CN111879592A - 一种防掉片细胞dna定量染色液及其制备方法 - Google Patents

一种防掉片细胞dna定量染色液及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111879592A
CN111879592A CN202010860790.6A CN202010860790A CN111879592A CN 111879592 A CN111879592 A CN 111879592A CN 202010860790 A CN202010860790 A CN 202010860790A CN 111879592 A CN111879592 A CN 111879592A
Authority
CN
China
Prior art keywords
reagent
staining solution
parts
staining
cell
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202010860790.6A
Other languages
English (en)
Inventor
贺权源
刘朝前
谢凯
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hunan Pinsheng Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Hunan Pinsheng Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hunan Pinsheng Biotechnology Co ltd filed Critical Hunan Pinsheng Biotechnology Co ltd
Priority to CN202010860790.6A priority Critical patent/CN111879592A/zh
Publication of CN111879592A publication Critical patent/CN111879592A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
    • G01N2001/302—Stain compositions

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)

Abstract

本发明提供了一种防掉片细胞DNA定量染色液及其制备方法，优选硫堇‑亚硫酸盐染色，易溶于热水，并有显著的因光异色作用，最大吸收波长(水中)602.5nm，适用于高特异性细胞核DNA定量染色，弥补了Schiff试剂(无色品红亚硫酸溶液)共染带来的背景杂乱，特异性不高的缺点。本发明适用于各类细胞核DNA染色，尤其适用于细胞DNA定量染色分析；可与其余多种细胞质/蛋白染色方法联用，适用性广，商业用途价值高。

