CN110736655A - 一种细胞核dna染色方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种细胞核DNA染色方法，由以下步骤组成：配制AF固定液、水解液、漂洗液以及伊红染色液；配制细胞DNA染色液；细胞DNA染色液由体积比为1∶1的细胞DNA染色液A和细胞DNA染色液B组成；将病理样本放入AF固定液中固定；流水清洗后，放入水解液中水解；流水清洗后，放入细胞DNA染色液中染色；流水清洗后，放入漂洗液中漂洗；乙醇逐级脱水，放入伊红染色液，无水乙醇脱色，晾干、封片。本发明染色时间大大缩短；水解液由非易制毒化学品组成，属于环境友好型试剂；AF固定液较以往的固定液，不含乙酸，对人体刺激小；细胞DNA染色液配制简单，无需加热煮沸，有效期长于18个月，即用型，适于商业推广。
Description
技术领域
本发明涉及一种染色方法，尤其涉及一种细胞核DNA染色方法。
背景技术
自1954年，Van Duijn发现一种专门用于染小鼠肝肾细胞核的硫堇-亚硫酸盐试剂以来，此项技术已被广泛应用于细胞核DNA含量的测定。Feulgen染色是显示细胞核DNA较具特异性的一种染色法，DNA双链中的特定碱基可被酸性物质水解断开，暴露出游离醛基(RNA无此特性)，游离的醛基与细胞DNA染色液中的蓝紫色中间产物结合形成蓝紫色的细胞核，即DNA在细胞核内的分布位置及准确含量。由于传统方法染色过程繁琐，染色时间长，极易受组织固定液种类、酸解时间和温度的影响，直接影响着细胞DNA含量测定值的准确程度。传统方法使用的盐酸为易制毒化学品，管制严格不易购买，且挥发性强不利于人体健康。传统细胞DNA染色液配制复杂，过程中需要煮沸，有效贮存期约为2-5 天，如此短的保质期妨碍了这种试剂的存储，也妨碍了它的商业应用。
发明内容
为了解决上述技术所存在的不足之处，本发明提供了一种细胞核DNA染色方法。
为了解决以上技术问题，本发明采用的技术方案是：一种细胞核DNA染色方法，由以下步骤组成：
I、配制AF固定液、水解液、漂洗液以及伊红染色液；
II、配制细胞DNA染色液；细胞DNA染色液由体积比为1∶1的细胞DNA染色液 A和细胞DNA染色液B组成；其中，细胞DNA染色液A包括质量份为0.1～1份的硫堇、30～50份的醇、50～70份的酸性过滤水，细胞DNA染色液B包括质量份为 30～50份的醇、1～3份的亚硫酸盐、50～70份的蒸馏水；
III、将病理样本放入AF固定液中固定10～15min；流水清洗后，放入水解液中水解15～30min；流水清洗后，放入细胞DNA染色液中染色20～40min；流水清洗后，放入漂洗液中漂洗5-10min；50％乙醇、75％乙醇、95％乙醇逐级脱水，放入伊红染色液1～3min，无水乙醇脱色，晾干、封片。
进一步地，AF固定液由体积比为1∶9的甲醛溶液和95％乙醇组成。
进一步地，水解液由质量份为50～150份的酸液和20～50份的超纯水组成；其中酸液由固体盐酸、磷酸中的一种或两种组成。
进一步地，固体盐酸由质量分数为50％的水合肼、36％的盐酸和14％的水组成，烘干制得；磷酸为市售商品。
进一步地，漂洗液由质量份为0.5～1份的亚硫酸盐和100份的酸性过滤水组成；其中亚硫酸盐包括质量份为0～1份的亚硫酸氢钠和0～1份的偏重亚硫酸钠。
进一步地，酸性过滤水为25℃条件下pH＜3的水。
进一步地，伊红染色液包括质量份为0.1～1份的曙红Y和100份的95％乙醇。
进一步地，步骤II中醇为乙醇、乙二醇、异丙醇和叔丁醇中的一种或多种按任意比组成。
进一步地，步骤II中亚硫酸盐为偏重亚硫酸钠或亚硫酸氢钠或亚硫酸钠。
硫堇，易溶于热水，开始是蓝色，后呈紫色，水溶液加盐酸后变得更蓝，与氢氧化钠作用产生红棕色沉淀，与硫酸产生黄绿色溶液，稀释时变蓝色，更稀时呈紫色，并有显著的因光异色作用。最大吸收波长(水中)602.5nm。也是染色剂。如细胞核的染色，类淀粉蛋白、嗜碱性细胞和黏蛋白染色，活体染色。
亚硫酸盐是一种含氧酸盐，亚硫酸盐有很多实际用途，例亚硫酸氢钙大量用于造纸工业，即用它溶解木质制造纸浆，亚硫酸钠和亚硫酸氢钠大量用于染料工业，也用作漂白织物时的去氯剂。
固体盐酸为粉末制剂的固体酸类，可以替代盐酸的常规酸洗工艺，主要用于清除各种钢铁、不锈钢、铜、铝等金属零件及其设备表面的锈、氧化皮、水垢、灰垢等污物，特别是钢铁热扎、冷扎过程中生成的高温难清除氧化皮。
水合肼，工业上一般应用含量为40％--80％的水合肼水溶液或肼的盐。水合肼液体以二聚物形式存在，与水和乙醇混溶，不溶于乙醚和氯仿；它能侵蚀玻璃、橡胶、皮革、软木等，在高温下分解成N2、NH3和H2；水合肼还原性极强，与卤素、HN03、KMn04等激烈反应，在空气中可吸收C02，产生烟雾。水合肼及其衍生物产品在许多工业应用中得到广泛的使用，用作还原剂、抗氧剂，用于制取医药、发泡剂等。
