CN109900537A - 一种组织病理学的组织样本的处理方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种组织病理学的组织样本的处理方法，其特征在于：该处理方法包括以下步骤：对离体的组织样本依次进行固定、冲洗、脱水、透明、浸蜡包埋、切片、染色以及封片，所述染色过程中采用的染色液为苏木素伊红染色液，将染色液样本处理类产品的有效成分溶解于溶剂中，轻轻搅动使其完全溶解，待溶液恢复至室温后，过滤去除沉渣，加入适量的优质石墨烯即可使用，密闭保存；本发明利用石墨烯具有吸附和高比表面特性，携带样本处理所需的有效成分迅速进入临床和科研领域的各种样本的内部，加速组织样本染色过程，解决了传统样本处理操作时间过长以及由此使样本不够新鲜进而导致结果可靠性差的问题。
Description
技术领域
本发明涉及组织病理学样本处理技术领域，特别涉及一种组织病理学的组织样本的处理方法。
背景技术
样本处理技术是随着临床病理学技术的应用而一起发展、成熟起来的。古希腊医学巨匠希波克拉底是西方医学奠基人，其所做的尸体解剖研究获得了许多关于人体结构的基础知识，开启了病理样本处理的先河。18世纪中叶，意大利人Morgagni根据积累的尸检经验创立了器官病理学，标志着病理形态学的开端。19世纪中叶，德国病理学家Virchow在显微镜的帮助下创立了细胞病理学，这对病理学、临床检验学以及其他生物学样本的研究乃至对整个医学和生命科学的发展作出了具有划时代意义的巨大贡献。
现有组织样本处理技术需要经过处理包埋、切片、染色、封片等诸多步骤，包埋骤通常是将离体组织样本从样品盒中取出，加入诸如固体石蜡包埋材料的模具中，得到包埋组织；切片步骤是将包埋组织置于切片机中切片，切片需要2-25微米厚的片；染色步骤是将得到的切片用特殊的染色剂染色处理，以便于镜下观察；封片步骤则是保护染色好的组织样本，防止污染，以便观察。
然而，上述过程包括诸多细节步骤，步骤繁琐且耗时长，现有组织样本处理技术人为操作，存在人为污染组织样本的风险；并且过程中需要使用到大量甲醛、二甲苯、氯化汞等挥发性有毒试剂，长期接触容易损害技术人员身体健康。
发明内容
发明的目的在于提供一种组织病理学的组织样本的处理方法，解决了耗时长以及技术人员身体健康的问题。
本发明是这样实现的，一种组织病理学的组织样本的处理方法，该处理方法包括以下步骤：对离体的组织样本依次进行固定、冲洗、脱水、透明、浸蜡包埋、切片、染色以及封片，
所述染色过程中采用的染色液为苏木素伊红染色液，将染色液样本处理类产品的有效成分溶解于溶剂中，轻轻搅动使其完全溶解，待溶液恢复至室温后，过滤去除沉渣，加入适量的优质石墨烯即可使用，密闭保存。
本发明的进一步技术方案是：所述苏木素染色液配制过程如下：分别将1份苏木色精溶解于9份无水乙醇，15份硫酸铝钾溶解于加热的200份的蒸馏水，轻轻搅动使其完全溶解，待溶液恢复至室温后，与苏木素无水乙醇溶液充分混合，再加入氧化剂0.5份，最后加入1份丙三醇和0.5份保护剂，即为苏木素染液半成品，苏木素染液半成品密闭自然氧化一周，过滤去除沉渣，加入2份石墨烯即可使用；
所述伊红染色液配制过程如下：将1g伊红Y二钠盐溶解于100ml蒸馏水，加入防腐剂，过滤去除沉渣，加入1g石墨烯即可使用。
本发明的进一步技术方案是：所述染色步骤为：
采用脱蜡液对石蜡组织切片浸泡脱蜡10min，得到脱蜡切片；
依次用复水液A、复水液B、复水液C、复水液D、复水液E浸泡处理，然后用复水液F冲洗处理3min，得到复水切片；
依次用所述苏木素染色液浸泡复水切片3-5min，水冲洗15-20s，盐酸-乙醇溶液冲洗1-2s，水冲洗2-3s，饱和碳酸锂溶液冲洗15-20s，水冲洗直至切片变色，所述伊红染色液浸泡3-5min，水冲洗2-3s，复水液D冲洗5-10s、复水液C冲洗5-10s、复水液B冲洗5-10s，无水乙醇脱水，二甲苯透明，得到透明切片。
本发明的进一步技术方案是：所述脱蜡液由以下重量份的组分混合后制成：D-柠檬烯50份、甲基环己烷38份。