Description

一种防掉片细胞DNA定量染色液及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种细胞DNA定量检测的染色方法，尤其涉及一种防掉片细胞DNA定量染色液及其制备方法。
背景技术
脱氧核糖核酸(DNA)染色方法有Feulgen法、甲基绿-派洛宁法、吖啶橙荧光法等，其中最经典的是Feulgen法，Feulgen染色由Feulgen和Rossenbeck在1924年发现的一种细胞核内DNA染色技术。该法是一种经典的酶组织化学法。Leagene Feulgen stain原理在于：DNA经弱酸(1mol/LHCl)水解后，嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键被打开，并且使脱氧核糖与磷酸间的磷酯键断开，在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。醛基在原位与Schiff(无色品红亚硫酸溶液)试剂结合，形成紫红色化合物，使细胞内含有DNA的部位呈紫红色阳性反应。紫红色的产生是因为反应产物的分子内有醌基(醌基是一个具有颜色的发色团)，所以凡含有DNA的部位，就呈紫红色。而RNA用此法处理后则分解。Feulgen染色使DNA特异性着色。其染色的深浅与DNA的含量或倍体成正比。
细胞DNA定量分析技术主要通过对细胞核内DNA进行特异性染色、仪器测定细胞核内DNA含量或倍体来判断细胞的生理状态和病理改变。DNA定量细胞学在宫颈癌、口腔鳞癌、头颈部肿瘤、颈部淋巴结肿大、乳腺癌、胃癌、肺癌、泌尿系肿瘤、胸腹积液的临床应用及研究中有重大意义。
因传统方法中由载玻片承载的组织、细胞经酸解、固定、水洗等操作后，极易出现不同程度的载玻片掉片(即组织、细胞等标本从载玻片上部分或全部脱落缺失的现象)，造成假阴性的情况，直接影响结果的判定甚至降低方法学的准确性。为此，科研人员研发了各类防脱载玻片，例如CN201921220040.1、CN201521113399.0等所设计的防脱载玻片通过提高洁净度、增加黏附层、增设卡槽等手段对液基细胞学、组织染色等出现的掉片现象有大幅改善。
然而，由于传统方法染色过程繁琐，极易受组织固定液种类、酸解时间和温度的影响，仅仅通过增强黏附力防止掉片是治标不治本的，防脱载玻片的脱片仍时有发生。方法学中冷、热、酸、碱、醇对于防脱载玻片的影响仍未得到根本解决。因碱性Schiff特异性不高，背景易出现共染现象，影响结果的判定，降低准确性。
发明内容
针对上述技术所存在的不足之处，本发明提供了一种防掉片细胞DNA定量染色液及其制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
本发明提供了一种防掉片细胞DNA定量染色液，包括：
试剂A，包括：硫堇、染色助剂和水；
试剂B，选自甲醇、叔丁醇、乙醇、乙二醇、盐酸、磷酸中的一种或多种；
试剂C，包括：亚硫酸盐和超纯水；
所述试剂A、试剂B和试剂C的体积比为：5：1：4(V/V/V)。
硫堇，带黑绿色闪光针状结晶。易溶于热水，开始是蓝色，后呈紫色，并有显著的因光异色作用。溶于氯仿，微溶于乙醇、乙醚和冷水。最大吸收波长(水中)602.5nm。也是染色剂，如细胞核的染色，类淀粉蛋白、嗜碱性细胞和黏蛋白染色，活体染色。替代Feulgen染色的碱性品红，特异性更高(背景不易出现共染现象)。
亚硫酸盐是一种含氧酸盐，白色结晶性粉末，有二氧化硫的气味，可溶于水，也微溶于醇。兼具还原性、氧化性，多表现还原性用途广泛，在空气中易被氧化为硫酸盐。联合碱性硫堇共同作用，特异性定量标记细胞核DNA。
优选地，所述试剂A中，按重量份计，包括：硫堇50-150份，染色助剂20-50份，蒸馏水50-250份。
优选地，所述试剂B选自甲醇、叔丁醇、乙醇、乙二醇中的一种或多种，或者甲醇、叔丁醇、乙醇、乙二醇中的一种或多种与盐酸和/或磷酸的混合物。更优选地，甲醇、叔丁醇、乙醇、乙二醇中的一种或多种与盐酸和/或磷酸的体积比为7：1。
优选地，所述试剂C中，按重量份计，包括：亚硫酸盐20-50份和超纯水50-150份。
更优选地，所述亚硫酸盐选自偏重亚硫酸钠、偏重亚硫酸钾、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠中的一种或多种。
本发明还提供了上述防掉片细胞DNA定量染色液的制备方法，包括如下步骤：
(1)配制试剂A，再加入试剂B，混合均匀；
(2)加入试剂C，恒温25-40℃磁力搅拌30-60min，得防掉片细胞DNA定量染色液。