AF固定液，用于组织化学中细胞或组织切片的固定，既有脱水作用，也有交联作用。使用时可以防止病理样本被冲洗掉。
水解液用于改变细胞膜的通透性，利于染料进入细胞内，并且使染色质中的DNA和蛋白质分离，有利于DNA染色。
细胞DNA染色液用于将细胞核内DNA染色。
漂洗液用于将多余的细胞DNA染色液洗掉，便于后续观察。
伊红染色液将样本复染，使细胞质染色呈红色，便于镜检观察。
本发明染色时间大大缩短；水解液由非易制毒化学品组成，原料有保证，且不挥发、腐蚀性弱，属于环境友好型试剂；AF固定液较以往的Bohm- Sprenger固定液，不含乙酸，对人体刺激小；细胞DNA染色液配制简单，无需加热煮沸，有效期长于18个月，即用型，适于商业推广。
附图说明
图1为本发明的整体流程示意图。
图2为实施例一的染色效果图。
图3为实施例二的染色效果图。
图4为实施例三的染色效果图。
图5为实施例四的染色效果图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
如图1所示的一种细胞核DNA染色方法，由以下步骤组成：
I、配制AF固定液、水解液、漂洗液以及伊红染色液；
II、配制细胞DNA染色液；细胞DNA染色液由体积比为1∶1的细胞DNA染色液 A和细胞DNA染色液B组成；其中，细胞DNA染色液A包括质量份为0.1～1份的硫堇、30～50份的醇、50～70份的酸性过滤水，细胞DNA染色液B包括质量份为 30～50份的醇、1～3份的亚硫酸盐、50～70份的蒸馏水；其中，醇为乙醇、乙二醇、异丙醇和叔丁醇中的一种或多种按任意比组成。亚硫酸盐为偏重亚硫酸钠或亚硫酸氢钠或亚硫酸钠。
III、将病理样本放入AF固定液中固定10～15min；流水清洗后，放入水解液中水解15～30min；流水清洗后，放入细胞DNA染色液中染色20～40min；流水清洗后，放入漂洗液中漂洗5-10min；50％乙醇、75％乙醇、95％乙醇逐级脱水，放入伊红染色液1～3min，无水乙醇脱色，晾干、封片。
AF固定液由体积比为1：9的甲醛溶液和95％乙醇组成。
水解液由质量份为50～150份的酸液和20～50份的超纯水组成；其中酸液由固体盐酸、磷酸中的一种或两种任意比组成。固体盐酸由质量分数为50％的水合肼、36％的盐酸和14％的水组成，烘干制得；磷酸为市售商品。
漂洗液由质量份为0.5～1份的亚硫酸盐和100份的酸性过滤水组成；其中亚硫酸盐包括质量份为0～1份的亚硫酸氢钠和0～1份的偏重亚硫酸钠。酸性过滤水为25℃条件下pH＜3的水。
伊红染色液包括质量份为0.1～1份的曙红Y和100份的95％乙醇。
一下结合具体实施例对本发明进一步说明：
实施例一、
一种细胞核DNA染色方法，由以下步骤组成：
I、按照体积比为1∶9的甲醛溶液和95％乙醇配制AF固定液；
II、按照表1配制细胞DNA染色液、水解液、漂洗液以及伊红染色液；
表1
III、将病理样本放入AF固定液中固定10～15min；流水清洗后，放入水解液中水解15～30min；流水清洗后，放入细胞DNA染色液中染色20～40min；流水清洗后，放入漂洗液中漂洗5-10min；50％乙醇、75％乙醇、95％乙醇逐级脱水，放入伊红染色液1～3min，无水乙醇脱色，晾干、封片。染色后效果图如图2所示。
实施例二、
与实施例一的区别在于，按照表2配制细胞DNA染色液、水解液、漂洗液以及伊红染色液。
表2
染色后效果图如图3所示。
实施例三、
与实施例一的区别在于，按照表3配制细胞DNA染色液、水解液、漂洗液以及伊红染色液。
表3
染色后效果图如图4所示。
实施例四、
与实施例一的区别在于，按照表4配制细胞DNA染色液、水解液、漂洗液以及伊红染色液。
表4
染色后效果图如图5所示。
实施例五、
与实施例一的区别在于，按照表5配制细胞DNA染色液、水解液、漂洗液以及伊红染色液。
表5
实施例六、
与实施例一的区别在于，按照表6配制细胞DNA染色液、水解液、漂洗液以及伊红染色液。
表6
实施例七、
与实施例一的区别在于，按照表7配制细胞DNA染色液、水解液、漂洗液以及伊红染色液。
表7
本发明相比现有技术具有的优点为：
a、染色时间大大缩短；
b、水解液由非易制毒化学品组成，原料有保证，且不挥发、腐蚀性弱，属于环境友好型试剂；
c、AF固定液较以往的Bohm-Sprenger固定液，不含乙酸，对人体刺激小；
d、细胞DNA染色液配制简单，无需加热煮沸，有效期长于18个月，即用型，适于商业推广。
上述实施方式并非是对本发明的限制，本发明也并不仅限于上述举例，本技术领域的技术人员在本发明的技术方案范围内所做出的变化、改型、添加或替换，也均属于本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种细胞核DNA染色方法，其特征在于：由以下步骤组成：
I、配制AF固定液、水解液、漂洗液以及伊红染色液；