本发明的进一步技术方案是：所述复水液A由二甲苯和无水乙醇按照1:1的体积比例混合而成，复水液A浸泡时间为5min；复水液B、复水液C、复水液D、复水液E依次是体积分数95％乙醇、70％乙醇、45％乙醇、30％乙醇，且复水液B、复水液C、复水液D、复水液E的溶剂均为0.01mol/L的柠檬酸钠溶液；复水液B-复水液E的浸泡时间均为3min；复水液F是ddH2O。
本发明的进一步技术方案是：所述盐酸-乙醇溶液由0.5mL盐酸和100mL75％酒精混合而成。
本发明的进一步技术方案是：所述固定步骤为将样本放入4％多聚甲醛固定液中固定，固定1-2周。
本发明的进一步技术方案是：所述4％多聚甲醛固定液配制过程如下：将2g多聚甲醛、2g磷酸盐溶解于100ml蒸馏水，可加热60℃并加入2滴氢氧化钠促溶，调节pH值至7.4,过滤去除沉渣，加入2g石墨烯即可使用。
本发明的有益效果：本发明利用石墨烯具有吸附和高比表面特性，携带样本处理所需的有效成分迅速进入临床和科研领域的各种样本的内部，加速组织样本染色过程，解决了传统样本处理操作时间过长以及由此使样本不够新鲜进而导致结果可靠性差的问题，使在极短时间内了解实验或检测结果以及获得更可靠的结果成为可能；使用溶液种类减少，步骤简化，减少人为误差，减少染色试剂的使用时间，效果显著。
具体实施方式
实施例一：
本发明示出了一种组织病理学的组织样本的处理方法，该处理方法包括以下步骤：对离体的组织样本依次进行固定、冲洗、脱水、透明、浸蜡包埋、切片、染色以及封片，
所述染色过程中采用的染色液为苏木素伊红染色液，将染色液样本处理类产品的有效成分溶解于溶剂中，轻轻搅动使其完全溶解，待溶液恢复至室温后，过滤去除沉渣，使用时加冰醋酸，密闭保存。
所述苏木素染色液配制过程如下：分别将1份苏木色精溶解于9份无水乙醇，15份硫酸铝钾溶解于加热的200份的蒸馏水，轻轻搅动使其完全溶解，待溶液恢复至室温后，与苏木素无水乙醇溶液充分混合，再加入氧化剂0.5份，最后加入1份丙三醇和0.5份保护剂，即为苏木素染液半成品，苏木素染液半成品密闭自然氧化一周，过滤去除沉渣，使用时每100ml苏木素染色液加入5ml冰醋酸；
所述伊红染色液配制过程如下：将1g伊红Y二钠盐溶解于100ml蒸馏水，加入防腐剂，过滤去除沉渣，使用时每100ml伊红染色液加入50μL冰醋酸。
所述染色步骤为：
采用脱蜡液对石蜡组织切片浸泡脱蜡10min，得到脱蜡切片；
依次用复水液A、复水液B、复水液C、复水液D、复水液E浸泡处理，然后用复水液F冲洗处理3min，得到复水切片；
依次用所述苏木素染色液浸泡复水切片3min，水冲洗15s，盐酸-乙醇溶液冲洗1s，水冲洗2s，饱和碳酸锂溶液冲洗15s，水冲洗直至切片变色，所述伊红染色液浸泡3min，水冲洗2s，复水液D冲洗5s、复水液C冲洗5s、复水液B冲洗5s，无水乙醇脱水，二甲苯透明，得到透明切片。
所述脱蜡液由以下重量份的组分混合后制成：D-柠檬烯50份、甲基环己烷38份。
所述复水液A由二甲苯和无水乙醇按照1:1的体积比例混合而成，复水液A浸泡时间为5min；复水液B、复水液C、复水液D、复水液E依次是体积分数95％乙醇、70％乙醇、45％乙醇、30％乙醇，且复水液B、复水液C、复水液D、复水液E的溶剂均为0.01mol/L的柠檬酸钠溶液；复水液B-复水液E的浸泡时间均为3min；复水液F是ddH2O。
所述盐酸-乙醇溶液由0.5mL盐酸和100mL75％酒精混合而成。
所述固定步骤为将样本放入4％多聚甲醛固定液中固定，固定1周。
所述4％多聚甲醛固定液配制过程如下：将2g多聚甲醛、2g磷酸盐溶解于100ml蒸馏水，可加热60℃并加入2滴氢氧化钠促溶，调节pH值至7.4,过滤去除沉渣，加入2g石墨烯即可使用。
实施例二：
本发明示出了一种组织病理学的组织样本的处理方法，该处理方法包括以下步骤：对离体的组织样本依次进行固定、冲洗、脱水、透明、浸蜡包埋、切片、染色以及封片，
所述染色过程中采用的染色液为苏木素伊红染色液，将染色液样本处理类产品的有效成分溶解于溶剂中，轻轻搅动使其完全溶解，待溶液恢复至室温后，过滤去除沉渣，加入适量的优质石墨烯即可使用，密闭保存。