优选地，通过以下方法配制试剂A：按重量份称取硫堇劳氏紫粉末，加入烧杯中，用部分蒸馏水冲洗残留试剂，再加入染色助剂，余量用剩余蒸馏水补齐，然后加热沸腾10-30min，冷却至30-50℃，得试剂A。
优选地，上述方法还包括将步骤(2)得到的染色液放入棕色瓶中，冷藏，有效期7天。
更优选地，每次使用染色液前快速取出所需用量至另一棕色瓶中提前5-15min预热。
本发明的有益效果如下：
染色液优选硫堇-亚硫酸盐染色，易溶于热水，并有显著的因光异色作用，最大吸收波长(水中)602.5nm，适用于高特异性细胞核DNA定量染色，弥补了Schiff试剂(无色品红亚硫酸溶液)共染带来的背景杂乱，特异性不高的缺点。
本发明适用于各类细胞核DNA染色，尤其适用于细胞DNA定量染色分析；可与其余多种细胞质/蛋白染色方法联用，适用性广，商业用途价值高。
附图说明
图1.传统Feulgen染色实例脱片结果。
图2.本发明染色实例脱片结果。
图3.本发明宫颈脱落细胞染色实例扫描结果之CV值。
图4.本发明宫颈脱落细胞染色实例扫描结果之IOD值。
图5.本发明宫颈脱落细胞染色实例扫描结果之线性度。
具体实施方式
为了便于更清楚的理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步详细的说明。
本发明中，“室温”可以是22-30℃。
可以理解的是，以下实施例中，如未有特殊说明，其采用的材料及方法均通过本领域常规技术手段即可实现。
实施例1
以配制420ml为例，本实施例的DNA染液配液步骤如下：
(1)按重量份计，称取50份的硫堇劳氏紫粉末，加入500ml烧杯中；量取50份的蒸馏水用于冲洗残留试剂；量取20份的染色助剂加入烧杯中，余量用200份蒸馏水补齐。加热沸腾30min，冷却至50℃，即制得试剂A。试剂A中，按重量份计，包括：硫堇50份，染色助剂20份，蒸馏水250份。
(2)按照体积比5：1向冷却的液体中加入试剂B，混合均匀。本实施例中，试剂B为乙二醇：磷酸＝7：1(V/V)。
(3)称取20份的偏重亚硫酸钠充分溶解于150份的蒸馏水中，室温进行，即制得试剂C，向试剂A和试剂B的混合溶液中加入试剂C，试剂A、试剂B和试剂C的体积比为5：1：4(V/V/V)，再加入蒸馏水至420ml。
(4)在液体中加入磁力搅拌转子后，盖好瓶盖，放置于磁力搅拌器上。
(5)恒温箱35℃搅拌45min后放入棕色瓶中，贴好标签，冰箱冷藏，有效期7天。
(6)每次使用须快速取出所需用量至另一棕色瓶中提前5-15min预热。
实施例2
以配制420ml为例，本实施例的DNA染液配液步骤如下：
(1)按重量份计，称取100份的硫堇劳氏紫粉末，加入500ml烧杯中；量取50份的蒸馏水用于冲洗残留试剂；量取50份的染色助剂加入烧杯中，余量用75份蒸馏水补齐。加热沸腾30min，冷却至50℃，即制得试剂A。试剂A中，按重量份计，包括：硫堇100份，染色助剂50份，蒸馏水125份。
(2)向冷却的液体中加入试剂B，混合均匀，试剂B为叔丁醇：盐酸＝7：1(V/V)。所述试剂B与冷却的液体的体积比是5：1(V/V)。
(3)按重量份计，称取35份的亚硫酸氢钠充分溶解于100份的蒸馏水中，室温进行，即制得试剂C，向试剂A和试剂B的混合溶液中加入试剂C，试剂A、试剂B和试剂C的体积比为5：1：4(V/V/V)，再加入蒸馏水至420ml。
(4)在液体中加入磁力搅拌转子后，盖好瓶盖，放置于磁力搅拌器上。
(5)恒温箱25℃搅拌60min后放入棕色瓶中，贴好标签，冰箱冷藏，有效期7天。
(6)每次使用须快速取出所需用量至另一棕色瓶中提前5-15min预热。
实施例3
以配制420ml为例，本实施例的DNA染液配液步骤如下：
(1)按重量份计，称取100份的硫堇劳氏紫粉末，加入500ml烧杯中；量取50份的蒸馏水用于冲洗残留试剂；量取50份的染色助剂加入烧杯中，余量用75份蒸馏水补齐。加热沸腾30min，冷却至50℃，即制得试剂A。试剂A中，按重量份计，包括：硫堇150份，染色助剂50份，蒸馏水50份。
(2)向冷却的液体中加入试剂B，混合均匀，试剂B为甲醇：盐酸＝7：1(V/V)。所述试剂B与冷却的液体的体积比是5：1(V/V)。
(3)按重量份计，称取50份的亚硫酸氢钠充分溶解于50份的蒸馏水中，室温进行，即制得试剂C，向试剂A和试剂B的混合溶液中加入试剂C，试剂A、试剂B和试剂C的体积比为5：1：4(V/V/V)，再加入蒸馏水至420ml。
(4)在液体中加入磁力搅拌转子后，盖好瓶盖，放置于磁力搅拌器上。
(5)恒温箱40℃搅拌30min后放入棕色瓶中，贴好标签，冰箱冷藏，有效期7天。
(6)每次使用须快速取出所需用量至另一棕色瓶中提前5-15min预热。