II、配制细胞DNA染色液；细胞DNA染色液由体积比为1∶1的细胞DNA染色液A和细胞DNA染色液B组成；其中，细胞DNA染色液A包括质量份为0.1～1份的硫堇、30～50份的醇、50～70份的酸性过滤水，细胞DNA染色液B包括质量份为30～50份的醇、1～3份的亚硫酸盐、50～70份的蒸馏水；
III、将病理样本放入AF固定液中固定10～15min；流水清洗后，放入水解液中水解15～30min；流水清洗后，放入细胞DNA染色液中染色20～40min；流水清洗后，放入漂洗液中漂洗5-10min；50％乙醇、75％乙醇、95％乙醇逐级脱水，放入伊红染色液1～3min，无水乙醇脱色，晾干、封片。
2.根据权利要求1所述的细胞核DNA染色方法，其特征在于：所述AF固定液由体积比为1∶9的甲醛溶液和95％乙醇组成。
3.根据权利要求1所述的细胞核DNA染色方法，其特征在于：所述水解液由质量份为50～150份的酸液和20～50份的超纯水组成；其中酸液由固体盐酸、磷酸中的一种或两种组成。
4.根据权利要求3所述的细胞核DNA染色方法，其特征在于：所述固体盐酸由质量分数为50％的水合肼、36％的盐酸和14％的水组成，烘干制得；磷酸为市售商品。
5.根据权利要求1所述的细胞核DNA染色方法，其特征在于：所述漂洗液由质量份为0.5～1份的亚硫酸盐和100份的酸性过滤水组成；其中亚硫酸盐包括质量份为0～1份的亚硫酸氢钠和0～1份的偏重亚硫酸钠。
6.根据权利要求5所述的细胞核DNA染色方法，其特征在于：所述酸性过滤水为25℃条件下pH＜3的水。
7.根据权利要求1所述的细胞核DNA染色方法，其特征在于：所述伊红染色液包括质量份为0.1～1份的曙红Y和100份的95％乙醇。
8.根据权利要求1所述的细胞核DNA染色方法，其特征在于：所述步骤II中醇为乙醇、乙二醇、异丙醇和叔丁醇中的一种或多种按任意比组成。
9.根据权利要求1所述的细胞核DNA染色方法，其特征在于：所述步骤II中亚硫酸盐为偏重亚硫酸钠或亚硫酸氢钠或亚硫酸钠。
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Cited By (2)
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|---|---|---|---|---|
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| CN112033783A (zh) * | 2020-08-11 | 2020-12-04 | 长沙迪安医学检验所有限公司 | 一种dna倍体染色液及制备方法和染色方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106645153A (zh) * | 2016-12-23 | 2017-05-10 | 麦克奥迪（厦门）医疗诊断系统有限公司 | 一种细胞病理切片快速染色检测方法 |
| CN108287097A (zh) * | 2017-08-24 | 2018-07-17 | 南京福怡科技发展股份有限公司 | 一种硫堇伊红染色液及制备方法和应用 |
-
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106645153A (zh) * | 2016-12-23 | 2017-05-10 | 麦克奥迪（厦门）医疗诊断系统有限公司 | 一种细胞病理切片快速染色检测方法 |
| CN108287097A (zh) * | 2017-08-24 | 2018-07-17 | 南京福怡科技发展股份有限公司 | 一种硫堇伊红染色液及制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 李懋学 等: "《作物染色体及其研究技术》", 31 August 1996, 中国农业出版社 * |
| 王德田 等: "《实用现代病理学技术》", 31 January 2012, 中国协和医科大学出版社 * |
| 蔡文琴: "《现代实用细胞与分子生物学实验技术》", 31 January 2003, 人民军医出版社 * |
| 边才苗: "《环境工程微生物学实验》", 31 August 2019 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112033783A (zh) * | 2020-08-11 | 2020-12-04 | 长沙迪安医学检验所有限公司 | 一种dna倍体染色液及制备方法和染色方法 |
| CN111879592A (zh) * | 2020-08-25 | 2020-11-03 | 湖南品胜生物技术有限公司 | 一种防掉片细胞dna定量染色液及其制备方法 |
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