所述苏木素染色液配制过程如下：分别将1份苏木色精溶解于9份无水乙醇，15份硫酸铝钾溶解于加热的200份的蒸馏水，轻轻搅动使其完全溶解，待溶液恢复至室温后，与苏木素无水乙醇溶液充分混合，再加入氧化剂0.5份，最后加入1份丙三醇和0.5份保护剂，即为苏木素染液半成品，苏木素染液半成品密闭自然氧化一周，过滤去除沉渣，加入2份石墨烯即可使用；
所述伊红染色液配制过程如下：将1g伊红Y二钠盐溶解于100ml蒸馏水，加入防腐剂，过滤去除沉渣，加入1g石墨烯即可使用。
所述染色步骤为：
采用脱蜡液对石蜡组织切片浸泡脱蜡10min，得到脱蜡切片；
依次用复水液A、复水液B、复水液C、复水液D、复水液E浸泡处理，然后用复水液F冲洗处理3min，得到复水切片；
依次用所述苏木素染色液浸泡复水切片3min，水冲洗15s，盐酸-乙醇溶液冲洗1s，水冲洗2s，饱和碳酸锂溶液冲洗15s，水冲洗直至切片变色，所述伊红染色液浸泡3min，水冲洗2s，复水液D冲洗5s、复水液C冲洗5s、复水液B冲洗5s，无水乙醇脱水，二甲苯透明，得到透明切片。
所述脱蜡液由以下重量份的组分混合后制成：D-柠檬烯50份、甲基环己烷38份。
所述复水液A由二甲苯和无水乙醇按照1:1的体积比例混合而成，复水液A浸泡时间为5min；复水液B、复水液C、复水液D、复水液E依次是体积分数95％乙醇、70％乙醇、45％乙醇、30％乙醇，且复水液B、复水液C、复水液D、复水液E的溶剂均为0.01mol/L的柠檬酸钠溶液；复水液B-复水液E的浸泡时间均为3min；复水液F是ddH2O。
所述盐酸-乙醇溶液由0.5mL盐酸和100mL75％酒精混合而成。
所述固定步骤为将样本放入4％多聚甲醛固定液中固定，固定1周。
所述4％多聚甲醛固定液配制过程如下：将2g多聚甲醛、2g磷酸盐溶解于100ml蒸馏水，可加热60℃并加入2滴氢氧化钠促溶，调节pH值至7.4,过滤去除沉渣，加入2g石墨烯即可使用。
实施例三：
本发明示出了一种组织病理学的组织样本的处理方法，该处理方法包括以下步骤：对离体的组织样本依次进行固定、冲洗、脱水、透明、浸蜡包埋、切片、染色以及封片，
所述染色过程中采用的染色液为苏木素伊红染色液，将染色液样本处理类产品的有效成分溶解于溶剂中，轻轻搅动使其完全溶解，待溶液恢复至室温后，过滤去除沉渣，加入适量的优质石墨烯即可使用，密闭保存。
所述苏木素染色液配制过程如下：分别将1份苏木色精溶解于9份无水乙醇，15份硫酸铝钾溶解于加热的200份的蒸馏水，轻轻搅动使其完全溶解，待溶液恢复至室温后，与苏木素无水乙醇溶液充分混合，再加入氧化剂0.5份，最后加入1份丙三醇和0.5份保护剂，即为苏木素染液半成品，苏木素染液半成品密闭自然氧化一周，过滤去除沉渣，加入2份石墨烯即可使用；
所述伊红染色液配制过程如下：将1g伊红Y二钠盐溶解于100ml蒸馏水，加入防腐剂，过滤去除沉渣，加入1g石墨烯即可使用。
所述染色步骤为：
采用脱蜡液对石蜡组织切片浸泡脱蜡10min，得到脱蜡切片；
依次用复水液A、复水液B、复水液C、复水液D、复水液E浸泡处理，然后用复水液F冲洗处理3min，得到复水切片；
依次用所述苏木素染色液浸泡复水切片4min，水冲洗18s，盐酸-乙醇溶液冲洗2s，水冲洗3s，饱和碳酸锂溶液冲洗18s，水冲洗直至切片变色，所述伊红染色液浸泡4min，水冲洗3s，复水液D冲洗8s、复水液C冲洗8s、复水液B冲洗8s，无水乙醇脱水，二甲苯透明，得到透明切片。
所述脱蜡液由以下重量份的组分混合后制成：D-柠檬烯50份、甲基环己烷38份。
所述复水液A由二甲苯和无水乙醇按照1:1的体积比例混合而成，复水液A浸泡时间为5min；复水液B、复水液C、复水液D、复水液E依次是体积分数95％乙醇、70％乙醇、45％乙醇、30％乙醇，且复水液B、复水液C、复水液D、复水液E的溶剂均为0.01mol/L的柠檬酸钠溶液；
复水液B-复水液E的浸泡时间均为3min；复水液F是ddH2O。
所述盐酸-乙醇溶液由0.5mL盐酸和100mL75％酒精混合而成。
所述固定步骤为将样本放入4％多聚甲醛固定液中固定，固定2周。