试验例
基于本发明防掉片细胞DNA定量染色液进行染色的方法，由以下步骤组成：
I、按照实施例2的方法配制DNA染液。
II、制片：梯度离心沉降法，步骤如下：
(1)样本确认并相应编号。
(2)将样品瓶置于振荡器上充分震荡5min(3-5min均可)。
(3)沿沉降仓壁或滤杯壁向沉降仓中加入2.5ml(1-2.5ml均可)分离液(湖南品胜生物技术有限公司，样本梯度分离液)。
(4)吸取2.5ml(1-2.5ml均可)样品-保存液(湖南品胜生物技术有限公司，液基细胞保存液)沿滤杯壁加入。
(5)对称平衡放入离心机(湖南品胜生物技术有限公司，梯度离心机4000A)，1200rpm(800-2000rpm均可)，离心3min(1-5min均可)。
(6)去掉过滤网，弃上清液，轻轻甩干，旋转取下沉降仓，取出载玻片于染色架。
(7)流水冲洗。
(8)恒温箱35℃烘烤15min(10-30min均可)。
III、染色：步骤如下：
(1)固定：玻片浸入BS固定液中，固定30min(20-50min均可)，恒温箱35℃中进行，本试验例的BS固定液由质量份为220份的甲醛，80份的甲醇、150份的乙酸组成。
BS固定液、酸解液使用时均需提前5-15min预热。
(2)回收：将BS固定液倒回相应回收瓶中(BS固定液只可使用两次，第二次用完后弃用)。
(3)冲洗：流水洗涤3min(1-3min均可)，室温下进行。
(4)酸解：浸入酸解液中，酸解25min(15-35min均可)，恒温箱35℃中进行。本试验例的酸解液由质量份为100份的盐酸(也可以是磷酸或氢溴酸或其组合)和50份的超纯水组成。
(5)回收：将酸解液倒回相应回收瓶中(酸解液只可使用两次，第二次用完后弃用)。
(6)冲洗烘烤：流水洗涤3min(1-3min均可)，恒温箱35℃烘烤15min(10-30min均可)。
(7)染色：浸入DNA染色液中；染色50min(20-50min均可)，恒温箱35℃中进行。
(8)冲洗：流水洗涤3min(1-3min均可)，室温下进行。
(9)漂洗：浸入预热的蒸馏水中，浸泡5min(3-8min均可)，恒温箱35℃中进行。
(10)脱水：浸入50％乙醇中，脱水2min(1-2min均可)，室温下进行。
(11)脱水：浸入75％乙醇中，脱水2min(1-2min均可)，室温下进行。
(12)脱水：浸入95％乙醇中，脱水1min(1-2min均可)，室温下进行。
(13)脱水：浸入无水乙醇中，脱水2min(1-2min均可)，室温下进行。
(14)封片：自然晾干或用冷风吹干后中性树脂进行封片。
为了检测本发明的效果，载玻片同时选用普通载玻片、a公司防脱载玻片产品和b公司防脱载玻片产品作为对照，染色方法采用传统Feulgen染色与采用本发明染色液染色作为对照，分别对宫颈组织和宫颈脱落细胞进行染色，具体实验设计如表1所示。
表1.实施方案(例)
Figure BDA0002648001480000061
Figure BDA0002648001480000071
本试验例进一步以宫颈脱落细胞染色作为示例，采用全自动细胞DNA定量分析系统(湖南品胜生物科技有限公司)进行扫描，出具有IOD、CV、线性度等质控数据，肉眼观察评估脱片情况；宫颈组织染色肉眼观察评估脱片情况。
其中IOD(指积分光密度＝平均光密度*选定对象的面积＝每个像素点光密度之和；OD指光密度，光通过被检测物前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。《科技编辑大辞典》对光密度的定义是：入射光强度与透射光强度之比值的常用对数值)能够代表染色情况(240<IOD<380，IOD越高染色越深)，往往可以作为质控参数。
其中CV指细胞DNA含量的变异系数，不同标本二倍体细胞DNA指数的CV可以代表它们IOD测量的离散程度，离散程度越小，说明测量精度越高。因此，CV值往往用于质控参数。
其中线性度Z＝四倍体细胞平均值/二倍体细胞平均值，不同标本的线性度，可以代表它们四倍体计算平均偏差，越接近2，平均偏差越小。因此，线性度往往用于质控参数。
其中脱片指切片从载玻片上脱下或切片已与载玻片分离，悬浮但尚未脱下，情况分为三个等级：轻度脱片(切片边缘轻度卷曲至脱落面积＜10％)；中度脱片(10％＜切片脱落面积＜80％)；重度脱片(切片脱落面积＞80％)。
结果如表2(图1)、表3(图2)、图3、图4、图5所示。
表2.传统Feulgen染色实例结果
Figure BDA0002648001480000072
Figure BDA0002648001480000081
