierflüssigkeit, die
Farbstoff enthält, womit die Anwendung eingeschränkt ist. Die
Lösung gemäß US PS 4857300 enthält Formalin, daß gesundheits
schädlich ist. Der hohe Wassergehalt wirkt sich negativ auf
die Konservierungseigenschaften aus. Beide Fixiermittel
liegen im basischen Bereich, wodurch die Zellkerne unzurei
chend kontrastiert werden. In der DE OS 38 24 936 wird in
Ergänzung für die Heißwasserfixierung ein Gemisch aus Tan
nin/Gerbsäure und anderen bekannten Bestandteilen vorgeschla
gen. Die Hitzedenaturierung ist aufwendig und bewirkt eine
Veränderung der chemischen Strukturen, was die anschließende
Auswertung beeinträchtigt. Die Gerbsäure soll in diesem
Zusammenhang antibakteriell und gegen Verleimung wirken.
Eine kurzfristige Fixierung erzielen diese Mischungen nicht.
Es ist eine längere Badbehandlung, bzw. ein Kochen erforder
lich.
Aufgabe der Erfindung ist es, eine Fixierflüssigkeit zu
entwickeln, die die aufgeführten Nachteile des Standes der
Technik mindert, die Behandlungszeit verkürzt, die Darstel
lung des Zellkernes verbessert und kostengünstig herzustellen
ist. Eine weitere Aufgabe ist die Anwendbarkeit im Sprayver
fahren und im Tauchverfahren.
Erfindungsgemäß wird die Aufgabe dadurch gelöst, daß die
Mischung 20 bis 77 Volumenprozente einer Anteilmischung
Alkohole (Äthylalkohol, Methylalkohol, Propylalkohol, Isopro
pylalkohol), 20 bis 77 Volumenprozente Aceton, 0 bis 10
Volumenprozente Aqua dest, 1,2 bis 2,5 Volumenprozente Poly
ethylenglycol (MG 200-6000), 1 bis 4 Volumenprozente Essig
(bei 96% Essigsäure) und/oder, 1 bis 4 Volumenprozente
Kaliumacetatlösung (gesättigt) enthält und einen pH-Wert von
2 bis 6,5 besitzt.
Die Erfindung nutzt gewonnene Erkenntnisse hinsichtlich
bekannter und neuer Einzelbestandteile und kombiniert diese
so, daß wesentliche Verbesserungen der Wirkung erzielt wer
den.
Die Anteile verschiedener Alkohole und Aceton beeinflussen
die Konstitution der Eiweißkörper minimal und erhalten eine
Reihe von Substanzen, die von bekannten Kombinationen ange
löst werden. Damit ist eine gute Färbbarkeit nach der Fixie
rung vorhanden. Sie vermindern außerdem die Nachteile reinen
Alkohols wie Austrocknung und Eiweißfällung. Essigsäure und
Kaliumacetat bewirken ein saures Milieu und führen zu einer
guten Fixierung der Zellkerne. Sie lassen ein kräftig färbba
res distinktes Chromatingerüst hervortreten. Glyzerin und
Polyethylenglycol verzögern die Verdunstung der anderen
Bestandteile, so daß nach der Kontaktierung (Tauchbad,
Spray) der Fixierungsvorgang auf dem Objektträger weiterläuft.
Deren niedriger Anteil vermeidet andererseits die negativen
Wirkungen.
Durch diese Kombination konnten überraschende Ergebnisse
erzielt werden. So vermindert sich die Tauchzeit in der
Fixierung von 30 Minuten auf einige Sekunden. Weiterhin ist,
die Mischung gesundheitlich unbedenklich und eignet sich auch
zum Aufsprühen. Die für die zytologische Befundung besonders
wichtigen Zellkerne (Chromatin) sind speziell berücksichtigt.
Somit wird eine optimale Fixierung gewährleistet.
Nachfolgend soll die Anwendung des Fixiermittels an einem
Beispielen erläutert werden.