所述4％多聚甲醛固定液配制过程如下：将2g多聚甲醛、2g磷酸盐溶解于100ml蒸馏水，可加热60℃并加入2滴氢氧化钠促溶，调节pH值至7.4,过滤去除沉渣，加入2g石墨烯即可使用。
综上实验可得，实施例一与加了石墨烯的实验相比花差不多的时间，实施例一的染色效果没有加了石墨烯的染色效果好。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种组织病理学的组织样本的处理方法，其特征在于：该处理方法包括以下步骤：对离体的组织样本依次进行固定、冲洗、脱水、透明、浸蜡包埋、切片、染色以及封片，
所述染色过程中采用的染色液为苏木素伊红染色液，将染色液样本处理类产品的有效成分溶解于溶剂中，轻轻搅动使其完全溶解，待溶液恢复至室温后，过滤去除沉渣，加入适量的优质石墨烯即可使用，密闭保存。
2.根据权利要求1所述的一种组织病理学的组织样本的处理方法，其特征在于：所述苏木素染色液配制过程如下：分别将1份苏木色精溶解于9份无水乙醇，15份硫酸铝钾溶解于加热的200份的蒸馏水，轻轻搅动使其完全溶解，待溶液恢复至室温后，与苏木素无水乙醇溶液充分混合，再加入氧化剂0.5份，最后加入1份丙三醇和0.5份保护剂，即为苏木素染液半成品，苏木素染液半成品密闭自然氧化一周，过滤去除沉渣，加入2份石墨烯即可使用；
所述伊红染色液配制过程如下：将1g伊红Y二钠盐溶解于100ml蒸馏水，加入防腐剂，过滤去除沉渣，加入1g石墨烯即可使用。
3.根据权利要求2所述的一种组织病理学的组织样本的处理方法，其特征在于：所述染色步骤为：
采用脱蜡液对石蜡组织切片浸泡脱蜡10min，得到脱蜡切片；
依次用复水液A、复水液B、复水液C、复水液D、复水液E浸泡处理，然后用复水液F冲洗处理3min，得到复水切片；
依次用所述苏木素染色液浸泡复水切片3-5min，水冲洗15-20s，盐酸-乙醇溶液冲洗1-2s，水冲洗2-3s，饱和碳酸锂溶液冲洗15-20s，水冲洗直至切片变色，所述伊红染色液浸泡3-5min，水冲洗2-3s，复水液D冲洗5-10s、复水液C冲洗5-10s、复水液B冲洗5-10s，无水乙醇脱水，二甲苯透明，得到透明切片。
4.根据权利要求3所述的一种组织病理学的组织样本的处理方法，其特征在于：所述脱蜡液由以下重量份的组分混合后制成：D-柠檬烯50份、甲基环己烷38份。
5.根据权利要求3所述的一种组织病理学的组织样本的处理方法，其特征在于：所述复水液A由二甲苯和无水乙醇按照1:1的体积比例混合而成，复水液A浸泡时间为5min；复水液B、复水液C、复水液D、复水液E依次是体积分数95％乙醇、70％乙醇、45％乙醇、30％乙醇，且复水液B、复水液C、复水液D、复水液E的溶剂均为0.01mol/L的柠檬酸钠溶液；复水液B-复水液E的浸泡时间均为3min；复水液F是ddH2O。
6.根据权利要求3所述的一种组织病理学的组织样本的处理方法，其特征在于：所述盐酸-乙醇溶液由0.5mL盐酸和100mL75％酒精混合而成。
7.根据权利要求1所述的一种组织病理学的组织样本的处理方法，其特征在于：所述固定步骤为将样本放入4％多聚甲醛固定液中固定，固定1-2周。
8.根据权利要求7所述的一种组织病理学的组织样本的处理方法，其特征在于：所述4％多聚甲醛固定液配制过程如下：将2g多聚甲醛、2g磷酸盐溶解于100ml蒸馏水，可加热60℃并加入2滴氢氧化钠促溶，调节pH值至7.4,过滤去除沉渣，加入2g石墨烯即可使用。
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Cited By (2)
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| CN112014192A (zh) * | 2020-09-04 | 2020-12-01 | 贵州大学 | 一种用于黔北麻羊卵巢组织石蜡切片的he染色方法 |
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