CN101046434A - 细胞去氧核醣核酸染色试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
细胞去氧核醣核酸染色试剂盒及其制备方法是一种应用于生命科学、人类医学领域中的生物细胞DNA特异性染色用的试剂盒，尤其是直接应用在生物细胞中的细胞核的单独染色。该试剂盒包括DNA染液、DNA固定液、DNA漂洗液；其中按容量配比计算，DNA染液∶DNA固定液∶DNA漂洗液＝1.05∶2∶1，误差＜±5％。制备方法为：1)DNA染液的制备；2)DNA固定液的制备；3)DNA漂洗液的制备；4)细胞保存液的制备；5)将载玻片、细胞取用器与DNA染液、DNA固定液、DNA漂洗液、细胞保存液放入试剂盒组成细胞去氧核醣核酸染色试剂盒。解决了生命科学及人类医学领域内的细胞DNA诊断中的染色的烦琐及不准确的问题。
Description
技术领域
本发明是一种应用于生命科学、人类医学领域中的生物细胞DNA特异性染色用的试剂盒，尤其是直接应用在生物细胞中的细胞核的单独染色。
背景技术
目前的细胞DNA染色以席夫试剂为主要成分，因席夫试剂本身也是酸性的，也会造成DNA的水解从而造成结果的不准确并且由于染液的制备方法多种多样，大多是在固定液的选择，席夫试剂的品质的参差无法保证生物标本的染色的结果能够有效重复，导致进行DNA的检测结果不能正确反映客观事实，由此而造成在生命科学领域及人类医学领域内的人类认识受到阻碍。目前经过国家食品和药品管理局数据库的检索未发现相同或类似产品。
发明内容
技术问题：本发明的目的是为了解决生命科学及人类医学领域内的细胞DNA诊断中的染色的烦琐及不准确的问题，达到简便，准确，标准化地完成对生物体脱落细胞的细胞核内DNA的特异性染色的目标，提供一种细胞去氧核醣核酸染色试剂盒及其制备方法。
技术方案：本发明的细胞去氧核醣核酸染色试剂盒主要包括：DNA染液、DNA固定液、DNA漂洗液、载玻片、细胞保存液、细胞取用器；其中按容量配比计算，DNA染液∶DNA固定液∶DNA漂洗液＝1.05∶2∶1，误差＜±5％。
试剂盒的制备方法如下：
1.)DNA染液的制备：硫堇100mg加入蒸馏水100ml加热至沸腾10分钟后冷却至摄氏55度再加入叔丁醇87ml混匀后加入5当量盐酸5.2ml；混合亚硫酸氢钠1800mg加蒸馏水至210ml；置于磁力加热搅拌器上避光搅拌60分钟，摄氏33-38度条件过滤后调节PH至1.4摄氏25度条件后凉置装入深色瓶中封装；
2.)DNA固定液的制备步骤如下：甲醇320ml加入甲醛60ml再加入冰乙酸20ml后装入瓶内封装；
3.)DNA漂洗液的制备步骤如下：偏重亚硫酸钠1g加5当量盐酸2ml加蒸馏水至200ml装入瓶内封装；
4.)细胞保存液的制备步骤如下：50％乙醇加入1％二硫苏糖醇共计10ml(2∶1)装入瓶内封装；
5.)将载玻片、细胞取用器与DNA染液、DNA固定液、DNA漂洗液、细胞保存液放入试剂盒组成细胞去氧核醣核酸染色试剂盒。
所述的搅拌为磁力加热搅拌。
有益效果；本发明的有益效果是，将繁杂、多样的试剂制备过程简化，同时提供了质量和效果稳定的工艺流程以方便使用者使用，提供了标化和准确的控制方法。解决了生命科学及人类医学领域内的细胞DNA诊断中的染色的烦琐及不准确的问题，达到简便，准确，标准化地完成对生物体脱落细胞的细胞核内DNA的特异性染色的目标。
附图说明
图1是本发明B液制备流程，
图2是本发明A液制备流程，
图3是本发明C液制备流程，
图4是本使用流程中的细胞保存液的制备流程。
具体实施方式
本发明的细胞去氧核醣核酸染色试剂盒主要包括：DNA染液、DNA固定液、DNA漂洗液、载玻片25.4mm×76.2mm、细胞保存液、细胞取用器；还可以包括条形码标签、使用操作说明书、外包装盒。
其中：DNA染液的制备步骤如下：硫堇100mg加入蒸馏水100ml加热至沸腾10分钟后冷却至摄氏55度再加入叔丁醇87ml混匀后加入5当量盐酸5.2ml。混合亚硫酸氢钠1800mg加蒸馏水至210ml。置于磁力加热搅拌器上避光搅拌60分钟(摄氏33-38度条件)过滤后调节PH至1.4(摄氏25度条件)后凉置装入300ml深色瓶中封装。