表3.本发明染色液染色实例结果
Figure BDA0002648001480000082
结果：组织染色中，随着防脱片载玻片的使用以及品质的优劣，迅速的提升了防脱片效果；细胞染色中，随着防脱载玻片的使用以及品质的优劣，迅速的提升了防脱片效果；传统Feulgen染色与本发明中，本发明每一项实验结果均优与传统染色，且能兼容大部分不同黏附剂的防脱载玻片，甚至在普通载玻片上也表现优异。质控方面，CV值随着染色品质的增加而降低，如图3所示，即本发明变异度低于传统染色法，结果更可靠；本发明中IOD优于传统染色，如图4所示，即染色更深，更有益于观察；线性度(P>0.05，无明显差异)，如图5所示，线性度也与标本有关，在1.9-2.1的可控范围内。
结论：本发明提供的一种防掉片细胞DNA定量染色液及其制备方法，优选硫堇-亚硫酸盐染色适用于高特异性细胞核DNA定量染色，弥补了传统试剂共染带来的背景杂乱，特异性不高的缺点。质控数据显示，本发明适用于DNA染色，尤其适用于细胞DNA定量染色分析，变异离异程度低，染色更深更易观察；可回收，适用性广，试剂安全稳定，商业用途价值高。
上述实施方式并非是对本发明的限制，本发明也并不仅限于上述举例，本技术领域的技术人员在本发明的技术方案范围内所做出的变化、改型、添加或替换，也均属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种防掉片细胞DNA定量染色液，包括：
试剂A，包括：硫堇、染色助剂和水；
试剂B，选自甲醇、叔丁醇、乙醇、乙二醇、盐酸、磷酸中的一种或多种；
试剂C，包括：亚硫酸盐和超纯水；
所述试剂A、试剂B和试剂C的体积比为5：1：4。
2.根据权利要求1所述的一种防掉片细胞DNA定量染色液，其特征在于，所述试剂A中，按重量份计，包括：硫堇50-150份，染色助剂20-50份，蒸馏水50-250份。
3.根据权利要求1所述的一种防掉片细胞DNA定量染色液，其特征在于，所述试剂B选自甲醇、叔丁醇、乙醇、乙二醇中的一种或多种，或者甲醇、叔丁醇、乙醇、乙二醇中的一种或多种与盐酸和/或磷酸的混合物。
4.根据权利要求3所述的一种防掉片细胞DNA定量染色液，其特征在于，甲醇、叔丁醇、乙醇、乙二醇中的一种或多种与盐酸和/或磷酸的体积比为7：1。
5.根据权利要求1所述的一种防掉片细胞DNA定量染色液，其特征在于，所述试剂C中，按重量份计，包括：亚硫酸盐20-50份和超纯水50-150份。
6.根据权利要求1所述的一种防掉片细胞DNA定量染色液，其特征在于，所述亚硫酸盐选自偏重亚硫酸钠、偏重亚硫酸钾、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠中的一种或多种。
7.权利要求1-6任意一项所述的一种防掉片细胞DNA定量染色液的制备方法，包括如下步骤：
(1)配制试剂A，再加入试剂B，混合均匀；
(2)加入试剂C，恒温25-40℃磁力搅拌30-60min，得防掉片细胞DNA定量染色液。
8.根据权利要求7所述的一种防掉片细胞DNA定量染色液的制备方法，其特征在于，通过以下方法配制试剂A：按重量份称取硫堇劳氏紫粉末，加入烧杯中，用部分蒸馏水冲洗残留试剂，再加入染色助剂，余量用剩余蒸馏水补齐，然后加热沸腾10-30min，冷却至30-50℃，得试剂A。
9.根据权利要求7所述的一种防掉片细胞DNA定量染色液的制备方法，其特征在于，还包括将步骤(2)得到的染色液放入棕色瓶中，冷藏，有效期7天。
10.根据权利要求9所述的一种防掉片细胞DNA定量染色液的制备方法，其特征在于，每次使用染色液前快速取出所需用量至另一棕色瓶中提前5-15min预热。
CN202010860790.6A 2020-08-25 2020-08-25 一种防掉片细胞dna定量染色液及其制备方法 Pending CN111879592A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010860790.6A CN111879592A (zh) 2020-08-25 2020-08-25 一种防掉片细胞dna定量染色液及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010860790.6A CN111879592A (zh) 2020-08-25 2020-08-25 一种防掉片细胞dna定量染色液及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111879592A true CN111879592A (zh) 2020-11-03