Die erfindungsgemäße Mischung mit einer Gesamtmenge von einem
Liter wird aus folgenden Einzelanteilen gemischt:
- - 500 ml Anteilmischung Ethylalkohol, Methylalkohol, Pro pylalkohol, Isopropylalkohol
- - 381 ml Aceton,
- - 82 ml Aqua dest
- - 16 ml Polyethylenglycol (MG 200-6000)
- - 8 ml 96% Essigsäure (Eisessig) und 13 ml Kaliumacetat.
Die Mischung kann zur Tauchfixierung in Küvetten verwendet
werden. Die frisch entnommenen Ausstriche auf den Objekträ
gern werden etwa 15 Minuten (aber auch länger möglich) fi
xiert, etwas getrocknet und zum Versand in die Präparatekä
sten eingeordnet. Auch das kurze Eintauchen der Präparate von
ca. 1 bis 2 Sekunden mit anschließender Liegezeit von wenigen
Minuten genügt für eine optimale Fixierung. Somit erfolgt ein
merklicher Zeitgewinn, verbunden mit weniger manueller Tätig
keit.
Die Mischung kann gleichermaßen als Sprayfixierung in immer
wieder verwend- und nachfüllbaren Plastsprayflaschen an
Stelle der bisher üblichen Metallflaschen verwendet werden.
Als Treibmittel dient Luft, die durch Druck auf den Sprühkopf
die Flüssigkeit in die Düse treibt. Es entsteht ein auf diese
Zwecke abgestimmter feiner Spray. Die Präparate sind nach dem
Spray in einigen Minuten versandfertig. Dies Anwendung ist
umweltfreundlich, da kein Treibgas und keine Entsorgung der
Sprayflaschen erforderlich ist.
Claims (4)
1. Fixiermittel für Zellen und Gewebe von Lebewesen, be
stehend aus einer Mischung von Alkohol, Polyaethylengly
col, Aceton und Aqua dest., dadurch gekennzeichnet,
daß die Mischung
- - 20 bis 77 Volumenprozente einer Anteilmischung Alkoho le (Ethylalkohol, Methylalkohol, Propylalkohol, Iso propylalkohol),
- - 20 bis 77 Volumenprozente Aceton,
- - 0 bis 10 Volumenprozente Aqua dest,
- - 1,2 bis 2,5 Volumenprozente Polyethylenglycol (MG 200-6000) oder Glycerin,
- - 1 bis 4 Volumenprozente Essig (bei 96% Essigsäure) und/oder,
- - 1 bis 4 Volumenprozente Kaliumacetatlösung (gesät tigt) enthält und
- - einen pH-Wert von 2 bis 6,5 besitzt.
2. Fixiermittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß die Mischung
- - 50 Volumenprozente einer Anteilmischung Alkohole (Ethylalkohol, Methylalkohol, Propylalkohol, Isopro pylalkohol),
- - 38,1 Volumenprozente Aceton,
- - 8,2 Volumenprozente Aqua dest,
- - 1,6 Volumenprozente Polyethylenglycol (MG 200-6000),
- - 0,8 Volumenprozente 96% Essigsäure (Eisessig) und
- - 1,3 Volumenprozente Kaliumacetatlösung (gesättigt) enthält und
- - einen pH-Wert von 2 bis 6,5 besitzt.
3. Anwendung des Fixiermittels nach Anspruch 1 und 2, da
durch gekennzeichnet,
daß dieses auf den Ausstrich bzw. das Gewebe aufgesprüht
wird.
4. Anwendung des Fixiermittels nach Anspruch 1 und 2, da
durch gekennzeichnet,
daß der Ausstrich bzw. das Gewebe in dieses kurzzeitig
getaucht und zur weiteren Fixierung zwischengelagert
wird.
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|---|---|---|---|
| DE1999128820 DE19928820A1 (de) | 1999-06-17 | 1999-06-17 | Fixiermittel für Zellen und Gewebe von Lebewesen |
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|---|---|
| DE19928820A1 true DE19928820A1 (de) | 2000-12-21 |
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| DE (1) | DE19928820A1 (de) |
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- 1999-06-17 DE DE1999128820 patent/DE19928820A1/de not_active Withdrawn
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