DNA固定液的制备步骤如下：甲醇320ml加入甲醛60ml再加入冰乙酸20ml后装入500ml瓶内封装。
DNA漂洗液的制备步骤如下：偏重亚硫酸钠1g加5当量盐酸2ml加蒸馏水至200ml装入300ml瓶内封装。
细胞保存液的制备步骤如下：50％乙醇加入1％二硫苏糖醇共计10ml(2∶1)装入20ml瓶内封装。
细胞保存液的制备步骤如下：50％乙醇加入1％二硫苏糖醇共计10ml(2∶1)装入20ml瓶内封装。
工作原理：生物细胞中的DNA在酸性环境中水解出的氧分子的醛基，与染料结合生成有颜色的化学反应，其染色的饱和度与细胞核的DNA含量百分比成正比，在反应过程中该反应中对DNA是特异性的，在细胞核里没有非特异性的醛基生成，在染色过程及步骤要严格控制如下：
1、制好的干燥玻片置入无水乙醇液内30分钟后放入DNA固定液60分钟，以蒸馏水洗涤2次后放置于5当量盐酸液内60分钟(20摄氏度条件)再以蒸馏水洗涤2次，
2、玻片放入DNA染液中67分钟(摄氏22-23度条件)后以蒸馏水洗涤6次，
3、DNA漂洗液洗3次(分别一、三、四分钟)再以蒸馏水洗3次，
4、先后放入50％乙醇、75％乙醇、95％乙醇各1分钟，在放入无水乙醇中3次，
5、二甲苯液中30-60秒，
6、盖玻片封胶。
下面结合附图和实施例对本发明进一步说明：
在图1中给出的具体数量可以根据使用时的需要按照其相关的比例进行调整。本图所给出的应用为21(人)份量。甲醇320ml加入甲醛60ml再加入冰乙酸20ml后装入瓶内封装。
在图2中给出的具体数量可以根据需要进行调整，本案是按21(人)份量的标准。硫堇100mg加入蒸馏水100ml加热至沸腾10分钟后冷却至摄氏55度再加入叔丁醇87ml混匀后加入5当量盐酸5.2ml。混合亚硫酸氢钠1800mg加蒸馏水至210ml。置于磁力加热搅拌器上避光搅拌60分钟(摄氏33-38度条件)
在图3中给出的具体数量可以根据需要进行调整，本案是按21(人)份量的标准。偏重亚硫酸钠1g加5当量盐酸2ml加蒸馏水至200ml入瓶内封装。
在图4中给出的具体数量可以根据需要进行调整，本案是按21(人)份量的标准。50％乙醇140ml加入1％二硫苏醣醇70ml，混匀后分装为21份，也可以最多分装成42份。
本发明是一种染色用的试剂盒，按每个标本计算可以完成21个标本，也可以按本发明的比例调整。
Claims (4)
1.一种细胞去氧核醣核酸染色试剂盒，其特征在于该试剂盒包括DNA染液、DNA固定液、DNA漂洗液；其中按容量配比计算，DNA染液∶DNA固定液∶DNA漂洗液＝1.05∶2∶1，误差＜±5％。
2.根据权利要求1所述的细胞去氧核醣核酸染色试剂盒的制备方法，其特征在于在该试剂盒中还设有载玻片、细胞取用器。
3.一种如权利要求1所述的细胞去氧核醣核酸染色试剂盒的制备方法，其特征在于试剂盒的制备方法如下：
1.)DNA染液的制备：硫堇100mg加入蒸馏水100ml加热至沸腾10分钟后冷却至摄氏55度再加入叔丁醇87ml混匀后加入5当量盐酸5.2ml；混合亚硫酸氢钠1800mg加蒸馏水至210ml；置于磁力加热搅拌器上避光搅拌60分钟，摄氏33-38度条件过滤后调节PH至1.4摄氏25度条件后凉置装入深色瓶中封装；
2.)DNA固定液的制备步骤如下：甲醇320ml加入甲醛60ml再加入冰乙酸20ml后装入瓶内封装；
3.)DNA漂洗液的制备步骤如下：偏重亚硫酸钠1g加5当量盐酸2ml加蒸馏水至200ml装入瓶内封装；
4.)细胞保存液的制备步骤如下：50％乙醇加入1％二硫苏糖醇共计10ml(2∶1)装入瓶内封装；
5.)将载玻片、细胞取用器与DNA染液、DNA固定液、DNA漂洗液、细胞保存液放入试剂盒组成细胞去氧核醣核酸染色试剂盒。
4.根据权利要求1所述的细胞去氧核醣核酸染色试剂盒的制备方法，其特征在于所述的搅拌为磁力加热搅拌。
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