Family

ID=73203246

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010860790.6A Pending CN111879592A (zh) 2020-08-25 2020-08-25 一种防掉片细胞dna定量染色液及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111879592A (zh)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5168066A (en) * 1990-03-07 1992-12-01 Cytyc Corporation Thionin staining and imaging technique
US5942410A (en) * 1997-07-07 1999-08-24 Oncometrics Imaging Corp. Composition and method for staining cellular DNA, comprising thiazine derivative metabisulfite and methanol or ethanol
US20060199243A1 (en) * 2005-03-03 2006-09-07 Garner David M Cytological stain composition and methods of use
CN101046434A (zh) * 2006-11-20 2007-10-03 东南大学 细胞去氧核醣核酸染色试剂盒及其制备方法
CN108287097A (zh) * 2017-08-24 2018-07-17 南京福怡科技发展股份有限公司 一种硫堇伊红染色液及制备方法和应用
CN110736655A (zh) * 2019-11-06 2020-01-31 麦克奥迪（厦门）医疗诊断系统有限公司 一种细胞核dna染色方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5168066A (en) * 1990-03-07 1992-12-01 Cytyc Corporation Thionin staining and imaging technique
US5942410A (en) * 1997-07-07 1999-08-24 Oncometrics Imaging Corp. Composition and method for staining cellular DNA, comprising thiazine derivative metabisulfite and methanol or ethanol
US20060199243A1 (en) * 2005-03-03 2006-09-07 Garner David M Cytological stain composition and methods of use
CN101046434A (zh) * 2006-11-20 2007-10-03 东南大学 细胞去氧核醣核酸染色试剂盒及其制备方法
CN108287097A (zh) * 2017-08-24 2018-07-17 南京福怡科技发展股份有限公司 一种硫堇伊红染色液及制备方法和应用
CN110736655A (zh) * 2019-11-06 2020-01-31 麦克奥迪（厦门）医疗诊断系统有限公司 一种细胞核dna染色方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
田玉旺等: "硫堇显示细胞核DNA组织化学染色技术", 《中国组织化学与细胞化学杂志》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105950700B (zh) 一种真菌荧光染色剂
CN105842037B (zh) 一种同时显示肥大细胞与嗜酸性细胞的染色方法
CN112213172A (zh) 一种稳定的阴道分泌物有形成分染色液及其制备方法
CN106053167A (zh) 一种骨髓液涂片的制备方法
CN108287097A (zh) 一种硫堇伊红染色液及制备方法和应用
CN105651579B (zh) 一种α-丁酸萘酚酯酶染色试剂盒
CN111879592A (zh) 一种防掉片细胞dna定量染色液及其制备方法
CN104711315A (zh) 一种肺炎链球菌的荚膜染色方法
CN109946278A (zh) 荧光染料dapi对细胞dna进行染色定量的癌症筛查和诊断方法
CN108195653A (zh) 一种复染染色试剂盒及制备和应用
CN111999144B (zh) 一种防掉片细胞dna定量染色方法
CN109540633B (zh) 核型分析专用制备高分辨染色体染液
CN101804082B (zh) 显微染色鉴别冬虫夏草粉的方法
CN108593393A (zh) 精子活性氧染色试剂盒及其使用方法
CN108007754A (zh) 一种脱落细胞一步染色法、所用染料组合及试剂盒
CN109668771B (zh) 一种液基脱落细胞染色液及其染色方法
CN103382498A (zh) 一种用于染色体核型分析的dna和rna鉴别染色显带法
Rossi et al. Cytological and histological structures identification with the technique IBIL in elemental microanalysis
CN110161025A (zh) 一种测定茶叶及茶制品中茶多酚的连续流动分析方法
Begemann et al. Staining methods
CN102589956A (zh) 一种显微染色鉴别冬虫夏草粉的方法
Zachleder et al. Fluorescence microscopy of acridine orange stained nuclei in chlorococcal algae
CN108593750A (zh) 一种缩短琼脂糖凝胶电泳染色的方法
AU2021102139A4 (en) Application of m6a rna methylation content, and methylation-related enzymes and binding proteins thereof in preparation of senescence detection kit
Pinto The importance of schistocytes in a patient in VA-ECMO

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20201103

RJ01 Rejection of invention patent application after publication